p57kip2和p21cip1在人脑胶质瘤中的表达和临床意义(一)
细胞周期调控
2.cdc基因 Leland Hartwell、 Paul Nurse分别以不同的酵母为实验材料，发现了许多与细胞分裂
有关的基因(cell division cycle gene，CDC)。如芽殖酵母的cdc28、裂殖酵母cdc2基因。 进一步研究发现：P34cdc2与P34cdc28是同源物，二者本身并不具有激酶活性，只有当其与有 关蛋白结合后，其激酶活性才能够表现出来。例如：P34cdc2必须与另一种蛋白P56cdc13结合 后才具有激酶活性。
表皮生长因子（EGF)受体 集落刺激因子－1（CSF-1)受 体 神经生长因子（NGF)受体
酪氨酸激酶 丝氨酸激酶 GTP/GDP结合蛋白
转录因子（AP-1) DNA结合蛋白 类固醇受体家族成员
3．抑癌基因 抑癌基因可抑制细胞周期于静止期，并使DNA复制不完全或损伤的细胞不能进入分裂期，
避免细胞的癌变。
（1）Ink4(Inhibitor of cdk 4) 如P16ink4a、P15ink4b、P18ink4c、P19ink4d，专一地与CDK4、CDK6结合，阻止CDK和 cyclinD的结合。使细胞周期不能从G1期的调控点进入到下一个时相。
（2）Cip/Kip
包括P21cip1 (cyclin inhibition protein 1)、P27kip1(kinase inhibition protein 1)、 P57kip2等，能与多种cyclin - CDK复合物包括cyclinE–CDK2、cyclinD–CDK6、cyclinD– CDK4结合，抑制cyclin - CDK复合物的蛋白激酶活性，使一些细胞增殖所需要的蛋白质磷 酸化受阻，细胞停留在G1期。
此外P21cip1还可与DNA聚合酶δ亚单位PCNA (proliferating cell nuclear antigen, PCNA )相互作用， 抑制DNA复制，但不影响DNA修复。
p21基因作用
p21基因作用P21基因是一种抑制细胞周期进程的关键基因，也被称为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A（Cip1）或骨架蛋白P21（Waf1/Cip1）。
这个基因编码的蛋白质P21是一种蛋白酶抑制剂，可以通过和细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）结合以抑制其激酶活性。
在细胞内，CDK与其配体细胞周期蛋白（Cyclin）相结合后形成复合物，促进细胞周期的推进。
P21的出现可以抑制CDK的活性，从而阻断细胞周期的推进，使细胞停留在G1/S和G2/M转换期，保证了DNA修复和细胞凋亡的进行。
P21基因在人体细胞中广泛表达，它的表达受到多种信号的调控。
在细胞受到DNA损伤、细胞失去正常的生长因子刺激、细胞内出现异常增殖等情况下，P21基因会被激活并开始进行转录。
这样一来，P21蛋白就会在细胞核内大量积累，抑制CDK的活性，使细胞周期停滞，为细胞提供更多时间来进行DNA修复。
这是细胞对于DNA损伤的一种保护机制，可以避免受损的DNA进入有问题的细胞周期，从而避免细胞突变和癌变。
除了在DNA损伤修复过程中的重要作用外，P21基因还参与了多种细胞生理过程的调控。
例如，在细胞老化过程中，P21的表达上调可以抑制细胞的增殖，并促进细胞进入细胞凋亡程序。
这对于细胞的寿命和代谢稳定具有重要意义。
此外，研究表明P21还参与了多个信号通路的调节，如细胞凋亡通路、转录调节通路等，与细胞周期密切相关的转录因子和调节因子也有可能与P21相互作用，共同调控细胞的分化和发育。
P21基因作为一个细胞周期调控剂，具有广泛的生物学功能，对于维持细胞的正常功能和机体的健康至关重要。
近年来，关于P21基因的研究越来越受到关注，人们已经发现了许多与其相关的生理和病理学过程，并对其作用机制进行了深入研究。
首先，P21基因在细胞周期的控制中起着至关重要的作用。
正常细胞周期的进行需要严格的调控，细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）是细胞周期进行的重要调控分子。
Ki67＼GFAP在人脑恶性胶质瘤病理分级中的意义
Ki67＼GFAP在人脑恶性胶质瘤病理分级中的意义目的探讨Ki67、GFAP与人脑恶性胶质瘤病理分级的关系。
方法取深圳市宝安区中医院病理科2007年1月~2012年12月组织学确诊为恶性胶质瘤标本31例，根据WHO（2007年）胶质瘤分级标准，分为胶质瘤Ⅱ级组、胶质瘤Ⅲ级组和胶质瘤Ⅳ级组，另取10名正常人脑组织胶质细胞作为正常对照组。
免疫组织化学法检测Ki67及GFAP表达。
结果Ki67表达水平在正常对照组最低，随着肿瘤WHO分级的增高而增高，在胶质瘤Ⅳ级组达高峰，差异有统计学意义（P < 0.05）；GFAP表达水平在正常对照组最高，随WHO分级的增高而降低，在胶质瘤Ⅳ级组表达水平最低，差异有统计学意义（P < 0.05）。
结论Ki67、GFAP 可作为人脑恶性胶质瘤病理分级及预后判断有价值的参考指标。
[Abstract] Objective To study the correlation betweem Ki67, GFAP expression and pathological grading of human brain m alignant glioma. Methods 31 cases of m alignant glioma specimens confirmed by histology in Hospital of TCM in Bao’an District of Shenzhen City were collected from January 2007 to December 2012, while divided into glioma Ⅱ, Ⅲand Ⅳgrade groups according to WHO (2007) glioma grading standards. Another 10 cases of normal brain tissues were selected as control group. Then the expression of Ki67, GFAP was detected by immunohistoehemistry. Results The expression of Ki67 in normal control group was the lowest, which increased with the increase of WHO grading of tumors, reached a peak in glioma Ⅳgrade group, the difference was statistically significant (P < 0.05). The expression level of GFAP in normal control group was the highest, which decreased with the increase of WHO grading of tumors, reached a bottom in glioma Ⅳgrade group, the difference was statistically significant (P < 0.05). Conclusion Ki67 and GFAP can be regarded as valuable markers to judge the pathological grading and prognosis.[Key words] Glioma; Ki67; GFAP人脑胶质瘤是严重威胁人类健康的疾病，其临床病理分级对其治疗和预后均有指导意义，目前公认的分级方法是依据肿瘤组织异型性、坏死、微血管增生程度来确定，具有很大的主观性。
细胞周期限制点
细胞周期调控(cell cycle regulation)
二、历史回顾
Leland H. Hartwell 1970s “Checkpoint” Yeast genetics ~100 CDC genes Start gene
Paul M. Nurse 1970s CDKs yeast
Tim Hunt 1980s Cyclins Sea Urchins
将发挥微管组织中心的作用，纺锤体微管，星体微管的形成均与 此相关。
３、G2期（DNA合成后期，从DNA复制完成到有丝分裂开始前的时期， 为有丝分裂 进行物质条件）
为细胞分裂准备期，细胞中合成一些与M期结构功能相关的蛋白 质，与核膜破裂，染色体凝集相关的成熟促进因子在此期合成。 微管蛋白G２期合成达高峰，为M期纺锤体微管的形成提供了丰 富的来源。 已经复制的中心粒在G2期逐渐长大，并开始向细胞两极分离。
CDK activating
活性位点
抑制位点
2、细胞周期限制点（check point） 由于某些环境因素的作用细胞周期出现故障或差错， 这些信号可是细胞停留在某些点上，称为限制点。 主要检验点： G1/S限制点：DNA是否损伤？细胞外环境是否适宜？ 细胞体积是否足够大？在酵母中称start点，在哺乳动 物中称R点(restriction point)。 S期限制点：DNA复制是否完成？
1、细胞周期的启动机制
细胞周期能否启动进行细胞增殖，主要的调控点在G1期，它决定 细胞是否通过G1期进入S期。 这一调控点首先在芽殖酵母的研究中被认识，人们称其为“起始 点”（START）。一旦细胞通过start,它们势必进入 S期，完成整 个细胞分裂周期。因此 start 有人称之为酵母细胞周期的“决定 点”。 在人体细胞增殖中，在G1期存在相似的调控机制。在G1期较晚时， 也有一个决定点，称为“限制点”（restriction point），与酵母 的START功能类似，不同的是，人类细胞是否通过“限制点”， 进入细胞周期，主要受与细胞增殖有关的细胞外生长因子的调控， 而不是营养素。只要有相应的生长因子存在，细胞就能通过 R 点 进入 S 期，完成整个细胞周期。回到 G0/1 期。相反，如果细胞在 G1期就缺乏相应的生长因子，细胞周期的运行将停止在 R点，此 时细胞进入“安静状态，称之为G0期。
不同级别胶质瘤患者MEK、ERK、CHKα蛋白的阳性表达情况及临床意义
㊃论著㊃D O I:10.3969/j.i s s n.1672-9455.2024.08.019不同级别胶质瘤患者M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白的阳性表达情况及临床意义甘杰1,文擘彬1,杨晗2,王争1ә1.湖南省长沙市第四医院神经外科,湖南长沙410000;2.中南大学湘雅医院神经外科,湖南长沙410000摘要:目的探讨不同级别胶质瘤患者胆碱激酶α(C H Kα)㊁细胞外信号调节激酶(E R K)及丝裂原激活蛋白激酶(M E K)蛋白的阳性表达情况及临床意义㊂方法回顾性分析2019年1月至2022年12月长沙市第四医院神经外科收治的124例胶质瘤患者的临床资料㊂检测㊁统计不同级别胶质瘤患者M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白的阳性表达情况㊂结果不同肿瘤最大径㊁年龄㊁WHO分级及预后胶质瘤患者M E K㊁E R E㊁C HKα蛋白的高㊁低表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂Ⅰ㊁Ⅱ㊁Ⅲ㊁Ⅳ级胶质瘤患者M E K蛋白阳性表达率分别为9.62%㊁7.69%㊁94.08%和92.04%,E R K蛋白阳性表达率分别为9.57%㊁7.49%㊁94.52%和92.18%, C HKα蛋白阳性表达率分别为9.60%㊁7.53%㊁94.71%和92.23%,高㊁低级别胶质瘤患者M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)㊂随访结束后结果显示,124例患者中死亡52例,失访12例,获得随访112例,随访率为90.32%㊂结论不同级别胶质瘤患者M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白的阳性表达情况有明显区别,并且与患者的疾病预后明显相关,对疾病的诊断和预后判断具有重要价值㊂关键词:胶质瘤;丝裂原激活蛋白激酶;细胞外信号调节激酶;胆碱激酶α;免疫组织化学法中图法分类号:R739.4文献标志码:A文章编号:1672-9455(2024)08-1118-05 P o s i t i v e e x p r e s s i o n a n d c l i n i c a l s i g n i f i c a n c e o f M E K,E R K a n d C H Kαp r o t e i n si n p a t i e n t s w i t h g l i o m a o f d i f f e r e n t g r a d e sG A N J i e1,WE N B o b i n1,Y A N G H a n2,WA N G Z h e n g1ә1.D e p a r t m e n t o f N e u r o s u r g e r y,T h e F o u r t h H o s p i t a l o f C h a n g s h a i n H u n a n P r o v i n c e,C h a n g s h a,H u n a n410000,C h i n a;2.D e p a r t m e n t o f N e u r o s u r g e r y,X i a n g y a H o s p i t a l,C e n t r a l S o u t hU n i v e r s i t y,C h a n g s h a,H u n a n410000,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o i n v e s t i g a t e t h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n a n d c l i n i c a l s i g n i f i c a n c e o f c h o l i n e k i n a s eα(C H Kα),e x t r a c e l l u l a r s i g n a l-r e g u l a t e d k i n a s e(E R K)a n d m i t o g e n-a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e(M E K)p r o t e i n s i n p a t i e n t s w i t h d i f f e r e n t g r a d e s o f g l i o m a.M e t h o d s T h e c l i n i c a l d a t a o f124g l i o m a p a t i e n t s a d m i t t e d t o t h e D e p a r t m e n t o f N e u r o s u r g e r y,t h e F o u r t h H o s p i t a l o f C h a n g s h a f r o m J a n u a r y2019t o D e c e m b e r2022w e r e r e t-r o s p e c t i v e l y a n a l y z e d.T h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n s o f M E K,E R K a n d C H Kαp r o t e i n s i n p a t i e n t s w i t h g l i o m a o f d i f f e r e n t g r a d e s w e r e d e t e c t e d a n d a n a l y z e d.R e s u l t s T h e m o r t a l i t y r i s k o f p a t i e n t s w i t h g l i o m a w a s s t a t i s t i-c a l l y s i g n i f i c a n t c o m p a r e d w i t h t h e m a x i m u m d i a m e t e r o f d i f f e r e n t t u m o r s,t h e a g e,WHO g r a d e a n d p r o g n o s i s o f g l i o m a p a t i e n t s w i t h h i g h a n d l o w e x p r e s s i o n o f M E K,E R K a n d C HKαp r o t e i n s(P<0.05).T h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e s o f M E K p r o t e i n i n g r a d eⅠ,Ⅱ,Ⅲa n dⅣg l i o m a s w e r e9.62%,7.69%,94.08%a n d92.04% r e s p e c t i v e l y.T h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e s o f E R K p r o t e i n w e r e9.57%,7.49%,94.52%a n d92.18%r e s p e c-t i v e l y.T h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e s o f C H Kαp r o t e i n w e r e9.60%,7.53%,94.71%a n d92.23%r e s p e c t i v e l y. T h e r e w e r e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s i n t h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n r a t e s o f M E K,E R K a n d C H Kαp r o t e i n s b e t w e e n h i g h a n d l o w g r a d e p a t i e n t s w i t h g l i o m a(P<0.05).T h e f o l l o w-u p r e s u l t s s h o w e d t h a t52p a t i e n t s d i e d,12 p a t i e n t s w e r e l o s t t o f o l l o w-u p,a n d112p a t i e n t s w e r e r e c o v e r e d,w i t h a f o l l o w-u p r a t e o f90.32%.C o n c l u s i o n T h e p o s i t i v e e x p r e s s i o n o f M E K,E R K a n d C H Kαp r o t e i n s i n p a t i e n t s w i t h g l i o m a o f d i f f e r e n t g r a d e s a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t,a n d a r e s i g n i f i c a n t l y c o r r e l a t e d w i t h t h e p r o g n o s i s o f t h e p a t i e n t s,w h i c h i s o f g r e a t v a l u e f o r t h e d i a g n o s i s a n d p r o g n o s i s o f t h e d i s e a s e.K e y w o r d s:g l i o m a; m i t o g e n-a c t i v a t e d p r o t e i n k i n a s e;e x t r a c e l l u l a r s i g n a l-r e g u l a t e d k i n a s e;c h o l i n e k i n a s eα;i mm u n e h i s t o c h e m i c a l m e t h o d脑胶质瘤是一种生长迅速㊁侵袭性较强的原发性颅内肿瘤,其发病机制涉及多个信号通路的异常激活和调控失衡[1]㊂胆碱激酶α(C H Kα)㊁细胞外信号调节激酶(E R K)及丝裂原激活蛋白激酶(M E K)是细胞信号通路中的关键蛋白,它们均参与了细胞的增殖㊁生存㊁分化等多个生物学过程,恶性肿瘤中异常活化㊃8111㊃检验医学与临床2024年4月第21卷第8期 L a b M e d C l i n,A p r i l2024,V o l.21,N o.8作者简介:甘杰,男,主治医师,主要从事脑血管疾病方面的研究㊂ә通信作者,E-m a i l:30694283@q q.c o m㊂的信号通路通常与肿瘤的发生和发展密切相关[2]㊂M E K /E R K 信号通路是一个主要的细胞增殖和生存信号传导通路,而C H K α则在细胞周期调控和D N A 损伤修复中发挥关键的调节作用,这些蛋白的表达水平是否可以作为胶质瘤的生物标志物,且是否有助于对不同级别的胶质瘤进行分类和预测患者的生存状况还有待考察㊂临床通常使用基因表达水平的定量数据来定义M E K ㊁E R K 和C H K α等基因的高表达和低表达状态㊂基于此,本研究采用免疫组织化学法检测不同级别胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白的阳性表达情况,判断其预后价值,现报道如下㊂1 资料与方法1.1 一般资料 回顾性分析2019年1月至2022年12月长沙市第四医院神经外科收治的124例胶质瘤患者的临床资料,其中男64例(51.61%),女60例(48.39%);年龄10~75岁,平均(43.58ʃ11.03)岁㊂根据世界卫生组织(WHO )胶质瘤的分级标准将其划分为Ⅰ~Ⅳ级[3]㊂纳入标准:(1)所有患者均经病理学检查诊断符合胶质瘤诊断标准[4];(2)血液㊁尿液㊁大便㊁肝功能㊁肾功能㊁心功能检查均无异常㊂排除标准:(1)疾病类型为复发性胶质瘤或接受过分子靶向药物及放化疗治疗的患者;(2)合并心㊁肝㊁肺㊁肾等实质性脏器病变或其他恶性肿瘤患者㊂本研究经长沙市第四医院医学伦理委员会审核批准(201810-013)㊂1.2 M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白表达情况检测方法 根据患者胶质瘤发生的不同功能区进行切除,并采用3.7%甲醛溶液固定和脱水包埋切除组织,随后进行染色㊂采用免疫组织化学法对上述组织实施抗原修复及脱蜡,再用封闭液封闭2h ,加入M E K ㊁E R K ㊁C HK α抗体温育2h ,使用磷酸盐缓冲液洗净后加入相应种属二抗㊂并将苏木精和二氨基联苯胺显色液加入实施常规复染,随后给予封片和干燥,同时观察M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白的表达情况㊂在400倍光学显微镜下任意选取6个视野,每个视野观察100个细胞㊂M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白表达情况以细胞膜/细胞核/细胞质中出现着色视为阳性细胞㊂阳性细胞百分数评分标准:阳性细胞数ɤ5%为0分;>5%~20%为1分;>20%~50%为2分;>50%为3分㊂着色程度强弱评分标准:无着色为0分;轻度着色为1分;中度着色为2分,重度着色为3分㊂M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白表达情况评估:阳性细胞百分数评分和着色程度强弱评分总分为0分为 -,总分为1~2分为 + ,定义为M E K ㊁E R K ㊁C HK α蛋白表达阴性(低表达);总分为3~4分为 ++ ,总分为5~6分为 +++ ,定义为M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白表达阳性(高表达)㊂1.3 免疫组织化学法判读标准 采用C a pt u r e 2.1显微镜图片采集软件选取3个染色均匀且不相邻的高倍视野(ˑ400)进行拍照,以阳性细胞百分数和着色强度作为标准,对所有观察到的阳性细胞实施计数,并对阳性细胞的百分数进行计算,取其平均值㊂1.4 随访情况 术后医务人员需指导患者准时来院进行放化疗,注意饮食营养补充,避免进食辛辣生冷食物,并以电话的方式对参加本研究的患者进行追踪随访㊂主要观察患者有无新并发症出现等㊂患者生存时间以住院手术后经病理检查证实时间为起始,停止时间为患者死亡或随访终止时㊂1.5 统计学处理 采用S P S S 22.0统计软件进行数据分析处理㊂计数资料以例数或百分率表示,组间比较采用χ2检验㊂以P <0.05为差异有统计学意义㊂2 结 果2.1 不同临床病理特征胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白表达情况比较 不同年龄㊁WHO 分级㊁肿瘤最大径及预后胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白高㊁低表达情况比较,差异均有统计学意义(P <0.05);不同性别㊁肿瘤位置㊁吸烟情况胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白高㊁低表达情况比较,差异均无统计学意义(P >0.05)㊂见表1㊂表1 不同临床病理特征胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白表达情况比较[n (%)]病理特征nM E K 蛋白低表达高表达χ2PE R K 蛋白低表达高表达χ2PC H K α蛋白低表达高表达χ2P性别0.5480.1440.6100.2030.9430.621男6438(59.38)26(40.62)37(57.81)27(42.19)40(62.50)24(37.50) 女6025(41.67)35(58.33)26(43.33)34(56.67)24(40.00)36(60.00)年龄(岁)6.8210.0385.4930.0246.2580.010ȡ659843(43.88)55(56.12)44(44.90)54(55.10)45(45.92)53(54.08) <652620(76.92)6(23.08)18(69.23)8(30.77)19(73.08)7(26.92)W H O 分级10.3640.0029.2410.0038.4920.004Ⅰ~Ⅱ级6048(80.00)12(20.00)46(76.67)14(23.33)49(81.67)11(18.33) Ⅲ~Ⅳ级6414(21.88)50(78.13)15(23.44)49(76.56)12(18.75)52(81.25)肿瘤最大径(m m)6.513<0.0016.1020.0087.2580.006ɤ610049(49.00)51(51.00)49(49.00)51(51.00)50(50.00)50(50.00) >62414(58.33)10(41.67)14(58.33)10(41.67)13(54.17)11(45.83)㊃9111㊃检验医学与临床2024年4月第21卷第8期 L a b M e d C l i n ,A pr i l 2024,V o l .21,N o .8续表1 不同临床病理特征胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白表达情况比较[n (%)]病理特征nM E K 蛋白低表达高表达χ2PE R K 蛋白低表达高表达χ2PC H K α蛋白低表达高表达χ2P肿瘤位置0.6810.4190.4890.0800.5410.108额叶4823(47.92)25(52.08)23(47.92)25(52.08)20(41.67)28(58.33) 颞叶3616(44.44)20(55.56)17(47.22)19(52.78)16(44.44)20(55.56) 顶叶1410(71.43)4(28.57)10(71.43)4(28.57)9(64.29)5(35.71) 枕叶128(66.67)4(33.33)8(66.67)4(33.33)10(83.33)2(16.67) 其他146(42.86)8(57.14)4(28.57)10(71.43)9(64.29)5(35.71)吸烟0.2360.0970.5820.0960.7150.072是1912(63.16)7(36.84)11(57.89)8(42.11)13(68.42)6(31.58) 否10551(48.57)54(51.43)52(49.52)53(50.48)51(48.57)54(51.43)预后7.0150.0057.8460.0046.5080.009死亡524(7.69)48(92.31)6(11.54)46(88.46)7(13.46)45(86.54) 存活6054(90.00)6(10.00)53(83.33)7(11.67)51(85.00)9(15.00) 失访125(41.67)7(58.33)4(33.33)8(66.67)6(50.00)6(50.00)2.2 Ⅰ~Ⅳ级胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C HK α蛋白阳性表达率比较 124例胶质瘤患者中Ⅰ级33例,Ⅱ级27例,Ⅲ级31例,Ⅳ级33例㊂M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白主要分布在细胞质内,Ⅰ~Ⅳ级胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白阳性表达率见表2㊂高级别胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白阳性表达率较低级别胶质瘤患者更高,差异均有统计学意义(P <0.05)㊂见图1㊁2㊁3㊂2.3 随访情况 随访时间截止于2022年12月30日,124例患者中失访12例(9.68%),获得随访112例(90.32%),死亡52例(41.94%)㊂2.4 K a p l a n -M e i e r 生存曲线分析 K a pl a n -M e i e r 生存曲线分析结果显示,M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白低表达胶质瘤患者均较M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白高表达患者累计生存率更高,差异有统计学意义(P <0.05),见图4㊁5㊁6㊂表2 Ⅰ~Ⅳ级胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白阳性表达率比较(%)W H O 分级nM E K 蛋白高表达低表达E R K 蛋白高表达低表达C H K α蛋白高表达低表达Ⅰ级33-9.62-9.57-9.60Ⅱ级27-7.69-7.49-7.53Ⅲ级3194.08-94.52-94.71-Ⅳ级3392.04-92.18-92.23-注:WH O 分级为Ⅰ级其特征为毛细胞性星形细胞瘤;Ⅱ级为弥漫性星形细胞瘤;Ⅲ级为间变性星形细胞瘤;Ⅳ级为多形变胶质母细胞瘤;-表示无数据㊂图1 胶质瘤患者C H K α蛋白的表达(从左至右依次为Ⅰ㊁Ⅱ㊁Ⅲ㊁Ⅳ级,ˑ400)图2 胶质瘤患者E R K 蛋白的表达(从左至右依次为Ⅰ㊁Ⅱ㊁Ⅲ㊁Ⅳ级,ˑ400)㊃0211㊃检验医学与临床2024年4月第21卷第8期 L a b M e d C l i n ,A pr i l 2024,V o l .21,N o .8图3 胶质瘤患者M E K 蛋白的表达(从左至右依次为Ⅰ㊁Ⅱ㊁Ⅲ㊁Ⅳ级)图4 M E K蛋白低表达和高表达胶质瘤患者生存曲线图5 E R K蛋白低表达和高表达胶质瘤患者生存曲线图6 C H K α蛋白低表达和高表达胶质瘤患者生存曲线3 讨 论胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤之一,具有高度异质性和侵袭性,严重影响患者的生活质量和预后㊂目前根据病理学特征及分子生物学标志,胶质瘤主要分为多种亚型,其中Ⅰ级为良性肿瘤,Ⅳ级为高度恶性肿瘤㊂不同级别的胶质瘤具有明显的生物学差异,包括细胞增殖速度㊁血管生成㊁细胞凋亡等,这种差异可能与细胞内信号通路的激活状态有关[5-6]㊂M E K /E R K 信号通路和C H K α是研究的焦点,它们在细胞生存㊁增殖和凋亡等方面发挥关键作用㊂M E K /E R K 信号通路作为一个重要的细胞信号传导通路,参与调控细胞的增殖㊁分化㊁生存和凋亡等生命活动,在胶质瘤中,M E K /E R K 信号通路的异常激活与肿瘤的发生和发展密切相关㊂有研究发现,不同级别的胶质瘤患者M E K 和E R K 蛋白表达存在差异,提示这一通路在胶质瘤分级过程中可能起关键的调控作用[7]㊂此外,C H K α是细胞周期检查点激酶之一,参与细胞周期的调控和D N A 损伤修复,胶质瘤中C H K α的异常表达与细胞的D N A 损伤应答和凋亡抵抗性有关,其在维持细胞染色体稳定性和基因组完整性中扮演重要角色[8]㊂然而,目前针对不同级别的胶质瘤,M E K ㊁E R K 和C H K α的表达及其在肿瘤生物学过程患者的作用尚未得到充分研究㊂了解不同级别胶质瘤中这些分子的表达情况及它们在调控细胞生物学功能中的作用,对于深入理解胶质瘤的分子机制㊁寻找潜在的治疗靶点及制订个性化治疗策略具有重要临床意义㊂基于此,本研究以不同级别胶质瘤患者作为研究对象,对其肿瘤组织中M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白表达进行观察分析,通过对不同级别胶质瘤组织样本的免疫组织化学染色和分子生物学试验,系统探讨它们对胶质瘤发生㊁发展及预后的潜在影响,结果显示,其各亚型胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白的表达在弥漫性星形细胞瘤与少突胶质瘤或同级别之间无明显差别㊂基于此,本研究只选择了其中一种类型的胶质瘤作为研究方向,结果显示,高级别胶质瘤患者M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白阳性表达率明显高于低级别患者㊂可能与高级别胶质瘤通常具有更高的细胞增殖能力㊁侵袭性和治疗抵抗性有关,高级别胶质瘤的细胞增殖速度更快,具有更强的侵袭性,而M E K ㊁E R K 和C H K α信号通路在细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,因此其表达增加可能支持这些恶性特征㊂本研究结果还显示,M E K ㊁E R K ㊁C H K α蛋白的表达与肿瘤最大径㊁年龄㊁WHO 分级存在明显相关性,肿瘤最大径ɤ6mm ㊁WHO 分级为Ⅲ~Ⅳ级㊁年龄ȡ65岁胶质瘤患者肿瘤组织中M E K ㊁E R K ㊁C H K α㊃1211㊃检验医学与临床2024年4月第21卷第8期 L a b M e d C l i n ,A pr i l 2024,V o l .21,N o .8蛋白表达明显高于肿瘤最大径>6c m㊁WHO分级为Ⅰ~Ⅱ级㊁年龄<65岁的患者㊂原因可能包括以下几点:(1)肿瘤最大径较大常表示肿瘤已经发展到了更晚期,其细胞增殖和侵袭性更强;(2)WHO分级反映了肿瘤的分化程度和组织学特征,Ⅲ~Ⅳ级肿瘤通常是高度恶性的,细胞分化程度低,而Ⅰ~Ⅱ级肿瘤的恶性程度则相对较低,不同级别的肿瘤细胞可能在蛋白表达方面存在差异,高级别肿瘤可能表现出更高的M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白表达;(3)年龄是一个重要的生理特征,不同年龄段的个体在肿瘤发展和生物学特征方面可能存在差异,年龄ȡ65岁的患者可能受到年龄相关的生理变化和免疫功能下降的影响,导致肿瘤细胞中M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白表达升高㊂有研究表明,M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白的高表达在一定程度上会使患者发生不良预后的可能性增加[9-10]㊂也有研究发现,M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白的高表达与肿瘤患者的复发和死亡风险有关[11-12]㊂从上述不同研究结论来看,目前临床尚不完全清楚M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白在胶质瘤患者中的高表达对其预后及作用机制的影响㊂本研究发现,高级别胶质母细胞瘤中M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白高表达较多,但在Ⅰ级星形细胞瘤中较少(P<0.05)㊂这可能是因为M E K/E R K信号通路的过度活化可能会导致细胞增殖和生长异常加速,高级别胶质母细胞瘤中C H Kα蛋白低表达可能会导致D N A损伤修复机制失调,使细胞更容易发生不稳定和突变,从而加速肿瘤发展,并且其表面形态与患者的疾病预后可能有一定关系[13-14]㊂本研究结果显示,C H Kα蛋白低表达患者累计生存率更高,差异有统计学意义(P<0.05),可能与C H Kα蛋白的低表达降低了肿瘤细胞的生存优势及减缓了肿瘤的进展有关,C H Kα作为一个细胞周期调控的关键分子,它的低表达使肿瘤细胞更容易受到治疗的影响[15]㊂WHO分级为Ⅲ级和Ⅳ级是高级别胶质瘤,并且通常会采取术中全切与术后放化疗联合进行治疗,尽管现如今已有多种对高级别胶质瘤进行治疗的方案,但效果均不是特别理想,且患者术后复发率仍居高不下[16]㊂此外,大多数患者在被确诊或发觉异常时已处于疾病中晚期或肿瘤已转移或已扩散,极难再通过外科手术完全切除[17]㊂所以,早期诊断和更精确地观察对于改善胶质瘤患者的预后十分关键㊂但目前由于临床样本量太少,还需扩大样本量实施进一步研究㊂综上所述,M E K㊁E R K㊁C H Kα蛋白在不同级别胶质瘤患者中的阳性表达情况有明显区别,且与患者的疾病预后明显相关,对其疾病的诊断和预后判断具有重要价值㊂参考文献[1]P L A T T E N M,B U N S E L,W I C K A,e t a l.A v a c c i n e t a r-g e t i n g m u t a n t I D H1i n n e w l y d i a g n o s e d g l i o m a[J].N a-t u r e,2021,592(7854):463-468.[2]黄灵,邹有瑞,李琢琦,等.C H K A基因沉默对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其机制[J].中国癌症杂志,2021,31(11):1041-1049.[3]薛彩强,杜晓灏,金龙,等.基于M R I深度学习模型预测WHOⅡ㊁Ⅲ级胶质瘤MGM T启动子甲基化状态[J].中华放射学杂志,2021,55(7):734-738.[4]蔡志超,池琦.磁共振扩散张量成像定量参数对脑胶质瘤分级的诊断价值[J].现代肿瘤医学,2019,27(11):2005-2009.[5]M E L L I N G HO F F I K,E L L I N G S O N B M,T O U A T M,e ta l.I v o s i d e n ib i n i s oc i t r a t ede h y d r o g e n a s e1-m u t a t e d a d-v a n c e d g l i o m a[J].J C l i n O n c o 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p21 WAF1／Cip1和p27 Kip1在宫颈癌及癌前病变的表达及临床意义
Ｈ ． Ｐ Ｎ ａ ｅ ｒ ｉｅ ｙｈ ｂｉ ａ ｔ ｅ Ｉ（ ＣⅡ） ａｄｅｒｉ ｉ ｓ ａ ｂａ ｅ Ｒ Ｈ Ｖ Ｄ Ａ ｗ ｓ ｔ ｍ ｎ ｄｂ ｙ ｒ ｃｐ ｒ Ｉ Ｈ ｄｅ ｄ ｕ ， ｅｖ ａ ｂｏ ｙｗ ｓ ｔ ｎｄ ｎ ｅ ｌ ｐ ｏ ｉ ｕ ｄ ｒ ｏ ｏｅｐ ｉ ｎ ｉ ｎ ｓｓｂ ｉｏ ａ ｏ ｇ ｓ ． ｈ ｎｐ １ “ ｎ ｅ ｌ ｓｏ ｙｗｔ ｆ ａ ｄａ ｏｅ ｙｈｓ ｐｔ ｌ ｉ ｔ ｔ Ｔ ｅ ２ ａ ｄｐ ７ ｅ． ｅｐ ｈｉ ｌ ｇ ｔ ｈ ｏ ｅｅｓ ｎ ２ ｘ
病 变 （ ５组 ） Ｈ — Ｐ 阳性 率分 别 为 ： 性 宫 颈 炎 ３ ． ６ （ ５ ３ ， Ｉ ０ （ ２ 共 的 ＲＨ Ｖ 慢 ８ ４ ％ １／ ９） Ｃ Ｎ Ｉ８ ％ １／ １ ） ＣＮⅡ ８ ．２ （ ８ ２ ） Ｃ Ｎｌ ９ ． ３ （ ６ ６ ） 宫颈鳞 癌 ８ ．９ （ ４ ２ ） ５ ，Ｉ １ ８ ％ １／ ２ ， Ｉ Ｕ ３ ３ ％ ５ ／ ０ ， ８ ８ ％ ２ ／ ７ 。慢性 宫颈 炎 Ｈ — Ｐ Ｎ 负荷量 明显低 于其他 ４组 （ ＝ ．６ ｇ ｍ ， ０ ０ ） Ｃ Ｎ Ｉ～Ⅲ及 ＲＨ Ｖ Ｄ Ａ Ｍ ０ ５ ｐ／ ｌＰ＜ ． １ ， Ｉ
ｐ７ ：．００４ Ｐ＜ ． １ ２ ０３ 、．６， ０ ０ 。结论 ：２ ｗ ｃ ｐ１圳／ 和 ｐ７ 表 达增 强 与宫 颈病 变进 展 密切 相 ２
关 ， 宫颈 ＨＲ ＨＰ 对 — Ｖ持 续感 染及 高 负荷 量 患者 可行 ｐ １ ２～
病 变的发 生和发展 。
和 ｐ ７ 检 测 以预 测 细胞 ２
维普资讯
２０ ０ ８年 ８月第 ｌ ７卷第 ８期
Ｐｏ ｂｔ ｖ ｅｏ． 峨 ２０ ． ｏ １ Ｎ ． ｒ Ｏ ｓ ｔ ｎ ｃ１Ａ ｇ ｅＧ ０ ８ Ｖ １ ７．ｏ８ ．
细胞周期与肿瘤
细胞周期调控与肿瘤Cell Cycle Control and Cancer主要内容细胞周期概述细胞周期运行的分子机制——CDKs调控机制 细胞周期运行的的启动和监控细胞周期的启动—限制点细胞周期的监控—检查点细胞周期与肿瘤发生、治疗、耐药细胞周期概述增殖是生命的基本特征种族的繁衍、个体的发育、损伤的修复一个受精卵发育为初生婴儿，细胞数目增至1012个，长至成年有1014个成人体内每秒钟仍有数百万新细胞产生，以补偿血细胞、肠粘膜上皮细胞等的衰老和死亡。
无限制的增殖是一场灾难！细胞无限制增殖对个体来说意味着癌症个体无限制繁殖对地球来说意味着灾难一个大肠杆菌若按20分钟分裂一次，并保持这一速度，两天即可超过地球的重量。
细胞的增殖由细胞周期系统执行什么是“细胞周期”¾连续分裂的细胞从一次分裂完成开始¾到下一次分裂完成为止，所经历的全过程。
¾细胞周期是细胞复制/繁殖的过程¾其结果是产生两个子细胞。
细胞周期三个重要事件：细胞内容物加倍（doubling of cell mass）染色体的忠实复制染色体精确的分离和细胞内容物的大致等分细胞周期的四个时相：G1、S、G2、M间隔（G1、G2）: 感受促增殖或抑增殖的信号复制细胞器和胞质组分；合成（S）: 染色体复制；分裂（M）: 染色体分离和其他细胞组分分配到两个子细胞。
间期(G1、S、G2）分裂期（M)分裂期分为四个阶段Prophase(早期)Metaphase(中期)Anaphase(后期)Telophase(末期) Spindle fibres/Prophase: Chromatin condenses into chromosomes；Nuclear envelope starts to disappear.Metaphase：Chromosomes attach to spindles andalign at the equatorial plate.Anaphase：Sister chromatids separate and move apart.Telophase: Daughter chromosomes arrive the pole of spindle；A new envelope reassembles; Cytoplasm divides.不同细胞的分裂速率不一样酵母细胞：2小时变形虫：几天人胚胎细胞：15-20分钟人成年细胞：8小时-100天主要内容细胞周期概述细胞周期运行的分子机制——CDKs调控机制 细胞周期运行的的启动和监控细胞周期的启动—限制点细胞周期的监控—检查点细胞周期与肿瘤发生、治疗、耐药细胞周期调控的关键因子的发现——2001年诺贝尔生理学医学奖Paul Nurse：1990，发现MPF中具有激酶活性的蛋白是cdc, 其活性需要cyclin，称之CDK（cyclin-dependent kinase）。
p57 kip2和p21 cip1在人脑胶质瘤中的表达和临床意义
２ ００８年 １０月
西 安 交 通 大 学 学 报 （医 学 版 ）
Ｊ ｕ ｎａ ｆ Ｘｉａ ｉ ｏ ｏｎｇ Ｕ ｎｉ ｒ ｉｙ（ ｅ ｃ ｌＳ ｉ ｃ ｓ ｏ ｒ ｌｏ ’ ｎ Ｊ ａ ｔ ｖｅ ｓｔ Ｍ ｄｉａ ｃｅｎ ｅ ）
Ｖ ０１２９ Ｎ ｏ． ． ５ ０ｃ．２ ８ ｔ ００
摘要 ： 目的
探 讨 ｐ ７ 蛋 白 、２ 蛋 白在 人 脑 胶 质 瘤 中 的 表 达 情 况 及 其 临 床 意 义 。 方 法 采 用 免 疫 组 织 化 学 Ｓ ５ ｐ１ Ｐ
法 检测 ｐ ７ 、２ 在 ５ ５ ｐ １ ５例人 脑 胶 质 瘤 和 １ ｏ例 正 常 脑 组 织 中 的表 达 。 结 果 在 ５ 例 胶 质 瘤 中 ，５ 蛋 白 阳性 率 ５ ｐ７ 为 ３ ． （１ ５ ） 显著 低 于 正 常 脑 组 织 的 ８ （／ ０ （ ８ ２ ２／ ５ ， Ｏ ８ １ ）Ｐ一 ０ ０ ６ 。ｐ ７ 蛋 白表 达 在 低 度 恶性 （ ． ３ ） ５ Ｉ一 Ⅱ级 ） 显 著 组 高 于 高度 恶 性 （ｌ Ⅳ级 ） （ Ｉ一 ｌ 组 Ｐ一００ ９ ， ． ２ ） 生存 时 间 ≥ ２年 组 显 著 高 于 ＜ ２年 组 （ Ｐ一 ０ ０ ２ 。 脑 胶 质 瘤 中 ｐ １ 蛋 白 ．３） ２ 阳性 率 为 ６． （ ３５ ）与 正 常 脑组 织 的 ９． （／０ 相 比 ， 异 无 统计 学 意 义 （ ００ ３ ／ ５ ， ００ ９１） 差 Ｐ一 ０ １ ３ 。 ｐ １ 蛋 白表 达 在 高 ． ４ ） ２ 度 恶性 （Ｉ Ⅳ级 ） Ｈ一 组湿 著 低 于 低 度 恶 性 （ Ｉ一 Ⅱ级 ） （ ｏ０ ７ ， 存 时 间＜ ２年组 显 著 低 于 ≥ ２年 组 （ 一 ０ ０ ２ 。 组 Ｐ— ． ４ ）生 Ｐ ． ０ ） ｐ ７ 蛋 白 的表 达 与 ｐ １ 蛋 白的 表 达存 在 正 相 关 （ｓ ．５ ， ００ ８ 。 结论 ５ ２“ ｒ：０ ３ ４Ｐ一 ． ０ ） ｐ ７ 蛋 白和 ｐ １ 蛋 白在 脑 胶 质 ５ ２“
细胞周期调控
2001年诺贝尔生理学和医学奖细胞周期调控一、背景介绍2001年诺贝尔生理学医学奖授予美国西雅图弗瑞德·哈钦森癌症研究中心的Leland H Hartwell、英国伦敦皇家癌症研究基金会的Sir Paul M. Nurse和R. Timothy Hunt，以表彰获奖者们在细胞周期调控方面的卓越发现和贡献。
Leland (1939年生)在上世纪60年代末便认识到用遗传学方法研究细胞周期的可能性。
他采用啤酒酵母细胞建立系统模型，经过一系列试验，分离出细胞周期基因发生突变的酵母细胞。
Hartwell和其他科学家相继发现了100多种与细胞周期调控相关的CDC基因族。
其中，Hartwell发现的CDC28调控细胞周期G1期进程的第一步，故又称为“start”基因。
另外，Hartwell在研究酵母细胞对辐射的敏感性基础上，提出了著名的“checkpoint”概念，即当DNA受损时，细胞周期会停止。
这一现象的生理意义在于，在细胞进入下一个细胞周期之前能有足够的时间进行DNA修复。
后来，Hartwell将“checkpoint”的概念扩展到调控并保障细胞周期各期之间的正确顺序。
Sir Paul (1949年生)继Hartwell之后在70年代中期采用非渊粟酒裂殖酵母细胞为模型，发现了cdc2基因在细胞分裂(从G2期到有丝分裂期)调控方面起重要作用。
后来，他发现cdc2与Hartwell在啤酒酵母中发现的“start”基因相同，还可调控从G1期到S期的转变。
因此，cdc2基因可调控细胞周期的不同阶段。
1987年，Nurse分离出人类的相应基因——CDK1。
Nurse发现CDK的活性依赖可逆性的磷酸化反应。
基于这些理论，又有一些人类的CDK分子相继被发现。
R. Timothy Hunt(1943年生)在80年代早期发现了第一个周期蛋白分子。
周期蛋白是一种在细胞周期中周期性产生和降解的蛋白质。
周期蛋白与CDK分子结合，调节CDK的活性。
p21基因作用
p21基因作用
P21基因，也称为CDKN1A基因，是人类基因组中的一个关键基因。
它编码了一种蛋白质，称为p21蛋白质（或Cip1/Waf1）。
p21蛋白质是细胞周期调控的重要调节因子之一。
p21蛋白质的主要作用是抑制细胞周期的进展。
当细胞受到DNA损伤、细胞应激或其他压力刺激时，p21蛋白质的表达会被上调。
p21蛋白质可以与细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）和细胞周期蛋白（Cyclin）形成复合物，从而阻止细胞周期的进程，使细胞停留在G1/S和G2/M 转换点，从而保证细胞有足够的时间来修复DNA损伤或应对其他应激。
此外，p21蛋白质还具有其他重要的功能。
它参与细胞分化、凋亡、老化等多种生物学过程，并在肿瘤发生和发展中发挥重要作用。
p21蛋白质的异常表达与多种肿瘤的发生和预后有关，因此，研究p21基因的作用对于理解细胞周期调控、肿瘤发生机制以及治疗策略的制定具有重要意义。
脑胶质瘤分子标志物IDH1、IDH2、p53基因突变和Ki-67蛋白表达与病理分级临床特征的关系
脑胶质瘤分子标志物IDH1、IDH2、p53基因突变和Ki-67蛋白表达与病理分级临床特征的关系孙怡;李惠;吴颐;李健;申龙树;王耀辉;王剑蓉;章宜芬【摘要】目的通过联合检测脑胶质瘤样本异柠檬酸脱氢酶1、2(IDH1、IDH2)基因突变/p53基因突变以及Ki-67蛋白表达情况,明确不同脑胶质瘤基因型特征,探讨其表达与胶质瘤病理分级和临床特征的相关性,为临床诊断与治疗提供分子病理学依据.方法采用直接测序法检测46例胶质瘤样本IDHl基因第132位密码子、IDH2基因第172位密码子突变及p53基因第5~8外显子突变,免疫组织化学方法检测样本Ki-67蛋白表达,分析分子标志物与样本临床特征和病理分级相关情况.结果共检出32.6%(15/46)的样本发生IDH1基因R132H突变,WHOⅡ~Ⅳ级样本中突变率分别为40.0%、58.3%、17.4%,IDH1基因突变与较低年龄(P=0.028)、肿瘤位置发生于额叶(P=0.002)、WHOⅡ~Ⅲ级组织学分级(P=0.047)、Ki-67蛋白低表达(P=0.034)显著相关;检出4例胶质母细胞瘤样本发生p53基因突变,突变位点位于第7、8外显子,并伴IDH1基因野生型;所有样本Ki-67均有阳性表达,在Ⅱ~Ⅳ级胶质瘤中Ki-67表达呈上升趋势,不同级别胶质瘤间Ki-67阳性表达程度有统计学差异(P<0.01),Ki-67低表达组IDH1突变率高于Ki-67高表达组,IDH1基因突变与Ki-67表达呈负相关.结论不同病理分型胶质瘤的IDH1基因突变比例存在差异,在WHOⅡ~Ⅲ级中最高,IDH1、Ki-67表达水平与胶质瘤分级密切相关,p53基因突变在原发性胶质母细胞瘤中更常见,IDH1、p53、Ki-67联合检测有利于胶质瘤的诊断分级和预后评估,具有一定的临床价值.%Objective To investigate the mutations of IDH1,IDH2,p53 gene,and Ki-67 protein expression in different grade of gliomas and identify the association with its clinical relevance. Methods The mutations of IDH1,IDH2 and p53 gene were detected bydirect DNA sequencing,and protein expression of Ki-67 was analyzed by immunohistochemistry. The correlations between gender,age,tumor site,differentiation degree and pathological type of patients were analyzed. Results R132H mutation of IDH1 gene was detected in 32.6% samples (14/46 cases),of which the proportion of WHO classification grade Ⅱ was 40.0%,and grade Ⅲ was 58.3%. IDH1 mutations were shown correlated with age,pathology level Ⅱ-Ⅲ,and Ki-67 low expression. p53 mutations were detected in 4 glioblastomas,with mutations located at exon 7,8. IDH1 gene mutation was negatively correlated with Ki-67 expression. Conclusions The proportion of IDH1 gene mutation in different pathological types of gliomas is different,which is the highest ingradeⅡ~Ⅲ. It is suggested that the subtypes should be listed independently by routine tests. Mutations in p53 gene are more common in primary glioblastomas and may be associated with adverse outcomes. The combined detection of DH1,p53 and Ki-67 is conducive to the diagnosis and prognosis of glioma.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2018(034)009【总页数】5页(P1455-1459)【关键词】胶质瘤;突变;IDH1;IDH2;p53;Ki-67【作者】孙怡;李惠;吴颐;李健;申龙树;王耀辉;王剑蓉;章宜芬【作者单位】南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院神经外科南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院神经外科南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029;南京中医药大学附属江苏省中医院病理科/国家中医药管理局分子生物学三级实验室南京 210029【正文语种】中文胶质瘤是最常见的颅内恶性肿瘤，其发病率约占原发性脑肿瘤的40%～50%左右，而且呈逐年上升趋势［1-2］。
DNA损伤修复
DNA damage response (DDR)——损伤太强导致的细胞周期停滞（cell-cycle arrest）DNA 分子在进行一系列DNA 的复制、包装、分离和转录等复杂的动态过程中伴随着大量的DNA 损伤及复制错误。
基因组还会受到各种存在于环境中的诱变剂攻击，例如电离辐射和化学试剂。
各式各样的基因毒性压力伴随着许多类型的基因突变，包括双螺旋断裂（DSBs），单链的DNA 断裂，DNA 交叉互换及插入，核苷酸碱基修饰、插入、缺失及染色体易位。
其中危害最大的是DNA 双链断裂。
DNA 的损伤可以进一步破坏机体细胞、组织及器官。
细胞进化出了一种DNA 损伤应激反应可以修复DNA 损伤，高度保守的DNA 损伤修复应答机制可以维持基因组的完整性[1]。
DNA损伤应答（DNA Damage Response）是细胞对DNA损伤后的一种应激反应。
正常细胞具有复杂的DNA损伤应激反应通路，其激活会引起细胞周期停滞、细胞凋亡或者细胞衰老，并抑制细胞癌变的发生[1]。
当高水平的DNA 损伤发生时，细胞周期检查点被激活，使细胞周期停滞，待细胞修复系统修复这些损伤后，细胞周期恢复运转，其中，细胞周期检查点的激活需要DNA 损伤达到一个阈值[2]。
细胞周期检查点的激活需要DNA 损伤达到一个阈值DNA 损伤能够激活细胞周期检查点，但是，事实上在增殖的哺乳动物细胞中，每小时每个细胞DNA 大约发生一万次修饰。
并不是任何程度的DNA 损伤细胞都会发生激活检查点，在低水平的DNA 损伤情况下，细胞周期检查点不会被激活，单个DNA 双链断裂足以引起检查点的激活。
DNA 损伤程度依赖于处理时间的长短，细胞周期检查点的激活需要DNA 损伤达到一个阈值。
DNA 损伤激活细胞周期检查点[2]自然界各种物理、化学因子如射线或化学药物可以引起细胞内DNA 损伤。
细胞增殖过程中，当DNA 损伤发生时，细胞激活一种调节机制，使细胞周期停滞，待细胞修复系统修复这些损伤后，细胞周期恢复运转。
细胞分裂和细胞周期调控
4).末期Ⅱ：形成核膜，染色
体去凝集，形成4个单
倍体的子细胞。
减数 分裂 和有 丝分 裂的 比较
减数分裂的生物学意义
◆保证染色体数目在世代交替中的恒定, 先减半成1n, 形成合子时, 又成为2n;
◆染色体间分离时的重组,提供了遗传的多 样性;
➢ 先GC，后AT，先常染色质，后异染色质 ➢ rDNA在S期前半程复制 ➢ X染色体长臂在S期末期复制
中心粒开始复制并完成
二、细胞周期各时相及主要事件
3. G2期 (DNA合成后期) 染色体凝集相关蛋白，微管蛋白 合成成熟促进因子，为M期作准备 完成0.3％DNA 复制 中心粒开始长大，向两极分离
G1＋S＋ G2
有丝分裂期(mitosis)
G0期(静止期)
若胞外信号为抑制性信号，细胞将延迟通过G1期，进 入一个特殊的静止期，不合成DNA， 称为G0期。 不进行分裂，处于静止状态数周甚至更久。 如某些免疫淋巴细胞, 肝,肾细胞等。
G0期
二、细胞周期各时相的动态变化
1. G1期(DNA合成前期)
多聚核糖体再形成
磷脂合成速率增加
Байду номын сангаасG2
M
RNA合成
RNA合成停止
放线菌素D敏感
蛋白质继续合成 蛋白质合成减少 微管蛋白合成
非组蛋白继续合成 DNA开始转录 染色体凝集分离
合成磷脂
多聚核糖体散开
三 细胞周期的调控 (Control of the Cell Cycle)
（一）研究周期调控系统常用的真核细胞系统 1.酵母 2.爪蟾胚胎细胞 3.体外培养的哺乳动物细胞
细胞周期2009
（一）细胞周期调控蛋白（cell cycle-regulating protein）
CDK（蛋白激酶）
—— 催化亚基
细胞周期素（Cyclin） —— 调节亚基 CDK抑制因子（CKI） —— 抑制CDK激酶活性
1. CDK（cyclin-dependent kinase）
CDK1——CDK7等
分子的特性： ①各种CDK分子均含有一段相似的激酶结构域， 这一区域有一段保守序列，即PSTAIRE，与cyclin结 合有关。 ②具有磷酸激酶（丝/苏氨酸蛋白激酶）的活性， 作为催化亚基 。 分类① G1、G1/S 、S期—CDK 运行周期，启动DNA复制
G1期:完成必要的生长和物质准备，检查DNA的完 整性。 S期:染色体DNA的复制。
G2期:必要的检查及修复以保证DNA复的准确性。
M期:DNA均等分配到子细胞中，细胞一分为二。
G1 - first gap
S - DNA synthesis
(replication) G2 - second gap M - mitosis
哈特韦尔、纳斯和亨特三人的发现对研究细 胞的发育有重大的影响，特别是对开辟治疗癌症 新途径将具有极其深远的意义。科学家在研究中 逐渐发现，几乎所有癌基因、抑癌基因的生物学 效应，最终都会聚到细胞周期机制上来，许多癌 基因、抑癌基因直接参与细胞周期的调控，或者 本身就是细胞周期调控复合体的主要成分。这些 基因变异的结果，导致了细胞周期的失控。失去 控制的细胞无限制地增殖，形成肿瘤。
（4）以裂殖酵母菌为研究对象找到 了 cdc2 基因，其功能与 cdc28 相当， 不但能控制G2期进入M期的检查点， 也能控制 G1期进入 S期的检查点。此 基因翻译产物是一种蛋白质激酶，主
肿瘤分子细胞生物学
肿瘤分子细胞生物学肿瘤分子细胞生物学起源与演进、细胞分化与肿瘤、肿瘤生长的细胞生物学、肿瘤的侵袭与转移、血管生成与肿瘤、肿瘤的超微结构、肿瘤标记物、端粒和端粒酶与肿瘤、细胞凋亡与肿瘤、化学致癌因素及其致癌机制、物理性致癌因素及其致癌机制、病毒致癌因素及其致癌机制、免疫与肿瘤、激素与肿瘤、遗传与肿瘤、微卫星DNA与肿瘤、肿瘤基因及其调控机制、细胞周期与肿瘤、细胞信号转导与肿瘤和转基因动物技术一、肿瘤细胞的物质代谢肿瘤细胞的最基本的生物学特征就是恶性增殖、分化不良、浸润和转移等。
这些恶性行为与肿瘤的特殊生化代谢过程密切相关。
细胞癌变是从致癌因素引起靶细胞的基因突变开始的，基因突变引起基因表达异常，导致细胞中蛋白质和酶谱及其功能的改变，酶是物质代谢的催化剂，当酶功能和活性发生重大变化时，必然引起物质代谢的改变。
（一）糖代谢的改变肿瘤细胞糖代谢的改变主要表现为酵解明显增强。
正常肝组织在有氧条件下由氧化供能约占99%，而酵解供能仅占1%，但肝癌组织中糖酵解供能可高达50%。
（二）核酸代谢的改变肿瘤组织中RNA及DNA合成速率皆比正常组织高，而分解速率则下降。
（三）蛋白质代谢的改变肿瘤相关的标志酶或蛋白，如胚胎性蛋白质合成速率增快。
相反，与细胞分化相关的酶或蛋白合成则会减少或几乎消失。
总之，与肿瘤细胞恶性增殖相关的生物化学代谢特点是：合成细胞结构成分的代谢途径明显增加；细胞成分及合成原料的分解代谢途径明显降低，酵解增加。
二、肿瘤细胞酶学的改变肿瘤组织中某些酶活性增高，可能与生长旺盛有关；有些酶活性降低，可能与分化不良有关。
例如肝癌病人在血中γ-谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶和碱性磷酸酶的同功异构酶均可升高；骨肉瘤的碱性磷酸酶活性增强而酸性磷酸酶活性弱；前列腺癌的酸性磷酸酶可升高；肺鳞状细胞癌的脂酶活性随分化程度降低而减弱。
由于癌细胞的新陈代谢与化学组成都和正常细胞不同，可以出现新的抗原物质。
有些恶性肿瘤组织细胞的抗原组成与胎儿时期相似，如原发性肝癌病人血清中出现的甲种胎儿球蛋白(AFP)，AFP的特异性免疫检查测定方法是肝癌最有诊断价值的指标。
细胞周期及其调控研究进展
细胞周期及其调控研究进展于庆羽【期刊名称】《《吉林农业C版》》【年(卷),期】2011(000)004【总页数】1页(P67-67)【关键词】细胞周期; 调控【作者】于庆羽【作者单位】吉林农业科技学院生物工程学院吉林吉林 132101【正文语种】中文【中图分类】Q21 细胞周期调控自1951年Howard和Pelc提出细胞周期的概念以来，细胞周期的研究不断深入，目前对其机制和调控已比较明确。
细胞周期是指从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束，细胞一分为两个子细胞的时期，可分为G0期（静息期）、G1期(DNA合成前期)、S期(DNA合成期)、G2期(DNA合成后期)、M期(有丝分裂期)，5个时期；在这个过程中有两个主要限制点，即G1/S限制点(G1→S期，修复染色体中受损的碱基)和G2/M限制点(修复细胞分裂之前已复制DNA上出现的损伤)。
近年来，随着细胞周期素(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK) 和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(CKI)的发现，细胞周期的研究取得了很大突破。
1.1 G1期的Cyclins和CDKs细胞从静息状态进入细胞周期时首先合成的CyclinD与CDK4、CDK6结合形成复合物，在CAK介导下，使CDK4/6的172位酪氨酸残基发生磷酸化，共同激活其激酶活性。
静息期细胞缺乏CyclinD，但在生长因子刺激下其表达量会增加。
CyclinD水平只在G1期的晚期有一个微峰值，其表达依赖生长因子的持续作用。
Zhou等发现CyclinD1主要在G1的中至晚期发挥作用。
CyclinE是一种合成比CyclinD稍晚的另一种G1期细胞周期蛋白，它与CDK2结合形成复合物，该激酶活性的峰值出现在G1晚期。
通过向细胞内注射抗CyclinE或者抗CDK2的抗体，发现细胞停在G1期，说明细胞进入S期需要CyclinE及CDK2的参与。
1.2 S、M期的Cyclins和CDKsLabbe研究表明CyclinA是DNA复制所必需的，他将反义的cDNAs或抗CyclinA抗体注入到细胞，发现细胞在DNA合成过程中受到抑制。
KLF4在正常生理活动与肿瘤中的作用
KLF4在正常生理活动与肿瘤中的作用吴钊【摘要】Krüppel-like factor 4(KLF4)是一个在多种组织中广泛表达的锌指结构转录因子,作为KLF因子家族的一员,KLF4在细胞分化和细胞周期停滞中扮演重要角色.根据靶基因不同,KLF4既可以激活又可以抑制转录作用.此外,在特定的细胞微环境情况下.KLF4既可以作为肿瘤抑制因子也可以作为癌基因.对于KLF4因子不同功能间的转换,在正常细胞以及癌细胞中的作用及其相应的分子机制研究,将进一步为肿瘤的发生和治疗的研究提供新的策略和思路.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2010(022)003【总页数】3页(P246-248)【关键词】KLF4;肿瘤;转录因子【作者】吴钊【作者单位】重庆医科大学附属第一医院胃肠外科,重庆400016【正文语种】中文【中图分类】R730.5Krüppel-likefactor4（KLF4）是一种在多种人类组织中广泛表达的转录因子，包括肠道和上皮组织，并在许多不同的生理活动包括生长、分化和正常组织稳态的维持中具有重要作用。
KLF4是一个双重功能转录因子，根据不同的靶基因，通过不同的机制，既可以激活又可以抑制转录作用。
另外，KLF4在不同的肿瘤中可以作为癌基因或肿瘤抑制因子。
本文对KLF4在正常生理活动及其在肿瘤发生与发展中作用的研究现状作一综述。
Krüppel是黑腹果蝇的一种包含锌指结构的转录因子，对控制胚胎发生有重要作用。
大量哺乳动物基因与Krüppel的DNA结合域具有序列同源性［1］。
其中的KLFs最为近似。
最近发现KLFs对哺乳动物胚胎的生长有重要作用。
KLF家族至少有16个不同的成员组成，并根据其结构分为几个亚组。
其中最大的亚组包含至少7个蛋白，其典型基因为KLF1。
而KLF4和KLF2锌指结构的氨基酸序列和核定位信号与KLF1极近似。
细胞增殖分化异常与疾病
⑷增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）
也是一种细胞周期相关蛋白，它不与CDK结 合，而作为DNA聚合酶的附属蛋白，促进DNA聚 合酶延伸DNA，在S期浓度最高，故常可作为S期 标志物之一。
cyclin、CDK、CDI之间的关系（小结）
在细胞周期中，cyclin与CDK形成复合体，激活 CDK，推动细胞周期行进；
当CDI介入，形成cyclin/CDK/CDI复合体或cyclin 减少时，CDK活性受到抑制，就终止细胞周期行进，这 种调控，在细胞周期过程中，根据实际需要有序进行， 使细胞周期运行与环境和发育相一致。
CDK又受Rb和P53、myc等基因的控制，使之与细胞 分化和细胞死亡相协调，完成细胞增殖。
⑸泛素依赖的蛋白溶解系统 泛素，是由76个氨基酸组成的小分子蛋白，
CDI是CDK的抑制物，分子量较小，哺乳类 细胞的CDI主要包括Ink4（Inhibitor of cdk4）和 Kip（kinase inhibition protein，Kip）等。
当出现某种应激或损伤时，Kip和/或Ink4发 挥作用， 使带有某种类型损伤的细胞阻滞在G1期。
Ink是一组CDK4的抑制蛋白，分子量15~20KD ，
连续分裂的细胞按G1→S→G2→M四个阶段循环，又称 为周期性细胞（不稳定细胞）。
有些细胞可暂时脱离细胞周期，不进行增殖，需 要适当 刺激才可以重新进入细胞周期，称为G0期细胞，如肝细胞、 肾小管上皮细胞等等（稳定细胞）。
还有些细胞如神经细胞、心肌细胞等永远脱离细胞 周期，
细胞周期的特点
①单向性 细胞只能沿G1→S→G2→M方向推进，不能逆转。 ②阶段性 各期细胞形态和代谢特点有明显差异，细胞可因某 种原因而在某时相停滞下来，待生长条件适合后，细胞 又可重新活跃到下一时期。 ③检查点 控制各时相交叉处存在着检查点（checkpoint）决 定细胞下一步的增殖分化趋向。 ④细胞微循环影响 细胞周期是否顺利推进与细胞外信号、条件等密切 相关。
G2M检验点调控机制研究概述
G2/M检验点调控机制研究概述季宇彬1,2,3，高鹏1,2,，邹翔1,2,3（1．哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨150076；2. 国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，哈尔滨150076；3．哈尔滨商业大学药物所博士后科研工作站，哈尔滨150076）摘要：G2/M检验点是阻止带有DNA损伤的细胞进入有丝分裂期的最后一道关卡，是目前研究的热点，Cdc2(Cdk1)-cyclinB复合物是G2/M检验点调节的关键因子，Cdc2(Cdk1)-cyclinB的活性受多种因素的调控，现对G2/M检验点调控机制的研究现状作一综述。
关键词：G2/M检验点；cyclinB；Cdc2 ；Cdc25Abstract：G2／M cell cycle checkpoints is the final hurdle to prevent a cell with DNA damage from going into mitosis，and is currently on a hot. The Complex of Cdc2 (Cdk1)-cyclinB is the keyfactor of the G2 / M cell cycle checkpoints. The activity of Cdc2 (Cdk1)-cyclinB is regulated by many factors. This overview would explain the status quo of modulating mechanism of G2 / M cell cycle checkpoints.Key words：G2／M cell cycle checkpoints；cyclinB ；Cdc2；Cdc25细胞周期指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程，通常分为G l期、S期、G2期和M期，在这四个时相中均发生特定的生物化学反应。
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p57kip2和p21cip1在人脑胶质瘤中的表达和临床意义(一)
作者：杨涛，张熙，周乐，屈建强
【摘要】目的探讨p57kip2蛋白、p21cip1蛋白在人脑胶质瘤中的表达情况及其临床意义。
方法采用免疫组织化学SP法检测p57kip2、p21cip1在55例人脑胶质瘤和10例正常脑组织中的表达。
结果在55例胶质瘤中，p57kip2蛋白阳性率为38.2%(21/55)，显著低于正常脑组织的80%(8/10)(P=0.036)。
p57kip2蛋白表达在低度恶性(Ⅰ-Ⅱ级)组显著高于高度恶性(Ⅲ-Ⅳ级)组(P=0.029)，生存时间≥2年组显著高于2年组(P=0.032)。
脑胶质瘤中p21cip1蛋白阳性率为60.0%(33/55)，与正常脑组织的90.0%(9/10)相比，差异无统计学意义(P=0.143)。
p21cip1蛋白表达在高度恶性(Ⅲ-Ⅳ级)组显著低于低度恶性(Ⅰ-Ⅱ级)组(P=0.047)，生存时间2年组显著低于≥2年组(P=0.002)。
p57kip2蛋白的表达与p21cip1蛋白的表达存在正相关(rs=0.354，P=0.008)。
结论p57kip2蛋白和p21cip1蛋白在脑胶质瘤中存在异常表达，p57kip2蛋白和p21cip1蛋白的表达程度与脑胶质瘤的分化程度、预后相关。
【关键词】p57kip2蛋白p21cip1蛋白胶质瘤免疫组织化学ABSTRACT:ObjectiveToexploretheexpressionsofp57kip2andp21cip1inhuma ngliomasandtheirclinicalsignificance.MethodsP57kip2andp21cip1weredete ctedbySPimmunohistochemicaltechniquein55humangliomaand10normalb raintissues.ResultsExpressionrateofp57kip2proteininhumangliomawas38.2 %(21/55),whichwassignificantlylowerthanthatinnormalbraintissues80%(8/
10)(P=0.036).P57kip2expressioninlowmalignancegroup(Ⅰ-Ⅱgrade)wassig nificantlyhigherthanthatinhighmalignancegroup(Ⅲ-Ⅳgrade)(P=0.029)andi nsurvivaltime≥2yearsgroupwassignificantlyhigherthanthatin2yearsgroup(P =0.032).Expressionrateofp21cip1proteininhumangliomawas60.0%(33/55), notsignificantlylowerthanthatinnormalbraintissues90.0%(9/10)(P=0.143).P 21cip1expressioninhighmalignancegroup(Ⅲ-Ⅳgrade)wassignificantlylowe rthanthatinlowmalignancegroup(Ⅰ-Ⅱgrade)(P=0.047)andinsurvivaltime2 yearsgroupwassignificantlylowerthanthatin≥2yearsgroup(P=0.002).The rew asapositivecorrelationbetweentheexpressionofp57kip2andp21cip1(rs=0.35 4,P=0.008).ConclusionTheexpressionofp57kip2proteinandp21cip1proteinis deregulatedinglioma,anditsdegreeiscorrelatedwiththegliomadifferentiatio nandprognosis.Thecombinedanalysisofp57kip2andp21cip1expressioniscon sideredtobemorereliable.
KEYWORDS:p57kip2protein;p21cip1protein;glioma;immunohistochemistry 近来研究表明，细胞周期调控异常与细胞癌变密切相关，二者的关系是肿瘤学研究的热点问题之一〔1〕。
细胞周期调控系统由细胞周期蛋白(cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinase,CDK)和CDK 抑制因子(cdkinhibitor,CKI)组成。
Cyclin与CDK以Cyclin-CDK复合物的形式发挥作用，CKI能竞争性地与CDK结合，抑制其活性，从而调整细胞周期。
新近发现的p57kip2为细胞周期调控因子CKIs家族的新成员，是细胞周期G1/S期的重要调控因子，与多种肿瘤的发生、发展有关
〔2-4〕。
但p57kip2蛋白的表达与脑胶质瘤的关系以及p57kip2蛋白与p21cip1蛋白在脑胶质瘤发生发展中的关系目前尚不清楚。
本文应用免疫组织化学技术，探讨p57kip2、p21cip1在脑胶质瘤组织和正常脑组织中以及不同生存期的脑胶质瘤组织中的表达和意义。
1材料与方法
1.1材料
55例脑胶质瘤标本为西安交通大学医学院第二附属医院2002-2004年手术存档石蜡标本，术后均经病理诊断证实为脑胶质瘤，其中星形细胞瘤42例，多形性胶质母细胞瘤6例，少突胶质细胞瘤5例，室管膜瘤2例。
病例中男28例，女27例，年龄4-71岁，平均40.1岁。
生存时间≥2年24例，2年31例。
根据2000年修改的WHO神经系统肿瘤分类标准，对所有肿瘤进行组织学分类和分级。
其中，Ⅰ级12例，Ⅱ级17例，Ⅲ级18例，Ⅳ级8例。
另10例正常对照脑组织取自我院因颅脑损伤行内减压术的患者，男女各5例，年龄10-65岁，平均36.5岁。
所有患者均未经过放疗或化疗。
鼠抗人p57kip2单克隆抗体(NeoMarkers公司，1∶400)、鼠抗人p21cip1单克隆抗体(NeoMarkers 公司，1∶100)、广谱SP试剂盒购自深圳晶美生物技术有限公司。
1.2免疫组化染色
采用链霉素抗生物素-过氧化物酶法(SP法)检测蛋白表达。
每次实验均以PBS代替一抗作为空白对照，阳性对照片由试剂公司提供。
实验操作按试剂盒说明书进行。
1.3观察测定方法p57kip2蛋白和p21cip1蛋白均以胞核染色为棕褐色颗粒者为阳性细胞。
400倍显微镜下每张载玻片计数500个细胞，依据染色阳性细胞数，计算阳性细胞所占百分比：10%为阴性(-)；10%-25%为弱阳性(+)；26%-50%为阳性；>50%为强阳性。
1.4统计学处理
应用SPSS11.5统计软件进行分析。
用卡方检验、校正卡方检验及Spearman等级相关分析，P0.05为差异有统计学意义。