精子DNA碎片检测操作卡

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精子DNA检测系列简介

产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400018号执行标准号：YZB/闽明0030-2013 生产许可证号：闽食药管械生产许第20110297号
包装规格：10人份/盒、20人份/盒、 40人份/盒
存储条件及有效期：试剂盒于2-8℃避光保存，有效期为12个月。
（三）
精子活体染色试剂盒（拒染法）
检测原理：
利用荧光络黄染料（吖啶橙）具有高度的异染性的特性，以插入的方式与双螺旋的DNA分子
结合，染色后断裂的单DNA精子呈绿色荧光。
医生可通过计算红色和黄色荧光精子即单链DNA
精子的百分率评估精子受精几率。
3、检测操作过程
检测样本：液化后的新鲜精液标本精子洗涤涂片固定
三明市和众生物技术有限公司内部培训资料
生殖医学检测试剂盒系列
精子五联检
1、精子DNA检测试剂盒 2、精子DNA碎片检测试剂盒 3、精子活性检测试剂盒 4、精子形态学检测试剂盒 5、精子核蛋白检测试剂盒
影响精子受精或男性不育的因素

精子死亡率过高精子畸形率过高精子成熟率过低精子染色体异常精子数量过少精子活动力过低精子液化能力过低
完
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%

结果：核蛋白不成熟的精子（IM）染紫蓝色或紫色核蛋白成熟的精子（M）染红色。
操作方法
精子液化精子洗涤精子洗涤
涂片
复染洗脱染色固定
镜检
染色效果
不成熟精子
成熟精子
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
产品基本信息
产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400022号执行标准号：YZB/闽明0033-2013 生产许可证号：闽食药管械生产许第20110297号

精子细胞染色操作卡

精子/血细胞染色操作卡样本准备精液样本1、新鲜完全液化2、精子密度低于10×106/ml，600g离心10分钟后去除大部分精浆，重新悬浮。

血液样本EDTA抗凝血操作步骤1、在预染载玻片的染料中心区域加入标本4μl 盖上盖玻片，以笔的平端轻．轻．挤压盖玻片2、根据染色标本或染色目的的不同，选择下列合适的方法进一步操作：①干片观察（适用于精子形态学染色）室温染色30min~120min 以约30-70°的角度拉动盖片制成精子涂片自然干燥显微镜100×油镜下观察结果②湿片观察（适用于血细胞形态染色）：室温染色15 min后，不揭盖玻片，显微镜100×油镜下观察细胞形态注意事项1、加样量过多、标本液层过厚可影响染色效果，致使细胞受染不匀。

2、以笔的平端挤压盖玻片的中央，使标本均匀覆盖在染料表面，可增加细胞染色的均一性。

3、在制备干片过程中，揭去盖玻片后以约30-70°的角度拉动盖片时，注意应始终保持盖片在载玻片的涂漆表面滑行，不得落入染色区域4、本试剂盒不适于以干片方式染色洗涤后的精子，除非在洗涤后的精子沉淀团内加入精浆重悬。

但洗涤后的精子（不以精浆重悬）可以湿片方式观察，染色3~5min即可观察结果。

5、血液细胞染色最好不要以干片方式观察结果。

网织红细胞染色后不易褪色，但网织红细胞计数应在染色后5小时内完成，因为染色时间过久后部分红细胞会褪色。

6、精液标本可采用湿片和干片相结合的方式观察细胞形态。

可先在湿片状态下鉴定圆细胞形态，然后揭去盖玻片，以干片方式观察精子形态。

湿片状态下可轻易鉴别生精细胞和白细胞：前者胞质中无颗粒而后者胞质中有较多颗粒。

精子核蛋白染色操作卡

精子核蛋白染色操作卡
标本准备：
1．0.2-0.5ml 液化新鲜精液 + 1ml 生理盐水于Eppendorf 管中弃去上清液。

2．Eppendorf 管中加入1.5ml 生理盐水弃去上清液。

3．重复上一步操作离心结束后，弃去上清液。

4. 在Eppendorf 管中加入A 液约0.1-0.2ml ，混匀并计数精子密度。

5. 用洗液A 调整密度至20-40×106/ml 的精子悬液。

操作步骤：
1．精子悬液5μl 干燥。

2．滴加B 液2-3滴/涂片窗流水冲洗。

3．滴加C 液2-4滴/涂片窗流水冲洗。

4．载片插入D 液反应池中流水冲洗。

5．滴加E 液2-4滴/涂片窗流水冲洗，吹干观察。

注意事项:
1. 不同标本，成熟精子的染色本底可能会存在差异。

观察结果时，以该标本具代表性的最浅红染的精子作为对照，较之对照更深染的紫色或紫蓝色精子便可判定为不成熟精子。

2. 试剂盒配备的组织载片高度洁净，请小心保存。

混匀
1000g 离心5min 混匀 1000g 离心5min 组织载片
涂布室温2min
室温5min 室温5min
室温5min。

诱发精子顶体反应检测操作卡(新版20130710)

诱发精子顶体反应检测操作卡操作步骤：1、每例标本同时设测定管和对照管，均加精子悬液0.5m 孵育3小时。

2、测定管+钙离子载体2.5ul对照管+对照液2.5ul 3、以下存在两种反应模式,一种为组织玻片4℃过夜反应模式(推荐),一种为组织玻片37℃反应1小时模式,请酌情使用。

⑴ 4℃过夜反应模式(推荐), a.均加生理盐水 1ml 生理盐水1.5ml 生理盐水至100μl 取10μl 精子悬液涂片干燥。

b.如果不能连续完成检测，则第2步完成后，在测定管和对照管中均加入生理盐水1ml 生理盐水1.5ml 加入生理盐水至100ul 取10μl 精子悬液涂片干燥后的组织载片完全浸泡于盛有组织片保存液的反应池内，置于2-8℃ 至少可保存72h ，取出后可继续进行后面步骤。

c.将干燥组织载片浸于固定液中30min 纯化水浸2min ，换水，重复三次干燥。

d.荧光结合物50μl 置于湿盒内纯化水浸泡2min ，换水，重复三次。

e.干燥每个涂片窗内加1滴荧光封固液盖片,观察。

二氧化碳培养箱（5%CO 2、37℃）孵育15min 。

600g 离心5min 去除上清液 600g 离心5min去除上清液二氧化碳培养箱（5%CO 2、37℃） 600g 离心5min 去除上清液 600g 离心5min去除上清液 4℃过夜反应R)*)/(1.11810*(g rpm 5(2) 37℃反应1小时模式a.均加精子洗液B 应用液 1ml 精子洗液B 应用液 1.5ml 精子洗液B 应用液至100ul 取10μl 精子悬液涂片干燥。

b.如果不能连续完成检测，则第2步完成后，在测定管和对照管中均加入生理盐水1ml生理盐水1.5ml 加入生理盐水至100ul 取10μl 精子悬液涂片干燥后的组织载片完全浸泡于盛有组织片保存液的反应池内，置于2-8℃ 至少可保存72h ，取出后可继续进行后面步骤。

c.将干燥组织载片浸于固定液中30min 纯化水浸2min ，换水，重复三次干燥。

精子-透明质酸结合试验操作卡

精子－透明质酸结合试验操作卡
试剂准备
溶解SHB标本稀释液1支SHB标本稀释液冻干粉，加入5.0ml纯化水溶解
标本准备
精子浓度＞80×106/ml，用SHB标本稀释液稀释标本至20~50×106/ml
操作步骤
1、在包被载玻片的“T”孔内加入液化的精液10μl 盖上盖玻片精液
会自然扩散到“C”孔内。

2、载玻片臵于20~30℃的室温或恒温平台至少反应10min，但不要超过20min。

3、40×物镜下观察结果。

注意事项
1、建议以“SHB标本稀释液”稀释精液，不要使用本试剂盒以外的其他介质调
节精子密度，以免影响检测结果的准确性（可导致检测结果假阳性）。

2、温度和反应时间对检测结果影响明显。

过高的反应温度（＞30℃）可能使检
测结果假性降低，反应时间过长（超过20min），也可能导致检测结果偏低。

3、镜下观察“T”孔结果时，尽量不要太靠近孔的边缘。

4、精子被透明质酸结合的判定标准：（1）精子尾部持续鞭打、头部被结合在玻
片表面，精子不能前行，只能以头部的结合位点为轴心转动，（2）精子尾部持续鞭打、精子头部紧贴玻片，偶尔艰难地“贴壁”缓慢前行。

DNA碎片检测试剂操作步骤及注意事项

DNA操作步骤及注意事项
一、试验前准备
1、将溶液B加入10ml蒸馏水中稀释；
2、已配备好的C液；
3、蒸馏水；
4、70%，90%，100%的乙醇
（为以后方便操作，建议将以上六种溶液，分别装入6个小染缸中。

染缸也可以用我们装玻片的盒子，将稀释后的B液和C液装入其中）
二、操作步骤
1、用生理盐水将待测精液标本浓度调整至1000万/ml左右。

（根据
某些医院多年操作经验将精液浓度调至1000-1500万/ml，更容易镜下观察计数）
2、取溶液A一支，将其在90℃-100℃溶解后（可以用微波炉或电磁
炉水中加热等），再在37℃中平衡5分钟，加入60微升精液标本，必须充分混匀；
3、取预处理玻片一张置4℃左右预冷后，将琼脂糖精液25微升加到
预处理载玻片上，并且迅速盖上盖玻片；放入4℃冰箱5分钟。

（由于琼脂糖精液低温下极容易凝固，因此将琼脂糖精液加到玻片上须迅速盖上盖玻片）
4、从冰箱中拿出标本，小心将盖玻片水平方向推拉掉。

（勿揭开盖玻
片，以免将已经凝固的琼脂糖精液随盖玻片带走）
5、将载玻片在25℃左右室温下，置入稀释后的溶液B中7分钟；取
出，可将载玻片背面残留溶液用滤纸吸干，（勿接触标本区）；置入溶液C中25分钟后；再置入蒸馏水中5分钟，最后分别置入70%，90%，100%的乙醇中各2分钟，取出载波片自然晾干（载波片置入溶液中应保持溶液平静，切勿晃动，以及置入时间尽量准确）
6、染色：加染液D 1-2滴1分钟后，加染液E 2-4滴染色5分钟，（第
二步染色时间可适当延长，染色效果更好），用纯净水洗涤玻片，自然晾干。

光学显微镜400倍或1000倍预览全片计数100—500精子。

精子DNA碎片检测演示文稿

在已婚夫妇中，非意愿性不孕不育的发
生率为7%-46%，并呈逐年增加的趋势，
目前精液常规检查项目不能全面评估男性生育力，随着我国工业化程度的增高，环境污染的逐渐加重，人精神压力的不断增加，因此，精子DNA的检测能够对不育病因做出合理，准确的诊断，有助于选择合适的助孕手段。
第三页，共22页。
（2） DNA碎片程度反映精子遗传物质
第十九页，共22页。
7 治疗
口服抗氧化剂可以降低精子DNA碎片
化程度，提高治疗的成功率，口服抗氧剂（口服VC、VE 、左卡尼汀、抗氧化的中药等）能够显著降低不育患者的精子DNA
碎片化程度，显著调高ICSI的临床妊娠率和胚胎种植率
第二十页，共22页。
8 小结
众多研究结果证实，精子DNA碎片化检测意义重要，能够反映精子遗传物质的完整性，深入的评估男性的生育能力，预测治疗结局和指导治疗
精子DNA化程度与囊胚形成率呈负相关，当阳性精子比例小于20%时，囊胚形成率比当该比例大于20%时提高了50%
第九页，共22页。
（6）胚胎种植率和妊娠率与DNA碎片化
呈负相关
(7) 精子DNA碎片化与反复流产有关
第十页，共22页。
3 .精子DNA碎片化的发生机制
(1)精子发生过程中异常染色质包装染色质是由一条DNA分子缠绕无数核
精子DNA碎片检测演示文稿
第一页，共22页。
检测原理
没有DNA碎片的精子在经过酸变性和
去掉核蛋白后DNA扩散形成特征性的光晕，而带有DNA碎片化的精子不会产生
这种特征性的光晕，根据光晕的有无和
大小判断精子DNA碎片化的程度
第二页，共22页。
1.男性不育检测的新指标

精子活体染色操作卡（3种方法）

精子活体染色操作卡（3种方法）
精子活体染色操作卡
伊红染色法：
1. 滴新鲜精液 + 1滴伊红Y 溶液 30秒后高倍光学显微镜下立即观察、计数。

伊红-苯胺黑染色法：
1．10μl 新鲜精液+ 50μl 伊红-苯胺黑试剂室温放置30秒
2．取约5μl 染液-精子混合物涂片空气中干燥。

3．显微镜至少观察200个精子，计数并计算活精子百分率。

低渗膨胀法：
1．1ml 低渗膨胀液37℃预热约5min 。

2．加入0.1m1液化的精液在37℃下至少保持30min （不要超过2h ）。

3．显微镜至少观察200个精子，计数并计算活精子百分率。

注意事项
1．低渗膨胀液开瓶后，需分装放-20℃环境冷冻保存。

2．试剂盒放2－8℃环境保存，使用有效期为1年，开封后2－8℃保存可用45天
载玻片上混匀
盖上盖玻片轻轻混匀 Eppendorf 管
加盖混匀。

精子DNA碎片检测操作卡

精子DNA 碎片检测操作卡
操作步骤： 1. 将已处理标本60μl ，加到易熔凝胶管内，混匀，37℃孵育待用。

2. 包被载玻片置于冰箱预冷5min 迅速加步骤1精子悬液30μl 于载玻片包被区域盖上盖片置2-8℃冰箱 5min 。

3. 取出载玻片，移去盖片置反应液A 中7min 置反应液B 中25min 浸入大量纯化水中5min ，换水1-2次。

4. 载玻片浸入70%乙醇中2min 90%乙醇中2min 100%乙醇中2min 干燥。

5. 将干燥组织载片以瑞氏染液15-20滴覆盖加入瑞氏缓冲液30-40滴，混合流水轻轻冲洗染片干燥观察500个精子。

注意事项：
1．用SCD 保存液保存的标本．．．．．
检测时，以生理盐水调整精子密度至5-10×106/ml 。

2．检测室温必须控制在20-28℃。

3．盖片必须干净。

4．浸于反应液B 中的时间准确控制在25min 。

试剂准备将易熔凝胶管80℃孵育20分钟，待完全融化后，37℃平衡5min 后待用标本准备以生理盐水调整已液化的新鲜精液浓度至5-10×106/ml 待测
室温15min
不能完成检测的标本，在Eppendorf 管中加入SCD 保存液300μl 和待保存新鲜精液100μl ，混匀．．
置于-20℃或-80℃保存。

精子dna碎片报告单

精子dna碎片报告单
报告单编号： SP-2022-001
受检者信息：
姓名：XXX 性别：男
年龄：35岁婚姻状况：已婚
检测项目：精子DNA碎片检测
样本：精液标本
检测结果：
本次检测结果显示，受检者精子DNA碎片率为25.6%。

正常参考范围为15%-25%，此次检测结果高于正常参考范围。

解释：
精子DNA碎片率是指精液中的DNA断裂的比例。

较高的精子DNA碎片率可能导致不孕症、习惯性流产等问题，对夫妻生育有
一定影响。

尽管本次检测结果高于正常参考范围，不必过于担心，因为精子DNA碎片率受多种因素影响，如环境、生活习惯、饮食等。

受检者可以采取一些措施，如适当的饮食调理、戒烟限酒、
避免接触放射线等，提高身体的免疫力，从而减少精子DNA碎片率。

如果夫妻在1年内未能自然怀孕，建议到专业的生殖医学中
心进行进一步检查和治疗。

备注：本报告单仅供参考，请咨询专业医生进行评估和治疗。

精子DNA碎片检测

（2） DNA碎片程度反应精子遗传物质旳完整性，精子DNA发生碎片化对生育将会产生负面影响，造成不育和反复流产.
精子DNA碎片化程度被以为是一种新旳，评价精液质量和预测生育能力旳指标
（3）男性不育检测旳现状，精子
数量，密度活率和抗精子抗体，这些检验项目旳成果判断和分析主观性较强。经国内外教授研究发觉，男性不育患者旳DNA碎片会明显增多，精子DNA旳完整性是判断精子质量旳有效根据。所以检测精子DAN旳完整性对不育患者精子质量旳评估具有极大旳价值.
5.参照值
精子DNA碎片率正常<10%
临界值10%-15%表达男性生育力有降低旳趋势不论是自然妊娠还是人工助孕成功率还有降低旳可能
碎片异常>15碎片率异常不小于15%表达男性生育力有降低旳趋势不论是自然妊娠还是人工助孕成功率还有降低旳可能，且IVF/ICS助孕有流产风险增长旳可能
6.精子DNA碎片化临床指导目旳
(2) 低氧和氧自由基旳形成
氧自由基（ROS）过多和抗氧化酶旳平衡失调造成旳ROS过多，会造成精子DNA单链和双链旳断裂主要原因是睾丸局部温度增高（精索静脉曲张）
(3) 凋亡异常
细胞死亡旳方式有三种凋亡是其中旳一种它是指细胞旳程序化死亡在一定旳生理和病理条件下，遵照本身旳程序，自动结束其生命旳过程最终细胞脱落立体或分解被其他细胞吞噬一般是一种生理细胞肿胀死亡，胀亡坏死多是指炎性旳病理性变化引起
核小体关键而连成一条串珠样旳长链形成旳核蛋白纤维，染色体是指细胞分裂时由DNA蛋白质纤维螺旋化后形成旳棒状小体染色体是基因旳载体，染色体在分裂旳过程中由间期细胞进入分裂期时染色质纤维经过四级折叠，长度压缩8400倍形成光学显微

精子分析仪使用手册

精子分析仪使用手册(总14页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--XYY型显微影像分析仪——精子分析系统用户使用手册哈尔滨市海慈医疗器械有限公司前言XYY型显微影像分析仪是生物显微技术与形态影像诊断技术相结合的高新技术产品，它的研制成功，将对人类健康作出巨大贡献。

其主要功能特点为高放大倍数、高分辨率、形态直观、视野多样、快捷方便、应用广泛。

该仪器在医疗领域可结合临床用于多种疾病的诊断，能够对早期病变所出现在细胞水平上的改变作出直观的判断，还可用于对人体健康或营养状况的普查，同时在生殖与性病检查方面，亦显示出直观、快速的特点。

该仪器亦可应用在金相分析、文物鉴定、公安侦察等领域。

打开包装箱后，在使用前请认真阅读此使用说明书，然后再按规定的使用方法操作。

阅毕请妥善保存，以便查考。

本套设备的生物显微镜、计算机、彩色显示器、打印机等的安装操作，请用户参照其各自的使用说明书，本说明书只提供系统的连接操作部分。

本产品执行医疗器械注册产品标准： YZB/黑0013-2010《显微影像分析仪》《医疗器械生产企业许可证》编号：黑食药监械生产许号《医疗器械注册证书》编号：黑食药监械(准)字2010第2400026号注意：仪器的安装和连接，必须在断开电源的状态下进行。

未经培训的操作人员不得操作本仪器。

一、系统的组成和名称仪器的组成：1、显微镜放大系统2、图像记录及输出系统3、多媒体图像处理系统二、系统的连接将加密狗插入到电脑主机USB口上LPT口或USB口打印电缆三、系统的主要性能指标*最高分辨率：µm。

*光学功能：相差、明视野、暗视野。

中密度*光源：100W卤灯，24小时开机温升<2℃。

*软件：基于WINDOWS98平台，可实时接收图像,进行图像处理,具有人员登记、资料统计、报表生成、典型图库预览、自动诊断等几大功能。

四、系统各部分的使用说明生物显微镜详见随机携带的《培训教材》视频变倍器规格：电源电压：AC220～240V （50HZ）功率消耗：10W像素：44万水平分辨率：彩色480线放大倍率：40～22000倍之间连续变倍工作温度：-10℃～50℃工作湿度：20～80%控制台规格：分体式电脑主机有关电脑主机的安装和调试，请叁照随机携带的使用说明书。