重庆市禽类鹦鹉热衣原体流行情况调查

2. 结果与分析
2.1 IHA 试剂盒检测 Cps
对 400 份血清样品的进行 IHA 检测，结果表明，阳性样品 157 份，阳性率为 39.3%（结 果见表 1）。
2.2 IHA 检测出的阳性血清对应的组织样品的 PCR 检测
对 IHA 检测出的 157 分阳性血清所对应的 157 份组织样品，经 PCR 检测，共检出 146 份 阳性样品，IHA 检出样品的阳性率为 93.0%（结果见表 1）。
60
26
43.3
26
24
92.3
40
13
32.5
13
13
100
-2-

总 计 Totals
400
157
39.3
157
146
93.0
2.4 重庆市 5 种禽类 Cps 的感染状况
在各区县采集鸭的 100 份样品中，IHA 检测出 43 份阳性样品，PCR 复检确定 41 份阳性 样品，感染率为 41.0%；在采集珍珠鸡的 80 份样品中，IHA 检测出 35 份阳性样品，PCR 复 检确定 30 份阳性样品，感染率为 37.5%；在采集肉鸡的 100 份样品中，IHA 检测出 29 份阳性 样品，PCR 复检确定 26 份阳性样品，感染率为 26.0%；在采集蛋鸡的 100 份样品中，IHA 检 测出 41 份阳性样品，PCR 复检确定 40 份阳性样品，感染率为 40.0%；在采集鹦鹉的 20 份样 品中，IHA 检测出 9 份阳性样品，PCR 复检确定 9 份阳性样品，感染率为 45.0%。说明在重 庆地区的观赏鸟类鹦鹉中，鹦鹉热衣原体的感染最为严重，达到了 45.0%。在重庆地区的家禽 中，除肉鸡的感染率略低外，鸭、蛋鸡、珍珠鸡的感染率均较高（结果见表 2）。
97.6
20
9
45.0
9
9
100
400
157
39.3
157
146
93.0
3. 讨论
3.1 Cps 在重庆的流行情况及其影响
通过 IHA 和 PCR 方法对重庆市 6 个区县的不同养殖环境下的 5 种禽类的 400 份样品的检 测结果发现阳性率约为 39%，远远高于我国 1987~1989 年全国 Cps 阳性率的 10.96%[7]。表明 重庆地区 Cps 感染情况较为严重，不同地区和种类的样品阳性检出率都较高，对整个重庆地 区的禽业养殖有着严重威胁。本次采集的各种样品涵盖了肉鸡蛋鸡的集约工厂化饲养；珍珠 鸡、鸭的人工放养；鹦鹉的个体饲养等几种饲养环境。发现衣原体在重庆地区禽类中的整体流行性。Cps 主要引起禽类腹泻和慢性感染，造成肉鸡的生长缓慢或生长不良；对蛋鸡影响就更大，直接 影响到产蛋率，此次采集组织中主要为输卵管黏膜组织，其中通过 PCR 检测得出的阳性率相 当高，如果是种禽通过母子感染，情况将难以控制。各种饲养环境下的高阳性率，表明了个 体间的交互感染严重，特别是鹦鹉作为观赏鸟类和人接触紧密，人被感染的具体情况还不清 楚。根据美国一项研究揭示，当禽衣原体病的流行率达到百分之几时，30％养有病鸟的家庭 成员会感染上该病[6]。因此，鹦鹉热衣原体对重庆地区居民健康也具有相当大的威胁。鹦鹉热 衣原体感染人后将造成人类非正常性流产，支气管炎，心肌炎等[8]。有必要对与禽类接触紧密 的人员及其家庭成员做进一步的鹦鹉热衣原体的检测，特别是有可疑症状的人员。而禽类产
IHA 检测
PCR 检测
样品
阳性
阳性率%
样品
阳性
阳性率%
Sample Positive Positive rate Sample Positive Positive rate
100
43
43.0
43
41
95.3
80
35
43.8
35
30
85.7
100
29
29.0
29
26
89.7
100
41
41.0
41
40
参考文献
[1] Fukushi H, Hirai K. Proposal of Chlamydia pecorum sp. nov. for Chlamydia strains derived from ruminants[J]. Int J Sys Bacteriol. 1992, 42 (2): 306-308.
根 据 鸟 源 鹦 鹉 热 衣 原 体 标 准 株 设 计 上 游 引 物 Cps-1 ：
5’-ATGAAAAAACTCTTGAAATCGG-3’ ， 下 游 引 物
Cps-2 ：
5’-CAAGATTTGATTCATCTTGTT-3’，引物由上海生工生物技术公司合成。采集组织的 DNA
提取采用上海生工生物技术公司的 DNA 提取试剂盒。经预试验优化的 PCR 反应体系为：Taq
区县 District
潼 南 Tongnan 沙坪坝 Shapingba 白市驿 Baishiyi 壁 山 Bishan 荣 昌 Rongchang 渝中区 Yuzhongqu
表 1 重庆市 6 个区县禽类鹦鹉热衣原体的检测
Table 1 Detection of avain Cps in poultry in six districts of Chongqing
摘 要：对重庆市 6 个区县不同养殖环境下的禽类随机采集血清样品 400 份和相对应的组织 样品 430 份，利用 IHA 诊断试剂盒初步检测筛选出可疑样品，然后采用标准鸟源鹦鹉热衣原 体引物通过 PCR 反应对可疑样品进行进一步检测，以评价重庆市禽类鹦鹉热衣原体的流行情 况。结果表明，IHA 检测的阳性率为 39.3%，PCR 复检阳性样品的阳性率为 36.5%；6 个区县 的 5 种禽类中均检出了衣原体阳性，各个地区和种类间的感染率介于 26.0%-45.0%。说明重庆 市地区的禽类均有较大比例的鹦鹉热衣原体感染。通过对 IHA 检测的阳性样品进行 PCR 检测 表明，PCR 检测方法的准确性更高，所建立的鹦鹉热衣原体 PCR 检测体系可用于禽类鹦鹉热 衣原体检测。 关键词：重庆，禽类，鹦鹉热衣原体，调查
聚合酶 2 U，DNA 模板 3 µl，引物（100 ng）各 1 µl，10×缓冲液 2.5 µl，dNTP(2.5 mM) 1 µl，
1.5 mmol MgCl2，无菌水 15.5 µl。设阳性对照和阴性对照。反映条件为 94℃ 5 min，94℃ 30 s，
56℃ 30 s，72℃ 30 s，30 个循环；72℃延伸 5 min。
-3-

品在流通过程中造成的 Cps 感染将促使其情况的进一步恶化，有必要加强监控。
3.2 Cps 诊断方法对 Cps 流行的影响
Cps 诊断方法在对 Cps 流行的控制中起着关键作用。快速准确的 Cps 诊断方法才能对 Cps 的感染流行情况提供可靠的数据，是控制 Cps 流行的基础和采取对策的根本依据。本研究利 用 PCR 方法对 IHA 检测出的阳性样品进一步复测，PCR 检测中的阳性率为 93.0%，有着较高 的一致性，证明了 PCR 方法的可靠性，同时也发现了 IHA 检测中的部分假阳性。本实验没有 利用 PCR 方法对整个样品进行检测，对这两种检测方法的整体比较还有待进一步研究。PCR 技术在 Cps 诊断上已经有一定应用，其准确性较高，但是它制样繁琐、耗费时间较长，尚难 以在养殖场或生产中大规模快速检测。不过，随着 PCR 检测技术的逐渐普及，建立一套快速 可靠的样品 DNA 快速提取方法及 PCR 检测技术体系，将对 Cps 的监控具有重要的作用。
1.3 血清学检测方法
IHA 的判定标准：在对照孔成立的情况下，各待检孔达到 1：16 孔及以上凝集情况者为
本课题得到重庆市科委攻关项目(CSTC.2007AC1002)的资助。
-1-

++，判定为阳性；1：4 孔及以下者为++，判定为阴性。
1.4 PCR 检测方法
2.3 重庆市 6 个区县 Cps 的感染状况
在潼南县采集的 120 份样品中，IHA 检测出 48 份阳性样品，PCR 复检确定 45 份阳性样 品，感染率为 37.5%；在沙坪坝区采集的 40 份样品中，IHA 检测出 16 份阳性样品，PCR 复 检确定 13 份，感染率为 32.5%；在白市驿采集的 60 份样品中，IHA 检测出 23 份阳性样品， PCR 复检确定 22 份阳性样品，感染率为 36.7%；在壁山县采集的 80 份样品中，IHA 检测出 31 份阳性样品，PCR 复检确定 29 份阳性样品，感染率为 36.3%；在荣昌县采集的 60 份样品 中，IHA 检测出 26 份阳性样品，PCR 复检确定 24 份阳性样品，感染率为 40.0%；在渝中区 采集的 40 份样品中，IHA 检测出 13 份阳性样品，PCR 复检确定 13 份阳性样品，感染率为 32.5%。 说明重庆各个地区的鹦鹉热感染情况都较严重，感染率也较相近（结果见表 1）。
种类 Species
鸭 Ducks 珍珠鸡 Guinea fowls 肉鸡 Broilers 蛋鸡 Layers 鹦鹉 poll parrot 总计 Totals
表 2 重庆市 5 种禽类鹦鹉热衣原体的检测
Table 2 Detection of avian Cps in 5 kinds of poultry in Chongqing

重庆市禽类鹦鹉热衣原体流行情况调查
吴东海 1，李应国 1, 2，杨迎伍 1，邓伟 1，王国民 1, 2，李正国 1*
1 重庆大学生物工程学院，重庆（400044） 2 重庆出入境检验检疫局，重庆 (400041)
E-mail：zhengguoli@
1880 年 ， Ritter 发 表 了 最 早 记 载 鹦 鹉 热 的 文 章 [1] 。 1882 年 ， Morange 提 出 使 用 “pneumotyphus”这个词来描述此疾病，即鹦鹉热[2]。鹦鹉热衣原体（Chalmydiae psittaci, Cps） 主要引起禽类的腹泻或慢性感染。研究发现，观赏鸽和信鸽中也有到鹦鹉热衣原体的存在， 甚至在进口的种山羊中也发现了 Cps[3]。人与病禽接触可感染鹦鹉热衣原体，引起非典型性肺 炎。Cps 的主要宿主是禽类，传染源包括家禽和野禽在内的诸多鸟类，其次宿主为人类以外的 哺乳动物，人只是在接触这种动物后才会受到感染。人类有无原发性的鹦鹉热感染，尚存争 论。但人类的鹦鹉热作为一种养禽业的职业病已被医学界所公认。人感染禽株鹦鹉热嗜性衣 原体后，主要表现为非特异性流感样症状，同时还常见严重的肺炎、心内膜炎、脑炎[4][5]。在 德国，平均每年通报的人鹦鹉热病例约 100 例，其中数例死亡。美国一项研究揭示，当禽衣 原体病的流行率达到百分之几时，30％养有病鸟的家庭成员会感染上该病[6]。为了评估 Cps 在重庆地区的流行情况，本研究主要应用了间接血凝试剂盒（IHA）对随机样品进行了初步检 测，然后采用标准鸟源鹦鹉热衣原体引物通过 PCR 对可疑样品进行进一步检测确诊。以期为 重庆禽类鹦鹉热衣原体病的发生与控制奠定基础。