心脏缺血再灌注损伤研究论文
心肌缺血再灌注损伤的研究进展
30中国处方药 第18卷 第4期·综述·心肌缺血指心脏血流灌注减少，心脏供氧不足，心肌能量代谢异常，无法支持心脏正常工作。
随着人们生活方式的变化，我国心肌缺血患病率逐渐升高，且呈现出年轻化趋势，严重威胁患者生命健康[1]。
再灌注是治疗心肌缺血的重要方式，可恢复心脏缺血区域血流，但部分缺血的心肌细胞出现功能异常，甚至死亡，形成心肌缺血再灌注损伤。
部分研究认为心肌缺血再灌注损伤可能与氧自由基生成、细胞内钙离子过载、炎症反应等有关[2-3]，但具体机制仍有待探究。
同时，需了解心肌缺血再灌注损伤的治疗策略，以指导临床治疗。
故本文以心肌缺血再灌注损伤的发生机制、治疗策略为主作一综述，报告如下。
1发生机制心肌缺血再灌注损伤的发生可能为多种机制作用所致，如炎性反应、氧化应激、线粒体膜通透性转换孔开放、细胞内钙超载、生理pH值快速恢复等。
1.1炎性反应急性心肌梗死早期，中性粒细胞受中性粒细胞趋化物吸引，进入梗死区域，24 h内中性粒细胞迁移至心肌组织。
中性粒细胞可造成血管阻塞，加快氧自由基释放、酶降解。
实验研究发现，心肌缺血再灌注过程中，通过抑制中性粒细胞，可缩小心肌梗死面积[4]。
但临床上，抑制中性粒细胞无法缩小心肌缺血再灌注患者心肌梗死面积。
产生上述研究差异的具体机制不明。
1.2氧化应激心肌缺血再灌注刚开始时，会产生氧化应激反应，介导心肌细胞死亡、心肌损伤。
实验研究发现，急性心肌梗死后，氧自由基清除能力下降，而恢复供氧、供血后，短时间氧自由基大量生成[5]。
氧自由基可引起脂质过氧化，损伤膜磷脂，破坏心肌细胞膜，还会阻碍线粒体氧化磷酸化，影响能量合成，灭活NO，导致中性粒细胞粘附于血管壁。
此外，氧自由基加快中性粒细胞趋心肌缺血再灌注损伤的研究进展张凯（天津市滨海新区大港医院心血管内科，天津 300270）【摘要】再灌注是治疗心肌缺血的常用方法，可有效挽救患者生命，但会对心肌组织造成损伤。
因此，了解心肌缺血再灌注损伤的发生机制，寻找方法减轻再灌注损伤是心血管内科研究的重要内容。
中西医药物治疗心肌缺血-再灌注损伤的研究进展
中图分 类号 ：５ ２ Ｒ４． ２ 文献 标识 码 ： 文 章编 号 ：０６ ０７ （０２ ｏ— ｌ５ ０ Ａ １０ —９ ９２ １ ）３ ０ １— ３
缺血 性心脏病是人类 最常见且危害严重 的疾病之 一 ， １ 目 ． ２活血 化瘀 ： 注早期 ， 再灌 由于气 的冲泻 ， 造成对 血管 内皮细胞 及 前 利 用 溶 栓 、 脉 搭 桥 或 经 皮 冠 脉 扩 张 手 术 等 手 段 ， 对 缺血 心 肌细胞 的“ 冠 是 撞击 ” 。尤如 受到外 力的 “ 伤 ”使 其造 成 “ 在 的气 击 ， 潜 心 肌 恢 复 血 流 供 应 ，减 少坏 死 和 控 制 梗 塞 面 积 进 一 步 扩 展 最 血瘀滞 ” 。再灌 注后 ， 的主要成 分纤维蛋 白溶解 ， 解的纤 维蛋 血栓 溶 有 效 的 方 法 。 而 由 于再 灌 注 后 血 液 循 环 中的 白细胞 附 壁 、 然 聚 白碎片进入 血流 ， 使血小板 活化 而易于 粘 附 ， 形成小 的血 栓 。再 灌 集 、 出 ， 而 导 致 心 肌 细 胞 坏 死 ， 之 氧 自 由基 的大 量 产生 ， 注 时血管 内皮细胞 合成血 栓素 增加 ，而前列 腺素形 成减 少易 于血 渗 从 加 以及 再 灌 注 后 心肌 细胞 内 钙 超 载 等 ，致使 缺 血 性 的 心 肌 结 构 栓形成 Ｈ 。 损 伤 更 为 严 重 ， 再 灌 注 损 伤 。 目前 ， 治 心 肌 缺 血 再 灌 注损 即 防 李 玉 梅 ， 旭 华 等 在 家 兔 心 肌 的 研 究 中 发 现 ， 参 主 要 陈 丹 伤 （ Ｉ Ｉ 在 临 床 受 到 越 来 越 多 的重 视 ， 成 为 当今 医 学 的研 是 通 过 阻 滞 经 Ｌ型 钙 通 道 之 Ｃ ２内流 ，降 低 胞 浆 内 的 ｃ ２ ＭＲ） 已 也 ａ ＋ ａ＋ 浓 究热点 ， 近年 来 ， 来 越 多 的 中西 医药 物 用 于 治 疗 心 肌 缺 血 再 度 ， 而 有 利 于 线 粒 体 将 堆 积 的 Ｃ ２ 出 ， 护 心 肌 功 能 与结 越 从 ａ＇ 排 保 灌 注 损 伤 ， 文通 过 中西 医药 物 分 类 对 治 疗心 肌缺 血 一 灌 注 构 的 正 常 。王 晓 霞 ， 志 强等 ［用 丹 参 注 射 液 对 大 鼠 心肌 缺血 本 再 陈 ｔ ｏ １
心肌缺血再灌注损伤机制的研究进展
心肌缺血再灌注损伤机制的研究进展摘要急性心肌梗死是临床常见急症重症，及时、有效的恢复心肌的血液灌注,挽救“濒死”的心肌是抢救成功的关键，因此探索缺血再灌注损伤的机制，减轻或防止再灌注损伤的发生，是临床的重要课题。
本文综述了心肌缺血再灌注损伤发生机制研究领域的最新进展。
关键词心肌缺血再灌注；氧自由基；钙超载；中性白细胞；血管内皮细胞；一氧化氮；细胞黏附因子；细胞凋亡急性心肌梗死（AMI）是临床常见急症重症，及时、有效的恢复心肌的血液灌注,挽救“濒死”的心肌是抢救成功的关键。
探索心肌再灌注损伤(MRI)的机制，减轻或防止再灌注损伤的发生，是临床的重要课题。
至今为止MRI的机制还没有完全清楚，目前主要认为与氧自由基、钙超载、活化的中性白细胞、心肌纤维能量代谢障碍、血管内皮细胞、一氧化氮、细胞黏附因子和细胞凋亡等都可能参与MRI的发病过程。
[1、2]1氧自由基与心肌缺血再灌注损伤生理情况下，细胞内存在的抗氧化物质可以及时清除自由基，对机体并无有害影响。
当组织细胞缺血、缺氧时，由于活性氧生成过多或机体抗氧化能力不足，可引起氧化应激反应，造成膜流动性与钙离子通透性增加,破坏膜结构完整性,钙跨膜内流与超负荷导致细胞损伤甚至死亡。
氧化应激是缺血组织再灌注的特征之一。
而且应用自由基清除剂辅酶Q10[3]可以减轻缺血再灌区细胞的损伤。
2钙超载与心肌缺血再灌注损伤近年研究表明,细胞内Ca2+超载在心肌缺血再灌注损伤发病机制中起中心作用。
钙超载可以造成线粒体功能障碍，激活磷脂酶类，使细胞膜及细胞器膜结构受到损伤。
还可激活蛋白酶，促进细胞膜和结构蛋白的分解，同时促进氧自由基的生成。
激活某些ATP酶和核酶，加速ATP消耗，引起染色体损伤。
Ca2+超载还可引起再灌注心律失常。
心肌缺血再灌注损伤的始动环节是能量代谢障碍,而直接损伤原因则是自由基,其结果导致细胞内钙超载,并形成恶性循环。
钙超载是多种原因导致的细胞损伤和死亡的共同通路。
心肌缺血再灌注损伤及药物治疗研究进展
·297·心肌缺血再灌注损伤及药物治疗研究进展吴 玉 邓小红 绵阳市人民医院 四川绵阳 621000摘 要：心肌缺血在治疗过程中可能会出现再灌注损伤，在损伤程度逐渐加重情况下，梗死面积会有所增大，这种现象发生与氧自由基增加、钙超载以及炎症反应之间联系紧密。
随着此病治疗技术的不断提高，针对缺血再灌注阶段展开治已经周围治疗心肌缺血重点，并药物研究也是应重点关注的问题。
关键词：心肌缺血 再灌注损伤 药物治疗心肌缺血近几年发病率呈现逐年上升趋势，发病原因为多种因素造成的冠状动脉在血流量方面有所减低，造成心肌血液在供应过程中受到阻碍，代谢产物未能得到有效清除，营养物整体供应存在不足，最终使心肌细胞被损伤，甚至是出现死亡问题。
一般情况下，再灌注能够使受损心肌结构得到恢复，促进心脏功能改善，但是也可能会造成损伤加重，出现大面积梗死情况，也就是再灌注损伤[1]。
1钙超载钙离子属于细胞中的信使，能够发挥促进细胞分裂、增殖、能量代谢作用，人体处于正常状态时，细胞外部钙离子实际数量为细胞的内部钙离子几万倍，能够使细胞正常功能得以维持，钙离子超载为细胞中的钙离子出现过度积蓄的情况。
一旦其出现超载问题，线粒体膜会开放通透性转换孔，并且出现ATP消耗量增大等多种问题，钙超载情况下会引发MIRI[2]。
心肌缺血问题发生时，心肌膜会出现结构损伤，相应的钙离子体现出的通透性也会有所增加，细胞外部钙离子会以浓度梯度形式进入到细胞中，导致钙超载出现。
同时钙超载也可能和钙离子以及钠离子的交换逆转相关。
正常状态下，钙离子以及钠离子交换蛋白会将细胞中钙离子向细胞外运输，肌浆网、NXC等能够对正常钙浓度进行维持，在出现心肌缺血时，ATP实际生成含量会有所减少，并且钠泵活性有所下降，细胞当中的钙离子在浓度上上升明显。
再灌注过程中，细胞外部PH值会快速恢复。
使用药物时可以使用NCT，NCT属于双向转运蛋白，由一个钙离子和三个钠离子构成，能够使细胞内部钙离子向细胞外部转移，心肌缺血情况下，细胞胞浆会出现内酸中毒，进而对NHE产生刺激，细胞中的钠离子在浓度上会有所升高，进而使NCT出现反向运转，造成细胞内部出现钙超载问题[3]。
心肌缺血再灌注损伤的机制研究进展
心肌缺血再灌注损伤的机制研究进展【摘要】心肌细胞凋亡、钙超载、血管内皮细胞功能障碍、粒细胞浸润、能量代谢障碍以及氧自由基生成增多均是心肌缺血再灌注损伤（MIRI）机制，本笔者针对以上内容进行简要阐述。
【关键词】MIR；机制；研究进展前言MIR主要是在极短时间内中断心肌血供，随后在特定时间中血供逐渐恢复，与血供恢复前相比，原缺血心肌损伤更严重。
伴随国内大血管外科手术、复杂先天性心脏病救治术、冠状动脉搭桥术、瓣膜置换术、心脏外科体外循环的广泛采用，MIR是当前阻碍心脏血管外科术疗效核心问题。
据有关报道指出，心肌细胞凋亡、钙超载、血管内皮细胞功能障碍、粒细胞浸润、能量代谢障碍以及氧自由基生成增多等一系列因素均是MIRI机制，本笔者对此进行深入探讨。
1心肌细胞凋亡据有关研究人员指出，心肌细胞凋亡和MIRI存在紧密联系，导致心肌细胞出现凋亡核心因素之一便是再灌注，而引发细胞凋亡还包括缺血后再灌注心肌以及持续缺血心肌，凋亡心肌细胞数可收到再灌注减少随之减少，然而会加速不可挽救心肌细胞凋亡。
据吴帆[1]研究指出，CL（心肌磷脂）分解及合成过程中在细胞存活方面、维持线粒体功能以及结构等方面具有关键作用，细胞色素C和CL两者之间香菇作用作为凋亡起始步骤。
并且凋亡关键作用包括腺嘌呤核苷酸移位酶以及细胞色素氧化酶。
同时，还有部分研究人员指出，生理条件以及病理不同，则出现心肌细胞凋亡程度有所差异，例如高脂血症者其Bc1-2/Bax比例上升，同时心肌细胞凋亡程度以及梗死面积也随之增加，同时再灌注时间以及缺血时间均不断延长，可见再灌注或者是心肌缺血会加速心肌细胞凋亡。
是因为再灌注以后心肌虽然得到了有效的供血，然而OFR随之增加，促使Ca2+超载，引发心肌细胞凋亡。
据母晓艺[2]等人研究指出，通过对心肌细胞凋亡进行抑制，可有效缓解MIRI。
2钙超载据王蓉[3]等人研究指出，一旦Ca2+发生异常则Ca2+分隔机制与内流失调，促使Ca2+超载。
心肌缺血再灌注损伤的机制研究进展
• 文献综述 •63心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemic reperfusion in j ury ，MIRI ）指心肌缺血恢复血流供应后，造成代谢功能障碍及结构损伤加重的现象[1]。
MIRI 是临床上常见的疾病，其病理过程与冠状动脉血管形成术，冠状动脉重建术，心脏移植等术后并发症密切相关[2]。
MIRI 涉及的机制复杂，尚有待更深入的研究阐述。
近年来，由于电生理学、基因组学和蛋白组学等技术的应用，对MIRI 机制的研究也获得了一定的进步，其主要机制概述如下：1 氧自由基与MIRI自由基（free radical ），又称游离基，指在外层电子轨道上具有不配对的单个电子、原子、原子团或分子的总称[3]。
由机体内氧诱发化学性质活泼的自由基称为氧自由基，包括羟自由基和超氧阴离子。
生理状态下自由基存在较少，在细胞缺血时，其氧自由基清除能力下降[4]。
当组织恢复血液供应时，触发氧自由基“爆增”并累积，攻击自身和周围细胞，造成损伤[5]。
自由基损伤细胞膜，致其结构破坏造成心肌酶溢漏；自由基氧化破坏机体蛋白，改变蛋白酶表面结构使功能受损；自由基诱导遗传物质DNA 、RNA 断键或破损，影响核酸正常功能[6]。
自由基可导致心律失常，心肌损伤，细胞凋亡等事件[7]。
2 炎症反应与MIRIMIRI 发生时心脏组织内皮结构受损触发功能障碍，而中性粒细胞趋集、黏附血管内皮是炎症“级联”反应的诱发阶段[8]。
激活的中性粒细胞合成释放肿瘤坏死因子、IL-1、IL-6 等炎症介质，介导其他炎症细胞共同攻击心肌组织[9]。
此外，白细胞浸润在MIRI 中涉及的主要机制为，MIRI 使细胞膜受损和膜磷脂降解，具有很强趋化作用的白三烯等代谢产物增多，使更多白细胞循环浸润，对心肌细胞造成多次损伤。
MIRI 时，心肌缺血细胞生成大量的促炎介质如补体C 5a 、LPS 、IL-8等，激活并诱导心肌细胞多种黏附如ICAM-1，ICAM-2等分子表达[10]。
心肌缺血再灌注损伤的研究新进展
心肌缺血再灌注损伤的研究新进展心肌缺血再灌注损伤是指心肌在短暂缺血后重新获得血液供应时，反而加重心肌损伤的过程。
近年来，随着相关研究的深入，人们对心肌缺血再灌注损伤的认识不断加深，也为寻求有效的治疗方法提供了新的思路。
在以往的研究中，心肌缺血再灌注损伤的机制主要包括氧化应激、钙离子超载、炎症反应等。
其中，氧化应激是最为重要的一个环节，自由基的过度产生和清除失衡会导致心肌细胞的进一步损伤。
另一方面，钙离子超载也会导致心肌细胞死亡，而在再灌注过程中炎症反应的加剧也会加重心肌损伤。
针对这些机制，临床上已经开展了一系列治疗措施，如缺血预处理、远程缺血预处理、药物干预等。
其中，缺血预处理和远程缺血预处理可以有效地减少心肌细胞的死亡，而药物干预则可以通过调节炎症反应、清除自由基等方式减轻心肌损伤。
随着研究的不断推进，干细胞修复和新技术的应用为心肌缺血再灌注损伤的治疗提供了新的可能性。
干细胞修复是指利用干细胞的分化能力，将干细胞移植到受损的心肌组织中，以替代受损的心肌细胞。
新技术的应用则包括基因治疗、细胞治疗、纳米技术等，这些技术可以更加精准地调控细胞的生长和分化，为心肌损伤的治疗提供了新的途径。
尽管已经取得了一定的研究成果，但是心肌缺血再灌注损伤的治疗仍然面临许多挑战。
如何确保干细胞在心肌组织中的生长和分化是一个亟待解决的问题。
新技术的应用尚处于初步阶段，其长期效果和安全性需要进一步验证。
如何在临床实践中将这些治疗方法与传统的冠心病治疗方法相结合，以提高患者的生存率和生活质量，也是未来研究的重要方向。
心肌缺血再灌注损伤的研究新进展为冠心病的治疗提供了新的思路和方法。
然而，仍需要更多的研究来明确其机制和治疗方法。
通过深入探讨心肌缺血再灌注损伤的机制，我们可以更精准地制定出有效的治疗方案。
同时，随着新技术的不断发展，相信未来会有更多创新的治疗方法问世，为心肌缺血再灌注损伤患者带来希望。
在未来的研究中，我们还需要以下几个方面：深入探讨干细胞修复和新技术治疗心肌缺血再灌注损伤的机制，以期发现更为有效的治疗方法。
分析心肌缺血再灌注损伤的研究进展.
分析心肌缺血再灌注损伤的研究进展.发布时间：2021-01-28T09:55:25.130Z 来源：《中国医学人文》2020年10月10期作者：范立涛[导读] 冠脉再通术在近几年获得了迅速发展，心肌缺血再灌注损伤当前成为面临的全新问题，缺血心脏在血流恢复之后，经常会发生心紊乱问题，并且这一问题比较严重，心功能表现低下，甚至心肌会出现不能逆转的损伤，这一现象可以称之为I-R损伤，当前对其发生机制和防治措施的研究获得了一定进展。
范立涛（韶关学院医学院；广东韶关512026）摘要：冠脉再通术在近几年获得了迅速发展，心肌缺血再灌注损伤当前成为面临的全新问题，缺血心脏在血流恢复之后，经常会发生心紊乱问题，并且这一问题比较严重，心功能表现低下，甚至心肌会出现不能逆转的损伤，这一现象可以称之为I-R损伤，当前对其发生机制和防治措施的研究获得了一定进展。
关键词：心肌缺血；再灌注；研究进展近几年研究显示，出现急性心肌缺血之后，正常状态下实施的血液灌注会造成缺血心肌发生进一步损害，在介入心脏病学逐渐开展背景下，除了运用冠脉搭桥术之后，又实施了溶栓、冠脉内部扩张等冠脉再通手术，当前对于再灌注产生的损伤问题越发关注，相关研究报道逐渐增加[1]。
一、心肌缺血再灌注具体损伤机制（一）产生自由基就当前来讲，广泛被接受的观点为心肌缺血再灌注可能会造成氧自由基的大量产生，导致心肌细胞出现损伤问题。
一般情况下，在线粒体当中电子传递时会形成小量氧自由基，其活性较强，能和身体当中过氧化氢酶、氧化物歧化酶等之间实现平衡，这些酶都属于自由基清除剂，能够避免自由基受到损伤，自由基在过量情况下，可能会导致膜脂质出现过氧化问题，进而使结构遭到破坏，膜难以实现对离子的有效控制，同时也会对蛋白质造成损伤，将酶整体活性改变，并对DNA产生损伤[2]。
外源自由基清除剂能够发挥保护心肌的作用，电子自旋方面的共振谱仪以及自旋捕捉术能够实现氧自由，存在于心肌损害整个过程当中，心肌方面的氧自由基处于缺血末期的情况下已经增加，再灌注时间在十秒时能够达到峰值，可以使用无氧液实现再灌注，自由基处于缺血期水平，这在一定程度上说明氧分子的引入会使自由基爆发式产生。
从心脏生理的角度分析心肌缺血再灌注损伤的发生机制、对机体造成的损伤和防治原则
从心脏生理的角度分析心肌缺血再灌注损伤的发生机制、对机体造成的损伤和防治原则摘要：体组织器官正常代谢、功能的维持，有赖于良好的血液循环。
各种原因造成的局部组织器官的缺血，常常使组织细胞发生缺血性损伤（ ischemia injury ），但在动物试验和临床观察中也发现，在一定条件下恢复血液再灌注后，部分动物或患者细胞功能代谢障碍及结构破坏不但未减轻反而加重，因而将这种血液再灌注后缺血性损伤进一步加重的现象称为缺血再灌注损伤（ ischemia-reperfusion injury ）。
关键词：心肌缺血再灌注损伤的发生机制，，心肌缺血再灌注，氧自由基，钙超载对机体的损伤，防治原则心肌缺血再灌注损伤的发生机制，目, 缺血再灌注损伤发生的机制尚未完全阐明, 研究表明自由基、钙超载、心肌纤维能量代谢障碍、中性粒细胞、血管内皮细胞、细胞黏附分子与细胞凋亡等均可能参与缺血再灌注损伤。
1.氧自由基（FR）生成正常细胞内有自由基清除剂超氧化物歧化酶（SOD），使氧自由基转变为过氧化氢，后者又通过触酶及谷胱甘肽过氧化物酶的作用还原为水和分子氧，故小量氧自由基不造成损伤。
再灌注时产生的量氧自由基不能被清除，其中包括非脂质氧自由基和脂质氧自由基, 如超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢等。
缺血 再灌注后，它可与各细胞成分, 如膜磷脂、蛋白质、核酸等发生反应, 造成细胞结构损伤和功能代谢障碍。
Castedo等［3］在动物实验中发现, 再灌注后细胞内膜脂质过氧化增强, 形成种生物活性物质, 如血栓素、前列腺素等, 促进再灌注损伤。
2.钙超载生理状态下，胞浆内钙浓度约为10-7mol/L，而细胞外及胞浆内的钙储存系统（如内质网和线粒体）中钙浓度为10-3mol/L。
正常状态下，细胞通过一系列转运机制可以保持种巨大的浓度梯度，以维持细胞内低钙状态。
但是再灌注后, 钙离子向线粒体转移, 导致线粒体功能障碍; 钙离子浓度升高, 可激活多种酶（如激活膜磷脂酶A2）同时促使心肌纤维过度收缩; 通过Na+ /Ca2 +交换形成一过性内向电流, 在心肌动作电位后形成延迟后除极, 这是引起心律失常的原因之一。
心肌缺血再灌注损伤的研究进展
７ １
心肌缺血再灌注损伤的研究进展
陈 珂 方红义 ① （ ） 亳州市人民医院 亳州 ２ ３ ６ ８ ０ ０
急性心肌梗死是当今世界一种致死率和致残率均很高的疾病。对心肌梗死患者， 最主要的治疗目的是减少心肌急性缺血损伤并限制心 摘要： ） 肌梗死面积， 现如今对心梗患者的最主要治疗手段是及时并有效地通过溶栓治疗或者经皮冠状动脉介入（ 手术恢复心肌灌注， 即使心肌及时 Ｐ Ｃ Ｉ 有效得到再灌注。然而， 再灌注本身也会导致心肌细胞的死亡， 这一过程被称为心肌再灌注损伤， 而目前对此并无有效的治疗手段。 关键词： 急性心肌梗死 心肌再灌注 再灌注损伤 ： ／ Ｄ ｉ ． ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ １－８ ８ ０ １． ２ ０ １ ６． ０ ７． ０ １ ７ ｏ ｉ １ ０． ３ ９ ６ ９ ｊ Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｒ ｏ ｒ ｅ ｓ ｓ ｏ ｆ ｍ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｌ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ａ －ｒ ｅ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｕ ｒ ｐ ｇ ｙ ｐ ｊ ｙ ｈ ｅ ｎ ｅ Ｆ ａ ｎ ｏ ｎ ｉ Ｃ Ｋ Ｈ ｇ ｇ ｙ ： ， ） ， Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｗ ｏ ｒ ｌ ｄ ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｍ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｌ ｉ ｎ ｆ ａ ｒ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ（ Ｍ Ｉ ｉ ｓ ｔ ｈ ｅ ｍ ａ ｏ ｒ ｃ ａ ｕ ｓ ｅ ｏ ｆ ｄ ｅ ａ ｔ ｈ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｓ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ． Ｉ ｎ Ｍ Ｉ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓ ｔ ｈ ｅ ｍ ａ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｉ ｓ ｔ ｏ ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｙ ｊ ｙ ｐ ｐ ｙ ， ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｕ ｒ ａ ｎ ｄ ｌ ｉ ｍ ｔ ｉ ｎ Ｍ Ｉ ｓ ｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｈ ｅ ｌ ｆ ｕ ｌ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｉ ｓ ｔ ｉ ｍ ｅ ｌ ａ ｎ ｄ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｒ ｅ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｔ ｈ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ｏ ｍ ｂ ｏ ｌ ｔ ｉ ｃ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｏ ｒ ｒ ｉ ｍ ａ ｒ ｅ ｒ ｃ ｕ ｔ ａ ｎ ｅ ｏ ｕ ｓ ｃ ｏ ｒ － ｊ ｙ ｇ ｐ ｙ ｐ ｙ ｐ ｙ ｐ ｙ ｐ ） ， ， ｎ ａ ｒ ｉ ｎ ｔ ｅ ｒ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ（ Ｐ Ｐ Ｃ Ｉ ． Ｗｈ ｉ ｌ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｔ ｓ ｅ ｌ ｆ ｃ ａ ｎ ｉ ｎ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ｏ ｍ ｏ ｃ ｔ ｅ ｄ ｅ ａ ｔ ｈ ｗ ｈ ｉ ｃ ｈ ｉ ｓ ｋ ｎ ｏ ｗ ｎ ａ ｓ ｍ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｌ ｒ ｅ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｕ ｒ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｏ ｙ ｐ ｙ ｙ ｙ ｐ ｊ ｙ ｉ ｓ ｎ ｏ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｓ ｔ ｉ ｌ ｌ ｎ ｏ ｗ． ｐ ｙ ： Ｋ ｅ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ Ａ ｃ ｕ ｔ ｅ ｍ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｌ ｉ ｎ ｆ ａ ｒ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｃ ａ ｒ ｄ ｉ ａ ｌ ｒ ｅ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｅ ｅ ｒ ｆ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｕ ｒ Ｍ Ｒ ｙ ｙ ｐ ｐ ｊ ｙ ｙ （ ） 中图分类号 】 文献标识码 】 文章编号 】 Ｒ－０ 【 Ｂ 【 １ ６ ７ １－８ ８ ０ １ ２ ０ １ ６ ０ ７－０ ０ １ ７－０ ２ 【 ７］ １ 。自噬在心肌缺血发 是当今世界主要的致死及致 残 疾 病。冠 心 病 的 影 响 陷， 会进一步导致小鼠 和 人 心 脏 功 能 严 重 受 损［ ＣＨＤ） 冠心 病 （ ８］ １ ） 常常 归 因 于 急 性 心 肌 缺 血 再 灌 注 损 伤 （ 导致的负面效应。心肌急性 生时已经开始， 。 甚至一直持续到再灌注后期［ Ｉ Ｒ Ｉ ） 缺血 再 灌 注 损 伤 常 常 发 生 在 急 性 Ｓ 患 者 ， ３ 减 少 心 肌 再 灌 注 损 伤 的 治 疗 策 略 Ｓ Ｔ 段抬高 性 心 肌 梗 死（ Ｔ ＥＭ Ｉ 这类患者入院后最主要的治疗措 施 是 及 时 并 有 效 的 通 过 溶 栓 或 者 经 皮 干预的时机 对于已经发生急性心肌缺血的 Ｓ Ｔ 段抬高型心梗患者， ） 冠 状 动 脉 介 入（ 治疗来减轻心肌急性缺血损伤并限制梗死面积。然 是在心肌缺血发生之后或者是在 心 肌 再 灌 注 时。 通 过 Ｐ Ｐ Ｃ Ｉ Ｃ Ｉ手 术 达 到 心 此 现 象 被 称 为 心 肌 肌再 灌 注 的 技 术 仍 在 不 断 改 善 ， 而， 心肌缺血再灌注本身也会导 致 心 肌 细 胞 的 死 亡， 主要措施有早期再灌注， 但是， 对于接受 １， ２］ 。本文就心肌缺血再灌注损伤的病理生理学变 化 及 Ｐ 缺血 再 灌 注 损 伤 ［ 没有治疗微循环障碍或者急剧再灌 Ｃ Ｉ手 术 的 Ｓ Ｔ 段抬高型心梗患者， 一些减少心脏再灌注损伤新的治疗方案作一综述。 治疗氧 化 应 激、 钙 离 子 超 载、 注损伤的特效药物。令人遗憾的是， Ｐ Ｈ纠 ９］ １ 。 正及炎症等再灌注损伤的效果令人沮丧， 下面来分析具体原因［ １ 心 肌 缺 血 再 灌 注 的 病 理 生 理 学 通过 Ｐ 。缺血后适应的概念是相对于一次 性 贯 通 冠 脉 ） Ｔ 段抬高型心肌梗死患者病 情 发 作 后， Ｃ Ｉ手 术 进 行 及 时 有 ３． Ｓ Ｉ １ 缺 血 后 适 应 （ Ｐ ｏ ｓ ｔ 限 制 心 梗 面 积， 维 持 心 室 收 缩 的再 灌 注 而 言 ， 效的 心 肌 再 灌 注 可 能 可 以 挽 救 部 分 心 肌 ， 即对急性缺血的心肌进行断断续续的再灌注， 据报道， 此 ［０］ 功能病情阻止心衰的发作。然而， 急性心肌缺血再灌注却能诱导细胞的 方案 对 于 减 轻 再 灌 注 损 伤 并 且 使 心 梗 面 积 减 少 ４ 。１ ０－５ ０％ ２ ９世纪 １， ２］ ， 死亡 ［ 尽管这一现象在很多 年 不 能 被 接 受。下 面 我 们 从 几 个 方 面 详 ８ 这种再灌注方案应激被认为是一种改良的再灌注方案， 并且在 ０年代， 细探讨下心肌再灌注损伤。 将 间 断 再 灌 注 中 是 获 益 的 。Ｓ ｔ ａ ａ ｔ等 首 次 应 用 这 个 Ｐ Ｃ Ｉ方 案 治 疗 患 者 ： 接着用血管球囊将支架上游 １． １ 再 灌 注 性 心 律 失 常 。 再 灌 注 性 心 律 失 常 是 指 心 脏 冠 状 动 脉 阻 塞 后 病 变 冠 脉 置 入 支 架 后 立 即 恢 复 血 流 ６ ０ 秒， 再通时， 心 脏 所 发 生 的 心 律 失 常 。１ 如此反复４次。这个实验的结果证实了人类缺血再 灌 ９ ８ ０年 Ｈ ｅ ａ ｒ ｓ ｅ的 团 队 首 次 在 动 物 实 血 流 阻 断 ６ ０秒， ３］ １］ ２ 。而临床上最多见的是 Ｓ 验中发现再灌注诱 导 的 室 性 心 律 失 常［ 。尽管不是所有研究 结 果 都 是 积 极 有 益 的， 多 难 受， 仍 Ｔ 段 注 损 伤 的 存 在［ 但 有许多临床研究 陆 续 证 实Ｉ 抬高 型 心 肌 梗 死 患 者 在 紧 急 接 受 再 灌 注 治 疗 时 出 现 的 室 性 心 律 失 常 ； Ｐ ｏ ｓ ｔ治 疗 使 患 者 获 益 。 目 前 一 个 正 在 进 行 ［ ４］ ） 是 这 些 心 律 失 常 的 特 点 是 常 常 可 以 自 行 终 止 或 者 比 较 容 易 干 预 终 止 。 的大 型 多 中 心 随 机 临 床 实 验 （ 研究 Ｐ Ｄ ＡＮＡＭ Ｉ －３ Ｃ Ｉ患 者 接 受 Ｉ Ｐ ｏ ｓ ｔ的 ２ 心 肌 顿 抑 。 在 再 灌 注 治 疗 中 由 心 肌 缺 血 导 致 的 心 肌 收 缩 功 能 受 损 临 床 预 后 。 １． 可逆转， 称 为 心 肌 顿 抑 。Ｈ ｅ ｎ ｄ ｒ ｉ ｃ ｋ ｘ 首 次 在 完 全 性 冠 脉 阻 塞 中 发 现 这 ３． ２ 远 端 缺 血 预 处 理 。Ｉ Ｐ ｏ ｓ ｔ需 要 直 接 对 心 脏 进 行 侵 入 性 介 入 治 疗 。 ｙ ５］ ， 应 激 导 致 的 冠 脉 阻 但是， 在其他器官或 组 织 经 受 一 次 或 者 多 次 简 单 的 非 致 命 缺 血 再 灌 注 种现 象 ［ 然而随后有研究发 现 在 冠 脉 硬 化 基 础 上， ［ ６］ 心脏在经受缺血再灌注时可 以 减 轻 损 伤， 这种现象称之为远端缺血 塞再通后， 心肌顿抑这种现象会持续存在 。如果冠脉完全再 通 并 且 血 后， ［ ２］ ２ 。在临床应 用 上， 流不再受限， 心肌顿抑现象持续几个小时后即会缓解； 然而， 如 果 冠 脉 严 预 处 理（ 不需要侵入性 Ｒ Ｒ Ｉ Ｃ） Ｉ Ｃ 可 以 很 简 单 做 到， 重硬化狭窄导致冠脉再通 后 血 流 受 限， 心肌收缩功能障碍会持续至２ 即用血压计袖带在上臂进 行 ３ 次 ５ 分 钟 的 加 压 释 压 处 理， 即可达 ４ 手段， ３］ ４］ ７］ ２ ２ 。这种再灌注损伤主要 是 由 氧 化 应 激 及 心 肌 细 胞 内 钙 离 子 超 载 到远端缺血和再 灌 注［ 。 这 种 方 案 在 接 受 心 脏 外 科 手 术［ 及选择性 小 时［ ［ ［ ５］ ８］ ２ 和对照组相比 引起的 。 Ｂ Ｃ Ｉ手 术 的 患 者 是 获 益 的 。 最 近 ， ｏ ｔ ｃ ｈ ｅ ｒ等 研 究 发 现 ， Ｐ ” 一 较， 在Ｓ 微 循 环 障 碍（ 护理人员 ＭＶＯ） ３ 微 循 环 障 碍 。１ ９ ６ ６年 Ｋ ｒ ｕ Ｔ 段抬高型心肌梗 死 患 者 转 运 入 心 脏 介 入 中 心 途 中， １． ｇ 等第 一 次 提 出 “ ［ ９］ 。主
心脏缺血再灌注损伤研究论文
心脏缺血再灌注损伤研究论文心脏缺血再灌注损伤研究论文心脏疾病是当前世界上最常见的疾病之一，据统计全球每年有数百万人死于心血管疾病。
而心脏缺血再灌注损伤则是心脏病发生时的一个重要环节。
在心脏缺血期间，由于心肌血流的减少或者中断，心肌细胞遭受缺氧和营养不足的打击，如果及时得不到恢复，则会导致心肌细胞死亡。
随后，再灌注期间，血流突然恢复，发生急性缺血，大量氧自由基积聚，在心肌细胞内产生大量自由基，这导致心肌细胞进一步受损，甚至死亡。
因此，为了更好的了解心脏缺血再灌注损伤的机制，心脏缺血再灌注损伤研究成为了近些年来医学研究的热点之一。
心脏缺血再灌注损伤研究主要涉及到以下方面：1.缺血再灌注调控炎症反应的细胞因子在心脏再灌注中，许多机体应答分子如TNF-α，IL-1β和IL-6文件等初始的炎症反应，细胞因子和趋化因子的调节可能是心肌缺血再灌注造成对细胞和血管的影响的重要机制。
这方面的研究表明，在心脏缺血再灌注损伤过程中，能够通过调节炎症反应因子达到保护心肌的目的。
2.缺血再灌注调控自由基在心肌缺血再灌注损伤中，心肌细胞内的自由基的产生引起一系列的细胞损伤。
现有研究证实，能够通过调整数种抗氧化物质的合成或者酶类的表达，并且能够有效的抑制心脏缺血再灌注损伤。
3.缺血再灌注调控细胞凋亡细胞凋亡在心脏缺血再灌注中起着重要的作用，通过对缺血再灌注调控细胞凋亡和细胞增殖，能够促进心肌细胞的再生。
4.缺血再灌注调控心肌细胞代谢在缺血再灌注损伤中，心肌细胞能量供应的严重不足是心肌缺血再灌注所患的破坏。
通过进行心肌细胞代谢的调控，能够使得心肌细胞的能量得以正常的供应。
总的来说，上述研究提示了心脏缺血再灌注损伤机制中一些关键的调节点。
能够通过调整炎症反应分子、自由基的产生、细胞凋亡和代谢的正常化等方法才能实现心脏缺血再灌注损伤的有效治疗。
此外，还有一些与心脏缺血再灌注损伤相关的药物被研究，如氢氧化物和ADP等，能够通过调节心脏缺血再灌注损伤的相关因素，从而减轻心脏缺血再灌注损伤所带来的影响。
心肌缺血再灌注损伤的研究现状
心肌缺血-再灌注损伤的治疗研究概述
【摘要】心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)是指在心肌细胞缺血的基础上，通过各种治疗措施恢复心脏血液再灌注后，心肌细胞发生的功能障碍和结构损伤。
近年来，随着人们对MIRI的深入研究出现了许多新的防治措施和药物，本文通过对相关文献的整理分析综合，将目前对MIRI的几项主要治疗方法和药物进行归纳总结，为临床治疗提供重要依据。
【关键词】缺血再灌注损伤发病机制治疗措施
众所周知，所有组织、器官的正常功能和形态结构的维持，必须要有足够的血液灌注量。
如果血液灌注相对或绝对不足，就会引起相应组织、器官的功能或结构损伤，所以恢复组织、器官的血液灌注量就成为治疗缺血性疾病的主要目标。
但是，近几年的研究发现存在一些反常现象，如1955年Sewell等人发现，结扎狗的冠状动脉后，突然恢复血流灌注，动物会立即发生心室纤维颤动而死亡。
1966年，Jennings首先提出缺血再灌注损伤的概念，即当组织细胞血液低灌注后恢复正常血液灌注时，不仅不能减轻或恢复组织细胞的缺血性损伤，反而加重了缺血性损伤，它是高等动物机体缺血再灌注后发生的普遍现象。
如心脏手术、脏器供血阻塞后再通、器官移植和休克脏器低灌流恢复后都可发生再灌注损伤，本文主要针对心肌缺血再灌注损伤的临床症状、发病机制、防治措施展开论述，为本病的治疗提供一些有力的依据。
一、临床表现
1、持久性心室收缩功能低下。
心肌血液灌注量虽然恢复了，但是心肌的功能并未随之改善甚至恶化，主要是再灌性心肌顿抑造成的。
2、再灌注心率失常。
主要表现为期前收缩、自发性室性节律或室性过速，有时出现室颤，多为一时性的，也可能出现致死性室颤。
心肌缺血再灌注损伤发生机制研究进展
成 的细胞 内高 Ｎ ＋Ｈ 和 内源性儿茶 酚胺 释放增加可直接 或间接激活 Ｎ Ｔ ａ 交换蛋 白 ， ａ、 ａＣ ２ 促进细胞外 Ｃ ２ ａ＋ 内流 ， 进一步加重细
１６ ２
度高 出细胞内约万倍。再灌注损伤发生时 ， 细胞 内 ｃ ａ 平衡状态紊乱后 引起 ｃ ａ 内流和 ｃ ２ ａ＋ 分隔机制 的失调导致 了缺血再灌
注心肌细胞 内钙超载 。钙超载主要发生在再灌注期 ， 由于缺血期细胞膜对 ｃ２ 是 ａ通透性显著增强 ， ＋ 而再灌注期生成 的大量
第 ｌ卷 ５
第２ 期
心肌缺血再灌注损伤发生机制研究进展
宝鲁Байду номын сангаас
（ 内蒙古民族大学 医学院， 内蒙古 通辽 ０ ８４ ） ２ ０３
［ 摘
制。
要 ］ 自由基、 氧 钙超载、 中性粒细胞激活、 心肌能量代谢障碍、 血管内皮细胞损伤和
细胞凋亡等 因素可能共同参与 了Ｍ Ｒ 的发病过程， ＩＩ 综述 了心肌缺血再灌注损伤发生机
心肌缺血再灌注时 由于毛细血管 内皮细胞内黄嘌呤氧化酶增多 、 中性粒细胞呼吸爆 发 、 线粒体功能受损 、 儿茶酚胺氧化
等途径使 Ｏ Ｒ产生增多 ， Ｆ 而抗氧化酶 活性降低 ， 引发 自由基连锁反应 生成更 多 自由基 ， 与各种 细胞成分发生反应造成细胞结 构损伤和功能代谢障碍 。自由基与膜脂质不饱 和脂 肪酸作用 引发脂质过氧化 ， 使膜不饱和脂肪酸， Ａ质 比例失调 ， 蛋 细胞膜 和细胞器膜的液态性 、 流动性降低及 通透 性升 高 ，ａ 内流增加 ， ｃ 间接抑制膜 蛋 白功能 ， 导致胞浆 Ｎ ｃ ａ、 ａ 浓度 升高造成 细胞 肿胀 、 钙超载 ， 以上变化使膜 电位 不稳定 ， 触发严重 的再灌注性 心律 失常 ； Ｆ Ｏ Ｒ使细胞结构蛋 白和酶 的巯基 、 氨基酸氧化 ， 损 伤蛋白质功能 ； Ｆ Ｏ Ｒ直接攻击核酸 ， 引起 Ｄ Ａ断裂 、 色体 畸变 ； Ｆ Ｎ 染 Ｏ Ｒ激活血小板环化酶 ， 生成大量血栓 素Ａ 、 ２ 促进组织因子
心肌缺血再灌注损伤研究进展
心肌缺血再灌注损伤研究进展心肌缺血再灌注损伤是一种常见的心血管疾病，主要由冠状动脉阻塞导致心肌供血不足，进而引发心肌损伤。
随着医疗技术的不断发展，人们对心肌缺血再灌注损伤的认识也在逐步深入。
本文将从心肌缺血再灌注损伤的基本概念、研究现状、研究局限性和未来研究方向等方面进行综述，以期为相关研究提供参考和启示。
心肌缺血再灌注损伤是指由于冠状动脉阻塞导致的心肌缺血，当阻塞血管再通或侧支循环建立后，缺血心肌得到再灌注，但此时心肌反而受到进一步的损伤。
这种损伤主要是由于再灌注后氧自由基产生过多、钙离子内流、中性粒细胞浸润等多种因素共同作用所致。
心肌缺血再灌注损伤的主要临床表现为心律失常、心力衰竭和猝死等。
近年来，心肌缺血再灌注损伤的病理生理机制研究取得了较大进展。
研究发现，再灌注后氧自由基的大量产生是导致心肌损伤的主要因素之一。
同时，钙离子内流、中性粒细胞浸润等也在一定程度上加剧了心肌损伤的程度。
细胞凋亡、自噬等细胞死亡过程也在心肌缺血再灌注损伤中发挥重要作用。
流行病学研究发现，心肌缺血再灌注损伤在心血管疾病患者中普遍存在，且其发生与患者的年龄、性别、血脂水平、高血压等疾病状态密切相关。
研究还发现，吸烟、饮食不健康、缺乏运动等不良生活习惯也会增加心肌缺血再灌注损伤的风险。
对于心肌缺血再灌注损伤的诊断，目前主要依赖于心电图、超声心动图、核磁共振等影像学检查手段。
同时，心肌酶学、炎症因子、氧化应激指标等实验室检查也在一定程度上有助于心肌缺血再灌注损伤的诊断和评估。
心肌缺血再灌注损伤是心血管疾病中一个重要的病理过程，其发生机制复杂，受到多种因素的影响。
目前，关于心肌缺血再灌注损伤的研究已经取得了一定的进展，但在流行病学研究和临床诊断方面仍存在一定的局限性。
未来，随着科学技术的发展和对心肌缺血再灌注损伤机制的深入了解，我们将有望发现更加有效的预防和治疗策略，以降低心肌缺血再灌注损伤的发生率和致死率，提高患者的生活质量。
急性冠脉综合征心肌缺血再灌注损伤的临床研究
·综述·SYSTEMS MEDICINE系统医学系统医学2017年6月第2卷第12期急性冠脉综合征(Acute coronary syndrome,ACS):是指由冠状动脉发生粥样硬化后,易损斑块出现破裂、糜烂,冠状动脉痉挛、血小板活化并聚集,血栓形成后导致管腔狭窄甚至闭塞,引起以胸痛等为主要表现的一组临床综合征[1]。
包括非ST 段抬高型心肌梗死(non-ST-segment elevation myocardial infarction,NSTEMI)、ST 段抬高型心肌梗死(ST-segment eleva⁃tion myocardial infarction,STEMI)、不稳定型心绞痛(Unstable angina,UA)和心源性猝死(Sudden cardiacdeath,SCD)。
随着现代医学技术的不断发展,由最初的单纯药物干预,到经皮冠脉腔内血管成形术(Percutaneoustransluminal coronary angioplasty,PTCA),再到当今经皮冠脉介入治疗(Percutaneous coronary intervention,PC1),以及溶栓后补救性介入治疗(3~24h 内),甚至行冠状动脉搭桥术(Coronary artery bypass grafting,CABG)等策略以血运重建治疗,从而使缺血心肌重新恢复血流灌注,心功能得到明显改善等[2-3]。
然而,ACS心肌缺血早期再灌注治疗,能够引起冠脉血管内皮细胞功能异常,心肌代谢和结构均发生变化。
同时激活炎性因子,细胞膜Na +-Ca 2+交换异常等,通常导致再灌注性损伤的发生。
目前,ACS 心肌缺血再灌注性损伤,为全国乃至全世界心血管医师共同研究的热点。
该文结合最新心血管疾病诊治指南,对ACS 心肌缺血再灌注性损伤的概念、病理生理机制、临床表现、防治措施等方面给予综述。
1ACS 心肌缺血-再灌注性损伤的概念:Jennings 等[4]最早于1960年做了首例动物试验,用狗心脏建立了冠状动脉结扎的模型,通过缺血再灌注后,第一次描述了心肌发生缺血-再灌注损伤。
空心病的心脏缺血再灌注损伤研究
空心病的心脏缺血再灌注损伤研究心脏缺血再灌注损伤是一种常见的心脏疾病，主要指心脏血液供应中断后再次恢复供应时引发的损伤。
这种损伤在心脏手术、心脏病发作和心脏移植等临床操作中经常出现。
针对这一问题，科学家们对空心病的心脏缺血再灌注损伤进行了广泛的研究。
空心病是一种罕见的心脏病，其特点是心脏的中央腔室呈空洞状。
这种病症导致心脏的血液供应异常，容易引发心脏缺血。
当心脏缺血发生时，心肌细胞会出现缺氧和能量代谢紊乱，导致细胞功能受损。
然而，当血液再次灌注心脏时，由于氧化应激和炎症反应的激活，心肌细胞反而遭受更大的损伤。
在研究空心病的心脏缺血再灌注损伤的过程中，科学家们发现了一些重要的机制。
首先，氧化应激被认为是心脏缺血再灌注损伤的主要原因之一。
当心脏缺血时，缺氧导致心肌细胞内氧自由基的产生增加，进而引发氧化应激反应。
这些氧自由基会攻击心肌细胞的膜结构和细胞器，导致细胞的功能受损甚至死亡。
其次，炎症反应在心脏缺血再灌注损伤中也起到了重要的作用。
当心脏缺血时，损伤的心肌细胞会释放出一系列炎症介质，如细胞因子和趋化因子，引发炎症反应。
这些炎症介质会激活炎症细胞，如中性粒细胞和巨噬细胞，进一步破坏心肌细胞，加重损伤。
针对上述机制，科学家们提出了一些治疗策略，以减轻空心病的心脏缺血再灌注损伤。
一种常见的策略是使用抗氧化剂来减轻氧化应激。
抗氧化剂可以清除心肌细胞内的氧自由基，从而减轻氧化应激的损伤。
此外，还有研究表明，通过调节炎症反应可以减轻心脏缺血再灌注损伤。
例如，抑制炎症细胞的激活和炎症介质的释放，可以减少炎症反应的程度，从而减轻损伤。
除了药物治疗，科学家们还研究了其他的治疗方法。
例如，通过改变心脏缺血再灌注的方式，可以减轻损伤。
一种常见的方法是通过预处理心脏，使其产生一种保护性的效应。
预处理可以通过短暂的缺血再灌注或药物处理来实现。
这种方式可以激活心肌细胞内的保护性机制，从而减轻损伤。
此外，还有研究表明，调节心肌细胞的能量代谢也可以减轻心脏缺血再灌注损伤。
心肌缺血再灌注损伤及其调控机制研究
心肌缺血再灌注损伤及其调控机制研究心脏疾病是当前全球范围内最常见的致死性疾病之一，其中心肌梗死是最为常见的类型之一。
目前临床上的主要治疗方法是通过快速重建梗死血管以恢复心肌血供，然而，该方法存在一定的局限性。
因为血管重建的过程本身就会造成一定的心肌缺血再灌注损伤，进一步加重了心肌损伤。
因此，探究心肌缺血再灌注损伤的机制，具有重要的临床意义。
心肌缺血再灌注损伤的机制心肌缺血再灌注导致的损伤机制非常复杂，涉及到一系列的生理和生化过程。
其中，包括缺氧引起的能量代谢障碍，血管痉挛和扩张，氧自由基的过度产生等等。
这些过程相互作用，导致心肌细胞的损伤和死亡。
缺氧引起的能量代谢障碍是心肌缺血再灌注损伤的重要机制之一。
心肌细胞在缺氧的情况下无法正常产生ATP，导致一系列关键酶的功能受到影响，从而影响能量代谢。
此外，氧自由基的过度产生和炎症反应的加剧也会导致细胞膜的损伤，从而导致心肌细胞的凋亡和坏死。
心肌缺血再灌注损伤的调控机制心肌缺血再灌注损伤的发生是多因素共同作用的结果，因此调控机制也是多样化的。
目前，研究者们已经发现了一系列的信号途径和关键分子，用来调控心肌缺血再灌注损伤。
首先，减轻心肌缺血再灌注损伤的有效方法之一是通过降低胆固醇水平。
研究证明降低胆固醇水平可以降低心肌细胞的损伤和凋亡。
这是因为胆固醇可以调节细胞膜的组成，从而影响细胞膜的稳定性。
因此，通过降低胆固醇水平可以改善细胞膜的稳定性，从而减轻心肌缺血再灌注损伤。
其次，研究者们也发现，一些细胞因子和信号途径也可以调控心肌缺血再灌注损伤。
例如，炎症因子和凋亡途径等都可以通过某些分子调节抑制心肌细胞的凋亡和坏死。
而利用这些调节因子可以为临床治疗提供新的方向。
最后，一些营养和药物也被认为能够减轻心肌缺血再灌注损伤。
例如，在不同的实验动物模型中，维生素C可以减轻心肌缺血再灌注损伤。
此外，一些养分和药物也是有效的，如硒、维生素E和谷胱甘肽等。
结论虽然目前我们对心肌缺血再灌注损伤的机制以及调控因素有了很多的了解，但是目前的研究还停留在动物模型中。
心肌缺血再灌注损伤所致血管功能障碍研究进展
心肌缺血再灌注损伤所致血管功能障碍研究进展作者：柴峰于忠娟来源：《中国实用医药》2014年第27期缺血性心脏病仍然是威胁人类健康的头号杀手。
目前的干预措施是依靠经皮介入治疗、血栓溶解剂或抗凝血剂迅速开通闭塞的冠状动脉。
然而，这些治疗都伴随着缺血再灌注损伤的不利后果，现对缺血再灌注损伤引起的血管功能障碍总结如下。
1 心肌缺血再灌注损伤导致的微血管功能障碍心肌缺血和再灌注与血管表型有关，包括：血管通透性增加，内皮细胞炎症，血管舒张和血管收缩因子以及凝血激活与补体系统之间的不平衡等。
缺血再灌注损伤之后对人体产生的微血管功能障碍可能导致呼吸衰竭，表明低氧血症和肺水肿不是由心力衰竭引起，而是由肺泡毛细血管屏障功能的破坏而引起的，可导致微血管通透性的增加[1]。
这种微血管功能障碍类型可以在心脏器官移植患者发生的移植性心肌缺血再灌注情况中出现。
在缺血时期，血管缺氧可以导致血管通透性增加，利用培养的内皮细胞暴露于环境性低氧环境下（2%氧分压，超过24 h）的研究表明暴露于缺氧情况后的血管通透性增高是由环磷酸腺苷（cAMP）的低水平而引起的。
相似的是暴露于低氧环境下的小鼠肺水肿加重、白蛋白泄漏到多个器官、细胞因子水平增加、补体系统激活、白细胞内皮细胞黏附和血小板白细胞聚集，进一步加重了再灌注之后微血管功能障碍。
一项关于镰状细胞病的小鼠模型与输血相关性肺损伤的研究涉及到中性粒细胞减少现象，在微循环损伤中中性粒细胞超微结构域介导与内皮细胞、红细胞或血小板的相互作用[2]。
再灌注之后减轻血管松弛，可以导致无复流现象，在梗死相关的闭塞血管重新开启后以微血管血流的阻抗力增加为特征。
在缺血心肌损伤大鼠模型中，缺血诱导的微血管外周细胞的持久性收缩，对氧化硝化反应的抑制可缓解外周细胞收缩，降低红细胞聚集和重新恢复血管通畅，改善组织的存活率。
这项研究结果确实表明微血管壁是氧自由基和氮自由基的主要来源，可导致缺血-再灌注，诱导微血管功能障碍[3]。
心脏缺血再灌注损伤研究论文
---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 心脏缺血再灌注损伤研究论文【关键词】再灌注损伤Changesofnitricoxidesynthesisincardiacischemiareperfusionin jury【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionandfunctionofendothelialnitri coxidesynthase(eNOS)andinducibleNOS(iNOS)duringischemiarepe rfusioninjury(IRI)inrathearts.METHODS:IRIwasinducedbyclampi ngtheleftanteriordescending(LAD)ofcoronaryarteryfor1h,follo wedbyreperfusion.Nitricoxidesynthase(NOS)activitiesofhearts wasassayedatvarioustimepointsandNOSproteinlevelsaswellasNOS mRNAexpressionweredeterminedbyWesternblotandRTPCRmethodsres pectively.RESULTS:eNOSactivity,proteinlevelandmRNAexpressio nallincreasedafter26hofIRIanddecreasedafter3dofIRIandthengr aduallyreturnedtobasallevelafter21d.iNOSwasexpressedafter12 hofIRIandreachedthepeaklevelatday3afterIRIandthendecreasedt obasallevel.CONCLUSION:TheexpressionofiNOSishighwhilethatof eNOSislowduringcardiacischemiareperfusioninjury.Properregul ationofeNOSandiNOSexpressionmaybetherapeuticallyhelpfulintr eatingpatientswithcardiacischemiareperfusioninjury.【Keywords】reperfusioninjury;nitricoxidesynthase;heart【摘要】目的：研究大鼠心脏缺血再灌注损伤(IRI)过程中一氧化氮合酶1 / 8(NOS)的变化规律及其作用.方法：制作SD大鼠心脏IRI动物模型,用同位素法测定正常及IRI心组织的NOS活性；用Western印迹和逆转录PCR法分析eNOS和iNOS在IRI过程中蛋白和基因表达的变化.结果：心脏eNOS活性、蛋白和mRNA表达水平，在缺血再灌注2~6h 后均增高，3天后降低，21天后逐渐恢复到正常水平.心脏iNOS活性、蛋白和mRNA表达水平，在缺血再灌注12h后开始表达，3天达高峰，然后逐渐降至正常水平.结论：单纯缺血并不引起NOS活性的明显变化,再灌注损伤使NOS的mRNA表达增加,酶的合成增多,活性增高.【关键词】再灌注损伤；一氧化氮合酶；心脏0引言一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在心肌缺血再灌注中起着极其重要的作用［1］.一氧化氮合酶(nitricoxidesynthesis,NOS)可分为原生型(cNOS)和诱生型(iNOS).cNOS依存在的部位分为神经型(nNOS)和内皮型(eNOS).心脏组织内的NOS同功酶有两种,即eNOS和iNOS.参与炎性反应及急性排斥反应等病理过程［2］.我们研究eNOS和iNOS在心脏IRI中的变化规律及其作用,为其防治提供理论基础.1材料和方法1.1材料SD 大鼠购自华中科技大学同济医学院实验动物中心；iNOSAssayKit购自南京建成生物技术研究所；一抗羊抗大鼠iNOS或eNOSmAb购自武汉博士德公司；HRP标记的兔抗羊IgG二抗购自Sigma公司；Trizol 裂解液、Oligo(dT)、TaqDNA聚合酶和逆转录酶(AMVRT)均为美国Gibco公司产品；eNOS和iNOS引物及内参照由上海博亚生物技术公司合成.冠状动脉阻断再灌注模型制备［3］后在不同的再灌注时间点处死大鼠,收集心脏标本,液氮急冻,-70℃保存备用.1.2方法取雄性---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 200～220gSD大鼠120只,随机分为缺血再灌注（IRI）组和假手术（对照,Control）组，每组60只，在再灌注不同时间点（0,0.5,1,2,6,12h 和1,3,7,14,21,30d）处死大鼠，每组每个时间点各5只.1.2.1NOS 活性的测定IRI组大鼠取左室缺血区心肌0.2g,对照组大鼠取左室相应区心肌0.2g,采用iNOSAssayKit进行测定.心组织NOS活性的测定采用3［H］精氨酸同位素法［4］,心组织在4℃含有1mmol/Lleupeptin,2mmol/Laprotonin,1mmol/Lphenylemthylsulfon ylfluoride,1mmol/LDTT,1ml/LTritonX100的30mmol/LHEPES缓冲液中匀浆,反应液为30mmol/LHEPES缓冲液(pH7.4),含1mmol/LCaCl2,100mmol/LNADPH,300mmol/Ltetrahydrobiopterin,1m mol/Ldithiothreitol,以40mmol/LL3H精氨酸(37kBq/反应液)为反应底物,在37℃下反应30min,用200μL含100mmol/LEGTA的终止液终止反应,反应体系过5cm的Dowex离子交换层析柱,加闪烁液后读取放射性记数.蛋白定量用Bradford法,NOS活性用每克蛋白秒fmol（即fkat/g）表示.1.2.2Western印记检测iNOS和eNOS蛋白表达IRI组大鼠取左室缺血区心肌0.2g,对照组大鼠取左室相应区心肌0.2g,以5∶1(V/m)比例置匀浆缓冲液（含50mmol/LTrispH7.5,150mmol/LNaCl,5g/Lαcholatesodium,1g/LSDS ,2mmol/LEDTA,10g/LTritonX100,100mL/L甘油，1mmol/LPMSF,2mg/Laprotinin）匀浆破碎组织.匀浆液于4℃10000g 离心15min，收集上清液并用dyebinding(BioRad)方法以牛血清清蛋3 / 8白为标准测定蛋白浓度.取含30mg总蛋白的各组标本匀浆上清液点样进行75g/LSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离Mr135000的iNOS及150000的eNOS蛋白.Mr标准采用预染的彩虹重组蛋白(AmershamInternationalplc,Buckinghamshire,England).电泳后的凝胶通过Western印记装置（BioRad）电转移蛋白质至hybondC膜(AmershamPharmaciaBiotech,Buckinghamshire,England).转移膜经封闭、与1∶500稀释的iNOS或eNOSmAb4℃孵育过夜、洗涤、与1∶5000稀释的HRP标记的兔抗羊IgG室温孵育1h和第2次洗涤，最后用ECLWestern印记荧光检测系统(AmershamLifeSciences,ArlingtonHeights,IL)显色、曝光于X光底片(Fuji,Tokyo,Japan)和显影、定影.将感光X光片上蛋白条带应用HPIAS2000型图像分析系统(同济千屏影像工程公司生产)扫描测定光密度(OD)定量.1.2.3RTPCR检测iNOS和eNOS的转录IRI组大鼠取左室缺血区心肌0.2g,对照组大鼠取左室相应区心肌0.2g,采用Trizol 试剂提取总RNA，以thermoscriptTMRTPCR系统进行逆转录和PCR反应.PCR反应采取等量逆转录cDNA模板，分别以iNOS,eNOS,βactin 特异性引物进行PCR反应.扩增iNOS的引物对为：sense：5′TGGCTTGCCCTTGGAAGTTTCTC3′,antisense:5′TCCAGGCCATCTTGGT GGCAAGA3′，预计扩增产物为574bpiNOScDNA片段，PCR反应条件为95℃5min；95℃30s，60℃45s，72℃1min，共30个循环；72℃10min.扩增eNOS的引物对为：sense:5′TACGGAGCAGCAAATCCAC3′,antisense:5′CAGGCTGCAGTCCT---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ TTGATC3′，预计扩增产物812bp，PCR反应条件为95℃5min；95℃45s，60℃45s，72℃1.25min，共30个循环；72℃10min.内对照βactin 的扩增引物对为：sense:5′GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3′,antisense:5′CTCCTTAATGTCA CGCACGATTTC3′，预计产物为540bp，PCR反应条件为95℃2min；95℃30s，60℃45s，72℃1min，共30个循环；72℃10min.PCR产物以含0.5mg/L溴乙锭的10g/L琼脂糖凝胶电泳分离，紫外光照下观察电泳条带,用BioRad凝胶分析系统分析结果，结果以光密度值（OD）表示.统计学处理:数据均以x±s表示.应用SPSS11.0软件进行方差分析,P0.05为有显著性差异.2结果2.1心脏IRI时NOS活性的变化单纯缺血1h，心脏NOS活性与对照组相比无明显变化.心脏恢复血供再灌注0.5h后cNOS活性即开始升高,以2～6h最高,与对照组相比,差异有显著性意义(P0.01)；但12h后却迅速下降,3d时活性最低与对照组相比,差异有显著性意义(P0.01),以后逐日恢复,21d时心恢复正常.iNOS活性在[1][2]对照组心脏表达微弱,再灌注2h后逐渐升高,12h~3d活性达高峰,与对照组相比差异有显著性意义(P0.01),以后逐渐下降,7d后基本恢复正常(Tab1).表1心脏IRI后cNOS和iNOS 的活性变化（略）2.2Western印迹IRI组再灌注0.5h后心脏eNOS 蛋白质表达即开始升高,2h达到高峰,12h后开始减少,3d时为最低,以后逐渐恢复,21d时恢复至对照组水平,与NOS活性变化相一致.对照组心脏检测出iNOS蛋白微量表达,但表达量远低于eNOS,IRI可诱5 / 8导其表达,在12h后表达逐渐增强,3d时表达最强,随后逐渐减弱,21d 时恢复对照组水平,也与iNOS的活性变化相一致(Fig1,Tab2).表2Western印迹法测定心脏IRI后eNOS和iNOS蛋白表达(略)2.3NOSmRNA的基因表达IRI组心脏再灌注早期(0.5～12h)即可诱导eNOSmRNA表达增强,2h达高峰,此后随着损伤程度加重,其表达迅速下降.3d低于对照组,以后逐步恢复,21d已相当对照组水平.在对照组心脏iNOSmRNA表达微弱,再灌注12h后开始增强,3d达高峰,21d恢复正常水平(Fig2,Tab3).以上eNOS和iNOSmRNA的消长变化与蛋白质的表达和酶活力的变化一致.表3大鼠心脏IRI后eNOS和iNOSmRNA半定量结果(略)3讨论eNOS来源的NO具有舒张心血管,抑制白细胞浸润和血小板的凝聚作用［5］，从而对心脏可能起到保护作用.Song等［6］的研究表明,在早期eNOS的过量表达对小鼠骨骼肌的IRI具有保护作用,随着损伤过程的进展,心脏结构和功能的损害不断加重,eNOS表达也相应迅速下降.这可能由于大量心肌细胞坏死和凋亡,导致eNOS的合成减少有关.eNOS的表达随着心脏损伤修复和心功能的恢复逐步恢复.NO在心肌再灌注损伤中加重心肌损害.缺血再灌注情况下,多种细胞因子上调巨噬细胞等内的iNOS的mRNA表达,立即产生大量的iNOS和NO.过量的NO与氧迅速反应生成大量的氧自由基如过氧亚硝酸阴离子(ONOO),后者可进一步反应生成HO-,NO2,NO3-等,其结果是引起和加重心肌缺血再灌注损伤［7］.我们发现，单纯缺血1h对心脏NOS活性无明显影响,再灌注30min后NOS活性即开始升高,2～6h到达高峰,持续到6h，此后迅速下降,24h---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 降低到正常以下,21d时恢复至正常水平.RTPCR分析发现eNOS及iNOSmRNA的变化与其蛋白变化相一致.可见在IRI中,早期eNOS的高表达可能参与了早期心血流的调节,对抑制心血管痉挛、减少炎性细胞的浸润有关；iNOS参与介导了心脏IRI的炎症损伤.可以设想,在器官保存过程中或移植后早期使用iNOS的抑制剂,将会减少急性心肌坏死和凋亡以及急性排斥反应的发生,对IRI起到保护作用,促进心功能的恢复，为临床提供科学的理论依据.【参考文献】［1］张荣庆，徐凯，程何祥，等.卡维地洛对缺氧心肌细胞NO生成的影响［J］.第四军医大学学报，2002；23（22）：2071-2073.ZhangRQ,XuK,ChengHX,etal.Effectsofcarvedilolonnit ricoxideproductionbymyocardialcellsduringanoxia［J］.JFourthMilMedUniv,2002；23（22）：2071-2073.［2］许春梅，董卫国，余保平，等.低氧诱导因子1α及诱导型一氧化氮合酶在炎症性肠病中的表达［J］.第四军医大学学报，2004；25（17）：1558-1561.XuCM,DongWG,YuBP,etal.Expressionofhypoxiainducibl efactor1alpha(HIF1α)andinduciblenitricoxidesynthase(iNOS)g enesininflammatoryboweldisease［J］.JFourthMilMedUniv,2004；25（17）：1558-1561.［3］SuzukiM,SasakiN,MikiT,etal.RoleofsarcolemmalK(ATP)channelsi ncardioprotectionagainstischemia/reperfusioninjuryinmice ［J］.JClinInvest,2002;109(4):509-516.［4］7 / 8CheungF,SiowYL,ChenWZ,etal.InhibitoryeffectofGinkgobllobaex tractontheexpressionofinduciblenitricoxidesynthaseinendothe lialcells［J］.BiochemPharmacol,1999;58(10):1665-1673.［5］OzakiM,KawashimaS,HiraseT,etal.Overexpressionofendothelialn itricoxidesynthaseinendothelialcellsisprotectiveagainstisch emiareperfusioninjuryinmouseskeletalmuscle［J］.AmJPathol,2002;160(4):1335-1344.［6］SongW,LuXR,FengQP.Tumornecrosisfactorαinducesapoptosisviai nduciblenitricoxidesynthaseinneonatalmousecardiomyocytes ［J］.CardiovascRes,2000;45(3):595-602.［7］项红军,赵佐庆,李纪鹏,等.大鼠小肠缺血再灌注后血中NO,SOD浓度及肺中Bax,Bcl2表达的改变［J］.第四军医大学学报，2002；23（21）：1974-1977。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 心脏缺血再灌注损伤研究论文【关键词】再灌注损伤Changesofnitricoxidesynthesisincardiacischemiareperfusionin jury【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionandfunctionofendothelialnitri coxidesynthase(eNOS)andinducibleNOS(iNOS)duringischemiarepe rfusioninjury(IRI)inrathearts.METHODS:IRIwasinducedbyclampi ngtheleftanteriordescending(LAD)ofcoronaryarteryfor1h,follo wedbyreperfusion.Nitricoxidesynthase(NOS)activitiesofhearts wasassayedatvarioustimepointsandNOSproteinlevelsaswellasNOS mRNAexpressionweredeterminedbyWesternblotandRTPCRmethodsres pectively.RESULTS:eNOSactivity,proteinlevelandmRNAexpressio nallincreasedafter26hofIRIanddecreasedafter3dofIRIandthengr aduallyreturnedtobasallevelafter21d.iNOSwasexpressedafter12 hofIRIandreachedthepeaklevelatday3afterIRIandthendecreasedt obasallevel.CONCLUSION:TheexpressionofiNOSishighwhilethatof eNOSislowduringcardiacischemiareperfusioninjury.Properregul ationofeNOSandiNOSexpressionmaybetherapeuticallyhelpfulintr eatingpatientswithcardiacischemiareperfusioninjury.【Keywords】reperfusioninjury;nitricoxidesynthase;heart【摘要】目的：研究大鼠心脏缺血再灌注损伤(IRI)过程中一氧化氮合酶1 / 8(NOS)的变化规律及其作用.方法：制作SD大鼠心脏IRI动物模型,用同位素法测定正常及IRI心组织的NOS活性；用Western印迹和逆转录PCR法分析eNOS和iNOS在IRI过程中蛋白和基因表达的变化.结果：心脏eNOS活性、蛋白和mRNA表达水平，在缺血再灌注2~6h 后均增高，3天后降低，21天后逐渐恢复到正常水平.心脏iNOS活性、蛋白和mRNA表达水平，在缺血再灌注12h后开始表达，3天达高峰，然后逐渐降至正常水平.结论：单纯缺血并不引起NOS活性的明显变化,再灌注损伤使NOS的mRNA表达增加,酶的合成增多,活性增高.【关键词】再灌注损伤；一氧化氮合酶；心脏0引言一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)在心肌缺血再灌注中起着极其重要的作用［1］.一氧化氮合酶(nitricoxidesynthesis,NOS)可分为原生型(cNOS)和诱生型(iNOS).cNOS依存在的部位分为神经型(nNOS)和内皮型(eNOS).心脏组织内的NOS同功酶有两种,即eNOS和iNOS.参与炎性反应及急性排斥反应等病理过程［2］.我们研究eNOS和iNOS在心脏IRI中的变化规律及其作用,为其防治提供理论基础.1材料和方法1.1材料SD 大鼠购自华中科技大学同济医学院实验动物中心；iNOSAssayKit购自南京建成生物技术研究所；一抗羊抗大鼠iNOS或eNOSmAb购自武汉博士德公司；HRP标记的兔抗羊IgG二抗购自Sigma公司；Trizol 裂解液、Oligo(dT)、TaqDNA聚合酶和逆转录酶(AMVRT)均为美国Gibco公司产品；eNOS和iNOS引物及内参照由上海博亚生物技术公司合成.冠状动脉阻断再灌注模型制备［3］后在不同的再灌注时间点处死大鼠,收集心脏标本,液氮急冻,-70℃保存备用.1.2方法取雄性---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 200～220gSD大鼠120只,随机分为缺血再灌注（IRI）组和假手术（对照,Control）组，每组60只，在再灌注不同时间点（0,0.5,1,2,6,12h 和1,3,7,14,21,30d）处死大鼠，每组每个时间点各5只.1.2.1NOS 活性的测定IRI组大鼠取左室缺血区心肌0.2g,对照组大鼠取左室相应区心肌0.2g,采用iNOSAssayKit进行测定.心组织NOS活性的测定采用3［H］精氨酸同位素法［4］,心组织在4℃含有1mmol/Lleupeptin,2mmol/Laprotonin,1mmol/Lphenylemthylsulfon ylfluoride,1mmol/LDTT,1ml/LTritonX100的30mmol/LHEPES缓冲液中匀浆,反应液为30mmol/LHEPES缓冲液(pH7.4),含1mmol/LCaCl2,100mmol/LNADPH,300mmol/Ltetrahydrobiopterin,1m mol/Ldithiothreitol,以40mmol/LL3H精氨酸(37kBq/反应液)为反应底物,在37℃下反应30min,用200μL含100mmol/LEGTA的终止液终止反应,反应体系过5cm的Dowex离子交换层析柱,加闪烁液后读取放射性记数.蛋白定量用Bradford法,NOS活性用每克蛋白秒fmol（即fkat/g）表示.1.2.2Western印记检测iNOS和eNOS蛋白表达IRI组大鼠取左室缺血区心肌0.2g,对照组大鼠取左室相应区心肌0.2g,以5∶1(V/m)比例置匀浆缓冲液（含50mmol/LTrispH7.5,150mmol/LNaCl,5g/Lαcholatesodium,1g/LSDS ,2mmol/LEDTA,10g/LTritonX100,100mL/L甘油，1mmol/LPMSF,2mg/Laprotinin）匀浆破碎组织.匀浆液于4℃10000g 离心15min，收集上清液并用dyebinding(BioRad)方法以牛血清清蛋3 / 8白为标准测定蛋白浓度.取含30mg总蛋白的各组标本匀浆上清液点样进行75g/LSDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离Mr135000的iNOS及150000的eNOS蛋白.Mr标准采用预染的彩虹重组蛋白(AmershamInternationalplc,Buckinghamshire,England).电泳后的凝胶通过Western印记装置（BioRad）电转移蛋白质至hybondC膜(AmershamPharmaciaBiotech,Buckinghamshire,England).转移膜经封闭、与1∶500稀释的iNOS或eNOSmAb4℃孵育过夜、洗涤、与1∶5000稀释的HRP标记的兔抗羊IgG室温孵育1h和第2次洗涤，最后用ECLWestern印记荧光检测系统(AmershamLifeSciences,ArlingtonHeights,IL)显色、曝光于X光底片(Fuji,Tokyo,Japan)和显影、定影.将感光X光片上蛋白条带应用HPIAS2000型图像分析系统(同济千屏影像工程公司生产)扫描测定光密度(OD)定量.1.2.3RTPCR检测iNOS和eNOS的转录IRI组大鼠取左室缺血区心肌0.2g,对照组大鼠取左室相应区心肌0.2g,采用Trizol 试剂提取总RNA，以thermoscriptTMRTPCR系统进行逆转录和PCR反应.PCR反应采取等量逆转录cDNA模板，分别以iNOS,eNOS,βactin 特异性引物进行PCR反应.扩增iNOS的引物对为：sense：5′TGGCTTGCCCTTGGAAGTTTCTC3′,antisense:5′TCCAGGCCATCTTGGT GGCAAGA3′，预计扩增产物为574bpiNOScDNA片段，PCR反应条件为95℃5min；95℃30s，60℃45s，72℃1min，共30个循环；72℃10min.扩增eNOS的引物对为：sense:5′TACGGAGCAGCAAATCCAC3′,antisense:5′CAGGCTGCAGTCCT---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ TTGATC3′，预计扩增产物812bp，PCR反应条件为95℃5min；95℃45s，60℃45s，72℃1.25min，共30个循环；72℃10min.内对照βactin 的扩增引物对为：sense:5′GTGGGGCGCCCCAGGCACCA3′,antisense:5′CTCCTTAATGTCA CGCACGATTTC3′，预计产物为540bp，PCR反应条件为95℃2min；95℃30s，60℃45s，72℃1min，共30个循环；72℃10min.PCR产物以含0.5mg/L溴乙锭的10g/L琼脂糖凝胶电泳分离，紫外光照下观察电泳条带,用BioRad凝胶分析系统分析结果，结果以光密度值（OD）表示.统计学处理:数据均以x±s表示.应用SPSS11.0软件进行方差分析,P0.05为有显著性差异.2结果2.1心脏IRI时NOS活性的变化单纯缺血1h，心脏NOS活性与对照组相比无明显变化.心脏恢复血供再灌注0.5h后cNOS活性即开始升高,以2～6h最高,与对照组相比,差异有显著性意义(P0.01)；但12h后却迅速下降,3d时活性最低与对照组相比,差异有显著性意义(P0.01),以后逐日恢复,21d时心恢复正常.iNOS活性在[1][2]对照组心脏表达微弱,再灌注2h后逐渐升高,12h~3d活性达高峰,与对照组相比差异有显著性意义(P0.01),以后逐渐下降,7d后基本恢复正常(Tab1).表1心脏IRI后cNOS和iNOS 的活性变化（略）2.2Western印迹IRI组再灌注0.5h后心脏eNOS 蛋白质表达即开始升高,2h达到高峰,12h后开始减少,3d时为最低,以后逐渐恢复,21d时恢复至对照组水平,与NOS活性变化相一致.对照组心脏检测出iNOS蛋白微量表达,但表达量远低于eNOS,IRI可诱5 / 8导其表达,在12h后表达逐渐增强,3d时表达最强,随后逐渐减弱,21d 时恢复对照组水平,也与iNOS的活性变化相一致(Fig1,Tab2).表2Western印迹法测定心脏IRI后eNOS和iNOS蛋白表达(略)2.3NOSmRNA的基因表达IRI组心脏再灌注早期(0.5～12h)即可诱导eNOSmRNA表达增强,2h达高峰,此后随着损伤程度加重,其表达迅速下降.3d低于对照组,以后逐步恢复,21d已相当对照组水平.在对照组心脏iNOSmRNA表达微弱,再灌注12h后开始增强,3d达高峰,21d恢复正常水平(Fig2,Tab3).以上eNOS和iNOSmRNA的消长变化与蛋白质的表达和酶活力的变化一致.表3大鼠心脏IRI后eNOS和iNOSmRNA半定量结果(略)3讨论eNOS来源的NO具有舒张心血管,抑制白细胞浸润和血小板的凝聚作用［5］，从而对心脏可能起到保护作用.Song等［6］的研究表明,在早期eNOS的过量表达对小鼠骨骼肌的IRI具有保护作用,随着损伤过程的进展,心脏结构和功能的损害不断加重,eNOS表达也相应迅速下降.这可能由于大量心肌细胞坏死和凋亡,导致eNOS的合成减少有关.eNOS的表达随着心脏损伤修复和心功能的恢复逐步恢复.NO在心肌再灌注损伤中加重心肌损害.缺血再灌注情况下,多种细胞因子上调巨噬细胞等内的iNOS的mRNA表达,立即产生大量的iNOS和NO.过量的NO与氧迅速反应生成大量的氧自由基如过氧亚硝酸阴离子(ONOO),后者可进一步反应生成HO-,NO2,NO3-等,其结果是引起和加重心肌缺血再灌注损伤［7］.我们发现，单纯缺血1h对心脏NOS活性无明显影响,再灌注30min后NOS活性即开始升高,2～6h到达高峰,持续到6h，此后迅速下降,24h---------------------------------------------------------------范文最新推荐------------------------------------------------------ 降低到正常以下,21d时恢复至正常水平.RTPCR分析发现eNOS及iNOSmRNA的变化与其蛋白变化相一致.可见在IRI中,早期eNOS的高表达可能参与了早期心血流的调节,对抑制心血管痉挛、减少炎性细胞的浸润有关；iNOS参与介导了心脏IRI的炎症损伤.可以设想,在器官保存过程中或移植后早期使用iNOS的抑制剂,将会减少急性心肌坏死和凋亡以及急性排斥反应的发生,对IRI起到保护作用,促进心功能的恢复，为临床提供科学的理论依据.【参考文献】［1］张荣庆，徐凯，程何祥，等.卡维地洛对缺氧心肌细胞NO生成的影响［J］.第四军医大学学报，2002；23（22）：2071-2073.ZhangRQ,XuK,ChengHX,etal.Effectsofcarvedilolonnit ricoxideproductionbymyocardialcellsduringanoxia［J］.JFourthMilMedUniv,2002；23（22）：2071-2073.［2］许春梅，董卫国，余保平，等.低氧诱导因子1α及诱导型一氧化氮合酶在炎症性肠病中的表达［J］.第四军医大学学报，2004；25（17）：1558-1561.XuCM,DongWG,YuBP,etal.Expressionofhypoxiainducibl efactor1alpha(HIF1α)andinduciblenitricoxidesynthase(iNOS)g enesininflammatoryboweldisease［J］.JFourthMilMedUniv,2004；25（17）：1558-1561.［3］SuzukiM,SasakiN,MikiT,etal.RoleofsarcolemmalK(ATP)channelsi ncardioprotectionagainstischemia/reperfusioninjuryinmice ［J］.JClinInvest,2002;109(4):509-516.［4］7 / 8CheungF,SiowYL,ChenWZ,etal.InhibitoryeffectofGinkgobllobaex tractontheexpressionofinduciblenitricoxidesynthaseinendothe lialcells［J］.BiochemPharmacol,1999;58(10):1665-1673.［5］OzakiM,KawashimaS,HiraseT,etal.Overexpressionofendothelialn itricoxidesynthaseinendothelialcellsisprotectiveagainstisch emiareperfusioninjuryinmouseskeletalmuscle［J］.AmJPathol,2002;160(4):1335-1344.［6］SongW,LuXR,FengQP.Tumornecrosisfactorαinducesapoptosisviai nduciblenitricoxidesynthaseinneonatalmousecardiomyocytes ［J］.CardiovascRes,2000;45(3):595-602.［7］项红军,赵佐庆,李纪鹏,等.大鼠小肠缺血再灌注后血中NO,SOD浓度及肺中Bax,Bcl2表达的改变［J］.第四军医大学学报，2002；23（21）：1974-1977。