牛促卵泡生成素FSH酶联免疫分析ELISA
卵泡刺激素(FSH)测定试剂(荧光免疫层析法)产品技术要求万孚
1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，标识清晰，各组分齐全，液体无渗漏。
1.2物理检查
膜条宽为 4.0±0.5mm；液体移行速度应不低于10mm/min。
1.3准确度
用参考品作为样本进行测定，其测定结果的相对偏差（B ias）不应超过±10%。
1.4最低检出限
应不大于1mIU/mL。
1.5线性
在1mIU/mL～100mIU/mL 的范围内，线性相关系数r≥0.9900。
1.6精密度
1.6.1批内精密度
用同一批号的试剂分别测定 2 个不同浓度的样本，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。
1.6.2批间精密度
用三个不同批号的试剂分别测定2 个不同浓度的样本，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。
1.7特异性
1.7.1与促黄体生成素（LH）
浓度不低于200 IU/L 的LH，在本试剂上的测定结果应不大于1mIU/mL。
1.7.2与促甲状腺素（TSH）
浓度不低于200 mIU/L 的TSH，在本试剂上的测定结果应不大于1mIU/mL。
1.7.3与人绒毛促性腺激素（HCG）
浓度不低于1000 IU/L 的HCG，在本试剂上的测定结果应不大于1mIU/mL。
酶联免疫吸附试验(ELISA)测定错误结果的原因分析
ELISA测定错误结果的原因分析ELISA即酶联免疫吸附试验，是一种常用的固相酶免疫测定方法。
Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定，并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。
ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。
但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在临床检验中除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。
引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试剂因素；③操作因素。
本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。
血清是最常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：1．内源性物质有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。
常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
（1）类风湿因子人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。
酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量
酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量姓名：李希东专业：植物学学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：一、实验目的：掌握间接法测定植物激素的原理和方法；了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。
二、实验原理：酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。
其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。
ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。
间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。
如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。
图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：A.间接酶联免疫原理示意图示反应板（固相载体）示激素特异抗体（一抗）示激素（抗原）示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。
酶联免疫吸附试验(ELISA)基本原理
SOP_13-1 酶联免疫吸附试验（ELISA）基本原理与注意事项一、基本原理1、包被1.1、固相载体的要求（1）、结合抗体或抗原的容量大（2）、抗体或抗原牢固地固定在其表面（3）、不影响免疫反应性（4）、利于反应充分进行（5）、固相方法简便易行，快速经济1.2、固相载体的材料：聚笨乙烯1.3、包被coating将抗原或抗体结合于固相载体。
1.4、封闭blocking用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附。
2、反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体。
标记酶的要求：(1)、活性高(2)、性质稳定(3)、专一性强(4)、酶催化底物的显色信号易于判断和测量(5)、方法敏感，重复性好，简单易行(6)、酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉常用酶辣根过氧化物酶HRP（ELISA中应用最为广泛的标记用酶）3、洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离。
4、底物显色HRPDH2+H2O2—————→D+2H2OH2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很高。
供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种。
常用底物：四甲基联苯胺TMB四甲基联苯胺TMB是ELISA中应用最广泛的底物。
TMB反应后显蓝色，加酸终止反应后变为黄色,测定波长450nm ，稳定，无致癌性。
二、常用方法与原理1、双抗体夹心法方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色应用：二价或二价以上的较大分子抗原测定乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等2、双抗原夹心法原理：类似双抗体夹心法操作步骤：类似双抗体夹心法应用：乙型肝炎表面抗体3、竞争法（测抗原）方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。
加底物显色。
应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）4、竞争法（测抗体）原理：类似检测抗原的竞争法应用：乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)和乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的检测5、间接法方法：用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗抗体或二抗）加底物显色。
植物激素的酶联免疫吸附测定法(ELISA)
结果计算： 曲线的横坐标用激素标样各浓度（ng/ml ）的自然对 数表示，纵坐标用各浓度显色值的logit值表示。Logit 值的计算方法如下： B/B0 B Logit（B/B0）=ln———— =ln———— 1-B/B0 B0-B 其中B0是0ng/ml孔的显色值，B是其它浓度的显色 值。 待测样品可根据其显色值的logit值从图上查出其所 含激素浓度（ng/ml）的自然对数，再经过反对数即可 知其激素的浓度（ng/ml）。 求得样品中激素的浓度后，再计算样品中激素的含量 （ng/g•fw）。
材料、试剂及设备
(1) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH2PO4 , 2.96g Na2HPO4 •12H2O，用量筒加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。 (2) 样品稀释液：500 ml PBS中加0.5 ml Tween-20， 0.5g明胶（稍加热溶解）。 (3) 底物缓冲液：称取5.10g C6H8O7•H2O（柠檬酸）， 18.43g Na2HPO4•12H2O，用量筒加1 000ml蒸馏水， 再加1 ml Tween-20，pH为5.0。 (4) 洗涤液：1000ml PBS加1mlTween-20。 (5) 终止液：2mol/L H2SO4。
实验步骤
一、竞争：即加标准物、待测样和抗体。 加标样及待测样： 取适量所给标样用样品稀释液配成： IAA标准曲线的最大浓度为100ng/ml。然后再依ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ2倍 稀释8个浓度（包括0ng/ml ）。将系列标准样加入96孔 酶标板的前两行，每个浓度加2孔，每孔50μl,其余孔加 待测样，每个样品重复两孔，每孔50μl。 加抗体：在5ml样品稀释液中加入一定量的抗体,混匀 后每孔加50μl，然后将酶标板加入湿盒内开始竞争。 竞争条件37℃左右0.5h。
酶联免疫方法检测细胞因子步骤
酶联免疫方法检测细胞因子步骤酶联免疫方法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种广泛应用于生物医学研究领域的检测技术，它能够快速、准确地检测细胞因子等生物大分子的含量。
细胞因子是一类在调节和介导细胞间相互作用中发挥重要作用的细胞因子，它们在免疫反应、炎症反应和细胞信号传导等生理过程中具有重要的调节作用。
本文将对酶联免疫方法检测细胞因子的步骤进行详细介绍，让读者对该技术有一个全面的了解。
第一步：样品处理在进行酶联免疫法检测细胞因子之前，首先需要对样品进行处理。
样品处理的目的是提取细胞因子，并将其置于适宜的条件下以便后续的检测。
对于细胞因子的提取可采用离心、超声波破碎等方法，以获取高纯度的样品。
同时，对于血清、血浆等液体样品，还需通过凝胶过滤、醋酸纤维素柱层析等步骤进行净化处理，以去除样品中可能存在的干扰物质。
第二步：酶标记抗体的制备酶联免疫法的关键之一是酶标记抗体的制备。
酶标记抗体一般是通过将抗体与酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）进行共价结合而得到的。
在制备酶标记抗体时，需要考虑到抗体与酶的比例、结合条件等因素，并通过一系列的实验来优化制备条件，以确保酶标记抗体的稳定性和活性。
第三步：微板上样品的包被完成样品的处理和酶标记抗体的制备之后，下一步是将样品包被到微板上。
微板是一种通常由聚苯乙烯、聚碳酸酯等材料制成的微量反应容器，其表面具有一定的亲和性，可以吸附蛋白质等生物分子。
在将样品包被到微板上时，需注意包被的时间、温度等因素，以使样品能够均匀地吸附到微板上，并且保持其天然的构象和生物活性。
第四步：酶标记抗体的添加将样品包被到微板上之后，接下来就是添加酶标记抗体。
酶标记抗体作为二抗，可以与包被在微板上的靶分子结合，形成特异性的抗原-抗体复合物。
为了确保酶标记抗体的特异性和灵敏度，通常需要对酶标记抗体进行适当的稀释，并加入到微板上进行孵育。
第五步：底物的加入与反应在酶标记抗体添加完毕后，需要加入底物并进行反应。
酶联免疫吸附剂测定ELISA实验报告及实验讨论
ELISA实验报告一、实验名称酶联免疫吸附测定二、实验原理在抗原-待测抗体-酶标记抗体的复合物中加入相应酶的底物，反应生成有色产物，然后借助分光光度计的光吸收计算抗体的量。
待测抗体的定量与有色产生成正比。
三、实验材料与试剂1.抗原Human IgG (0.025mg/ul),一抗Rabbit-α-human IgG,二抗辣根过氧化物酶羊抗兔IgG。
2.包被液，PBS溶液，封闭液，Tween-20 0.5mL蒸馏水稀释至100mL，邻苯二胺溶液，中止液。
3.聚苯乙烯微量细胞培养板，酶联免疫检测仪，取液器，烧杯，稀释用带凹槽的平板。
四、实验步骤1.将用包被液稀释好的Human IgG加入到培养板以B2至D10为对角线的矩形区域中，200ul/well，B11 C11 D11处不加抗原作为对照，然后在37℃下温育30分钟。
2.取出平板，倒尽液体，然后向B2至D11的矩形区域每个孔中加入200ul的PBS 洗涤液，然后倒掉，如此洗涤3次。
再将平板倒置在吸水纸上，使孔中液体流尽。
3.在B2到D10的矩形区域每个孔中加入0.5﹪的BSA溶液200ul，然后在37℃条件下温育30分钟。
4.Washing with PBS 200ul/well for three times。
具体步骤同步骤2。
5.将first antibody Rabbit-α-human IgG稀释成不同的浓度梯度，200ul/well 按下表加入到平板中。
其中B10 C10 D10不加一抗作为对照，然后incubate at7.在B2到D11的矩形区域中加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG，每孔200ul，在37℃下温育30分钟。
8. Washing with PBS 200ul/well for three times。
具体步骤同步骤2。
9.向平板B2到D11的矩形区域中加入底物邻苯二胺溶液200ul/well。
10. 向平板B2到D11的矩形区域中加入终止液，每孔50ul。
生殖激素的测定方法与实际应用
生殖激素的测定方法与实际应用生殖激素是一类控制生殖功能的激素，包括促性腺激素（Gonadotropin）、类固醇激素等。
它们对于正常的性发育、生殖过程以及激素的调节作用至关重要。
生殖激素的测定方法是现代生物技术研究的重点，对于疾病诊断、治疗以及妊娠维护等多方面都有很重要的作用。
本文将介绍当前常用的生殖激素测定方法以及其在实际应用中的作用和意义。
生殖激素的测定方法酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的生殖激素测定方法。
其原理为利用酶标记的抗体特异性识别生殖激素，最终测定生殖激素的含量。
常见的ELISA方法包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等。
这种方法具有操作简便、检测灵敏度高、具有较好的进化拓展性等优点。
但是其灵敏度受到抗体质量、标记物的选择等影响，有时可能会出现误差较大的情况。
免疫荧光法（IF）免疫荧光法（IF）是一种通过荧光信号观测的生殖激素测定方法。
其原理为抗体与激素相结合后，在荧光显微镜下观测生殖激素的分布。
这种方法具有高灵敏度和灵活性，但是需要专业设备和管理技能，成本较高。
毒蛋白结合法（RIA）毒蛋白结合法（RIA）是一种利用毒蛋白包覆的放射性同位素标记捕捉生殖激素的测定方法。
这种方法具有较高的灵敏度、特异性和准确性，是生殖激素测定较为传统的方法。
但是由于使用放射性物质会造成危害，使用成本和操作要求较高。
液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）是一种高流量、高通量、高分辨率和高灵敏度的生殖激素测定方法。
这种方法通过质谱技术分析原子或分子的组成和结构，可以准确、敏感地检测出多种生殖激素。
相对于上述几种方法，LC-MS/MS具有灵敏度高、特异性好、准确性高、分析速度快等优点。
但是使用成本较高，操作难度大。
实际应用生殖系统疾病的诊断生殖激素的测定方法在生殖系统疾病的诊断中具有重要作用。
例如，在某些形式的不孕症中，女性患者卵巢功能畸形导致卵泡发育障碍，促卵泡激素（FSH）水平较高，而黄体生成素（LH）水平较低。
小鼠促卵泡素(FSH)Elisa试剂盒说明书
小鼠促卵泡素（FSH）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆及相关液体样本中促卵泡素（FSH）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠促卵泡素（FSH）水平。
用纯化的小鼠促卵泡素（FSH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入促卵泡素（FSH），再与HRP标记的FSH抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠促卵泡素（FSH）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠促卵泡素（FSH）浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：13.5IU/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
酶联免疫吸附(ELISA)实验具体步骤及详细说明
酶联免疫吸附（ELISA）实验具体步骤及详细说明酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
（2）研究抗酶抗体的合成。
（3）显现微量的免疫沉淀反应。
（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。
本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。
这种方法欲测的抗原必须有两个可以与抗体结合的部位，因为其一端要包被于固相载体上的抗体作用，而另一端则要与酶标记特异性抗体作用。
因此，不能用于分子量小于5000的半抗原之类的抗原测定。
我们用在霍乱肠毒素的测定。
HbSAg及HbS的测定。
具体步骤一、包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 ug /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱。
二、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。
三、每凹孔加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃作用1～2小时。
四、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。
五、加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的酶标记特异性抗体溶液，37℃作用1～2小时或由预试实验确定作用时间。
六、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。
七、加入0.2ml底物溶液于每个凹孔(OPD或OT)，室温作用30分钟（另作一空白对照，0.4 ml底物加0.1 ml终止剂）。
八、加终止剂：每凹孔加2M H2SO4或2 M柠檬酸0.05 ml。
九、观察记录结果：目测或用酶标比色计测定（OPD用492nm）OD值。
注意事项1.可溶性抗原或抗体吸附于固相载体而成为不溶形式，这是进行酶标记测定的基本条件。
促卵泡生成激素(FSH)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求yuande
促卵泡生成激素（FSH）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）适用范围：本品用于体外定量测定人血清或血浆中的FSH的含量。
1.1 产品规格试剂盒规格为48人份/盒、96人份/盒。
1.2 主要组成成分表1 促卵泡生成激素（FSH）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）主要组成成分a) 酶结合物以含牛血清白蛋白的缓冲液配制的联接HRP的FSH单克隆抗体，其中含ProClin300做为防腐剂。
b) 校准品校准品主要以含牛血清白蛋白的缓冲液为稀释液，其中含ProClin300做为防腐剂，校准品A～F中含有FSH的目标浓度为0、1.2 IU/L、5.0 IU/L、9.0 IU/L、45 IU/L、100 IU/L。
校准品具体浓度详见标签及试剂盒参数IC卡。
c) 发光液发光液A主要成份为鲁米诺，发光液B主要成份为过氧化脲，两者均以pH8.6的Tris-HCl缓冲液配制。
d) 包被微孔板包被有FSH单克隆抗体白色聚苯乙烯微孔板，用铝箔袋真空包装。
e) 质控品（备选）以正常人血清为基质制备的冻干品，其中含ProClin300做为防腐剂，其靶值浓度范围QCⅠ（7 IU/L～12 IU/L）QCⅡ（34 IU/L～56 IU/L）。
质控品具体浓度详见质控品参数卡。
不同批号试剂盒中的相同组分不能互换。
2.1 外观a）液体组分应澄清，无沉淀或絮状物，实际装量应不小于标示装量；b）冻干组分呈白色或淡黄色疏松体，加水后应在3分钟内完全溶解；c）所有组分均无包装破损，标示清楚。
2.2 准确度用国家标准品（编号：150533）作为参考物质，配制不同浓度水平的样本作为待测样本，使用试剂盒内校准品检测待测样本，其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。
2.3线性在[1.0,100] IU/L范围内，相关系数（r）应不低于0.990。
2.4 2.4重复性和批间差2.4.1.重复性：CV≤10%（手工操作），CV≤8%（全自动）。
2.4.2 批间差：CV≤15%。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应用
ELISA的基本原理是利用抗原-抗体反应的特异性，将特异性抗体或抗原固相 化在固体表面上，再与待测样本中的相应抗原或抗体发生特异性结合，加入酶标 记的二抗，最后通过底物显色反应，定量或定性分析待测样本中的抗原或抗体。
随着生物技术的不断发展，ELISA技术也在不断进步。在抗体方面，越来越 多的重组抗体和基因工程抗体被应用于ELISA中，这些抗体的制备过程更加简单， 纯度和特异性更高。在标记技术方面，酶标记物的选择更加多样化，如碱性磷酸 酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶等，以满足不同检测需求。同时，一些新 型的检测系统，如微孔板、磁性颗粒和纳米材料等被引入到ELISA中，使得检测 更加灵敏、快速和自动化。
6、洗涤：清洗，去除未结合的酶标记抗体或抗原。
7、显色：加入底物溶液，酶催化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗 原或抗体的浓度。
8、终止反应：加入终止液，停止酶催化反应。
9、读数：在酶标仪上读取各孔的光密度值，根据标准曲线计算抗原或抗体 的浓度。
三、ELISA酶联免疫吸附试验原 理
ELISA酶联免疫吸附试验基于抗原抗体反应的特异性。抗原和抗体分别固定 在固相载体和酶标记物上，当两者相遇时，发生特异性结合。通过洗涤步骤去除 未结合的成分，仅留下结合在固相载体上的抗原-抗体复合物。然后加入酶标记 的抗体或抗原，进一步与复合物中的抗原或抗体结合。最后加入底物溶液，酶催 化底物生成有色产物，根据颜色深浅判断抗原或抗体的浓度。
酶联免疫吸附反应的技术进展及应 用
酶联免疫吸附反应（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一 种基于抗原-抗体反应的经典免疫分析方法。在过去的几十年里，ELISA技术取得 了显著的技术进展，使其在生物医学、环境保护、食品检测等领域中的应用越来 越广泛。本次演示将介绍ELISA的技术进展及其在不同领域中的应用情况，并通 过案例分析探讨其优缺点和发展趋势。
怎么样看内分泌(性激素六项)化验单
有很多妇产科医生和患者，在看到性激素六项化验单时，只要看到其值在正常范围内，就认为是正常的，这是完全错的。
我告诉你：1，FSH卵泡刺激素值在月经的第三天一般是在5.8。
LH 促黄体生成激素值在4.8。
这样才比较正常。
2，雌激素(E2)在月经第三天的值应在62~70才正常。
如E2＜50pg/ml，那就是子宫内膜雌激素准备不够，是雌激素偏低，会有明显的临床症状。
3，当雌激素偏低时，PRL催乳素会高，而且当你在化验时紧张，PRL也会升高。
这是生理性升高，如果不是垂体微腺瘤引起的是不用服嗅隐亭的。
4，一般在月经的第三天不需要化验孕激素(P)，可在月经的第22 天化验它，既省钱又有意义。
当女性垂体功能不全时，除了引起雌激素分泌减少外，还引起“隐性甲状腺功能减退”。
这种病在临床上如果没有经验就很容易被忽视。
特别是雌低又伴“隐甲减”时易误诊。
隐性甲状腺功能减退可具有如下症状：1，疲劳感，肌痉挛，关节痛，麻痹，体重增加，嗜睡，低体温，皮肤干燥，便秘，胃口差。
2，青春期发育迟缓(偏瘦小、或“豆芽菜型身材)，月经失调。
3，习惯性流产，不孕。
治疗需用甲状腺素。
----------------有很多人问我：在妊娠期间不小心服了一些药物，去医院里医生说不能要，就做了流产，对吗？其实在卵子受精后的1周内用药，受精卵尚未种植在子宫内膜，一般不受药物影响；如在受精后的1-2周内用药，受精卵虽已种植于子宫内膜，但组织尚未分化，药物产生的影响除造成流产之外，并不引起致畸，属安全期。
故在孕前或孕早早期服用了一些药物对胎儿不会有太大的影响，不必过分担心,也不必因此作人工流产。
-----------------------激素测定的常用检测方法与单位目前临床上用于激素测定的常用检测方法有：（1）放射免疫分析法 (RIA)，灵敏度10-9 ~ 10-12 g (ng，pg，nmol/L, pmol/L)；（2）酶联免疫吸附分析法(ELISA) ，灵敏度 10-9~10-10 g (ng，pg，nmol/L, pmol/L)；（3）免疫放射分析法(IRMA) 抗体作标记，灵敏度高于10-9~10-12 g (ng，pg，nmol/L, pmol/L)；（4）时间分辨荧光免疫分析(DELFIA)，灵敏度达： 10-12~10-15 g （ng，fg，nmol/L, fmol/L）；（5）酶放大化学发光法（IMMULITE）敏度高于10-9~10-12 g (ng，pg，nmol/L, pmol/L)；（6）电化化学发光（ELECSYS）敏度高于10-9~10-12 g (ng，pg，nmol/L, pmol/L)。
免疫发光检查的项目及意义
免疫发光检查的项目及意义
免疫发光检查是一种常用的实验室检测方法，用于检测各种生物标志物。
以下是一些常见的免疫发光检查项目及其意义：
1. 甲状腺功能相关指标：如促甲状腺激素（TSH）、甲状腺素
（T4）、三碘甲状腺原氨酸（T3）等。
这些指标用于评估甲状腺的功能状态，帮助诊断甲状腺功能亢进或减退等疾病。
2. 生殖激素：如人绒毛膜促性腺激素（hCG）、促黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）等。
这些激素在生殖系统的正常功能中起着重要作用，对于评估生育能力、诊断生殖系统疾病等具有重要意义。
3. 肿瘤标志物：例如癌胚抗原（CEA）、糖类抗原15-3（CA15-3）、糖类抗原19-9（CA19-9）等。
这些标志物可以用于肿瘤的筛查、诊断、监测治疗效果和复发等。
4. 心血管疾病相关指标：如肌钙蛋白、B 型利钠肽（BNP）等。
这些指标可用于急性心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病的诊断和风险评估。
5. 自身免疫性疾病相关指标：如抗核抗体（ANA）、类风湿因子（RF）等。
这些指标对于自身免疫性疾病的诊断和监测具有重要意义。
6. 感染性疾病相关指标：例如乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体等。
这些指标可用于感染性疾病的筛查和诊断。
免疫发光检查的意义在于提供快速、准确、敏感的检测结果，帮助医生进行疾病的诊断、治疗监测和预后评估。
然而，具体的检测项目和其意义需要根据临床情况和医生的判断来确定。
在进行免疫发光检查时，医生会根据患者的症状、病史和其他相关信息选择合适的项目，并结合检查结果进行综合分析。
促卵泡生成素(FSH)检测试剂盒(胶体金免疫层析法)产品技术要求jinhuake
促卵泡生成素（FSH）检测试剂盒（胶体金免疫层析法）适用范围：本产品用于体外定性检测人尿液样本中促卵泡生成素（卵泡刺激素）的水平。
1.1 包装规格条型：50人份/盒；板型：25人份/盒。
1.2 主要组成条型产品包括50人份的检测试纸条、干燥剂和尿杯。
板型产品包括25人份的检测卡（检测卡由检测试纸条和塑料卡塞两部分组成）、干燥剂、小吸管和尿杯。
检测试纸条主要由PVC塑料底板、样品垫、聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水板组合而成，聚酯膜上喷有胶体金标记的鼠抗人促卵泡生成素单克隆抗体，硝酸纤维素膜上分别包被了鼠抗人促卵泡生成素单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体。
2.1 物理性状2.1.1 外观应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固。
2.1.2 膜条宽度应≥2.5mm。
2.1.3 液体移行速度应≥10mm/min。
2.2 临界值及重复性产品的临界值为20mIU/mL。
a)重复检测25 mIU/mL的促卵泡生成素样品液20次，结果的阳性率应≥95%。
b)重复检测15 mIU/mL的促卵泡生成素样品液20次，结果的阴性率应≥95%。
2.3 特异性分别检测300mIU/mL促黄体生成素（LH）、20uIU/mL促甲状腺素（TSH）、200mIU/mL 人绒毛膜促性腺激素（HCG）样品液，结果应均为阴性。
2.4 HOOK效应检测浓度为600mIU/mL的促卵泡生成素样品液，反应结果应为阳性。
2.5 批间差抽取三个批次的试纸，按产品临界值及重复性的检验方法检测，各批次反应结果应一致并符合临界值及重复性检测的要求。
2.6 稳定性产品于4～30℃储存有效期为24个月，取到有效期后两个月内的产品进行检测，分别检测2.1、2.2和2.4项，检测结果应符合各项目的要求。
猪促卵泡素(FSH)酶联免疫分析试剂盒 说明书
猪促卵泡素（FSH）酶联免疫分析试剂盒说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定猪血清、血浆或其它相关生物液体中促卵泡素（FSH）含量。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗FSH抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗FSH抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的FSH呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）2.标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1.0ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50mIU/ml，做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）后，分别稀释50mIU/ml，25mIU/ml，12.5mIU/ml，6.25mIU/ml，3.12 mIU/ml，1.56mIU/ml，0.78mIU/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0mIU/ml，临用前15分钟内配制。
如配制25mIU/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）50mIU/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3.样品稀释液：1×20ml。
4.检测稀释液A：1×10ml。
5.检测稀释液B：1×10ml。
6.检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7.检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B1:100稀释。
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牛促卵泡生成素(FSH)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆，细胞上清及相关液体样本中促卵泡生成素(FSH)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛促卵泡生成素(FSH)水平。
用纯化的牛促卵泡生成素(FSH)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入促卵泡生成素(FSH)，再与HRP标记的促卵泡生成素(FSH)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的促卵泡生成素(FSH)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛促卵泡生成素(FSH)浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为9 IU/L，6 IU/L ，3 IU/L，1.5 IU/L，0.75 IU/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%检测范围：0.3IU/L -10IU/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月FOR RESEARCH USE ONLYGeneric Name：Bovine Follicle-stimulating hormone (FSH) ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of FSH concentrations in Bovineserum, blood plasma, cell culture supernates and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Bovine FSH level in the sample，use Purified BovineFSH antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add FSH to wells, Combined FSH antibody which With HRP labeled , become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of FSH in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samplesto the standard curve.Materials provided with the kitSpecimen requirements1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidlyfrozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）,Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it t o the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl fro m the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density:9 IU/L,6 IU/L ,3 IU/L,1.5 IU/L, 0.75IU/L)2.add sample：Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range0.3IU/L -10IU/LStorage and validity1．Storage ： 2-8℃. 2．validity ： six months.Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.This chart for reference only。