克伦特罗胶体金试纸条复核报告

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克伦特罗胶体金快检法适用性验证

克伦特罗胶体金快检法适用性验证作者：沈彦苗德升张中堂来源：《科学与财富》2018年第32期摘要：目的验证克伦特罗胶体金快检试剂法的适用性。

方法采用LC-MS方法与克伦特罗胶体金检测市售畜产品中克伦特罗残留量，对比快检方法与实验室传统仪器检测法测定的结果，分析胶体金试剂盒的适用性。

结果通过对90批次的猪牛羊肉中克伦特罗残留量的检测，胶体金快速检测法与LC-MS测定的结果进行分析比较，结果一致性达92%。

结论克伦特罗胶体金快速检测法基本可用于畜产品中克伦特罗残留量的检测。

关键词：克伦特罗；胶体金；快检；验证民以食为天，食以安为先，食品是人类赖以生存和发展的最基本的物质条件。

随着我国经济的快速发展和人民生活水平提高，食品安全问题受到广泛的关注。

食品安全不仅关系到民生，还涉及到我国社会的长治久安。

然而近年来，我国食品频频爆发出质量问题，一些不良企业通过各种方式和渠道，生产出问题食品流通于市面，给人们的健康带来危害。

问题食品经过监管部门的抽样，到检测部门的法定方法检测，再到执法部门依据相关法规判罚，需要一定的周期时间完成，再加上传统的实验室检测方法比较繁琐，耗时，一定程度上增加了食品的检验周期，大大减弱了流程的时效性。

对监督工作带来许多不便，因此催生出了快检技术。

快检技术具有操作简单，快速，省时，省力。

目前市场上快检试剂盒，快检仪器主要用于食品的初步的快速筛查，胶体金快检法是否能够准确的筛查出阳性样品，假阳性率多少，本实验将采用实验室规定的《GB/T22286-2008动物源性食品中-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》LC-MS法对样本进行检测，检测结果与胶体金快检法进行对比验证。

1 胶体金快检法1.1 产品简介本产品用于快速检测组织样本中克伦特罗残留，适用于各类企业、检测机构、监督部门的现场快速检测。

1.2 检测限（ug/㎏=ppb）1ug/㎏1.3 适用范围猪、牛、羊肉（精瘦肉为宜）1.4.1 将去脂、绞碎的精肉组织样本4克以上，装入离心管中，拧紧管盖（勿让水进入离心管中），在90℃以上水浴锅中加热10分钟（肉熟透为准）立即取出样品渗透液。

饲料中盐酸克伦特罗的测定 ——胶体金免疫层析法

ICSDB34备案号：安徽省质量技术监督局发布前言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。

本标准由安徽省质量技术监督局批准。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。

本标准起草人：许世富、蔡东东、汤春莲、明文庆。

本标准于2008年8月1日首次发布。

饲料中盐酸克伦特罗的测定——胶体金免疫层析法1 范围本标准规定了用胶体金免疫层析法检测饲料中的盐酸克伦特罗。

本标准适用于饲料中盐酸克伦特罗的快速检测。

本标准检测限为10µg/kg。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理本试验为竞争抑制法。

将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记抗体。

硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移。

在移动的过程中，会发生相应的抗原抗体反应，并通过免疫金的颜色而显示出来。

样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA 偶联物的结合，使检测线不显颜色，结果为阳牲；反之，检测线显红色，结果为阴性。

4 试剂和材料除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合 GB/T 6682 二级水的规定。

4.1 胶体金免疫层析快速检测装置组成4.1.1 盐酸克伦特罗全抗原的偶联率为 1：10～1：20 （ BSA：CL）。

4.1.2 抗盐酸克伦特罗抗体、多抗或单杭。

多抗可以由兔或羊血清获得，效价应大于5000（间接ELISA 法），或有效抗体含量应大于0.05mg/mL；特异性应大于5000（间接抑制ELISA法）。

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制-论文

ｐｒｅｐａｒｅｄｂｙｒｅｄｕｃｉｔｏｎｏｆＨＡｕＣｈｕｓｉｎｇｔｒｉｓｏｄｉｕｍｃｉｔｒａｔｅ．Ａｎｉｔ — ＣＬｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（ＭＡｂ）ｗｅｒｅｔｈｅｎｌａｂｅｌｅｄｗｉｔｈｃｏｌｌｏｉａｌｄｇｏｌｄｔｏｏｂｔａｉｎ
ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｈｅｓｔｒｉｐ．Ｔｏｏｂｔａｉｎｈｅｔｂｅｓｔｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｏｆｔｈｅｓｔｉｒｐ，ｓｅｖｅｒａｌｃｏｎｉｔｄｉｏｎｓｗｅｒｅｏｐｔｉｍｉｚｄｅｓａｆｏｌｌｏｗｓ：ｈｅｔｉａｄｍｅｔｅｒｏｆｔｈｅｃｏｌｌｏｉａｌｄｇｏｌｄ
Ｃｌｅｎｂｕｔｅｒｏｌ
ＸＩＡＯＺｈｉ－ｌｉ，ＹＵＪｉａｎ－ｈｕａ，ＬＥＩＨｏｎｇ－ｔａｏ，ＹＡＮＧＪｉｎ－ｙｉ，ＳＵＮＹｕａｎ－ｍｉｎｇ
（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｏｄＱｕａｌｉｔｙａｎｄＳａｆｅｙｔｏｆＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｙ，ｔＧｕｎｇａｚｈｏｕ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ）

基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器

基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器张洪才1 刘国艳1,2 陈小连2 刘春燕2 叶雨丹2 1(上海交通大学农业与生物学院,上海200240) 2(上海市兽医生物技术重点实验室,上海摘要利用免疫竞争抗制原理制备检测盐酸克伦特罗的免疫纳米金试纸条,盐酸克伦特罗与CLB -BSA 复合物竞争性结合胶体金上抗体的有限位点,从而使试纸条上的检测带显色减弱或消失㊂将显色后的试纸条插入自行研制的光电型传感器的测试孔内,根据反射光的强弱计算出克伦特罗的浓度㊂结果表明:用光电传感方法检测盐酸克伦特罗的线性范围为1~10m g/L ,检出限为0.05m g/L ,回收率为85.46%~96.05%㊂此光电型传感器检测克伦特罗具有简便㊁快速㊁灵敏㊁特异性强的优点㊂关键词盐酸克伦特罗;光电型传感器;免疫胶体金试纸条;猪尿2011-10-29收稿;2011-12-31接受*E -mail:cychai88@1 引言盐酸克伦特罗,又名为瘦肉精,是一种人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂,动物食用后能显著提高瘦肉率,但同时也造成动物性食品中瘦肉精的残留,从而引起人类中毒事件的发生[1,2]㊂中国农业部在1997年就严令禁止β2-肾上腺素激动剂在动物生产中的应用,规定在动物性食品中的检出限为10m g/L ㊂目前,盐酸克伦特罗的常用检测方法主要有色谱方法[3~10]㊁免疫学方法[11,12]㊁电化学方法[13,14]和传感器法[15~17]等㊂有效的检测方法是控制盐酸克伦特罗滥用的关键之一,因此有必要研究高灵敏的快速检测方法㊂由于传统的免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗残留只能进行定性和半定量检测,但与光电型传感器相结合后,可以达到定量检测的要求[18]㊂此外,传感器检测技术还具有检测迅速㊁简便㊁容易携带㊁可实现现场检测等优点㊂目前,用此方法检测盐酸克伦特罗的残留还未见报道㊂本实验制备出了检测盐酸克伦特罗的免疫胶体金试纸条㊂由于盐酸克伦特罗会占据胶体金上抗体的位点,使得其无法和硝酸纤维素膜上固定的CLB -BSA 复合物结合,从而不产生抗原抗体复合物,而不显色或显色较浅㊂根据盐酸克伦特罗浓度的大小在试纸条上会显示出不同程度的颜色,其显色强度能通过光电型传感器的电流频率转换器转化为电信号,再经微处理器转换成反射光的强度值,建立了检测盐酸克伦特罗残留的光电型传感器的分析方法㊂2 实验部分2.1 仪器与试剂光电型传感器(上海交通大学电子信息与电气工程学院的协助下自行研制而成);台式高速离心机(北京医用离心机厂);切割机(上海本善科技有限公司);真空冷冻干燥机(上海亚翔制冷设备工程有限公司)㊂PVC 板,玻璃纤维,NC 膜购自上海金标科技有限公司㊂盐酸克伦特罗标准品(中国农业科学院上海兽医研究所惠赠);羊抗鼠二抗(Sigma 公司);抗盐酸克伦特罗抗体和CLB -BSA 偶联物(本实验室合成);聚乙二醇2000㊁聚乙烯二醇㊁脱脂奶粉㊁甘氨酸㊁牛血清白蛋白㊁氯金酸㊁柠檬酸三钠(分析纯,上海国药集团上海化学试剂公司);Tris -HCl 缓冲液(pH 7.4)为实验室配制,实验用水均为二次蒸馏水㊂2.2 免疫胶体金试纸条的制备[18]2.2.1 胶体金溶液的制备取100mL 蒸馏水倒入锥形瓶中,滴加500m L 1%氯金酸,加热到沸腾,再滴加500m L 1%柠檬酸三钠,当溶液颜色由紫红色变成红色时,再小火加热5min 即可,冷却,于4ħ冰箱保存㊂2.2.2 金标垫的制备取标记好的离心管,加入1mL Tris -HCl 缓冲液,4m L 抗体,混匀;再加入10mL 胶体金溶液,在冰浴中放置5min ,用K 2CO 3调至pH >8.5;30min 后,再加入120m L BSA ,静止5min ,分装到6个离心管内,以12000r/min 离心,产生红色沉淀;用配制好的洗涤液离心一次,将红色沉淀收集到一个离心管中;将该红色沉淀均匀滴加到玻璃纤维上,-50ħ冷冻干燥,备用㊂2.2.3 试纸条的组装为了增加CLB -BSA 偶联物和羊抗鼠二抗在NC 膜上显色的表面积,采用机械冲压打孔法在PVC 板上制成直径为0.5cm 的圆孔;在PVC 底板上装上NC 膜(5g/L 牛血清白蛋白和0.3g 甘氨酸先对其进行封阻,以消除非特异性的结合);在PVC 底板上装配吸水纸㊁金标垫和玻璃纤维;将其切成6cm ˑ0.9cm 的条子(如图1所示);在NC 膜的打孔处均匀喷上4m L 二抗和CLB -BSA 偶联物,自然晾干后备用㊂2.3 实验方法光电型传感器的硬件㊁检测原理和样机如图2所示,光从光源发出,投射到试纸条的测试区后被反射;反射光由电流频率转换器接收,并转换为电信号进行传输;经过单片机的数据处理,显示在显示器上,且电信号的强度与试纸条的颜色深浅呈反比㊂图1 免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的示意图Fig.1 Scheme for determination of clenbuterol based onimmune colloidal gold strip1.吸水纸(Hydrophilic paper);2.C 带(Control strap);3.硝酸纤维素膜(nitrocellulose (NC)membrane);4.T 带(Test strap);5.金标垫(Colloidal gold pad);6.玻璃纤维(Fiberglass);7.PVC 板(PVC plate)㊂图2 光电型传感器的检测原理和样机Fig.2 Detection principle andprototype of photoelectricsensorⅠ.原理图(Principle sketch of photoelectric sensor);Ⅱ.样机(Pro -totype the photoelectric sensor)㊂1.测试区(Testing cell);2.液晶显示屏(Liquid crystal display(LCD))㊂将1,2,4,6,8和10m g/L 盐酸克伦特罗标准溶液缓慢滴加在玻璃纤维上,依靠毛细管虹吸的作用,在T 带和C 带处显示程度深浅不同的颜色;剪切显色的试纸条,放在光电型传感器的测试区内,盖上盖子,进行测试㊂分别在0,30,60,90,120,150,180,210和240s 处对显色的试纸条进行测试,记录光电型传感器的光电信号值㊂3 结果与讨论3.1 免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的显色结果因为免疫胶体金试纸条的灵敏度和胶体金溶液中包被抗体的量密切相关,分别滴加2,4和6m L 的抗体进行检测,结果表明,在金标垫上包被2m L 抗体,检测灵敏度最高㊂因此,本研究选用包被有2m L 盐酸克伦特罗抗体的胶体金试纸条㊂将剪切好的试纸条滴加不同浓度的盐酸克伦特罗标准品进行检测㊂显色结果如图3所示,在有盐酸克伦特罗的情况下,盐酸克伦特罗先与金标垫上的单抗形成复合物,从而与NC 膜上的CLB -BSA 偶联物形成竞争,抑制CLB -BSA 偶联物捕获盐酸克伦特罗金标单抗的量,T 带较浅或消失,判断为阳性㊂相反,当无盐酸克伦特罗时,T 带颜色较深,判断为阴性㊂而控制线(C 带)应一直显色,因为二抗结合盐分析化学第40卷酸克伦特罗抗体的其它结合位点与盐酸克伦特罗的存在无关㊂随着盐酸克伦特罗浓度的增加,试纸条图3 基于免疫金试纸条测试不同浓度的盐酸克伦特罗的显色结果Fig.3 Coloration ofgold strip with dif -ferent concentrations of a.blank;b.1m g/L;c.2m g/L;d.4m g/L;e.6m g/L;f.8m g/L;g.10m g/L.在检测带上的颜色由深变浅㊂3.2 基于免疫胶体金试纸条的光电型传感器的时间-信号变化曲线为了研究恰当的时间记录光电型传感器的响应信号和测试传感器的灵敏性,不同浓度盐酸克伦特罗的响应时间和传感器的响应信号如图4所示㊂随着响应时间和盐酸克伦特罗浓度的增加,试纸条的颜色逐渐变浅,光电型传感器的响应信号值也逐渐减小㊂在150s 后,曲线基本达到平衡状态,试纸条的反射率达到最大,之后曲线变化不大,逐渐进入稳定期,所以150s 应为数据采集的最佳时间㊂3.3 基于免疫胶体金试纸条的光电型传感器检测盐酸克伦特罗的标准曲线基于免疫胶体金试纸条的光电型传感器检测盐酸克伦特罗的标准曲线如图5所示㊂回归方程为y=604.53-30.050x (r =0.996),试纸条显色后经光电型传感器显示的信号值与盐酸克伦特罗的浓度在1~10m g/L 范围内具有良好的线性关系;检出限为0.05m g/L ㊂这是由于盐酸克伦特罗与金标垫上的单抗竞争结合NC 膜上的CLB -BSA 偶联物,在T 带处显示颜色深浅不同的印迹,所以随着浓度的增加,与标准进行对比发现,试纸条的颜色逐渐变浅,传感器的信号值也将逐渐降低㊂图4 基于光电型传感方法检测不同浓度盐酸克伦特罗的时间-响应曲线Fig.4 Sensor response versus time in detection of clen -buterol with different concentrationsa.10m g/L;b.8m g/L;c.6m g/L;d.4m g/L;e.2m g/L;f.1m g/L.图5 基于光电型传感器检测盐酸克伦特罗的标准曲线Fig.5 Tandard curve for determination of clenbuterol on the photoelectric sensor3.4 传感方法的优越性为了比较本方法与其它检测盐酸克伦特罗方法的优越性㊂分别与文献报道的检测盐酸克伦特罗的方法进行比较分析㊂不同检测盐酸克伦特罗残留的方法如表1所示㊂基于免疫胶体金试纸条和光电型传感器检测盐酸克伦特罗显示出较高的灵敏性,传统的免疫胶体金试纸条只能定性和半定量检测盐酸克伦特罗,但免疫胶体金试纸条与光电型传感器相结合检测盐酸克伦特罗,能够达到定量分析的要求,并且检出限达到0.05m g/L ㊂这可能是由于在NC 膜处标记的CLB -BSA 偶联物与金标垫上的盐酸克伦特罗抗体竞争反应时,一般肉眼看不到的颜色,通过光电型传感器能够检测出信号值,从而能够达到微量检测的要求㊂第期张洪才等:基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器3.5 干扰实验和回收实验选用实际样品中可能含有的违禁兽药莱克多巴胺和沙丁胺醇作为干扰物质,在1mg/L 盐酸克伦特罗标准液中分别添加两种干扰测试液,所检测的盐酸克伦特罗的浓度差异不显著(P >0.05)㊂将上述3种溶液混合后,检测出盐酸克伦特罗的浓度差异也不显著㊂表1 用不同方法检测盐酸克伦特罗的比较分析Table 1 Comparative analysis of different types of methods for detection of clenbuterol检测方法Detection Method线性范围Linear range检测线Detection limit 文献References高效液相色谱法(HPLC)High Performance Liquid Chromatography 0.2~20g/mL 0.05g/mL [3]液-质联用法(LC -MS)Liquid chromatography -mass spectrometry 0.5~5.0mg/mL0.04mg/mL [10]气-质联用法(GC -MS)Gas chromatography -mass spectrometry 10~500m g/L 0.00252~2.02mg/L2.4m g/L 1m g/L [21][22]酶联免疫吸附法(ELISA)Enzyme linked immunosorbent assay0~10m g/kg0.5m g/kg [11]毛细管电泳-电化学联用法Capillary electrophoresis with electrochemical detection0.2~100m g/mL 0.1m g/mL [13]微流体免疫法Microfluidic immunoassay 0~5m g/L 0.088m g/L [20]电化学免疫传感器Electrochemical immunosensor0~10g/mL 0.1m g/L [16]光电型传感器Photoelectric sensor 1~10m g/L0.05m g/L -为了进一步探讨该传感器的可靠性,选用未饲喂盐酸克伦特罗的健康仔母猪的尿液(上海兽医生物技术实验室),分成5组加入2~10m g/L 的盐酸克伦特罗标准液,超声5min 后,以6000r/min 离心10min ,取其上清液,用0.45m m 滤膜过滤,收集㊁备用㊂盐酸克伦特罗的回收率为85.46%~96.05%(如表2)㊂因此,本传感器能够满足现场实际样品的检测㊂3.6 光电型传感器性能测试制作好的免疫胶体金试纸条放在光电型传表2猪尿中盐酸克伦特罗的回收率(n =5)(m g/L)(m g/L)(%)S12 1.921ʃ0.05296.05 2.8S24 3.768ʃ0.08394.20 4.3S36 5.555ʃ0.04192.58 4.8S487.139ʃ0.05789.23 5.1S5108.546ʃ0.09485.465.7感器上进行检测,可在1min 内完成㊂更换同一批次制作的试纸条,对相同浓度的盐酸克伦特罗进行检测,5次测试结果得相对标准偏差(RSD)小于3.1%㊂随机抽取5批次制作的试纸条,检测同一浓度的盐酸克伦特罗样品,其RSD <3.5%㊂因此,本实验制备的基于免疫胶体金试纸条的光电型传感仪具有检测速度快㊁特异性强等优点㊂4 结论本实验采用与传统方法不同的制备方法,以机械冲压打孔方法成功制备出检出限较低的盐酸克伦特罗试纸条,再将显色后的试纸条剪切成一定尺寸,置于光电型传感上检测㊂在1~10m g/L 范围内有良好的线性关系,检出限为0.05m g/L ㊂免疫胶体金试纸条在光电型传感器的测试在1min 内完成,可实现现场快速检测㊂R e f e r e n c e s1 P a t i e n c e JF ,R o s sK A ,B e a u l i e uA D ,M e r r i l l J ,V e s s i eG.J .A n i m .S c i .,2011,89(7):2243~22562 B r a m b i l l aG ,F i o r iM ,R i z z oB ,C r e s c e n z iV ,M a s c iG.J .C h r o m a t o g r .B ,2001,759(1):27~323 M o s t a f aG A E ,H e f n a w y M M ,E l -M a j e dA.J o u r n a l o f A O A CI n t e r n a t i o n a l ,2009,92(3):824~8294 L i C ,W uYL ,Y a n g T ,Z h a n g Y ,H u a n g -F u W G.J .C h r o m a t o g r .A ,2010,1217(50):7873~7877分析化学第40卷5 C h u r c h w e l lMI,T w a d d l eNC,M e e k e rLR,D o e r g eDR.J.C h r o m a t o g r.B,2005,825(2):134~1436J u a nC,I g u a l a d aC,M o r a g u e sF,L e o nN,M a n e s J.J.C h r o m a t o g r.A,2010,1217(39):6061~60687 K o o t s t r aPR,K u i j p e r sCJPF,W u b sK L,v a nD o o r nD,S t e r kSS,v a nG i n k e lL A,S t e p h a n y R W.A n a l.C h i m.A c t a,2005,529(1-2):75~818 W a n g L,L iY Q,Z h o uY K,Y a n g Y.C h r o m a t o g r a p h i a,2010,71(7-8):737~7399 WU Y i n-L i a n g,Y A N GT i n g,S H A NJ I-H a o,H U A N G F U W e i-G u o.C h i n e s e J.A n a l.C h e m.,2010,38(6):833~837吴银良,杨挺,单吉浩,皇甫伟国.分析化学,2010,38(6):833~83710 B l a n c aJ,M u n o zP,M o r g a d o M,M e n d e zN,A r a n d a A,R e u v e r sT,H o o g h u i s H.A n a l.C h i m.A c t a,2005, 529(1-2):199~20511 R e nXF,Z h a n g F M,C h e nFJ,Y a n g TB.F o o d.A g r.I mm u n o l,2009,20(4):333~34412 Z h e n g SL,S o n g SQ,L a nH,Q uG R,L i,RX,W uAB,Z h a n g DB.A n a l.L e t t.,2009,42(3):600~61413 W a n g W Y,Z h a n g YL,W a n g JY,S h iX,Y e JN.M e a t.S c i.,2010,85(2):302~30514 Z h a oC,J i nGP,C h e nLL,L iY,Y uB.F o o d.C h e m,2011,129(2):595~60015 G a oLJ,G a nN,H uFT,C a oY T,Z h e n g L.A d v.M a t e r.R e s.,2011,(217-218):1793~179616 L i uG,C h e nH D,P e n g HZ,S o n g SP,G a o JM,L u JX,D i n g M,L i LY,R e nSZ,Z o uZY,F a nCH.B i o s e n s.B i o e l e c t r o n.,2011,28(1):308~31317 H ePL,W a n g ZY,Z h a n g LY,Y a n g WJ.F o o d.C h e m.,2009,112(3):707~71418 L IH u a i-M i n g,L A I W e i-H u a,X U H e n g-Y i,X U B o,L U O W e i,W E IH u a,WA N G S h u i-X i n g,X I O N G Y o n g-H u a.C h i n e s e J.A n a l.C h e m.,2011,39(11):1647~1652李怀明,赖卫华,许恒毅,徐波,罗薇,魏华,王水华,熊勇华.分析化学,2011,39(11):1647~165219J I A N G Y a n-B i n,S U N G u a n-R u,WA N G H a i,Y A OS o n g-T a o,Y A N G H o n g-J u,C U I L i-L i,C A OJ i a n-R o n g,Y U L e i.C h i n e s eA n i m a lH u s b a n d r y a n dV e t e r i n a r y M e d i c i n e.,2010,37(10):109~113姜艳彬,孙冠如,王海,姚松涛,杨红菊,崔立莉,曹健荣,于雷.中国畜牧兽医,2010,37(10):109~11320 K o n g J,J i a n g L,S uX O,Q i n JH,D uY G,L i nBC.L a b.C h i p,2009,9(11):1541~154721 Z h a oL,Z h a o JA,H u a n g f u W G,W uYL.C h r o m a t o g r a p h i a,2010,72(3-4):365~36822 X I E M e n g-X i a,L I U Y u a n,J I A N G M i n.C h i n e s e J.A n a l.C h e m.,2002,30(11):1308~1311谢孟峡,刘媛,蒋敏.分析化学,2002,30(11):1308~1311AP o r t a b l eP h o t o e l e c t r i c S e n s o rB a s e do n I m m u n eC o l l o i d aS t r i p s f o rR a p i dD e t e r m i n a t i o no fC l e n b u t e r o l i nP i g U rZ HA N G H o n g-C a i1,L I U G u o-Y a n1,2,C H E N X i a o-L i a n2,L I U C h u n-Y a n2,Y EY u-D a n2,C HA IC h u n-Y a 1(S c h o o l o f A g r i c u l t u r e a n dB i o l o g y,S h a n g h a i J i a oT o n g U n i v e r s i t y,S h a n g h a i200240,C h i n a)2(S h a n g h a iK e y L a b o r a t o r y o f V e t e r i n a r y B i o-t e c h,S h a n g h a i200240,C h i n a) t I mm u n e c o l l o i d a l g o l d s t r i p s f o r t h e d e t e r m i n a t i o no f c l e n b u t e r o l(C L B)w e r e d e v e l o p e db y p r i n c i p l eo f i mm u n e c o m p e t i t i v e i n h i b i t i o n.C l e n b u t e r o l c o m p e t e s t h e s p e c i f i c a n t i b o d y c o m b i n i n g s i t e w i t h t h e c o m p o u n do f c l e n b u t e r o l a n db o v i n e s e r u ma l b u m i n(B S A),w h i c hm a k e t h e c o l o r o f t h e t e s-t i n g s t r a p a b a t e o r d i s a p p e a r.T h e s e n s i n g s y s t e m w a s e a s i l y e s t a b l i s h e db y c o n n e c t i n g t h e t e s t s t r i p s t oa p h o t o e l e c t r i c s e n s o r t h r o u g h t h e t e s t i n g c e l l a n d t h e c o l o r o f t e s t s t r i p s b e c a m e l i g h t e r a n d l i g h t e r w i t h t h e i n c r e m e n t o f t h e c o n c e n t r a t i o no f c l e n b u t e r o l.T h e r e s u l t s s h o w e dt h a t t h e r e s p o n s eo f t h e p h o t o e l e c t r i c s e n s o r t o c o n c e n t r a t i o no f c l e n b u t e r o l d i s p l a y e da l i n e a r c o r r e l a t i o no v e r a r a n g e f r o m1 t o10m g/Lw i t ha d e t e c t i o n l i m i t o f0.05m g/L,a n d t h e r e c o v e r y r e a c h e d85.46%-96.05%i n p i g u-r i n e s a m p l e s.T h e p h o t o e l e c t r i c s e n s o r b a s e d o n i mm u n e c o l l o i d a l g o l d s t r i p s f o r t h e d e t e c t i o n o f c l e n-b u t e r o l i s s i m p l e,q u i c k,a n d s p e c i f i c.K e y w o r d s C l e n b u t e r o l;P h o t o e l e c t r i c s e n s o r;I mm u n e c o l l o i d a l g o l d s t r i p;P i g u r i n e(R e c e i v e d29O c t o b e r2011;a c c e p t e d31D e c e m b e r2011)第期张洪才等:基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器。

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制姜艳彬;孙冠如;王海;姚松涛;杨红菊;崔立莉;曹健荣;于雷【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2010(037)010【摘要】研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测.以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条.如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与同相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带.经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作.【总页数】5页(P109-113)【作者】姜艳彬;孙冠如;王海;姚松涛;杨红菊;崔立莉;曹健荣;于雷【作者单位】中国动物疫病预防控制中心,农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100125;北京金豪制药股份有限公司,北京,100176;中国动物疫病预防控制中心,农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100125;北京金豪制药股份有限公司,北京,100176;中国动物疫病预防控制中心,农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100125;北京金豪制药股份有限公司,北京,100176;北京金豪制药股份有限公司,北京,100176;中国动物疫病预防控制中心,农业部畜禽产品质量监督检验测试中心,北京100125【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.基于免疫胶体金试纸条检测盐酸克伦特罗的便携式光电型传感器 [J], 张洪才;刘春燕;刘国艳;陈小连;叶雨丹;王艺如;柴春彦2.用试纸条快速检测盐酸克伦特罗的试验 [J], 宋天增;冯静;杜迎春;石国庆3.克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制 [J], 姜金庆;杨雪峰;王自良;邓瑞广;王选年;张改平4.盐酸克伦特罗快速检测试纸条 [J], 张娟敏;蒋皓;张少东5.盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制 [J], 肖治理;余建华;雷红涛;杨金易;孙远明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析

关于“动物性食品中克伦特罗(瘦肉精)残留的检测”的实验分析LINK链接猪肉是否含瘦肉精的迅速推断办法看该猪肉的脂肪(猪油)，如该猪肉在皮下就是瘦肉或仅有少量脂肪，则该猪肉就可能含有“瘦肉精(CLB)”。

含有“瘦肉精”的瘦肉外观特殊鲜红，纤维比较疏松，切成二三指宽的猪肉比较软，不能立于案，瘦肉与脂肪间有黄色液体流出，脂肪特殊薄。

而普通健康的瘦猪肉是淡红色，肉质弹性好，瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。

购买时一定要看清该猪肉是否盖有检疫印章和检疫合格证实。

一、样品迅速检测办法 1.胶体金检测卡法(1)特点①操作容易、检测速度快，尿样检测时光约5min，组织约10min。

②无需其他仪器设备。

③样品量需求少。

④适用于大量样本的迅速步筛。

⑤结果推断容易明白。

(2)推断结果①阴性:C线条显色，T线条肉眼可见，无论色彩深浅均判为阴性。

②阳性:C线条显色，T线条不显色，判为阳性。

③无效:C线条不显色，无论T线条是否显色，该试纸均判为无效。

(3)检测对象猪尿液、组织；猪饲料；猪肉制品。

(4)适用单位生殖养殖场、屠宰场，农业、贸易等主管部门。

2.酶联免疫(ELISA)法(1)检测原理测定的基础是抗原抗体反应。

微孔板包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体。

克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标志物、标准或试样溶液。

克伦特罗与竞争性酶标志物竞争克伦特罗抗体，没有与抗体衔接的克伦特罗酶标志物在洗涤步骤中除去。

将底物(过氧化尿素)和发色剂(四甲基联苯胺)加入孔中孵育，结合的标志酶将无色的发色剂转化为蓝色产物。

加入反应停止液后使色彩由蓝色改变为黄色。

在450nm处测量吸光度值，吸光度壁纸与克伦特罗浓度的自然对数成反比。

(2)试剂磷酸二氢钠、高氯酸、异丙醇、乙酸乙酯、0.1mol/L高氯酸溶液、1mol/L氢氧化钠溶液、pH=6的0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、针孔式微孔过滤膜(0.45μm，水相)、克伦特罗酶联免疫试剂盒、96孔板(12调×8孔)包被有针对克伦特罗IgG的包被抗体、克伦特罗系列标准液(最少5倍比稀释第1页共4页。

克伦特罗胶体金免疫层析试纸条的技术报告

克伦特罗胶体金免疫层析试纸条的技术报告1 胶体金的制备1.1 玻璃器皿的准备玻璃器皿表面的少量污染会干扰金颗粒的生成，一切玻璃容器应绝对清洁，用前经过酸洗，硅化。

硅化过程一般是将玻璃容器浸泡于含5％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中1min，室温干燥后蒸馏水冲洗，再干燥备用。

专用的玻璃器皿以第一次生成的胶体金稳定其表面，弃去后以双蒸馏水淋洗，可代替硅化处理。

将玻璃器皿用酸液浸泡72小时后，取出，大量自来水冲洗，洗洁精洗涤，蒸馏水浸泡24h后用去离子水冲洗三次，37℃温箱烘干后备用。

1.2 柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液在胶体金免疫层析试验中，检测信号是由于金颗粒在检测线或质控线上聚集而成，所以如果金颗粒太小就不能产生足够的颜色信号，如果太大又会遇到空间位阻问题。

空间位阻可以阻止小分子蛋白质接近金颗粒的zeta电位，例如IgG 分子(160 000 DaLtons)大约8nm，约有4nm可以与金颗粒的表面结合，其最适的标记金颗粒为40nm，而对小分子抗原来说，可以使用20nm的胶体金颗粒进行标记。

取0.01％氯金酸水溶液100mL用恒温电磁搅拌器加热至沸腾，持续搅拌的情况下加入1％柠檬酸三钠水溶液1.0mL，继续搅拌加热10min，溶液呈透亮的红色。

室温冷却，用去离子水恢复到原体积，4℃保存。

1.3 胶体金的质量鉴定1.3.1 肉眼观察用肉眼观察制备的胶体金，其颜色为酒红色、均匀度较好无杂质、透明度较高。

1.3.2 紫外扫描鉴定取冷却后的胶体金溶液进行400～600nm紫外扫描，确定最大吸收峰波长，观察最大吸收峰的峰形、峰宽。

紫外扫描的最大吸收峰波长为525nm，根据回归方程Y= 0. 4271X + 514. 56计算得到胶体金颗粒粒径为24.4nm。

由图谱可以看出最大吸收峰的峰宽较小,说明胶体金颗粒分布比较均匀1.3.3 透射电镜鉴定透射电镜下观察胶体金颗粒的大小是否均匀一致，有无椭圆形及多角形。

拍片放大后测量胶体金颗粒直径大小，取多个点计算胶体金颗粒的平均直径。

克罗特伦快速检测实验报告

克罗特伦快速检测实验报告盐酸克伦特罗 (Clenbuterol,CLB) ,又名瘦肉精,分子式为C12H18Cl2N2O•HCl,药品名为克喘素、氨哮素等,为白色或类白色的结晶粉末,无臭、味苦,易溶于水、甲醇、乙醇,微溶于丙酮、氯仿,不溶于乙醚和苯,化学性质稳定;它是一种人工合成的B-肾上腺素受体激动剂,具有扩张支气管的作用,常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病(Mersmann,1998)。

当其应用剂量达到治疗量的5~10倍时,又具有能量重分配作用,可使肌肉合成增加,脂肪沉积减少,因此将其俗称为瘦肉精,在养猪业中一些非法使用者将其作为一种生长促进剂添加到饲料中(Kuip-er,1998),用以改善胴体的品质,但同时也造成了猪肉中盐酸克伦特罗的残留。

当人们食用含有盐酸克伦特罗残留的肉品后,常常造成心动过速,低血钾,低磷酸盐血症,肌肉震颤,头晕,口干,失眠甚至于瘫痪等中毒症状,对心脏病患者更有生命危险。

国家农业部农牧发[2002]1号文5关于发布食品动物禁用的兽药及其他化合物清单的通知6中,盐酸克伦特罗被列为所有食品动物禁止使用。

实验步骤（1）使用前将待测样本溶液恢复至室温（2）取出检测卡平放，用移液枪吸取待测样品溶液100ul，垂直加于加样孔，开始计时（3）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。

阴性(-): 两条紫红色条带出现。

表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL,或不含有。

阳性(+): 检测T线无显色，则表示样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL。

无效:未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。

结果与讨论若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA偶联物)金标盐酸克伦特罗单抗复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线);测试端多余的金标盐酸克伦特罗单抗在硝酸纤维素膜上继续层析可被对照印迹羊抗鼠IgG单克隆抗体捕获形成红色的对照条带(对照线)。

胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗

胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗李超辉;陈雪岚;郭亮;许恒毅;刘文娟;赖卫华;熊勇华【摘要】建立了基于T/C比值的胶体金免疫层析法快速定量检测猪肉中克伦特罗残留的新方法.胶体金免疫层析试纸条的定量检测线性范围为0.1～1.5 ng/g,检测猪肉中克伦特罗残留的最低检测灵敏度为0.19 ng/g.比较了5种猪肉组织样本中克伦特罗的简便提取方法,其中采用0.02 mol/L,含2.8％ NaCl的HCl溶液抽提猪肉样品2次的提取方案,克伦特罗的平均回收率达到76.7％,变异系数为7.4％.实际样本加标回收实验显示,加标量为0.5、1.0、2.0及3.0 ng/g时,胶体金试纸条检测回收率分别为(60.4±12.8)％,(70.24±4.2)％,(75.9±4.9)％,(71.1±5.0)％.与传统ELISA方法比对,结果显示2种方法具有较好的相关性(R2=0.9136).以上实验结果证实,基于T/C比值法的胶体金免疫层析试纸条可用于猪肉组织样品中克伦特罗的快速及定量检测.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2013(039)004【总页数】6页(P167-172)【关键词】克伦特罗;胶体金试纸条;猪肉【作者】李超辉;陈雪岚;郭亮;许恒毅;刘文娟;赖卫华;熊勇华【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌,330047;江西师范大学,江西南昌,3110323;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌,330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌,330047;江西中德生物工程有限公司,江西南昌,330029;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌,330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌,330047【正文语种】中文克伦特罗(clenbuterol，CLE)是一种β-肾上腺素受体激动剂［1］，作为饲料添加剂用于畜牧生产，能够改变动物体内的代谢途径，促进肌肉生长，提高瘦肉率，俗称“瘦肉精”［2-3］。

半定量快速检测盐酸克伦特罗的胶体金试纸条及生产和使用方法[发明专利]

专利名称：半定量快速检测盐酸克伦特罗的胶体金试纸条及生产和使用方法
专利类型：发明专利
发明人：李文平,何湘蓉
申请号：CN02139704.X
申请日：20021022
公开号：CN1403818A
公开日：
20030319
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一步法半定量快速检测动物产品或饲料中盐酸克伦特罗的胶体金试纸条及其生产、使用方法。

用胶体金标记盐酸克伦特罗—载体蛋白偶联物，均匀喷洒在玻璃纤维纸上，将抗盐酸克伦特罗—载体蛋白抗血清呈横条状多层次固定于层析膜上，使第一条抗体浓度刚好与胶体金所标记的载体蛋白偶联物完全中和。

当检测样品为阴性时，检测试纸条只显示一条带，当检测样品中含有盐酸克伦特罗时，显示出多条带，条带越多，则样品中的盐酸克伦特罗浓度越高，因此根据条带的多少可判定待检样品中盐酸克伦特罗的含量。

整个检测过程只需5分钟，准确率高，抗干扰性强，检测灵敏度和特异性均达99％以上。

检测试剂条由底板、滤纸、玻璃纤维纸、硝酸纤维膜等制成。

申请人：李文平,何湘蓉
地址：410125 湖南省长沙市芙蓉区马坡岭省农科院内湖南农泰饲料有限公司
国籍：CN
代理机构：湖南兆弘专利事务所
代理人：彭选明
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不合格克伦特罗检验方法

不合格克伦特罗检验方法
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不合格克伦特罗的检验通常采用快速且灵敏的方法，如胶体金快速检测试纸、酶联免疫吸附测定法（ELISA）等。

其中，胶体金快速检测试纸能简便快捷地检测尿液、动物组织及饲料中的克伦特罗，灵敏度可达3-5ppb，且对多种其他药物显示阴性，避免误判。

ELISA法则基于抗原抗体反应，通过竞争结合原理测定样品中克伦特罗含量，定量更为准确，适用于猪尿中克伦特罗残留的常规检测。

这些方法能有效筛查出超出安全限值的克伦特罗，保障食品安全，防止“瘦肉精”污染的肉类流入市场，保护公众健康。

克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制

克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制姜金庆;杨雪峰;王自良;邓瑞广;王选年;张改平【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2013(044)001【摘要】The objective of this study was to develop a colloidal gold-labeled multianalysis strip assay (Multi-strip) for the simultaneous detection of clenbuterol (CL) and ractopamine (RAC residues. Hybridoma lines that secrete monoclonal antibody (mAb) against CL and RAC were filtered through cell fusion technology and their immunological traits were characterized. The colloidal gold-based immunochromatography competition method was employed to develop a Multi-strip, which consisted of a sample pad, a conjugate pad, a NC membrane containing two test lines and a control line, and an absorbent pad. The gold-labelled CL mAb and RAC mAb were sprayed onto the conjugate pad, and the test lines were separately coated with CL-OVA and RAC-BSA, 2 mm in distance. The visual detection limits of Multi-strip were 1 and 2 ng · mL-1 for CL and RAC, respectively, and the results can be judged within 5-8 min. Parallel analysis of natural positive matrices with CL and RAC showed consistent results obtained from the individual strip, ELISA and GC-MS, without false-positive or false-negative cases. This Multi-strip possesses rapidity, sensitivity, specificity and simplicity, and is suitable for on-site screening and qualitative determination.%本试验旨在研制同时检测克伦特罗(CL)和莱克多巴胺(RAC)的多残留胶体金免疫层析试纸条(Multistrip).用细胞融合技术筛选CL 和RAC杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,金标抗体竞争性膜层析技术研制Multistrip.该试纸条由样品垫、偶联垫、双检测线和质控线标记的NC膜、吸收垫等几部分构成,其中偶联垫上灌注有CL和RAC两种金标单克隆抗体,双检测线由检测抗原CL-OVA和RAC-BSA喷膜构成,间距2 mm.结果表明:多残留试纸条的CL和RAC目测检测限分别为1和2 ng·mL-1,检测时间5～8 min.基质呈阳性的真实样品用单残留试纸条、ELISA和GC-MS检测,结果一致,无假阳性或假阴性案例.该试纸条具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于现场检测和筛选.【总页数】8页(P87-94)【作者】姜金庆;杨雪峰;王自良;邓瑞广;王选年;张改平【作者单位】河南科技学院动物科学学院,新乡453003;河南省动物免疫学重点实验室,郑州453003;河南科技学院动物科学学院,新乡453003;河南科技学院动物科学学院,新乡453003;河南省动物免疫学重点实验室,郑州453003;河南省动物免疫学重点实验室,郑州453003;河南省动物免疫学重点实验室,郑州453003【正文语种】中文【中图分类】S859.84【相关文献】1.胶体金免疫层析试纸条定量检测猪尿中克伦特罗 [J], 李超辉;罗薇;徐波;刘文娟;许恒毅;熊勇华2.基于荧光硅球的克伦特罗快速定量免疫层析试纸条的研制 [J], 李怀明;赖卫华;许恒毅;徐波;罗薇;魏华;王水兴;熊勇华3.盐酸克伦特罗与莱克多巴胺联检速测卡的研制 [J], 罗奕铭4.牛β-乳球蛋白胶体金免疫层析试纸条的研制及检测应用 [J], 薛海燕;吴剑;张颖;宋宏新;贺宝元5.非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条的研制 [J], 邬旭龙;刘波;王印;张鹏飞;江地科;肖璐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

胶体金免疫层析试纸条定量检测猪尿中克伦特罗

胶体金免疫层析试纸条定量检测猪尿中克伦特罗李超辉;罗薇;徐波;刘文娟;许恒毅;熊勇华【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2013(034)012【摘要】目的:建立胶体金免疫层析试纸条快速、定量检测尿样中克伦特罗的方法.方法:采用正交设计获得克伦特罗胶体金试纸条最佳工艺条件,建立T/C比值法定量检测尿样中克伦特罗残留.结果:胶体金免疫层析试纸条检测尿样中克伦特罗的最低检测限0.22ng/mL;当尿液中克伦特罗质量浓度在0.1～2.0ng/mL范围内,胶体金免疫层析试纸条具有较好的线性关系且50％抑制质量浓度(IC50)为0.36ng/mL;加标回收实验结果表明,阴性尿样分别添加0.5、1.0、1.5ng/mL克伦特罗,试纸条检测的平均回收率为(102.4±7.8)％、(96.5±6.8)％以及(103.3±7.2)％.结论:成功建立了基于胶体金免疫层析试纸条定量检测尿样中克伦特罗的方法.【总页数】5页(P114-118)【作者】李超辉;罗薇;徐波;刘文娟;许恒毅;熊勇华【作者单位】南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学中德联合研究院,江西南昌 330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学中德联合研究院,江西南昌 330047;江西中德生物工程有限公司,江西南昌 330029;江西中德生物工程有限公司,江西南昌 330029;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学食品科学与技术国家重点实验室,江西南昌 330047;南昌大学中德联合研究院,江西南昌 330047【正文语种】中文【中图分类】TS207.3【相关文献】1.胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗 [J], 李超辉;陈雪岚;郭亮;许恒毅;刘文娟;赖卫华;熊勇华2.乳胶免疫层析法定量检测猪尿液中的盐酸克伦特罗 [J], 管笛;魏颖;王旗;李俊博;武会娟3.多枝状胶体金免疫层析试纸条定量检测猪尿中沙丁胺醇 [J], 吴雨豪;刘文娟;武燕华;周耀锋;熊勇华4.应用酶联免疫吸附法(ELISA)结合胶体金试纸法快速筛选猪尿中的盐酸克伦特罗残留 [J], 刘子芝;尹望中;杜永平;阳积文5.对胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗的几点分析 [J], 杨旭因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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《克伦特罗快速检测试纸条-胶体金免疫试纸法》
复核实验报告
受贵州测正生物技术有限公司的委托，对其所研制的克伦特罗快速检测试纸条进行复核。

复核内容包括胶体金试纸条的检测限、假阴性率、假阳性率及与仪器方法的比较。

1 材料和方法
1.1 材料
克伦特罗快速检测试纸条，贵州测正生物技术有限公司研制。

1.2 试纸条处理样本方法及检测步骤
1.2.1 样本前处理方法
猪肉样本前处理方法：
（1）取已去脂肪的组织样本于均质器中均质1min（10000rpm）；
（2）称取5.0±0.05g 匀浆好的组织样本至10ml 聚苯乙烯离心管中；
（3）放入80℃水浴锅中水浴10min 后取出冷却至室温，待检。

1.2.2 检测步骤
取出所需数目的试纸条，并做好标记。

用微量移液器吸取60μL样本液于加样孔中，液体流动时开始计时，反应5-10min，判读结果。

2 结果与讨论
2.1 勤邦胶体金试纸条检测下限
取空白猪肉样品20份，分别添加克伦特罗标准品至3.0mg/ kg、5.0mg/ kg，按照贵州测正生物技术有限公司说明书方法进行前处理后，用试纸条进行检测，每个浓度重复测定5次，结果见表1。

表1 试纸条检测限
样本添加浓度/(ug/kg) 检测结果（n=20）
猪肉0 全为阴性
3.0 全为阳性
5.0 全为阳性
用试纸条检测空白猪肉样品各20份，结果均为质控线和检测线都显色，呈阴性；检测添加3.0ug/kg、5.0ug/kg克伦特罗标准品的猪肉样品各20份，结果均为质控线显色而检测线不显色，呈阳性。

结论为：当样本中克伦特罗残留量高于或等于3.0ug/kg时，试纸条质控线显色而检测线不显色，呈阳性。

由此可知，试纸条检测限为3.0ug/kg。

2.2 假阴性率、假阳性率
取已知克伦特罗残留量小于 3.0ug/kg的阴性猪肉样品各50份，残留量大于或等于3.0ug/kg的阳性猪肉样品各50份，阴性样品编号分别为1－50号，阳性样品编号分别为51－100号，按照贵州测正生物技术有限公司说明书方法进行前处理后，用试纸条进行检测，判定试纸条的假阴性率和假阳性率。

结果见表2。

表2 试纸条的假阴性率和假阳性率
结论为：干猪肉样品阴性符合率为100%，假阳性率为0，阳性符合率为100%，假阴性率为0；
由此可知，试纸条假阳性率为0，假阴性率为0。

2.3 与仪器方法比较
取猪肉样品各20份，样品编号分别为1－20号，分别用本试纸条和仪器方法进行检测，仪器方法依照《GB/T 23379-2009 猪肉中克伦特罗残留的测定高效液相色谱法》测定。

表3 试纸条与仪器方法的比较
本试纸条对猪肉样品的最低检测限为3.0ug/kg，高于3.0ug/kg为阳性，用“+”表示，低于3.0ug/kg为阴性，用“－”表示，液相色谱-串联质谱法对样品的检测低于3.0ug/kg用“*”表示。

结论为：本试纸条检测结果与仪器检测结果阳性样品符合率为100%。

3 结论
本实验复核了动物猪肉中克伦特罗残留的胶体金试纸条测定法，复核内容包括胶体金试纸条的检测限、假阴性率、假阳性率及与仪器方法比较。

复核结果表明，试纸条的检测限为3.0ug/kg。

试纸条的阳性样品符合率为100%，阴性样品符合率大于95%，假阳性率小于5%。

本试纸条检测结果与仪器检测结果阳性样品符合率为100%。

复核实验结果表明，贵州测正生物技术有限公司研制的克伦特罗胶体金检测试纸条检测方法简单、方便、迅速，可用于动物猪肉中克伦特罗残留的筛选。

复核单位：贵州省某某检验测试中心
复核时间：2019.10.15。