《EBV在CAEBV中克隆起源》的翻译
北师大版高中英语选择性必修第三册Unit9 Lesson 1 课文中英文对照
北师大版高中英语新教材(选择性必修第三册)课文Lesson 1 To Clone or not to Clone?第一课克隆还是不克隆Cloning is the process of making an exact copy of a plant or animal and developing it either naturally or artificially. Natural cloning has been going on for generations. For example, gardeners have been using a form of cloning when they take a cutting from a plant and place it in a suitable medium, such as soil. Another example of natural cloning is identical twins, who are produced from the same egg.克隆是通过自然或人为的方式，对植物或动物进行精确复制、培育的过程。
自然克隆由来已久。
例如，园丁们从植物上截取一段，放在合适的培养基中(例如土壤)，就是一种克隆。
自然克隆的另一个例子是同卵双胞胎，它们是由同一个卵子受精产生的。
For years, there had been attempts to clone animals artificially. The first successfully cloned animal was a sheep named Dolly in 1996. At first, Dolly grew normally, but later she developed an illness that is more normally found in much older animals. She lived for six and a half years, only half the life of the sheep from which she was cloned. After Dolly, scientists have cloned more than 20 mammal species, including camels, cattle, deer, dogs, goats and mice. However, they have found a similar pattern of health problems with these other species as well. This has led to questions such as, “Will this be a major issue for all cloned animals?” “Will it continue to happen forever?”.多年来，人们一直在尝试人工克隆动物。
人教版八年级上册：《奇妙的克隆》课文原文
人教版八年级上册：《奇妙的克隆》课文原文克隆是什么一个细菌经过20分钟左右就可一分为二；一根葡萄枝切成十段就可能变成十株葡萄；仙人掌切成几块，每块落地就生根；一株草莓依靠它沿地“爬走”的匍匐茎，一年内就能长出数百株草莓苗……凡此种种，都是生物靠自身的一分为二或自身的一小部分的扩大来繁衍后代，这就是无性繁殖。
无性繁殖的英文名称叫“Clone”，音译为“克隆”。
实际上，英文的“Clone”起源于希腊文“Klone”，原意是用“嫩枝”或“插条”繁殖。
时至今日，“克隆”的含义已不仅仅是“无性繁殖”，凡来自一个祖先，无性繁殖出的一群个体，也叫“克隆”。
这种来自一个祖先的无性繁殖的后代群体也叫“无性繁殖系”，简称无性系。
自然界的许多动物，在正常情况下都是依靠父方产生的雄性细胞(精子)与母方产生的雌性细胞(卵子)融合(受精)成受精卵(合子)，再由受精卵经过一系列细胞分裂长成胚胎，最终形成新的个体。
这种依靠父母双方提供性细胞、并经两性细胞融合产生后代的繁殖方法就叫有性繁殖。
但是，如果我们用外科手术将一个胚胎分割成两块、四块、八块……最后通过特殊的方法使一个胚胎长成两个、四个、八个……生物体，这些生物体就是克隆个体。
而这两个、四个、八个……个体就叫做无性繁殖系(也叫克隆)。
可以这样说，关于克隆的设想，我国明代的大作家吴承恩已有精彩的描述孙悟空经常在紧要关头拔一把猴毛变出一大群猴子，猴毛变猴就是克隆猴。
克隆鲫鱼出世前后1979年春，中国科学院武汉水生生物研究所的科学家，用鲫鱼囊胚期的细胞进行人工培养，经过385天59代连续传代培养后，用直径10微米左右的玻璃管在显微镜下从培养细胞中吸出细胞核。
与此同时，除去鲫鱼卵细胞的核，让卵细胞留出空间做好接纳囊胚细胞核的准备。
一切准备就绪后，把玻璃管吸出的核移放到空出位置的鲫鱼卵细胞内。
得到了囊胚细胞核的卵细胞在人工培养下大部分夭亡了。
在189个这种换核卵细胞中，只有两个孵化出了鱼苗，而最终只有一条幼鱼渡过难关，经过80多天培养后长成8厘米长的鲫鱼。
儿童慢性活动性EB病毒感染诊疗规范(2021年版)
儿童慢性活动性EB病毒感染诊疗规范(2021年版)一、概述慢性活动性EB病毒感染（chronic active Epstein-Barr virus infection, CAEBV）是EBV感染T细胞或NK细胞引起的淋巴增殖性疾病，2016年WHO将CAEBV分类为EBV相关T或NK细胞淋巴增殖性疾病（EBV-positive T- orNK-lymphoproliferative diseases，EBV-T/NK-LPD）。
CAEBV 的发病机制并不完全清楚，机体的免疫功能缺陷或病毒基因组片段缺失导致机体的免疫系统不能控制EBV在体内的活动是可能的发病机制。
CAEBV临床表现有两个特点：系统性炎症表现和肿瘤性增生表现。
EBV相关噬血细胞综合征（hemophagocytic lymphohistiocytosis，HLH）即系统性炎症的重要表现。
CAEBV在疾病的发展过程中有可能最终转化为EBV相关淋巴瘤。
被EBV感染的T或NK细胞浸润组织脏器导致多个系统和脏器损害，浸润血管并继发免疫反应导致血管炎的发生。
种痘样水疱病（hydroa vacciniforme，HV）和重度蚊虫叮咬过敏（severe mosquito bite allergy，sMBA）是两种典型的CAEBV引起的皮肤损害。
二、适用范围符合下述CAEBV诊断标准的患儿。
三、诊断（一）临床表现1.CAEBV的临床表现多种多样，其主要特征是传染性单核细胞增多症（infectious mononucleosis, IM）样症状持续或反复存在。
主要表现为发热、咽峡炎、肝、脾、淋巴结肿大、皮疹等。
2.血液系统：白细胞减低（或增高）、贫血或血小板减少、肝脾淋巴结肿大。
3.消化系统：腹泻、消化道溃疡、出血、肝功损害、黄疸。
4.呼吸系统：肺间质病变为主，可表现为咳嗽、气促、呼吸困难，严重时可出现浆膜腔积液。
5.皮肤黏膜：严重蚊虫叮咬过敏(sMBA)和种痘样水疱病(HV)，口唇或咽部疱疹。
EB病毒感染[材料浅析]
![EB病毒感染[材料浅析]](https://img.taocdn.com/s3/m/2acb7d75f8c75fbfc67db277.png)
重点资料
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五、实验室检查(一般检查)
(5)影像学检查：X线胸片检查可见间质性改变、胸腔积液。腹部B超可 发现腹腔积液、胆囊壁增厚和肾脏增大。头颅CT、磁共振表现为 陈旧性或活动性感染灶，有脑实质出血、萎缩、水肿，白质和灰 质有局灶性损害，髓鞘形成障碍和脑实质钙化等表现。
重点资料
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五、EBV所致疾病谱
一 ) 急性EB病毒感染 唯一由病毒直接引起的疾病。儿童
多见，重症预后不佳，急性起病，病程1月内，主要包括： 1 传染性单核细胞增多症（infectious mononucleosis, IM） IM+噬血淋巴细胞增生症 (EBV+HLH)，重症IM, 爆发性IM, 致死性
EBV核抗原（EBNA） 早期抗原（EA），
膜抗原（MA）
衣壳抗原（VCA），
淋巴细胞识别膜抗原(LYDMA）
人体感染EBV后能诱生抗EBNA抗体，抗EA抗体，抗VCA抗 体及抗MA抗体。
抗MA抗原的抗体能中和EBV。
上述体液免疫系统能阻止外源性病毒感染，却不能消灭病毒的 潜伏感染。
细胞免疫(如T淋巴细胞的细胞毒反应)对病毒活化的“监视” 和清除转化的B淋细胞起关键作用。
(2)肝功能：转氨酶升高(90％以上)。其他较常见的有高胆红素血症 (主要是间接胆红素升高为主)、白蛋白降低、高甘油三酯血症。
(3)凝血功能：有凝血功能障碍时表现为PT延长、APTT延长、纤维蛋 白原下降、D-二聚体升高等。
(4)骨髓检查：多数骨髓象正常。如并发HLH，有明显组织细胞增多伴 噬血现象。
lymphoproliferative disorders, EBV+LPD） 发病3月以上 系统性表现，多器官受损并渐加重 包括：
儿童EB病毒感染疾病的诊断指南
CAEBV临床特点：
CAEBV的临床表现多种多样;主要有： 1. 发热、肝脏肿大、脾脏肿大、肝功能异常、血小板减少症、贫血、淋
EBV-HLH可以发生在原发性EBV感染时期和既往EBV感染再激活时期;因 此;EBV-HLH患者血清中EBV抗体反应呈多种反应类型;要结合病史具体分析 &Imashuku报道94例EBV-HLH患者;60例患者血清EBV抗体呈VCA-IgM 阴性的既往EBV感染;34例患者为VCA-IgM／EADR-IgG阳性的原发感染和 既往EBV感染再激活&
在CAEBV患者;血清EBV抗体反应异常&1988年Straus提出的CAEBV诊断 标准中;抗VCA-IgG≥l:5120;抗EA-IgG≥1:640或EBNA-IgG＜1:2阴性&现 有 研 究 显 示 ; 许 多 CAEBV 腐 例 ; 血 清 EBV 抗 体 不 能 达 到 上 述 标 准 ; 2005 年 Okano等提出CAEBV患者抗EBV抗体滴度升高为;抗VCA-IgG≥l:640和抗 EA-IgG≥1:160;同时抗VCA-IgA和或EA-IgA阳性&
②进行腹部体格检查时动作要轻柔& ③注意处理便秘& ④IM患儿应尽量少用阿斯匹林降温;因其可能诱发脾破裂及血小极减少 &
慢性活动性EBV感染CAEBV
慢性活动性EBV感染CAEBV
原发感染后EBV进入潜伏感染状态;机体保持健康或亚临床状态&
少数无明显免疫缺陷的个体;原发EBV感染后病毒持续活动性复制、不进 入潜伏感染状态;或处于潜伏感染状态下的EBV可再次激活并且大量复制、 机体再次进入病理状态;表现为IM症状持续存在或退而复现;伴发多脏器损 害或间质性肺炎、视网膜眼炎等严重并发症;称为CAEBV&
儿童主要非肿瘤性EB病毒感染相关疾病的诊断和治疗原则建议
Ⅱ．实验室指标 （１）抗ＥＢＶ．ＶＣＡ．ＩｇＭ和抗ＥＢＶ—ＶＣＡ－ＩｇＧ抗体阳性，且抗ＥＢＶ－ＮＡ— ＩｇＧ阴性：
（２）抗ＥＢＶ．ＶＣＡ．ＩｇＭ阴性，但抗ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＧ抗体阳性，且为低 亲和力抗体；
——、ＩＭ
（一）概念 ＩＭ由原发性ＥＢＶ感染所致，其典型临床“三联
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０５７８一ｌ ３ １０．２０１６．０８．００２ 通信作者：申昆玲，１０００４５首都医科大学附属北京儿童医院呼 吸科，Ｅｍａｉｌ：ｋｕｎｌｉｎｇｓｈｅｎｌ７＠１６３．ｃｏｎ；俞蕙，２０１１０２上海．复旦大学 附属儿科医院感染科，Ｅｍａｉｌ：ｙｕｈｕｉ４７５６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
样水疱及蚊虫过敏）和心血管并发症（包括动脉瘤和心瓣膜病）等 Ⅱ．ＥＢＶ感染及引起组织病理损害的证据，满足下列条件之一
（】）血清ＥＢＶ抗体滴度异常增高，包括抗ＶＣＡ—ＩｇＧ≥１：６４０或抗ＥＡ—ＩｇＧ≥ｌ：１６０，ＶＣＡ．ＩｇＡ和（或）ＥＡ．ＩｇＡ阳性； （２）ＰＢＭＣ中ＥＢＶ－ＤＮＡ水平高于ｌ×１０２ ５拷贝／¨ｇ ＤＮＡ，或血清、血浆ＥＢＶ．ＤＮＡ阳性； （３）受累组织中ＥＢＶ—ＥＢＥＲｓ原位杂交或ＥＢＶ—ＬＭＰＩ免疫组织化学染色阳性； （４）Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交在组织或外周血细胞中检测出ＥＢＶ．ＤＮＡ Ⅲ．排除目前已知自身免疫性疾病、肿瘤性疾病以及免疫缺陷性疾病所致的上述临床表现
（３）双份血清抗ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＧ抗体滴度４倍以上升高； （４）外周血异型淋巴细胞比例ｉ＞０．１０和（或）淋巴细胞增多≥
５．０×１０９／Ｌ
注：ＩＭ：传染性单核细胞增多症；ＥＢＶ：ＥＢ病毒；ＶＣＡ：衣壳抗原； ＮＡ：核抗原
课文翻译
Unit2 克隆：它将把我们引向何方？克隆一直与我们同在，而如今它还要持续下去。
这是一种用来生产与原型完全相同的动植物的方法。
当园艺师从生长着的植物上剪下枝条来培植新植物时，就会产生这种现象。
这种现象也发生在动物身上，从同一个原生卵子产生性别和相貌相同的双胞胎也是克隆。
实际上，这些都是自然克隆现象。
克隆技术有两大用途。
第一，园艺师一直用它生产大量的供商用的植物；第二，它在对新植物物种的研究以及对动物的医学研究方面都是很有价值的。
克隆植物简单，但克隆动物就比较复杂了，是一项很难完成的任务。
克隆哺乳动物的多次尝试都失败了。
但是，科学家的决心和耐心最终得到了回报，这就是1996年具有突破性的克隆羊“多莉”的诞生。
它的程序如下图所示：1．母羊(A)提供一个卵细胞。
2．在卵细胞中取出细胞核。
3．卵细胞准备接受新的细胞核。
4．母羊(B)提供一个供克隆的躯干细胞。
该细胞核应包含生产一头新羊所需要的全部基因。
5．取出该细胞的细胞核。
6．用电把母羊(B)的躯干细胞核和母羊(A)的卵细胞结合起来。
7．细胞分裂并生长成胚胎。
8．把胚胎植入另外一头母羊(C)体内，母羊(C)就是克隆羊的代孕者。
9．这头小羔羊就是母羊(B)所提，供的细胞核克隆而成的。
一方面，整个科学界都在关注着首例成功的克隆动物多莉羊的成长¨多莉看来是在正常地成长着，这很令人鼓舞。
接着传来了多莉病重的坏消息。
研究克隆的科学家发现多莉得的病更容易发生在年老的羊身上．这让他们很沮丧。
多莉总共只存活了六年半，这是它的原型羊寿命的一半。
可悲的是，同样无法控制的命运也在影响着其他物种，如克隆鼠。
科学家的脑海里产生的问题是：“这是不是所有克隆动物的一个主要困难呢？这种现象会不会永远发生？如果改进程序，问题会不会解决？另一方面，多莉的出生引起了一阵强烈的反对，对，对媒体和公众的想象力也产生了巨大的影响。
它引起了争议，因为它突然打开了人们的眼界，看到了有可能：用克隆技术来治疗重病，甚至克隆出人类。
英语选修八小课文及翻译第二单元
Unit2 THE RETURN OF THE DINOSAURS? 恐龙的回归？The possibility of cloning fierce and extinct wild animals has always excited film makers. 克隆凶猛和灭绝的野生动物的可能性一直使电影制片商感到兴奋。
And they are not the only ones! 然而他们并不是唯一对此感到兴奋的人。
The popularity of films such as Jurassic Park, in which a scientist clones several kinds of extinct dinosaurs, proves how the idea struck a mixture of fear and excitement into people's hearts.在《侏罗纪公园》这部影片中，有一位科学家克隆了好几种不同的绝种恐龙。
类似这样的电影很受欢迎，证明了这一想法使人们感到既兴奋又恐惧。
But in fact we are a long way from being able to clone extinct animals.但事实上，想要克隆绝种动物，我们还要很长的路程要走。
Scientists are still experimenting with cloning mammals.科学家们现在还在进行克隆哺乳动物实验，This is because the cloning of mammals is still a new science and its story only began seriously in the 1950s as this list shows:这是因为克隆哺乳动物仍然还是一门新的科学，它是从20世纪50年代才开始进行认真研究的，如下表所示：1950s cloning of frogs 1996 first clone of a mammal: Dolly the sheep 20世纪50年代：克隆青蛙1966年：首次克隆哺乳动物(多莉)1970s research using the embryos of mice 2000 cow gave birth to a bison20世纪70年代：用老鼠胚胎进行研究2000年：母牛生野牛1979 work on embryos of sheep and mice 2001 China's first cloned twin calves1979年：对羊和老鼠的胚胎进行研究2001年：中国首次克隆出双胞胎小牛1981 first experimental clones of mice 2002 first cloned cats1981年：首次对老鼠进行实验性的克隆2002年：首次克隆猫1983 first experimental clones of cows 2005 first cloned dog1983年：首次对母牛进行实验性的克隆2001年：首次克隆狗……From time to time people suggest that extinct animals like dinosaurs, can possibly be brought back to life through cloning.不时地会有人提议，克隆技术将有可能使地球上已经消失的动物（如恐龙）复活。
慢性活动性EB病毒感染
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一、EBV 概述
在儿童，非肿瘤性EBV感染疾病主要包括： ① 传染性单核细胞增多症（infectious mononucleosis, IM） ② 慢 性 活 动 性 EBV 感 染 （ chronic active Epstein-Barr virus
Okano等2005年提出了CAEBV的诊断建议指南（日本）：
(1)持续或间断IM样症状
(2)异常的EBV抗体滴度，抗VCA和抗EA的抗体滴度升高和(或)受累组织和外 周血中检测到EBV基因组的升高
(3)慢性疾病无法用其他疾病解释的。
诊断CAEBV必须满足上述所有指标，并且在疾病过程中可以出现噬血淋巴组 织细胞增生症、T／NK淋巴增殖性疾病或淋巴瘤，某些患者表现为皮肤 损害。指南中不再强调病程大于6个月。指出抗EBV抗体(抗VCA和抗EA) 增高，但VCA-IgG≥l：640和EA-IgG>1：160即可，同时推荐了检测组 织、外周血中EBV-DNA、RNA和组织病理学、免疫学等实验室方法
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三、病因以及发病机制
CAEBV的病因目前尚不清楚。异常的病毒复制和受
EBV感染细胞的偏离正常轨迹的增生可能是该病的双
重病因。
1. 病毒本身
2. 机体免疫 CAEBV患者EBV特异性CTL的功能是下降 的
3. EBV感染淋巴细胞的克隆性
4. EBV感染的细胞类型 CAEBV的发病关键是EBV感染T
(2)在活检组织中(肝脏、淋巴结和脑等)原位杂交检测含EBV编码小 RNA的细胞(EBERs)，即EBER-l阳性细胞
CAEBV
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病毒学检查
EBV血清学抗体检测 以往的CAEBV诊断标准强调EBV 相关 抗体滴度的异常, 但部分CAEBV患儿抗VCA及抗 EA抗体并 不升高 , 可能与机体对 EBV 特异性免疫应答存在某些缺陷 有关 ; 且因免疫荧光试验部分取决于荧光显微镜的质量和 试剂的来源 , 故不同实验室测得的抗体滴度可比性不高 , 目前认为抗体滴度改变并非诊断CAEBV必要条件。 EBV-DNA、RNA检测 (1) 荧光定量PCR 检测外周血或脑脊液中EBV-DNA载量拷贝 数。EBV-DNA载量拷贝数在 CAEBV患者外周血中可明显升 高 (2) 在活检组织中( 肝脏、淋巴结和脑等 ) 应用原位杂交技术 检测含 EBV 编码小 RNA的细胞 (EBERs), 即EBER-l阳性细胞。
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实验室检查
1、外周血象 大部分患者外周血常有一系或多系减少, 其中以血红蛋白和 血小板减少多见 , 少部分患者白细胞和血小板亦会升高 , 而合并 HLH 时可发展为全血细胞减少。 2、肝功能 血清转氨酶升高可达 90 ％以上。其他较常见的有高胆红素血 症( 主要是间接胆红素升高为主)、白蛋白降低、高甘油三酯血症。 3、凝血功能 主要表现为凝血酶原时间延长、部分凝血活酶时间延长、 纤维蛋白原下降、D-二聚体升高等。 4、骨髓检查 多数病例骨髓象正常 , 少数表现为血细胞减少。如并发噬 血细胞综合征 , 活动期骨髓中有明显组织细胞增多伴噬血现象 , 但无 恶变证据。 5、影像学检查 X线胸片检查部分病例可见肺间质性改变、胸腔积液。腹 部B 超部分病例可发现腹腔积液、胆囊壁增厚和肾脏增大。头颅CT、 磁共振部分病例可表现为陈旧性或活动性感染灶, 有脑实质出血、萎 缩、水肿,白质和灰质有局灶性损害, 髓鞘形成障碍和脑实质钙化等表 现。 6、组织病理学检查 针对受累器官( 尤其是淋巴结和肝脏) 进行组织病理 学检查非常重要, 可除外恶性肿瘤, 还可以找到病原体感染的证据。
beccl
2003年2月14日，多莉因肺部感染无法 治愈而死亡，“享年”不足7岁。肺部感染 是11-12岁的老年羊的常见病。 1999年，法国全国农业研究所的克隆牛 犊出生一月后死亡。尸体解剖发现其脾 脏、胸腺等组织未正常发育。
1998年7月五日，日本石川县畜产综合 中心一头代孕母牛产下两头克隆牛后， 于次日下午停止心跳而猝死。 克隆动物的胚胎常在母体怀孕期死亡。 代孕母体子宫容易病变。出生的也有诸 多致命毛病。 自然繁殖情况下，动物胚胎出现基因正 常的比例不足1%，而克隆繁殖则超过40%
相关背景知识
什么是克隆人？ 有性生殖和无性生殖 植物的克隆 细胞的全能性 动物细胞核的全能性
生殖性克隆（克隆人）
人体克隆技术
治疗性克隆（克隆胚胎）
讨论1
我们能克隆出爱因斯坦或者希特勒 吗？
讨论2
克隆人会给我们带来哪些好处？
讨论3
1.克隆人是真正意义上的人吗? 2.克隆人会自卑吗?我们该如何看待 克隆人?
讨论4
克隆人和被克隆者（亲本细胞核供 体）之间应该是什么关系呢？是亲 子关系还是孪生兄弟或姐妹？ 如果一个人的父母的体细胞在生前 得以保存，父母亡故后小辈将其体 细胞取出克隆，此人与其父母的克 隆人又是怎样的关系？
讨论4
你觉得生命能通过克隆这种方式制 造出来吗? 你赞成还是反对克隆人？给维克写了 一本名为《克隆人》的书，书中描写 到：科学家将一富翁的体细胞核移植 到一枚去核的受精卵中，在体外发育 到胚胎期时将其移植到女人子宫中， 代孕母亲经过足月的怀孕，终于产下 一健康男婴 ，即富翁的复制品、克隆。
1996年，克隆绵羊多莉出世，随后出 现了克隆牛、克隆猪等，人们把目光聚 焦在了克隆人身上。 2001年2月5日，意大利的塞韦里诺.安 蒂诺里宣布开始克隆人。随后，陆续传 来要进行克隆人实验的消息。 克隆人真的要来了吗？究竟该不该克 隆人？
克隆
克隆是英语单词clone的音译，clone源于希腊 klone，原意是指幼苗或嫩枝，以无性繁殖或营养繁 殖的方式培育植物，如杆插和嫁接。 如今，克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖， 以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体 组成的种群。克隆也可以理解为复制、拷贝，就是 从原型中产生出同样的复制品，它的外表及遗传基 因与原型完全相同。 1997年2月，绵羊“多利”诞生的消息披露，立即引 起全世界的关注，这头由英国生物学家通过克隆技 术培育的克隆绵羊，意味着人类可以利用动物身上 的一个体细胞，产生出与这个动物完全相同的生命 体，打破了千古不变的自然规律。
The cons of clone
(1) 生态层面，克隆技术导致的基因复制，会威胁基因多 样性的保持，生物的演化将出现一个逆向的颠倒过程， 即由复杂走向简单，这对生物的生存是极为不利的。 (2) 文化层面，克隆人是对自然生殖的替代和否定，打破 了生物演进的自律性，带有典型的反自然性质。与当 今正在兴起的祟尚天人合一、回归自然的基本文化趋 向相悖。三是哲学层面，通过克隆技术实现人的自我 复制和自我再现之后，可能导致人的身心关系的紊乱。 人的不可重复性和不可替代性的个性规定因大量复制 而丧失了唯一性，丧失了自我及其个性特征的自然基 础和生物学前提。
什 么 东 西 可 以 克 隆
有生命的都可以克隆
The pros of clone
（1）培育优良畜种和生产实验动物； （2）生产转基因动物； （3）生产人胚胎干细胞用于细胞和组织替代疗法； （4）复制濒危的动物物种，保存和传播动物物种资源。 在不久的将来，克隆技术将可以用来治疗糖尿病、中风、癌症、 心脏病以及诸如帕金森综合症等精神疾病，并极大改变现有的器官 移植理论和治疗手段，给人类带来福音。然而，克隆技术也存在着 一些弊端。在理论上，克隆技术还很不成熟；在实践中，克隆动物 的成功率还很低，生出的部分个体表现出生理或免疫缺陷，而且动 物的残废率相当高并伴有早衰现象等。此外，克隆技术（尤其是人 胚胎方面的应用）对伦理道德的冲击和公众对词的强烈反应也限制 了克隆技术的应用。但几年来克隆技术的发展表明，世界各科技大 国都不甘落后，谁也没有放弃克隆技术研究。我认为，克隆技术的 巨大理论意义和实用价值在于它促使科学家们加快了研究的步伐， 使克隆技术的研究与开发进入一个高潮，从而更好地为人类造福。
儿童EBV感染及相关疾病的诊断(讲)
Historical milestones of CAEBV
1948, Issacs: prolonged fever, malaise, lymphadenopathy, hepatosplenomegaly
1975, Horwitz et al:such clinical manifestations with mildly or moderately high or positive IgG against VCA and EA
阴性 3、也有的病人CA-IgM持续几个月阳性
抗体亲合力检测
机体在受到病原体入侵时首先产生低亲 合力抗体，随感染的继续和进展，抗体 亲合力升高。因此，低亲合力抗体的检 出提示原发性急性感染。
原发EBV感染，100％的病人在第一个月 内可感染后的免疫抗体反应
Hepatosplenomegaly
Eyelid edema
Palatal petechiae
Atypical lymphocytes
慢性活动性EBV感染
CAEBV is characterized by severe, chronic or recurrent infectious mononucleosis-like symptoms after a primary EBV infection, and has a high morbidity and mortality from hepatic failure, lymphoma, sepsis, or hemophagocytic syndrome.
嗜异白细胞凝集抗体 特异性EBV抗原的抗体检测:衣壳抗原
（CA）－IgM 荧光定量PCR检测外周血中EBV-DNA
嗜异白细胞抗体
克隆
克隆是英文"clone"或"cloning"的音译，而英文"clone"则起源于希腊文"Klone"，原意是指以幼苗或嫩枝插条，以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物，如扦插和嫁接。
在大陆译为“无性繁殖”，在台湾与港澳一般意译为复制或转殖或群殖。
中文也有更加确切的词表达克隆，“无性繁殖”、“无性系化”以及“纯系化”。
克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。
通常是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因的个体或种群。
虽然克隆很神奇，但是它诱人的地方也就是它最危险的地方。
简单地说，克隆的定义就是：不经过两性细胞结合而直接繁衍后代，就叫无性繁殖，也称克隆。
克隆的定义:克隆，是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。
克隆在希腊语中是“小树枝叶”的意思，用以指无性增殖物。
现在则指个体、细胞、基因等不同水平上的无性增殖物。
（1）个体水平：在植物的无性增殖中，植物的发芽、插条等由同一个体通过无性生殖而增长的个体群均被视为克隆。
采用组织培养方法可使植物细胞培养发育成完全的个体（愈伤组织），采用这种方法得到的具有相同基因型的个体群，也被称为克隆；在动物的无性增殖中，典型的例子是采用核移植实验方法，把分化细胞的核移植到一个事先去核的蛙卵中，让其发育并得到克隆蛙。
克隆动物具有均一遗传性质，在研究环境条件对发育、分化的影响以及药物的检测方面都是重要的实验材料。
在哺乳动物中，由于细胞分化，核异质化的程度加剧，因此核移植尚无成功的例子。
（2）细胞水平：由一个细胞经过有丝分裂生成的细胞群叫克隆。
但如果培养细胞发生转化，则很容易引起染色体变异。
（3）基因水平：利用基因重组操作技术，使特定的基因与载体结合，在细菌等宿主中进行增殖，有可能得到均匀的基因群。
儿童慢性活动性EB病毒感染3例报告
儿童慢性活动性EB病毒感染3例报告刘洪军;李春【摘要】Aim To clarify the clinical and prognostic characteristics in 3 cases with chronic active infection of EB virus (CAEBV) infection. Data of 3 cases with CAEBV infeetion were analyzed retrospectively, which included clinical presentation, auxiliary examination,medical imaging, pathology, diagnosis, differential diagnosis,treatment and prognosis. Methods 3 cases report and literature review were made. Result CAEBV was characterized by chronic or recurrent infectious mononucleosis-like symptoms,such as persistent or intermittent fever,hepatomegaly,splenomegaly,lymphadenopathy,fiver dysfunction, and others,including the abnormalities of lactate dehydrogenase (LDH) , serum ferritin (SF) , T lymphocyte subpopulations, pathological data, especially EB virus ( EBV ) -antibodies and DNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and infected tissue, 18F-FDG PET-CT had abnormal changes. Cases of CAEBV were more opportunistic infection. Conclusion This disease is rare but severe with high morbidity and mortality, and the clinical feature of CAEBV infection varied exceedingly. CAEBV is characterized by chronic or recurrent infectious mononucleosis-like symptoms. Patients with CAEBV have high viral loads in their peripheral blood and/or an unusual pattern of EBV-related antibodies, may result in severe or even fatal complication. Early diagnosis and adopting active measures should be made so as to improve their prognosis. the result of traditional therapy is not good,forantiviral therapy and immunosuppressive agents and immunomodulatory therapy is generally ineffective for this dis%目的通过分析3例儿童慢性活动性EB病毒感染(CAEBV),结合文献阐明儿童期该病的临床表现、实验室特点、影像学、病理学检查、诊断、鉴别诊断、治疗反应及预后情况.方法临床病例分析及文献综述.结果该病特点主要表现为持续或间断长期发热、肝、脾、淋巴结肿大、肝功能异常;常有乳酸脱氢酶(LDH)和血清铁蛋白(SF)异常升高、T细胞亚群紊乱;EBV 相关抗体持续阳性、外周血高EBV载量、病变组织可检测到EBV-DNA;PET-CT 可有FDG代谢增高的异常信号.容易发生机会性感染.结论 CAEBV是一种少见的严重综合征,临床表现复杂多样,主要表现为EBV感染后出现慢性或复发性传染性单核细胞增多症(IM)样症状伴随EBV抗体的异常改变和病毒载量增高,病程中可出现严重的或致死的并发症.应早期采取积极措施,有助于改善预后.传统的抗病毒治疗、免疫抑制剂、免疫调节治疗效果有限,针对特异性EBV蛋白的细胞免疫疗法或造血干细胞移植应为有前景的根治性手段.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)011【总页数】4页(P1382-1385)【关键词】EB病毒感染;慢性;活动性;儿童【作者】刘洪军;李春【作者单位】安徽医科大学附属省立医院儿科,安徽,合肥,230001;安徽医科大学附属省立医院儿科,安徽,合肥,230001【正文语种】中文Epstein-Barr virus(EBV)感染在儿童期常见，临床表现多样。
传染性单核细胞增多症和慢性活动性EB病毒感染患儿免疫功能分析
传染性单核细胞增多症和慢性活动性EB病毒感染患儿免疫功能分析王颖超;朱桂英;张秋堂;蒋兰君;李壮壮【期刊名称】《中国全科医学》【年(卷),期】2017(20)17【摘要】目的探讨儿童EB病毒(EBV)感染引起的传染性单核细胞增多症(IM)和慢性活动性EBV感染(CAEBV)外周血淋巴细胞亚群及免疫球蛋白改变特点.方法选取2010年5月-2016年5月在郑州大学第一附属医院儿科诊治,且进行过外周血淋巴细胞亚群及免疫球蛋白检测的EBV感染患儿共34例,其中IM组20例、CAEBV 组14例;选取同期体检健康的儿童20例为对照组,采用流式细胞术检测CD+3T淋巴细胞、CD+4T淋巴细胞、CD+8T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞计数,应用免疫散射比浊法检测免疫球蛋白IgA、IgG、IgM水平.结果 3组外周血白细胞计数、淋巴细胞计数、CD+3T淋巴细胞计数、CD+4T淋巴细胞计数、CD+8T淋巴细胞计数、B淋巴细胞计数、自然杀伤细胞计数比较,差异均有统计学意义(P<0.05).其中IM组外周血白细胞计数、淋巴细胞计数、CD+3T淋巴细胞计数、CD+8T淋巴细胞计数较对照组升高,B淋巴细胞计数较对照组降低(P<0.05);CAEBV组外周血淋巴细胞计数、CD+3T淋巴细胞计数、CD+4T淋巴细胞计数、CD+8T淋巴细胞计数、B淋巴细胞计数、自然杀伤细胞计数较对照组和IM组降低(P<0.05);CAEBV组外周血白细胞计数较IM组降低(P<0.05).3组IgA、IgG比较,差异均有统计学意义(P<0.05).其中IM组和CAEBV组IgA、IgG较对照组升高(P<0.05).结论 IM患儿CD+8T淋巴细胞大量增殖是淋巴细胞计数显著升高的主要原因,CAEBV患儿淋巴细胞减少,以T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞亚群均降低为主要特点;IM与CAEBV患儿免疫球蛋白IgA、IgG均明显升高.淋巴细胞亚群检测有助于IM和CAEBV的诊断及鉴别诊断.%Objective To investigate the lymphocyte subset and immunoglobulin features of peripheral blood in children with Epstein-Barr virus(EBV)-associated infectious mononucleosis(IM) and infected with chronic active EBV (CAEBV).Methods Thirty-four children infected with EBV who received diagnosis and treatment in Department of Pediatrics,the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University from May 2010 to May 2016 were selected,and they had underwent the detection of lymphocyte subset and immunoglobulin in peripheral blood.Among them,20 cases in IM group and 14 cases in CAEBV group;20 healthy children after physical examination at the same period were also included as control group.Flow cytometry was used to detect CD+3 T lymphocytes,CD+4 T lymphocytes,CD+8 T lymphocytes,B lymphocytes,and natural killer cell count,and immunoglobulin IgA,IgG and IgM levels were measured by immunological scatting turbidity method.Results There were significant difference in white blood cell count,lymphocyte count,CD+3 T lymphocyte count,CD+4 T lymphocyte count,CD+8 T lymphocyte count,B lymphocyte count,natural killer cell count of peripheral blood among the three groups (P<0.05).The leukocyte count,lymphocyte count,CD+3 T lymphocyte count and CD+8 T lymphocyte count in peripheral blood in IM group were higher than those in control group,and the B lymphocyte count was lower than that in control group (P<0.05).Lymphocyte count,CD+3 T lymphocyte count,CD+4 T lymphocyte count,CD+8 T lymphocyte count,B lymphocytecount and natural killer cell count in peripheral blood in CAEBV group were lower than those in control group and IM group (P<0.05).The leukocyte count in peripheral blood in CAEBV group was lower than that in IM group (P<0.05).There were significant differences in IgA and IgG among the three groups (P<0.05).IgA and IgG in IM group and CAEBV group were higher than those in control group (P<0.05).Conclusion The CD+8 T lymphocyte proliferation of children with IM is the main reason of significant increasing of lymphocyte count,lymphocyte of children CAEBV reduces,with reduced T lymphocytes,B lymphocytes,and natural killer cell subsets as the main features.Immunoglobulin IgA and IgG are significantly increased in children with IM and CAEBV.Lymphocyte subsets detection contributes to the diagnosis and differential diagnosis of IM and CAEBV.【总页数】6页(P2089-2094)【作者】王颖超;朱桂英;张秋堂;蒋兰君;李壮壮【作者单位】450052河南省郑州市,郑州大学第一附属医院儿科;450052河南省郑州市,郑州大学第一附属医院儿科;450052河南省郑州市,郑州大学血液病研究所;450052河南省郑州市,郑州大学第一附属医院儿科;450052河南省郑州市,郑州大学第一附属医院儿科【正文语种】中文【中图分类】R512.7【相关文献】1.EB病毒感染传染性单核细胞增多症和噬血细胞综合征患儿免疫功能分析 [J], 张霞;付笑迎;蔡德丰;黄娟;肖伟伟;陈诗杨2.48例成人慢性活动性EB病毒感染的临床特征和外周血淋巴细胞免疫表型 [J], 凌炜焱;丁俊琪;田芝奥;姚建华3.EB病毒感染与巨细胞病毒感染的传染性单核细胞增多症患儿临床表现和实验室检查对比 [J], 延融4.慢性活动性EB病毒感染患儿免疫机制及血液学病征分析 [J], 王建军;赵伟峰5.亲情护理模式在EB病毒感染传染性单核细胞增多症患儿中的应用 [J], 周帆;李静;沈丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
探讨EB病毒(EBV)感染患儿不同临床疾病类型与其免疫功能的关系
探讨EB病毒（EBV）感染患儿不同临床疾病类型与其免疫功能的关系摘要：目的：探讨EB病毒感染患儿不同临床疾病类型与其免疫功能的关系。
方法：采用随机分组的方式将我院近两年收治的EB病毒感染患儿150例平均分为三组，分别为IM组、CAEBV组、EBV-HLH组（以下简称I组、C组、E组），选取50例不存在EB病毒感染普通感染患儿为对照组，对四组患儿细胞免疫功能进行对比。
结果：比较CD3+T细胞，I组升高，E组降低（p＜0.05）；比较CD4+T细胞，I组、C组、E组都出现降低（p＜0.05），E组下降幅度最高；比较CD8+T细胞，I组显著高于其他三组（p＜0.05）；对比CD19+细胞，I组、C组与E组皆明显下降（p＜0.05）；对比CD56+细胞，E组显著降低（p＜0.05）。
结论：EB病毒感染通过IM、CAEBV、EBV-HLH三种疾病发病机制引发疾病，三种疾病的发展与患儿免疫功能紊乱有很大的关系，监测患儿的细胞免疫功能对于EB病毒不同临床疾病类型的判断很有必要，值得在临床上推广应用。
关键词：EB病毒；患儿；疾病类型；免疫功能EB病毒属于一种DNA病毒[1]，是疱疹病毒群中的一种，其具有多样化的传播方式，人体很容易感染[2]。
虽然该病在欧洲主要在成人群体中多发，但在我国等发展中国家中则主要集中在3至5岁的婴幼儿人群，感染率多达90%[3]。
该病在临床上表型较为复杂，且多潜伏感染[4]，其主要受累细胞群为人体B淋巴细胞，人体感染EB病毒与自身免疫功能有重大的关系[5]。
本文分析了几种EB病毒感染的几种常见疾病，IM（传染性单核细胞增多症）、CAEBV（慢性活动性EBV感染）、EBV-HLH（EBV相关淋巴细胞增生性噬血综合征）与患儿免疫功能的关系，现报道如下。
1.一般资料与方法1.1一般资料选取我院近两年收治的EB病毒感染患儿150例，按照疾病类型分成三组。
所有患儿都符合实验室病原学相关诊断标准，确诊为EB病毒感染所属类型。
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题目：EB病毒感染的T/NK细胞亚群在慢性活动性EB病毒感染中的克隆起源关键词：EB病毒慢性活动性EB病毒感染淋巴组织增生性疾病CD-34细胞外标题：在CAEBV中克隆的被EB病毒感染的T/NK细胞子集缩写：BM:骨髓（ bone marrow）， CAEBV: 慢性活动性EB病毒感染（chronic active Epstein-Barr virus infection）， EBV:EB病毒（ Epstein-Barr virus）， EBER: EB病毒编码的mRNA（Epstein-Barr virus-encoded mRNA）,EBNA:EB病毒核抗原（ Epstein-Barrvirus-nuclear antigen）, HLH:噬血淋巴组织细胞瘤病（ hemophagocytic lymphohistiocytosis）, HIV:人类免疫缺陷病毒即艾滋病毒HIV（ human immunodeficiency virus）, HMB: 蚊虫叮咬过敏症（hypersensitivity to mosquito bite）, Ig:免疫球蛋白（immunoglobulin）， IM:传染性单核细胞增多症（ infectious mononucleosis）， LMP:潜伏感染膜蛋白（latent membrane protein）, MNC:单核细胞（mononuclear cell）, Lin:遗传（ lineage）, LPD:恶性淋巴瘤（ lymphoproliferative disease）, NK：自然杀伤细胞（ natural killer）, PB:周边血液（ peripheral blood）, PCR:聚合酶链反应（polymerase chain reaction）,TCR:T细胞受体（ T-cell receptor）版权转易：无摘要：在免疫应激学中，会间或出现被EB病毒感染的B细胞的克隆扩充，这样经EB病毒感染的T细胞/NK细胞就会在慢性活动性EB病毒感染（CAEBV）的病人体内扩散；慢性活动性EB病毒感染是一种罕见的单核细胞增多症，根据受感染的靶细胞的不同可以将其分类为T细胞型和NK细胞型，目前此病的发病机理仍不十分清楚。
为了寻找被EB病毒感染的T细胞/NK细胞的克隆起源，可通过高度净化从6个病人体内获得细胞因子的方法来评估病毒的分布和克隆类型。
病人1有被EB病毒感染的T细胞受体，即Vδ2/Vγ9-表达细胞的单克隆增生，并且在αβT细胞中携带较低的EB病毒复制数目。
病人2和3体内有被EB病毒感染的CD4+T细胞的克隆扩充，而且在CD56+细胞中携带较低的EB病毒负荷。
病人4、5和6体内存在较CD3+细胞带有更高EB病毒负荷的CD56+细胞的扩充。
在5个病人中多数目标人群的克隆带决定EB病毒的末端复制。
这个末端复制的规格表明了在4个病人中少数目标人群子集合的克隆类型和多数目标人群子集合的克隆类型是相同的。
但是并没有发现EB病毒存在于病人的骨髓CD34+细胞谱系中，其反应是阴性。
这一结果说明EB病毒能够在细胞分化阶段感染T/NK细胞，但是不能感染CAEBV病人的CD34+骨髓造血干细胞。
简介：大于90%的成年人会被EB病毒感染，并且这种感染会伴随一生。
原发性的感染经常在青少年和年轻的成年人中引起严重的传染性单核细胞增多症。
γ疱疹病毒进入CD21+B细胞中，在记忆B细胞库中通过带有EB病毒特异性细胞毒素的T细胞避免免疫排除来建立潜伏性感染1，被EB病毒感染的B细胞恶性淋巴瘤在免疫缺乏症的病人中显现。
最近，在非免疫功能受损的主体中，像是慢性活动性EB病毒感染（CAEBV）和EB病毒联合性嗜血淋巴组织细胞瘤病（HLH），由EB病毒驱动的异常T/NK细胞恶性淋巴瘤已经被鉴别出来了2,3。
CAEBV是一种罕见的单核细胞增多临床综合征，其特点是EB病毒DNA的高循环水平和类似传染性单核细胞增多症的周期性症状，并伴随冠状动脉病变，脉络膜视网膜炎和脑牵连4。
CAEBV首次被描述是作为一种以B细胞为靶细胞的进行性EB病毒感染所呈现的，但是大多数从亚洲方面报道的病例是将其作为EB病毒感染的T/NK细胞恶性淋巴瘤，根据被感染的靶细胞，可以将亚洲地区类型的CAEBV分类为T细胞型和NK细胞型5-7。
NK细胞类型可能与蚊虫叮咬过敏症（HMB）以及某些慢性疾病有关联。
然而，未进行同种异体的干细胞移植的病人，不论受哪一类型的影响，都会导致胎儿的死亡8-9。
CD8+T细胞比较特别地针对EBV-HLH的病人，但是病毒却遍布于CAEBV病人体内T/NK细胞的每一个子集合。
细胞式特定感染并不能保证转化变形或是组织渗透。
尽管有越来越多的报道，但T 细胞感染的起因仍不十分明确。
EB病毒DNA的游离基因存在一个可以末端复制序列的高度变异重复反应，这种序列在进入细胞时被由线性基因组环化所决定的随机重组所加入。
由于TR数目在EB病毒再生和再感染的循环中是固定的，这种变化则表示有潜伏性感染的细胞在复制。
尽管这样，细胞纯度和染色敏感性限制了CAEBV中T/NK细胞的精确分化。
在病人体内建立的由EB病毒产生的T/NK细胞系并不代表活的有机体内的克隆特性。
在当代研究中，通过利用高精确度的细胞排序，在CAEBV病人体内的T/NK细胞EB病毒的负载和克隆能力是可以被分析出来的。
伴随克隆型感染证据的存在，可以发现多数目标人群和另一目标群拥有一样的EB病毒DNA。
首先，这一结果意味着T/NK细胞的前体细胞受到感染，反之，与T/NK细胞拥有共同的淋巴祖细胞的骨髓CD34+细胞则没有涉及到感染之列。
所以，CAEBV的发病原理曾经被讨论过，在这里应特别的提及EB病毒感染的细胞起源。
材料和研究方法：1.病人2002至2008年期间，这六个日本病人在九州大学附属医院接受治疗并且康复了，所有病人均完成了临床诊断标准11（临床档案资料如表格1所示）。
疾病发作的中位时间是3.5年（范围是1-8年），其特殊的症候包括：蚊虫叮咬过敏（n=4），痘样水疱（n=4）以及冠状动脉损害（n=1）。
其中三个病人有对抗EB病毒抗体的形式，五个病人体内存在增长的激活T细胞和/或高CD4/CD8比率的数目，三个病人体内主要的靶细胞是T细胞，三个是NK细胞。
对于周边血液（PB）的单核细胞（MNCs）来说，通过EBV-TR和免疫球蛋白（Ig）/T细胞受体（TCR）基因，这种克隆是可以屏蔽的。
在研究期间，没有病人接受过细胞毒素的作用。
研究控制包括EB病毒血清反应阳性的课题以及有免疫性血小板减少症的病人。
2.抗体、细胞染色和分类筛选通过离心分离方法把单核细胞分开（卡佩尔·奥罗拉)。
在染色了抗CD3、CD4、CD8和CD56的单克隆抗体之后，用真空灌胶分选层析法(德国贝尔吉施格拉德巴赫市美天旎生物技术)通过免疫粒子，细胞的每一个部分就能被分离出来。
接着，在用FITC标记成对的抗Vδ2单克隆抗体(贝克曼库尔特公司, 法国马赛市)或是PE标记成对的TCRαβ单克隆抗体染色之后，层析抗FITC标记或者是抗PE粒子(美天旎基因工程)，可以得到T细胞受体（TCR）Vδ2+细胞和T细胞受体αβ+细胞。
在淋巴细胞消耗柱耗损了CD3+细胞之后，利用淋巴细胞分离柱（德国贝尔吉施格拉德巴赫市美天旎生物技术)即可收集CD56+细胞。
这个过程产出纯度高于97%的细胞样品，此细胞的纯度是利用流式细胞仪通过流式细胞术所决定的。
为了培养出高纯度（>99.9%)的CD3+细胞、 Vδ2+细胞、TCRαβ+细胞和CD34+细胞，所有细胞的排序和分析均是由流式细胞分选仪（仪器型号：FACS Aria）完成的(BD 生物科学, Oxnald, PA, 美国)。
随着各自的FITC标记的成对单克隆抗体染色之后，CD3+细胞、 Vδ2+细胞和TCRαβ+细胞就能被准确的分类出来了。
BM CD34+细胞的分类如下所示，像之前描述的一样，间接的利用了CD34粒子组分将CD34+细胞从骨髓细胞中浓缩出来12。
经过分析和排序，用Cy5-PE或是PC5成对的谱系混合，包括CY5-PE或是PC5成对的抗 CD3、 CD4、CD8、CD10、 CD20、CD11b、CD14、GPA，FITC标记成对的抗CD3、 CD4 或Vδ2，PE标记成对的抗Vαβ、 CD16或是CD56，来染色细胞样品，抗原提呈细胞成对的抗CD34和非活性细胞用碘化丙啶染色后被排除。
流式细胞分选仪把CD34+细胞从骨髓细胞中分离出来。
满足条件的同种配对单克隆抗体对照物决定每一个凹槽的染色水平。
为了避免任何污染，第二次的分类拣选牢牢的遵从第一次分类拣选的方式。
得到的数据用FlowJo软件分析(Tree Star公司)。
再次分析必须确保获得的细胞纯度与之前的一致，都是> 99.9%的(补充的部分见图表1)。
3.DNA抽取和EB病毒DNA实时PCR从细胞样品中提取高分子的DNA，DNA被用于PCR和Southern印迹，根据已制定的方法，进行EB病毒DNA的实时PCR4,6。
简言之，就是分别于5S末和3S末时在 TaqMan调查上用报道染色分子和通过核苷酸臂连接的冷却粉质贴上标签。
基因剂量通过ABI PRISM 7700来进行分析(PE 生物系统, 加拿大福斯特市)，DNA用荧光定量聚合酶链反应普遍掌握组合(PE生物系统)、引物和TaqMan试样进行混合。
PCR要满足的条件是在刚开始的2分钟内保持50°C的温度，后10分钟内持续95°C，继则50个周期后保持95°C达15秒和60°C达1分钟的水平。
曾有过EB病毒感染的健康人群显示在周边血液中每毫升小于200个的DNA复制，以及在核细胞中每微克小于40个的DNA复制。
4.Southern印迹探查用EB病毒串联反复（TR）或是TCR/Ig基因Southern印迹的实施按照之前已制定的方式进行2,13，简言之，5μg 高分子加重于DNA上，DNA被Eco RI和/或Bam HI吸收。
被吸收的DNA经0.9%琼脂糖胶电泳转运到Byodine-B上，再将Byodine-B和带P标签32的试样混合。
用5.2-kbBam HI-Eco RI片段评估淋巴细胞的克隆能力，其中，5.2-kb Bam HI-Eco RI片段包括EBV染色体组的TR排序和/或C β1、Jβ1、Jβ2、Jγ和 JH的 TCR/Ig基因试样。
正常的对照DNA从健康但EBV血清反应阳性的成年人的MNC中提取。
5.γδT细胞的基因分析通过常规方法，从高纯度的周边血液经PAN标记TCRγδ阳性的周边血核细胞中提取染色体杂交品种。
对于TCRδ基因和TCRγ基因，N区PCR 产物的直接排序已完成。