胚胎培养
植物胚胎培养
（2）防止幼胚早熟萌发的方法
①提高培养基渗透压。胚龄越小要求的渗透 压（糖浓度）越高，高糖浓度控制幼胚早熟 萌发的效果早已被证实。下述实例阐明不同 胚龄对糖浓度的要求。
②提高无机盐浓度。提高无机盐浓度也是为 了提高培养基渗透压。可加入适量的NaCl 以提高渗透压，浓度一般为0．2％－0．4 ％，超过0．8％对胚有毒害作用。
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（二）幼胚
发育早期的幼胚，由于胚胎发育要求更 为完全的人工合成培养基，而且剥离技 术要求很高，用成熟胚的培养方法很难 成功，可以采用胚珠预培养的方法。
具体做法：将授粉后的子房剥出用药剂
进行表面消毒，在无菌条件下切取胚珠
进行预培养。培养一定时间后，再将胚
从胚珠中剥出，接着培养裸露的胚，使
曼陀罗：5.0一8.1
水稻：5.0
番茄： 6.50
大麦：4.9
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(三) 环境条件对胚性发育的影响
1）光照条件：
由于胚在胚珠内发育是不见光的。一 般认为在黑暗或弱光下培养幼胚比较适 宜。光照对胚胎发育有轻微抑制作用， 离体培养条件下，幼胚正常胚性发育对 光的要求，还应根据植物种类来决定。
③加人甘露醇提高渗透压。甘露醇的浓度为 1．l％－5．5％，以部分地代替蔗糖，使幼 胚在等渗条件下继续胚性发育。
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（二） 培养基酸碱度对胚性发育的影响
培养基酸碱度对胚性发育也是非常重 要的。通常胚培养所用pH值的范围为。 因植物种类不同而有所差异。
如：
荠菜： 5.4－7.5
桃：5.8
（五）克服种子的自然不育性
（六）种子生活力的测定
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内容 3
第4章-胚胎培养PPT演示课件
•56
复习思考题：
1、植物胚胎培养分为哪些类型？各有何种特点 和要求？
2、胚胎培养有何意义？
3.花器官培养通常指花的哪些部分培养?常用的 基本培养基是什么?
4.在进行幼胚培养时，由于幼胚过小而分离困 难，可采取什么途径解决?
•57
温度。 C.光照：通常弱光培养。光暗交替有利幼胚生
长
•25
原胚(幼胚)的培养的条件
➢ 无机氮：
包括硝酸盐、亚硝酸盐或铵盐；
➢ 渗透压：
蔗糖，8%-10%，不同发育期，渗透压不一 样，初期高（WHY）。因为自然条件下，原 胚被一ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ高渗液体包围着。
➢ 复杂的天然提取物：
椰乳 CM有促进幼胚生长和分化的作用
4.培养：
加入生长素和CTK，诱 导形成愈伤组织或胚状 体，再分化成植株。
•51
•52
二、种子培养
优点： 1.植株分化容易，无菌操作方便，
打破休眠。 2.使杂种败育种子正常萌发。
•53
种子结构
•54
培养方法：
1.种子消毒：
◇种皮厚或不饱满的用0.1%升汞浸10-20min， 或用10%次氯酸钠浸15-20min。
（2N）
•8
一.培养类型
1、离体胚培养时期 A.异养期 B.自养期
A.异养期，完全依赖于周围细胞中的代谢，而 且依赖于周围胚乳消耗的养料。B.自养期，胚 能吸收培养基中的无机盐和糖，经过自身的代 谢作用合成其生长所必需的物质。
•9
2、离体胚培养类型 ⑴成熟胚培养 ⑵幼胚培养
•10
2、离体胚培养类型
完全成熟的胚乳，生理活动很弱，在诱导脱分化前， 必须借助于原位胚的萌发，使其活化。
植物胚胎培养121111111111111111
③培养条件的控制
剥离出来的幼胚要立即接种到培养基上进行培养。 在培养之前必须对所培养的对象在自然发育条件 下的特性充分了解，比如胚的休眠问题、是否需 要春化作用、胚萌发的温度等。
2、幼胚的分离及培养 ①幼胚的剥离 ②幼胚的培养 胚胎发育过程分为两个时期： 1）异养期（heterotrophy period），即在胚发育早期， 幼胚由胚乳及周围的组织提供养分。 2）自养期(autotrophy period) ，胚在代谢上已经能在 基本的无机盐和蔗糖的合成培养基上生长，在营养上已相 当独立。
子房由子房壁和胚珠组成
授粉子房的培养 类型 未授粉子房的培养
子房 的 结 构
子房
子房胚珠 受精极核 胚乳 受精卵
胚
未授精子房
授精子房
性细胞（卵细胞、助细胞、极核、反足细 胞）----胚状体或愈伤组织----单倍体植株；
体细胞（珠被、子房壁）---胚状体或愈伤 组织----二倍体植株；
胚培养
胚培养：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠 中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步 生长发育，以至形成幼苗的过程。
一、培养类型
1、幼胚培养 2、成熟胚培养
胚的类型
合子胚：由受精卵形成的胚
体细胞胚： 在离体或活体条件下由除合子
之外的孢子体细胞形成的胚
非合子胚
孤雌胚：
由未受精卵形成的胚
孤雄胚： 由小孢子或花粉粒形成的胚 不定胚：由植物组织或器官直接产生的体细胞胚。
对培养条件要求宽松。
2、成熟胚培养过程---以玉米成熟胚培养为例
1）玉米种子消毒 2）在黑暗条件下，将种子放在含无菌湿润滤纸的培 养皿中培育6h。 3）将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4）无菌水冲洗3次 5）在MS培养基中暗培养。 6）观察：2d出现胚根，3-4 d出现胚芽，10d长成幼 苗。 玉米成熟胚的培养
早期胚胎培养的原理
早期胚胎培养的原理
早期胚胎培养的原理是为了模拟体内给予胚胎生长所需的适宜环境和养分，以促进其正常发育。
具体来说，培养基是一种含有适量有机营养物、无机盐和必需氨基酸等的液体或凝胶介质，能够提供胚胎细胞所需的养分和能量。
培养基的配方及组成可以因胚胎类型和实验目的而有所不同。
在早期胚胎培养过程中，温度、pH值、氧气浓度等环境因素
都需要维持稳定。
通常采用具有一定保温功能的培养箱或培养器来控制温度在适宜范围内，并通过加入合适的缓冲剂来调节培养基的pH值。
另外，一定的氧气浓度也是胚胎发育所必需的，因此通常会在培养器中控制适宜的氧气浓度及通气速率。
胚胎培养通常分为体外受精后的早期胚胎培养和体外授精（试管婴儿）前的全程培养。
早期胚胎培养通常从受精后第一天开始，将受精卵置于培养基中，并在一定温度下维持其正常发育。
全程培养则是指将精子和卵子在培养基中进行受精，然后将受精卵继续培养至移植阶段。
通过早期胚胎培养，可以为胚胎正常发育提供稳定的环境和养分，同时也为人工生殖技术的应用提供了基础和保障。
植物的胚胎培养
7
8.1.3 幼胚培养（immature embryo culture） 是指对发育早期胚或未成熟胚的培养，即供给一
定的培养条件，使幼胚逐步发育成成熟胚，并进 一步发育成小植株的技术。 幼胚培养要根据幼胚发育的不同阶段，选用相应 的培养基、营养条件和培养条件。
远缘杂交杂种胚拯救 ，使胚发育不全的植株 获得大量的后代
整理课件
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8.2.2、子房培养:
包括授粉子房和未授粉子房培养。 1949年和1951年最早在黄瓜、番茄、菜 豆、草莓、烟草等植物上获得成功。 授粉子房培养形成成熟果实和种子； 未授粉子房培养形成小的无籽果实。
授粉后3d的玉米子房， 其中6颗发育成种子， 其余产生愈伤组织。
整理课件
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（1）子房培养的意义: ➢获得杂种植株； ➢未授粉子房培养为试管受精提供技术基础； ➢未授粉子房培养能获得获得单倍体植株，用
具有特殊的意义。 在柑桔杂交育种中一个问题是杂交往往得不到杂种
胚，由于珠心胚的生长把合子胚挤到旁边去。
整理课件
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(6) 用于有关理论研究
离体胚培养还可用于许多重大理论问题 的研究，如胚胎发育过程，影响胚发育的各种因 素，胚乳作用以及与胚发育有关的代谢和生理变 化等。
(7) 脱分化与再分化培养
以幼胚或成熟胚为外植体诱导愈伤组织， 建立胚性无性系，不仅可以应用于研究体细胞胚 胎发生、分离原生质体，还可应用于植物体细胞 遗传饰变和转基因技术的研究等。
整理课件
3
8.1 离体胚培养
8. 1.1 离体胚培养的概念 离体胚培养（embryo culture）指从植物种子中分
离出胚组织进行离体培养的技术。包括幼胚培养和 成熟胚培养。
幼胚
植物胚胎
2、母体组织的影响 柱头可影响某些植物受精，应切除柱 头和花柱。 而有些植物则需要保留，更有利于离 体受精，如烟草。 3、花粉萌发和花粉管生长 离体花粉萌发率和花粉生长速度直接 影响试管受精成功率。
幼胚离体培养的生长发育方式
(1)、胚性发育(embryonal development) 幼胚接种
到培养基上以后，仍然按照在活体内的发育方式发
育，最后形成成熟胚(有时甚至可能类似种子)，然 后再按种子萌发途径出苗形成完整植株，这种途径 发育的幼胚一般一个幼胚将来就是一个植株。
(2)、早熟萌发(early mature sprou培养条件和营 养的要求都较高。 需要多种的营养和 适宜的培养条件。
影响幼胚培养成功的因素主要包括 幼胚发育时期、培养基及培养条件等。
（1）天然提取物及某些蛋白制品； 1934年银杏幼胚培养中添加银杏胚乳 有促进作用；1941年曼佗罗幼胚培养中 发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发 育(200-500um的幼胚)。 此外，大麦胚乳、麦芽提取物、酵母 提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的 发育。
★单倍体植株的培育 ★离体授粉的需要 ★离体条件形成果实 ★花被功能研究
2、子房培养的方法
授粉前或授 粉后的子房
表面消毒
接种培养
受精后的子房仍需进行表面消毒后再 接种。而未受精子房可将花被表面消毒后， 在无菌条件下直接剥取子房接种。
子房培养只需较简单的培养基即可形 成果实，并含成熟种子。
影响因素
三、胚的培养
指在无菌条件下将胚从胚珠或种子中分离 出来，置于培养基上进行离体培养的方法。
胚胎干细胞培养操作规程
胚胎干细胞培养操作规程胚胎干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞，具有无限的增殖能力和多能性分化潜能，对于组织再生和疾病治疗具有重要的应用价值。
为了进行胚胎干细胞的培养和扩增，下面给出一份胚胎干细胞培养操作规程。
1. 实验前准备：a. 清洗培养器具：用无菌水洗净培养皿、玻璃器皿和刷子。
b. 预热培养液：根据实验需要预热胚胎干细胞培养基和所需的其他培养液，以确保适宜的温度。
2. 细胞除菌：a. 必要时，用无菌棉签将细胞悬液接种到新的培养皿中。
b. 将枪头含有70％乙醇的吸管对准培养皿，喷洒乙醇并晾干。
c. 将培养皿放置在超净工作台内，进行进一步的消毒和清洁操作。
3. 细胞接种：a. 取出细胞悬液，并与培养基按照比例混合。
b. 将胚胎干细胞悬液均匀地接种到预先涂覆有明胶或者植物凝胶的培养皿上。
c. 确保培养皿中的细胞接种均匀且不过于密集，以便细胞能够自由生长。
4. 细胞培养：a. 将被接种的培养皿置于培养箱中，在37℃和5% CO2的条件下培养。
b. 每天检查和观察细胞的状态和生长情况，观察细胞的形态和数量。
c. 根据需要，定期更换新鲜的培养基。
5. 细胞分离：a. 当细胞达到足够密度时，可使用胰蛋白酶等酶来进行细胞的分离。
b. 向培养皿中加入足够的酶液，并将其均匀地涂抹在细胞上。
c. 在温度适宜的条件下，观察细胞的分离情况，并在适当的时间停止酶的作用。
6. 细胞传代：a. 轻轻将细胞悬液转移到新的培养皿中，避免细胞团的形成。
b. 加入新的培养基，使细胞能够继续生长和分化。
c. 定期观察和记录细胞的生长情况，监测细胞的纯度和分化状态。
7. 储存和保存：a. 使用液氮分装装置将细胞悬液分装到液氮管中。
b. 储存液氮管在液氮罐中，确保细胞的存活和完整性。
c. 定期检查和更新细胞的库存记录，确保细胞的有效使用和管理。
通过以上的操作规程，可以进行有效的胚胎干细胞的培养和扩增工作，为进一步的研究和应用奠定基础。
植物的胚胎培养
养。
分为两种类型：授粉胚珠培养
未授粉胚珠培养
（1）胚珠培养的意义:
➢ 防止杂种胚早期败育，获得杂种植株；也为拯救 心型期胚或心型期以前的胚胎提供了新的途径。
➢ 授粉前胚珠培养，可作为试管受精的基础； ➢ 未授粉胚珠培养，能培养获得单倍体植株，用于
单倍体育种。
（2）胚珠培养方法: A、材料的选择和灭菌： 未授粉胚珠：开花前1-6天， 授粉胚珠：授粉后1-120天不等，较晚 时期有利于胚的发育。 灭菌：先对子房或外表组织消毒灭菌后， 后取出胚珠培养。
越小，糖浓度要求越高，成熟胚，2%；而幼胚，4％甚至 更高浓度的蔗糖。如曼陀罗的前心形期胚培养要求8%的蔗 糖含量，而鱼雷期要降到%～0.5%。
氨基酸：谷氨酰胺是促进离体胚生长最有效的氨基酸； 酪蛋白水解物（CH），不同物种的离体胚对
CH的浓度要求不同 。 胚乳提取物。一般认为，八分成熟的椰乳对幼胚培养作
成小植株，因此，培养基相对简单，一般只需要大 量元素和糖即可，有些培养为了打破种子休眠也加 入一些植物激素。
水稻成熟胚培养
观赏与药用（紫杉醇） 种子有休眠特性
台湾红豆杉成熟胚培养
种子有休眠特性 （种皮与未完成 后熟的原因）
牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖
Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony
(3) 克服种子休眠
有些植物种子休眠期很长，如鸢尾（lris），一
般种子成熟后要休眠2～3年才能萌发，在培养基 上几天内种子就能萌发。 植物种子休眠的原因可能来自胚乳，因为离体胚 如果带着胚乳培养，胚的生长就受到抑制。具有 休眠特性的种子，其胚离体培养时，在培养基中 加入1～2 mg/L的赤霉素，对打破种子休眠有显 著作用。
植物生物技术-第三章 胚胎培养
单子叶植物胚的发 育
从合子至原胚的发育过程与双子叶的相似，以后只发育出一片 子叶
15Байду номын сангаас
2 、离体胚培养时，胚的发育的几种途径： （ 1 ）胚胎发育途径：幼胚经过心形期，再发育到鱼雷形期，
进而进入子叶期，最后萌发成苗。这是幼胚培养成功的途径 （ 2 ）胚性发育途径： 幼胚增大到正常大小，但不能成苗，通
过调节渗透压或Th长素可正常Th长
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（ 3 ）早熟萌发途径：幼胚从心形期发育到鱼雷形期后，不经 过子叶期直接发育成苗，即跳过某一个发育阶段，这样的幼 苗 往往很弱小，组织不健全，且难于培养成正常的植株
（ 4 ）产Th愈伤组织：幼胚培养过程中细胞脱分化产Th愈伤组 织。通过幼胚培养产Th的愈伤组织，经植株再Th同样可得到 远 缘杂种。据报道，由胚培养产Th的愈伤组织较其它外植体 容易 得到再Th植株。
方法 例如蔷薇属植物的栽培品种常需 1 年才能开花。从离体培养 胚获得的幼苗只需 2 － 3 个月即可开花，而利用这种花作父 本 ， 1 年内可产Th 2 个世代，大大地提高育种进程
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5 、种子Th活力的快速测 定 • 应用一般的萌发试验测定休眠的种子Th活力所需时间很长，必
须要预先进行后熟处理 • Tukey （ 1994 年）发现未后熟的种子和后熟的种子的胚在离
• 植物胚胎培养的定义： 是对植物的胚 ( 种胚 ) 及胚器官 ( 如 子房，胚珠 ) 进行人工离体无菌培养 , 使其发育成幼苗 的技 术
• 胚胎培养类型：胚培养、胚珠培养、子房培养、胚乳培 养
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本章主要内 容
第一节、胚培养 第二节、胚珠和子房的培养 第三节、胚乳培养 第四节、离体授粉
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本章教学目的与要求
便于观察和培养胚胎的培养皿
便于观察和培养胚胎的培养皿胚胎培养是生物学研究中重要的一环，它能够帮助科学家们了解胚胎发育机理、疾病形成原因等。
为了实现高质量的胚胎培养，科研人员们不断追求更好的培养皿设计。
本文将介绍一种便于观察和培养胚胎的新型培养皿，并探讨其优势和应用前景。
一、胚胎培养的重要性胚胎培养对于生物学研究和医学应用具有重要意义。
通过胚胎培养，科学家们可以观察和研究胚胎在不同发育阶段的变化，从而深入了解生命起源和发展的奥秘。
此外，胚胎培养还被广泛应用于生殖医学、遗传学和药物研发等领域，为人类健康事业做出了重要贡献。
二、传统培养皿的局限性传统胚胎培养皿存在一些局限性，限制了观察和培养的效果。
首先，传统培养皿的材质通常不透明，难以清晰地观察细胞的变化。
其次，传统培养皿的形状和尺寸单一，不利于不同发育阶段胚胎的培养。
此外，由于培养皿内的空间有限，胚胎生长受到限制，影响了培养的效果。
三、新型便于观察和培养胚胎的培养皿为了克服传统培养皿的局限性，科学家们近年来提出了一种新型培养皿，旨在便于观察和培养胚胎。
这种培养皿采用透明的材质制成，可以清晰地观察胚胎的变化。
同时，培养皿的形状和尺寸可根据需要进行调整，以适应不同发育阶段胚胎的培养需求。
此外，该培养皿还具备较大的培养空间，使得胚胎能够自由生长，促进了培养效果的提高。
四、新型培养皿的优势和应用前景新型培养皿相比传统的培养皿具有多个优势。
首先，透明的材质使得科学家们能够更好地观察胚胎的变化，提高了研究的准确性。
其次，可调整的形状和尺寸使得培养皿更加灵活，可以适应不同生物样本的培养需求。
最后，较大的培养空间有利于胚胎的自由生长，改善了培养效果。
新型培养皿在生物学研究和医学应用中具有广阔的应用前景。
在研究领域，该培养皿可用于观察和研究不同发育阶段胚胎的变化，揭示发育过程中的细胞信号通路和基因调控机制。
在医学应用中，新型培养皿可用于辅助生殖技术、胚胎干细胞培养等，为不孕不育患者提供帮助，并有望促进再生医学的发展。
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胚胎培养
一、胚胎培养的概念
1.胚胎：植物在受精后，受精卵形成合子，随即进行第一次分裂，进而形成分生组织和幼胚，再发育成成熟胚。
2.胚胎培养：胚胎培养是植物组织培养的一个主要领域。
植物胚胎培养是指对植物的胚（种胚）及胚器官（如子房，胚珠）进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。
二、胚胎培养的种类以及方法
1.胚培养
⑴幼胚培养
①定义：将子叶期以前的具胚结构的幼小胚从母体上分离出来，放在无菌的人
工环境条件下使其进一步生长发育形成幼苗的技术。
②特点：幼胚培养完全是异养的，离体条件下培养要求培养基成分复杂，培养
不易成功。
附：以下几种发育方式：
a、胚性发育，此种方式不能萌发成苗
b、早熟萌发，长成的苗十分瘦弱
c、产生愈伤组织，再由愈伤组织分化形成胚或不定芽
⑵成熟胚培养
①特点：成熟胚培养是自养的，培养基需要简单。
②主要目的：
a、研究胚发育过程的形态建成
b、生长调节物质的作用
c、胚与胚乳相互关系和营养要求
③培养方法：
将受精后成熟或未成熟种子或果实，用70%-75%酒精表面消毒几分钟；
用0.1%升汞溶液或饱和漂白粉溶液消毒10min，无菌水反复冲洗；
无菌操作台上，直接或在解剖镜下剥取胚接种在培养基上。
2、胚乳培养
⑴定义：指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植
株的技术。
⑵胚乳是由两个单倍的极核和一个单倍的精子结合而成的3倍体组织。
由它可
获得无子结实的3倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。
不同胚乳发育类型及发育时期直接影响外植体取材时期以及胚乳细胞产生愈伤组织频率。
胚乳培养的后代，常发生细胞染色体数目变化，形成多倍体、非整倍体等。
⑶培养的方法：
取授粉4-8d后的幼果，常规消毒；
无菌条件下切开果实，取出种子，分离出胚乳；
接种在培养基上（MS、White等培养基，附加2，4-D或NAA 0.5～2.0，BA0.1～
1.0。
），在25-270C和黑暗条件或散光下培养想成愈伤组织；
转到分化培养基（MS培养基附加0.5～3.0 mg/l的BA及少量的NAA。
）上，待愈伤组织长出芽后，切下不定芽；
插入生根培养基中，光下培养10-15d，切下白色不定根。
⑷胚乳培养的应用
a、获得三倍体幼苗和植株，用于育种利用。
三倍体植株具有营养体大，无籽等
特点。
如无籽西瓜。
b、胚乳培养也会产生较多的混合体，影响育种利用。
但可用染色体工程研究。
c、胚乳培养也为研究这些产物（淀粉、蛋白质和脂类）的生物合成和代谢提供
一个很好的实验体系。
⑸胚乳发生的类型与发育程度：
①胚乳的发生方式：核型、细胞型、沼生目型
②胚乳的发育时期：早期、旺盛生长期、成熟期
⏹早期：操作不便，诱导率低
⏹旺盛生长期：易诱导产生愈伤组织
⏹成熟期：难产生愈伤组织
附：越接近成熟和完全成熟的胚乳，愈伤组织的诱导率越低
3、子房培养
⑴子房培养的意义：
a、有效地挽救杂种胚的败育；
b、单倍体植株的培育；
c、离体授粉的需要；
d、离体条件形成果实；
e、花被功能研究
⑵子房培养的方法：
授粉或授粉后的子房→表面消毒→培养接种
说明：受精后的子房仍需表面消毒后再接种，而为受精的子房可将花被表面消毒后再无菌条件下直接剥取子房接种。
子房培养只需较简单的培养基即可形成果实，并含成熟种子。
4、胚珠培养
⑴定义：在无菌条件下对授粉的子房取出胚珠进行培养的过程。
有时也把胚珠连同胎座一起取下来培养。
⑵胚珠培养的意义：
a、有利于合子和早期原胚的培养；
b、胚分化不全的种子的胚培养；
c、获得杂交后代好优良品种；
d、离体授粉的需要；
e、获得无病毒苗。
⑶培养方法
接种和培养基：从花中取出子房进行表面消毒，在无菌条件下进行解剖，取出胚珠，放在培养基上培养；多用Nistch培养基，也可采用MS、N6、B5等培养基。
优点：胚珠培养可以解决象兰科植物成熟胚较小不易培养的问题。
另一方面在未受精的胚珠培养中，可诱发大孢子发育成单倍体，用于单倍体育种。
注意：关键是选择胚的发育时期，实验证明发育到球形胚期的胚珠较易培养成功。
另外可取用带胎座甚至带部分子房的胚珠进行培养。
5、植物离体受精培养
⑴受精培养的方法：
开花前数天套袋，开花前一天或当天取花蕾或花药，表面消毒后，无菌条件下收集花粉。
采用直接引入法，或者是哺育法、接近法进行胚珠试管授粉。
离体花粉及胚珠——试管内授粉——受精的胚珠培养——种子发芽
⑵技术关键：
A.花粉的采集和灭菌
✧确定开花、花药分裂、授粉、花粉管进入胚珠和受精作用时间
✧去雄厚将花蕾套袋隔离
✧采集花粉粒
✧消毒
✧无菌条件分裂花粉
✧授粉
B.外植体的选择
✧开花前套袋，去雄
✧开花后1-2d，采集花蕾，放入无菌室培养准备
✧切去柱头，防止不授粉
✧胚珠剥离时间（开花后1-2d效果好）
C.适合的培养基
✧培养基应促进受精后的胚珠正常发育
⑵离体受精障碍：
①花粉在柱头上不萌发
②花粉管不能进入胚珠
③花粉在花柱中破裂
④受精后，胚乳发育不良
⑤杂种胚不能发育成熟
三、胚胎培养的影响因素
1.胚珠（子房）的成活率及育龄
✧胚珠（子房）离体成活率的关键是培养基成分的筛选。
2.母体组织的影响
✧柱头可影响某些植物受精，应切除柱头和花柱；
✧而有些植物则需要保留，更有利于离体受精，如烟草。
3.花粉萌发和花粉管生长
✧离体花粉萌发率和花粉生长速度直接影响试管受精成功率。
四、胚胎培养的意义
1.克服杂种胚的败育，获得稀有杂种
2.获得单倍体和多倍体植株
3.快速打破种子休眠，促进胚萌发
4.快速繁殖良种，缩短发育周期
5.克服种子生活低下和自然下不育性，提高种子发芽率
6.提高后代抗性，改良品质
7.种子活力的快速测定
8.种质资源的搜集和保存
9.研究胚胎发育的过程和控制机制。