TEM操作步骤及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项
透射电镜生物样本制备流程及注意事项透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种使用电子束而不是光束进行成像的显微镜。
它可以提供高分辨率的图像，因此被广泛应用于生物样本的观察和研究。
然而，由于其特殊的工作原理和生物样本的复杂性，透射电镜生物样本的制备过程需要注意一些关键的步骤和细节。
下面将逐步介绍透射电镜生物样本制备流程及注意事项。
一、样品固定1.选择合适的固定剂：固定剂的选择应根据所研究的样本类型和要观察的细胞结构而定。
常用的固定剂包括戊二醛（glutaraldehyde）、乙酰化亚胺（acrolein）、纤维蛋白素（formaldehyde）等。
2.采取合适的固定时间和固定温度：固定时间和温度应根据固定剂的要求和样本的特性进行优化。
通常情况下，固定时间为数小时至数天，温度在4℃至25℃之间。
3.注意透射电镜样品的固定深度：样品应保持较小的厚度以便透射电子束的穿透。
二、样品剖解1.剖解细胞膜：通常采用超声波振荡或冷冻断裂等方法来剖解细胞膜。
超声波振荡可用于含有细胞膜的细胞或组织，而冷冻断裂则适用于脆弱细胞和膜脂体系。
2.剖解细胞核：利用离心裂解法可以将细胞核分离出来。
离心裂解可分为机械法和渗透法两种，机械法利用高速离心的作用将细胞核分离，而渗透法则是通过渗透剂将细胞核溶胀并破碎。
三、样品固化1.脱水：样品在固定后需要进行脱水处理，以便在后续的步骤中更好地渗透和浸透。
常用的脱水剂有乙醇、丙酮和乙醚等，脱水过程往往需要进行多次重复。
2.浸透：在脱水后，样品需要在树脂中进行浸透，使其固化为坚硬的样品。
通常采用环氧树脂或比较稳定的丙烯酸树脂来进行浸透。
这一步骤通常需要较长时间，如数小时甚至数天。
3.树脂填充：浸透后的样品需要在模具中进行树脂填充，并在适当的温度下进行固化。
树脂填充的过程需要注意排除气泡和避免过度填充。
四、样品切片1.选择合适的切割工具和方法：样品通常使用切片机和切片刀进行切割。
透射电镜制样步骤以及注意事项
透射电镜制样步骤以及注意事项透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是目前最常用的高分辨率电子显微镜，可以用于观察物质的微观结构。
制备TEM样品的过程非常重要，下面将详细介绍TEM制样的步骤以及需要注意的事项。
制备TEM样品的步骤一般包括样品的选择、固定与固化、切片、薄化、网格制备和贴膜等。
第一步是样品的选择，样品应具有研究价值且适合观察。
例如，生物样品可以是细胞、组织或器官的薄片，金属样品可以是扁平的块状、粉末或薄膜等。
第二步是固定与固化。
对于生物样品，常用的固定方法包括浸泡法、灌注法和切片冷冻法；对于无机样品，可以使用固定剂将样品固定在固定剂中。
第三步是切片。
将固定好的样品切割成薄片，一般要求薄片的厚度在100 nm以下，通常使用超薄切片机来进行切割。
第四步是薄化。
将切割好的样品进行薄化处理，使其达到TEM观察所需的薄度。
常见的薄化方法有机械薄化、电化学薄化和离子薄化等。
第五步是网格制备。
将薄化好的样品放置在铜网格上，网格的选取应该根据所研究样品的性质和需要进行选择。
最后一步是贴膜。
将组织切片或带有样品的网格进行贴膜，以保护样品并提高图像的对比度。
在以上步骤中，需要注意的事项有：1.样品在制备过程中要避免受到污染或氧化，尽量在纯净无尘的环境中进行操作。
2.固定剂的选择要合理，不同的样品可能需要使用不同的固定剂，应根据需要进行选择。
3.切片时要注意刀片的尖锐度和切割角度，以免对样品造成损伤或变形。
4.薄化过程中要控制好加工参数，以保证样品的均匀薄化。
5.制作网格时应选择合适的网格尺寸和类型，以适应观察需求。
6.贴膜时要使薄膜均匀平整，并避免出现气泡或杂质。
总之，TEM制样是一项复杂而关键的过程，要保证样品的质量和可观察性，需要仔细选择方法、控制操作参数、注意样品的保护与处理。
合理的样品制备能够获得高质量的TEM图像，并提供准确的实验数据和结论。
TEM透射电子显微镜教程
TEM透射电子显微镜一、制样二、开机1.开循环水：先按下下面的黑色按钮，再按下上面的黑色按钮；2.主机开Col键,开机（软件自启）；三、放样1.出样品杆：向外拉部分杆，顺时针旋转15°，再向外拉部分杆，逆时针旋转30°,红灯亮，松手，拨下Air开关，等红灯灭，完全拉出杆。
（黑色圈以后的部分不能碰到，注意不要碰到杆尖端的钻石）；2.放样：铜网放到四、进样1.杆上的螺丝对准进样孔的凹槽插入，等红灯亮，往上拨Air杆，绿灯亮，顺时针30°推进，然后逆时针15°推进，完成进样。
五、软件操作1.加压：点击右侧第四个HV图标，弹出一个框，在框内选择HV ON,等高压上升到100；2.点亮灯丝：点框内的Filame on(显示为10μA为正常)；3.按下操作键盘的lens reset钮，旋转Brightness钮调整亮度。
右击左侧工具栏Stage,弹出一个框，点击Holder,下拉菜单，选择样品序号。
关掉此框，移动轨迹球，调整倍数寻找样品；4.旋转M钮，放大倍数，若变暗，逆时针旋转Brightness旋钮；5.按下WOB按钮，进行辅助对焦。
如果样品在视野内晃动剧烈，调整样品杆下方的银色金属旋钮（Z轴），直到样品不在晃动；6.右击左侧工具栏CCD，又出来一个框，这个时候要进行调整亮度，使框中最下方的screen density调为-12.点击Run。
7.调节亮度使长方框里的最右侧的红色峰位于框中间位置，然后用Focus聚焦。
准备拍的时候要按灭WOB辅助聚焦按钮，点击Freeze,点save保存图片。
8.如果要在同一倍数下拍，点击Run,继续拍摄。
如果要缩小倍数大范围找样，点Stop,缩小倍数，调节亮度找到合适样品。
六、出样1.点击左侧工具栏HV，在框里点击beam off。
2.出样品杆：向外拉部分杆，顺时针旋转15°，再向外拉部分杆，逆时针旋转30°,红灯亮，松手，拨下Air开关，等红灯灭，完全拉出杆。
TEM-操作规范
查看仪器控制面板上的指示灯（正常情况为On 灯灭，Of 、Vac 和 HT 灯亮）。
A 口口查看样品台的指示灯（正常情况指示灯不亮）检查空调、冷却水机、空气压缩机、不间断电源及其他相关设备仪表的工作状况，确保 其正常运行。
检查实验器材（样品杆、镊子、杜瓦瓶、投影室视窗）是否有损坏。
检查仪器使用日志。
二、登陆用户界面（User In terface ）在登陆界面输入用户名和密码（直接进入，现在没设）。
启动主程序 Tec nai User In terface （一般是开启状态）。
再次检查仪器是否处于正常状况。
确认Column Valves Closed 按钮处于关闭状态（黄色）。
查看真空和高压值是否正常：真空：在Tec nai User In terface 软件中，在 Setup Vacuum 控制面板中：Gun ⑴，Column （6）, Camera （30-32）的压力指示条都应该是绿色的才为正常。
高压：在 TecnaiUser In terface 软件中，在 Setup HighTe nsio n 控制面板中：在正常情况 下，High Tension 指示条为黄色，高压指示值为 200kV （高压平时一直加到 200kV ）。
FEG Control 控制面板中，Op erate 是黄色的（灯丝开启状态）。
查看样品台位置是否正常。
＜注意事项＞1. TEM 操作程序（笔记）检查仪器是否运行正常1. 2. 3.① ② ③d I --I T和 心 1代 ■■ Vrm ■上二^—-3*5 1 石.I I -J 1 I I . r1 绘I I ・■■* . ■■ ▼JnT£M Bn^nt AridSA 逊B[ it 宙.a 二a. 皿*曲 _1. 2. 3. 4. 5. 6. Vacuum 中，Status 显示为COL.V ALVES , Gun 的真空值必须为 1, Column 值必须为6, camera值小于40。
tem样品制备以及浓度要求
tem样品制备以及浓度要求tem样品制备以及浓度要求是生物、化学等领域实验室常见的操作步骤。
为了获得高质量的tem样品，制备过程和浓度控制至关重要。
本文将详细介绍tem样品制备的流程与方法，以及各种溶液的浓度要求。
一、tem样品制备概述tem样品制备主要包括样品处理、固定、切片、染色、洗涤与脱水、透明化与包埋、切片染色、观察与分析等环节。
在实际操作中，每个环节都需要严格把控，以保证样品的质量和制备效果。
二、制备流程与方法1.样品处理：首先从实验动物或植物中获取所需的组织样品，将其浸泡在生理盐水或PBS缓冲液中，以保持细胞形态。
2.样品固定：将处理好的样品转移到固定液中，常用的固定液有戊二醛、多聚甲醛等，固定液浓度为4%。
固定过程中，应确保样品充分浸泡，以达到良好的固定效果。
3.切片：将固定好的样品进行切片，常用的切片设备有旋转切片机和冷冻切片机。
切片厚度根据实际需求和观察仪器而定，一般为50-70μm。
4.染色：将切片转移到染色液中，染色液可以是Goat Solution、抗兔/鼠IgG等，浓度为1:50-1:100。
染色过程中，需注意温度和时间控制，以保证染色效果。
5.洗涤与脱水：染色后，用PBS缓冲液轻轻洗涤切片，去除多余的染色剂。
然后进行脱水，脱水液可以采用系列酒精（70%、80%、90%、100%），每个浓度停留3-5分钟。
6.透明化与包埋：将脱水后的切片转移到透明液中，常用的透明液有丙酮、乙酸乙酯等，浓度为1:1。
透明化后，将切片转移到包埋液中，包埋液可以选择丙烯酸、环氧树脂等，浓度为1:1。
7.切片染色：将包埋好的切片进行切片染色，染色液可以是Envision、DAB等，浓度为1:50-1:100。
染色过程中，注意控制温度和时间。
8.观察与分析：将染色后的切片放置在显微镜下观察，采集图像并进行分析。
观察指标包括细胞形态、组织结构、染色深度等。
三、浓度要求1.固定液浓度：4%2.染色液浓度：1:50-1:1003.洗涤液浓度：PBS缓冲液4.脱水液浓度：系列酒精（70%、80%、90%、100%）5.透明液浓度：1:16.包埋液浓度：1:1通过以上详细的tem样品制备流程和浓度要求，可以确保获得高质量的tem样品。
透射电子显微镜的正确使用方法
透射电子显微镜的正确使用方法透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种非常强大的显微镜工具，能够观察微小的物质结构，并提供高分辨率的图像。
然而，由于其复杂的操作和灵敏的性能，正确使用透射电子显微镜需要一些专业的技巧和注意事项。
第一部分：仪器准备在启动透射电子显微镜之前，首先要确保仪器的基本情况良好。
检查电子束的亮度和对角度的调整是否正常，以及是否有足够的真空保持在可靠的水平。
为了获得高质量的图像，还需要校准样品台的倾斜和旋转角度。
第二部分：样品制备样品制备是获得清晰图像的重要步骤。
首先，样品必须是极薄的，通常在纳米或亚纳米尺寸范围内。
常见的样品制备技术包括机械切片、离心旋涂、离子薄片制备等。
在制备过程中，还需要注意避免样品受到气体、粉尘或液体的污染。
第三部分：对样品的放置将样品放入显微镜的样品台中时，需要小心而谨慎。
必须保证样品完全平稳和对焦。
推荐的方法是使用化学钳夹取样品，并通过显微镜的观察窗口来定位和调整样品的位置。
第四部分：参数设置在开始观察样品之前，需要进行一些参数设置。
这包括加速电压、对比度、亮度、聚焦和孔径。
这些参数的选择将直接影响到所得到的图像的清晰度和对比度。
为了以最佳的方式捕捉样品的细节，需要根据样品的性质和所需分辨率进行调整。
第五部分：图像获取和分析一旦参数设置完毕，可以开始进行图像获取和分析。
透射电子显微镜可以提供高分辨率、具有深度和表面细节的图像。
拍摄图像时，要避免电子束超过样品所能承受的剂量，以免对样品造成损害。
此外，还需要注意调整对比度和亮度，确保获得清晰的图像。
第六部分：数据处理和解释通过透射电子显微镜，我们可以获得丰富的图像和数据。
为了更好地理解样品的结构和性质，需要对这些数据进行进一步的处理和解释。
常见的处理方法包括图像增强、3D重建和能谱分析。
这些方法可以使我们更全面地了解样品的微观结构和化学成分。
总结：透射电子显微镜是一种非常重要的科学工具，可以帮助研究人员深入研究物质的微观结构。
TEM操作步骤及注意事项
FEI TECNAI 20透射电镜目录电镜操作面板...................................... - 2 - 使用步骤：.......................................... - 4 -一.放置样品 ..................................... - 4 -二.合轴 ............................................. - 4 -三.拍形貌 ......................................... - 5 -四.踩带轴 ......................................... - 6 -五、拍衍射 ...................................... - 6 -六、能谱分析 .................................. - 7 -七、高分辨 ...................................... - 7 -八、拔样品杆及关机 ...................... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview ，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close ，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
TEM操作步骤及注意事项教学提纲
精品文档FEI TECNAI 20透射电镜目录电镜操作面板...................................... - 2 - 使用步骤：.......................................... - 4 -一.放置样品 ..................................... - 4 -二.合轴 ............................................. - 4 -三.拍形貌 ......................................... - 5 -四.踩带轴 ......................................... - 6 -五、拍衍射 ...................................... - 6 -六、能谱分析 .................................. - 7 -七、高分辨 ...................................... - 7 -八、拔样品杆及关机 ...................... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview ，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close ，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
TEM-操作规范
TEM-操作规范TEM 操作程序（笔记）1. 检查仪器是否运⾏正常①查看仪器控制⾯板上的指⽰灯（正常情况为On 灯灭，Off 、Vac 和HT 灯亮）。
②查看样品台的指⽰灯（正常情况指⽰灯不亮）。
③检查空调、冷却⽔机、空⽓压缩机、不间断电源及其他相关设备仪表的⼯作状况，确保其正常运⾏。
④检查实验器材（样品杆、镊⼦、杜⽡瓶、投影室视窗）是否有损坏。
⑤检查仪器使⽤⽇志。
⼆、登陆⽤户界⾯（User Interface ）1.在登陆界⾯输⼊⽤户名和密码（直接进⼊，现在没设）。
2.启动主程序Tecnai User Interface （⼀般是开启状态）。
3.再次检查仪器是否处于正常状况。
①确认Column Valves Closed 按钮处于关闭状态（黄⾊）。
②查看真空和⾼压值是否正常：真空：在Tecnai User Interface 软件中，在Setup→Vacuum 控制⾯板中：Gun(1), Column(6), Camera(30-32)的压⼒指⽰条都应该是绿⾊的才为正常。
⾼压：在TecnaiUser Interface 软件中，在Setup→HighTension 控制⾯板中：在正常情况下，High Tension 指⽰条为黄⾊，⾼压指⽰值为200kV （⾼压平时⼀直加到200kV ）。
FEG Control 控制⾯板中，Operate 是黄⾊的（灯丝开启状态）。
③查看样品台位置是否正常。
<注意事项>62001.Vacuum中，Status显⽰为COL.V ALVES，Gun的真空值必须为1，Column值必须为6，camera值⼩于40。
2.如果出现红⾊，数值为99，说明仪器真空破坏，不得进⾏实验。
3.High Tention必须为黄⾊，数值为200kV。
4.FEG中Operate必须为黄⾊。
5.⽆报警符号出现。
6.若样品位置X，Y，Z，A，B不为0，需要进⾏归零。
三、装液氮1.将投影室视窗⽤挡板挡住。
高分辨电镜(TEM)分析操作指南
JEM2100F操作注意事项：1.抽拔样品杆时置KV档，抽真空<2×10-5Pa才可以开beam阀。
2.抽拔样品杆1）先置KV档2）将样品杆归零（如果是双倾台，拔下Y线）3）抽拔样品杆到不能动位置向内旋置顶端再抽拔一次再旋置顶端4）真空开关调下，听到放气声再全部拔出。
3.关机时，降高压160KV，即Stand By.4.下班前烘液氮：插加热棒；调KV档;maintenance--ACD Bake---ACD heat: on 开机步骤1：如果开始的光斑不是一个，而是多个类似衍射斑点的话，需要先调整Z方向将光斑缩小成一个点。
步骤2：照明系统合轴2.1. 电子枪合轴：1.开电子枪，按下STD FOCUS，倍率x40k，spot 1，Alpha 3；2.Maintenace---Alignment：调出面板，选择Anode+Gun3.调节DEF/STIG X，Y，直到光斑同心收缩（所有按钮旁边的CRS按键：按亮为粗调，暗为细调）4.关掉Anode2.2 Spot1-spot5合轴（1-5和轴）：1.Maintenance-Alignment 选取DEF Selector-Gun，转动BRIGHTNESS，将光斑束缩小之后，将Spot size 调至1，以Shift X,Y将光斑移到荧光屏中心2. Maintenance-Alignment 选择DEF Select-CLA (condenser lensaperture)，将Spot size 调到5，以Shift X,Y将光斑移到荧光屏中心。
3.重复上面两步，直到光斑不动，保持在中心为止。
2.3 聚光镜光阑校正：将光斑散开到与荧光屏相似大小，通过聚光镜光阑机械位置调节光斑位置到与荧光屏同心：调节Brightness，光斑能够同心收缩2.4 聚光镜消象散：1.顺时针调节Brightness，将光斑散开2.按下Cond STIG，调整DEF/STIG X,Y使光斑呈圆形。
TEM 操作规程
TEM 操作规程1、接通电源。
2、接通循环冷却水电源。
3、接通电镜电源开关，红灯亮。
4、接通电脑开机键，同时接通显示器开关。
5、输入登陆密码，进入电脑工作界面。
6、待工作界面电镜标识变绿色，点击电镜操作标识登陆。
7、进入登陆操作界面后，接通抽真空开关VAC键，电镜开始抽真空。
8、回答提示栏提出的问题，机器自检。
9、戴震控指示处变为绿色时及相应按键处激活状态时，点击HT按键。
10、从20KV起逐步加HT。
11、检查发射电流的设置是否在适当位置。
12、装入超薄切片：1）首先检查样品室红灯是否处于熄灭状态，红灯亮时不得送样品2）将样品杆销对准白色标识线且水平插入样品室，此时样品室红灯亮3）待红灯灭，逆时针旋转样品杆，将其送入镜筒。
13、观察镜筒真空，当COL在20LOG以下时，点击电镜电流按键。
14、待电流强度升至预先设置的数值后，点击镜筒阀门开关，此开关按键由黄色变为灰色。
15、用放大倍率扭，将放大倍率降到合适位置。
16、用操作盘，左手旋钮控制观察亮度。
17、同时用左手轨迹球控制光斑对中。
18、同时用右手轨迹球移动被观察样品的图象，用聚焦旋钮聚焦图象。
19、消除物镜像散。
20、将要拍照的视野放入观察屏的四框内，调整亮度使曝光时间在3.0秒左右，按左手操作台上的Export键拍照图象。
21、数码摄像。
22、关机：1) 将放大倍率降低，取出样品杆2) 切断灯丝电源3)切断HT4)切断Vac真空开关5)带冷却30分钟后关循环水电源6)推出操作界面7)按电镜开关OFF键红、绿灯同亮。
注意事项：1、必须确认冷却循环水启动无误后，方可进行下一步操作；2、更换样品需由仪器负责人操作，以免发生故障。
工作原理：利用电子射线（或称电子束也称电子波）穿透样品，而后经多级电子放大后成像于荧光屏。
主要优点：分辨率高，可用来观察组织和细胞内部的超微结构以及微生物和生物大分子的全貌。
根据加速电压的大小分为以下3种：1）一般TEM。
TEM制样方法及详细步骤
TEM制样方法及详细步骤TEM（Transmission Electron Microscope）是一种高分辨率的电子显微镜，主要用于观察物质的微观结构和形态。
其制样方法是获得高质量TEM样品的关键步骤之一、下面将详细介绍TEM制样的常用方法及其步骤。
1.选择合适的样品:首先需要选择合适的样品进行TEM观察。
常见的样品可以是金属、陶瓷、生物材料、纳米材料等。
2.样品固化:对于柔软或液态的样品，需要进行固化处理。
常见的方法包括冷冻固化、溶剂固化和等离子固化等。
冷冻固化适用于水基液体样品，而溶剂固化适用于有机溶液样品。
3.样品切片:将固化的样品切片成薄片，一般厚度为几百纳米至几十微米。
常见的切片工具包括超声切割机、切片机和玻璃刀等。
切片时需要保持样品的湿润状态，以避免切片过程中出现伪影。
4.转移样品到导电基片上:将样品切片转移到导电基片上。
常用的导电基片有铜网格、聚合物膜和碳膜等。
转移样品时要避免产生气泡和杂质，以确保样品的质量。
5.超薄化:将样品的厚度进一步减小到大约100纳米以下的范围，以适应TEM的观察条件。
常见的方法有机械薄化和离子薄化。
机械薄化实际上就是通过磨削和打磨的方式将样品的厚度减小，而离子薄化则是利用离子束对样品进行腐蚀，达到薄化的目的。
6.入射（预处理）:在TEM观察前，为了提高样品的对比度和可见性，通常需要进行预处理。
可能的预处理方法包括吸收染料、金属蒸镀和有机膜覆盖等。
7.放置样品:选择合适的TEM网格，将样品放置在网格孔口上。
网格可以选择自带孔口或膜孔口的类型，根据样品的性质和目的的不同进行选择。
8.观察和记录:将制备好的TEM样品放入TEM仪器中进行观察和记录。
在观察过程中需要调整TEM仪器的参数，如加速电压、聚焦和对比度等，以获得所需的高分辨率图像。
9.分析和解释:通过观察记录的TEM图像，对样品的微观结构和形态进行分析和解释。
可以进行晶体学分析、晶体缺陷分析、显微结构表征等。
TEM简介
TEM简介1.操作事项（1）检查仪器是否运行正常。
（2）登录用户界面。
（3）装液氮。
①将投影室视窗用挡板挡住。
②戴上手套，将液氮小心地倒入杜瓦瓶中（不要装满），慢慢将铜辫伸入杜瓦瓶中，并将杜瓦瓶安置在支架上。
③将瓶中的液氮装满，并盖上盖子。
④往能谱罐中加满液氮（一般不用此操作）。
（4）装样品。
将待测样品装入样品杆，样品正面需朝下。
样品杆有两种类型：单倾：只能在A方向倾转；双倾：在A，B两个方向都能倾转，如不需倾转样品，请选择单倾样品杆。
①选择单倾样品杆，取下前端套筒。
②检查样品杆尖端以及夹具是清洁干燥的。
③保持一只手顶在样品杆的末端，确保它不会移出套管。
④将（套管支持架上其中一个孔中的）工具插入到夹子前面的孔中，然后提起夹子到最大可能的角度。
⑤将样品正面朝下，放在样品杆尖端圆形的凹槽处。
⑥用工具把夹子小心地降到样品之上，并确保样品保持在正确位置。
样品安全夹子必须小心地放低，否则，样品和夹子会被损伤，将样品杆旋转180o，轻敲套管，确保样品不会掉落。
双倾样品杆：①选择双倾样品杆，取下前端套筒。
②检查样品杆O圈是清洁干燥的。
③保持一只手顶在样品杆的末端，确保它不会移出套管。
④用六角棒将样品固定螺母旋下，并取出垫圈（垫圈可以不用）。
⑤将样品正面朝下，放在样品杆O。
（5）进样。
①再次确认样品的x，y，z，A，B五个坐标近似为零。
如果不为零，点击Holder进行归零。
②确认样品台的红灯熄灭（如果红灯是亮的，应点击Holder，这时红灯就会熄灭）。
③手拿样品杆，将限位突针对准标线，沿轴线平行将样品杆小心插入，向内滑动样品杆直到遇到阻挡。
样品预抽室开始预抽，样品台的红灯亮，预抽开始。
④此时，样品杆不能旋转。
若样品杆能够旋转，说明样品杆没有进到位，应慢慢把样品杆向左、右稍微转动直到完全进到位。
圈内，并确保样品保持在正确位置。
（6）启动场发射枪电流（一直是开启状态）。
（7）启动软件。
（8）开启阀门。
（9）设置共心高度。
透射电子显微镜的操作流程
透射电子显微镜的操作流程透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种高分辨率的显微镜，能够在纳米级别观察样品的内部结构和原子级别的细节。
本文将介绍透射电子显微镜的操作流程。
一、准备工作在操作透射电子显微镜之前，需要进行一些准备工作。
首先，确保显微镜的主要部件都处于正常工作状态，如电子源、电子透镜、样品夹持器等。
其次，检查透射电子显微镜的真空系统是否正常运行，避免气体对电子束的干扰。
最后，选择适当的样品，将其切片并磨制至适当厚度，以便透射电子通过。
二、样品装载将事先制备好的样品装载到透射电子显微镜的样品夹持器上。
夹持器通常有细螺纹固定装置，通过轻轻旋转可以固定样品。
在装载过程中，需注意避免样品与夹持器之间产生机械应力，以免影响显微镜观察的结果。
三、对准操作对准是使用透射电子显微镜必不可少的一步，它确保电子束能够准确地照射在样品上并通过样品，以获取清晰的图像。
对准操作主要包括以下几个步骤：1. 调整透射电子显微镜的电子源，使其发射的电子束平行并具有适当的亮度和聚焦度。
2. 调节电子透镜系统，包括调节聚焦透镜和透镜间距，以使电子束在样品上得到合适的聚焦。
3. 利用荧光屏或高放大倍率的光学系统对电子束进行对齐，以确保电子束与样品表面垂直。
四、图像获取在对准完成后，可以开始进行图像的获取。
操作过程中需要注意以下几点：1. 调节透射电子显微镜中的电子束强度，避免过高的电子束强度对样品产生伤害。
2. 选择适当的像场和放大倍率，使得所需观察的细节能够在图像中清晰可见。
3. 调整对比度和亮度，以获得最佳的图像效果。
4. 在浏览图像时，可以调整样品的不同区域和焦平面，以获取更全面的信息。
五、数据分析与处理获取到的图像可以进行数据分析与处理，提取感兴趣的信息。
常见的数据处理方法包括图像增强、图像对比度调整、图像滤波等。
这些方法可以帮助更好地理解和解释样品的结构和特性。
透射电镜的使用流程
透射电镜的使用流程简介透射电镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）是一种能够使用电子束来观察物质的高分辨率显微镜。
它可以提供比光学显微镜更高的放大倍数和更高的分辨率，因此被广泛应用于材料科学、生物学和纳米技术等领域。
本文将介绍透射电镜的使用流程。
使用流程1.准备工作–关掉手机等干扰设备，确保安静的实验环境。
–戴上护目镜和手套，确保实验操作的安全。
–确保透射电镜和相关设备处于正常工作状态，并联网（如果需要）。
2.打开透射电镜–打开透射电镜的主机，并等待系统启动。
–检查电子束的亮度和对比度，根据需要进行调整。
3.样品制备–准备样品，并将其切割成薄片，确保透射电镜的电子束可以穿透样品。
–使用显微镜或其他相关设备，将样品转移到透射电镜的样品台上。
4.调整透射电镜参数–使用透射电镜的控制台，调整电子束的聚焦和对准，以确保获得最佳的图像质量。
–根据样品的特点和需要，选择适当的电子束诸如干涉仪或投影仪。
5.开始观察–将透射电镜设置为所需的放大倍数，并将样品移动到电子束的路径上。
–通过电子感应器或激光系统，记录所观察到的图像，可以通过照相机或视频设备进行记录。
6.数据分析和保存–对所得到的图像进行分析和解释，可以使用透射电镜软件进行图像处理和测量。
–根据需要，将数据保存到计算机或其他存储设备中，以备后续分析和研究。
7.关闭透射电镜–使用透射电镜的控制台，将电子束设置为关机状态。
–关闭透射电镜的主机，并确保所有相关设备也被关闭。
注意事项•在操作透射电镜时，注意避免触摸样品或其中的部分，以免造成污染或损坏。
•当使用透射电镜时，要避免使用过高的电子束能量，以防止样品的热损伤。
•在整个使用流程中，保持实验环境干净和整洁，以确保获得高质量的图像结果。
•在存储和处理数据时，注意合理规划数据的文件结构和命名，以方便后续的管理和使用。
透射电镜是一项复杂而强大的工具，在使用过程中需要谨慎操作，并了解每个步骤的目的和要求。
透射电镜样品制备流程及注意事项
透射电镜样品制备流程及注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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TEM操作步骤及注意事项
精品文档FEI TECNAI20透射电镜目录电镜操作面板................. - 2 - 使用步骤：................... - 4 -一.放置样品................ - 4 -二.合轴.................... - 4 -三.拍形貌.................. - 5 -四.踩带轴.................. - 6 -五、拍衍射................. - 6 -六、能谱分析............... - 7 -七、高分辨................. - 7 -八、拔样品杆及关机......... - 8 -电镜操作面板镜筒注意事项1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：一.放置样品1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
旋入样品杆时，要一手拿着，一手托着，放置进入过快。
然后点Tube on。
然后点Col Values Closed。
检查4．关灯，取下蒙皮。
5.点击→Search，即可看到样品所在位置。
开始找样品中心空洞。
二.合轴1.在Spot size为1，低倍（6200X或8700X）下找到薄区（朝着光亮处找）。
然后调焦。
选择最佳物镜电流值92.5854（按Eucentric focus）。
TEM制样方法及详细步骤
由透射电镜的工作原理可知，供透射电镜分析的样品必须对电子束是透明的；此外，所制得的样品还必须可以真实反映所分析材料的某些特征，因此，样品制备在透射电子显微分析技术中占有相当重要的位置，也是一个涉及面很广的题目。
大体上透射电镜样品可分为间接样品和直接样品。
我们下面将对间接样品的制备作简单介绍。
间接样品“复型”可以分为五步来进行：第一步，在拟分析的样品表面滴一滴丙酮，将醋酸纤维素薄膜即A.C.纸覆盖其上，适当按压形成不夹气泡的一级复型；第二步，待上述一级复型干燥后，小心地将其剥离，并将复制面向上平整地固定在玻璃片上；第三步，将固定好复型地玻璃片连同一白瓷片置于真空镀膜室中，以垂直方向喷涂碳，以制备由塑料和碳膜构成地“复合复型”。
白色瓷片表面在喷碳过程中颜色的变化可以表示碳膜的厚度。
第四步，将复合复型上要分析的区域剪为略小于样品台钢网的小方块后，使碳膜面朝里，贴在事先熔在干净玻璃片上的低熔点石蜡层上，石蜡液层冷凝后即把复合膜块固定在玻璃片上。
将该玻璃片放入丙酮液中，复合复型的A.C.纸在丙酮中将逐渐被溶解，同时适当加热以溶解石蜡。
最后，待AC纸和石蜡溶解干净后，碳膜（即二级复型）将漂浮在丙酮液中，将其转移至清洁的丙酮液中清洗后，再转移至盛蒸馏水的器皿中。
此时，由于水的表面力，碳膜会平展地漂浮在水面，用样品铜网将其捞起，干燥后即可置于电镜下观察。
透射电镜的样品制备是一项较复杂的技术，它对能否得到好的ＴＥＭ像或衍射谱是至关重要的．投射电镜是利用样品对如射电子的散射能力的差异而形成衬度的，这要求制备出对电子束”透明”的样品，并要求保持高的分辨率和不失真．电子束穿透固体样品的能力主要取决加速电压，样品的厚度以及物质的原子序数．一般来说，加速电压愈高，原子序数愈低，电子束可穿透的样品厚度就愈大．对于１００～２００ＫＶ的透射电镜，要求样品的厚度为５０～１００ｎｍ，做透射电镜高分辨率，样品厚度要求约１５ｎｍ（越薄越好）．透射电镜样品可分为：粉末样品，薄膜样品，金属试样的表面复型．不同的样品有不同的制备手段，下面分别介绍各种样品的制备．（１）粉末样品因为透射电镜样品的厚度一般要求在１００ｎｍ以下，如果样品厚于１００ｎｍ，则先要用研钵把样品的尺寸磨到１００ｎｍ以下，然后将粉末样品溶解在无水乙醇中，用超声分散的方法将样品尽量分散，然后用支持网捞起即可．（２）薄膜样品绝大多数的ＴＥＭ样品是薄膜样品，薄膜样品可做静态观察，如金相组织；析出相形态；分布，结构及与基体取向关系，错位类型，分布，密度等；也可以做动态原位观察，如相变，形变，位错运动及其相互作用．制备薄膜样品分四个步骤：ａ将样品切成薄片（厚度１００～２００微米），对韧性材料（如金属），用线锯将样品割成小于２００微米的薄片；对脆性材料（如Ｓｉ，ＧａＡｓ，ＮａＣｌ，ＭｇＯ）可以刀将其解理或用金刚石圆盘锯将其切割，或用超薄切片法直接切割．ｂ切割成φ３ｍｍ的圆片用超声钻或ｐｕｎｃｈｅｒ将φ３ｍｍ薄圆片从材料薄片上切下来．ｃ预减薄使用凹坑减薄仪可将薄圆片磨至１０μｍ厚．用研磨机磨（或使用砂纸），可磨至几十μｍ．ｄ终减薄对于导电的样品如金属，采用电解抛光减薄，这方法速度快，没有机械损伤，但可能改变样品表面的电子状态，使用的化学试剂可能对身体有害．对非导电的样品如瓷，采用离子减薄，用离子轰击样品表面，使样品材料溅射出来，以达到减薄的目的．离子减薄要调整电压，角度，选用适合的参数，选得好，减薄速度快．离子减薄会产生热，使样品温度升至１００～３００度，故最好用液氮冷却样品．样品冷却对不耐高温的材料是非常重要的，否则材料会发生相变，样品冷却还可以减少污染和表面损伤．离子减薄是一种普适的减薄方法，可用于瓷，复合物，半导体，合金，界面样品，甚至纤维和粉末样品也可以离子减薄（把他们用树脂拌合后，装入φ３ｍｍ金属管，切片后，再离子减薄）．也可以聚集离子术（ＦＩＢ）对指定区域做离子减薄，但ＦＩＢ很贵．对于软的生物和高分子样品，可用超薄切片方法将样品切成小于１００ｎｍ的薄膜．这种技术的特点是样品不会改变，缺点是会引进形变．（３）金属试样的表面复型即把准备观察的试样的表面形貌（表面显微组织浮凸）用适宜的非晶薄膜复制下来，然后对这个复制膜（叫做复型）进行透射电镜观察与分析．复型适用于金相组织，断口形貌，形变条纹，磨损表面，第二相形态及分布，萃取和结构分析等．制备复型的材料本身必须是”无结构”的，即要求复型材料在高倍成像时也不显示其本身的任何结构细节，这样就不致干扰被复制表面的形貌观察和分析．常用的复型材料有塑料，真空蒸发沉积炭膜（均为非晶态物质）．常用的复型有：ａ塑料一级复型，分辨率为１０～２０ｎｍ；ｂ炭一级复型，分辨率２ｎｍ，ｃ塑料－炭二级复型，分辨率１０～２０ｎｍ；ｄ萃取复型，可以把要分析的粒子从基体中提取出来，这种分析时不会受到基体的干扰．除萃取复型外，其余复型只不过是试样表面的一个复制品，只能提供有关表面形貌的信息，而不能提供部组成相，晶体结构，微区化学成分等本质信息，因而用复型做电子显微分析有很大的局限性，目前，除萃取复型外，其他复型用的很少．TRANSMISSION ELECTRON MICROSCOPE利用电子，一般是利用电子透镜聚焦的电子束，形成放大倍数很高的物体图像的设备。
扫描电镜操作注意事项
4. 样品脱水干燥贴牢后，需放置玻璃密封真空（加干 燥剂）干燥器皿内。样品喷镀后，最好当天观察， 照相,如看不完，还需放干燥器中密封真空保存，防 灰尘潮气进入。最好勿超过3个月。 5. 因条件有限，无临界点干燥仪，我们采用六甲基二 胺烷（HMDS）代替临界点干燥仪，优点是快速经 济，不受仪器限制，看普通标本，组织细胞支架材 料，与常规临界点干燥处理效果基本一致；看精细 材料（ECM）的分辨率还是有差距。 6. 胶原纤维样品梯度脱水前的漂洗液我们采用无菌的 三蒸水洗2次，防止盐结晶沉积在样品表面，影响 与超微纳米胶原的混淆。
扫描电镜样品的制做与观察
解放军总医院骨科研究所 黄靖香
目的
随着组织工程技术的发展兴起，如支架材料 的制作后，需观察样品中的孔径大小 ，与细 胞的相融性，生长形态变化等。用扫描电镜 观察获得清晰图像，是重要的检测手段之一。
电子显微镜分透射和扫描电镜两种，透射电 镜（TEM）是观察样品中的内部结构：如细 胞器等；扫描电镜（SEM）可观察样品中的 表面形态结构。
1. 材料准备、液体配制： 1）玻璃器皿需泡酸、蒸溜水清冼后灭菌备用。 2）磷酸缓冲液（PBS-0.1M PH-7.4）配制：磷 酸二氢钠2.964g , 磷酸氢二钠29.011g加三蒸水 1000ml，也可用不加酚红无菌Dhankes液代替。 3）固定液的配制：用PBS缓冲液配成2.5%戍 二醛和1%的四氧化锇。
二. 比较不同干燥方法的优缺点
材料分类 A 单纯支架材料：看孔隙率和孔径大小分布，用普通冷冻 干燥机冷冻干燥法干燥48h的支架→粘贴后→喷金上机观 看
干燥喷镀上机观察
B.活细胞不处理环镜扫描直观看细胞
活细胞环镜扫描图
C. 细胞常规梯度脱水：用冷冻干燥机处理 细 胞收缩，断裂，立体感差。
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精品文档
FEI TECNAI20透射电镜
目录
电镜操作面板................. - 2 - 使用步骤：................... - 4 -
一.放置样品................ - 4 -
二.合轴.................... - 4 -
三.拍形貌.................. - 5 -
四.踩带轴.................. - 6 -
五、拍衍射................. - 6 -
六、能谱分析............... - 7 -
七、高分辨................. - 7 -
八、拔样品杆及关机......... - 8 -
电镜操作面板
镜筒
注意事项
1. 使用电镜时，首先要观察电镜的状态。
2. 有黄色背景的按钮，要谨慎。
3. 观察一系列数值，包括：最佳电流值、Spot size 、样品各坐标是否都归零等。
使用步骤：
一.放置样品
1.放样品时，夹子不能碰到银环，放置后，用手振动玻璃管，使样品至中间状态，然后用螺丝帽压紧（不可过紧，固定住即可）
2.插入样品杆时，要使杆上小柱的位置对准左上角螺丝，插至凹槽完全进入，然后连上数据线。
确认在双束（双倾台不是双束）下，点两下回车。
打开抽真空示意图→Vacuum Overview，开始抽真空。
3.两次抽真空完毕后，逆时针旋转小柱对准Close，插入。
抽真空共分成两段时间，第二个倒计时结束后，即红灯一灭，必须在20秒内将样品杆逆时旋入。
旋入样品杆时，要一手拿着，一手托着，放置进入过快。
然后点Tube on。
然后点Col Values Closed。
检查
4．关灯，取下蒙皮。
5.点击→Search，即可看到样品所在位置。
开始找样品中心空洞。
二.合轴
1.在Spot size为1，低倍（6200X或8700X）下找到薄区（朝着光亮处找）。
然后调焦。
选择最佳物镜电流值9
2.5854（按Eucentric focus）。
2.放大倍数至86000X，然后将光斑移至孔区域，开始合轴。
观察光斑是否为圆形，非圆形时要进行调圆→condenser，调圆后点→None
3.即2.6合轴。
在Tune菜单下进行操作。
（1）Spot size 2→Gun shift→光斑移至中间→Done
（Spot size大小用R3和L3进行加减。
）
（2）Spot size6→Beam shift→光斑移至中间→Done
重复以上步骤，直至光斑在中间位置。
（3）然后将Spot size 降至1→光斑缩小并移至中心(确认光斑在顺时针放大逆时针缩小状态)→点击
Beam shift PPX→调动多功能钮至两个圆重合→Done
Beam shift PPY→调节多功能钮至两个圆重合→Done （4）移动样品杆，将样品边缘对准中间小黑点，然后抬起左侧的小镜子→Rotation Center→调节多功能钮至视野中样品上下跳动（不能左右晃动）→Done
三.拍形貌
1.找空洞
2．2、6合轴，散开光斑。
3.倍数在2250X—86000X下都可以进行拍摄。
套上物镜光阑，先用最大的光阑找区域，然后换成小号。
用物镜光阑套住感兴趣的区域。
4.然后将光斑散开，时刻注意右边的红绿条，要保证方框始终在绿色区域（其目的是为了保护相机）。
5.相机参数： Camera View 为0.5，Camera Acquire为1.0。
按钮R1进行抬屏，然后点Start view，加载相机，调焦，然后点Acquire，进行拍照。
6.拍完后点击stop view R1放下屏幕。
在拍照期间禁止调节放大倍数。
四.踩带轴
1、2，6合轴，调焦。
2、86000X，找到薄区且带有特点易记的区域（踩带轴过程中样品会动，这样便于识别出自己感兴趣的区域）。
3、将光斑汇聚到一点。
4、按diffraction，寻找菊池线。
菊池线汇聚的焦点一般为一正带轴，菊池线汇聚数目越多，晶带指数越低。
再按diffraction，散开光斑。
用左键盘左上角四个按钮调节样品位置，不断按diffraction查看带轴是否踩正。
不断调节，直至踩正，踩正后的衍射斑点中心在屏幕小黑点处，并且周围斑点亮度应对称。
五、拍衍射
1.先调数值，Camera View为0.03，Camera Acquire为0.3.
2.踩正带轴，低指数。
3.加上选区光阑，亮斑套住要拍衍射区域。
4.调Spot size大于等于5，在底屏看不见，在抬起的小屏上可看见。
5.点Start view加载相机→左手抬屏→Stop view→立即放下屏。
6.查看光强，Analysis→Statics→Mininum→min and max，观察最大值不超过50000，如过大应继续散开光斑或者继续调大spot size。
7.确认最大强度不超过50000时，即可进行拍照。
8.关闭选区光阑、关闭Diffication、降低Spot size到1（具体看下一步操作的要求）。
六、能谱分析
1.找感兴趣的点
2.把光斑缩小到一点，放大倍数86000倍，spotsize调到6以上。
Cps值小于20000（先RTEM Control in才能看CPS值）。
3.点击电脑屏幕下方RTEM Contor→in→Acquire(左上方，区别于拍形貌及衍射时的acquire)。
4.能谱中最高峰到2000时，点击Acquire停止。
5.若换别的区域做EDS，直接移样品杆移动到相关区域。
重复Acquire→最高峰到2000→Acquire。
若不再做EDS，点击out，降低spotsize到1，散开光斑。
七、高分辨
1、感兴趣的区域，踩正带轴吗，越正越好。
2、最佳物镜电流值。
3、用Z调焦（略欠焦）。
4、放大倍数在25万倍消象散（在44万倍以上拍高分辨像），采用一般的照相模式，相机常数0.5和1.0。
5.点击左下角MF X: image shift x（做完高分辨时记得调回Beam shift X）。
7.点击start view
8.点击Process→live→FFT
9.调焦距，用多功能钮将光斑移到样品边缘（不可用样品杆移动样品），一般样品边缘呈非晶态。
调到欠焦时的一个圆环的样式。
10.点击Tune中的objective，用多功能钮将非晶环调圆，欠焦过程是中心白圆不断扩大，过焦状态时白圆缩小。
11.用高分辨图片与FFT图片确定好正焦后，按左键盘L2使Defoucs归0，我们一般的最佳欠焦值是-70。
12.消象散后将放大倍数调到44万倍，拍高分辨像。
八、拔样品杆及关机
1、将倍数调至6200×
2、将光斑散开
3、Search—Holder
4、Setup—Col Valued Closed（若有事临时外出可暂时保留在此状态）。
5、盖上蒙皮，开灯。
6.拔样品杆：取下数据线→往外轻拔样品杆（此时有一个微弱的吸力）→露出凹槽（与进入时看见的相同）→顺时针旋转，将小柱转到底（大
概左上角螺丝）→轻轻彻底拔出样品杆（控制好力度，应一下
拔出但又不至于力过大使样品杆拔出时甩飞样品）→（当天电镜不再使用时才倒液氮烘烤，烘烤会持续4小时左右）倒液氮→点击→cryo →cryo cycle（烘烤电镜）等大约5分钟colum真空度掉到99变红可离开。
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