特殊显微镜
实验二 特殊显微镜的使用 相差显微镜
实验二特殊显微镜的使用相差显微镜实验二特殊显微镜的使用-相差显微镜实验二特殊显微镜的使用实验2.1差距显微镜一、实验目的掌控差距显微镜的原理、结构及其采用方法。
二、实验原理相差显微镜（phase-contrastmicroscope）是由p.zernike于1932年发明的，p.zernike于1953年获诺贝尔物理奖。
相差显微镜最大的特点就是可以用于观察未经染色的标本和活细胞。
人们在光学显微镜下观测被检标本时，只有在反射光的波长（颜色）和振幅（亮度）与周围介质存有变化时，方能够看见被检样品的结构。
活细胞近似于无色透明化，光波通过时，借由或反射光的波长和振幅都不出现发生改变，所以用普通光学显微镜难以分清活体的结构。
通常对于浓淡对照不大的样品，多借助紧固和染色等化学方法，并使样品和背景的散射或反射光在波长和振幅上发生变化，即为在颜色和亮度上有所差异，就可以辨识。
但有些样品一经染色就可以引发变形，染色也可以并使存有生命的样品丧生。
我们可以利用差距显微镜去展开观测。
差距显微镜利用衍射的干涉现象，将人眼不容辨别的相位差变成可以辨别的振幅高，因此它就是一种应用领域在染色困难或无法染色的新鲜标本上赢得低对照图像的新型显微镜。
相差方法应用于生物学上的主要价值，在于它能对透明的活体进行直接观察，无需采用使细胞致死的固定和染色的方法。
染色给活体以有害的影响，甚至失真。
由此，才使相差法显得异常重要。
差距就是指同一光线经过折射率相同的介质其增益发生变化并产生的差异。
增益就是所指在某一时间上，光的波动所达至的边线。
差距同意于光波所通过介质的折射率之差及其厚度，等同于折射率与厚度的乘积之差（即为光程之差），介质越薄或折射率越大，光波失速也越大。
为了达到相差效应，在相差显微镜的物镜中，装有由光学玻璃制成的相板（phaseplate）。
在圆形相扳平面上，有一圈与周围（里外）相扳厚度不同的或凸或凹的圆环。
相板分两部分：图1-10差距显微镜光路图共轭面（conjugatearea）：通常为环状，是通过直射光的部分。
偏振光显微镜用途作用
偏振光显微镜用途作用
偏振光显微镜是一种特殊的光学显微镜，它通过使用偏振光和偏振器来观察样本中的光学性质。
以下是偏振光显微镜的主要用途和作用：
1. 材料研究和分析：偏振光显微镜可以用来研究和分析各种材料的光学性质，例如晶体的晶体结构、晶体的双折射现象以及材料中的应力分布等。
2. 生物学研究：偏振光显微镜可以用来观察和分析生物标本中的结构和组织，例如细胞、组织和生物材料中的纤维等。
3. 矿物学和地质学研究：偏振光显微镜可以帮助矿物学家和地质学家观察和识别不同矿物的光学性质，从而确定其种类和特性。
4. 材料质量控制：偏振光显微镜可以用来检测和评估材料的质量，例如纤维材料的结构和纯度等，对于纺织品、塑料、陶瓷等行业非常有用。
5. 医学诊断：偏振光显微镜在医学诊断中也有一定的应用，例如在组织学和病理学中观察和分析组织样本的组织结构和病变情况。
总的来说，偏振光显微镜可以用于观察和分析各种材料和生物样本中的光学性质，有助于研究和理解它们的结构、组织和特性。
实验一 特殊显微镜使用方法
倒置显微镜的使用方法：1.将亮度调节柄调至最小位置，接通电源，打开开关，再将亮度调节柄调至适中位置。
2.将样品置于载物台上，调节载物台纵横移动手轮，确定观察目标的位置。
3.将10X物镜置入光路，通过目镜观察，粗调焦使成像清晰。
将高倍物镜置入光路，右目镜观察，微调焦使成像清晰。
用左目镜观察，调整其上的视度调节圈，使成像清晰。
4.双手握左右相对转动，调整瞳距（双像重合）。
5.调节灯丝成像居中，然后观察样品。
相差显微镜的使用方法：1.将相差聚光镜转盘转至“0”标记处。
2.将亮度调节柄调至最小位置，接通电源，打开开关，再将亮度调节柄调至适中位置。
3.将样品置于载物台上，调节载物台纵横移动手轮，确定观察目标的位置。
4.把绿色滤色镜放入镜座的视场光阑转圈上。
5.将10X物镜置入光路，通过目镜观察，粗调焦使成像清晰。
将高倍物镜置入光路，右目镜观察，微调焦使成像清晰。
用左目镜观察，调整其上的视度调节圈，使成像清晰。
6.双手握左右相对转动，调整瞳距（双像重合）。
7.将相差聚光镜转盘转至“10”标记处，并将10X相差物镜置入光路。
（更换物镜倍数时，相差聚光镜转盘要转至匹配的数值）8.取下目镜，换上对中目镜（CT望远镜），旋松对中目镜上的螺钉并轴向抽动，使相板圆环和光阑圆环清晰，锁紧对中目镜上的螺钉。
9.调节相差聚光镜转盘两侧的调节扳手，左右推动，直至相板圆环和光阑圆环重合。
10.取下对中目镜（CT望远镜），换上目镜进行相差观察。
荧光显微镜的使用方法：1.将滤片转换拉杆拉至“E”位置，然后按倒置显微镜的使用方法中1－4步骤调整一起，作明场观察。
2.将汞灯电源箱上的电源接通，关闭荧光落射装置上的视场光阑拉杆，关闭显微镜右侧底座电源开关，开启汞灯电源开关，10分钟后，汞灯点燃至稳定状态，方可开始使用。
3.将25X荧光物镜置入光路，将滤片转换拉杆拉至所需位置，即蓝光（B）获绿光（G）的位置上。
4.将荧光落射装置上的视场光阑拉杆开至最大，粗调焦使成像清晰，观察荧光。
裂隙灯显微镜构造
裂隙灯显微镜构造
裂隙灯显微镜是一种特殊的显微镜，其构造和普通显微镜有所不同。
它主要由以下几个部分组成：
1.物镜：裂隙灯显微镜使用的物镜通常比普通显微镜的物镜长，这是因为它需要将样品的光线聚焦到裂隙灯上。
2.裂隙灯：裂隙灯是裂隙灯显微镜的关键部件，它是一个细小的光源，可以发出非常亮的光。
裂隙灯通常由氘气灯或氩气灯制成。
3.滤光片：由于裂隙灯发出的光线非常亮，它会使样品的颜色变得不真实。
因此，裂隙灯显微镜配备了各种不同颜色的滤光片，以帮助消除这种问题。
4.目镜：目镜是裂隙灯显微镜的另一个重要部分，它用于放大样品的图像，使观察者能够更清晰地看到样品。
总之，裂隙灯显微镜的构造是非常复杂的，但它的功能非常强大。
它可以帮助科学家研究各种微小的样品，包括细胞、细菌和病毒等。
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偏光显微镜用途
偏光显微镜用途一、引言偏光显微镜是一种特殊的显微镜，它具有许多其他类型的显微镜所不具备的特殊性能。
偏光显微镜主要用于材料科学、地质学、生物学等领域。
本文将详细介绍偏光显微镜的用途。
二、材料科学中的应用1. 晶体结构分析偏光显微镜可以通过观察晶体在不同方向上通过偏振器和分析器时的颜色变化来确定晶体结构。
这种方法被称为波尔法（Brewster法）或尼古拉斯法（Nicols法）。
这种方法可以帮助材料科学家确定晶体中原子排列方式和晶格参数。
2. 晶体缺陷研究偏光显微镜还可以用于研究晶体中的缺陷，如位错和空位。
这些缺陷会导致晶格畸变，从而影响材料性能。
使用偏光显微镜可以直接观察到位错和空位，并测量它们的密度和形态。
3. 热处理过程研究在材料制备过程中，经常需要进行热处理。
使用偏光显微镜可以观察材料在不同温度下的结构变化，并确定热处理过程中的相变温度和相变类型。
三、地质学中的应用1. 岩石组分鉴定偏光显微镜可以用于鉴定岩石中的不同矿物组分。
不同的矿物在偏光显微镜下具有不同的颜色和形态特征。
通过观察这些特征，地质学家可以确定岩石中的主要成分和含量。
2. 地质样品形态观察使用偏光显微镜可以观察地质样品中微小结构和颗粒的形态。
这对于确定样品来源、成因以及古环境等方面具有重要意义。
3. 矿物晶体结构研究与材料科学类似，偏光显微镜也可以用于地质学中对晶体结构的分析。
通过观察晶体在不同方向上通过偏振器和分析器时的颜色变化，可以确定晶体结构和晶格参数。
四、生物学中的应用1. 细胞形态观察生物学家可以使用偏光显微镜观察细胞的形态和结构。
偏光显微镜可以显示细胞中的各种结构，如细胞膜、细胞核、细胞质等。
2. 组织学研究偏光显微镜可以用于组织学研究。
通过观察组织切片在不同方向上通过偏振器和分析器时的颜色变化，可以确定组织中不同成分的分布情况。
3. 荧光物质检测许多生物荧光物质具有特殊的偏振性。
使用偏光显微镜可以检测这些荧光物质，并确定它们的分布情况和数量。
偏光显微镜原理
偏光显微镜原理偏光显微镜是一种特殊的显微镜，它利用偏振光的原理观察样品的细微结构。
在偏光显微镜中，光线经过偏振片后成为偏振光，再通过样品后被观察者观察。
这种显微镜可以观察到许多肉眼无法看到的细微结构，对于材料科学、生物学、地质学等领域有着重要的应用价值。
本文将介绍偏光显微镜的原理和工作过程。
偏光显微镜的原理主要包括偏振光的产生和样品的偏光成像。
首先，偏振光是指在一个方向上振动的光，它可以通过偏振片产生。
偏振片是一种具有吸收特定方向光线的材料，当自然光通过偏振片后，只有与偏振片方向相同的光线能透过，其他方向的光线则被吸收。
这样产生的光就是偏振光。
其次，样品的偏光成像是指样品对偏振光的作用，使得观察者可以看到样品的细微结构。
当偏振光通过样品后，样品中的晶体、纤维或其他结构会改变光的偏振状态，观察者可以通过偏光显微镜观察到这些结构的特殊性质。
偏光显微镜的工作过程包括光源、偏振片、样品和偏光显微镜本身。
首先，光源产生的光线通过偏振片成为偏振光，然后通过样品后被观察者观察。
在这个过程中，观察者可以调节偏振片的方向和样品的位置，以获得最佳的观察效果。
偏光显微镜通常还配有显微镜目镜和物镜，观察者可以通过调节物镜的倍数来观察样品的不同放大倍数。
偏光显微镜在材料科学中有着广泛的应用。
例如，在金属材料的研究中，偏光显微镜可以观察到金属晶粒的形状和大小，从而分析材料的力学性能。
在生物学中，偏光显微镜可以观察细胞的结构和形态，对细胞学研究有着重要的意义。
在地质学中，偏光显微镜可以观察岩石的矿物组成和结构特征，帮助地质学家了解地球的演化历史。
总之，偏光显微镜是一种重要的科学研究工具，它利用偏振光的原理观察样品的细微结构。
通过调节偏振片和样品的位置，观察者可以获得清晰的偏光成像，从而对样品进行详细的观察和分析。
偏光显微镜在材料科学、生物学、地质学等领域有着广泛的应用前景，对于推动科学研究和技术发展具有重要的意义。
1偏光显微镜的构造和使用
1偏光显微镜的构造和使用偏光显微镜是一种特殊的显微镜，主要用于观察和分析具有双折射性质的样品。
它可以帮助研究人员观察样品的结构、组成和性质等。
一、偏光显微镜的构造偏光显微镜由以下几个主要部分组成：1.显微镜主体：包括底座、立柱和支架等。
底座提供了显微镜的稳定性，立柱和支架则用于支撑其他部件。
2.光源：通常采用白炽灯作为光源，通过准直器和调节器调节光源的亮度。
3.滤光镜：用于调节光的颜色和强度。
常用的滤光镜有偏振片和滤色片。
4.偏光器：位于光源和样品之间，用于产生一个特定方向的偏振光。
5.样品台：用于放置样品的平台，通常是旋转的，可以调整样品的角度。
6.物镜：通过物镜来放大样品的细节。
偏光显微镜常用的物镜有10x、20x、40x和100x等。
7.等光干涉装置：位于物镜和目镜之间，用于形成干涉图像。
等光干涉装置主要由偏振片、波片和标尺组成。
8.目镜：用于放大样品的图像。
常用的目镜有10x和20x等。
9.视场光幕：位于目镜的视场上，用于产生光的差异，以增强样品的对比度。
10.旋转盘：用于旋转偏振片和标尺，以改变样品的偏振角度。
二、偏光显微镜的使用使用偏光显微镜需要按照以下步骤进行：1.样品制备：将待观察的样品进行适当的处理和制备，如切片、染色等。
2.调节显微镜：打开光源，并调节亮度。
将样品放置在样品台上，并通过旋转盘调整偏振片和标尺的角度。
3.对焦样品：选择一款适当的物镜，通过调节刻度盘将样品移动到焦点位置。
然后使用目镜来调整样品的清晰度。
4.观察样品：调整光源的亮度和滤光镜的颜色，以获得清晰的图像。
通过旋转旋转盘来改变样品的偏振角度。
5.记录观察结果：在观察的过程中，可以使用相机或摄像机来记录观察到的图像和结构。
也可以使用目镜和标尺等工具来进行测量和分析。
6.清洁和保养：使用完偏光显微镜后，应将各部分进行清洁，保持其干净和良好的工作状态。
同时，定期进行维护和保养，以延长设备的使用寿命。
总结：偏光显微镜是一种重要的观察工具，广泛应用于地质学、生物学、材料科学等领域。
光学显微镜的几种特殊显微镜
光学显微镜的几种特殊显微镜一.暗视野显微镜暗视野显微镜由于不将透明光射入直接观察系统，无物体时，视野暗黑，不可能观察到任何物体，当有物体时，以物体衍射回的光与散射光等在暗的背景中明亮可见。
在暗视野观察物体，照明光大部分被折回，由于物体(标本)所在的位置结构，厚度不同，光的散射性，折光等都有很大的变化。
暗视野显微镜在普通光学显微镜台下配一个暗视野聚光器,来自下面光源的光线被抛物面聚光器反射，形成了横过显微镜视野而不进入物镜的强烈光束。
因此视野是暗的，视野中直径大于 0.3m 的微粒将光线散射，其大小和形态可清楚看到。
甚至可看到普通明视野显微镜中看不见的几个毫微米的微粒。
因此在某些细菌、细胞等活体检查中常常使用。
二.相位差显微镜相差显微镜是荷兰科学家Zermike 于1935年发明的，用于观察未染色标本的显微镜。
活细胞和未染色的生物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位发生变化(振幅差)，这种振幅差人眼无法观察。
而相差显微镜通过改变这种相位差，并利用光的衍射和干涉现象，把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。
相差显微镜和普通显微镜的区别是:用环状光阑代替可变光阑， 用带相板的物镜代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。
相差显微镜相差显微镜具有两个其他显微镜所不具有的功能:①将直射的光(视野中背景光)与经物体衍射的光分开;②将大约一半的波长从相位中除去，使之不能发生相互作用，从而引起强度的变化。
相差显微镜（phasecontrast microscope）由P．Zernike 于1935年发明，并因此获1953年诺贝尔物理奖。
这种显微镜最大的特点是可以观察未经染色的标本和活细胞。
相差显微镜的基本原理是，利用物体不同结构成分之间的折射率和厚度的差别，把通过物体不同部分的光程差转变为振幅（光强度）的差别，经过带有环状光阑的聚光镜和带有相位片的相差物镜实现观测的显微镜。
检影镜的原理和应用
检影镜的原理和应用1. 检影镜的概述检影镜（reflection microscope），又称透射反射型显微镜，是一种特殊的显微镜。
它能够同时观察样品的显微尺度细节和透射性质，广泛应用于材料科学、生物学、药学等领域。
本文将介绍检影镜的原理和应用。
2. 检影镜的原理检影镜的原理基于透射和反射两种光学现象。
其内部包含上、下两个光学路径，分别用于观察透射和反射样品的显微图像。
透射路径通过样品内部的透明部分，观察样品的组织结构。
反射路径通过样品表面的反射光，观察样品的表面特征。
3. 检影镜的工作原理检影镜的工作原理如下：•光源发出光线，经过准直器产生平行光。
•平行光经过分束器，分成透射和反射两个光束。
•透射光束通过透射样品，进入物镜，形成透射的显微图像。
•反射光束通过反射样品，经过物镜，进入目镜，形成反射的显微图像。
•观察者通过目镜同时观察透射和反射图像。
4. 检影镜的应用场景检影镜在科学研究和工业生产中有广泛的应用，主要包括以下几个方面。
4.1 材料科学•检影镜可以观察材料的晶体结构和表面缺陷，用于材料结构研究和质量控制。
•检影镜可以观察材料的相变行为和晶界纹理，研究材料的物性和性能。
4.2 生物学•检影镜可以观察细胞结构和组织器官，用于细胞生物学和组织学研究。
•检影镜可以观察生物标本的染色和荧光，研究生物体的分子结构和功能。
4.3 药学•检影镜可以观察药物的微观结构和成分分布，用于药物品质评价和新药研发。
•检影镜可以观察药物在体内的吸收和代谢过程，研究药物的药代动力学。
4.4 金属加工•检影镜可以观察金属的晶粒结构和位错分布，用于金属材料的变形和强化研究。
•检影镜可以观察金属的表面质量和涂层均匀性，进行金属加工过程的质量控制。
5. 总结检影镜作为一种特殊的显微镜，同时提供透射和反射两种显微图像，广泛应用于材料科学、生物学、药学等领域。
其原理基于透射和反射光学现象，通过透射和反射光路观察样品的显微尺度细节和性质。
倒置荧光显微镜使用方法
倒置荧光显微镜使用方法简介倒置荧光显微镜是一种特殊的显微镜，常用于生物学、细胞学和医学研究中。
与传统的直立显微镜不同，倒置荧光显微镜的物镜和光源被颠倒放置，使得观察样本更加方便。
本文将详细介绍倒置荧光显微镜的使用方法。
准备工作在开始使用倒置荧光显微镜之前，需要进行一些准备工作：1.清洁工作台：确保工作台干净整洁，避免灰尘和杂物对实验结果的影响。
2.样本制备：根据实验需求制备好待观察的样本。
可以是细胞培养物、组织切片等。
3.荧光染料：根据实验需求选择合适的荧光染料，用于标记待观察的结构或分子。
步骤1. 打开显微镜将倒置荧光显微镜放在清洁的工作台上，并轻轻打开仪器。
确保所有部件都处于正常工作状态。
2. 样本安装将样本安装到显微镜的载物台上。
使用载玻片夹固定样本，确保样本稳定且不会移动。
3. 调节荧光滤光片倒置荧光显微镜使用荧光染料来标记待观察的结构或分子。
在观察之前，需要根据使用的荧光染料调节滤光片。
1.选择正确的激发滤光片：根据荧光染料的激发波长选择对应的滤光片。
通常，显微镜附带了一组滤光片，可以根据需要更换。
2.安装激发滤光片：将激发滤光片安装到显微镜中。
确保滤光片正确对齐，并紧固固定螺丝。
3.调节透射镜筒：通过旋转透射镜筒，调节透射光的强度。
确保透射光与荧光染料激发波长相匹配。
4. 调节目镜和物镜1.调节目镜：通过调节目镜的高度和焦距，使得样本的图像清晰可见。
可以使用显微镜上的焦距调节轮来实现。
2.选择合适的物镜：根据对样本的放大需求，选择合适倍数的物镜。
倒置荧光显微镜通常配备多个物镜，可以根据需要进行更换。
5. 调节荧光滤光器在观察荧光信号之前，需要正确调节荧光滤光器。
1.选择正确的发射滤光片：根据荧光染料的发射波长选择对应的滤光片。
通常，显微镜附带了一组滤光片，可以根据需要更换。
2.安装发射滤光片：将发射滤光片安装到显微镜中。
确保滤光片正确对齐，并紧固固定螺丝。
6. 观察样本通过目镜观察样本是否清晰，如果不清晰可以通过调节目镜或物镜来改善。
普通和几种特殊光学显微镜的结构及使用-2022年学习资料
结构特点：普通光学显微镜加上一些附件-荧光光源-超高压汞灯-激发滤片-阻断滤片
按光路分两种：-1.透射式荧光显微镜-2.落射式荧光显微镜
银球-第：二凌光片-截玻片与盖或片-汞奶-第一滤光片-平面度射镜-心y-函25透射式荧光显徽镜图解-B-图 -6落射式荧光显微镜图解-A.-载物台；B.标本：C,物镜：D,双色束分离器；凡.激-发漤片F.阻断滤片； .目镜；H,汞灯
三注意事项-1.-拿显微镜时，要一手紧握镜臂，一手托住镜座，不要单手提-拿，以防目镜或其他零件滑落。-2. 显微镜不可放置在实验台边缘，以免碰翻落地。-3.-不要随意取下部件，以免灰尘落入内部。-4.-保持显微镜的 洁。光学和照明部分的镜面只能用擦镜纸轻-轻擦拭，切勿用手指、手帕和绸布等擦摸。机械部分可用布-擦拭。-5. 显微镜使用完毕后，转动粗调上升镜筒或下降载物台，取下-标本，转动转换器使物镜离开通光孔，下降镜筒或上升载物 台，使接近物镜，垂直反光镜，下降集光器，关闭虹彩光阑
3.油镜的使用方法-1在高倍镜下找到所要观察的标本，移至视野中心。-2把集光器上升到最高位置，光阑开到最大 -3移开高倍镜，在要观察的部位的盖玻片上滴加一滴香柏油作为-介质。-4稍稍上升镜简或下降载物台，使油镜对准 光孔，慢慢转动粗-调螺旋，使油镜与油滴接触，再小心地使它贴近盖玻片表面。-5用眼观察目镜，微微上升或下降载 台，直到出现清晰的物像。-6油镜使用完毕，先用拭镜纸蘸少许二甲苯将镜头上的大部分油-去掉，再用干拭镜纸擦拭 擦拭时要顺镜头的直径方向，不要-沿镜头的圆周擦。
3.光学部分-目镜常备有2一3个目镜，上面刻有5x、10x、15x等-符号以示其放大倍数，可选择使用，一般 用的-目镜倍数为10x。-物镜-显微镜分辨性能高低的关键部件》-主要性能指标一一放大倍数和镜口率（如-10 0.25,40/0.65和100/1.25，镜筒长度和所要求的-盖玻片厚度（如160/0.17）-表1-1 标准费镜的生质-镜1率〔.4.-工作距离mm-1D×-6.5-20X-0.60-2.0-40×-100×.20
特殊显微镜
特殊显微镜的原理与使用◆载物台、聚光镜、光源和支架等部件组成。
昆虫-暗视野显微镜甲虫腿-荧光显微镜长脚蜘蛛的眼睛-共聚焦显微镜甲虫-立体显微镜藻-偏振光特殊显微镜的原理与使用1.暗视野显微镜2.相差显微镜3.荧光显微镜4. 激光共聚焦显微镜实验目的◆ 1.了解和掌握暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的构造原理；◆ 2.学习相差显微镜、荧光显微镜和激光共聚焦显微镜的使用。
1. 暗视野显微镜⏹根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条件下观察被检物体的显微镜⏹观察到明场看不到的极其微小的物体⏹最高分辨率可达0.004微米（普通显微镜最大的分辨率为0.2微米）⏹可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
使用中央遮光板或暗视野聚光器，使光源的中央光束被阻挡。
不能由下而上地通过标本进入物镜。
从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，而整个视野是黑暗的。
结构特点暗视野挡板的制作(1)选择要观察的物镜。
(2)转动聚光器孔径光阑调节环，使与相应倍数的物镜相对应,对标本准焦。
(3)从显微镜上卸下聚光器，用圆规量出孔径光阑开孔的直径，以上测直径在相纸上绘一圆。
(4)再测量聚光器下方滤片支架的直径。
以上测直径在相纸上作另一同心圆。
(5)在两圆之间绘出三条连接的支架，用剪刀剪下两圆，放入滤片支架中。
(6)将聚光器安装回显微镜，即得该物镜的暗视野挡板。
昆虫-暗视野显微镜2.相差显微镜波长（频率）变化表现为颜色不同，振幅变化表现为明暗的不同，而相位不同肉眼感觉不到。
和普通光学显微镜相比，它在物镜中增加了相板，在聚光器增加了环状光阑，可以将肉眼看不到的相差，利用衍射和干涉现象，变为可辨明暗的振幅差。
利用相差显微镜，可以观察活细胞或未染色标本的细微结构。
(1)环状光阑(2)相板a共轭面和补偿面b吸收膜和相位膜C正（暗）反差和负（明）反差(3)合轴调节望远镜(4)绿色滤光片相板环状光阑倒置相差显微镜3.荧光显微镜和普通光学显微镜相比，它利用较短波长的紫外光照射标本，使样品受到激发，产生较长波长的荧光，可以用来观察和分析样品中产生荧光的成分和结构、位置。
实验一特殊显微镜的工作原理和使用
实验一特殊显微镜的工作原理和使用特殊显微镜是一种能够观察微观尺度物体的仪器，它通过利用光学、电子、声波等原理来放大和显示样品的细节。
特殊显微镜在科学研究、医学诊断、材料分析等领域起着重要的作用。
本文将重点介绍光学、电子和声学显微镜的工作原理和使用。
一、光学显微镜光学显微镜是一种利用可见光作为照明源的显微镜，其主要由物镜、目镜、调焦机构和光源构成。
它的工作原理是通过物镜将样品上的光聚焦到目镜上形成放大的影像。
光学显微镜的使用步骤如下：1.确保显微镜放置在平稳的台面上，并保持垂直。
2.调节光源亮度，使其能够提供足够的照明。
3.将样品放在载物台上，并使用样品夹夹紧。
4.用粗调焦机构将物镜与样品靠近，然后用细调焦机构调节焦距，直到看到清晰的影像。
5.调节目镜，使影像更为清晰。
6.根据需要，可以使用滤光片或偏振片来改变光的属性。
7.使用目镜检查样品，并调节焦距和目镜，如有需要。
光学显微镜的优点是成本较低、易于操作，并且可以观察到样品的活体细胞。
缺点是分辨率有限，仅能观察到大约200-300纳米的细节。
二、电子显微镜电子显微镜是一种利用电子束取代可见光来照射样品的显微镜，它可以提供比光学显微镜更高的分辨率和放大倍数。
电子显微镜的工作原理是通过电子束的散射、透射和反射来获得样品的影像。
具体而言，电子束通过电子枪产生，然后经过准直系统和电子透镜聚焦。
在样品中穿透或被散射后，电子束最终落在屏幕或探测器上生成影像。
电子显微镜的使用步骤如下：1.准备样品，通常需要制备薄片并清洁表面。
2.打开电子显微镜，等待其预热。
3.将样品放置在样品台上，并将其安装在显微镜中。
4.调节电子束的对焦，使其尽可能锐利。
5.对样品进行调节，以便获得所需的放大倍数和分辨率。
6.观察和记录样品的影像，可以使用照相机或电子影像探测器。
电子显微镜的优点是具有更高的分辨率和放大倍数，可以观察到更小的细节，如原子尺度。
缺点是设备复杂、操作困难，并且样品必须处于真空环境中才能进行观察。
特殊光学显微镜的原理与使用
相差显微镜旳使用范围
• 相差显微镜能观察到透明样品旳 细节，合用于对活体细胞生活状 态下旳生长、运动、增殖情况及 细微构造旳观察。所以，是微生 物学、细胞生物学、细胞和组织 培养、细胞工程、杂交瘤技术等 当代生物学研究旳必备工具。
相差显微镜旳操作环节
• （1）根据观察标本旳性质及要求，挑选适合 旳相差物镜。
• 般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最佳使用 特制旳无荧光镜油，也可用上述甘油替代，液体石蜡也可用，只是折 光率较低，对图像质量略有影响。
使用荧光显微镜旳注意事项
•
（1）严格按照荧光显微镜出厂阐明书要求进行操作，不要随意变化
程序
•
（2）应在暗室中进行检验。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞
– 相板上镀有两种不同旳金属膜：吸收膜和 相位膜。吸收膜常为铬、银等金属在真空 中蒸发而镀成旳薄膜，它能把经过旳光线 吸收掉60%—93%，相位膜为氟化镁等在 真空中蒸发镀成，它能把经过旳光线相位 推迟1/4波长。
相差显微镜旳构造和装置
• 3、合轴调整望远镜
– 是相差显微镜一种极为主要旳构造。环状光阑旳像 必须与相板共轭面完全吻合，才干实现对直射光和 衍射光光反被吸收，应推迟旳相位有 旳不能被推迟，这么就不能到达相差镜检旳效果。 因为环状光阑是经过转盘聚光器与物镜相匹配旳， 因而环状光阑与相板常不同轴。为此，相差显微镜 配置有一种合轴调整望远镜（在镜旳外壳上标有 “CT”符号），用于合轴调整。使用时拨去一侧 目镜，插入合轴调整望远镜，旋转合轴调整望远镜 旳焦点，便能清楚看到一明一暗两个圆环。再转动 聚光器上旳环状光阑旳两个调整钮，使明亮旳环状 光阑圆环与暗旳相板上共轭面暗环完全重叠。如明 亮旳光环过小或过大，可调整聚光器旳升降旋钮， 使两环完全吻合。假如聚光器已升到最高点或降到 最低点而仍不能矫正，阐明玻片太厚了，应更换。 调好后取下望远镜，换上目镜即可进行镜检观察。
第五节特种光学显微镜介绍
为了增强显镜微的功能，利用光学的一些特殊机制及专门制作的零部件使普通显微镜功能得以扩展，形成特种显微镜系列。
如暗场显微镜、荧光显微镜、紫外光显微镜、偏光显微镜、相差及干涉显微镜、近场显微镜等。
一、暗场显微镜显微镜的分辨本领取决于单色光波长及物镜的NA。
物镜的最大NA= 1.6，一可推算在白光下的最大分辨率为0.2um。
在显微技术中把线度小于0 .1um的粒子称为超显微粒子，也称微小粒子。
当强光投射到微粒上时要发生散射，由于衍射环的存在，以每个微粒为核心形成一个发亮的衍射斑，这就是丁铎尔(tyndall)效应。
若让照明光束不直接射入物镜使视场变暗即暗场(darkfield )，则为观察丁铎尔衍射斑提供了具有一定反差的暗背景。
此条件下通过显微镜的日镜，对线径大于0.3um的微小物体能够看清其形状和大小;对于超显微粒子或生物，虽无法分辨其形状和大小，却能通过衍射斑判断它的存在、位置和数量。
例如原生质颗粒在亮场照明时呈均匀系，在暗场下就反映出颗粒分散的特征。
标本中的超显微病毒也可以用暗场显微镜C dark field micro-scope）加以鉴别。
形成暗场是暗场显微镜的技术关键，其方法就是用侧向照明。
对于透明物体的观察，只需要在阿贝聚光器下方加上一个环形暗场光阑，挡住入射到聚光器光线的中心部分，从而实现侧向照明。
但根据所使用的物镜的数值孔径的大小情况又有不同。
对于小的物镜，如果在聚光器的最后一个光学而与载玻片间滴上镜头油，盖玻片和物镜之间是空气，则经过聚光器的环形光束在盖玻片内被全反射而不能进入物镜便一可形成暗视场。
对于NA较大的物镜则需要专门的暗视场聚光器，基本结构是山消球差、消色差良好的非球面透镜(组)和暗场光阑组成。
对于不透明的被观测物体，则要采用落射光照明，最简单的办法是自下方射来的照明光束，经中央挡板后形成一中空光柱，再经聚光镜将光线反射后以斜光束会聚照亮物体上的一点。
山于其投射倾角很大，故反射光线不能进入物镜，只有山物体来的散别一光进入物镜，从而形成暗视场下的明亮的放大像。
实验二 特殊显微镜的使用 相差显微镜
实验二特殊显微镜的使用相差显微镜实验二特殊显微镜的使用-相差显微镜实验二特殊显微镜的使用实验2.1相差显微镜一、实验目的掌握相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
二、实验原理相衬显微镜是P.Zernike在1932年发明的。
泽尼克于1953年获得诺贝尔物理学奖。
相衬显微镜最大的特点是可以用来观察未染色的标本和活细胞。
人们在光学显微镜下观察被检标本时，只有在反射光的波长（颜色）和振幅（亮度）与周围介质有变化时，方能看到被检样品的结构。
活细胞近于无色透明，光波通过时，透过或反射光的波长和振幅都不发生改变，所以用普通光学显微镜难以辨清活体的结构。
一般对于明暗对比很小的样品，多借助于固定和染色等理化方法，使样品和背景的反射或透射光在波长和振幅上发生变化，即在颜色和亮度上有所差异，才能识别。
但有些样品一经染色就会引起变形，染色也可使有生命的样品死亡。
我们可以利用相差显微镜来进行观察。
相差显微镜利用了光的干涉现象，将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差，因此它是一种应用在染色困难或不能染色的新鲜标本上获得高对比图像的新型显微镜。
相位差法在生物学中的主要价值在于，它可以直接观察透明的活体，而不需要杀死细胞的固定和染色方法。
染色对活体有有害影响，甚至会造成变形。
因此，相位差法非常重要。
相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。
相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。
相差决定于光波所通过介质的折射率之差及其厚度，等于折射率与厚度的乘积之差（即光程之差），介质越厚或折射率越大，光波减速也越大。
为了获得相位差效果，在相位差显微镜的物镜中安装了一块由光学玻璃制成的相位板。
在圆形相位板的平面上，有一圈凸面或凹面环，其厚度与周围（内、外）相位板的厚度不同。
相位板分为两部分：图1-10相差显微镜光路图共轭面积：通常为环形，即通过直射光的部分。
环是凸的或凹的。
振幅改变，从而达到不同的目的与观察效果。
利用相板把光波相位推迟，振幅改变。
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特殊显微镜
特殊显微镜及其使用
实验目的：掌握暗视野显微镜、相差显微镜及荧光显微镜的原理、构造及其使用方法。
实验材料：水绵、轮藻、褐藻、洋葱内表皮、汤菜下表皮、原生动物；
Ⅰ暗视野显微镜
一、实验原理：利用暗视野聚光器使入射光束从聚光器斜向照明被检样品，使之发出反射和散射光。
镜检时，因不能直接观察到照明光线而背景是黑暗的，由样品发出的散射光和反射光形成了明亮的物体影象。
二、使用：
1、换装暗视野聚光器，安装到位并固紧；
2、调节暗视野聚光器焦点：转动聚光器升降螺旋，使视场中光环调成一最小的
圆形光点，即为聚光器的焦点；
3、制一简装片(洋葱内表皮，原生动物观察)进行观察。
Ⅱ相差显微镜
一、实验原理：利用相差装置将透过细胞标本不同区域（密度不同）的
光波的光程差变成振幅差，从而使细胞内的各种结构之间呈现出清晰可见的明暗差的特殊光镜。
二、实验方法：
1、相差显微镜的结构：
(1)、倒置显微镜：光源（灯室和视场光阑控制杆）
（2）、圆盘状环状光栏及环状光栏的调中螺杆：是能使透过聚光器的光线形成空心光锥并聚焦到标本上；
（3）、物镜：及位于物镜后焦面的环行相板（一种涂有相位膜和吸收膜的玻璃板）。
（4）、观察转盘及伯特兰透镜调焦杆
（5）、调焦旋钮及载物台移动钮
（6）、相差物镜：相差物镜的后焦面上有种类不同的相板。
因物镜内相板的不同，物镜在明暗反差上可区分为两大类：即明反差B（或
正反差P）和暗反差N（或负反差D），物镜的反差类别，用英
文字母B或N和D或P标志在物镜外壳上，并兼有高H、中M、
低L三种不同的反差。
有的相差物镜用字样Ph标示。
2、合轴调中：在视场中观察所见，环状光阑为一明亮的圆环，而相板的圆环为一暗环。
互相匹配的明环与暗环大小一致。
在使用时两者要合轴。
两环的重叠，须通过合轴调节方能取得。
光源和视场
转盘式环
物镜（环行相板） 观察转盘（左：
调焦旋钮及载物台移动
（1）将聚光镜转盘放到[PHL]位置，观察转盘放到[o]位置；
（2）将视场光阑全部打开；
（3）将4X物镜转入到光路上，并将标本调至焦点位置；
（4）将观察转盘转到[B]位置，转动伯特兰透镜调焦杆，使相位环调人到物镜的焦点上；
（5）用环状光栏的调中螺杆，使物镜的相位环（暗环）与环状光栏（亮环）相重合。
3、将观察转盘转回到[o]位置，即可进行观察。
注意：（1）、环状光栏与物镜配套使用；每改变一次放大倍数，则要转换一次环状光栏；
（2）、环状光栏一次完成调中以后，在使用另外的环状光栏时，一般不需要更多的调中；如果用于精确的观察和显微摄影时，就要保证在
改变放大倍数时，重新进行调节。
4、制一简装片（褐藻胞质环流，花粉），进行观察。
Ⅲ荧光显微镜
一、实验原理：利用一定波长的紫外线作为激发光源照射被检标本，使标
本中的荧光物质受激发后产生荧光的特殊光镜。
这一现象称为荧光现象。
二、实验方法
1、荧光显微镜的结构
紫外发
二向色镜光阀阻挡滤
2、反（落）射式荧光显微镜光路图
3、使用：水绵叶片自发荧光
（1）、样品聚焦：将样品置于载物台上，用光阀阻断短波光，普通光透射照明，低倍镜聚焦；
（2）、待寻找到最佳影象后，熄灭溴钨灯或将其转入最暗，推开光阀，使短波光进入；
（3）、观察。
注意：一定用光阀阻断短波光，切勿频繁开启汞灯开关，以免减短其使用寿命。
实验作业：
1、绘制暗视场和荧光显微镜被检样品形态图（各一样品）。
2、相差显微镜有那些特有的附件？其构造如何？。