C18柱使用手册
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南1.样品准备在进行C18色谱柱分析之前，样品通常需要进行预处理。
对于有机溶剂溶解的样品，可以通过过滤来去除杂质颗粒。
对于水溶性样品，可以使用有机溶剂混合溶解，以提高样品在有机相中的溶解度。
此外，还可以使用离心机除去悬浮物和沉淀物。
2.工作条件选择C18色谱柱可以在不同的工作条件下使用，包括流动相组成、流速、柱温等。
在选择工作条件时，需要考虑目标化合物的极性、分离程度和保留时间等因素。
常见的流动相组成包括水和有机溶剂的混合物，比如水/甲醇和水/乙腈。
流速的选择需要权衡分离效果和分析时间，一般流速在0.5-2 mL/min之间。
柱温的控制可以改变样品的保留行为，从而影响分离效果。
3.柱平衡在进行实际分析前，C18色谱柱需要进行柱平衡。
柱平衡的目的是使色谱柱内部的填料达到稳定的状态，从而提高分离效果和重复性。
柱平衡可以通过流动相运行一段时间来实现，一般需要10-20柱体积的流动相通过柱床。
4.样品注射在C18色谱柱中，样品通常是通过进样器注入。
选择适当的进样量是保证分析准确性和可重复性的关键。
进样量过大会导致色谱峰扩展和分离效果下降，进样量过小则可能导致分析信号过低。
通常情况下，进样量在1-10μL之间。
5.分析在进行C18色谱柱分析时，需要关注色谱峰的对称性、解析度和保留时间等指标。
色谱峰的对称性可以通过调整流速、压力、温度等因素来改善。
解析度是衡量两个相邻峰之间的分离程度，可以通过调整流动相组成和流速等来增加。
保留时间是指化合物在色谱柱中停留的时间，可以通过调整流动相组成和流速来改变。
总结：C18色谱柱是常用的反相色谱柱，在样品准备、工作条件选择、柱平衡、样品注射和分析等方面有一些注意事项。
正确的样品准备、选择合适的工作条件、进行柱平衡、控制进样量和关注分析指标可以提高C18色谱柱的分析效果和重复性。
在使用C18色谱柱进行实验时，需要严格按照相关的操作规范进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。
YMC-Triart C18,C8, Phenyl, PFP色谱柱用户手册说明书
YMC-Triart C18,C8, Phenyl, PFP 使用说明书( HPLC 用：5 µm, 3 µm ／UHPLC 用：1.9 µm )1. 前言非常感谢您选用YMC 公司的高效液相/超高效液相(HPLC/UPLC)用色谱柱YMC-Triart 系列。
YMC-Triart 采用新开发的混合型硅胶基质，是能在多种分析条件下都可使用的新一代反相色谱柱。
与普通的反相柱相比，具有高度的耐久性和良好的分离性能，对于大多数化合物的分离而言是最适合的首选色谱柱。
本公司在YMC-Triart 系列的制造过程中进行了严格的质量管理，保证能为客户提供最高品质的产品（具体性能指标请参照色谱柱盒内的COLUMN INSPECTION REPORT ）。
为了使提供给您的色谱柱最大限度发挥其性能并能够长时间的使用，敬请仔细阅读使用说明书后正确使用本产品。
2． 产品规格一览3． 色谱柱的连接型号及其系统设定中的注意点色谱柱连接样式：产品型号后面的【PT 】是UPLC ＊的互换连接型号，【WT 】是WATERS 连接型号。
・ 配管的连接部分如有空隙可能会造成漏液或色谱柱性能（理论塔板、峰形对称性）降低。
为了不产生多余的空隙，请注意配管的法兰先端长度和其截面。
・ UPLC(超高效LC)用1.9 µm 的填料色谱柱，与以往的5 µm 和3 µm 填料的色谱柱相比压力较高，一般情况下，可适用于耐60MPa 以上的UPLC 系统，使用时请注意分析系统和连接配管的耐压性。
我们为色谱柱连接使用准备了可移动式法兰的耐高压（耐压137Mpa ）配件，详细情况请向我司查询 ・ 在系统流路上引起的样品扩散（柱外扩散）会给色谱柱性能带来非常大的影响，特别是当色谱柱内径在2mm 以下时。
为获得最佳柱性能，请根据以下提示对分析系统的使用环境进行优化。
1）进样器与色谱柱间、色谱柱与检测器间的配管请尽可能使用长度短、内径小（0.15mm 以下）的管线，同时还请注意不要在连接部分产生空隙。
C18色谱柱通用使用方法
C18色谱柱通用使用方法1.柱的准备：a.检查柱的完整性和封闭性。
确保柱的端口和连接器没有损坏，没有杂质进入柱内。
b.检查柱的包装是否完好。
确保柱没有受到损坏或污染。
2.柱的预处理：a.将新的C18色谱柱进行预处理。
通常情况下，柱需要进行反相条件下的"洗涤"，以去除柱内的杂质和残留物。
b.使用适当的洗涤溶液，如乙腈/水或甲醇/水混合溶液，进行柱的洗涤。
通常需要使用高浓度有机溶剂，如100%乙腈或甲醇，进行洗涤。
c. 洗涤柱时，使用较高的流速，通常为1-2 mL/min，以加快杂质的去除。
3.样品的准备：a.样品前处理。
根据需要，对样品进行适当的前处理，如过滤、离心、稀释等。
b.样品溶剂的选择。
根据样品的性质选择合适的溶剂，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
c.样品的溶解。
将样品溶解于适当的溶剂中，并通过过滤器进行过滤，以去除悬浮物和固体杂质。
4.色谱条件的设置：a.流动相的选择。
根据需要选择合适的流动相组成，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
b.pH值的调节。
根据需要调节流动相的pH值，以适应目标化合物的分离。
c. 流速的设置。
根据样品的复杂性和分离的要求，设置合适的流速。
通常情况下，流速为0.5-2 mL/min。
d.分析温度的控制。
根据样品的性质和分析要求，设置合适的温度。
通常为室温或稍高温度。
5.色谱分离：a.样品注射。
将样品通过自动进样器或手动注射器注入到色谱柱中。
b.等待分离。
在流动相的作用下，样品组分将按照其亲水性和疏水性被分离。
根据需要，调节流动相的组成和温度，以实现最佳的分离效果。
c.收集分离的组分。
根据需要，收集分离出的目标组分，可以通过分级洗脱或梯度洗脱的方式进行。
6.柱的保养：a.柱的再生。
根据需要，可以使用适当的再生溶液（如有机溶剂）对柱进行再生，以去除残留的样品和杂质。
b.柱的保存。
在不使用柱时，将其存放在干燥、避光和低温的环境中，以保持柱的稳定性和使用寿命。
C18色谱柱的使用
C18色谱柱的使用一、C18色谱柱的选择C18色谱柱有多种尺寸和填充材料可供选择。
常见的C18色谱柱尺寸有2.1mm×50mm、3.0mm×100mm、4.6mm×150mm等。
填充材料也有很多种，如高纯度的C18、低碱性的C18等。
选择合适的C18色谱柱需要依据实验目的、样品类型和色谱条件等因素进行考虑。
二、C18色谱柱的预处理在使用之前，需要对C18色谱柱进行预处理，以去除可能存在的杂质和保证柱子的稳定性。
常见的预处理方法有使用高压液相系统进行洗脱、使用有机溶剂或酸碱溶液进行洗脱等。
此外，需要注意避免用过酸性或过碱性的洗脱剂，以免对C18柱填料造成损害。
三、C18色谱柱的条件优化和样品准备在进行分离实验之前，需要对色谱条件进行优化，包括流动相选择、流速调整、梯度程序、检测波长等。
此外，样品的准备也是至关重要的，在合适的溶剂中溶解样品，避免样品溶解不完全和产生沉淀等问题。
四、C18色谱柱的操作注意事项1.避免样品浓度过高：过高的样品浓度会导致柱子的负荷过重，影响柱寿命和分离效果。
2.避免使用过强的溶剂强度：过强的溶剂强度会导致溶剂胁迫效应，影响柱子分离和保护柱寿命。
3.柱温控制：C18色谱柱的使用温度一般在室温到60摄氏度之间，过高的温度会导致柱寿命降低、分离效果不理想；过低的温度则会影响分离速度。
4.关注保护柱：在使用过程中，需要使用保护柱来避免样品残留或杂质对主柱的损害。
同时注意定期更换保护柱和保证流量正常。
5.适时进行柱再生：在使用C18色谱柱一段时间后，柱子表面可能会有附着物或杂质，可以通过使用一些合适的再生剂来清洗柱面并恢复分离性能。
总之，C18色谱柱是一种常用且有效的色谱柱，具有广泛的应用前景。
正确选择和使用C18色谱柱，能够得到较好的分离效果和分析结果。
在使用过程中，需要注意柱的预处理、条件优化和操作注意事项，以保证实验的顺利进行。
C18色谱柱通用使用方法
C18/C8色谱柱使用方法
一、新柱活化：新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，
再换成流动相进行平衡；如果流动相中含有缓冲盐，在换成流动相前，请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡；
二、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
三、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在，新柱子在使用
之前需用100%的甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速平衡30min 左右，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用100%的纯甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速冲洗30min左右，最后用100%的纯甲醇（色谱纯）保存。
四、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在，新柱在使用之前
需用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min 左右，将新柱高浓度甲醇溶液完全置换掉，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右，将色谱柱中缓冲盐溶液完全置换掉，最后用100%的纯甲醇清洗色谱柱30min，最后用纯甲醇保存色谱柱。
C18柱使用指南
C18柱使用指南1、新柱在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到巅峰状态；
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，最后保存在纯有机试剂或高
比例的有机试剂溶液（如90%
甲醇水）中；
4、日常保存溶剂（即第二天需继续使用）尽量与3中相同；
5、由于C18柱（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响，（Diamonsil2）由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%
6、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效；
7、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%
甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。
色谱柱再生程序：
按照下列次序冲洗色谱柱，冲洗体积均为20倍柱体积：
10%甲醇水→甲醇→异丙醇（或氯仿）→甲醇→10%甲醇水（步骤3选用异丙醇时，由于异丙醇粘度较大，需适当降低流速，建议流速设为0.2-0.3ml/min）
体积计算表：。
C18色谱柱的使用
C18色谱柱的使用C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，广泛应用于化学分析、生物分析、药物研发等领域。
它具有良好的选择性和分离效果，对于疏水性化合物的分析具有很高的灵敏度和分辨率。
本文将详细介绍C18色谱柱的使用方法及其在不同领域的应用。
一、C18色谱柱的使用方法1.样品制备：将待分析的样品溶解在适当的有机溶剂中，通常是甲醇、乙腈等。
确保样品的浓度适当，以避免过高的浓度造成柱阻塞或过低的浓度造成分离不彻底。
2.色谱柱的准备：将C18色谱柱安装在色谱仪上，并根据柱子的要求进行预处理。
通常情况下，使用乙腈/水混合溶液进行洗脱，以去除柱子中的杂质和残留的有机溶剂。
3.流动相的选择：根据待分析化合物的性质选择合适的流动相。
C18色谱柱通常使用有机溶剂和水的混合物作为流动相，其中有机溶剂的比例越高，柱子的亲水性越低，适用于疏水性化合物的分离。
常用的有机溶剂包括甲醇、乙腈、异丙醇等。
4.色谱条件的优化：根据待分析化合物的性质和目标分离效果，优化色谱条件。
可以尝试不同的流速、温度、洗脱梯度等参数，以获得最佳的分离效果。
5.注射样品：将样品注射进色谱柱中，注意控制注射量，以避免样品过多造成柱阻塞或过少造成分离不完全。
通常情况下，使用自动进样器进行样品注射，以提高分析的准确性和重复性。
6.数据分析：通过检测器检测柱出口的化合物，得到色谱图。
根据峰的形状、相对保留时间等参数，对化合物进行定性和定量分析。
二、C18色谱柱的应用领域1.化学分析：C18色谱柱广泛应用于有机化学、环境分析、食品安全等领域的化学分析中。
通过C18色谱柱的分离效果，可以对复杂的混合物进行分离和鉴定，提高分析的准确性和灵敏度。
2.生物分析：C18色谱柱在生物分析中的应用也非常广泛。
例如，可以用于蛋白质和肽段的分离和纯化，用于核酸的分离和测序，用于药物代谢产物的分离和鉴定等。
C18色谱柱的选择性和分离效果能够满足对于生物分子的高分辨率分析需求。
3.药物研发：在药物研发中，C18色谱柱常用于药物的分离和纯化。
C18色谱柱通用使用方法
C18色谱柱通用使用方法1.前处理在使用C18色谱柱之前，需要进行前处理步骤。
首先，用洗涤溶液洗涤色谱柱。
一般来说，常用的洗涤溶液有甲醇、醋酸乙酯、水等。
然后，进行平衡步骤，即用合适的溶剂或缓冲液进行平衡，确保色谱柱内部的pH和温度稳定。
2.样品处理在进行样品处理之前，需要先将样品溶解在合适的溶剂中，以获得适合色谱分离的样品溶液。
然后，通过过滤或离心等方法去除悬浮物和杂质。
3.注射样品将经过处理的样品注入色谱柱，通常使用自动进样器或手动进样器进行。
在注射之前，可以选择使用一定的进样溶液进行稀释，以避免样品浓度过高导致色谱柱阻塞。
4.流动相选择选择合适的流动相对于分离和纯化化合物至关重要。
通常，流动相是由溶剂和缓冲液组成的。
选择流动相的重要参数包括pH值、离子强度、有机溶剂浓度等。
在一些情况下，可能需要进行溶剂梯度洗脱或流动相变化来实现较好的分离效果。
5.进行色谱分离将注射的样品放入色谱仪中，设置合适的流速和检测波长。
使用C18色谱柱时，样品中的化合物会根据它们的亲水性和疏水性在色谱柱上发生分离。
不同的化合物在色谱柱上的停留时间不同，从而实现分离。
6.数据分析和解释通过检测器对柱液进行检测并记录数据。
根据分离物的峰面积、保留时间、峰形等信息，可以对样品中的化合物进行定量分析和鉴定。
同时，对于复杂的样品，可能需要使用色谱质谱联用技术（LC-MS）进行物质的进一步鉴定。
7.后处理在完成色谱分离之后，需要进行色谱柱的后处理。
首先，使用洗脱溶剂进行柱洗脱，以去除残留在柱中的样品和污染物。
然后，用合适的保存液进行保护。
保护色谱柱可以延长其使用寿命，并确保下次使用时仍然具有良好的分离效果。
这是C18色谱柱的通用使用方法。
在实际操作过程中，可能会根据具体的样品性质和实验要求进行一定的调整和优化。
熟练掌握色谱柱的使用方法，对于获得高质量、稳定的色谱分离结果至关重要。
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南一、准备工作1.选择适当的C18色谱柱，通常根据样品性质、分子量和分离效果选择合适的柱型和尺寸。
2.检查色谱系统，保证其正常运行，包括检查泵、检测器、进样器、流量计等设备是否正常工作。
3.根据样品的性质选择合适的溶剂和添加剂，准备好色谱用的溶剂和溶液。
二、样品处理1.样品的准备应尽量避免杂质的干扰，可以进行适当的前处理，如蛋白质沉淀、萃取等。
2.选择适当的溶剂溶解样品，避免过高浓度或过低浓度的样品，以避免柱堵塞或分离效果不佳。
三、操作步骤1.将C18色谱柱连接到色谱系统中，并用适当的溶剂进行洗脱，以去除杂质。
2.进行进样前的平衡，使用纯溶剂进行连续冲洗，直到检测器基线稳定。
3.进样器设定合适的进样量，确保样品进入柱后分离效果良好。
一般情况下，进样量不超过柱容量的10%。
4.选择合适的溶剂组成和梯度条件，进行分离。
可根据样品性质和需求进行优化。
5.在柱温和流速稳定的条件下进行分离，记录相应的信号。
6.柱洗脱后，用适当的溶剂进行冲洗，以保护色谱柱。
四、优化条件1.优化柱温：柱温对分离效果有重要影响，一般来说，提高柱温可以缩短分离时间，但也可能导致分离不彻底。
2.优化流速：流速过低可能导致峰形变宽，流速过高可能导致分离效果不佳，因此要选择合适的流速条件。
3.优化溶剂和梯度条件：针对不同的样品性质，通过调整溶剂和梯度条件，进行分离优化，以获得最佳的分离效果。
五、注意事项1.避免样品浓度过高，以免造成柱堵塞或分离效果不佳。
2.定期检查色谱系统的运行状况，及时更换或维修损坏的设备。
3.注意柱的保养，避免使用有害的溶剂或缓冲液，以免对柱产生损害。
4.储存柱时，应保持柱干燥和避光，以避免柱的老化和降解。
总结：C18色谱柱是一种常用的分析工具，使用C18色谱柱进行分离时，需要做好准备工作，合理处理样品，按照操作步骤进行操作，并根据需要优化条件。
使用C18色谱柱时，需要注意一些事项，以确保色谱柱的正常运行和延长其寿命。
acepfp c18色谱柱说明书
acepfp c18色谱柱说明书AcepFP C18 色谱柱说明书引言：本说明书介绍了AcepFP C18色谱柱的性能特点、适用范围、使用方法以及相关的注意事项。
AcepFP C18色谱柱是一种高性能色谱柱，广泛应用于分离和纯化各种化合物。
本文将详细介绍该色谱柱的技术参数、使用说明，并给出一些实际应用案例。
一、产品特点AcepFP C18色谱柱具有以下特点：1. 高度稳定性：该色谱柱采用优质的C18填料，具有出色的化学稳定性和物理耐受性，保证色谱柱的稳定性和长期使用寿命。
2. 高分离效果：AcepFP C18色谱柱具有极佳的分离效果，可有效地分离各种复杂的化合物混合物，提高实验的分析准确性和可靠性。
3. 宽pH范围：该色谱柱适用于广泛的pH范围，可在酸性、碱性和中性条件下稳定分离化合物。
4. 良好的再生性：AcepFP C18色谱柱具有良好的再生性能，可多次使用而不损失分离效果和分辨率。
二、技术参数以下是AcepFP C18色谱柱的主要技术参数：- 型号: AcepFP C18- 柱径: 根据实际需求选择- 长度: 根据实际需求选择- 填料颗粒大小: 5μm- pH范围: 2-10- 最大使用压力: 400 bar- 表面积: 300 m²/g- 碳负荷: 18%三、使用方法1. 色谱柱的准备：a. 检查色谱柱的外观，确保无损坏。
b. 连接色谱柱到色谱系统中，注意正确安装柱芯和连接管路。
2. 前处理样品：a. 样品前处理应根据实验需求进行。
b. 注意采用合适的溶剂及溶解度，以保证样品溶解彻底。
3. 样品注入：a. 使用注射器将前处理好的样品插入到色谱柱的进样口处。
b. 控制注射量和流速，避免色谱柱承受超过最大使用压力。
4. 色谱条件参数设定：a. 根据分析需求设定流速、温度和梯度等参数。
b. 合理设定检测器的波长和灵敏度，保证信号的准确性和清晰度。
5. 结果分析：a. 分析实验结果，注意样品峰的对称性、分离度和峰形。
C18色谱柱通用使用方法
C18/C8色谱柱使用方法
一、新柱活化：新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，
再换成流动相进行平衡；如果流动相中含有缓冲盐，在换成流动相前，请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡；
二、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
三、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在，新柱子在使用
之前需用100%的甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速平衡30min 左右，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用100%的纯甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速冲洗30min左右，最后用100%的纯甲醇（色谱纯）保存。
四、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在，新柱在使用之前
需用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min 左右，将新柱高浓度甲醇溶液完全置换掉，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右，将色谱柱中缓冲盐溶液完全置换掉，最后用100%的纯甲醇清洗色谱柱30min，最后用纯甲醇保存色谱柱。
acepfp c18色谱柱说明书
acepfp c18色谱柱说明书ACE C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，因其针对不同的分析需求而设计了多种规格，本说明书将详细介绍该色谱柱的结构、特点、应用范围及使用方法等。
1.结构及特点：ACE C18色谱柱采用高纯度、高效能的C18修饰剂将C18烷基链固定在硅胶基质表面，形成反相色谱柱。
此外，该色谱柱还具有以下特点：1.1高效能：ACE C18色谱柱具有较高的分离效果，可用于多种复杂样品的分离和纯化。
1.2良好的稳定性：色谱柱表面修饰牢固，具有良好的耐久性和稳定性，可保持良好的分离性能。
1.3广泛的应用范围：ACE C18色谱柱适用于多种分析领域，如生物医药、环境监测等。
1.4多种规格可选：ACE C18色谱柱提供多种规格选择，适合不同的分析需求。
2.应用范围：ACE C18色谱柱适用于以下分析领域：2.1生物医药领域：可用于分离和纯化生物样品中的药物、蛋白质、肽段等。
同时，ACE C18色谱柱对氨基酸、糖类等也具有较好的分离能力。
2.2环境监测领域：可用于分析各类环境样品中的有机污染物，如农药、药物残留物、工业废水中的有机化合物等。
2.3食品安全领域：可用于食品中有害物质的检测和分析，如农药残留、添加剂等。
3.使用方法：3.1实验前的准备：开封前需检查色谱柱是否完好，如有损坏或泄漏请勿使用。
将色谱柱安装在色谱仪上，并根据实际要求选择适当的流动相和检测器等。
3.2流动相配制：根据具体分析需求，配置合适的流动相，确保流动相溶液的纯度和pH值的准确性。
3.3柱温控制：对于某些特殊的实验需求，可考虑在分析过程中加热或冷却色谱柱。
3.4样品处理：通常情况下，应尽量减小样品表面活性剂、杂质及盐类的影响，以避免对分离效果的干扰。
3.5分离条件优化：根据分析需要，调整流速、柱温、柱长度、梯度elution等分离条件，以达到最佳分离效果。
3.6结果分析：根据检测器的输出结果，进行相应的定量或定性分析，记录并解释实验结果。
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南1.前处理：在使用C18色谱柱之前，需要对柱进行适当的前处理，以去除可能存在的杂质和污染物，保证柱的稳定性和分离效果。
常用的前处理方法包括：-水洗：用纯水反复洗涤柱，直到洗涤液的pH值稳定在中性范围内。
-酒精洗涤：用纯乙醇或甲醇溶液洗涤柱，去除柱内的有机污染物。
-pH调节：根据需要，可以使用酸碱溶液调节柱内的pH值。
-热水洗涤：将柱放入热水中，加热洗涤一段时间，以去除柱内的有机物。
2.样品准备：在进行色谱分析之前，需要对样品进行适当的准备，以保证分析结果的准确性和可重复性。
常用的样品准备方法包括：-溶解样品：将样品溶解在适当的溶剂中，以便于进样和溶解度的提高。
-过滤：使用0.22μm的微孔滤膜过滤样品，去除颗粒物和杂质。
-浓缩：对于含有低浓度目标物的样品，可以使用浓缩技术进行提纯和浓缩。
-衍生化：对于不易分离或检测的化合物，可以使用衍生化技术进行改性，提高其分离性和检测灵敏度。
3.柱条件的选择和优化：选择合适的柱条件是保证色谱分离效果和分析结果准确的关键。
在选择C18色谱柱时，需要考虑以下因素：- 柱尺寸：根据样品量和分离需求选择合适的柱尺寸，常见的尺寸有4.6mm×250mm和4.6mm×150mm。
-颗粒大小：根据需要的分离效果选择合适的颗粒大小，常见的颗粒大小有3μm和5μm。
-流动相选择：根据样品的性质和分离要求选择合适的流动相组成和pH值。
-流速：根据分离效果和分析时间进行优化，一般情况下，流速较低可以提高分离效果，但也会增加分析时间。
4.常见问题和解决方法：在使用C18色谱柱的过程中，可能会遇到一些常见的问题，如峰形畸变、峰分离不良、背景噪声高等。
-峰形畸变：可能是由于流速过高或柱温度不稳定造成的，可以尝试降低流速或优化柱温度。
-峰分离不良：可能是由于流动相组成不合适或样品准备不当造成的，可以尝试调整流动相组成或改进样品准备方法。
-背景噪声高：可能是由于柱的老化或样品中存在杂质造成的，可以更换新的柱或改进样品准备方法。
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南1.准备工作：在使用C18色谱柱之前，首先需要对柱进行适当的预处理。
先用纯溶剂（如甲醇或乙腈）进行均相柱平衡，然后再用适当的缓冲液进行反相柱平衡，可提高色谱分离效果。
2.样品处理：对于不同的样品，需要进行不同的预处理。
对于蛋白质或多肽等样品，可能需要进行脱盐、浓缩或去除杂质等步骤。
对于小分子有机物或天然产物等样品，可能需要进行提取、纯化或浓缩等步骤。
3.设置参数：根据实验要求，设置好色谱仪的参数，包括流速、波长和检测器类型等。
这些参数可以根据实验的需要进行调整，以获得最佳的分离效果和检测灵敏度。
4.进样：将经过预处理的样品注入色谱柱中。
可以使用自动进样器或手动进样器进行进样，注意保持进样量的一致性，避免浓度过高或过低对分离效果的影响。
5.优化分离条件：根据实验需要，逐步调整流速、缓冲液pH值、缓冲液浓度和梯度等参数，以获得最佳的分离效果。
在进行调整时，可以根据实验结果进行评估，通过增加或减少流速或调整梯度的斜率等方法来提高分离效果。
6.监测和记录结果：在整个实验过程中，需要及时监测和记录分离结果。
可以通过使用UV检测器、荧光检测器或质谱仪等设备进行监测，并将数据记录下来以备后续分析。
7.色谱柱保养：使用C18色谱柱后，需要进行适当的保养和维护，以延长色谱柱的使用寿命。
在每次使用后，需要进行均相柱平衡和反相柱平衡，以去除样品残留和保持色谱柱的稳定性。
8.解决问题：在实验中，可能会遇到一些问题，如分离不完整、峰形不对称、峰形畸变、背景噪音等。
这时，需要进行一些排查，如检查样品预处理是否合适、柱平衡是否充分、柱是否老化等。
可以根据问题的具体情况，调整柱温、流速、柱平衡时间等参数，以解决问题。
总之，C18色谱柱的使用需要注意一系列的步骤和条件，以获得最佳的分离效果和分析结果。
通过合理设置参数、优化分离条件和及时监测结果，可以更好地应用C18色谱柱进行样品的分离和分析。
同时，在使用过程中要保持良好的柱保养和解决问题的能力，以提高实验的成功率和效率。
C18色谱柱使用方法
C18色谱柱使用方法一、准备工作1.检查色谱柱的外观，确保没有破损或污染。
2. 根据实验需求选择适当的色谱柱规格，一般情况下使用内径4.6mm的色谱柱。
3.准备好色谱柱所需的溶剂和样品，并通过滤器将溶剂过滤。
二、连接和平衡色谱柱1.将色谱柱连接到色谱系统中，并根据仪器的要求进行调节。
确保色谱柱的连接稳固，无泄漏。
2. 打开色谱系统的背压调节阀，逐渐加压至平衡背压。
一般情况下，平衡背压为100-200 bar。
3.对于新的色谱柱，首次使用时需要进行初次平衡。
这可以通过注射纯溶剂并保持一段时间进行实现。
注射溶剂的体积一般为色谱柱体积的2-5倍。
三、样品注射和分离条件设置1.根据实验需求调节进样器的体积。
一般情况下，进样体积为10-20μL。
对于高浓度样品，进样体积可以适当减小，对于低浓度样品则可以适当增加。
2.根据样品的特性选择合适的流动相组成。
对于一般的有机物分析，可以选择的流动相是甲醇和水的混合物。
根据样品的极性，可以调节甲醇含量。
3. 设置流速。
一般情况下，流速为0.8-1.5 mL/min。
流速过高会影响分离效果，流速过低则分析时间过长。
四、优化分离条件1.如果初始分离效果不理想，可以尝试调整流动相的组成。
可以尝试不同比例的有机溶剂和水，或添加缓冲剂来改善分离效果。
2.调节流速，适当降低流速可以改善分离效果。
3.调节柱温，提高柱温可以加速分离，但过高的柱温可能导致柱效降低。
五、分离结束和保养1.当要分离的组分通过柱时，停止进样，并继续使用纯溶剂进行洗脱，以保证所有样品都被顺利洗脱。
2.分离结束后，关闭背压调节阀，将色谱柱与系统断开。
3.按照厂家的要求进行色谱柱的保养。
一般情况下，可以用少量的纯溶剂进行保养，然后用乙腈或甲醇进行封存。
总结：以上就是C18色谱柱的使用方法。
在使用C18色谱柱时，需要进行适当的准备工作，在正式分离前要进行柱的连接和平衡。
根据样品的特性和分离需求，设置合适的样品注射和分离条件。
Kinetex C18 型号 色谱柱 使用注意事项 和优化说明说明书
Column Care and Optimization Notes色谱柱使用注意事项和优化说明Entretien de colonnes et notes d’optimisationSäulenschutz und Optimierungstipps Istruzioni per la Manutenzione e Note per l’Ottimizzazione Precauciones y notasde optimizaciónGuía para el cuidadoy optimizaciónGuia de Cuidados e Otimização取扱説明書カラムケアと最適化SPECIFICATIONSShipping Solvent• Kinetex C18, EVO C18, XB-C18, C8, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5 and PFP columns are shipped in Acetonitrile / Water (≥ 50:50 v/v; exactcomposition dependent on column dimensions)• Kinetex HILIC is shipped in Acetonitrile / Water 90:10 (v/v)Test CertificateEach Kinetex C18, EVO C18, XB-C18, C8, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5 and PFP column is individually tested before shipment. A test certificate showing the separation parameters for the reversed phase test mixture containing uracil, acetophenone, toluene, and naphthalene can be found online at /mysupport.Each Kinetex HILIC column is individually tested before shipment. A test certificate showing the separation parameters for the HILIC test mixture containing toluene, uracil, and cytosine can be found online at/mysupport.If the performance of your Kinetex column is not similar to the test certificate, please review the system optimization tips in this guide or contact Phenomenex.OPERATING PARAMETERSColumn InstallationThe arrows on the column tag indicate the flow direction. Do not operate or back-flush a Kinetex 1.3 µm column in the opposite direction to the one indicated by the arrow on the column tag. Phenomenex recommends the use of HPLC / UHPLC Sure-Lok™ High Pressure PEEK male nut fittings for installation of Kinetex columns on HPLC / UHPLC systems. The convenient one-piece design (AQ0-8503) is pressure rated to 12,000 psi (827 bar), while the 3-piece unit (AQ0-8504 with AQ0-8505), which contains a PEEK nut, a ferrule, and stainless steel gripping ring, will provide leak-free connections up to 19,000 psi (1,310 bar). A handy fitting tighteningtool (AQ0-8530) is available to facilitate achievement of a leak-free connection.Mobile Phase Restrictions• Kinetex EVO C18 columns are stable from pH 1 - 12 and can be used with typical reversed phase mobile phase (aqueous methanol, aqueous acetonitrile or appropriate aqueous buffer / methanol or aqueousbuffer / acetonitrile mixtures)• Kinetex C18, XB-C18, C8, Biphenyl and Phenyl-Hexyl columns are stable from pH 1.5 to 10* and can be used with typical reversed phase mobile phase (aqueous methanol, aqueous acetonitrile or appropriate aqueous buffer / methanol or aqueous buffer / acetonitrile mixtures)• Kinetex F5 and PFP columns are stable from pH 1.5 to 8.5 and can be used with typical reversed phase mobile phase (aqueous methanol, aqueous acetonitrile or appropriate aqueous buffer / methanol oraqueous buffer / acetonitrile mixtures)• Kinetex HILIC columns are stable from pH 2.0-7.5 and can be used with typical HILIC mobile phase (acetonitrile / aqueous buffer mixtures) * For isocratic conditions only.Use only high purity reagents and high quality chromatography grade solvents to prepare mobile phase. Trace impurities can dramatically degrade column lifetime. Degas and filter all mobile phase prior to use. Ensure sample (and matrix) are completely soluble / miscible with mobile phase. Immiscible solvents or buffer salt precipitation can permanently damage the column.Kinetex® Core-Shell Technology columns provideENGLISH performance gains on any LC system.Please carefully read these care and use notes toobtain the best results on your system.Avoid:• Operating below the lower pH limit specified for each Kinetex column as this will hydrolyze the bonded phase• Operating above the upper pH limit specified for each Kinetex column as this will dissolve the silica• Operating a Kinetex 1.3 µm column in the opposite direction to what is indicated by the arrow on the column tag• Immiscible solvents and buffers• Sudden pressure changesOperating BackpressureThe maximum operating pressure for Kinetex 5 µm and 2.6 μm columnsis 8,700 psi (600 bar)*, and for Kinetex 1.7 μm and 1.3 µm columns it is15,000 psi (1,000 bar). The mobile phase flow rate should be set suchthat the column backpressure does not exceed this maximum operating pressure. Note that operating at or near the maximum pressure willresult in shorter column lifetimes.* 2.1 mm ID columns are pressure stable up to 1,000 bar.Operating TemperaturesKinetex columns can be used up to a maximum temperature of 60 °C. Reduced mobile phase viscosity (and backpressure) and increasedmass transfer rates will be realized above 25 °C. When operating athigh pH (> 8), lower operating temperatures are recommended forlonger column lifetime. Note that operating at or near the maximum temperature will result in shorter column lifetimes.Column Cleaning and RegenerationIf an increase in operating backpressure is observed, reverse flushthe column (do not try this on any Kinetex 1.3 µm column or any other manufacturers’ columns) with reduced flow rates indicated below:2.1 mm0.1 mL/min3.0 mm0.3 mL/min4.6 mm0.5 mL/minReversed Phase (C18, EVO C18, XB-C18, C8, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5 and PFP)Kinetex reversed phase columns can be cleaned by flushing with 10 to20 column volumes of the following solvent mixtures in succession:1) 5:95 Acetonitrile / Water (or Methanol / Water) for buffer removal2) 95:5 Acetonitrile / Water (or Methanol / Water)3) THF (Tetrahydrofuran)4) 95:5 Acetonitrile / Water (or Methanol / Water)5) 5:95 Acetonitrile / Water (or Methanol / Water)6) Equilibrate with mobile phaseHILICKinetex HILIC columns can be cleaned by flushing with 10 to 20 column volumes of:1) 95 % Water / 5 % Acetonitrile (For buffer removal)2) 95 % 100 mM Ammonium Acetate, pH 5.8 / 5 % Acetonitrile3) 95 % Water / 5 % Acetonitrile4) Equilibrate with mobile phaseColumn StorageReversed Phase (C18, EVO C18, XB-C18, C8, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5 and PFP)Column storage for a period longer than several days is recommended in ≥ 50 % (v/v) acetonitrile or methanol in water. If the mobile phase contained buffer salt, then flush the column with 10 to 20 column volumes of water / acetonitrile or water / methanol to remove the buffer salts before storage. After flushing the column, insert column end plugs securely to prevent evaporation and drying out of the column bed. HILICColumn storage for a period longer than several days is recommended in 90 % (v/v) acetonitrile in water. If the mobile phase contained buffer salt, then flush the column with 10 to 20 column volumes of 90:10 acetonitrile / water to remove the buffer salts before storage. After flushing the column, insert column end plugs securely to prevent evaporation and drying out of the column bed.Kinetex 1.3 µm Operating TipsEvery care should be made to prevent and eliminate microbial growth in mobile phase reservoirs and UHPLC system plumbing when using a Kinetex 1.3 µm column. Some general recommended tips include: Solvents: Use ultra-pure, high quality UHPLC solventsAqueous Mobile Phases: Change daily or add 5-10 % organic modifier to waterMobile Phase-Reservoirs: Rinse aqueous reservoirs with methanol prior to refillingUHPLC System: Flush with isopropanol or methanol weekly OPTIMIZING THE PERFORMANCEOF YOUR KINETEX® COLUMNFlow RateKinetex columns are capable of maintaining high efficiencies with increasing flow rate. To reduce analysis times using Kinetex use shorter length columns (30, 50 or 75 mm) and increase the mobile phase flow rate.There is an optimal Kinetex column for your system and operating conditions.Visit/optimizeto determine the starting Kinetex columndimensions for your method.Subject to Phenomenex Standard Terms and Conditions which may be viewed at /TermsAndConditionsTrademarks Kinetex is a registered trademark, SecurityGuard is a trademark of Phenomenex. Kinetex EVO is patented by Phenomenex. U.S. Patent Nos. 7,563,367 and System OptimizationKinetex ® 2.6 µm core-shell columns operate comfortably withinthe pressure limits of conventional HPLC instruments and rival the performance of sub-2 µm fully porous particles achieved on UHPLC instruments. However, to maximize the benefits from your Kinetex core-shell column do the following:• Minimize sample dispersion before the column1. Gradient elution will minimize dispersion2. In isocratic elution, use an injection solvent that’s weaker than your mobile phase• Optimize detector settings by adjusting the scan rate and/or the time constant to the fastest possible setting such that signal-to-noise (s/n) is not adversely affected.• Minimize the extra-column volume between the injector and the column, and between the column and the detector1. Minimize the length of all connection tubing2. Use 0.12 mm ID (0.005 in.) tubing whenever possiblea) 0.17 mm ID (0.007 in.) tubing is acceptableb) Avoid, if possible, using 0.25 mm ID (0.010 in.) tubing3. Use extremely low dead-volume fittings4. Ensure all connecting tubing is seated properly at every connection • Use a micro volume flow-cell1. Standard flow cells on conventional LC systems can be >10 µL2. For best results, replace standard flow cells with <3 µL flow cells (<2 µL when using 2.1 mm ID columns)NOTE : To convert existing HPLC and UHPLC methods for use on Kinetex columns we have created a conversion calculator, available on the Phenomenex website: /optimizeExtending Column LifetimePhenomenex recommends the use of the SecurityGuard ™ ULTRA guard cartridge system to extend the lifetime of your Kinetex column, especially with samples extracted from complex matrixes. Ideally, samples must be completely dissolved in the mobile phase or filtered through a syringe filter of approximately 0.20 µm porosity.ENGLISH SecurityGuard ULTRA Cartridge Holder Cartridge HolderOrdering InformationAJ0-9000SecurityGuard ULTRA Cartridge Holder ea SecurityGuard ULTRA Cartridges© 2015 Phenomenex, Inc. All rights reserved.技术规范保存溶剂• Kinetex® C18、EVO C18、XB-C18、C8、Biphenyl、Phenyl-Hexyl、F5和PFP寄送时保存在乙腈/水中（≥ 50:50 v/v; 确切比例取决于柱规格）• Kinetex HILIC保存在乙腈/水90:10（v/v）中测试证书每支Kinetex C18、EVO C18、XB-C18、C8、Biphenyl、Phenyl-Hexyl、F5和PFP色谱柱在装运前都经单独测试。
C18萃取小柱使用说明书
C18萃取小柱使用说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1C18萃取小柱使用说明书C18小柱使用方便、可再生使用，是一种样品处理的固相萃取装置，本小柱是美国通过GMP和ISO9002认证的WATRES公司生产，是一流的药物萃取装置。
一、介绍此使用手册简单介绍小柱的使用和维护C18小柱有五种型号供萃取使用，包括：Plus、Light、Classic、Vac和Vac Rc 五种柱型。
C18吸附剂包括c18\+c18\c8\+c2二、固相萃取技术样品处理是分析中最常用的步骤，C18小柱可减少样品处理时间，可做如下使用：纯化：固相萃取小柱中的填料会吸附样品中所感兴趣的化合物或者样品中的杂质。
这样，当样品流出时，所选择的化合物（包括杂质）被留在萃取柱上。
微量萃取或浓缩：当分析物量在方法限量之下时，可浓缩分析物。
分离：依据样品不同极性进行梯度洗脱、提取样品、增加样品浓度。
溶解交换：如果样品难溶，可用合适的溶剂通过小柱吸附和洗提分析物。
三、C18萃取小柱的使用下列是小柱使用的五个步骤，每一步不同但并非必须。
步骤1：准备样品——样品既可以是液相也可以是气相，如果是固相，样品上柱前必须溶解或提取。
步骤2：柱的活化或平衡——对于反相柱如C18来说，活化是必须的，先使用强溶剂润湿小柱固定相，再用弱溶剂平衡、活化小柱。
步骤3：上样——将样品装入萃取柱，此时，固相萃取小柱中的填料会吸附样品中所感兴趣的化合物或者样品中的杂质。
这样，当样品流出时，所选择的化合物（包括杂质）被留在萃取柱上。
步骤4：冲洗——用一种强得能洗脱杂质而又弱得能保留感兴趣的化合物的冲洗液来冲洗杂质。
步骤5：洗脱感兴趣的化合物——用溶剂将被吸附在萃取柱上的化合物洗脱在溶液里。
四、影响分离的因素样品分离效果与流速和上载有关，下列是好的建议：小柱的流速——如果样品流速太快，有效成分可能没留在吸附剂中，所以活化小柱时流速为5~10ml/分钟，使用型号为Light、Vac 1 cc和 Vac 3 cc 200mg和其它的离子交换柱上载和洗提样品时，采用流速为~1ml/分钟，其它小柱采用流速为2~10ml/分钟。
c18柱子使用手册
C18柱使用手册正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns注意此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
C．对于极性键合柱的特殊说明由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。
C18色谱柱的使用说明
C18色谱柱的使用说明
一、色谱柱使用前注意事项
色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
对于在正相条件下评价的色谱柱，如果使用的条件为反相时，请用一个中介流动相（如异丙醇）先置换掉柱内的储存液，然后再应用于反相条件，否则，会对色谱柱造成极大的伤害，将会明显地减少色谱柱的使用寿命。
在反相色谱柱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，一定不要把色谱柱直接接上，应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过度一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机中很容易析出，而使色谱柱堵塞，无法恢复。
二、色谱柱的使用方向
色谱柱标签上的箭头所示方向是装填和评价时流动相流动的方向，使用过程中流动相的方向也应按此方向。
三、流动相
流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能地使用色谱纯，或至少是分析纯试剂；配流动相的水最好是超纯水或者是全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45或0.22μm的滤膜过滤一次则更好，这一点对含盐的流动相尤为重要。
另外，装流动相的溶器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
总之，必须保证所使用的流动相和色谱系统是足够的清洁。
四、样品
样品也要尽可能的清洁，同样可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，如无特殊要求，所有的溶剂和样品都应严格脱水。
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正相、反相和极性胶联柱使用手册
注意
此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1．简介
此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将反相柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2．色谱柱老化
在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化
要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化
柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
C．对于极性键合柱的特殊说明
由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。
如果这些溶剂不能混溶，必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。
3．洗脱液
注意第1节和第2节。
一定不要使用pH低于2或者高于7的缓冲液，这是由于它们会改变固定相的性质。
极性键合柱最好使用在3到5 之间。
在使用以前，洗脱液要进行脱气，以及使用0.5微米的滤膜过滤，以免发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查水溶液中有否微生物生长，否则你的柱子会堵塞，柱压会升高到无法接受的水平。
4．流量和压力
柱内径（毫米）流速（ml/min）
最佳最高
2.0 0.2 1.0
3.0 0.4 2.0
4.6 1.0 4.0
10.0 4.7 18.0
注意：最高压力：不锈钢柱：4500psi；玻璃柱：3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子，要降低流量至0，等待洗脱液完全流出柱子为止（2分钟）。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱（见第6节）会防止污染物沉积在分析柱上。
5．样品准备
保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱，不管是来自流动相还是样品。
特别地，要禁止导入颗粒杂质。
这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。
6．保护柱
一定要使用保护柱，因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。
一般保护柱的选择以同型号为原则，这样柱子的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似。
当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。
7．进样量和浓度
柱子的最大载样量取决于：柱子的型号，使用的条件和样品的类型。
很难给出一个一般的指示。
对于进样体积的建议则比较容易（见表中的典型值）。
注射了太大体积或太浓的样品会使峰展宽或者峰融合。
柱尺寸（长度*内径）最大样品体积
250×2.0mm ±10μl
200×3.0mm ±15μl
250×4.6mm ±50μl
250×10.0mm ±250μl
8．温度
HPLC柱最好在柱温箱中使用。
重复性取决于温度控制。
最佳的温度与特定的应用有关。
温度影响洗脱液流动的线速度。
在使用ChromSep玻璃柱的时候，一定要调节流速使压力保持在3000psi以下。
9．贮存
一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。
贮存溶剂应当含有至少20%的有机溶剂，以防止有细菌的生长。
10．柱效损失的可能原因
1．额外的峰展宽。
当使用小直径或者长度较短的柱子时，峰展宽的情况可能比较明显。
要保证管路的长度和内径都保持最小。
检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积。
2．洗脱的平衡时间不够。
3．不正确柱温。
4．不正确的修正浓度。
5．床压缩。
使用了过大的洗脱流速。
将柱子反向，使用低流速。
11.柱效丧失和/或高背压
1．颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上（它们都会使背压增高）。
如果柱压增高了，将柱子与进样器断开，运行泵，以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污染（样品、洗脱液和系统）。
倒转柱子，以反向的流动来冲洗柱子。
如果这样不能解决问题，更换进口过滤器或者筛板。
2．微生物在洗脱液中生长。
倒转柱子，尝试以反向的流动来将污染物冲洗出柱子。
更换进口过滤器或者筛板。
3．有蛋白质脂肪，油脂污染或者极性化合物等污染。
再生柱子（见第12节）。
12.再生
1．再生反相色谱柱
a．首先倒转柱子。
b．以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水
—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。
c．柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。
注意：在使用另外的淋洗方法的时候，一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液，保证其后的洗脱液可以混溶。
2．再生硅胶柱
a．首先倒转柱子。
b．以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照异辛烷（或己烷）—乙酸乙酯—干燥的异辛烷（或己烷）进行。
c．柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。
3.再生极性键合柱
取决于使用的条件，可以使用反相的条件，也可以使用硅胶柱的条件。
注意：再生会导致柱效降低，另外绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱，因为可能与固定相发生反应。
四氢呋喃作为替代可以使用。