大豆耐热β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的表达

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芽孢杆菌β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

芽孢杆菌β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达
王为先;张沁;申同健
【期刊名称】《遗传学报：英文版》
【年(卷),期】1993(20)4
【摘要】本工作采用新设计的营养缺陷型淘汰筛选法,从本实验室筛选的芽孢杆菌Bacillus R2中分离到能够水解生淀粉的β-淀粉酶基因。

该基因所在的DNA片段
为5.25kb,在大肠杆菌(E.coli)中的表达产物具有与供体菌相同的淀粉酶特性,实验
室条件下酶产量为500IU/ml以上,RDA值为57%,并且可以全部分泌到培养基中。

【总页数】7页(P374-380)
【关键词】β-淀粉酶;基因克隆;芽孢杆菌
【作者】王为先;张沁;申同健
【作者单位】中国科学院化工冶金研究所生化工程室;中国科学院生物物理研究所【正文语种】中文
【中图分类】Q939.110.3
【相关文献】
1.地衣芽孢杆菌α-耐高温淀粉酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 [J], 潘风光;宋德群;任洪林;艾永兴;柳增善
2.地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及其产物的分泌[J], 李金霞;蔡恒;路福平;杜连祥
3.地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆及表达 [J], 蔡恒;陈忠军;
路福平;杜连祥
4.产β-淀粉酶菌株的筛选及β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达 [J], 李猛;陈利飞;杨建楼;马春玲
5.嗜热脂肪芽孢杆菌耐热α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 [J],
N.Tsukagoshi;李尔炀
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甘薯β-淀粉酶cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达

甘薯β-淀粉酶cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达张勇为;张义正【期刊名称】《高技术通讯》【年(卷),期】2004(014)009【摘要】利用RT-PCR技术从甘薯新大紫(Ipomoea batatas Lam cv. Xindazi)块根总RNA中扩增出预期大小的DNA片段(约1.5kb).将该片段克隆至pMD-T载体,经酶切分析和序列测定后,正向插入的重组子命名为pMD-cAmy,插入片段长1521bp,编码499个氨基酸残基的多肽,分子量55 998kD.克隆的β-淀粉酶cDNA 与报道的甘薯另一品种Kokei No.14的mRNA 有99%的序列相同,与Calystegia sepium β-淀粉酶mRNA有87%相同.重组子pMD-cAmy经I PTG诱导后,胞内可溶性提取物经凝胶电泳和活性染色,出现明显的淀粉酶活性带.SDS-PAGE表明,大肠杆菌表达的β-淀粉酶亚基的分子量约为50kD.重组子pMD-cAmy在淀粉平板上形成明显的水解圈,说明甘薯β-淀粉酶cDNA不仅能在大肠杆菌表达,而且能将有活性的β- 淀粉酶分泌到胞外.对重组子pMD-cAmy和甘薯块根可溶性提取物的比较发现,大肠杆菌表达的β -淀粉酶与甘薯块根的β-淀粉酶除迁移率不同外,对淀粉酶活性抑制剂EDTA和β-巯基乙醇的敏感性相同.【总页数】5页(P29-33)【作者】张勇为;张义正【作者单位】四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室,成都,610064;四川大学生命科学学院四川省分子生物学及生物技术重点实验室,成都,610064【正文语种】中文【相关文献】1.蜡梅花香基因SAMT的cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达 [J], 马蕾;李慧芬;彭忱晨;陈子柱;龙章富2.蜡梅花香基因SAMT的cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达 [J], 马蕾;李慧芬;彭忱晨;陈子柱;龙章富3.欧李八氢番茄红素合成酶cDNA克隆、序列分析及在大肠杆菌中的功能表达[J], 张建成;杜俊杰;刘和;王鹏飞;薛晓芳;穆霄鹏;陈俊奇4.产β-淀粉酶菌株的筛选及β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达 [J], 李猛;陈利飞;杨建楼;马春玲5.鲢小清蛋白的cDNA克隆及在大肠杆菌中的原核表达 [J], 王慈;曹敏杰;郑晓江;詹春兰;刘光明;蔡秋凤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高温α-淀粉酶基因突变体在大肠杆菌、毕赤酵母中的表达

糖化。淀粉糊化后的自然 LV 为 !Z#，液化过程是在高温下进行的，常用的高温! 糖化 4淀粉酶作用的最适 LV 为 #Z’ ) "Z#，过程的最佳 LV !Z$ ) !Z#，在上述过程中就要反复调节 LV，调整不当还会产 LV 值的调整大大增加了化学试剂的消耗，
［$］。如果能研究出既耐高温、又在偏酸性环生大量的副产物
。
主要试剂和仪器：各种限制性内切酶、 5! K^3 连接酶
及 3"4 K^3 聚合酶购自 59U9S9 公司，所用化学试剂均为分析纯。引物合成由上海博亚公司完成。 R7$!%% 扩增仪（3LL6:0D 2:.G?G-08G）。 "$% 表达载体的构建根据 W0A29AX 中 ".5/ 基因的序列以及大肠杆菌和毕赤酵母表达载体上的多克隆位点的特征，设计合成了两对引物：。 R& 、 R$ 和 R* 、 R（表 &） !
巴斯德毕赤酵母表达系统近年来被广泛应用，由于其含有分泌信号，可将重组蛋白分泌到胞外，人们已成功表达了
［( ) B］多种外源蛋白。本文主要报道的是本实验室得到的一
个高温! 在大肠杆菌及毕赤酵母中进 4淀粉酶基因的突变体，行了表达，并对其产生的高温! 4淀粉酶进行了相关酶学性质的研究分析。
以质粒 1C/4!:"4DEF 为模板，分别以 .& 、 .> 和 .; 、 .B 为引物，进行 ./0 扩增， .& 、 .> 扩增产物经过 !"# 0!、 $%& A! 双酶切连接至 1GH>>I， .; 、 .B 扩增产物经过 !"# 0!、 ’#( ! 双酶切连接至 1.J/@K。 !%& 转化及转化子筛选将重组质粒 1GH>>I:"4DEF、 1.J/@K:"4DEF 转化 ! L "#)* 在含氨卞青霉素的抗性 NG 平板上筛选转 MA8 "感受态细胞，化子，提取质粒并进行酶切鉴定。将转化子（ MA8 O1GH>>I: " 点种在含 &P 可溶性淀粉的 NG 平板上，观察是否出 "4DEF）现透明的淀粉水解圈。提取 1.J/@K:"4DEF 质粒，经 $+) #酶切后，回收大片段，电击法转化毕赤酵母 =’&&8，涂布 0MG 平板， ;IQ 培养直至转化子出现，用牙签挑取转化子对应点种到 FF 和 FM 平板上，在 FM 平板上生长正常，在 FF 平板上不生 ;IQ 培养 >5，长或者生长不正常的转化子为阳性转化子（ =’&&8O1.J/@K:

淀粉酶基因的构建及其在大肠杆菌(amp+)中的表达

淀粉酶基因的构建及其在大肠杆菌（amp+）中的表达一、相关背景淀粉酶是较早发现的酶类之一，早在1833年Payen和Persoz已首次从麦芽的水抽提物中用酒精沉淀分离到淀粉酶。

1894年高峰让吉从米曲霉(Aspergillus oryzae)中提取出作为消化剂的酶，即高峰淀粉酶。

1919年法国Boidin和Effront首次用枯草杆菌生产淀粉酶。

淀粉酶(amylase，AMY,AMS)是作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等α－1，4-葡聚糖，水解α－1，4-糖苷键的酶类的总称。

现在淀粉酶大致可分为四大类:第一类α-淀粉酶，广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物。

第二类β-淀粉酶(EC3.2.1.2)从底物非还原性末端顺次水解每隔一个α-1,4糖苷键，切下的是麦芽糖单位。

第三类葡萄糖淀粉酶（EC3.2.1.3）,习惯上简称糖化酶，从底物的非还原性末端顺次水解α-1，4糖苷键和分支的α-1,6键生成葡萄糖。

第四类解枝酶或异淀粉酶(EC3.2.1.9)只水解糖原或支链淀粉分支点α-1,6糖苷键，切下整个侧枝。

还有淀粉α-1，6葡萄糖酶是在分支点的葡萄糖单位仅一个时起作用。

淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料，由于淀粉酶退浆机械作用小，水的用量少，可以在低温条件下达到退浆效果，具有鲜明的环保特色。

除此之外，不同性质的α-淀粉酶还具有许多不同的用途。

耐热性α-淀粉酶，由于使用时温度提高，液化完全，用酶量少，操作比较容易，β-淀粉酶在食品工业中主要用于制造麦芽糖浆、啤酒、面包、酱油等。

在制醋工业中，常用β-淀粉酶代替部分麸曲节省成本，在白酒和其他工业中也可以用其作糖化剂。

在医药工业上，β-淀粉酶的一个重要用途是制造麦芽糖，医学上常用该酶和α-淀粉酶一道作为消化剂使用。

二、目前研究情况1 .国内外研究机构由于α-淀粉酶是具有重要应用价值的工业酶，国内外很多课题组对它进行了研究。

《基因工程及其应用》教案设计

全国中小学“教学中的互联网搜索”优秀教学案例评选《基因工程及其应用》教案设计一、教案背景1面向学生：√中学□小学2学科：生物2课时：43学生课前准备：布置学生预习，要求学生搜集基因工程应用成果的资料，并用PPT文件展示出来搜集转基因生物和转基因食品安全性问题的相关资料并准备相应的辨论稿。

二、教学课题●知识目标1知道基因工程的概念2掌握基因工程操作的基本工具。

3理解基因工程操作的基本步骤。

4举例说出基因工程的应用●能力目标1通过对概念、原理、方法的理解和掌握，逐步形成分析、综合等思维能力，具备运用学到知识评价和解决实际问题的能力。

2通过引导学生网上探究，引导学生主动参与，培养收集处理信息的能力、分析和解决问题的能力及交流与合作的能力。

●情感目标1形成结构与功能相统一的基本观点。

2培养理论联系实际的良好学风，培养爱国主义热情。

3关注科学与社会。

三、教材分析基因工程是现代生物科技中的热点，逐渐对人类的生产和生活产生巨大的影响，所以该内容被录入了现行的高中生物必修教材中，并且在选修教材中有更详细的阐述。

学习这一内容，既有助于学生对这一前沿科技的了解，也能让学生对科学、技术、社会三者的关系有更深入的理解，还能为学生的人生规划和发展提供一种新的视角。

本课学习的基因工程操作的原理及教材概括的基本步骤：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的表达与检测这四个步骤，都可以在必修1和必修2中找到理论基础。

但基因工程是在分子水平的操作，操作过程细微，抽象，实验现象看不见也摸不着，只凭教师讲述是很枯燥并较难讲清，学生也难以理解。

教学内容的呈现还具有一定的开放性，展示了对转基因食品安全性问题认识的不同观点，引导学生对转基因生物和转基因食品的安全性问题的关注、思考和交流。

教学重点：1简述基因工程概念。

2掌握基因工程的基本工具。

3理解基因工程的基本步骤。

4关注转基因生物及转基因食品安全性。

教学难点：1掌握基因工程的基本工具。

地衣芽孢杆菌耐高温_淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆_表达及其产物的分泌

地衣芽孢杆菌耐高温α2淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及其产物的分泌李金霞　蔡　恒　路福平　杜连祥(天津科技大学食品科学与生物工程学院,天津,300222)摘　要　以耐高温α2淀粉酶生产菌地衣芽孢杆菌染色体DNA 为模板,通过PCR 扩增耐高温α2淀粉酶基因,将扩增产物119kb 的DNA 片段插入到pUC19质粒中,再转化大肠杆菌JM109,通过在淀粉平板上形成透明圈等方法筛选到一株阳性克隆菌株JM109(pUAM ),其表达产物可分泌到培养基中,除去菌体的发酵液中每100m L 酶活可达到27个单位。

将发酵上清液浓缩后用冷无水乙醇分级沉淀,所得样品进行S DS 2PAGE 分析,得到分子质量为60ku 的目的蛋白带。

关键词　耐高温α2淀粉酶,克隆与表达,地衣芽孢杆菌,大肠杆菌,分泌第一作者:硕士研究生。

收稿时间:2003-11-10,改回时间:2003-12-08 耐高温α2淀粉酶由于其热稳定性好,适合于在高温下液化淀粉,因此被广泛应用于食品、制药等行业[1]。

目前国内外市场中常用的耐高温α2淀粉酶其最适pH 范围为6～7,在酸性条件下酶活会明显降低[2],不能满足一些在酸性条件下进行淀粉原料液化的要求,因此开发一种耐酸的高温α2淀粉酶势在必行。

作者通过基因扩增和分子克隆等方法,将耐高温α2淀粉酶基因克隆在大肠杆菌(Escherichia coli )JM109中,得到了一株阳性克隆菌株JM109(pUAM ),并对该菌株的分泌现象及机制作了初步分析,为耐高温α2淀粉酶基因的耐酸性改造及产物的表达和分泌奠定了基础。

1　材料与方法111　菌株及质粒供体菌:地衣芽孢杆菌(B acilluslichenif ormis )020401,由江苏星达生化工程有限公司惠赠。

质粒pUC19及受体菌E 1coli JM109为本实验室保存。

112　酶和试剂限制性内切酶、T 4DNA 连接酶、T aqDNA 聚合酶等工具酶购自T aK aRa 公司,标准分子质量蛋白质购自Fermentas 公司,标准分子质量核酸购自上海生物工程有限公司,所用试剂盒购自Promega 公司。

高中生物 1.4《蛋白质工程的崛起》素材新人教版选修3

1.4 蛋白质工程的崛起[课本问题答案和提示]（一）思考与探究1.蛋白质工程是应怎样的需求而崛起的？提示〔供教师在教学中参考〕：蛋白质工程的崛起主要是工业生产和基础理论研究的需要。

而结构生物学对大量蛋白质分子的精确立体结构及其复杂的生物功能的分析结果，为设计改造天然蛋白质提供了蓝图。

分子遗传学的以定点突变为中心的基因操作技术为蛋白质工程提供了手段。

在已研究过的几千种酶中，只有极少数可以应用于工业生产，绝大多数酶都不能应用于工业生产，这些酶虽然在自然状态下有活性，但在工业生产中没有活性或活性很低。

这是因为工业生产中每一步的反应体系中常常会有酸、碱或有机溶剂存在，反应温度较高，在这种条件下，大多数酶会很快变性失活。

提高蛋白质的稳定性是工业生产中一个非常重要的课题。

一般来说，提高蛋白质的稳定性包括：延长酶的半衰期，提高酶的热稳定性，延长药用蛋白的保存期，抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性丧失等。

下面举一个如何通过蛋白质工程来提高重组β-干扰素专一活性和稳定性的例子。

干扰素是一种抗病毒、抗肿瘤的药物。

将人的干扰素的cDNA在大肠杆菌中进行表达，产生的干扰素的抗病毒活性为106 U/mg，只相当于天然产品的十分之一，虽然在大肠杆菌中合成的β-干扰素量很多，但多数是以无活性的二聚体形式存在。

为什么会这样？如何改变这种状况？研究发现，β-干扰素蛋白质中有3个半胱氨酸〔第17位、31位和141位〕，推测可能是有一个或几个半胱氨酸形成了不正确的二硫键。

研究人员将第17位的半胱氨酸，通过基因定点突变改变成丝氨酸，结果使大肠杆菌中生产的β-干扰素的抗病性活性提高到108U/mg，并且比天然β-干扰素的贮存稳定性高很多。

在基础理论研究方面，蛋白质工程是研究多种蛋白质的结构和功能、蛋白质折叠、蛋白质分子设计等一系列分子生物学基本问题的一种新型的、强有力的手段。

通过对蛋白质工程的研究，可以深入地揭示生命现象的本质和生命活动的规律。

大豆天冬酰胺合成酶B基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

张继，王相晶，于丹，王晴，向文胜
（１．东北农业大学生命科学学院，哈尔滨１５００３０；２．黑龙江农业职业技术学院，黑龙江佳木斯１５４００７）
摘
要：根据ＧｅｎＢａｎｋ登陆大豆天冬酰胺合成酶（ＡＳ — Ｂ）基因序列（登录号：ＧＭＵ５５８７４）设计特异引物，通过
ＶｏｃａｔｉｏｎａｌａｎｄＴｅｃｈｎｉａｌｃＣｏｌｌｅｇｅ，ＪｉａｍｕｓｉＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ１５４００７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｏｆａｓｐａｒａｇｉｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ（ＡＳ — Ｂ）ｇｅｎｅｉｎｓｏｙｂｅａｎ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒ：ＧＭＵ５５８７４）．ａｐａｉｒｏｆｓｐｅｃｉｉｆｃｐｒｉｍｅｒｓｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅＡＳ — Ｂｇｅｎｅｆｒｏｍ
［ＵＲＬ］ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２３．１３９１．Ｓ．２０１３０７１１．１８４６．０１４．ｈｔｍｌ

超耐热酸性α-淀粉酶基因的克隆及其在酵母细胞中的表达

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中图分类号
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超耐热酸性α-淀粉酶基因在多型汉逊酵母中表达及与在毕赤酵母中表达的比较研

超耐热酸性α-淀粉酶基因在多型汉逊酵母中表达及与在毕赤酵母中表达的比较研超耐热酸性α-淀粉酶基因在多型汉逊酵母中表达及与在毕赤酵母中表达的比较研究利用毕赤酵母的质粒载体pPIC9K将极端耐热古菌Pyrococcus furiosus的超耐热酸性α-淀粉酶 (Amy) 基因转化到多型汉逊酵母HP-6中,获得重组汉逊酵母.经过甲醇进行诱导,表达产物的酶活性检测和SDS-PAGE电泳,证明α-淀粉酶(Amy)在多型汉逊酵母中利用AOX1启动子和α-因子信号肽有效表达并分泌到胞外.该酶的最适反应温度为90～100℃,最适作用pH为4.0～5.0,较之重组毕赤酵母的最适作用pH 还低0.5.此外与毕赤酵母的重组蛋白相比,重组汉逊酵母α-淀粉酶不仅菌株筛选简便、周期短,而且具有更容易筛选到高拷贝转化子以及适用于大规模工业发酵等优点.作者：郝帅郭建强李运敏岳丽丽矫庆华 HAO Shuai GUO Jian-Qiang LI Yun-Min YUE Li-Li JIAO Qing-Hua 作者单位：郝帅,HAO Shuai(中国科学院微生物研究所,北京,100080;中国科学院研究生院,北京,100049)郭建强,GUO Jian-Qiang(三元基因有限公司,北京,100083)李运敏,岳丽丽,LI Yun-Min,YUE Li-Li(VA Medical Centre 111C5,Department of Medicine University of California at San Francico 4150 Clement Street,San Francisco,CA 94121,USA) 矫庆华,JIAO Qing-Hua(中国科学院微生物研究所,北京,100080) 刊名：菌物学报 ISTIC PKU英文刊名：MYCOSYSTEMA 年，卷(期)：2006 25(4) 分类号：Q939.97 关键词：Pyrococcus furiosus AOX1启动子 MOX启动子α-因子信号肽。

淀粉酶分类及区别

淀粉酶分类及区别
1 淀粉酶
淀粉酶是一类能够将淀粉类化合物分解为单糖的酶，其主要的功
能是分解淀粉，形成可以供细胞利用的单糖。

淀粉酶可以被植物、动
物和细菌等微生物产生，主要生物有酵母、白色念珠菌、大肠杆菌等。

淀粉酶有许多类型，包括α-淀粉酶、β-淀粉酶等。

2 α-淀粉酶
α-淀粉酶是一种特殊的淀粉酶，它能够在极低浓度的pH环境下
工作，因此在体内、发酵和化学合成方面具有十分重要的应用价值。

α-淀粉酶是由α-淀粉芽孢杆菌（B.subtilis）产生的，能够分解
α-淀粉，有效地分解α-淀粉为可以被细胞吸收利用的小分子几丁聚
醣和单糖（如葡萄糖和果糖）。

此外，α-淀粉酶还可以用于分解1,4-α-D-异构麦芽糖，也称为高粘麦芽糖。

3 β-淀粉酶
β-淀粉酶又称糊精酶，是由某些细菌（如大肠杆菌）产生的酶，
能够有效地分解β-淀粉为可以被细胞利用的小分子澱粉和单糖（如葡萄糖和果糖）。

β-淀粉酶分解的淀粉分子的大小主要依赖于pH值的
变化，因此有效的β-淀粉酶处理和储藏条件都可以在一定程度上影响β-淀粉的解糖效率。

4 区别
α-淀粉酶和β-淀粉酶的最大不同之处在于它们的工作pH值不同，α-淀粉酶可以在极低的pH环境下工作，而β-淀粉酶主要在中等pH
值（6-7）环境下工作。

此外，α-淀粉酶还可以有效地分解1,4-α-D-异构麦芽糖，而β-淀粉酶则不能分解它。

另外，α-淀粉酶水解产物
为碳水化合物（果糖和葡萄糖），而β-淀粉酶则水解产物为小分子澱粉，所以它们在改变食物营养和功能特性上有一定的差异。

新教材高考生物二轮复习专题突破练3酶和ATP含解析

专题突破练3 酶和ATP一、单项选择题1.大肠杆菌中发现的RNaseP是一种由蛋白质和RNA组成的复合体(一种酶),某实验小组提取核心组件M1(可在一定盐离子环境下体外单独催化tRNA加工过程),经蛋白酶处理后的M1仍然具有催化功能,而经RNA水解酶处理后的M1不再具备催化功能。

下列说法正确的是( )A.可用双缩脲试剂检测核心组件成分M1B.M1能为tRNA的体外加工过程提供活化能C.M1功能的丧失主要影响基因表达中的转录过程D.核心组件M1也具有高效性、专一性和作用条件较温和的特点2.(2021山东新高考联盟调研)Taq酶是一种发现于嗜热菌中耐高温的DNA聚合酶,在PCR扩增技术中有重要的作用。

下列关于Taq酶的说法,正确的是( )A.Taq酶可以为DNA复制过程提供能量B.Taq酶耐高温说明温度对Taq酶的活性没有影响C.Taq酶耐高温的特性与其特定的结构有关D.Taq酶的基本单位可以与双缩脲试剂发生紫色反应3.(2021山东潍坊摸底)YAP蛋白质在调控皮脂腺的大小中发挥重要作用,蛋白酶Caspase-3通过特殊机制调控YAP蛋白,从而影响腺体大小。

科学家在活体实验中发现,如果通过化学方法抑制蛋白酶Caspase-3的活性,会使皮脂腺细胞的增殖活动减弱,腺体中的细胞数量减少。

下列有关叙述错误的是( )A.蛋白酶Caspase-3活性较高时皮脂腺细胞的分裂活动增强B.蛋白酶Caspase-3降低了YAP蛋白催化化学反应的活化能C.蛋白酶Caspase-3能在皮脂腺发育的调控过程中发挥作用D.若控制蛋白酶Caspase-3的基因存在缺陷,则皮脂腺会发育得较小4.(2021山东烟台二模)下图表示不同质量浓度的Ca2+和Cu2+对淀粉酶活性影响的实验结果。

下列叙述错误的是( )A.本实验采用的对照方法有空白对照和相互对照B.本实验因变量的检测指标可以是单位时间内淀粉的剩余量C.实验过程中温度、pH等因素应该保持相同且适宜D.实验结果显示,不同质量浓度的Ca2+和Cu2+均会抑制酶的活性5.实验室有以下材料和用具:淀粉、过氧化氢溶液、淀粉酶溶液、肝研磨液、斐林试剂、碘液、盐酸、氢氧化钠溶液及其他必需的材料。

大麦β-淀粉酶在枯草芽孢杆菌中异源表达

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淀粉酶的酶活
' 范围较广 5］，相
的$淀粉酶
较高，温度
较好，作用pH
于植物度和
的$淀粉酶，微生物来
' 较低 6］%目
前，工使用的$淀粉酶主要来自于植物提取与
微生物，其中大麦提取的$淀粉酶由于其应用
效果好而深受工厂的青睐，但是大麦中的$淀粉酶
，取工艺复杂导致其提取成本较高，且耗
费大量粮食［7］。微生物
酶虽然
，但是
通常由于其稳定性不够而难
的使用
，因
此研究者
于微生物
表
物
的麦$淀粉酶的重组巴
赤酵母GS-BBA，
组在
条件下的酶活为180 U/mL［8］；
许黎明等大豆$淀粉酶在毕赤中实现了高
度表达，
碳源诱导后的酶活达到了
第一作者：硕士研究生(王金晶副教授为通讯作者，E-mail: jjwang @ jiangnan. edu. cn) %
的胞生
菌，不含内毒，且发酵条件简单，细
度高，分泌
强，是一要的工业
酶制剂生产菌种。全球大约有50%的工业酶制剂是
草芽抱杆菌生产［12 ］，是美国食品药品
理
局授予GRAS( 生物范畴［13］%因此
)的微生物，
入食品级微
利用枯草芽抱杆菌表：统
生产食品添加剂将成为主要趋势％ WB800为敲除了 8
个酶基因的枯草芽抱杆菌菌株，可更
％以
pET-28a( + ) -amyB为模板，根据pP43NMK中插入
的基因酶切设计引物如下：
P1 ( F ) ： AACACATGCCTCAGCATGGAAGTTA-

产耐高温β-淀粉酶枯草芽孢杆菌工程菌的构建的开题报告

产耐高温β-淀粉酶枯草芽孢杆菌工程菌的构建的开题报告一、研究背景淀粉酶是一种能够水解淀粉为糖类的酶类。

如今，淀粉酶在食品工业，制糖工业和酿造工业等领域得到广泛应用。

其中，淀粉酶在饲料行业中的应用越来越受到关注。

β-淀粉酶的主要应用领域是动物饲料中。

因为淀粉是许多动物饲料的主要成分，淀粉酶能够将大分子淀粉水解成小分子葡萄糖、麦芽糖和淀粉酶糖等成分，从而提高饲料的可消化性和营养价值。

目前市场上的β-淀粉酶主要是从真菌中提取得到，但是真菌制备的β-淀粉酶存在生产成本高，酶活性易受环境条件和生产批次变化的影响等问题。

因此，构建高效的β-淀粉酶生产菌株是实现β-淀粉酶产业化生产的关键。

枯草芽孢杆菌是一种常见的细菌，具有产酶能力、生长速度快、易于培养等优点。

因此，枯草芽孢杆菌被广泛应用于酶的生产中。

目前，已经有许多研究采用枯草芽孢杆菌作为酶的生产菌株，在实验室和工业生产中均表现出优异的表现。

二、研究目的本研究旨在构建一种耐高温β-淀粉酶的枯草芽孢杆菌工程菌，通过对纯化的β-淀粉酶的基础研究和相关菌株的实验筛选，最终获得一种高效、稳定、低成本的β-淀粉酶生产菌株，并探索适合β-淀粉酶大规模生产的条件和工艺流程。

三、研究内容和方案（一）β-淀粉酶生化性质的研究通过纯化得到高纯度的β-淀粉酶，并对其生化性质进行研究。

主要包括酶催化反应的适宜温度、适宜pH、反应条件的稳定性等。

（二）β-淀粉酶生产菌株的筛选将经过重组的β-淀粉酶基因导入枯草芽孢杆菌，研究β-淀粉酶产生情况，分析不同菌株产生β-淀粉酶的能力和效果，进而筛选出可用于β-淀粉酶生产的优良菌株。

（三）β-淀粉酶生产条件的优化确定β-淀粉酶最佳生产条件，包括培养基成分、培养温度、培养时间等因素。

通过正交实验等方法寻求最佳参数组合，进而优化β-淀粉酶生产菌株的生产效率。

（四）β-淀粉酶工艺流程的建立根据β-淀粉酶生产的最佳条件，建立适合β-淀粉酶规模化生产的工艺流程，并对该工艺流程进行优化。

大豆中β淀粉酶的提取、分离纯化、测活及固定化

大豆中β淀粉酶的提取、分离纯化、测活及固定化组员：毛耀俊、毕蜜春、张强、陈人良、吴剑峰、罗琼、陈金德、漆慧娟摘要：本文通过一定的试验方法，从大豆中提取β淀粉酶，并进行分离纯化、测活以及酶的固定化，然后对结果进行分析和讨论。

关键词：大豆、β淀粉酶、分离纯化、测活、固定化β-淀粉酶是外切型糖化酶，它作用于淀粉时，从淀粉非还原端开始水解a-1,4-糖苷键，顺次切下麦芽糖单位，遇到α-1,6键的分支点则停止不前，因此它对淀粉的水解产物是麦芽糖及大分子的β-界限糊精，该酶作用于底物时，同时发生沃尔登转位反应（Wanlden inversion），使生成的麦芽糖的由α-型转为β-型。

β-淀粉酶广布于高等植物中（如未发芽的大麦、小麦、燕麦、大豆、甘薯等）及微生物中，可耐酸。

将麦芽汁调节pH值为3.6，在0℃下可使α-淀粉酶失去活力，而余下β-淀粉酶；β-淀粉酶的唯一产物是麦芽糖，不是葡萄糖。

大豆是一年生豆科植物，呈椭圆形、球形，颜色有黄色、淡绿色、黑色等，故又有黄豆、青豆、黑豆之称。

大豆最常用来做各种豆制品、压豆油、炼酱油和提炼蛋白质。

豆渣或磨成粗粉的大豆也常用于禽畜饲料。

大豆是豆科植物中最富有营养而又易于消化的食物，是蛋白质最丰富最廉价的来源。

大豆不仅含有丰富的蛋白质、脂肪，还含有丰富的β-淀粉酶。

本文主要通过一定的实验方法，从大豆中提取β-淀粉酶，并对其进行分离提纯、测活和固定化。

1.实验材料与方法1.1实验材料大豆100g、0.04mol/L磷酸缓冲液、0.1mol/L磷酸缓冲溶液、NaOH溶液（2.5mol/L）、滤纸、5g淀粉、碘液、双蒸水、氯化钾溶液、豆浆机、玻璃棒、烧杯、漏斗、水浴锅、胶头滴管、滴定管、紫外分光光度计、饱和硫酸铵。

1.2实验方法1.2.1细胞的粉碎利用豆浆机对大豆进行植物组织细胞的破碎，得到大豆粉末。

1.2.2酶的提取采用磷酸缓冲液按照料液比1：5混合于烧杯中，得到的混合液进行过滤(过滤2~3次)，除掉固体杂质，得到酶的粗提取液。

某理工大学《普通生物化学》考试试卷(1113)

某理工大学《普通生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（245分，每题5分）1. 真核生物成熟mRNA的两端均带有游离的3′OH。

（）答案：正确解析：成熟的mRNA两端都带有游离的3′OH，防止被降解。

2. 乙醛酸循环和TCA循环都能净产生琥珀酸。

（）[浙江大学研]答案：错误解析：TCA循环不能净产生琥珀酸。

3. 血浆脂蛋白中，低密度脂蛋白负责把胆固醇运送到肝外组织。

（）[中山大学2004研]答案：正确解析：血浆脂蛋白在脂类的含量和组成比例上不相同，其蛋白质部分也不一样，它们在体内的合成部位和生理功能并不一致。

根据不同脂蛋白所含脂类多少、密度大小上的差别，可将血浆脂蛋白分为5个密度范围不同的组成部分，即：乳糜微粒、极低密度脂蛋白、中间密度脂蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白。

乳糜微粒的主要功能是从小肠转运三酰甘油、胆固醇及其他脂质到血浆和其他组织。

极低密度脂蛋白（VLDL）是从肝脏运载内源性三酰甘油和胆固醇至各靶组织。

中间密度脂蛋白（IDL）一部分被肝吸收，其余部分转变为LDL。

低密度脂蛋白（LDL）转运胆固醇到外围组织，并调节这些部位的胆固醇从头合成。

高密度脂蛋白（HDL）使胆固醇酯化，酯化的胆固醇由血浆中的脂质转移蛋白快速往复地送到VLDL或LDL。

4. 痛风是由于嘌呤代谢产物尿囊酸累积而引起的。

（）[南开大学2008研]答案：错误解析：5. 生物膜上的膜蛋白的肽链可以不止一次地穿过脂双层。

（）答案：正确解析：常为7次穿膜，还有4次穿膜的肽链。

6. 当dUMP转变为dTMP时，其甲基的供体是N5，N10亚甲基THFA。

（）答案：正确解析：THFA是四氢叶酸，是一碳单位的供体。

7. 果糖二磷酸酶催化磷酸果糖水解是糖异生的关键反应。

大肠杆菌中有三种DNA聚合酶

一、填空1）大肠杆菌中有三种DNA聚合酶，其中是使DNA链延长的主要聚合酶。

2）许多高温DNA聚合酶，如Taq、Tth等DNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基_，可以利用此性质进行PCR产物的克隆，即在的催化下，就可以把PCR产物连接到pUC-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。

3）真核细胞mRNA合成后的成熟过程包括内含子的切除、、_ 、3’端添加polyA尾巴__。

4）Rnase P 是一种内切核酸酶，识别分子的空间构象，所有的该分子的5’末端都是由Rnase P产生的。

5）含LacZ基因(编码β半乳糖苷酶)该酶能分解生色底物X-gal 产生蓝色,从而使菌落变蓝.当外源DNA插入后,LacZ基因不能表达,菌落呈白色,以此来筛选重组细菌.称之为蓝-白斑筛选。

6）肽链合成终止时, 终止因子进人"A"位,识别出__,同时终止因子使肽基转移酶的催化作用转变为水解作用。

7）PCR是聚合酶链式扩增反应，实验体系中需要DNA聚合酶、镁离子、引物、、dNTP和缓冲液。

聚合酶链式扩增反应需要变性、退火、延伸三个步骤，其中退火温度由决定，而延伸温度一般为度。

8）氨酰-tRNA合成酶对___ _____和相应的___ _____有高度的选择性。

9）质粒是一种染色体外的DNA分子，质粒载体通常带有选择性标记基因和人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的MCS，也就是序列，根据质粒的复制与寄主细胞之间的关系可以将质粒分和两种类型。

10）原核生物的S.D序列能与16 SrRNA的端相识别，它是富含的序列。

11）在蛋白质合成中需要起始tRNA，在原核细胞为__ __，在真核细胞为Met-tRNA Met。

二、名词解释1）半保留复制2）半不连续复制3）滚环复制4）冈崎片段5）复制子6）反转录7）断裂基因8）限制性内切酶9）TA克隆10）蓝-白斑筛选11）反式作用因子12）顺式作用元件13）葡萄糖效应14）SD序列15）无义突变16）转座子17）不对称转录18）RNA interference技术19）基因工程20）食品基因工程三、选择题1）转录与DNA复制过程的共同点是：（）A．需要DNA聚合酶B．所用模板相同C．所用原料相同D．所得产物相同E．需要RNA聚合酶2）逆转录酶催化：（）A．以RNA为模板的DNA合成B．以DNA为模板的RNA合成C．以mRNA为模板的蛋白质合成D．以DNA为模板的DNA合成E．以RNA为模板的RNA合成3）在乳糖操纵子中，阻遏蛋白结合的是：（）A．操纵基因B．调节基因C．启动基因D．结构基因E．启动子4）指导合成蛋白质的结构基因大多数为：（）A．单考贝顺序B．回文顺序 C．高度重复顺序D．中度重复顺序5）真核与原核细胞蛋白质合成的相同点是：（）A．翻译与转录偶联进行B．模板都是多顺反子C．转录后的产物都需要进行加工修饰D．甲酰蛋氨酸是第一个氨基酸E．都需要CTP6）下列哪种氨基酸的密码子可作为起始密码：（）A．甲硫氨酸B．S-腺苷蛋氨酸C．苯丙氨酸D．丙氨酸E．以上都不是，而是TAG7）DNA复制时，若母链核苷酸序列为5’-TAGA-3’则复制出来的子链相应序列为：（）A．5’-TCTA-3’ B．5’-ATCT-3’ C．5’-UCUA-3’D．5’-GCGA-3’ E．以上都不是8）真核生物基因组中没有：（）A．内含子B．外显子C．转录因子D．插入序列E．高度重复序列9）DNA的半保留复制需要：（）A．核心酶和单链DNA结合蛋白B．模板DNA和四种NTPC．引物和RNA聚合酶D．DNA引物和连接酶E．冈崎片段和终止因子10）RNA生物合成中包括下列哪种结合：（）A．DNA聚合酶与DNA结合B．RNA聚合酶与DNA结合C．Sigma因子与RNA结合D．解链蛋白与RNA结合E．起动因子与DNA聚合酶结合11）代表氨基酸的密码子是（）A．UGA B．UAG C．UAA D．UGG E．UGA和UAG12）下列氨基酸活化的叙述哪项是错误的：（）A．活化的部位是氨基酸的α-羧基B．活化的部位是氨基酸的α-氨基C．活化后的形式是氨基酰-tRNA D．活化的酶是氨基酰-tRNA合成酶E．氨基酰tRNA既是活化形式又是运输形式13）氨基酸是通过下列哪种化学键与tRNA结合的（）A．糖苷键B．磷酸酯键C．氢键D．酯键E．酰胺键14）蛋白质生物合成中多肽链的氨基酸排列顺序取决于（）A．相应tRNA专一性B．相应氨基酰tRNA合成酶的专一性C．相应mRNA中核苷酸排列顺序D．相应tRNA上的反密码子E．相应rRNA的专一性15）下述原核生物蛋白质生物合成特点错误的是（）A．原核生物的翻译与转录偶联进行，从5’端边转录、边翻译、边降解B．各种RNA中mRNA半寿期最短C．起始阶段需ATPD．有三种释放因子分别起作用E．合成场所为70S核糖体16）关于核糖体叙述正确的是（）A．多核糖体在一条mRNA上串珠样排列B．多核糖体在一条DNA上串珠样排列C．由多个核糖体大小亚基聚合而成D．在转录过程中出现E．在复制过程中出现17）氨基酰-tRNA合成酶的特点是：（）A．存在于细胞核内B．只对氨基酸的识别有专一性C．只对tRNA的识别有专一性D．催化反应需GTPE．对氨基酸、tRNA的识别都有专一性18）在氨基酰-tRNA合成酶催化下，tRNA能与哪一种形式的氨基酸结合：（）A．氨基酸-酶复合物B．自由的氨基C．氨基酰-ATP-酶复合物D．氨基酰-AMP-酶复合物E．氨基酰-ADP-酶复合物19）蛋白质合成时肽链合成终止的原因是：（）A．已达到mRNA分子的尽头B．特异的tRNA识别终止密码子C．释放因子能识别终止密码子并进入A位D．终止密码子本身具酯酶作用，可水解肽酰基与tRNA之间的酯键E．终止密码子部位有较大阻力，核糖体无法沿mRNA移动20）下列有关多肽链中羟脯氨酸和羟赖氨酸生成，哪一项是正确的：（）A．各有一种特定的遗传密码编码B．各有一种与之对应的反密码子C．各有一种tRNA携带D．是翻译过程中的中间产物E．是脯氨酸和赖氨酸修饰的产物四、问答思考题1）基因工程的操作过程一般分哪4个步骤？请按顺序说明2）常见的基因载体有：细菌质粒载体、λ噬菌体载体、柯氏质粒载体、病毒载体等。

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综合测评(一)(满分:100分;时间:75分钟)一、单项选择题:共15题,每题2分,共30分。

每题只有一个选项最符合题意。

1.下列关于细胞中元素和化合物的叙述,错误的是 ( )A.P是核糖及核苷酸的组成元素B.二肽与双缩脲试剂反应不呈现紫色C.胆固醇是动物细胞质膜的重要成分D.由蛋白质和糖类组成的结构具有识别信号分子的作用2.黏连蛋白是一种在有丝分裂末期会整装到DNA分子上的蛋白复合体,与有丝分裂过程中姐妹染色单体的黏着和分别亲密相关。

下列有关叙述正确的是( )A.黏连蛋白主要在分裂间期发挥作用B.黏连蛋白与DNA分子通过肽键连接C.黏连蛋白在附着于内质网的核糖体上合成D.黏连蛋白的去除会导致姐妹染色单体分别3.下列关于部分原核细胞的叙述,正确的是( )A.大肠杆菌结构简洁,没有细胞器B.乳酸菌以有丝分裂方式进行增殖C.蓝细菌细胞在细胞质基质中进行暗反应D.肺炎双球菌在线粒体内完成有氧呼吸4.如图为某细胞结构示意图。

下列叙述正确的是( )A.①②④都存在生物膜B.结构③能增大细胞质膜的面积C.⑤具有选择透过性,而⑥具有全透性D.细胞质膜不同部位的化学成分和功能相同5.“疫散登南岭,杜鹃开笑颜。

子规啼半夜,闲月照闲山”。

这首诗中的“杜鹃”和“子规”分别是指“杜鹃花(植物)”和“子规鸟(动物)”。

下列有关叙述正确的是( )A.这两种生物细胞的中心体是由两个相互垂直排列的中心粒及四周物质组成B.子规鸟的成熟的红细胞没有细胞核和多种细胞器C.这两种生物细胞的染色体主要由DNA和蛋白质组成D.科学家在电子显微镜下所拍摄的两种生物细胞质膜结构照片都属于物理模型6.从红色苋菜根部取最相宜做质壁分别与复原试验的细胞,将其浸润在质量浓度为0.3 g·mL-1的KNO3溶液中制成临时装片,用显微镜视察到如图甲所示图像,图乙表示试验过程中相关物质跨膜运输的两种方式。

下列叙述错误的是( )甲乙A.该试验所取细胞不行以是苋菜根尖分生区细胞B.图甲中细胞的状态表明,细胞正在发生质壁分别C.由于图甲中的O具有全透性,Q处充溢了KNO3溶液D.图乙中曲线①可表示K+进入苋菜细胞的方式,曲线②可表示水进出苋菜细胞的方式7.Ca2+泵分布于细胞质膜及细胞器膜上,能催化ATP水解并将Ca2+运出细胞,以维持细胞内Ca2+的低浓度水平。