基因型鉴定-普通PCR及核酸电泳-20170306

基因型鉴定-普通PCR及核酸电泳

2017.03.06 [普通PCR]

一、准备

✓试剂&耗材

10×buffer、dNTP、Taq酶、引物、模板cDNA、双蒸水、冰、黄板子

✓仪器设备

掌上离心机、PCR仪

二、步骤

25ul反应体系：

10×buffer：2.5ul ；dNTP：2ul ；Taq酶：0.25ul ；引物：0.5+0.5ul ；ddH2O：15.24ul ；DNA：5ul

注：记得在设置参数时，sample的体积改成25ul

[核酸电泳]

一、准备

✓试剂&耗材

琼脂糖、1×TBE、核酸染料（EB替代物）、6×loading buffer

✓仪器设备

核酸电泳区域

二、步骤

1. 根据对应的核酸片段长度选择琼脂糖浓度：

2.根据样品数量、目的基因表达水平确定胶的大小及梳子的规格。（一大块为100ml）

3.琼脂糖、1×TBE加入至锥形瓶中，用称量纸盖住瓶口，用微波炉加热至沸腾，完全溶解

4.冷却至50℃左右时（手背贴壁5s左右不觉得烫），按1：10000加核酸染料

5.混匀后加入到已插入梳子的凝胶床（记得放架子）

6.凝后拔出梳子，带架子放入电泳槽（槽内1×TBE要没过胶块）

7.核酸样品与6×loading buffer按5：1的比例混匀，上样

8.电泳（电压120V，电流80-100mA）

注：核酸电泳区域为污染区域，接触操作时应在丁腈手套外加PE手套；照胶可在本室，也可去3层