02 实验二 常见细菌种属的鉴定

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生物进化的基础。
2、数值分类
是随着信息数字化时代的发展,根据微生
物分类学信息,应用计算数学原理和技术辅助
定义微生物分类单元的一种方法。
主要是向分类学家提供准确的、可重复的、
大信息量的处理手段。
3、化学分类
是研究微生物细胞不同化学特性,并利用
这些特性对生物个体进行分类和鉴定。
由于细胞化学成分及分子结构的稳定性好, 因此化学分类是原核微生物系统分类学的主要 方法之一。
实验二
常见细菌种属的鉴定
一、目的要求 二、基本原理 三、器材
四、操作步骤
五、实验报告
一、目的要求
1、了解常见细菌种属的鉴定程序 2、掌握细菌的生理生化指标鉴定方法
二、基本原理
(一)微生物分类鉴定的方法—多相分类法 多相分类法:Colwell1970年提出,指利用微生物
多种不同的信息,包括表型的、基因型的和系统发育 的信息,综合研究微生物分类和系统进化的过程。多
3、化学分类的常用方法

百度文库
细胞(壁)化学组分分析 枝菌酸分析(诺卡氏菌)


磷酸类脂分析
脂肪酸组分分析 醌组分分析 全细胞蛋白SDS-PAGE分析 核糖体蛋白双向凝胶电泳(2D-PAGE)
4、分子分类
从分子水平上,对生物个体的DNA、RNA和蛋白质进
行研究,并根据获得的基因型信息对生物个体进行分

配制蛋白胨水培养基,接种试验菌种。 培养48小时后,将一支葡萄糖蛋白胨水培养物中加入甲 基红试剂2滴,培养基若变为红色者,为阳性,变黄色 者为阴性。

取另外一支培养48小时后的葡萄糖蛋白胨水培养物,加
入5~10滴40%的KOH,然后加入等量的5%的a-萘酚溶
液,用力振荡,再放入37°温箱中保温15~30分钟,以
类的方法。

DNA G+Cmol%
DNA 分子指纹分析
DNA-DNA杂交

核酸序列分析(16srDNA、ITS等)
(二)微生物的生理生化反应 1、淀粉水解实验
2、糖发酵试验 3、MR(甲基红)
4、V-P(伏-普)
1、淀粉水解实验 不同微生物对不同大分子的水解能
力不同,说明它们有着不同的酶系统。

取葡萄糖发酵培养基试管3支,分别接入大肠杆菌、枯草杆
菌、普通变形杆菌,对照不接种。另取乳糖发酵培养基试
管3支,操作同上。

接种后,轻轻摇动试管使其混合均匀,防止倒置的小管进 入气泡。

将接过种的和作为对照的6支管均置于37℃培养24~48小时。

观察各试管颜色变化以及杜氏小管有无气泡。
3、MR、VP试验

37 ℃倒置培养24-48小时 观察各种细菌的生长情况。将平板打开盖子,滴入少量Lugol’s碘 液,轻轻旋转,使碘液均匀铺满整个平板

观察菌落周围有没有透明圈出现。透明圈和菌落的直径大小可以
初步判断菌体解淀粉的活性。
2、糖发酵试验

用记号笔在装有糖发酵培养基的试管壁上分别表明培养基 名称和所接种的细菌菌名。
加快反应速度。培养物呈红色者,为V-P反应阳性。
五、实验报告
1.
记录实验结果
P 118.1;P120.1 ;P123.1 根据实验结果推测1、2、3号菌种分别是何菌?
2.
思考题
(1)你怎样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶? (2)加入某种微生物可以有氧代谢葡萄糖,发酵试验是什么结果? (3)为什么大肠杆菌是MR阳性,而枯草杆菌是阴性?这个实验,与V-P试验 最初底物与最终产物有何异同?为什么会不同?
三、器材
1.
菌种
枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌
2、培养基
固体淀粉培养基、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基等 3、仪器或其他用具
四、操作步骤
1.

淀粉水解试验
将固体淀粉培养基溶化后冷却至50℃,无菌操作制成平板。 用记号笔在平板底步划成三部分,将枯草、大肠杆菌、变形杆菌 等分别划线接种,并在平板背面标注菌种名称。
3、MR(甲基红试验)
用来检测由葡萄糖产生的有机酸, 如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产 酸时,甲基红试剂会由橘黄色(6.3)变 为红色(4.2),即为甲基红阳性反应。
4、V-P VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产 生非酸性或中性末端产物的能力,如丙酮酸。
此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气 氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白质中的精氨酸的 胍基作用,生成红色化合物,即为VP试验阳性。
相分类法几乎包括了现代分类中所有的方面,如传统
分类、化学分类、分子分类、数值分类等,被认为是 目前研究各级分类单元最有效的手段,可用于所有水 平上的分类单元的描述和定义。
1、传统分类法
也称描述分类,主要指以形态特征、培养
特征以及生理生化特征等表观分类指征,对微
生物分类单元进行的描述分类。
传统分类是认识微生物实际重要性和研究
淀粉遇到碘液会产生蓝色,但是细 菌水解淀粉的区域,用碘测试不再产生 蓝色,表明细菌产生淀粉酶。
2、糖发酵试验
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应, 在肠道菌的鉴定上尤为重要。 绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源, 但在分解糖类物质的能力上差别很大。有的能产 酸和气体,有的只产酸不产气。 发酵产酸时,溴甲酚紫(pH6.8)变为黄色 (pH5.2)。气体的产生可以由倒扣的杜氏小管 中有无气泡来证明。
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