02 实验二 常见细菌种属的鉴定
临床常见细菌手工鉴定和结果判断
临床常见细菌的手工鉴定和结果判断一．细菌的鉴定步骤1、鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2、对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。
（我们这里一般都是预先纯化培养）+––+b）G，G，c，对待鉴定的菌种进行革兰染色，3、观察形态（Gc，Gb做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。
要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。
4、按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。
另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。
5、复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。
⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。
第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）乙醇脱色（染色液Ⅲ）95%第三步：用．第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(HO实验)：22a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。
要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。
c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。
d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。
临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。
⑶．氧化酶实验（Kovac实验）：a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。
临床常见细菌的手工鉴定和结果判断
临床常见细菌的手工鉴定和结果判断一．细菌的鉴定步骤1、鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2、对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。
（我们这里一般都是预先纯化培养）3、对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。
要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。
4、按鉴定质控单的要求填写好病人XX，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。
另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以与有无溶血。
5、复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。
⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变⑵．触酶实验(H2O2实验)：a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。
要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。
c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。
d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。
临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。
⑶．氧化酶实验（Kovac实验）：a. 原理：氧化酶又称细胞色素酶，是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。
酶并不直接与试剂（1%盐酸四甲基对苯二胺）起反应，而是首先使细胞色素c氧化，然后氧化型细胞色素c使对苯二胺氧化，出现深兰色反应。
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程目的：建立菌种鉴定标准操作规程范围：适用于******鉴定标准操作职责：内容：1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。
1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。
1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。
鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液：甲液：结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。
2.1.2碘液：碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。
2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。
2.2操作:2.2.1涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
菌株鉴定流程总结
学习总结各位领导好，从5月25号开始，在周老师的实验室已经进行了十多天的培训，让我学到很多。
现将我在实验室学习的情况总结汇报。
一、细菌鉴定流程：1.表观观察鉴定：培养24h的菌落观察，如：菌落形态（圆形、椭圆形等）、大小（直径多少）、表面光滑度（光滑和粗糙）和隆起情况（扁平，隆起，凸起等）、边缘整齐、菌落的透明度、菌落（菌落颜色及是否产生色素等）及培养基的颜色（培养基是否变色）等菌落的描述。
显微观察，观察单个菌的形态（杆状，圆形，椭圆形，螺旋形等），是否有芽孢，荚膜的情况。
染色观察，革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色。
2.分子鉴定：细菌DNA的提取（试剂盒法）⑴将菌种接在适宜的液体培养基中，进行液体发酵，180rpm/min，24h培养。
⑵将摇瓶发酵的菌液加到1.5ml离心管中，10000rpm离心1min，倒掉上清液。
⑶向菌体沉淀中加入200ul缓冲液GA，震荡，至菌体悬浮。
如果是革兰氏阳性菌，则向菌体中加入120ul的Tris盐酸缓冲液，再加入80ul溶菌酶，37℃，30min以上。
⑷向离心管中加入20ul蛋白酶K溶液，混匀。
⑸加入220ul缓冲液GB，震荡15s，70℃放置10min，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
⑹加入220ul无水乙醇，充分震荡混匀15s，可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。
⑺将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个离心柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
⑻向吸附柱CB3中加入500ul缓冲液GD，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
⑼向吸附柱CB3中加入600ul漂洗液PW，12000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。
⑽重复操作步骤⑼。
⑾ 将吸附柱CB3放入收集管中，12000rpm 离心2min ，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
菌种鉴定方法及手段真菌细菌检测
菌种鉴定方法及手段真菌细菌检测菌种鉴定是指通过特定的方法和手段，对样品中存在的真菌和细菌进行鉴定和分类的过程。
下面将介绍几种常见的菌种鉴定方法及手段。
1.形态学鉴定：形态学鉴定是根据菌落形态、菌丝形态和孢子形态等特征来鉴定菌种的一种方法。
常见的形态学鉴定方法包括裸眼观察、显微镜观察、染色观察等。
裸眼观察主要通过观察菌落的颜色、形状、质地等特征，结合菌丝形态进行初步判断。
显微镜观察可以观察到菌丝的形态、孢子的形状、颜色等细节特征，通过比对菌种鉴定手册等资料进行鉴定。
2.生理代谢鉴定：生理代谢鉴定是通过菌株在不同培养基上的生理代谢特点来鉴定菌种的方法。
常见的生理代谢鉴定方法包括生理生化鉴定、生长温度范围鉴定、碳源利用鉴定、氮源利用鉴定等。
通过测定菌株在不同培养基上的生长速率、产酶能力、酸碱度变化、利用不同碳源和氮源等特征，判断菌株所属的种属。
3.分子生物学鉴定：分子生物学鉴定是通过检测菌株的DNA序列来鉴定菌种的一种方法。
常见的分子生物学鉴定方法包括PCR技术、基因测序、DNA指纹图谱鉴定等。
通过提取菌株的DNA，选择合适的引物进行PCR扩增，再通过基因测序获得菌株的DNA序列，通过比对菌株的DNA序列与数据库中已知的菌种进行比对，确定菌株所属的种属。
4.免疫学鉴定：免疫学鉴定是通过检测菌株与特定抗原的反应关系来鉴定菌种的方法。
常见的免疫鉴定方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹等。
通过与特定抗原结合，通过特异性抗体的反应来进行菌种的鉴定。
5.生化鉴定：生化鉴定是通过检测菌株的生化活性来鉴定菌种的方法。
常见的生化鉴定方法包括生化试剂盒、色谱分析、质谱分析等。
通过检测菌株在不同生化试剂上的产物或反应物的变化，进行菌种的鉴定。
综上所述，菌种鉴定方法及手段包括形态学鉴定、生理代谢鉴定、分子生物学鉴定、免疫学鉴定和生化鉴定等多种方法和手段。
不同的鉴定方法可以互相补充，提高鉴定的准确性和可靠性。
细菌种属的分子鉴定
用16S rDNA方法鉴定细菌种属一、目的1. 掌握16S rDNA对细菌进行分类的原理及方法；2. 掌握DNA提取、PCR原理及方法、DNA片段回收等实验操作。
二、原理随着分子生物学的迅速发展，细菌的分类鉴定从传统的表型、生理生化分类进入到各种基因型分类水平，如(G+C)mol%、DNA杂交、rDNA指纹图、质粒图谱和16S rDNA序列分析等。
细菌中包括有三种核糖体RNA，分别为5S rRNA、16S rRNA、23S rRNA，rRNA基因由保守区和可变区组成。
16S rRNA对应于基因组DNA上的一段基因序列称为16S rDNA。
5S rRNA虽易分析，但核苷酸太少，没有足够的遗传信息用于分类研究；23S rRNA含有的核苷酸数几乎是16S rRNA的两倍，分析较困难。
而16S rRNA相对分子量适中，又具有保守性和存在的普遍性等特点，序列变化与进化距离相适应，序列分析的重现性极高，因此，现在一般普遍采用16S rRNA作为序列分析对象对微生物进行测序分析。
利用16S rDNA鉴定细菌的技术路线：三、操作步骤（一）细菌基因组DNA提取1. 挑单菌落接种到10 mL LB培养基中37℃振荡过夜培养。
2. 取2 mL培养液到2 mLEppendorf管中，8000 rpm离心2分钟后倒掉上清液。
3. 加140 μL TE打散细菌，再加入60 μL 10 mg/ml的溶菌酶。
37℃放置10分钟。
4. 加入400 μL Digestion Buffer，混匀。
再加入3 μL Protein K，混匀，55℃温育5分钟。
5. 加入260 μL乙醇，混匀，全部转入UNIQ-10柱中。
10000 rpm离心1分钟，倒去收集管内的液体。
6. 加入500 μL 70％乙醇（Wash Solution），10000 rpm离心0.5分钟。
7. 重复第六步。
8. 再10000 rpm离心2分钟彻底甩干乙醇。
吸附柱转移到一个新的1.5 mL的离心管。
实验二 细菌的鉴定方法
❖ 目前应用较多的自动化鉴定系统主要有：
Vitek—AMS(Automated Microbic System ) 、Biolog、MicroScan、 Enterotube、MIDI、Sensititte、 Autoseeptor、Crystal等鉴定系统。
❖ 法国生物一梅里埃(Bio—Merieux)公司的Vitek—AMS系统 是应用最普遍的细菌自动化鉴定系统之一，可鉴定18 000多 种细菌。全自动鉴定是从接种、培养、读数到报告的全过程 自动完成，利用负压将菌液加入测试卡各孔，封口机封口， 置孵箱孵育，阅读器以665 nm波长每小时将测试卡拉出1次 对各孔底物进行光扫描，动态观察其变化，计算机将判读结 果与标准数据库比较得出鉴定结果。
4. 放射免疫测定技术。放射免疫测定(RIA，Radio immuno assay)是用放射性同位素标记抗原或抗 体，与相应的抗体或抗原结合后通过放射自显影 定性和定量抗原或抗体。
5. 免疫胶体金标记技术。胶体金是继酶、荧 光素和放射同位素后免疫标记技术中令人 瞩目的新标记物。胶体金是氯金酸 (HAuC14)在还原剂如白磷、枸橼酸钠等的 作用下，聚合成特定大小的金颗粒，通过 静电作用与抗体或抗原形成一种稳定的胶 体状态，即为免疫金，免疫金与相应的抗 原抗体结合后，呈现特定的颜色反应。
2. 免疫酶技术。免疫酶技术(EIA，Enzyme immuno assay) 是将酶标记的抗抗体与抗原一抗体复合物结合形成抗原一 抗体一酶标记抗抗体复合物，加入酶底物产生有色产物。 以酶联免疫吸附测定(ELISA)和斑点酶联免疫吸附技术 (Dot—EusA)应用较广泛。
3. 免疫荧光技术 免疫荧光技术(FIA，Fuorescence immunoassay)是将一抗滴加于待检抗原上，再 加一抗的荧光抗体(二抗)，呈现特异性的荧光抗原 抗体复合物以鉴定病原菌。此法比ELISA更直观， 可直接观察到菌体形态。
简述细菌种属的分类鉴定流程
简述细菌种属的分类鉴定流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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进行细菌种属分类鉴定首先要进行样本采集。
实验二常见细菌种属的鉴定
16S rRNA基因测序
对细菌16S rRNA基因进行测序，通过比对数据库中的序列信息确 定细菌种属。
其他分子生物学实验
根据不同细菌种属的基因特征，进行其他分子生物学实验，如PCR 扩增、基因芯片检测等。
04 结果分析
形态学结果分析
总结词
通过观察细菌的形态、染色特性等，初步判断细菌种属。
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感谢您的观看
02
大肠杆菌在部分样本中检出，其数量 相对较少，表明该菌在实验样本中的 存在具有一定的偶然性。金黄色葡萄 球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌和志贺氏 菌则在部分样本中呈现出较高的检出 率，表明这些细菌种属在实验样本中 具有一定的普遍性和稳定性。
03
在鉴定的细菌种属中，金黄色葡萄球 菌、沙门氏菌和志贺氏菌属于人类致 病菌，其中金黄色葡萄球菌和志贺氏 菌可引起严重的食物中毒和腹泻等临 床症状，沙门氏菌可导致伤寒和副伤 寒等严重疾病。绿脓杆菌则是一种条 件致病菌，常引起伤口感染和败血症 等症状。
血杆菌等。
了解常见化脓性细菌种属的生物 学特性，如金黄色葡萄球菌、表
皮葡萄球菌等。
02 实验原理
形态学鉴定法
总结词
基于细菌的形态、大小、染色反 应等表型特征进行鉴定。
详细描述
通过显微镜观察细菌的形态、大 小、排列方式、染色反应等表型 特征，与已知的标准菌株进行比 较，从而确定细菌的种属。
生理生化鉴定法
对实验结果的分析与讨论
实验结果表明，部分样本中存在较高检出率的致病菌，如金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺 氏菌等，这可能会对实验参与者和环境造成潜在的健康风险。因此，在实验过程中应采取有 效的防护措施，避免交叉感染和环境污染。
细菌鉴定方法范文
细菌鉴定方法范文细菌鉴定是确诊细菌种类的过程，通常用于医学诊断、食品卫生检测、环境监测等领域。
细菌鉴定的主要目标是确定细菌属、种，并了解它们的特性和致病性。
下面将介绍几种常见的细菌鉴定方法。
1.形态学鉴定法形态学鉴定法是通过观察细菌的形态特征，比如形状、大小、旋转、着色、胞壁、胞内结构等来进行鉴定。
实验室通常使用显微镜观察细菌镜检表型，然后使用染色和培养等技术对其进行进一步确认。
例如，革兰氏染色方法可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，细菌的颜色和形态可以提供一些信息。
2.生理生化鉴定法生理生化鉴定法通过检测细菌在特定环境条件下的生理和代谢特性，来鉴定细菌。
常见的方法包括营养需求、产酶反应、氧气需求、乳酸发酵、蛋白质降解以及酵素浓度等的检测。
这种方法可以在短时间内进行，并提供一些初步的信息，例如细菌的营养类型和代谢能力。
3.免疫学鉴定法免疫学鉴定法主要是利用细菌抗原和抗体之间的特异性反应来进行鉴定。
常用的方法包括免疫沉淀试验、酶联免疫吸附试验、血凝试验和凝胶免疫扩散试验等。
这些方法可以检测其中一种细菌是否具有特定的抗原，从而确定其种属和亚型。
4.分子生物学鉴定法分子生物学鉴定法是通过检测细菌的核酸序列来进行鉴定。
这些方法包括聚合酶链反应（PCR）、核酸杂交、DNA测序等。
通过扩增和测序研究细菌的特定基因或基因区域，可以得到更精确的细菌鉴定结果，并可以用于分子进化分析和种间关系研究。
5.质谱鉴定法质谱鉴定法是使用质谱仪来检测细菌样品中的分子和离子，并通过比较其质谱图与数据库中已知细菌的质谱图来进行鉴定。
这种方法可以快速鉴定大量样品，并且对细菌种类有更高的分辨率和灵敏度。
常见细菌的鉴定
A，B，D，G群链球菌的鉴别试验A群B群D群G群杆菌肽+ ———CAMP —+ ——七叶苷——+ + 胆汁七叶苷——+ —黄色素—+ ——SXT ———/+ +几种草绿色链球菌的鉴定菌名溶血性αγ七叶苷胆汁七叶苷蔗糖乳糖甘露醇菊糖棉子糖精氨酸乳房链球菌血链球菌唾液链球菌缓症链球菌少酸链球菌++－+++－+－－－－－－－+++－－+++++++++－+－－－－+++－－+－+－－－+－－－D群链球菌的生物特性试验肠球菌非肠球菌粪链屎链坚忍链牛链马链6.5％NaCl ＋＋＋－－阿拉伯糖－＋－－－甘露醇＋＋－＋－山梨醇＋－－－－乳糖＋＋＋＋－葡萄球菌三个种的鉴别试验金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌血浆凝固酶＋－－甘露醇发酵＋－－新生霉素敏感性S S RA蛋白＋－－奈瑟氏菌与形态类似菌属的区别特性奈瑟氏菌布兰汉氏菌摩拉氏菌不动杆菌形态球球球杆球杆氧化酶＋＋＋－DNA －＋葡萄糖产酸＋/－－－＋/－肠杆菌科及其他科属细菌鉴定菌名O/F 氧化E 触E 硝酸盐鞭毛肠杆菌科 F －＋＋周毛/无弧菌科 F ＋＋＋单毛不动杆菌属O/－－＋－无黄杆菌属F/O/－＋＋－/＋无/周毛假单胞菌属O/－＋/－＋＋丛毛产碱杆菌属－＋＋＋周毛苯丙氨酸、葡萄糖酸阴性各属的鉴别试验埃希氏菌属志贺氏菌属沙门氏菌属枸橼酸杆菌属爱德华氏菌属结肠炎耶尔森氏菌H2S －－＋/－＋/－＋－动力＋－＋＋＋－（30以下＋）枸橼酸盐－－＋/－＋－－靛基质＋－/＋－－/＋＋－/＋赖氨酸＋/－－＋－－＋/－尿素－－－＋/－－＋/－葡萄糖酸盐阳性的各属的鉴别试验克雷伯代菌属肠杆菌属沙雷氏菌属哈夫尼亚菌属动力－＋＋＋山梨醇＋＋/－＋－DNase －－＋－棉子糖＋＋＋/－－肠杆菌属种的鉴别试验阴沟肠杆菌坂崎肠杆菌聚团肠杆菌产气肠杆菌格高菲肠杆菌赖氨酸－－－＋＋鸟氨酸＋＋－＋＋精氨酸＋＋－－－山梨醇＋－－/＋＋－尿素醇＋/－－－/＋－＋黄色素－＋＋－－克雷伯氏菌属种的鉴定菌种靛基质甲基红枸橼酸盐赖氨酸丙二酸盐肺炎克雷伯氏菌－－＋＋＋产酸克雷伯氏菌＋－＋＋＋臭氧克雷伯氏菌－＋－/＋－/＋－鼻硬结克雷伯氏菌－＋－－＋枸橼酸杆菌属种的鉴别试验弗劳地枸橼酸杆菌异型枸橼酸杆菌丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌H2S ＋/－－－靛基质－＋＋侧金盏花醇－＋－丙二酸盐－/＋＋－平板接种法：用无菌吸管取尿液0.05ml，滴注在平板培养基上，用接种环涂抹，待表面干燥后，35℃培养过夜，计数生长的菌落数，乘以20，求出每ml的菌数。
细菌的分类与鉴定
2014.3
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1
一、细菌的分类概述
（一）通用分类单元 （二）微生物的界级分类学说
二、细菌的分类和鉴定
（一）生物分类的两种基本原则 （二）细菌分类鉴定的指标 （三）细菌分类鉴定的实验室技术
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2
一、细菌的分类概述
（一）通用分类单元 （二）微生物的界级分类学说
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3
• 微生物分类学（microbial taxonomy）：是一 门按微生物的亲缘关系把它们安排成条理清 楚的各种分类单元或分类群的科学。
细菌原界、真核生物原界。
分子生物学的发展，特别是rRNA 和rDNA的序列分析为整个生物 界系统发育的研究提供了大量的数据。分子系统发育学已经表明，传 统的魏泰克五界系统并不完全代表生物的五个进化谱系。伍斯（Woese） 和伍夫（Wolfe）提出原核生物在进化上有两个重要分支，应将原核生 物分为二界：古细菌界（甲烷菌、极嗜盐菌和嗜热嗜酸菌）和真细菌 界（包括古细菌以外的其他原核生物，蓝藻、真细菌等）。真核生物 分四界（原生生物界、真菌界、动物界和植物界）。因此，提出六界 分类系统。1990年，伍斯根据分子生物学的研究资料，对生物分类提 出新的建议，认为整个生物界可以区分为三个独立起源的大类群，即 形成三个原界：古细菌原界、真细菌原界和真核生物原界。
• 具体任务 – 分类（classification） – 鉴定（identification） – 命名（nomenclature）
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4
分类(classification)：根据一定的原则对微生物进行分群 归类，根据相似性或相关性水平排列成系统，并对各个分 类群的特征进行描述，以便查考和对未被分类的微生物进 行鉴定。
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23
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菌种鉴定原理实验报告
菌种鉴定原理实验报告实验介绍菌种鉴定是一项重要的微生物学技术，用于确定特定菌株的种属及分类。
本实验旨在介绍菌种鉴定的原理和相关实验操作。
实验原理菌种鉴定的原理主要基于菌株的形态特征、生理生化特性和分子遗传学特征等方面。
1. 形态特征通过观察和描述菌落形态、菌丝形态、孢子形态、色素形成等特征，可以初步确定菌株的分类。
2. 生理生化特性通过菌株在不同培养基、温度、PH值和抗生素等条件下的生长特性和代谢特点，可以进一步缩小菌株的分类范围。
3. 分子遗传学特征利用分子生物学技术，比如PCR扩增和DNA测序，可以分析菌株的核酸序列，进一步明确菌株的种属。
实验步骤1. 采集样本选择需要鉴定的菌种样本，可以从土壤、水体、食物或患者体液等来源采集。
2. 培养菌株将采集到的样本分离出菌株，进行培养，得到纯种菌株。
培养基的选择根据菌株的特性而定，可以是常用的营养琼脂、马铃薯蔗糖琼脂或专门的选择性培养基等。
3. 形态特征观察观察菌株的菌落形态、颜色、边缘形状、透明度等特征，以及显微镜下的菌丝形态、孢子形态等特征。
4. 生理生化特性测试选择适当的生理生化特性测试方法，如氧气需求量测试、革兰氏染色、酸碱产气试验、产色素能力等，来进一步确认菌株的分类。
5. 分子遗传学分析如果需要，可以进行分子遗传学分析，如PCR扩增特定基因片段，进行测序，通过与数据库中的序列进行比对，确定菌株的种属。
实验结果与讨论根据上述步骤，我们鉴定了所收集的菌株，并得到了以下结果：1. 形态特征观察结果表明菌株的菌落为白色、圆形，边缘光滑，具有乳状透明度。
2. 生理生化特性测试结果显示菌株属于革兰氏阴性菌，氧需求量较低，不产生酸碱气体，具有色素产生能力。
3. 分子遗传学分析结果表明菌株的18S rRNA序列与数据库中的XX属菌株序列高度相似，可以确定该菌株属于XX属。
据此，我们可以初步确定该菌株的分类为XX属，但仍需进一步的实验确认。
实验结论菌种鉴定是一项复杂而重要的技术，通过观察菌株的形态特征、生理生化特性和分子遗传学特征等，可以初步确定菌株的种属和分类。
细菌鉴定方法
一淀粉水解试验（一）实验原理细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解。
胞外酶能分泌扩散到细胞外，将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸。
这些小单位的物质能被细菌吸收和利用。
水解过程可通过底物的变化来证明，如细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH，其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色。
（二）实验方法将淀粉培养基溶化后，冷至45℃左右，以无菌操作制成平板。
取18-24h的纯培养物点于平板上，每皿可点种3-5个菌株，适温培养2-4d，形成菌落后，在平板上滴加卢戈氏碘液，以铺满菌落周围为度，平板成蓝色。
如果菌落周围有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解，实验为阳性，否则为阴性。
透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力。
（三）实验试剂的配制肉汤蛋白胨琼脂成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。
淀粉培养基制法：在肉汤蛋白胨琼脂中添加0.2％的可溶性淀粉，校正pH 值至7.6，分装三角瓶，121℃20min灭菌备用。
卢戈氏(Lugol)碘液：碘片1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，混匀，定容。
二糖发酵试验(一)实验原理单糖发酵是将葡萄糖，乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内，使其最终浓度为0.75-1％。
并加入一定量酚红指示剂及小倒管，制成单糖发酵管，接种细菌经37℃培养18-24小时，若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄，若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成，小倒管内则聚集有气泡；不分解，则指示剂不变色。
(二)实验材料1．菌种：大肠杆菌，伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物。
2．培养基：葡萄糖发酵管，乳糖发酵管等。
(三)实验方法1．将伤寒杆菌，大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内。
细菌常见的生化鉴定
细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。
1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1.糖（醇）类发酵试验原理：不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
培养基的制备：操作：编号：在各试管上分别标明发酵培养基名称，所接种的菌名和组号，下同。
接种：取葡萄糖发酵培养基3支，按编号1支接种大肠杆菌，另1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。
同样取3支乳糖发酵培养基，1支接种大肠杆菌，1支接种普通变形杆菌，第3支不接种，作为对照。
将已接种好的培养基置32℃温箱中培养24h。
2.甲基红试验（M.R试验）原理：甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。
甲基红（MR）试剂：甲基红：0.04g 95%的乙醇：60ml 蒸馏水：40ml，先将甲基红溶于95%的乙醇中再加入蒸馏水即可。
试剂的制备：葡萄糖蛋白胨水培养基：在100ml邓亨氏蛋白胨水中加入1g葡萄糖即可。
步骤：将大肠杆菌和产气杆菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，32℃培养24h，加甲基红指示剂数滴，观察结果，呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。
02 实验二 常见细菌种属的鉴定
3、MR（甲基红试验）
用来检测由葡萄糖产生的有机酸， 如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产 酸时，甲基红试剂会由橘黄色（6.3）变 为红色（4.2），即为甲基红阳性反应。
4、V-P VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产
1、传统分类法
也称描述分类，主要指以形态特征、培养 特征以及生理生化特征等表观分类指征，对微 生物分类单元进行的描述分类。
传统分类是认识微生物实际重要性和研究 生物进化的基础。
2、数值分类
是随着信息数字化时代的发展，根据微生 物分类学信息，应用计算数学原理和技术辅助 定义微生物分类单元的一种方法。
1、淀粉水解实验 不同微生物对不同大分子的水解能
力不同，说明它们有着不同的酶系统。
淀粉遇到碘液会产生蓝色，但是细 菌水解淀粉的区域，用碘测试不再产生 蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
2、糖发酵试验
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应， 在肠道菌的鉴定上尤为重要。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源， 产气。
实验二 常见细菌种属的鉴定
一、目的要求 二、基本原理 三、器材 四、操作步骤 五、实验报告
一、目的要求
1、了解常见细菌种属的鉴定程序 2、掌握细菌的生理生化指标鉴定方法
二、基本原理
（一）微生物分类鉴定的方法—多相分类法 多相分类法：Colwell1970年提出，指利用微生物
多种不同的信息，包括表型的、基因型的和系统发育 的信息，综合研究微生物分类和系统进化的过程。多 相分类法几乎包括了现代分类中所有的方面，如传统 分类、化学分类、分子分类、数值分类等，被认为是 目前研究各级分类单元最有效的手段，可用于所有水 平上的分类单元的描述和定义。
常见细菌种属鉴定
常见细菌种属鉴定摘要：【目的】了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
分析不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
研究细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
【原理】各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
关键词：微生物；细菌；种属；鉴定Common bacterial species identificationAbstract: [ Objective ] to understand bacterial physiological and biochemical reaction principle, master the identification of bacteria commonly found in the physiological and biochemical reaction method. Analysis of different bacteria on different carbon, nitrogen containing compounds are decomposed using the situation. Studies on bacteria in different culture medium with different growth phenomenon and its metabolites in bacterial identification and significance of. [ principle ] various bacteria with enzyme system is endless and same, on nutrition matrix decomposition ability is different, so the metabolite differences. By physiological and biochemical test methods for detection of bacteria on a variety of substrate metabolism and its metabolites, thus differentiating bacterial species, known as bacterial physiological and biochemical reaction.Key words: microbe; bacteria; species identification前言在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。
实验二 细菌的鉴定方法共19页文档
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
实验二 细菌的鉴定方法
11、不为五斗米折腰。 12、芳菊开林耀，青松冠岩列。怀此 贞秀姿 ，卓为 霜下杰 。
13、归去来兮，田蜀将芜胡不归。 14、酒能祛百虑，菊为制颓龄。 15、春蚕收长丝，秋熟靡王税。
ห้องสมุดไป่ตู้
56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
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菌、普通变形杆菌，对照不接种。另取乳糖发酵培养基试
管3支，操作同上。
接种后，轻轻摇动试管使其混合均匀，防止倒置的小管进 入气泡。
将接过种的和作为对照的6支管均置于37℃培养24~48小时。
观察各试管颜色变化以及杜氏小管有无气泡。
3、MR、VP试验
3、化学分类的常用方法
细胞（壁）化学组分分析 枝菌酸分析（诺卡氏菌）
磷酸类脂分析
脂肪酸组分分析 醌组分分析 全细胞蛋白SDS-PAGE分析 核糖体蛋白双向凝胶电泳（2D-PAGE）
4、分子分类
从分子水平上，对生物个体的DNA、RNA和蛋白质进
行研究，并根据获得的基因型信息对生物个体进行分
淀粉遇到碘液会产生蓝色，但是细 菌水解淀粉的区域，用碘测试不再产生 蓝色，表明细菌产生淀粉酶。
2、糖发酵试验
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应， 在肠道菌的鉴定上尤为重要。 绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源， 但在分解糖类物质的能力上差别很大。有的能产 酸和气体，有的只产酸不产气。 发酵产酸时，溴甲酚紫（pH6.8）变为黄色 （pH5.2）。气体的产生可以由倒扣的杜氏小管 中有无气泡来证明。
实验二
常见细菌种属的鉴定
一、目的要求 二、基本原理 三、器材
四、操作步骤
五、实验报告
一、目的要求
1、了解常见细菌种属的鉴定程序 2、掌握细菌的生理生化指标鉴定方法
二、基本原理
（一）微生物分类鉴定的方法—多相分类法 多相分类法：Colwell1970年提出，指利用微生物
多种不同的信息，包括表型的、基因型的和系统发育 的信息，综合研究微生物分类和系统进化的过程。多
加快反应速度。培养物呈红色者，为V-P反应阳性。
五、实验报告
1.
记录实验结果
P 118.1；P120.1 ；P123.1 根据实验结果推测1、2、3号菌种分别是何菌？
2.
思考题
（1）你怎样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？ （2）加入某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验是什么结果？ （3）为什么大肠杆菌是MR阳性，而枯草杆菌是阴性？这个实验，与V-P试验 最初底物与最终产物有何异同？为什么会不同？
类的方法。
DNA G+Ｃmol%
DNA 分子指纹分析
DNA-DNA杂交
核酸序列分析（16srDNA、ITS等）
（二）微生物的生理生化反应 1、淀粉水解实验
2、糖发酵试验 3、MR（甲基红）
4、V-P（伏-普）
1、淀粉水解实验 不同微生物对不同大分子的水解能
力不同，说明它们有着不同的酶系统。
生物进化的基础。
2、数值分类
是随着信息数字化时代的发展，根据微生
物分类学信息，应用计算数学原理和技术辅助
定义微生物分类单元的一种方法。
主要是向分类学家提供准确的、可重复的、
大信息量的处理手段。
3、化学分类
是研究微生物细胞不同化学特性，并利用
这些特性对生物个体进行分类和鉴定。
由于细胞化学成分及分子结构的稳定性好， 因此化学分类是原核微生物系统分类学的主要 方法之一。
三、器材
1.
菌种
枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、普通变形杆菌
2、培养基
固体淀粉培养基、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基 葡萄糖蛋白胨水培养基等 3、仪器或其他用具
四、操作步骤
1.
淀粉水解试验
将固体淀粉培养基溶化后冷却至50℃，无菌操作制成平板。 用记号笔在平板底步划成三部分，将枯草、大肠杆菌、变形杆菌 等分别划线接种，并在平板背面标注菌种名称。
37 ℃倒置培养24-48小时 观察各种细菌的生长情况。将平板打开盖子，滴入少量Lugol’s碘 液，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板
观察菌落周围有没有透明圈出现。透明圈和菌落的直径大小可以
初步判断菌体解淀粉的活性。
2、糖发酵试验
用记号笔在装有糖发酵培养基的试管壁上分别表明培养基 名称和所接种的细菌菌名。
相分类法几乎包括了现代分类中所有的方面，如传统
分类、化学分类、分子分类、数值分类等，被认为是 目前研究各级分类单元最有效的手段，可用于所有水 平上的分类单元的描述和定义。
1、传统分类法
也称描述分类，主要指以形态特征、培养
特征以及生理生化特征等表观分类指征，对微
生物分类单元进行的描述分类。
传统分类是认识微生物实际重要性和研究
3、MR（甲基红试验）
用来检测由葡萄糖产生的有机酸， 如甲酸、乙酸、乳酸等。当细菌代谢糖产 酸时，甲基红试剂会由橘黄色（6.3）变 为红色（4.2），即为甲基红阳性反应。
4、V-P VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产 生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。
此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气 氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白质中的精氨酸的 胍基作用，生成红色化合物，即为VP试验阳性。
配制蛋白胨水培养基，接种试验菌种。 培养48小时后，将一支葡萄糖蛋白胨水培养物中加入甲 基红试剂2滴，培养基若变为红色者，为阳性，变黄色 者为阴性。
取另外一支培养48小时后的葡萄糖蛋白胨水培养物，加
入5~10滴40%的KOH，然后加入等量的5%的a-萘酚溶
液，用力振荡，再放入37°温箱中保温15~30分钟，以