《细菌内毒素检查法》PPT课件

对内毒素的检出水平却不同。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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我本公司对鲎试剂质量得控制： 原料；工艺用水；生产环节；灵敏度标定。
标示灵敏度 国家标准
企业标准
0.50EU/ml 0.26EU/ml~0.50EU/ml 0.42EU/ml~0.50EU/ml
0.25EU/ml 0.126EU/ml~0.25EU/ml 0.21EU/ml~0.25EU/ml
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➢在进行鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和 供试品细菌内毒素检查时，各个实验中 要求的对照应同时进行，并在实验有效 的情况才能进行计算和判断。
➢在进行鲎试剂灵敏度复核、干扰实验和 供试品细菌内毒素检查时，各个实验中 要求的对照应同时进行，并在实验有效 的情况才能进行计算和判断。
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3）、内毒素标准品操作误差
正确 （易折点）错误
取细菌内毒素工作标准一支， 轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底， 再用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕， 用75%酒精棉球擦拭后启开 ， 防止玻璃屑落入瓶内。
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注意：①只能在安瓿的易折点上部开启内毒素， 不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在 封口膜上。
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二、试验误差分析及改进措施
鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响 细菌内毒素工作标准品效价及使用的影响 实验器皿的的影响 样品成份及理化性质的影响 实验员的影响 环境的影响
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1、鲎试剂质量及灵敏度标示值得的影响
➢鲎试剂的质量：抗干扰能力，稳定性； ➢鲎试剂灵敏度标示值的准确性 。
应该特别注意，该规程明确规定最后冲洗玻 璃器皿必须“用蒸馏水冲洗，禁用纯化水冲 洗。”有的客户使用反渗透制备的纯化水冲 洗试验用玻璃器皿，结果试验中所有的阳性 对
实验注意事项及影响试验结果的 因素分析
一、实验注意事项 二、影响试验结果的因素分析 三、企业产品优势
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一、试验操作注意事项
——2005年版《中国药品检验标准操作规程》P297细菌内毒素检查法
➢实验前，须用肥皂洗手，用75％酒精棉球 消毒。
➢在使用洗耳球、移液管取样时，应注意不 要将洗耳球中的气体吹入溶液中，以防止气 体中的内毒素进入供试液。
鲎试剂的活性只能控制在某一个范围内，不 可能控制在一个点，我们要求允许波动的范围尽 可能的小减少批间误差。
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2、细菌内毒素标准品引起的误差
细菌内毒素标准品种类 细菌内毒素标准品效价误差 细菌内毒素标准品操作误差 细菌内毒素单位表示误差 细菌内毒素标准品的错误使用
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1）、细菌内毒素标准品种类 ➢细菌内毒素国际标准品 ➢细菌内毒素国家标准品 ➢细菌内毒素工作标准品
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如果用量不大，使用频率不高，建议大 家选用本公司提供的一次性耗材。无热原耗 材是一种在此行业中被鉴定为无内毒素和 β-葡聚糖污染的产品，其中包括, 无热原 试管、无热原移液器吸头。这些产品可以给 您的工作带来很大方便,另外，当实验出现 误差时可首先排除器皿方面的因素,很快分 析判断出误差原因。
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3、实验器皿的影响
器皿的计量管理（校正） 器皿的选择标准 器皿的正确处理
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1）、器皿的选择标准
鲎试验对器皿的要求：刻度准确；内 表面光滑；易于清理。细菌内毒素检查实 验不宜选用注射器，最好使用经过校正的 刻度玻璃吸管或吸嘴。注射器刻度不精确， 内壁磨沙面吸附内毒素，而且要特别注意 注射器针头引入的铁离子对试验结果的干 扰，故不宜选用注射器。
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2）、器皿的正确处理
2005年版《中国药品检验标准操作规范》278 页——细菌内毒素检查法“实验准备”规定： “将被洗涤的玻璃器皿用洗涤剂和自来水洗 净并烘干水分后，置洗液中浸泡4小时，取出 将洗液沥干，用自来水将残余的洗液洗净， 再用蒸
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馏水冲洗干燥后置适宜的密闭金属容器中， 迅速置烤箱中，除去玻璃器皿表面可能存在 的外源性内毒素。”
➢复溶0.5ml鲎试剂时，在旋涡混合器上点 击1-3秒，促进鲎试剂的溶解。
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➢由于凝集反应是不可逆的，所以在反应 过程中及观察结果时应注意不要使试管 受到振动，以免使凝胶破碎产生假阴性 结果。
➢进行干扰实验时，标准对照系列和含内 毒素的供试品溶液系列应同时进行，并 使用同一支细菌内毒素标准品。
细菌内毒素国家标准品与细菌内毒素工作标准品 之间或细菌内毒素工作标准品与细菌内毒素工作 标准品之间的生物效价存在一定的误差，用不同 细菌内毒素标准品复核同一批鲎试剂灵敏度时可 能 存 在 一 定 的 误 差 。 中 国 药 典 要 求 “ 当 λc 在 0.5λ-2λ(包括0.5λ和2λ)时，方可用于细菌内毒素 检查，并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏 度。”试验结果只要在这合格范围内表示鲎试剂 标示灵敏度准确。
②只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶 细菌内毒素工作标准品。
③若使用的为细菌内毒素国家标准品，可 按其使用说明书中的方法将其稀释至规定浓度后 分装保存。若为细菌内毒素工作标准品，为一次 性使用。
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4）、错误使用
有部分客户使用厂家生产的细菌内毒素来复核 鲎试剂的灵敏度，这是一种错误行为，更有甚 者使用厂家生产的细菌内毒素来交叉复核鲎试 剂的灵敏度，这是一种严重错误行为。
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1）、鲎试剂灵敏度的误差
➢是否用细菌内毒素国家标准品标定？
➢标示值是否准确？
不同厂家的鲎试剂虽然标示值（λ）相同，但 仍然存在较大的误差。比如，标示值为0.5EU/ml 的鲎试剂，有的真实灵敏度可能是0.65EU/ml； 而另一个厂家的鲎试剂可能是0.30EU/ml时，按 0.5-2λ误差标准都是合格产品，但对同一检品 在相同的稀释倍数下，这两个厂家的鲎试剂产品
细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成， 用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素 工作标准品的效价。
细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为 基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰 试验及各种阳性对照。
——2005年版《中国药典》
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2）、细菌内毒素标准品效价误差