锯缘青蟹免疫增强剂的筛选及在病害防控中的应用
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表明免疫多糖可提高青蟹对拟态弧菌的抵抗力。 根据锯缘青蟹免疫增强剂注 射试验结果 , 选择能显著提高锯缘青蟹免疫指标和存活率的 CIS-1 、CIS-2 、 PG、 LPS作为免疫增强剂添加到饲料投喂青蟹 , 结果表明 : 投喂 CIS-1 、CIS-2 、PG、LPS
后 , 青蟹血淋巴过氧化物酶、酚氧化酶、碱性磷酸酶活力比对照组均有不同程度 的提高 ;CIS-2 试验组第 6d ALP、POD和 PO活力显著高于对照组 , 其中 ALP活力 达 0.74U/mL, 比对照提高 155%;SOD活力第 11d 比对照提高了 180%,显著高于对照 组 ; 投喂 CIS-1 和 PG后青蟹血清中 ALP活力在 11d 达到最高值 , 投喂 PG、LPS第 15d 血清中的 SOD活力显著高于对照组 ; 各免疫组血清抗菌活力在第 6d 达到最大 值 , 但差异不显著。
通过酚氧化酶体外增强试验 , 开展了青蟹免疫增强的筛选试验。选择了 30
多种中草药和食用菌 , 提取其免疫多糖 , 测定了免疫多糖对青蟹血淋巴酚氧化酶 （ PO）的增强作用。
结果表明白术多糖、木耳多糖、金银花多糖、大黄多糖、猪苓多糖、陈皮多 糖、 CIS-1 、 CIS-2 等均可显著提高 PO活力 , 其最佳激活浓度范围为 0.03 125 μ g/mL—0.125 mg/mL,其他多糖对 PO促进作用较弱或无作用。 选择 CIS-1 、CIS-2 、 连翘多糖分别以 7.5 ×10<sup>-3</sup>mg/mL、0.031 mg/mL 和 1.25 × 10<sup>-4</sup>mg/mL 对锯缘青蟹进行免疫注射实验 , 定期测定青蟹血淋巴的 超氧化物岐化酶 （SOD）、碱性磷酸酶（ ALP）、过氧化物酶（ POD）、酚氧化酶（PO）、 血清抗菌活力和血细胞吞噬活力等指标。
青蟹注射免疫多糖后 , 各组养殖箱中投入青蟹有较强致病力的拟态弧菌 SS060818（V.minicus ）, 终浓度为 1×10<sup>7</sup>cfu/mL 。试验表明 , 注射 CIS-1 、CIS-2 、连翘多糖组青蟹平均存活期比对照组分别增长 55.92%、139.35%、 12ห้องสมุดไป่ตู้43%。
CIS-1 、 CIS-2 、连翘多糖注射后 , 青蟹过氧化物酶（ POD）、酚氧化酶（ PO） 活力和血细胞吞噬活性比对照组均有不同程度的提高 ; 注射 CIS-124h 后, 血淋巴 SOD活性比对照提高了 18.2%（由 12.76 U/mgprot 提高到 15.08U/mgprot ）,ALP 比对照组提高了 75%（0.52 U/mL 提高到 0.91 U/mL ） ; 青蟹注射 CIS-2 和连翘多 糖后 , 血淋巴 SOD和 ALP活性无明显提高。 青蟹注射免疫多糖后 , 连翘多糖的抗菌 活力未见明显提高 , 表明上连翘多糖对青蟹血清抗菌活力无明显增强作用。
在生产性青蟹越冬池中 , 注射 CIS-1 和 CIS-2,15d 后测定青蟹血清的各免疫 指标 ALP、PO、SOD活力跟对照相比均有所提高 ,30d 后 CIS-1 和 CIS-2 注射组的 存活率为 71%、88%,比对照组提高分别 20.33%、49.15%,表明免疫多糖可提高青 蟹的免疫力和存活率 , 有良好的应用前景。
发现拟态弧菌 SS060818、气单胞菌 MrM0602、金黄色葡萄球菌 ATCC2592、3 溶壁微球菌 AS1.634 对 PO有激活作用 , 其中拟态弧菌和气单胞菌激活作用显著 , 金黄色葡萄球菌、 溶壁微球菌对 PO有弱激活作用 ; 肽聚糖、拟态弧菌脂多糖粗提 物可显著提高 PO活力 , 肽聚糖、脂多糖的最佳激活浓度 2.7 mg/mL、0.5 mg/mL。 此外 , 建立了超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、吞噬等青蟹非特异性免疫指标的测 定方法。
投喂免疫多糖 20d 后 , 投入青蟹有较强致病力的拟态弧菌 SS060818 （ V.minicus ）, 终浓度为 1×10<sup>7</sup>cfu/mL 感染青蟹 , 投喂 CIS-1 、CIS-2 、 PG、LPS组青蟹平均存活期比对照组分别增长了 44.57%、104.51%、31.59%、78.70%, 表明免疫多糖可提高青蟹对拟态弧菌的抵抗力。锯缘青蟹越冬养殖用 CIS-1 、 CIS-2 、PG、 LPS注射免疫锯缘青蟹 , 测定青蟹血淋巴中 ALP,SOD,PO,POD血, 清抗 菌活力等指标 , 结果表明 : 试验组 ALP活力均高于对照组 , 其中以 CIS-2 效果最 好 ,SOD、 POD和 PO的活力最高值分别可达 18.55U/mgprot 、0.16 U/mL 和 38.16 U/mL,分别比对照提高了 50%、100%、176%,ALP活力仍处于较高水平 ; 注射 CIS-1 和 LPS的 POD活力都在 16d 达到最高值为 0.14 U/mL, 比对照提高 75%,作用效果 显著 ; 注射 LPS后血清中 ALP、PO活力在与对照组相比变化不明显 ; 越冬 45d 后计 算各试验组青蟹存活率 ,CIS-1 、CIS-2 、PG存活率分别为 73%、82%、70%,均高于 对照组。
作者研究了温度、 pH、促进剂、抑制剂、菌体及免疫多糖对锯缘青蟹血细胞 裂解物（ HLS）酚氧化酶（ phenoloxidase,PO ）活力的影响。试验结果表明 : 锯缘 青蟹 PO的最适作用温度为 25℃, 最适 pH值为 7.8;SDS、Ca<sup>2+</sup>、 Mg<sup>2+</sup>均可提高 PO的活力 , 其中 Ca<sup>2+</sup>和 Mg<sup>2+</sup> 的最佳反应浓度分别为 50 mmol/L 和 150 mmol/L,SDS 的最佳反应浓度为 2.5 mg/mL;叠氮钠、二乙基二硫代氨基甲酸钠、乙二胺四乙酸、 Cu<sup>2+</sup>对 PO活力有不同的抑制作用。
锯缘青蟹免疫增强剂的筛选及在病害防控中的应用
锯缘青蟹（ Scylla serrata ）是我国主要的海水甲壳类养殖品种 , 总产量达 到 10.85 万吨 , 占世界总养殖产量的 88.14%。近年来养殖锯缘青蟹发生大规模疾 病和死亡。
青蟹发生的疾病有黄水病、 弧菌病、 纤毛虫病、 白芒病、 褐斑病、黄斑病等 , 病原包括细菌、病毒、环境因素及不明病因的疾病。 2006 年青蟹全国平均发病 率为 13.77%左右 , 全年经济损失为 2.29 亿元 , 严重制约了青蟹养殖健康可持续发 展。
后 , 青蟹血淋巴过氧化物酶、酚氧化酶、碱性磷酸酶活力比对照组均有不同程度 的提高 ;CIS-2 试验组第 6d ALP、POD和 PO活力显著高于对照组 , 其中 ALP活力 达 0.74U/mL, 比对照提高 155%;SOD活力第 11d 比对照提高了 180%,显著高于对照 组 ; 投喂 CIS-1 和 PG后青蟹血清中 ALP活力在 11d 达到最高值 , 投喂 PG、LPS第 15d 血清中的 SOD活力显著高于对照组 ; 各免疫组血清抗菌活力在第 6d 达到最大 值 , 但差异不显著。
通过酚氧化酶体外增强试验 , 开展了青蟹免疫增强的筛选试验。选择了 30
多种中草药和食用菌 , 提取其免疫多糖 , 测定了免疫多糖对青蟹血淋巴酚氧化酶 （ PO）的增强作用。
结果表明白术多糖、木耳多糖、金银花多糖、大黄多糖、猪苓多糖、陈皮多 糖、 CIS-1 、 CIS-2 等均可显著提高 PO活力 , 其最佳激活浓度范围为 0.03 125 μ g/mL—0.125 mg/mL,其他多糖对 PO促进作用较弱或无作用。 选择 CIS-1 、CIS-2 、 连翘多糖分别以 7.5 ×10<sup>-3</sup>mg/mL、0.031 mg/mL 和 1.25 × 10<sup>-4</sup>mg/mL 对锯缘青蟹进行免疫注射实验 , 定期测定青蟹血淋巴的 超氧化物岐化酶 （SOD）、碱性磷酸酶（ ALP）、过氧化物酶（ POD）、酚氧化酶（PO）、 血清抗菌活力和血细胞吞噬活力等指标。
青蟹注射免疫多糖后 , 各组养殖箱中投入青蟹有较强致病力的拟态弧菌 SS060818（V.minicus ）, 终浓度为 1×10<sup>7</sup>cfu/mL 。试验表明 , 注射 CIS-1 、CIS-2 、连翘多糖组青蟹平均存活期比对照组分别增长 55.92%、139.35%、 12ห้องสมุดไป่ตู้43%。
CIS-1 、 CIS-2 、连翘多糖注射后 , 青蟹过氧化物酶（ POD）、酚氧化酶（ PO） 活力和血细胞吞噬活性比对照组均有不同程度的提高 ; 注射 CIS-124h 后, 血淋巴 SOD活性比对照提高了 18.2%（由 12.76 U/mgprot 提高到 15.08U/mgprot ）,ALP 比对照组提高了 75%（0.52 U/mL 提高到 0.91 U/mL ） ; 青蟹注射 CIS-2 和连翘多 糖后 , 血淋巴 SOD和 ALP活性无明显提高。 青蟹注射免疫多糖后 , 连翘多糖的抗菌 活力未见明显提高 , 表明上连翘多糖对青蟹血清抗菌活力无明显增强作用。
在生产性青蟹越冬池中 , 注射 CIS-1 和 CIS-2,15d 后测定青蟹血清的各免疫 指标 ALP、PO、SOD活力跟对照相比均有所提高 ,30d 后 CIS-1 和 CIS-2 注射组的 存活率为 71%、88%,比对照组提高分别 20.33%、49.15%,表明免疫多糖可提高青 蟹的免疫力和存活率 , 有良好的应用前景。
发现拟态弧菌 SS060818、气单胞菌 MrM0602、金黄色葡萄球菌 ATCC2592、3 溶壁微球菌 AS1.634 对 PO有激活作用 , 其中拟态弧菌和气单胞菌激活作用显著 , 金黄色葡萄球菌、 溶壁微球菌对 PO有弱激活作用 ; 肽聚糖、拟态弧菌脂多糖粗提 物可显著提高 PO活力 , 肽聚糖、脂多糖的最佳激活浓度 2.7 mg/mL、0.5 mg/mL。 此外 , 建立了超氧化物歧化酶、碱性磷酸酶、吞噬等青蟹非特异性免疫指标的测 定方法。
投喂免疫多糖 20d 后 , 投入青蟹有较强致病力的拟态弧菌 SS060818 （ V.minicus ）, 终浓度为 1×10<sup>7</sup>cfu/mL 感染青蟹 , 投喂 CIS-1 、CIS-2 、 PG、LPS组青蟹平均存活期比对照组分别增长了 44.57%、104.51%、31.59%、78.70%, 表明免疫多糖可提高青蟹对拟态弧菌的抵抗力。锯缘青蟹越冬养殖用 CIS-1 、 CIS-2 、PG、 LPS注射免疫锯缘青蟹 , 测定青蟹血淋巴中 ALP,SOD,PO,POD血, 清抗 菌活力等指标 , 结果表明 : 试验组 ALP活力均高于对照组 , 其中以 CIS-2 效果最 好 ,SOD、 POD和 PO的活力最高值分别可达 18.55U/mgprot 、0.16 U/mL 和 38.16 U/mL,分别比对照提高了 50%、100%、176%,ALP活力仍处于较高水平 ; 注射 CIS-1 和 LPS的 POD活力都在 16d 达到最高值为 0.14 U/mL, 比对照提高 75%,作用效果 显著 ; 注射 LPS后血清中 ALP、PO活力在与对照组相比变化不明显 ; 越冬 45d 后计 算各试验组青蟹存活率 ,CIS-1 、CIS-2 、PG存活率分别为 73%、82%、70%,均高于 对照组。
作者研究了温度、 pH、促进剂、抑制剂、菌体及免疫多糖对锯缘青蟹血细胞 裂解物（ HLS）酚氧化酶（ phenoloxidase,PO ）活力的影响。试验结果表明 : 锯缘 青蟹 PO的最适作用温度为 25℃, 最适 pH值为 7.8;SDS、Ca<sup>2+</sup>、 Mg<sup>2+</sup>均可提高 PO的活力 , 其中 Ca<sup>2+</sup>和 Mg<sup>2+</sup> 的最佳反应浓度分别为 50 mmol/L 和 150 mmol/L,SDS 的最佳反应浓度为 2.5 mg/mL;叠氮钠、二乙基二硫代氨基甲酸钠、乙二胺四乙酸、 Cu<sup>2+</sup>对 PO活力有不同的抑制作用。
锯缘青蟹免疫增强剂的筛选及在病害防控中的应用
锯缘青蟹（ Scylla serrata ）是我国主要的海水甲壳类养殖品种 , 总产量达 到 10.85 万吨 , 占世界总养殖产量的 88.14%。近年来养殖锯缘青蟹发生大规模疾 病和死亡。
青蟹发生的疾病有黄水病、 弧菌病、 纤毛虫病、 白芒病、 褐斑病、黄斑病等 , 病原包括细菌、病毒、环境因素及不明病因的疾病。 2006 年青蟹全国平均发病 率为 13.77%左右 , 全年经济损失为 2.29 亿元 , 严重制约了青蟹养殖健康可持续发 展。