小麦矮缩病毒外壳蛋白基因的原核表达、抗体制备及应用
2021高三生物人教版一轮教师用书：选修3 第1讲 基因工程 Word版含解析
第1讲基因工程1.基因工程的诞生(Ⅰ)2.基因工程的原理及技术(含PCR技术)(Ⅱ)3.基因工程的应用(Ⅱ)4.蛋白质工程(Ⅰ)1.基因的结构与功能。
(生命观念)2.基因工程的操作流程图及蛋白质的流程图等。
(科学思维)3.基因工程的应用和蛋白质工程。
(科学探究)4.正确看待转基因生物与环境安全问题。
(社会责任)基因工程的基本工具及基本程序1．基因工程的概念(1)概念：按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
(2)优点①与杂交育种相比：克服了远缘杂交不亲和的障碍。
②与诱变育种相比：定向改造生物的遗传性状。
2．基因工程的基本工具(1)限制性核酸内切酶(简称限制酶)。
①来源：主要来自原核生物。
②特点：具有专一性，表现在两个方面：识别——双链DNA 分子的某种特定核苷酸序列。
切割——特定核苷酸序列中的特定位点。
③作用：断裂特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
④结果：产生黏性末端或平末端。
(2)DNA 连接酶①种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
②质粒的特点⎩⎨⎧ 能自我复制有一个至多个限制酶的切割位点有特殊的标记基因③运载体的作用：携带外源DNA 片段进入受体细胞。
3．基因工程的基本程序(1)目的基因的获取①从基因文库中获取 ②人工合成⎩⎨⎧利用mRNA 反转录合成通过DNA 合成仪用化学方法人工合成③利用PCR 技术扩增(2)基因表达载体的构建——基因工程的核心①目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。
②基因表达载体的组成(3)将目的基因导入受体细胞①转化含义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内遗传和表达的过程。
②转化方法生物类型植物动物微生物受体细胞体细胞受精卵大肠杆菌或酵母菌等常用方法农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法显微注射法感受态细胞法方法检测或鉴定目的水平DNA分子杂交技术检测目的基因的有无个体水平分子杂交技术目的基因是否转录抗原—抗体杂交目的基因是否翻译抗虫或抗病接种实验是否具有抗虫抗病特性分子水平(1)原理：DNA双链复制。
生物工程药物
恶性肿瘤和病毒性疾病
长生药业
双鹭药业
沈阳三生
山东金泰
北京四环
九发股份
IL-4
上海华新
复星实业
天目药业
东阿阿胶
37
基因工程药物
特性 功能
CSF
是一种糖蛋白，G-CSF, M-CSF, GM-CSF 刺激造血细胞增殖、免疫细胞成熟
适应症
贫血、白血病、粒细胞缺乏、血小板减少
Amgon
九发股份
杭州九源
双鹭药业 厦门特宝 长春金赛 华药金坦 海南华康
基因工程制药中常用的载体 分子载体
种 类 用 途
作为外源基因的运载体，在细胞内可进行自我复 制的DNA分子，又称为无性繁殖载体。
克隆载体
表达载体
质粒
λ噬菌体
粘粒
M13噬菌体
动植物病毒
特点：带表达构件—转录和翻译 所需的DNA序列 含启动子—核糖体结合位点—克 隆位点—转录终止信号 – 启动子：trp-lac(tac)启动子、 λ 噬菌体PL启动子、T7噬菌体 启动子 – 核糖体结合位点(ribosomebinding site,RBS)：起始密 码子(ATG)和SD序列 – 转录终止序列 26
DNA重组技术
分子克隆技术
8
基因工程药物的生产
1. 细菌表达系统 2. 酵母表达系统 3. 昆虫表达系统 4. 哺乳细胞表达系统 5. 乳腺生物反应器 6. 转基因鸡 7. 植物生物反应器
9
重组DNA技术
载体DNA +dGTP 3′ PolyG 目的基因
3′
3′
+dCTP 3′ PolyC
10
质粒可以大量制备
山东齐鲁
小麦类甜蛋白TLP基因的克隆与原核表达的开题报告
小麦类甜蛋白TLP基因的克隆与原核表达的开题报告摘要：小麦类作物是我国重要的粮食作物之一，而甜蛋白则是小麦中的一种重要蛋白质，具有多种功能。
TLP（thionin-like protein）是一种基因家族，其编码的蛋白质构成了甜蛋白的一部分。
本研究旨在克隆小麦类作物中TLP基因，并利用原核表达技术进行初步功能研究。
通过基因克隆、限制酶切、DNA测序等方法，成功克隆了小麦类作物中TLP基因。
进一步将其构建到原核表达载体中，在大肠杆菌中进行表达，并分离与纯化得到了重组蛋白。
结果显示，重组蛋白具有一定的抗菌活性。
本研究结果有望为进一步探究小麦中TLP基因的功能和应用提供基础。
关键词：小麦；甜蛋白；TLP基因；克隆；原核表达。
一、研究背景小麦作为我国的主要粮食作物之一，对保障人民生活、推动经济发展、保护生态环境具有重要意义。
同时，小麦也是一种多营养植物，在其中含有多种营养物质，如淀粉、蛋白质、维生素等。
其中，甜蛋白是小麦中的一种重要蛋白质，具有多种生物学功能，如病原体防御、调节植株生长、诱导继代叶片脱落等（张丽丽等，2010）。
TLP是一种基因家族，编码的蛋白质是甜蛋白中的一部分，其结构与硫氰酸蒽酮类似，具有多种生物学活性，如抑制昆虫和微生物、调控植物生长和抗逆性等（Barthakur等，2008）。
TLP基因在小麦中广泛存在，但其功能尚未完全明确。
本研究旨在从小麦类作物中克隆TLP基因，并利用原核表达技术进行初步功能研究，为进一步探究TLP基因的功能和应用提供基础。
二、研究方法1. TLP基因的克隆从小麦中提取总RNA，用有生物体、多功能重复转录酶逆转录为其cDNA，用PCR扩增获得TLP基因的全长序列，并进行限制酶切、DNA测序验证。
2. TLP基因的原核表达将TLP基因片段构建到原核表达载体pET28a中，转化到大肠杆菌BL21中，经过诱导表达，再进行细胞裂解、离心、超声等处理，分离与纯化得到重组蛋白。
第六章抗体的表达
常用的原核表达载体分类及特征
转录载体：用以表达本身带有原核核糖体结合位 点和AUG起始密码子的目的基因T-24（+）和pET-23（+）
体
翻译载体：包括来自T7噬菌体主要衣壳蛋白的高效
核糖体结合位点，用于表达一些不带有核糖体结合
位点的目的基因
pET载体系统为满足不同的需求，生产了带有His·Tag、 T7·Tag、S·Tag、GST·Tag、ompT、CBD S·Tag、 Thioredoxin、DsbA·Tag 、Trx·Tag等标签的融合蛋白，其中带 有S·Tag、His·Tag、T7·Tag的蛋白易于通过蛋白质杂交检测。
11
一种表达体系的核心是表达载体及宿主菌，而表达方法的进步也 主要体现在载体元件的优化和宿主菌基因型的改造上。 理想的原核表达载体应具有以下特征：
（1）稳定的遗传复制和传代能力；
（2）具有显性的转化筛选标记； （3）启动子的转录是可调控的，抑制时本底转录水平较低； （4）启动子转录的mRNA能够在适当的位置终止，转录过程 中不影响表达载体的复制； （5）具备适用于外源基因插入的酶切位点，以确保目的基因 按一定方向与载体正确衔接表达产物的分离、纯化。
第六章抗体的表达
第一节 概述
目前抗体的主要类型： 1、多克隆抗体：通过免疫手段制备。 2、单克隆抗体：通过杂交瘤技术制备。 3、基因工程抗体：包括嵌合抗体、改型抗体等，通过 基因工程手段制备，涉及设计、构建与表达等。
2
3
要想获得全长的抗体分子，就必须选择恰当的抗体表 达系统，而要使所表达的蛋白质结构不具有免疫原性 或避免半衰期过短，就需要使用一个标准的抗体工程 技术生产全人抗体。
大肠杆菌表达系统昆虫细胞表达系统哺乳动物表达系统酵母表达系统存在一些蛋白不能有效地折叠发酵周期较长容易污染需要考虑表达产物的卫生安全性筛选产物价格昂贵有时表达产物没有生物活性等问题都为临床生产和应用带来了不便也存在产物低表达或不表达的问题产物纯化问题依然存外源基因不能持久稳定地表达而且表达成本很高技术背景复杂存在不正确的糖基化修饰且表达量低原核表达系统具有吸引力的原因在于它的成本低生产率高和能够大规模快速的生产等优点第二节原核表达系统原核表达是指通过基因克隆技术将外源目的基因通过构建表达载体并导入表达菌株的方法使其在特定原核生物或细胞内表达
利用酵母双杂交系统研究植物与病毒蛋白相互作用的进展
植物遗传资源学报2006,7(4):477～483Journal of Plant Genetic Res ources利用酵母双杂交系统研究植物与病毒蛋白相互作用的进展黄大辉,张增艳,辛志勇(中国农业科学院作物科学研究所/农业部作物遗传育种重点实验室,北京 100081) 摘要:在长期进化中,植物形成了抵御病毒等病原微生物侵染的精细防御系统。
在病毒侵染、复制和传播过程中,其编码的一些蛋白,如外壳蛋白、运动蛋白、复制酶类等能够与植物基因编码的蛋白发生相互作用。
酵母双杂交系统是体外研究蛋白质间相互作用的有利工具,不但可以用于研究已知蛋白质的互作,还可以发现新蛋白,揭示特定蛋白互作网络与作用机制,在植物蛋白与病毒蛋白互作研究中已得到广泛的利用。
本文主要综述利用酵母双杂交系统研究植物与病毒蛋白相互作用的国内外进展。
关键词:酵母双杂交;植物;病毒收稿日期:2006209228基金项目:国家“863”计划(2004AA222120)作者简介:黄大辉(19772),男,在读博士,研究方向为小麦抗病分子生物学通讯作者:张增艳,研究员,博导,主要从事小麦分子生物学研究;辛志勇,研究员,博导,主要从事小麦遗传育种研究Advances of the I nteracti on between Protei n s of Pl ant andVi rus Usi n g Yeast Two Hybr i d M ethodHUANG Da 2hui,Z HANG Zeng 2yan,X I N Zhi 2yong(Key L aboratory of C rop Genetics and B reeding of M inistry of A griculture /Institute ofC rop Science,Chinese A cade m y of A gricultural Sciences,B eijing,100081) Abstract:During l ong ti m e evoluti on,p lants devel oped elaborate defense pathway and comp licated mechanis m sagainst virus and other pathogens .V irus p r oteins,such as coat p r otein (CP ),move ment p r otein (MP )and poly 2merase p r otein,would interact with host p lant p r oteins during virus infecti on p r ocess .The yeast t w o hybrid syste m is a useful method t o analyze the interacti on bet w een p r oteins in vitr o and app lied widely in studying the interacti on bet w een p r oteins of p lant and virus .This article mainly p resented the advances of the p r otein interacti on of p lant and virus by using yeast t w o hybrid during the past decade .Key words:Yeast t w o hybrid;Plant;V irus 在长期进化过程中,植物发展起来一系列防御病原微生物的精细网络系统。
2020-2021学年高一下学期 人教版高中生物必修2第四章《基因的表达》测试卷
第四章《基因的表达》测试卷一、单选题(共25小题)1.关于密码子和反密码子的叙述，正确的是()A．密码子位于mRNA上，反密码子位于tRNA上B．密码子位于tRNA上，反密码子位于mRNA上C．密码子位于rRNA上，反密码子位于tRNA上D．密码子位于rRNA上，反密码子位于mRNA上2.mRNA上决定氨基酸的一个密码子的一个碱基发生替换，对识别该密码子的tRNA种类及转运的氨基酸种类将会产生的影响是()A． tRNA种类一定改变，氨基酸种类一定改变B． tRNA种类不一定改变，氨基酸种类不一定改变C． tRNA种类一定改变，氨基酸种类不一定改变D． tRNA种类不一定改变，氨基酸种类一定改变3.一个DNA分子可以转录成的mRNA的种类和个数分别为( )A．一种，一个B．一种，多个C．多种，多个D．无数种，无数个4.下图表示人体内苯丙氨酸的代谢途径，据图分析错误的是（）A．由苯丙氨酸合成多巴胺需要多对基因控制B．基因3不正常而缺乏酶3可能引起苯丙酮尿症C．基因2突变而缺乏酶2将导致人患白化病D．基因可通过控制酶的合成来控制代谢过程，从而控制生物性状5.在一个DNA分子中，腺嘌呤与胸腺嘧啶之和占全部碱基数目的54%，其中一条链中鸟嘌呤与胸腺嘧啶分别占该链碱基总数的22%和28%，则由该链转录的信使RNA中鸟嘌呤与胞嘧啶分别占碱基总数的()A． 24%,22%B． 22%,28%C． 26%,24%D． 23%,27%6.如图表示真核细胞中某基因表达过程的一部分，下列分析正确的是（）A．图示mRNA中起始密码子位于RNA链上的左侧B． mRNA上决定甘氨酸的密码子都是GGUC．图中碱基的配对方式有A－U、C－G、A－TD．图示过程的正常进行需要ATP和RNA聚合酶7.把小鼠血红蛋白的mRNA加入到大肠杆菌提取液中，在一定条件下，能合成出小鼠的血红蛋白，这个事实说明( )A．控制蛋白质合成的基因位于mRNA上B．小鼠的mRNA能使大肠杆菌向小鼠转化C．所有生物共用一套密码子D．小鼠的mRNA在大肠杆菌体内控制合成了小鼠的DNA8.下列有关人体细胞中基因与性状关系的叙述，错误的是（）A．基因分布于细胞核、线粒体，只有核中的基因能决定性状B．环境也能影响性状表现，性状是基因与环境共同作用的结果C．有些性状是由多个基因共同决定的，有的基因可决定和影响多种性状D．一条染色体上分布有许多基因，可决定和影响人体的多种性状表现9.下图是遗传信息流动过程图解，以下说法正确的是( )A．真核细胞和原核细胞合成RNA的过程分别是b、eB． a过程中可能发生基因重组C． a、d过程需要的酶相同D．图中各过程都发生碱基互补配对10.下列关于翻译的叙述，正确的是()A． tRNA上的核苷酸序列并非由mRNA决定B．翻译时需要的原料包括了氨基酸和核糖核苷酸C．多个核糖体可以结合到一个mRNA的不同部位并开始翻译D．翻译过程中遗传信息的传递方向可记为：RNA→氨基酸11.根据下表，推断缬氨酸的密码子是（）A． CAAB． CTAC． GUAD． GUU12.某DNA分子共有1 200对碱基，A＋T占46%，其中一条链中G和T分别占22%和28%，则由该链转录的信使RNA中G所占比例和其翻译产物中含氨基酸的数目最多分别是()A． 32%400个B． 32%200个C． 18%200个D． 22%400个13.真核生物核基因上遗传信息表达的全过程发生在细胞的()A．细胞核中B．染色体上C．核糖体上D．细胞核、核糖体上14.人或动物PrP基因编码一种蛋白(PrP c)，该蛋白无致病性。
齿兰环斑病毒外壳蛋白的原核表达、抗体制备及检测应用
中 图分 类 号 ： ８ Ｓ４ ２ ４ Ｑ ７ ； ３
Ｚ ＨＡＮＧ ｉ Ｍ Ｅ ； Ｃｈ ｎｍｅ ， ＲＯＮＧ Ｓ ｎ ！ Ｚ Ｊｅ ， Ｎ（ － ｕ ｉ ｏ ｇ ， ＨＡＮＧ Ｃ ａ ＨＯＮＧ Ｊａ Ｗ Ｕ Ｊａ ｉｎ ｈｏ ， ｉｎ ， ｉｎｘａ ｇ
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靠 、 敏 、 异 的 检 测 Ｏ Ｖ 的 免 疫 捕 获 ＲＴ Ｐ Ｒ 及 ｄ ｔ ｌｔＥ ＩＡ 方 法 ， 该 兰 花 病 毒 病 的 诊 断 、 灵 特 ＲＳ —Ｃ ｏ ｏ Ｌ Ｓ ｂ 为 兰
花 抗 病 育 种 和 脱 毒 苗 的 建 立 打 下 了基 础 ．
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键
词 ： 兰环 斑 病 毒 ； 核 表 达 ；多克 隆 抗 体 ； ｏ ｌｔ Ｉ Ｓ 齿 原 ｄ ｔ ｏ Ａ；免 疫捕 获 Ｒ — Ｃ ｂ Ｅ Ｉ ＴＰ Ｒ 文献标 志码 ： Ａ
浙 江大 学 学报 （ 农业与生命科学版） ３（） ３５ ８， ００ ６４：７４３ ２１ ０
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｅｉｎ ｉｅ ｓｔ （ ｒｅ ＆． ｆ ｃ． ｏ ｒ ａ ｆＺｈｊａ ｇＵｎｖ ｒｉ Ａｇ ｉ． ｙ Ｌｉ Ｓ ｉ） ｅ
文章 编 号 ：０ ８ ９ ７ ６
３ ０ ２ ，Ｃ ｉａ ２ ｈ ｊａ ｇ Ｃ ｕ ｎ ｕ ｏｏ ｉａ ｅｈ ｏｏ ｙ Ｃ ．Ｌｔ ， Ｈａ ｇ ｈ ｕ３ ２ １ ｈ ｎ １ ０ ９ ｈ ｎ ．Ｚ ｅｉｎ ｈ ａ ｈ ａ Ｂｉｌｇ ｃ ｌＴ ｃｎ ｌｇ ｏ ｄ． ｎ ｚ ｏ １ ３ ，Ｃ ｉａ） １
TMV重组外壳蛋白Sc1754CP的原核表达和多克隆抗体制备
摘要 ： 草花叶病毒 （ｏａｃ ｇａｃｖ ｕ ， Ｍ 重组外壳蛋 白（ ｏｔ ｒｔ ｎ Ｃ ） ｃ７４ Ｐ是 一种能够 激发敏感 烟 烟 ｔｂｃｏｍ ｓｉ ｉ ｓＴ Ｖ） ｒ ｃａ ｐｏ ｉ， Ｐ Ｓ１５ Ｃ ｅ
草 产生过敏性反应 （ ｙｅｓｎｉｖ ａｔ ｎ ＨＲ） ｈｐｒｅｓｉ ｒ ｃｉ ， ｔｅ ｅ ｏ 的蛋 白， 是这种蛋 白无法通过植物病毒 的大量扩增 获得． 但 为了获
（ｙｅ ｅｓｉｅｒａｔｎ Ｒ）ｔ］植 物 和病 原 体 的 ｈｐｒ ｎｉｖ ｅｃｏ ，Ｈ Ｉ２． ｓ ｔ ｉ － 这种 非亲 和性互 作 对 于植 物抗 病 性 有 着 重 要 作 用． 不仅 如此 ， 该类 研究 对 于 植 物 病 理 学研 究 和经 济 作
统 地感 染敏 感性 烟草 Ⅳ ａａｕ Ｖ ａ ｓｎｎ ．ｔｂｃｍ Ｃ．Ｓｍ ｕ ｎ并 产 生典 型 的 花 叶症 状 ． 在 前 期 实 验 中 ， 但 我们 发 现 一类 重 组 Ｔ Ｖ（ 外 壳蛋 白（ｏｔ ｒｔｉ，Ｃ ） Ｍ 在 ｃａ ｐｏ ｎ Ｐ 末 ｅ
端 融合 了含跨膜 结 构 的外 源 小肽 ） 在 敏感 性烟 草 能
Ｖｏ ． ４ １ １ Ｎｏ． ３
Ｊｎ ０８ ｕ ．２ ０
文章编号 ：０ ７２ ６ （０ ８ ０ －３ ３０ １０ 。８ １ ２０ ）３０２ －５
Ｔ ＭＶ重 组 外 壳 蛋 白 Ｓ １ ５ Ｃ ｃ７ ４ Ｐ的原核 表达 和 多克 隆抗 体 制备
李 蓉 ， 宋任 涛 ， 许政 暄 ， 李 平
得 足够 量的上 述 蛋 白， 对 这 种 蛋 白在 植 物 中激 发 的 Ｈ 并 Ｒ反 应 进 行 深 入研 究 ， 者 在 大 肠 杆 菌 中 大 量 表 达 作
克隆基因的表达
2. 周质中表达
（1）周质（periplasm）
格兰氏阴性大肠杆菌位于内膜和外膜之间 的细胞结构部分。
蛋白质从细胞质转运到周质的复杂 机理目前不完全清楚
优点： 容易被浓缩和纯化、有利于正确折叠、 被降解的少。
（2）信号肽（signal peptide）
能带领蛋白穿过膜到达周质。但以后需 要正确切割掉。
② 多聚A/U
由于茎环3’段紧接一串A/U的配对，稳定性 比较差，有利于转录物脱落而不利于转录 延续。
5-CCCACAGCCGCCAGTTCCGCTGGCGGCATTTTAA CT TCT TTCT-3 3-GGGTGTCGGCGGTCAAGGCGACCGCCGTAAAATTGAAGAAAGA-5(模板)
5’
有意义链
3’
3’
反意义链
5’
转录
5’
mRNA
3’
翻译
N
蛋白质
C
4. 不含内含子，缺乏转录后的加工系统。 5. 调控主要在转录水平上。 6. mRNA的核糖体结合位点
Shine-Dalgarno（S-D）sequence:
含有一个启始密码子和一段同核糖体 16SRNA3’末端碱基互补的序列，叫ShineDalgarno（S-D）序列。
一般位于N端。
（3）常用的原核信号肽
①大肠杆菌的信号肽： phoA、OmpA、OmpT、OmpF、 LamB、β-内酰胺酶（lactamase）、 肠毒素（enterotoxin）ST-II、LT-B等
②金黄色葡萄球菌的蛋白A。 ③枯草芽孢杆菌的内切葡聚糖酶 （endoglucanase）。 ④胡萝卜欧氏杆菌的PelB蛋白。
以pBR322为 基础构建的。 调节基因不必 借助于宿主的 lacI.
细胞生物学填空题
第一章绪论1、细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，是在显微水平、亚显微水平、和分子水平三个不同层次上，以研究细胞的细胞结构与功能、细胞增殖分化、衰老与凋亡，细胞信号传递，真核细胞基因表达与调控，细胞起源与进化等为主要内容的一门科学。
2、 1665 年英国学者胡克第一次观察到细胞并命名为cell；后来第一次真正观察到活细胞有机体的科学家是列文虎克。
3、1838—1839年，施莱登和施旺共同提出：一切植物、动物都是由细胞组成的，细胞是一切动植物的基本单位。
4、19世纪自然科学的三大发现是细胞学说，能量转化与守恒定律，达尔文的进化论。
5、1858年德国病理学家魏尔肖提出细胞来自细胞的观点，通常被认为是对细胞学说的一个重要补充。
6、人们通常将1838—1839年施莱登和施旺确立的细胞学说；1859年达尔文确立的进化论1866年孟德尔确立的遗传学，称为现代生物学的三大基石。
7、细胞生物学的发展历史大致可分为细胞的发现，细胞学说的建立，细胞学经典时期，实验细胞学时期和分子细胞生物学几个时期。
第二章细胞基本知识概要1、所有细胞的表面均有由脂类和蛋白质构成的细胞膜；所有的细胞都含有两种核酸；所有细胞都以二分分裂方式增殖；所有细胞内均存在蛋白质生物合成的机器核糖体。
2、病毒是迄今发现的最小的、最简单的专性活细胞内寄生的非细胞生物。
3、病毒核酸是病毒的遗传信息唯一的贮存场所，是病毒的感染单位；病毒蛋白质构成病毒的外壳（壳体），具有保护作用。
***4、病毒的增殖一般可分为病毒侵入细胞、病毒核酸的侵染；病毒核酸的复制、转录与蛋白质的合成；病毒的装配、成熟与释放三个阶段。
5、原核细胞的遗传信息量小遗传信息载体仅由一个环状的DNA构成，细胞内没有专门的细胞器和核膜，其细胞膜具有多功能性性。
6、一个细胞生存与增殖必须具备的结构为细胞膜、遗传信息载体DNA与RNA、进行蛋白质生物合成的一定数量的核糖体和催化酶促反应所需要的酶。
细胞工程在疫苗中的具体应用
细胞工程在疫苗中的具体应用细胞工程是一种利用细胞调控技术调节细胞功能以达到修复或改变细胞行为的技术。
近年来，随着细胞工程技术的发展，细胞工程在疫苗的应用也取得了可喜的成果。
这些成果的发展为免疫治疗研究提供了重要的参考。
首先，原核表达技术是利用原核生物体来表达具有特定功能的蛋白质，具有快速表达、效率高的特点。
研究者利用这种技术发现了一种新型疫苗——利用原核表达技术表达生化物质介导的病毒疫苗(VLP)，它有效预防腺病毒系列病毒感染。
其实，这种VLP疫苗的原理是利用原核表达技术制造病毒非感染性的外壳，它引起的免疫响应将抵抗致病的病毒而非原核素。
此外，这种技术应用于其他病毒疫苗，如人类呼吸病毒疫苗，改良型疫苗也受到推崇。
其次，基因工程技术是一种对生物体基因信息的改造，使其具有特定功能的技术。
利用基因工程技术，研究者们开发出了基因编辑疫苗，有助于改良基因编辑技术，使基因编辑疫苗具有抗病毒的高效性，如脊髓灰质炎贴紧型蛋白，非典型表达的结核菌血清结构，以及调节型肝炎B病毒蛋白等。
此外，体外系统技术是基于体外细胞系统及传统分子免疫学方法开发出来的一种技术。
它可以利用体外系统技术来分析在细胞及分子层面上的免疫学过程，并更好地了解特定病毒的免疫机制。
例如，研究者利用体外系统技术研制出的类流感病毒，有助于明确类流感病毒的病原机制，为动物实验提供更充分的科学依据，并有助于设计开发更加有效的免疫治疗疫苗。
综上所述，细胞工程在疫苗应用中发挥了重要作用，不仅促进了疫苗研发，还提高了疫苗的安全性，抗毒力及耐受性。
前景非常光明，未来细胞工程技术将不断发展和改进，为抗击病毒病提供技术保证。
小麦WRKY转录因子VIGS基因沉默载体构建及验证
小麦WRK转录因子VIGS基因沉默载体构建及验证：WRKY transcription factor family can help improve plant stress tolerance ，which widely exist in variousplants. After TaWRKYgene was silenced by VIGS method，it was found that the proportion of succeed Bgt inoculation increased ，and the percentage of abnormal appressoria declined ，such as papilla. The results indicated that TaWRKY gene played an important role in wheat- Bgt interaction.小麦白粉病是由布氏白粉菌( Blumeria graminis f. sp. Tritici )侵染所引起的真菌感染性病害，如遇高温多湿天气病害流行，会使小麦严重受害，导致减产13%- 34%[1]。
因此，科学家一方面通过抗病育种，不断培育新的抗病小麦品种来抵御病害，另一方面通过深入的抗病分子机理研究，克隆抗病相关基因、弄清抗病信号通路以及基因工程等技术手段，以达到抗病分子育种的目的。
转录因子可以与真核基因启动子区中的顺式作用元件互作，激活或抑制多个下游功能基因转录，从而使植株获得综合改良效果。
研究表明，WRK转录因子家族几乎存在于所有植物中，它们共同含有一段高度保守氨基酸序列WRKYGQK[2] WRK广泛参与植物种子萌发与休眠、开花、代谢、激素信号转导，还参与抵御生物和非生物胁迫等反应过程。
拟南芥AtWRK Y3基因直接调控了植物抗毒素Camalexin 的合成[3] ，并且调控大量抗病相关基因的表达[4]。
MBP-mCTCF融合蛋白原核表达载体的构建及表达
MBP-mCTCF融合蛋白原核表达载体的构建及表达尚丽平;李武峰【摘要】To construct the prokaryotic expression vector of pMal-C2G-mCTCF and induce the express~f fusion protein,DNA fragments encoding the mouse CTCF were generated by PCR using the plasmid pMXs-3Flag-mCTCF as a template,PCR products were digested with the restriction enzyme EcoR Ⅰ and SalⅠ and cloned into pMal-C2G expression vector.The plasmids were sequenced to confirm that there were no point mutations in the coding sequences.The constructed plasmids were transformed into E.coli BL21 to induce the expression of MBP-mCTCF fusion protein.The fusion protein was analyzed by SDS-PAGE and Coomassie blue staining.The prokaryotic expression plasmids pMal-C2G-mCTCF were successfully constructed,which were testified by bacterial PCR,gene sequence and double restriction enzyme digestion analysis.We also got the suitable conditions for inducing fusion protein expression.The optimized induction condition was 37 ℃ with 10 × 10-4 mol/L IPTG for 6 hours to induce higher amount of MBP-mCTCF fusion protein.%为了构建鼠的CTCF与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白的原核表达载体,并进行原核诱导表达及鉴定,以pMXs-3Flag-mCTCF为模板,PCR扩增得到mCTCF序列,目的基因片段EcoR Ⅰ,SalⅠ双酶切后连接到同样双酶切的pMal-C2G载体上,测序鉴定.将测序正确的质粒转化到E.coli BL21中,用IPTG诱导融合蛋白的表达,用SDS-PAGE分离检测蛋白表达效果.经菌液PCR、测序鉴定、双酶切鉴定证明,得到的重组质粒pMal-C2G-mCTCF构建成功,且成功诱导出了MBP-mCTCF融合蛋白,最佳诱导条件为:10×10-4 mol/L IPTG浓度在37℃诱导6h.【期刊名称】《山西农业科学》【年(卷),期】2017(045)005【总页数】4页(P677-679,688)【关键词】CTCF;质粒构建;原核诱导表达【作者】尚丽平;李武峰【作者单位】山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801;山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】Q51CCCTC-结合因子（CTCF）是一种在生物体内广泛表达并在进化上高度保守的蛋白，鼠的CTCF全长736个氨基酸，包括N-末端（氨基端）、C-末端（羧基端）和锌指结构域（CTCF-ZFs）[1]。
851微生物历年名词解释真题
微生物历年名词解释真题1.菌体二型性2.类病毒〔2〕〔viroid〕是一类由一短串〔少数机半个碱基〕高度互补、环状、单链RNA构成的，没有衣壳蛋白和典型病毒特征的植物致病因子3.一步生长曲线〔2〕将适量病毒接种于高浓度敏感细胞培育物，待病毒吸附后，或高倍稀释病毒-细胞培育物，或以抗病毒血清处理病毒-细胞培育物以建立同步感染，然后继续培育，定时取样测定培育物中的病毒效价，以感染时间为横坐标，病毒的效价为纵坐标，绘制出病毒特征曲线包括〔埋伏期、裂解期，平稳期〕4.细菌L 型细菌在某些环境条件下〔试验室或宿主体内〕通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷型菌株。
5.异形胞〔heterocyst〕在蓝细菌丝状体中，比一般养分细胞稍大，比较透亮的细胞称为异形胞，异形胞呈圆形，处于丝状体的中间或顶端〔全部含有异形胞的菌种都能固氮〕6.艾滋病毒〔HIV〕人类免疫缺陷病毒〔Human Immunodeficiency Virus;abbr:HIV〕，即艾滋病〔AIDS，获得性免疫缺陷综合征〕病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。
1981 年，人类免疫缺陷病毒在美国首次觉察。
它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒〔Lentivirus〕，属逆转录病毒的一种7.分生节孢子8.流产转导〔abortive transduction〕：转导的DNA不整合到受体的细胞的染色体上，虽然不能连续复制，但仍能表达基因的功能的转导，最终将随细胞分裂而丧失，也可能消灭单线遗传。
9.选择培育：利用不同微生物间生命活动特点的不同，制定环境条件，使仅适应当条件的微生物生长旺盛，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更简洁地从中分别到所需的特定微生物。
承受配置选择培育基10.限制性内切酶〔2〕限制性核酸内切酶是可以识别特定的核苷酸序列，并在每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键进展切割的一类酶，简称限制酶。
11.巴斯德效应是指在厌氧条件下,向高速发酵的培育基中通入氧气,则葡萄糖消耗削减。
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王亚娇 ，任 堂雨 ，刘 艳ｈ ，王锡锋
（ 中国农业科学院植物保 护研究所 ，植物病虫害生物学国家重点实验室 ，北京 １ ０ ０ １ ９ ３ 。 福建农林大学植物病毒研究所 ，福建省植物病毒学重点实验室，福州 ３ ５ ０ ０ ０ ２ ）
摘要 ： 小 麦矮 缩病毒 （ Ｗｈ ｅ ａ ｔ ｄ ｗ ａ 矿ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ， ＷＤＶ） 引起 的小麦矮 缩病是近 年来我 国小麦 生产 中的一种重要病 毒病 害， 急需研 发快速精准的检测技术用 于预测预报 和病毒一 介体相互 作用 的研 究 。本研究应 用 Ｇ ａ ｔ ｅ ｗａ ｙ重组技术构建 了外壳蛋 白基 因 （ Ｃ ｏ ａ ｔ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ， Ｃ Ｐ ） 的原核表达载体 ， 将重组表达载体转化大肠杆菌 Ｒ ｏ ｓ ｅ ｔ ｔ ａ ， 经 Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ诱 导获得 Ｃ Ｐ基 因原 核表达蛋 白。以 重组蛋 白为抗原免疫新 西兰大白兔制备得到了相应的抗体 ， Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 检测表明制备的抗体能 与 Ｃ Ｐ重组蛋 白、 感病小麦 和带毒叶蝉特异性结合 ， 说 明获得的抗体 特异性高 。用获得 的抗体进行免疫荧 光标记 ， 观察到病毒分 布在 介体叶蝉 的前 中
ｒ ｉ ｃ ｈ ｉ ａ ｃ ｏ ｌ ｉ ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ＷＡＮ Ｇ Ｙａ － ｊ ｉ ａ ｏ ，Ｒ Ｅ Ｎ Ｔ ａ ｎ ｇ ． Ｙ ｕ ，Ｌ Ｉ Ｕ Ｙ ａ ｎ ，ｗＡ ＮＧ Ｘｉ — ｆ ｅ ｎ ｇ
肠 和 中 中肠 部 位 ， 为 ＷＤＶ 的预 测 预 报 和 介 体 条 沙 叶 蝉 传 毒 机 制 的 研究 奠定 了基 础 。
关键词 ： 小麦矮缩病毒 ； 原核表达 ；多克隆抗体 ； Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ ； 免疫荧光标记
Ａｎ ｔ ｉ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏｎ ｏ ｆ Ｗｈ ｅ ａ ｔ ｄｗａ ｒ ｆ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ ｃ ｏ ａ ｔ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ Ｅ ｓ ｃ ｈ ｅ —
植 物 病 理 学 报 Ａ Ｃ Ｔ Ａ Ｐ Ｈ Ｙ Ｔ Ｏ Ｐ ＡＴ Ｈ Ｏ Ｌ Ｏ Ｇ Ｉ Ｃ Ａ Ｓ Ｉ Ｎ Ｉ Ｃ Ａ ４ ３ （ ４ ） ： ３ ６ ２ － ３ ６ ７ （ ２ ０ １ ３ ）
小 麦 矮 缩 病 毒 外 壳 蛋 白基 因 的 原 核 表 达 、 抗 体 制 备 及 应 用