12 免疫细胞无血清培养基
无血清培养基介绍
无血清培养基介绍无血清培养基是一种无需添加动物血清的培养基，适用于细胞的体外培养。
相较于传统的含有动物血清的培养基，无血清培养基具有许多优势，如避免了潜在的传染病传播风险、提高了细胞培养的一致性和可重复性，同时也降低了培养的成本。
本文将介绍无血清培养基的成分、制备方法以及应用领域等方面的内容。
无血清培养基的基本成分包括碳源、氮源、微量元素、维生素、生长因子、胶原蛋白和附加物等。
碳源常用的有葡萄糖、果糖等，氮源常用的有谷氨酸、天冬酰胺等。
微量元素是重要的细胞营养物质，包括铁、锌、铜、锰等，其浓度一般较低。
维生素在细胞的代谢过程中起到重要的辅酶和辅因子的作用，为细胞的正常生长提供必需物质。
生长因子是一类具有特定生物活性的蛋白质，能够直接影响细胞的增殖和分化。
胶原蛋白是一种结构性蛋白质，可以提供细胞粘附的基质支持。
其他附加物如氨基酸、核酸、脂质等也可以根据具体需要添加到培养基中。
无血清培养基的制备过程主要包括消毒、配制、滤过、灭菌等步骤。
消毒包括培养器皿、玻璃棒、试剂瓶等的高压蒸汽灭菌，确保杂菌的清除。
配制过程中需要将不同成分按照一定比例配制成培养基液。
滤过是为了除去微生物和大分子物质，常用的有0.22μm的滤膜过滤。
灭菌是一种无菌操作，可以使用高压蒸汽灭菌器或者紫外线灭菌器，确保培养基的无菌性。
无血清培养基在许多领域具有广泛的应用。
在生物医学研究领域，无血清培养基可以用于细胞培养、细胞扩增和细胞实验等。
细胞培养是生物医学研究中非常重要的实验手段，可以用于研究细胞的生理和病理功能，评估药物的毒性和疗效等。
在生物制药领域，无血清培养基可以用于生产重组蛋白、疫苗和细胞疗法等。
传统的生物制药方法中，常使用含有动物血清的培养基，但是这种方法存在一些问题，如潜在的传染病传播风险、批次差异大等。
无血清培养基不仅可以提高生产一致性和控制性，还可以降低成本和生产风险。
总结来说，无血清培养基是一种无需添加动物血清的培养基，具有许多优势，如避免了传染病传播风险、提高了培养一致性和可重复性，降低了培养的成本。
细胞培养基简介
依据实验目的选择培养基
增殖实验
选择能够支持细胞快速增殖的培养基，以便在短时间 内获得大量细胞。
诱导分化实验
选择能够诱导细胞分化的培养基，以便观察细胞分化 过程和分化后的表型特征。
基因转染实验
选择能够支持基因转染的培养基，以便将外源基因导 入细胞并观察其对细胞表型的影响。
优化培养基配方
调整营养成分
较高。
无血清培养基
总结词
无血清培养基是指在培养基中不添加任何动物来源的血清，完全由化学成分合成的培养基。
详细描述
无血清培养基不含动物来源的血清，而是通过添加多种化学成分来模拟血清的功能，如添加蛋白质、生长因子等 。无血清培养基适用于生产疫苗、单克隆抗体等生物制品，因为其成分明确、质量控制方便，且能够避免血清批 次差异对细胞培养的影响。
再生医学
细胞培养基在再生医学领域也有广泛应用，如组织工程、器官再生等 。
发展趋势
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新型细胞培养基的开发
随着生物技术的不断发展，对新型细胞培养基的 需求越来越高，如无血清培养基、个性化培养基 等。
细胞培养基的个性化定制
根据不同细胞类型和实验需求，细胞培养基需要 进行个性化定制，以满足特定实验条件和生产需 求。
细胞培养基市场的主要参与者包括生 物技术公司、科研机构和制药企业等 。
细胞培养基市场主要集中在美国、欧 洲和亚太地区，其中亚太地区增长最 快。
应用领域
生物制药
细胞培养基是生物制药生产过程中必不可少的原料之一，用于大规 模培养细胞，生产重组蛋白、单克隆抗体等生物药物。
科学研究
细胞培养基广泛应用于生命科学、医学、药学和农业等领域的基础 研究和应用研究，如肿瘤研究、免疫学研究、干细胞研究等。
无血清培养基的市场调查报告
无血清培养基的市场调查报告第一章无血清培养基概述通常，动物细胞的生长均有赖于血清的存在，在普通培养基中，如不加血清，绝大部分细胞不能增殖。
目前，血清培养基中通常添加的比较好的血清是牛血清。
经研究发现细胞培养中使用牛血清存在污染外源病毒和致病因子的风险：由于不同批次牛血清间的生物活性和因子的不一致，导致产品和实验结果的重现性差：制品中残留的牛血清易引起接种者对血清的过敏反应。
无血清培养基(Serum-Free Media)，通常以SFM表示，顾名思义，就是在细胞培养中不需要添加血清，但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。
无血清培养基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等，能减少血清带来的不利因素，使细胞培养的条件更稳定。
经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。
采用无血清培养可简化纯化和鉴定各种细胞产物的程序，避免病毒污染造成的危害。
一、无血清细胞培养基及其优缺点（一）无血清培养基及分类无血清培养基是继天然培养基，合成培养基之后的第三类培养基。
与传统的培养基相比较，无血清培养基是不含动物血清或其他生物提取液，但仍可以维持细胞在体外较长时间生长、繁殖的一种培养基。
无血清培养基由于其组成成分相对清楚，制备过程简单，在现代生物技术学领域得到广泛应用。
无血清培养技术也是阐明细胞生长，增值，分化及基因表达调控的基础研究问题的有力工具。
目前，无血清培养基的研究有两个方向：一是培养基中不含有任何动物来源的添加组分；二是培养基中不含有不明确的添加组分。
依此可以将当前应用较多的无血清培养基归纳为以下四种：1.一般意义上的无血清培养基，用各类可代替血清功能的生物材料配制细胞培养基，如牛血清白蛋白（BSA），转铁蛋白，胰岛素等生物大分子物质，以及从血清中提取的去除蛋白质的混合脂类以及水解蛋白等。
其特点是培养基中的蛋白含量较高，添加物质的化学成分不明确，其中含有大量的动物来源蛋白。
无血清培养基概述及应用前景
2012年第36期(总第51期)科技视界Science &Technology VisionSCIENCE &TECHNOLOGY VISION科技视界(上接第46页)在垂直绿化中,有的利用藤本植物吸盘或卷须攀援而上,有的垂挂覆地,用长的枝和蔓茎,美丽的枝叶和花朵组成观景。
此外,除了植物本身所具有的自然美以外,人们往往赋予植物一种特殊的象征,人们常用紫藤表示欢迎,有热情好客之意;茉莉表示温柔亲切;香豌豆代表离别;南蛇藤表示真实和诚实;凌霄表示声誉和名声;牵牛花表示辛苦和勤奋。
这些植物的人格化在造景中如能合理运用,可形成诗情画意的境界。
更多更快地发展垂直绿化,即可以提高绿化质量,又可以改善和保护环境,创造景观、生态、经济三相宜的园林绿化效果。
所以,在开拓绿化空间及增加总绿量已成为趋势的今天,不仅需要平面绿化,还要把平面绿化和垂直绿化有机的结合起来,我们没有理由忽视垂直绿化的优势及潜力。
【参考文献】[1]王巧珍.浅谈垂直绿化在城市绿化的应用[J].农业装备技术,2005(3):45-46.[2]薛理和.城市绿化在生态城市建设中的作用[J].防护林科技,2003(4):51-58.[3]罗定先.城市绿化的探讨[J].国土绿化,1995(4):20-21,34.[4]陈明.城市绿化应走向艺术绿化[J].城乡建设,1996(4):32.[5]何永桃.城市绿化中的“遗憾工程”[J].城乡建设,2000(4):35.[6]汤友新,孔庆平.千般愁结何时解:城市绿化优思录[J].江苏绿化,1994(5).[7]付连珍.浅谈现代城市绿化的作用[J].山东环境,1997(3):32-33.[8]刘波.城市绿化应以植树为主[J].河南林业,2003(5):4.[责任编辑:王洪泽]无血清培养基(serum free medium,SFM)是继天然培养基、有血清合成培养基之后研制的一类既能满足细胞在体外较长时间生长繁殖又无需添加血清避免外源物质污染的合成培养基,是目前及未来生物工程领域的一大趋势。
(完整word版)细胞血清培养基和无血清培养基的配制以及区别
细胞血清培养基和无血清培养基的配制以及区别细胞培养基是如何配制的？培养细胞的完全培养基由基础培养基和添加剂(如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子)组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是迈健基础培养基和迈健培养基营养添加物的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而迈健培养基也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。
现应用于快速生长的细胞，同培养基含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培养基中这两种物质缺乏时)。
但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
血清细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。
基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。
特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。
胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。
而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。
然而，很多人也将胎牛血清用于神经元培养，也有人用马血清来培养胶质细胞。
用大鼠进行神经元培养的某些研究者喜欢使用同型血清;人类的胎盘血清，亦曾用于神经组织的器官类型的培养，也用在一些特殊培养种类中。
人淋巴细胞无血清培养基（ELISPOT 专用）说明书
第1页共2页人淋巴细胞无血清培养基（ELISPOT 专用）说明书【产品名称】通用名称：人淋巴细胞无血清培养基（ELISPOT 专用）【规格】100mL/瓶；500mL/瓶【预期用途】仅用于在ELISPOT 检测技术中对细胞的培养，不具备对细胞的选择、诱导、分化功能。
培养后的细胞用于体外诊断。
【检验原理】ELISPOT 技术是根据ELISA 技术的基本原理，建立的体外检测特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术。
由于其灵敏度高、操作简便经济，因此备受青睐。
传统的ELISPOT 检测技术中，细胞培养这一步使用的多为含有FBS 或者FCS 的培养基，由于血清中含有的很多未知成分能够抑制或者刺激细胞，从而干扰实验，并且由于血清的不确定性，不同批次对于实验的影响也不同，造成了实验的重复性降低。
本产品可有效避免血清质量变动及血清组分对实验研究的影响，提高细胞培养和实验结果的重复性。
【主要组成成分】无机盐、氨基酸、维生素、糖类、蛋白等。
【储存条件及有效期】1、2℃~8℃密封避光保存，避免污染。
2、在储存条件下有效期为一年。
【样本要求】1、细胞要求：新鲜分离的人淋巴细胞。
2、细胞悬液要求吹打混匀，成单细胞悬液。
【检验方法】1、取ELISPOT 板，每孔加入200μL 本产品，室温静置5-10分钟后将其扣出。
2、取新鲜分离的人淋巴细胞，使用本产品调整细胞浓度。
3、将调整好浓度的细胞悬液加入各实验孔，100μL/well 。
4、正对照孔加入阳性刺激剂工作液；负对照孔（含背景负对照孔）加入本产品；实验孔：加入实验者自己的刺激物。
5、所有样品和刺激物加完后，盖好板盖。
放入37℃，5％CO 2培养箱培养16-24小时。
6、显色：按照标准ELISPOT 操作流程进行细胞裂解、洗板、检抗孵育、酶孵育、显色，记录板底斑点数并分析。
【检验结果的解释】结果显示阳性孔斑点分布均匀、频率较高、斑点较大、圆润、线性好、背景干净；阴性对照孔无斑点或有极少斑点，背景干净，无杂色。
血清使用问题的总结
拜力生物编辑整理：
一、血清灭活问题。
1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？
答：不是必须的，看做什么实验了。
2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？
答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是
3、问：4℃冰箱内保存3个月的胎牛血清，能否继续使用？相关细胞和其它试剂的代价比较高，不敢轻易尝试。
答：需要长期保存的胎牛血清必须要保存在-20至-70℃的低温冰箱中，4℃冰箱中保存时间不要超过1个月。
五、FBS可否代替人AB型血清？
问：我现在在做人的外周血b淋巴细胞的培养，文献上要求用人的AB型血清，但是我觉得很多代理商都没有。我想FBS代替，但不知道可否，我先是担心免疫排斥之类，但是我查了些资料后，应该不会(我觉得)。但是我又不能够TRY。因为细胞因子确实太贵了，所以咨询一下。谢谢！
答：常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间，而时间则从15分钟到60分钟不等，其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。看看你养的细胞是什么，一般的话估计问题不大，要是很珍贵的细胞还是慎重一点啊。热灭活目的是为了去除血清中补体等对热敏感的物质， 在对补体灭活以外，热处理同时也对血清中可能存在的支原体具有灭活作用。现在好像不主张热灭活，热灭活经常给血清产品带来负面影响，对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生，此外，有研究结果证实热灭活步骤减弱了胎牛血清和小牛血清对细胞的促粘附作用。
答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。
生物治疗过程中如何使用无血清培养基培养细胞
生物治疗过程中如何使用无血清培养基培养细胞生物治疗是一种利用活体细胞和基因进行疾病治疗的方法。
在生物治疗过程中，培养细胞是必不可少的一步。
传统上，细胞培养通常在含有胎牛血清的培养基中进行。
然而，由于存在一些问题，如成本昂贵、血清批次差异、可能存在传染性病毒等，无血清细胞培养基越来越受到关注和应用。
下面将详细介绍如何使用无血清培养基培养细胞。
无血清培养基是不含动物血清的培养基，在其中添加一些必要的物质来满足细胞生长和增殖的需求。
通常情况下，无血清培养基通常包含以下组分：1. 基础盐：如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）或RPMI （Roswell Park Memorial Institute）等。
2.营养物质：如氨基酸、糖、维生素等。
3.生长因子：如表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（aFGF）等。
4.补剂：如胰岛素、转铁蛋白、胆红素结合蛋白等。
使用无血清培养基培养细胞的步骤如下：1.准备培养基：根据实验要求选择适当的无血清培养基，加入所需的补剂和生长因子。
注意，无血清培养基通常需预先暖培养15-30分钟，以达到适宜的温度。
2.预处理培养器皿：使用75%乙醇或其他消毒剂彻底清洁培养器皿，确保无细菌污染。
3.细胞接种：根据实验需要，将需要培养的细胞从传代培养中取出，用无血清培养基悬浮细胞，计算细胞浓度并进行稀释，接种到处理过的培养器皿中。
注意，不同细胞株可能对无血清培养基的要求不同，因此建议参考相关文献或生产商的推荐指南。
4.细胞培养：将细胞培养器皿放入恒温培养箱中，并设置适当的温度、湿度和含CO2的气氛（通常为5%CO2）。
培养箱通常保持在37°C，细胞培养时间根据细胞株的特性而定。
5.细胞检测和维持：在细胞培养期间，定期检查细胞形态和数量。
可以使用显微镜观察细胞的生长情况，或者使用细胞计数器定量细胞数量。
如果细胞数量过多，可以进行细胞传代。
无血清培养基的介绍
无血清培养基的介绍无血清培养基是通过化学合成或以类似动物胎牛血清的化学物质替代的方式，在不使用动物血清的情况下提供细胞培养所需的营养和生长因子。
无血清培养基能够模拟传统的细胞培养条件，提供细胞所需的能量、氨基酸、维生素、脂类和激素等物质，从而维持细胞的正常生长和分裂。
1. 基础培养基：无血清培养基通常使用无菌的DMEM（Dullbecco's Modified Eagle's Medium）或RPMI（Roswell Park MemorialInstitute）等基础培养基作为起始材料。
这些培养基中含有大量的氨基酸、碳水化合物和盐类，能够提供细胞所需的能量和基础物质。
2.营养物质：无血清培养基会添加各种营养物质，如氨基酸、葡萄糖、核苷、维生素等。
这些物质能够提供细胞所需的营养物质，促进细胞的正常生长和代谢。
3.细胞生长因子：无血清培养基中还会添加各种细胞生长因子，如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、血小板衍生生长因子等。
这些生长因子能够刺激细胞生长和分裂，促进细胞的增殖和繁殖。
4.补充物质：无血清培养基中还会添加一些补充物质，如胰岛素、转铁蛋白、胆固醇等。
这些物质能够提供细胞所需的特殊物质，满足细胞的特殊需求。
与传统的含血清培养基相比，无血清培养基有以下几个优点：1.可重复性好：无血清培养基是通过化学合成方式制备的，成分和性质都是可控的。
不同批次之间没有差异，能够提供较好的重复性。
2.纯度高：无血清培养基中不含有血清，避免了血清可能存在的污染问题。
同时，无血清培养基还可以通过滤膜等方式过滤除去可能存在的细菌、病毒和真菌等微生物，提高了培养液的纯度。
3.免疫原性低：血清中存在的蛋白质和其他组分可能会引起宿主的免疫反应，导致细胞的受损甚至死亡。
而无血清培养基中不含有血清，因此免疫原性低，能够更好地保护细胞的生长和代谢。
4.成本低：虽然无血清培养基的制备和加工成本较高，但血清的价格较高，使用无血清培养基可以在一定程度上节省成本。
细胞治疗用无血清培养基 - 中信药业
天津美德太平洋科技有限公司
--CIK无血清细胞培养基:
由天津美德太平洋科技与美国斯坦姆再生医学研究开发中心共同合作利用" 人造血浆技术"开发的新一代拥有自主知识产权的美德斯坦姆无血清细胞培 养基系统可有效避免人畜共染疾病问题，同时无血清细胞培养基批间差异小， 培养条件容易保持一致，实验的重复性大为提高。培养基与试剂的成分，都 经过仔细地筛选，并且符合或超越最高规格国家执行标准。成品试剂成分均 达到或超过中国药典的标准。 产品特点： 1.同美国斯坦姆再生医学研究开发中心共同研发，并由其监控产品 质量； 2.开瓶即可使用的完全培养基，即可用于滋养层培养法，也可用于无滋养层 培养法； 3.最新配方，支持胚胎干细胞及诱导胚胎干细胞快速贴壁并大量增殖；不含 异源动物成份可有效避免人畜共染疾病问题 4.与同类产品相比，含有更低浓度的bFGF和TGFβ因子，不干扰细胞代 谢，不刺激细胞分化。
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查
宝日医生物技术 (北京) 有限公司 Takara Biomedical Technology (Beijing) Co., Ltd. GT-T551产品特点 :日本原装进口无血清培养基，适 用于人体淋巴细胞及DC细胞培养。 日本原装进口无血清培养基，已经加入人血白蛋白组 分 支持淋巴细胞的高密度细胞培养 在日本多家医院用 于临床治疗的细胞培养 配制用水符合国家药监局《人体细胞治疗研究和制剂 质量控制指导原则》中注射用水标准
免疫细胞培养的一般操作步骤
单核细胞树突状细胞(DC)培养： 1、准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）。 2、将外周血单个核细胞在铺在培养瓶中，用加入25 mL免疫细胞无血清培养基。 3、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中孵育2〜3小时。 4、弃掉含非贴壁细胞的培养基。 5、用生理盐水洗涤贴壁细胞（主要是CD14 +单核细胞）三次。 6、往免疫细胞无血清培养基添加50至100 ng / mL的重组人IL-4和50 ng / mL的 重组人GM-CSF。细胞密度应介于1~3x105细胞/ mL之间。研究者可视情况 加入灭活的人自体血浆。 7、在37℃，5％CO 2的潮湿培养箱中连续孵育5天。培养3天左右换液。同时添 加IL-4和GM-CSF。 8、 6天之后，细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记（细胞CD1a， CD80，CD86，HLA-DR）。 9、向培养基中添加1μg/ mL的LPS或者50μl/mL的TNF-α诱导的树突状细胞的成 熟。
细胞血清培养基和无血清培养基的配制以及区别
细胞血清培养基和无血清培养基的配制以及区别细胞培养基是如何配制的？培养细胞的完全培养基由基础培养基和添加剂(如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子)组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。
基础培养基绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。
最广泛应用的培养基是迈健基础培养基和迈健培养基营养添加物的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。
而迈健培养基也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸)。
现应用于快速生长的细胞，同培养基含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。
选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。
例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。
F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。
在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。
对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸(若培养基中这两种物质缺乏时)。
但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。
血清细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。
基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。
特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。
胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。
而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。
然而，很多人也将胎牛血清用于神经元培养，也有人用马血清来培养胶质细胞。
用大鼠进行神经元培养的某些研究者喜欢使用同型血清;人类的胎盘血清，亦曾用于神经组织的器官类型的培养，也用在一些特殊培养种类中。
免疫细胞培养流程
免疫细胞培养流程
嘿，咱今儿就来唠唠免疫细胞培养流程这档子事儿！
你想想啊，培养免疫细胞就好比是养一盆特别娇贵的花。
咱得小心翼翼地给它准备好合适的“土壤”，也就是培养基。
这培养基可不能随随便便，得有各种营养成分，就像花儿需要的肥料、水分一样，得齐全了。
然后呢，得有优质的“种子”呀，这就是细胞样本啦。
咱得精挑细选，可不能有啥毛病的。
选好了“种子”，就把它轻轻地放到“土壤”里，让它在那舒舒服服地待着。
接下来，环境也很重要哦！温度啦、湿度啦，都得控制得刚刚好，就跟咱人住的屋子似的，得舒舒服服的才行。
不然这免疫细胞可不高兴了，还怎么茁壮成长呢？
培养的过程中，还得时不时地去看看它们，就跟照顾小朋友似的。
看看长得好不好呀，有没有啥问题呀。
要是发现有点不对劲，那可得赶紧想办法解决，不然不就前功尽弃啦？
培养免疫细胞可不是一天两天的事儿，得有耐心，得慢慢来。
就好像酿酒一样，得经过时间的沉淀，才能出好酒。
咱这免疫细胞也得慢慢培养，才能变得强壮、厉害。
你说，这培养免疫细胞是不是很有意思呀？就像看着一个小生命慢慢长大一样。
咱可得认真对待，不能马虎。
这可是关乎健康的大事呢！要是能把免疫细胞培养好了，说不定能给很多人带来希望呢！
所以啊，大家可别小瞧了这免疫细胞培养流程，这里面的学问大着呢！每一个环节都得用心去做，每一个细节都不能忽视。
只有这样，才能培养出高质量的免疫细胞，为医学研究和治疗做出贡献。
你说是不是这个理儿？。
配置干细胞无血清培养基msc的原则
配制干细胞培养基msc的原则1、选择适宜的营养物质江苏地区干细胞培养基的配置原则，所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源，但由于微生物营养类型复杂，不同微生物对营养物质的需求是不一样的，因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
迈健培养基自养型微生物能从简单的元机物合成自身需要的糖类、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物，因此培养自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物组成。
例如，培养化能自养型的氧化硫硫杆菌(Thiobacillus thiooxdans)的培养基组成见表3.9。
在迈健培养基配制过程中并末专门加入其他碳源物质，而是依靠空气中和溶于水中的CO2为氧化硫硫杆菌提供碳源。
就微生物主要类型而言，有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分，培养它们所需的培养基各不相同。
在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基(或简称普通肉汤培养基)培养细菌，用高氏I号合成培养基培养放线菌，培养酵母菌一般用麦芽汁培养基，培养霉菌则一般用查氏合成培养基。
2、营养物质浓度及配比合适迈健培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用，例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑菌或杀菌作用。
另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。
严格地讲，碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。
例如，在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中，培养基碳氮比为4/l时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少；当培养基碳氮比为3/l 时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。
再如，在抗生素发酵生产过程中，可以通过控制培养基中速效氮(或碳)源与迟效氮(或碳)源之间的比例来控制菌体生长与抗生素的合成协调。
无血清培养基需求
无血清培养基的需求涉及多个方面，包括基质成分、添加剂、成本控制等，共计约800字。
首先，无血清培养基与有血清培养基相比，更加纯净，减少了血清中可能存在的寄生虫、病毒等有害物质。
这不仅有利于细胞的生长，也有助于减少污染。
在研发环节，无血清培养基的研发难度更大，因为血清中含有多种未知的生长因子，需要充分理清这些生长因子的作用机理，而这也为研发带来了一定的挑战。
其次，无血清培养基的配方设计需要考虑多种因素，如细胞类型、生长阶段、培养条件等。
由于无血清培养基没有现成的血清可供使用，因此其贮藏和运输成本也相对较低。
这也意味着生产者需要自行合成血清白蛋白，并确定其质量与稳定性。
在生产环节，由于无血清培养基中不再包含血清等易引起污染的成分，因此对生产环境的要求更为严格。
再者，无血清培养基的配方设计需要经过细胞性能评估、细胞毒性测试、稳定性和长期储存测试等多个环节的验证与优化。
这些步骤有助于确保培养基的质量和有效性，并降低生产风险。
此外，无血清培养基的配方也需要不断更新和优化，以适应不同细胞系和不同实验条件的需求。
最后，无血清培养基的需求也体现在其对生物医药产业的影响上。
无血清培养基的应用有助于提高生物医药产品的质量和稳定性，降低生产成本，并提高生产效率。
这对于推动生物医药产业的发展具有重要意义。
总的来说，无血清培养基的需求是多方面的，包括研发、生产、质量控制和更新优化等环节。
同时，无血清培养基的应用也将在未来生物医药产业的发展中发挥越来越重要的作用。
未来，随着技术的不断进步和需求的不断增长，无血清培养基的应用范围也将不断扩大，为生物医药产业的发展带来更多的机遇和挑战。
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AdvCell®免疫细胞无血清培养基
AdvCell®免疫细胞无血清培养基（BICBM0001）的核心是采用无血清替代物为细胞提供一个营养全面和平衡的环境。
产品适用于人及哺乳类动物免疫细胞的培养,包括T、DC﹑CIK、NK等细胞的研究及应用。
通过添加不同的细胞刺激因子，可高效快速扩增相应的免疫细胞。
★产品号
Cat No : BICSFM0001
★产品组成
名称产品号规格储藏条件运输
AdvCell®免疫细胞基本培养基
BICBM0001 500 ml 2-8℃避光冰袋/常温AdvCell® Immune Cell Base Medium
AdvCell®免疫细胞添加物A
BICS0001A 20 ml -20℃避光干冰AdvCell® Immune Cell Culture Supplement A
AdvCell®免疫细胞添加物B
BICS0001B 1 ml -20℃避光干冰AdvCell® Immune Cell Culture Supplement B
★产品适用范围
适用于人及哺乳类来源的免疫细胞包括T、DC、CIK、NK 细胞的培养。
★培养条件
37℃，5％ CO2 无菌恒温培养。
★操作步骤
以下过程作为常规免疫细胞培养的一般准则，如需在生物反应器或培养袋中高密度培养，应优化条件来确定最佳的操作步骤，BICSFM0001中各组分（BICBM0001、BICS0001A、BICS0001B）在使用前37℃解冻之后混合。
1.准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC），或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序，在37℃的水浴，快速
解冻（〈1 分钟）冻存的外周血单个核细胞。
2.用生理盐水洗涤细胞，根据需要也可加入2-5％热灭活的人自体血浆。
3.用电子（即 Coulter 计数器，VI-细胞）或手动的方法（即血球计数仪）给细胞计数。
4.离心细胞，清除洗涤缓冲液。
5. 加入用AdvCell®免疫细胞基本培养基（BICBM0001）培养，培养初期，用含细胞因子（如IL-2）的培养基重悬 PBMC，CD3+ T 细胞密度保持在大约0.5-1×106/ml，转移细胞到相应的细胞培养容器（培养袋、培养瓶）。
随后可应用各种操作激活 T 细胞，包括添加刺激的抗体或抗原呈递细胞。
无论培养 T 细胞的规模大小，细胞均可被隔离，激活和扩大。
6.在37℃，5％CO2的潮湿培养箱中培养细胞，给予并维持细胞在对数期生长所需要的营养。
为了保持细胞
在对数期的增长，当细胞密度超过1×106/ml 时，需要分离传代，维持细胞密度在0.5-1×106/ml（例如， 2×106个细胞/ml 以上，按1：4 比例0.5×106细胞/ml）。
在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换，建议培养基深度不超过1 到1.2 cm。
【单核细胞树突状细胞﹙DC﹚培养】
1.准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）。
2.将外周血单个核细胞铺在培养瓶中，加入适量 AdvCell®免疫细胞基本培养基（BICBM0001）。
3.在37℃，5% CO2 的恒温培养箱中孵育2-3 小时。
4.弃掉含非贴壁细胞的培养基。
5.用生理盐水洗涤贴壁细胞（主要是CD14+单核细胞）三次。
6.添加重组人IL-4 和重组人GM-CSF 到 AdvCell®免疫细胞基本培养基（BICBM0001），至终浓度分别
为50～100 ng/ml 和50 ng/ml，并以此培养基培养贴壁细胞。
保持细胞度在1～3×105细胞/cm2之间。
研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。
7.在37℃，5% CO2的潮湿培养箱中连续孵育5天，建议培养3天左右已添加了IL-4 和GM-CSF 的 AdvCell®
免疫细胞基本培养基（BICBM0001）换液，换液过程保留贴壁和不贴壁的所有细胞。
8.培养6天之后，细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记（细胞CD1a、CD80、CD86、HLA-DR）。
9.向 AdvCell®免疫细胞基本培养基（BICBM0001）中添加1 ng/ml 的LPS 或者50 ng/ml 的TNF-α诱导的树突状细胞的成熟。
1.将采集的外周血收集到2支离心管中，2000 rpm/min离心5 min，弃上清，将沉淀细胞混合，到加生理
盐水至25 mL，使沉淀细胞充分悬浮。
另取1支离心管，加入淋巴细胞分离液20 mL，用滴管将血细胞悬液缓慢转移至淋巴细胞分离液的表面，使二者之间形成清晰的界面。
2.2000 rpm/min离心20 min 后，从管底到液面分为4层，依次为红细胞和粒细胞层、淋巴细胞分离液层、
外周血单个核细胞层（PBMC层）、血浆层。
用吸管将PBMC层吸出，转移至另一支离心管中。
3.加生理盐水至40 mL，1500 rpm/min离心5 min，结束后弃上清，将沉淀细胞悬浮，加入生理盐水至40 mL
充分混匀后，1500 rpm/min离心5 min。
如此共离心洗涤3次。
4.最后一次离心结束后，弃上清，将沉淀细胞均分为3份，分别转移到3个培养瓶中，各加入40 mL的免
疫细胞基本培养基（BICBM0001）培养，分别记为A1、A2、A3。
5.2h后取出培养的细胞，分别将A1、A2和A3中悬浮的淋巴细胞转移至另3个培养瓶中，分别记为B1、B2、 B3。
3个B瓶中加入IFN-γ，第二天加入IC因子（含有IL-2和抗CD3单抗），诱导培养CIK；3个含有贴壁细胞的A瓶中各加入40 mL 的免疫细胞无血清培养液和H1、Hb因子，诱导培养DC。
6.DC培养过程中，如有发黄，则换液，补加H1和Hb因子。
7.CIK培养过程中，如发现培养液发黄，则换液，换液后补加IL-2。
如发现有细胞团块结为不良絮状，则
用离心管收集后静置沉降5 min左右，待絮状物沉淀后，小心将上清细胞悬液倒回培养瓶中。
8.DC于第7天加入肿瘤抗原和TNF，第8天铲下收集后与相应的CIK混合共培养。
DC瓶弃去。
如果总的细
胞量过于庞大，也可将DC和CIK混合后均分到A和B瓶中。
9.共培养的DC-CIK于第10天做微生物检测。
10.细胞悬浮液的制备：培养结束后，将培养瓶中的细胞悬液用离心管收集，1500 rpm/min，5 min离心洗
涤3次，将25 ml白蛋白加入250 ml盐水中，终浓度1%，加入细胞沉淀，配成细胞悬液。
【NK细胞培养】
1.抽取患者外周血50 ml，将采集的血样转入50 ml 离心管，2000 rpm离心10 min。
2.离心结束后，用移液器吸取上层淡黄色血清于新的 50 ml 离心管，盖好离心管盖于 40℃水浴锅中孵育
30 min。
3.孵育结束后，再 1400 rpm(340 g)离心 10 min,吸取上清于新的离心管保存 4℃备用。
4.用移液管将下层的血细胞与生理盐水 1:1 混匀，按 1：1 将悬液缓慢加入装有淋巴细胞分离液的离心管（注意：不要打乱液面分界保持液面分层明显）。
5.将离心机的升速与降速调至最低，400 g 离心 30 min；离心结束后，用 5 ml 移液管吸取中间白膜层于
新的 50 ml 离心管，并用生理盐水洗涤离心两次，以去除多余血细胞。
6.根据计数结果调整细胞浓度，充分混匀后按 1- 2×106/ml 密度接种于含免疫细胞基本培养基
（BICBM0001）的培养瓶中，并添加相关NK细胞活化及增殖的相关因子，这些相关因子包括anti-CD3、 IL-2、IL-4、IL-5、IL-12、IL-15、retronectin。
其中，anti-CD3、IL-2、IL-4、IL-12为必选因子，浓度根据具体情况调整。
7.当细胞生长到第三天离心换液（340 g离心10 min）更换新鲜培养基及相关细胞因子。
8.以后 4-6 天每天镜检观察，根据细胞悬液颜色添加培养液，每次添加应为总体积的三分之一左右。
9.第七天计数，当细胞量大于 6×107 时，则需加入扩增试剂，如细胞数量在 3-6 ×107时，则长至第八
天在添加 NK 扩增培养试剂，加液时使总细胞浓度保持在 1-1.5 ×106cell/ml。
10.当培养液体积大于 150 ml 或细胞数量大于 1.5 ×108时则需转移至培养袋培养（气泡尽量排空，以
免影响细胞生长）。
11.第 8-11 天每天镜检观察计数，根据细胞悬液颜色加培养液。
第 12-14 天观察需加液时，细胞浓度需
保持在 2 ×106cell/ml。
12.当细胞达到所需剂量时，即可离心收集细胞待用。