一株纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究
纳豆芽孢杆菌饲料添加剂的发酵培养研究
选择碳源分别为葡萄糖、蔗糖、玉米淀粉，同 时同时取葡萄糖和蔗糖作为碳源。显然 ，补充合适
时设 空 白试 验 ，选 择最佳 碳源 。
２ ． 氮源的优化 ．２ ５
豆粕含水量为 ６％，选择氮源分别为牛 肉膏 、 ５ 蛋 白胨 ，（ Ｈ ） ０ ，同时设空 白试验 ，选择最佳 Ｎ Ｓ ２
不仅具 有分解 蛋 白质 、碳 水化 合物 、脂肪 等 大分子
由天 津市 东 丽 区 天大 化 学 试 剂 厂生 产 ；Ｎ Ｃ 由天 ａ１
津市东丽区天大化学试剂厂生产 ；琼脂 由北京奥博 星生物技术有限责任公司生产；蛋 白胨 由北京奥博 星生物技术有限责任公司生产；牛 肉膏 由北京奥博 星生物技术有 限责任公司生产 ；（ Ｈ ） ０ 分析纯 Ｎ ｓ 天津市 申泰化 学试 剂有 限公 司生产 。
研究方向为天然色素研究。 。
取 豆粕 ２ 、３ 、４０ ．、６０ｇ 别 加入 液 ． ． ．、５０ ． 分 ０ ０
体培养基 ，置 ３ ７℃ 恒温培养 ２ ，计数 ，重复 ３ ４ｈ
次。
通讯作者：研究员，Ｅ ｍａ：ｄｈ ｎｚｉ ６ ． ｒ。 － ｉ ｌｚａｇｈ＠１３ ｏ ｌ ｃｎ
收稿 １ ：２ １一 １ ２ ３期 ００Ｏ— Ｏ
用 分 析天 平 准 确 称取 豆粕 ２０ｇ ． ，置 于 烘 箱 内 １５℃ 烘 干至 恒重 ，计算 豆粕含 水量 。 ０
２４ 豆 粕加 量的测 定 ．
基金项 目：黑龙江省科技厅重大攻关项 目 Ｇ ０ Ｂ ０ ） （Ａ７２１ 作者简介 ：汤倩倩（９ ３ ） ，黑龙江绥化人 ，硕士研究生 １８一 ，女
３３ 不 同氮源对 纳豆 茵的影 响 ．
氮源 的选择结 果见 表 ４ 。
２２ 纳豆 茵 活茵数 的检 测 ．
_纳豆芽孢杆菌应用研究进展及开发前景
贮藏过程中 pH、挥发性盐基氮(TVB-N)和细菌总数
研究表明，纳豆芽孢杆菌能提高机体巨噬细胞
增加缓慢，货架期延长了 2~3 d (王东等, 2012)。利用 的活性，不但可以增强机体免疫活动，还能加强吞噬
纳豆芽孢杆菌应用研究进展及开发前景 Application Progress of Bacillus natto and Its Development Prospective 2534
2.1 在生物保鲜方面的应用
纳豆芽孢杆菌具有较强的抗菌作用，其无毒、 高效、适用性广、性能稳定等特点，是一种良好的天 然的生物保鲜剂。纳豆芽孢杆菌抗菌蛋白在新鲜瘦 猪肉和消毒牛奶的保藏中具有显著的防腐效果(钟青 萍和王斌, 2003)。张丽靖等(2008)把纳豆芽孢杆菌 用于豆浆的保鲜，结果表明在豆浆保鲜试验中有显 著的抑菌效果，保温 24 h 的处理样品中活菌数比对 照少 3 个数量级。在低温条件下纳豆芽孢杆菌抗菌 肽 APNT－6 对凡纳滨对虾的保鲜效果研究表明经 0.5 mg/mL 抗菌肽保鲜剂处理后，保鲜剂组在(4±1)℃
装条件下，加入的纳豆芽孢杆菌活性菌粉使绿茶表 面生成一种具有阻导性能的细菌生物被膜(戴瑞卿等, 2015)，该膜可在一定程度上减少茶叶的营养成分的 损失，控制绿茶氧化变质。
高血压, 高血脂)，而且能产生出氨基酸的美味(Choo et al., 2012; Hitosugi et al., 2015)；还可产生维生素类 物质，如维生素 K2 可以与寡糖偶合 (Fujita et al., 1995)，从而增加机体对营养物质的利用率。
著促进其生长，相对增重率可达 58.13%，可作为抗生 素饲料添加剂的一种替代物(石广举等, 2014)。吴德 华等(2009)在断奶仔犬日粮中添加 2%纳豆芽孢杆 菌，研究结果表明其肠道大肠杆菌数量均比饲喂前 极显著降低(p<0.01)，乳酸杆菌数量比饲喂前增加了 18.95% (p<0.01)，促进仔犬生长，调节肠道菌群。纳豆 芽孢杆菌还可以促进犊牛的瘤胃对食物的消化吸 收，从而改善犊牛瘤胃发酵的模式(Sun et al., 2011)，作 用机理可能是纳豆芽孢杆菌进入机体后，增强厌氧菌 在肠道的定植能力，改变了动肠道的微生物区系。
纳豆芽孢杆菌在食品中的研究现状和应用进展
技术研发TECHNOLOGY AND MARKETVol . 24,No . 7,2017纳豆芽孢杆菌在食品中的研究现状和应用进展容艳筠1邓毛程4(1.广东科隆生物科技有限公司，广东江门529100; 4.广东轻工职业技术学院，广东广州510300)摘要：纳豆（Natto )是日本传统大豆发酵食品。
自1987年纳豆中发现强力溶栓激酶——纳豆激酶以来，纳豆引起了全世界的广泛关注。
同时作为制作纳豆的发酵菌，纳豆芽孢杆菌也引起了全世界的广泛关注。
近年以来，我国学者对日本 纳豆做了大量的研究，从纳豆芽孢杆菌纯菌种的分离鉴定，到利用纳豆芽孢杆菌制作纳豆，研究纳豆的生理保健作用及 纳豆芽孢杆菌相关深加工产品的生产等多方面取得了很好的进展。
对纳豆芽孢杆菌的种类、生理功能及其在食品中的 应用的研究现状做了总结并对未来研究发展做了展望。
关键词：纳豆；芽孢杆菌；食品；发酵菌doi ： 10. 3969/j . issn . 1006 - 8554.2017. 07. 0601纳豆芽孢杆菌的起源、种类及特点1.1纳豆芽孢杆菌的起源纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto ),简称纳豆菌。
传统制作纳 豆是采用稻草作为发酵菌剂的来源，将煮熟的黄豆冷却后用稻 草包裹后于温湿度比较高的地方自然发酵1 ~2 d ,等黄豆表面 出现一种白色的黏液状物质即可。
S a w a mu r n 是第一个将纳豆 中筛选出的杆菌命名纳豆杆菌的研究学者。
1934年北海道大 学农学部半询教授首次成功地将分离的纯种纳豆苗（Bacillus natto N o . 1)。
1.2纳豆芽孢杆菌的种类及特点至今已知的主要纯菌种包括:丑3(^111^3111^1正0 3007、丑狂-cillus natto Sawamura 06、Bacillus natto Sawamura IF 0 3339 等。
纳豆芽孢杆菌细胞呈长杆状，属需氧型革兰氏阳性菌，大小约(0.7〜0.8) p m x (2.0〜3.0) p m ，为嗜氧菌，在不利的环 境下，能形成芽孢，芽孢呈柱状或椭圆形，孢囊膨大，有鞭毛，最 适宜的生长温度为37T ，最适生长p H 为7. 0，具有耐酸、耐热 特性的有益菌，在胃酸下4 h 存活率为100%。
纳豆芽孢杆菌的筛选与鉴定
纳豆芽孢杆菌的筛选与鉴定曾艳华，温文达，张杰良，张宁（暨南大学食品科学与工程系，广东 广州 510632）摘要：纳豆是大豆经纳豆芽孢杆菌发酵制成的一种药食兼用的传统食品。
本文以市售纳豆为原料，利用目标纳豆芽孢杆菌所应具有耐热性、显著的蛋白酶活性等生物学特性，筛选得到一株菌株。
根据菌落形态和糖发酵、过氧化氢酶等生理生化试验，初步鉴定其为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。
实验表明，此株菌株具有产γ-聚谷氨酸（γ-PGA）、产纳豆激酶的生理特性，从而证实了该菌株确实为纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）。
关键词：筛选；纳豆芽孢杆菌；γ-聚谷氨酸；纳豆激酶；鉴定中图分类号：Q939；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2009)06-0681-03Screening and Identification of a Bacillus Natto StrainZENG Y an-hua, WEN Wen-da, ZHANG Jie-liang, ZHANG Ning（Department of Food Science and Engineering, Jinan University, Guangzhou 510632, China）Abstract: Isolation of Bacillus natto strains from Japanese natto was conducted. The characteristics of the strains, including thermo-stability and proteinase activities, were investigated and one strain was isolated from Japanese natto and identified as Bacillus subtilis according to its colonial morphology, physiological and biochemistry characteristics. Furthermore, the strain was proved to produced poly(γ-glutamic acid) and nattokinase. Therefore it was identified as Bacillus natto.Key words: screening; Bacillus natto; poly (γ-glutamic acid); nattokinase; identification纳豆（Natto）是大豆经纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）发酵制成的传统食品，属于细菌型豆豉。
纳豆菌制剂作饲料添加剂喂生长肥育猪的试验
纳豆茵制剂作饲料添加剂喂生长肥育猪的试验缪东郭照辉丁祥力缪文超湖南省微生物研究所摘要用纳豆菌制剂作饲料添加剂喂生长肥育猪,试验结果表明,日粮中加纳豆菌制荆不论加量多少,明显优于日粮中加常用添加剂。
日粮中加纳豆茵制剂效果因加量不同则效果不同。
以日粮中加中0.4 % 的纳豆菌制剂效果最好。
与日粮加0.4 % 常用添加荆效果比较,增幅达21 % ,每头每日多长150.8go每增重1奴节省饲料成本费0.32元,多获利0.89元。
其次是日粮中加0.3%的纳豆菌制剂比日粮中加0.4%常用添加剂的增幅为18%,每头每日多长101g,每增重1kg节省饲料成本费0.18元,多获利0.6元。
再次是日粮中加0.2%和0.1%纳豆菌制剂比日粮中加0.4%常用添加剂分别增长l5.2% 和9.2%,每日每头多长84g和50.8g,增重1kg节省饲料成本费0.2元和0.2元。
关键词纳豆菌制剂添加剂肥育猪中图分类号:5816.7 文献标识码:B 文章编号:102—2813(20ac5)I1一(1051—002纳豆菌是一种纳豆菌芽孢杆菌,纳豆菌通过发酵生产的纳豆菌制剂,它含有类似果聚糖的混合物(果糖和R一多聚谷氨酸)维生素B1、蛋白质、脂肪、糖质、钙、铁、菸酸、蛋白酶、维生素和尿酶等多种成分,具有促消化、抗疾病、提高免疫能力多种功能。
加之它具有风味独特的口感,日本人不但把纳豆菌作为主要调味品和保健用品,而且扩大应用到饲料上作为饲料添加剂,促进养殖业的健康发展,获得较好的经济效益。
为了开发更好的、深受养殖户欢迎的、无残留、无公害、效果好的饲料添加剂,促进养殖业的发展和农民致富,我们于2O3年6月1213至9月1213,历时92d用纳豆菌制剂在长沙郊区综合农场养猪场进行了生长肥育猪临床试验,现将试验结果整理如下。
l 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 供试菌制湖南省微生物研究所新产品开发室提供。
1.1.2 供试日粮(猪饲料),综合农场养猪场提供,日粮配比:玉米60 % 、麦麸l8 % 、豆粕23 % 。
纳豆菌活性饲料添加剂对断奶仔猪生长性能和经济效益的影响
纳豆菌活性饲料添加剂对断奶仔猪生长性能和经济效益的影响纳豆菌生物饲料添加剂是以豆粕为原料，经过纳豆菌发酵而得到的安全、天然的生物制品，具有抗菌、调节肠道微生态环境、增强免疫力及促进动物生长等功能，可替代或部分替代饲料中的抗生素。
目前市场上销售的为数不多的微生态制剂大都是厌氧菌，不易存活和保存，而纳豆菌是需氧菌，且能产生抗逆性很强的芽孢，可抵制胃酸的作用，生存和繁殖能力极强，因此纳豆菌生物饲料添加剂不仅安全、多效，而且具有高性能的特点。
我国农业部已批准纳豆菌用于饲料添加剂，但到目前为止，市场上尚未有产业化生产的纳豆菌商品制剂。
浙江大学研究开发的纳豆菌生物饲料添加剂,含有的活菌数达到108cfu/g的农业部标准,有效去除或降低了豆粕中的抗营养因子,分子量小于1000的寡肽、维生素K2、B2、吡啶二羧酸等营养和功能成分比发酵前增加数倍。
动物喂养试验结果表明,添加2kg/t的纳豆菌生物饲料添加剂,能促进益生菌双歧杆菌和乳酸杆菌的增值, 显著促进断奶仔猪的生长。
选择28 日龄体重相近的杜大长断奶仔猪64 头分为4 组,每组2 个重复,每个重复8 头仔猪,对照组饲喂基础饲粮,不添加任何药物或制剂;0.2%和O.4%纳豆菌制剂组分别在基础饲粮中添加0-2%和0.4%纳豆菌制剂;抗生素组在基础饲粮中添加硫酸黏菌素100g 和金霉素150g/kg. 结果表明,0.2%和 0.4%纳豆菌制剂组平均日增重比对照组分别增加 19.8%和 19.1%,料重比分别降低 25.4%和 19-3%,仔猪腹泻率分别降低 4.0 和 7-2 个百分点.经济效益分析发现,0.2%,0.4%纳豆菌制剂组比对照组每头仔猪分别多收入8.2 元和6.5 元.纳豆菌即纳豆芽孢杆菌,是从日本传统食品纳豆中发现并分离出来的,是枯草芽孢杆菌的一个亚种,具有耐酸,耐碱,耐1000C 高温及耐挤压的特性,在酸性胃环境中能保持稳定性,可在动物肠道上段迅速发育转变成具有新陈代谢作用的营养型细胞,起到调节肠道微生态环境的作用.纳豆菌能使动物肠道酸化,有利于铁,钙及维生素D 等的吸收; 而且能明显提高蛋白酶,脂肪酶和淀粉酶的活性回, 可降解植物性饲料中大分子化合物,提高饲料转化率,从而增加营养,促进生长,缩短饲养周期.纳豆菌可以产生有抑菌活性的物质如一吡啶二羧酸,杆菌肽,多黏菌素,具有抑制沙门氏菌,大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,伤寒菌,痢疾菌等致病菌的作用.纳豆菌通过发酵生产的纳豆菌生物饲料添加剂含有维生素B,蛋白质,脂肪,碳水化合物,钙,铁,蛋白酶和脲酶等多种成分,具有促消化,抗疾病,提高免疫能力等多种功能.纳豆菌发酵豆粕得到的生物饲料添加剂具有特殊的香味,维生素B 含量比发酵前增加9 倍,抑菌物质2一吡啶二羧酸比发酵前增加10 倍, 并且易于消化吸收的活性肽也显着增加同. 与目前市场上其它生物饲料添加剂相比,纳豆菌生物饲料添加剂具有很多优异性能:首先纳豆菌是需氧菌,这充分解决了工业生产上的难点,同时也更便于保存;其次,纳豆菌能产生抗逆性很强的芽孢,其生存和繁殖能力强,极易存活,这与市场上销售的生物饲料添加剂中活菌数少或根本不存在活菌又形成明显对照;此外,纳豆菌能抵制胃酸及胆盐的作用,可在肠道中保持较好的活力.因而纳豆菌生物饲料添加剂极具开发价值. 本文通过纳豆菌制剂对断奶仔猪的饲喂效果试验,分析了该生物饲料添加剂对断奶仔猪生长性能的改善作用及其对经济效益的影响.1 材料与方法1.1 试验材料供纳豆菌发酵生物饲料添加剂.1-2 试验选择28日龄体重相近的杜大长仔猪64 头分为4 组,每组2 个重复,每个重复8 头仔猪:对照组饲喂基础饲粮,不添加任何药物或制剂;0.2%和0.4%纳豆菌制剂组分别在基础饲粮中添加0.2%和0.4%纳豆菌制剂; 抗生素组在基础饲粮中添加硫酸黏菌素和金霉素150g.试验期15d,即28~42 日龄.2 结果与分析2.1 纳豆茵制剂对断奶仔猪生长性能的影响由表2 可知,0.2%与0.4%纳豆菌制剂组平均日增重比对照组分别增加19.8%和19.1%,料重比分别降低25.4%和19.3%;抗生素组仔猪日增重效果较差,但料重比仍比对照组降低24.1%. 表2 纳豆菌制剂对断奶仔猪生长性能的影响组别样本数/头始重,kg 末重/kg 日增重倌料重比2.2 纳豆菌制剂对断奶仔猪早期腹泻的影响由表3 可知,与对照组相比,纳豆菌制剂组仔猪的腹泻率都呈现下降趋势,其中0.2%纳豆菌制剂组降低4.0 个百分点,0.4%纳豆菌制剂组效果较明显,降低7.2 个百分点,效果与抗生素组相当. 表3 纳豆菌制剂对断奶仔猪早期腹泻的影响注:腹泻率,%=腹泻猪头铖验猪总头次x100%.2.3 纳豆菌制剂对经济效益的影响 28~42 日龄仔猪的饲喂试验表明,与对照组相比,0.2%和0.4%纳豆菌制剂组头均增加利润分别为8.2 元和6.5 元,经济效益显着,抗生素组头均增加利润3.6 元,见表4. 表4 各组经济效益分析注:纳豆茵按照15 元/kg 计算成本,抗生素组以每吨饲料添加50 元的抗生素计.3. 结论试验结果表明,饲粮中添加纳豆菌制剂能提高仔猪饲料转化率,降低饲料成本,提高生猪的免疫能力,从而增加经济效益,且每吨饲料中添加2kg 纳豆菌活性饲料添加剂效果较好.。
益生菌纳豆芽孢杆菌在动物饲料中的应用研究
高
研， 等： 益 生 菌 纳 豆 芽孢 杆 菌 在 动 物 饲 料 中的 应 用 研 究
一 ｌ一
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益 生 菌 纳 豆 芽 孢 杆 菌
在 动 物 饲 料 中 的 应 用 研 究
摘
要： 纳豆 芽孢杆 菌是 一种 需氧 型益 生 茵 ， 属 于枯 草 芽孢 杆 菌的 一个 亚 种 ， 具 有 良好
的 耐 胃酸 、 耐饲 料 制粒 高温和 耐储 存性 能 ， 进 入 动物 肠道后 能 够迅速 萌发 并 消耗 肠道 内的 游
离氧 营造 厌氧 环境 ， 代谢 产 生 多种 消化 酶 、 纳豆 激酶 和抑 茵物质 。在 动物 饲料 中添加 纳豆 芽 孢杆 菌 。 可 以调 节动物肠 道 功能 紊乱 。 维持 肠道 菌群 平衡 ， 提 高机体免 疫 力 ， 降低 肠 炎和腹 泻 发 生率 ， 促进 动物 生 长 ， 提 高饲料 利 用率 ， 改善 动物 生产性 能 ， 是 一种 应 用价值较 高的微 生物 饲料 添加 剂 。 关键 词 ： 益 生菌 ； 纳豆 芽孢杆 菌 ； 作 用机 理 ； 生产 性 能
纳豆菌活性饲料添加剂对断奶仔猪生长性能和经济效益的影响
物饲料添加剂 极具开发价值 。
本文通 过纳豆 菌制剂 对断奶仔猪 的饲 喂效 果试 验 ，分析 了该生物饲料添加剂对断奶仔猪 生长性 能 的改善作用及其对经济效益 的影响。
１ 材 料 与 方 法 １ 试验 材料 ． １
供试纳豆菌发酵 生物 饲料添加剂 ，由浙江大 学 华家池校 区食 品生物 工程 学院提供 。试验 饲粮和 供 试猪 ，由浙江省农业科学 院畜牧兽 医研究所海宁科 技牧场 可 上段迅速发育转变成具有新陈代谢作用 的营养型细 胞， 到调节 肠道微 生态环 境的作用［ 起 ３ １ 。纳豆菌能使 动物肠道酸化 ， 有利 于铁 、 及维生素 Ｄ等 的吸收 ； 钙 而且能 明显提高蛋 白酶、 脂肪酶 和淀粉 酶 的活 性回 ， 可降解植物性饲料 中大分子化合物 ，提高饲料转化 率， 从而增加营养 、 促进生长 、 缩短饲养周期 。 纳豆菌 可 以产生有抑 菌活性 的物质如 ２６ 吡 啶二羧 酸 、 ，一 杆 菌肽 、 多黏菌素， 具有抑制沙 门氏菌、 大肠杆菌、 金黄 色葡萄球菌 、 伤寒菌 、 痢疾菌等 致病菌 的作用【 ３ 】 。纳 豆菌通过发酵生产的纳豆菌生物饲料添加剂含有维 生素 Ｂ、 白质 、 肪 、 水化 合物 、 、 、 白酶 蛋 脂 碳 钙 铁 蛋 和脲 酶 等 多种 成 分 ， 有 促消 化 、 疾 病 、 高免 具 抗 提 疫能力 等多种 功能【 ４ 】 。纳豆菌 发酵豆粕 得到 的生物 饲 料添 加 剂具有 特 殊 的香味 ，纳豆 菌 活菌数 量 在 １ ｌ８ ｆ ｇ以上 ，维 生素 Ｂ 含 量 比发 酵前 增 加 ９ ｘ Ｏ ｕ ｃ／ 倍、 抑菌物质 ２ ６ 吡 啶二羧酸 比发酵前 增加 １ 、 ，一 ０倍 并且 易于消化吸收的活性肽也显著增加同 。 与 目前市场 上其它 生物饲料添加 剂相 比， 纳豆 菌生物饲料 添加 剂具有很多优异性能 ：首先纳豆菌 是 需氧菌 ， 充分解 决 了工业生产上 的难点 ， 这 同时也 更便 于保存 ；其 次，纳 豆菌能产生抗逆 性很强的芽 孢 ， 生存 和繁殖 能力强 ， 其 极易存活 ， 与市场 上销 这
纳豆芽孢杆菌
纳豆芽孢杆菌
【性状】淡黄色粉末。
【成份及含量】纳豆菌，多种高活性生物酶，活菌总数120-150亿/克。
【适用范围】海参、鲍鱼、鳗鱼、甲鱼、虾、蟹、贝类、猪、鸡等，广泛适应于水产、畜禽养殖。
【产品特性】菌种适应范围广，活力旺盛，繁殖力强，形成优势种群快，生命周期长。
生长温度范围为5-55℃，经消化道排出体外后仍具有很强的活力。
【原理及功效】1、维持动物消化道生态平衡，促进消化吸收，提高生长速度，增强动物细胞免疫反应，增强抗应激力。
2、降低水质污染，改善养殖环境，水生动物的排泄物中含有大量的纳豆菌活菌，可有效消除水体中有机废料，彻底消除氨氮、亚硝酸盐，改良底质，改善水环境。
3、改善动物品质：可减少其它药物在动物体内的残留，提高食用安全度。
【用法用量】主要用于复配水产、畜禽活菌制剂和饲料加工。
【注意事项】1、避免与抗生素配伍使用。
2、置于阴凉干燥处，避免潮湿。
3、开包后应短期内用完。
【保质期】十八个月。
【规格】25kg/袋。
饲料中芽孢杆菌的检测及存在问题的分析
基 础 研 究中国畜牧兽医文摘 2013年 29卷 第1期微生物饲料添加剂又称益生素，是当摄入量足够时能对机体产生有益作用的活性微生物（FAO，WHO，2001），微生物饲料添加剂具有维护动物肠道健康、缓解不良应激、改善畜舍环境、调节机体脂肪代谢和改善畜产品品质的功能。
还有研究者认为，微生物饲料添加剂具有替代抗生素功能的作用（徐鹏等，2012）。
在国外，早在20世纪60年代开始使用益生菌作为人类保健食品和饲料微生物添加剂，20世纪70年代美国、欧洲就有饲料微生物添加剂上市（何月英等，2005）。
1989年美国食品药物管理局（FDA）和美国饲料公定协会（AAFCO）公布了44种“可直接饲喂且通常认为是安全的微生物” 作为微生态制剂的出发菌株。
1999年6月，我国农业部第105号文件发布的《允许使用的饲料添加剂品种目录》，共计12种微生物，其中芽孢杆菌属包括枯草芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌；2003年农业部第318号公告中规定了14种允许使用的微生物，地衣芽孢杆菌列入，但纳豆芽孢杆菌未列入；2006年农业部658号公告规定了16种允许使用的微生物，芽孢杆菌属包括枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌；2008年12月我国农业部1126号公告规定了16种允许使用的微生物，芽孢杆菌属依旧仅有枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌。
本研究通过对饲料样品芽孢杆菌的检测，发现目前的国家标准GB/T 26428- 2010《饲料微生物制剂中枯草芽孢杆菌的检测》中存在的一些问题，其不能有效的区分枯草芽孢杆菌与解淀粉芽孢杆菌，并提出了相应的改进方案。
1 材料与方法1.1 实验材料细菌染色体DNA提取试剂盒、2×Taq PCR Mastermix、DL2000核酸分子量Marker、100bp DNA Ladder购自天根生化科技（北京）有限公司；营养琼脂、LB培养基等购自北京陆桥技术有限责任公司；PCR引物由上海英骏生物技术有限公司合成；DNA测序由北京华大基因研究中心完成；API 50CHB细菌鉴定系统购自生物梅里埃中国有限公司。
纳豆芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌对绵羊生长性能、消化性能和血清生化
DOI :10.15906/11-2975/s.20191907[摘要]为研究纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto ,BN )和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ,BS )对绵羊生长性能、营养物质表观消化率和血清生化指标的影响,试验将体重相近的30只羊分为基础饲粮组(CK 组)、基础饲粮+BN 组(A 组)、基础饲粮+BN+BS 组(B 组),每组10只。
结果表明:(1)与CK 组相比,A 组平均日增重(ADG )提高32.29g (P <0.05),B 组提高68.00g (P <0.01),A 组和B 组之间差异不显著(P >0.05)。
(2)B 组粗蛋白质的表观消化率比CK 组显著提高16.31%(P <0.01),A 组与CK 组之间差异不显著(P >0.05)。
(3)与CK 组相比,A 组血清尿素氮降低23.44%(P >0.05)、B 组显著下降44.69%(P <0.01)。
综上,在本试验条件下,饲粮中添加BN 可显著提高绵羊的ADG ,但复合添加BS 的效果更好。
同时,饲粮中复合添加BN 和BS 可显著提高绵羊对粗蛋白质的表观消化率、降低血清尿素氮含量。
[关键词]纳豆芽孢杆菌;枯草芽孢杆菌;绵羊;生长性能;血清生化指标[中图分类号]S816.7[文献标识码]A[文章编号]1004-3314(2019)19-0034-05纳豆芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌对绵羊生长性能尧消化性能和血清生化指标的影响张俊瑜1,丛少波2,臧长江3,张志军1,王文奇1*(1.新疆畜牧科学院饲料研究所,新疆乌鲁木齐830011;2.乌鲁木齐市动物园,新疆乌鲁木齐830000;3.新疆农业大学动物营养实验室,新疆乌鲁木齐830052)基金项目:新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2016D01B001);国家现代农业肉羊产业技术体系专项(CARS -38);新疆维吾尔自治区重点研发计划项目(2017B01005-2-3-2)*通讯作者纳豆芽孢杆菌(BN )和枯草芽孢杆菌(BS )作为益生菌,能产生高活性的蛋白酶和淀粉酶(李雅丽等,2011),对生长环境的适应性强(吉美萍等,2016;杨锋等,2011),可明显改善动物生长性能(程连平等,2018;赵会利等,2013),并且可以抑制动物体内的有害细菌等(吉美萍等,2016;Chen 等,2013)。
一株枯草芽孢杆菌的饲料学特性研究
一株枯草芽孢杆菌的饲料学特性研究巨向红;叶小妹;张金燕;徐中文;孙建华;雍艳红【摘要】枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)具有调节肠道微生态平衡、提高饲料转化率和提高动物免疫力等功能,是微生物饲料添加剂的常用菌种.但由于对选育、传代和保藏等技术的不重视,导致其性能严重退化,选择抗逆性强和发酵效果佳的菌株用于动物饲料添加具有重要意义.该研究观察了一株枯草芽孢杆菌的形态特征,测定了其生长曲线、抗逆性及所发酵饲料的pH值和几种消化酶的活力变化,以为其推广应用提供依据.结果表明:该株枯草芽孢杆菌具有本种所特有的形态特征;在37℃、180 r/min条件下培养,无生长延滞期,生长对数期为0～6 h,生长稳定期为6～10 h,生长衰亡期为10 h以后;分别在37℃、70℃、80℃、90℃和100℃的水浴中处理10 min后,其存活率差异不显著(P＞0.05);在1％～5％的胆盐中生长存活率均大于100％;在pH值为2的酸性环境中培养60 min,存活率高达58.8％(P≤0.05);发酵饲料的pH值随发酵时间的延长而明显降低,而蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活力显著升高(P≤0.05).表明该株枯草芽孢杆菌的饲料学特性优良,是理想的有益微生物饲料添加剂.【期刊名称】《中国草食动物科学》【年(卷),期】2015(035)004【总页数】5页(P32-35,39)【关键词】枯草芽孢杆菌;生长曲线;抗逆性;酶活力【作者】巨向红;叶小妹;张金燕;徐中文;孙建华;雍艳红【作者单位】广东海洋大学动物医学系,湛江524088;广东海洋大学动物医学系,湛江524088;广东绿百多生物科技有限公司;广东绿百多生物科技有限公司;广东绿百多生物科技有限公司;广东海洋大学动物医学系,湛江524088【正文语种】中文【中图分类】S816畜牧养殖过程对抗生素的不规范使用，导致了病原微生物耐药性增强、药物残留和食品安全等诸多问题，并最终威胁到人类健康［1］。
纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究
纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究董尚智;陈远凤;黄燕华;冯定远【期刊名称】《动物营养学报》【年(卷),期】2009(021)003【摘要】本试验旨在从饲料应用学的角度对纳豆芽孢杆菌的各项特性进行测试,并总结出一套可行的试验方法和结果判断标准.试验通过对纳豆芽孢杆菌的形态和生化培养性质观察,不同温度、酸度、胆盐、人工胃液处理对纳豆芽孢杆菌存活率的影响,常用药物添加剂、微量元素对纳豆芽孢杆菌生长的影响及纳豆芽孢杆菌对几种致病菌和抗营养因子的影响进行了研究.结果表明,纳豆芽孢杆菌对高温、酸性、胆盐和人工胃液有一定的耐受能力,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都有较强的抑制作用,并能分解饲料中抗营养因子如半纤维素、植酸盐和果胶.结果提示,纳豆芽孢杆菌是优良的饲用微生物添加剂.【总页数】8页(P371-378)【作者】董尚智;陈远凤;黄燕华;冯定远【作者单位】珠海市农业科学研究中心,珠海,519100;珠海市农业科学研究中心,珠海,519100;珠海市农业科学研究中心,珠海,519100;华南农业大学动物科学院,广州,510642【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.一株纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究 [J], 巨向红;谢晓杭;张金燕;徐中文;雍艳红2.青贮饲料中优良乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性研究 [J], 何轶群;雷赵民;吴润;万学瑞;刁小龙;艾文娜3.饲料型四倍体刺槐生物学特性及其生理生化研究进展 [J], 杨玉红4.一株枯草芽孢杆菌的饲料学特性研究 [J], 巨向红;叶小妹;张金燕;徐中文;孙建华;雍艳红5.饲料中霉菌毒素生物学特性及其检测防治的研究进展 [J], 朱润芝;赖林泉;李京敬;张海彬;Char les Han;Andrew H,Davis;俞雁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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第35卷 第4期 广东海洋大学学报 V ol.35 No.42015年8月 Journal of Guangdong Ocean University Aug. 2015收稿日期：2015-05-19基金项目：湛江市科技计划项目（2012C0201）第一作者：巨向红（1977—），男，副教授，博士，主要从事动物应激性致病机理研究。
通信作者：雍艳红（1977—），女，讲师，博士，主要从事应激性致病机理研究。
一株纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究巨向红1，谢晓杭1，张金燕2，徐中文2，雍艳红1（1. 广东海洋大学农学院，广东 湛江 524088；2. 广东绿百多生物科技有限公司，广东 湛江 524088）摘 要：测定一株纳豆芽孢杆菌(LBD-3)的耐高温、耐酸、耐胆盐和耐人工胃液能力，以及该菌株发酵饲料的pH 、淀粉酶、蛋白酶和纤维酶酶活性。
结果表明：该菌株对100℃下10 min 处理、pH 为2水溶液和人工胃液有较强的耐受能力，但在1 ~ 5 g/L 胆盐环境中存活率低；经其发酵的饲料pH 显著降低（P ＜0.05），淀粉酶活性在第7和第15天分别增加6%和20%，而蛋白酶活性则分别增加68%和370%，纤维素酶活性分别提高38%和200%。
纳豆芽孢杆菌是较为理想的饲料添加剂用有益微生物，耐受胆盐应作为育种方向。
关键词：纳豆芽孢杆菌；微生态制剂；饲料学特性；酶活性中图分类号：S476 文献标志码：A 文章编号：1673-9159（2015）04-0087-06The feed Characteristics of a Strain of Bacillus nattoJU Xiang-hong 1, XIE Xiao-hang 1, ZHANG Jin-yan 1, XU Zhong-wen 2, YONG Yan-hong 1 (1. Agricultural College,Guangdong Ocean University , Zhanjiang 524088, China ； 2.Guangdong Lvbaiduo Biological Technology Co ., Zhanjiang 524088, China )Abstract ：Choosing a strain of Bacillus natto that has a strong resistance and good effect of feed fermentation and is used in animal feed additives is more and more important. The present study is conducted to detect the capacity of resistance to high temperature, acid bile and artificial gastric juice of a strain of Bacillus natto which are purchased from a biotechnological company. Meanwhile, the pH values, activity of amylase, protease and cellulase enzyme of feed fermented by this species are also observed at 7th to 15th days after fermentation began. The results showed that this strain of Bacillus natto has a strong tolerance to the environment of 100, pH2 and artificial gastric juice. ℃However, the resistant ability is poor to 0.1% to 0.5% bile salt environment. The pH value of feed that are fermented by the bacterial is decreased, but the amylase activity increased to 6% at 7th days and 20% at 15th day, the protease activity increased to 68% at 7th day and 3.7 fold at 15th day compared to control (P ＜0.05), the cellulase activity increased to 38% at 7th days , and around double fold at 15th days compared to control. Conclusion: This strain of Bacillus natto is an outstanding probiotics for feed additives.Key words ：Bacillus natto ；probiotics ；feed characteristics ；enzyme activity养殖过程中抗生素的过量使用严重危害动物性食品安全和畜牧业的健康发展[1]，探索替代或减少抗生素使用的生产技术对推动畜牧业可持续发展具有重要意义[2]。
益生菌能通过自身的代谢活广东海洋大学学报第35卷88动，分解或转化饲料中的抗营养因子，产生易于消化吸收的营养成分[3]。
经其发酵的饲料不仅具有维持动物肠道菌群平衡、增强机体免疫力、减少肠道病原微生物和净化畜舍环境的作用，还具有特别的香味，可刺激食欲和提高采食量[4]，近年得到广泛应用。
美国已批准了40多种微生物用于饲料微生物添加剂生产，我国农业部也于1999年公布了允许使用的饲料级微生物添加剂和酶制剂的微生物菌种名单，主要包括干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、粪链球菌（Enterococcus faecium）和啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）等[5]。
纳豆芽孢杆菌不仅对高温、酸性、胆盐和胃液有较强的耐受能力，还对常见的致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有较强的抑制作用，是理想的有益微生物饲料添加剂。
但随着菌株传代次数的增多及选育工作的不重视，其抗逆性能下降，产酶能力降低，优良性能不断退化 [6]。
有鉴于此，本研究测定一株纳豆芽孢杆菌的生长特性及对高温、酸度、胆盐和人工胃液的耐受能力，并观察经其发酵的饲料的pH、淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶活性的变化，为其应用推广和进一步选育提供基础。
1材料与方法1.1实验材料1.1.1实验菌种纳豆芽孢杆菌LBD-3菌株由广东绿百多生物科技有限公司提供。
1.1.2主要试剂营养琼脂培养基和营养肉汤培养基购自北京陆桥技术有限公司；Folin Ciocalteu 试剂盒购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；革兰氏染色试剂盒为广东微生物科技有限公司产品；人工胃液、胆盐均参照文献制备，所用试剂为国产分析纯。
发酵所用饲料为正大102小鸡料。
1.1.3主要仪器设备 BC/BD-27生化恒温培养箱购于上海博迅实业有限公司医疗设备厂，SPX-250B-Z超净工作台购于上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产，SW-CJ-2F震荡培养箱购于中国哈尔滨市东联电子技术开发有限公司，HHS-11-4可见光分光光度计购于上海精科科技有限公司，密封型手提式粉碎机购于广州市旭朗机械设备有限公司。
1.2实验方法1.2.1菌体的培养及形态观察在斜面牛肉膏蛋白胨培养基中接入一环纳豆芽孢杆菌，于37℃震荡培养24 h后置于4℃冰箱保存，每月重新保种一次，并进行革兰氏染色、瑞士染色及镜检。
1.2.2生长曲线测定按1%（φ）的接种量加入纳豆芽孢杆菌菌液，混合均匀后，置于37℃震荡培养箱恒温培养，于接种后的1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20 h各取培养液3 mL，分光光度计测定OD 值，记录结果并以时间为横坐标，D420nm为纵坐标绘制生长曲线。
1.2.3抗逆性能观察1.2.3.1耐高温性能测定按1% （φ）的接种量将菌种接种于营养肉汤培养基，分别置于37℃、60℃、70℃、80℃、90℃和100℃恒温水浴中，10 min后取出，置于37 ℃震荡培养箱中恒温培养。
在培养的第12 h、18 h 和24 h，于420 nm波长下测定吸光度。
每个温度梯度设3个重复，实验重复3次。
1.2.3.2耐酸性能测定以pH 为7.0 的PBS缓冲液为基础液配制营养肉汤培养基，用稀盐酸将pH调节为 2.0、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0和7.0，在9 mL的各培养基加入菌液1 mL，置于37℃震荡培养箱培养60 min，于420 nm波长下测定吸光度。
每组3个重复，实验重复3次。
1.2.3.3 耐胆盐性能测定在胆盐质量浓度分别为0、0.001、0.002、0.003、0.004和0.005 g/mL 的液体营养肉汤培养基中，按5% （φ）接种量接种纳豆芽孢杆菌，置于37℃震荡培养箱恒温培养18 h，于420 nm波长下测定吸光度。
每组设3个重复，实验重复3次。
1.2.3.4耐人工胃液能力测定将人工胃液（处理组）、无菌生理盐水（对照组）与纳豆芽孢杆菌菌液按体积比9∶1稀释混匀，于37℃震荡培养箱恒温培养，在培养的第15 min、30 min、60 min、90 min 和120 min于420 nm波长下测定吸光度。
每组设3个重复，实验重复3次。
1.2.4 发酵实验1.2.4.1菌液的制备将10 mL含有0.1% （φ）吐温80的无菌水分别倒入纳豆芽孢杆菌斜面培养基上，用接种环将斜面上的菌种和孢子刮下，置入盛有90 mL无菌水的三角瓶中，用磁力搅拌器将巨向红等：一株纳豆芽孢杆菌的饲料学特性研究89其搅拌均匀，适当稀释，使密度达到 1 × 107 cfu/mL 。
1.2.4.2 菌液的接种 饲料经粉碎后，0.250 mm 筛孔过筛，称取60 g 饲料装入100 mL 三角瓶中，高压灭菌25 min 。
冷却后将饲料粉打散，接入1×107cfu 的发酵种子液，37℃恒温培养箱培养。