细胞工程复习题

第二章

2、简要说明MS培养基的基本组成。

1）大量元素母液配制

MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸镁（MgSO4•7H2O）和氯化钾（CaCl2,CaCl2•2H2O）五种化合物。

2）微量元素母液配制

MS培养基的微量元素由7种化合物（除Fe外）组成MnSO4•4H2O、ZnSO4•7H2O、H3BO3、KI、NaMoO4•2H2O、CuSO4•5H2O、CoCl2•6H2O。

3）铁盐母液配制

MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4•4H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2•EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。

4）有机母液的配制

MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸吡哆素。

5）激素母液配制

MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素

6、初代培养时，接种的一般程序是什么？

1）在接种前打开超净工作台紫外灯照射20~30min，关闭紫外灯后，打开超净工作台的风机10min以上，开始无菌操作。

2）接种人员先洗净，在缓冲室内换好经过消毒的工作服，带上口罩，并换上拖鞋等。

3）上超净工作台后，用酒精棉球认真擦拭双手，特别是指甲处，然后擦拭工作台面及四周，装有培养基的培养器皿和盛外植体的烧杯也要用酒精擦拭消毒后，再放进工作台。

4）先用酒精棉球擦拭接种工具，然后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌或放在接种器械灭菌器中灭菌，灭菌后放在器械架上使其自然冷却。

5）把植物材料放在75%乙醇中浸泡约30s，再用0.1%的升汞中浸泡5~10min，浸泡时刻进行搅动，使植物材料与消毒剂有良好的接触，然后用无菌水冲洗3~5次。

6）接种时培养瓶瓶口要在酒精灯火焰附近，并在接种前后灼烧瓶口。

7）接种结束后，清理和关闭超净工作台。

第三章

1.基本概念

细胞的全能性：是指细胞具有发育成完整个体的遗传潜能。

细胞分化：是指发育起始状态的合子沿个体发育方向不断分化出形态结构、生理功能不同的细胞、组织、器官而最终形成完整植株的过程。即由于细胞的分工而导致其结构和功能改变或发育方式改变的过程。

去分化：已有特定结构和功能的植物组织，在一定的条件下，其细胞被诱导改变原有的发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程叫脱分化或去分化。体细胞胚： (somatic embry)又称胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。

人工种子：（artificial seeds）又称合成种子（synthetic seeds）或体细胞种子（somatic seeds）。就是将离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。

7、离体培养条件下，茎、芽和根的再生方式有几种？

答:在组织培养中，通过茎芽和根而再生植株的方式大致有3种：

1.先芽后根：多数植物；

2.先根后芽：颠茄；

3.在不同部位分别形成芽和根，最后通过微管组织联系形成再生植株。

9、何谓胚状体？胚状体与合子胚有何异同？

答：胚状体离体培养条件下，没有经过受精过程，但是经过了胚胎发育过程所形成的胚状类似物，此现象无论在体细胞培养还是生殖细胞培养中均可以看到，因而统称为体细胞胚或胚状体。

异同细胞胚具有两极性，而器官发生是单极的。细胞胚维管组织分布是独立的Y 字形结构，形成的再生植株遗传性比器官发生的稳定。与合子胚相比体细胞胚子叶不规范，胚小、含水量高、对脱水敏感、没有休眠。

15、控制胚性细胞同步化的方法有哪些？

答：①抑制剂法促进细胞同步分裂；②低温处理促进细胞同步分裂；③渗透压控制同步化法；

④同步胚的分段收集筛选法；⑤通气法。

16、人工种子繁殖体如何处理？人工种子的制备要点有哪些？

答：繁殖体的处理：①体细胞胚形成后，需要在无激素培养基上经过一定阶段的后熟培养，然后进行脱水干燥，再将畸形胚选出后才能进行包埋。在脱水之前用ABA处理体细胞胚强迫其进入休眠，更有利于长期储存。②微型变态器官繁殖体不能过度脱水，但亦需要适当干燥，除去表面多余的水分，同时要进行表面消毒处理以防止包被后的感染。为了延长储存时间，需根据使用季节进行适当的休眠处理。③以微芽为繁殖体时，不能进行脱水处理，但必需筛选生长健壮、组织充实的芽进行包埋。

第四章

1.名词概念：

微繁殖：是指在离体培养条件下，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行无菌培养，经过不断地切割和重复培养，使其增殖并再生形成完整植株，在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。

原球茎：兰科植物的种子在萌发初期并不出现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮的一端破裂，膨大的胚呈小圆锥状，称作原球茎。

4、离体无性繁殖一般可分为哪几个阶段？

简述其操作的一般程序。离体无性繁殖一般可分为5个阶段：

1、植株的准备：供体植株应生长旺盛、健壮、不病虫害，并尽可能生长在干净的环境中。

2、无菌培养物的建立：获得无菌材料并诱导外植体生长和发育。包括从供体植株上采取外植体进行消毒、接种及启动外植体生长等程序。

3、培养物的增殖：通过反复培养使第一阶段获得的数量有限的嫩枝、芽苗、胚状体或原球茎等培养物的总量增加。

4、生根培养：将增殖阶段形成的无根芽苗转移到生根培养基上诱导产生不定根，获得健壮的具有根、芽、茎的完整小植株。

5、试管苗的移栽及鉴定：移栽是将具根试管苗转移到土壤中的过程，是试管苗从离体培养逐步适应温室或田间生长环境的过程

6 、离体繁殖中常见得技术问题有哪些? 如何克服或防止其发生？

污染问题和褐变、玻璃化

污染问题预防措施：

１）通风２）去湿３）光照４）防霉5）改进外植体消毒方法或使用抗生素

褐变防治措施：