蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备
蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备
蟾蜍的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验报告实验名称蛙的坐骨神经—腓肠肌标本的制备及神经干的性质实验目的要求学习并掌握坐骨神经—腓肠肌标本以及腓肠肌标本制备的方法；学习生理学实验基本的组织分离技术；观察刺激强度，刺激频率与肌肉收缩反应的关系；掌握引导神经干复合动作电位和测定其传导速度的基本原理和方法。
实验材料，仪器，试剂蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、玻璃分针等）、烧杯、培养皿、纱布、棉线、粗剪刀、蛙板、污物缸、滴管、生理信号采集系统、张力传感器、铁架台、计算机、任氏液等。
实验原理两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。
因此在生理实验中常用蟾蜍的神经肌肉标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激的规律以及骨骼肌收缩的特点等。
任氏液是—种比较接近两栖动物内环境的液体，可以用来延长青蛙心脏在体外跳动时间、保持两栖类其他离体组织器官生理活性等。
腓肠肌由许多的纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。
当刺激强度过小时，不应期肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。
而能引起肌肉发生收缩的最小刺激强度，为阈刺激，但全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。
这时，即使再加大刺激强度，肌肉的收缩强度也不会随之而增大。
可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激。
肌肉组织对于一个阈上强度的刺激，发生一次迅速地收缩反应，即单收缩。
单收缩的过程分为三个时期，潜伏期、收缩期、舒张期。
刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。
在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。
若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。
坐骨神经-腓肠肌标本的制备
8、检验标本
01.
用经任氏液蘸湿的锌铜弓的两极，接触 神经，观察腓肠肌是否收缩！
02.
此标本用于神经干兴奋传导、神经-肌肉 接点的传递以及骨骼肌收缩等实验研究
பைடு நூலகம்意：
1. 保护标本——神经和肌肉：不用赃的皮肤碰标 本，不用自来水冲洗标本，不用金属接触神经以 及损伤肌肉。
2. 注意标本的完整，尤其注意保存股骨头一定的长 度
202X
坐骨神经——腓 肠肌标本的制备
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• • 方法
目的要求： 学习蛙类动物毁髓的方法 学习掌握蛙类腓肠肌及坐骨神经——腓肠肌标本的制备
步骤：
双毁髓
剥离后肢标本
分离两后肢
分离坐骨神经
分离股骨头
游离腓肠肌
检验标本
完整的神经肌肉标本应包括以下几个部分
1、首先准备手术所需的用品
动物瘫软如泥。
3、剥离后肢标本
动物腹面向上放置于蜡盘，手术镊轻轻提 起耻骨联合上方，剪开皮肤，再剪开体壁 肌肉，然后轻轻提起内脏，自耻骨部剪断 （勿伤脊神经），把内脏拨向头端，剪断 脊柱。然后一手捏住脊柱后端，另一手向 后撕剥皮肤，并除去头端肢体和内脏
4、分离两后肢
把去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上， 于耻骨联合处按压刀刃，切开耻骨联合。 然后用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉， 并纵向剪开脊柱。
5、分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，趾端向外 侧翻转，使其足底向上，用固定针将标本 固定在玻璃板下面的蛙板上。用玻璃分针 分离坐骨神经。股部的坐骨神经在股二头 肌与半膜肌之间。
6、分离股骨头或胫腓骨头
动物小，留股骨头 1cm
动物大，留胫腓骨 头1cm
7、游离腓肠肌
蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备缝匠肌神经标本制备
实验六蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备坐骨神经干标本的制备、缝匠肌神经标本制备一、实验目的1、急性动物实验（与慢性动物实验的区别）2、离体标本实验（与在体标本实验的区别）3、掌握锌铜弓导致生物电产生的原理4、掌握离体标本的制备及手术训练5、掌握剪刀的技用和双毁髓的意义二、实验原理1、急性动物实验与慢性动物实验，在体实验与离体实验急性动物实验可分为离体和在体实验两种方法。
离体实验：是从活着的或刚处死的动物身上取出所需要的器官、组织、细胞或细胞中的某些成分。
置于一个能保持其正常功能活动的人工环境中，观察某些人为的干预因素对其功能活动的影响。
例如，对离体蛙心或动物血管条进行灌流，可用于研究某些生物活性物质或药物对心肌或血管平滑肌收缩力的影响；应用膜片钳技术可研究细胞小片膜上单个离子通道的电流特性。
在体实验：是在动物麻醉条件下，手术暴露某些所需研究的部位，观察和记录某些生理功能在人为干预条件下的变化。
例如，以动脉插管记录动物血压，可用于观察某些神经或体液因素对血压的影响；将玻璃微电极插入脑内某些部位进行细胞外或细胞内记录，观察神经元在接受某些刺激时放电活动的变化，以了解这些神经元的生理功能。
急性动物实验的优点是实验条件比较简单，条件较易控制，便于进行直接的观察和细致的分析；离体实验则更能深入到细胞和分子水平，有助于揭示生命现象中最为本质的基本规律。
但急性动物实验的结果可能与生理条件下完整机体的功能活动有所不同，尤其是离体实验的结果，此时被研究的对象，如器官、组织、细胞或细胞中的某些成分已经脱离整体，它们所处的环境已发生很大的改变，实验结果与在整体中的真实情况相比，可能会有很大的差异。
慢性动物实验：慢性动物实验以完整、清醒的动物为研究对象，且尽可能保持外界环境接近于自然，以便能在较长时间内观察和记录某些生理功能的改变。
实验前一般需对动物作某些预处理，待动物康复后再进行观察。
例如，研究唾液的分泌调节时，可预先将唾液腺导管开口移至颊部体表，观察时就能方便地从体表收集到唾液腺分泌的纯净唾液；研究某种内分泌功能时，常先摘除动物某个内分泌腺，以便观察这种内分泌激素缺乏时以及人为替代后的生理功能改变，用以了解这种内分泌激素的生理作用。
生理学实验 坐骨神神经腓肠肌标本制备
实验一 坐骨神经腓肠肌标本制备【实验目的】掌握坐骨神经腓肠肌标本的制备技术，为以后有关实验打下基础。
【实验原理】两栖类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似， 而其离体组织所需的生活条件 比较简单，易于建立、控制和掌握。
因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观 察兴奋与兴奋性的一些规律以及骨骼肌的收缩特点等。
所以坐骨神经腓肠肌标本的制备是生 理实验的一项基本操作技术。
【实验对象】蟾蜍或蛙。
【实验材料】两栖类手术器械 1套(粗剪刀、组织剪、眼科剪、组织镊、眼科镊、金属探针、玻璃 分针、蛙板)、手术线、蛙尸缸、滴管、平皿、锌铜弓、任氏液。
【实验步骤】1． 破坏脑和脊髓取蟾蜍 1 只，用自来水冲洗干净。
左手握住蟾蜍，用拇指按压背部，食指按压头部 前端使其头部前俯，右手持金属探针在头前缘沿正中线向尾端触划，所触划到的头部后 端的凹陷处，即为枕骨大孔所在部位。
在此处将金属探针垂直刺入皮肤，有突破感后再 将金属探针折向前经枕骨大孔刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；然后将金属探针回抽至 枕骨大孔处，转向后刺入脊椎管，反复提插捣毁脊髓。
此时如蟾蜍的四肢松软，呼吸运 动消失，表示脑和脊髓已完全破坏，否则应按上法再行捣毁。
2． 剪除躯干上部及内脏如图 1－1 所示，在骶髂关节位置用左手将蟾蜍提起，在骶髂关节水平以上 0.5～l 厘米处用粗剪刀剪断脊柱，然后将粗剪刀尖向下深入体腔沿躯干两侧剪开皮肤，使蟾蜍 头、上肢与内脏自然下垂，将其一并剪除弃去，仅留后肢、骶骨、脊柱及紧贴于脊柱两 侧的坐骨神经。
在整个剪除过程中注意勿损伤神经。
3． 剥皮左手用组织镊夹紧或用手直接捏住脊柱断端(注意：不要夹住或接触神经)，右手捏，将标本放在盛有任氏液 住其上的皮肤边缘，用力向下剥掉全部后肢皮肤（见图 1－2）的平皿中。
将手及用过的粗剪刀、组织镊等全部手术器械洗净，再进行下述步骤。
4． 分离两腿用镊子从背位夹住脊柱将标本提起，剪去向上突出的骶骨(注意勿损伤坐骨神经)，然后沿正中线用粗剪刀将脊柱分为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，然后将分离的两条腿浸于盛有任氏液的平皿中备用。
实验三 坐骨神经腓肠肌标本制备
三、动物与器材
蟾蜍、常用手术器械、蜡盘、蛙板、玻 璃针、固定针、锌铜弓或电刺激器、培 养皿、滴管、纱布、粗棉线、任氏液
四、方法与步骤
［方法与步骤］ 1、双毁髓的方法 2、剥制后肢标本 3、分离两后肢 4、分离坐骨神经 5、分离股骨头 6、游离腓肠肌 7、检验标本
毁髓1 坐骨神经——腓肠肌标本2 坐骨神经——腓肠肌标本3 坐骨神经——腓肠肌标本4 坐骨神经——腓肠肌标本5
实验三坐骨神经—腓肠机标本的制 备）
一、目的要求
1.学习破坏蟾蜍脑和脊髓的方法. 2.熟悉并掌握蟾坐骨神经－腓肠肌标 本的制备
二、基本原理
腓肠肌由许多肌纤维组成，当刺激支配腓肠肌 的坐骨神经时，不同的刺激强度会引起肌肉的 不同反应，当使用阈下刺激时，不引起肌肉发 生收缩反应，而阈刺激可引起少数肌纤维发生 反应，顶刺激引起所有肌纤维发生反应，一次 单收缩可分为潜伏期，缩短期和舒张期三个时 期。当同等强度的连续阈上刺激作用时，出现 多个收缩反应的融合，称为强直收缩。
五、注意事项
1.标本不能用自来水冲洗，也不能用金 属器械碰压 2.连续刺激时间不宜过长 3.标本固定不要过度牵拉
六、作业和思考
1．如何保持标本在实验中机能正常 2．何为标本的最适刺激强度 3．实验结果说明骨骼肌有哪些生理特性 4．分析讨论肌肉发生收缩总和的条件和 机制 5．分析讨论不完全强直收缩和完全强直 收缩的条件和机制
蛙或蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备
1. 破坏脑脊髓 取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使 头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔（图 1-1），左右搅动捣毁脑组织，然 后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管 时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四 肢松软，呼吸消失。
5. 游离坐骨神经和剪断股骨 认清坐骨神经沟和腓肠肌的部位（图），用剪刀剪断梨状肌 及其周围的结缔组织，左手提着神经上的细线，右手持剪刀或玻璃分针沿坐骨神经沟细 心剥离，直至将坐骨神经剥离到腘窝。将游离干净的坐骨神经放在下腿上，沿膝关节的 周围将大腿的所有肌腱剪断，并用剪刀刮净股骨下段附着的肌肉，在股骨上三分之一处 剪去上段股骨及所附的肌肉，这样制成的称为坐骨神经下腿标本（图 1-4）。
图 1-1 破坏蟾蜍脑脊髓
图 1-2 剪除躯干和内脏
图 1-3 剥除后肢皮肤
4. 分离两腿 用玻璃分针沿脊柱两侧游离出两条坐骨神经，并于近脊柱处各扎一细线，然 后在扎线与脊柱之间剪断神经。提着神经上的细线，将两条坐骨神经分别置于两条大腿 上，左手持脊柱，将骶骨翘起，将下位脊柱全部剪除。捏着两侧骼骨向反方向分离，使 耻骨联合脱臼后，沿耻骨联合正中将两下肢剪开，将一条腿浸于任氏液中备用，另一条 置于浸有任氏液的玻璃板上。
6. 游离腓肠肌 在坐骨神经下腿标本的基础上，用剪刀将跟腱的下端剪断，在跟腱与肌肉 交界处扎一条细线，左手提线，右手用剪刀游离腓肠肌，直到膝关节。最后用粗剪刀在 膝关节下将小腿剪去，留下的即为坐骨神经腓肠肌标本（图 1-5）。做好的标肌立即收缩，表示标本的兴奋性良好，然后将标本 放入任氏液中，待其兴奋性稳定后再进行实验。
实验 1 蛙或蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备
生物实验报告坐骨神经腓肠肌标本制备
生物实验报告姓名：班级：日期：同组者：实验序号：实验题目：坐骨神经-腓肠肌标本的制备实验目的：1.学习蛙类动物双毁髓的实验方法。
2．学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。
实验原理：两栖类动物的离体组织所需要的生活条件比较简单，易于控制和掌握。
因此在生理实验中常用蟾蜍的坐骨神经——腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程、刺激强度、刺激频率与肌肉收缩反应的一些规律以及骨骼肌的收缩特性等。
实验对象：蟾蜍实验器材：常规手术器械（粗剪刀、手术剪、眼科剪、手术镊、眼科镊）蛙板、蛙钉、探针、锌铜弓、玻璃分针、培养皿、任氏液、滴管、手术线等。
实验方法及步骤：1、破坏脑脊髓部位枕骨大孔。
如果蟾蜍四肢松软，呼吸消失，表示脑脊髓已完全破坏，否则按上述方法再进行捣毁。
2、剪去躯干上部及内脏在骶髂关节前1 cm处用金冠剪（粗剪）剪断脊柱（可在下肢前端）。
沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。
在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。
注意切勿触及或损伤坐骨神经。
3、剥后肢皮肤左手持镊子夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。
将标本放于盛有任氏液的培养皿内，将手和手术器械洗净。
4、分离两腿用金冠剪剪去尾骨杆（骶骨），沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离（切勿伤及神经），将两腿浸于任氏液中。
5、游离坐骨神经取一后肢，腹面向上（背位），固定于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐一剪去神经分支至股端。
用金冠剪剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。
将标本改为背面向上（腹位）固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。
再沿坐骨神经沟（半膜肌和股二头肌的肌间缝）分离坐骨神经。
用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。
6、游离腓肠肌用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1 cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，提起跟腱，将腓肠肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。
坐骨神经-腓肠肌标本的制备
坐骨神经-腓肠肌标本的制备【实验目的】：掌握蛙类的捉拿和破坏脑脊髓的方法，掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备技术，了解神经-肌肉标本在实验中的应用。
【实验原理】：蛙或蟾蜍的一些基本生命活动与哺乳动物相似，其离体的神经-肌肉标本在一定时间内能保持其功能，体现活组织的某些共同的生理特性。
因此在生理学实验中常用坐骨神经-腓肠肌标本来观察兴奋性、刺激与反应的关系、骨骼肌的收缩形式等。
【实验对象】：蛙或蟾蜍【实验器材与药品】蛙类手术器械一套（粗剪刀、手术剪、眼科剪、镊子、金属探针、玻璃分针、蛙板与玻璃板、蛙钉、锌铜弓）、烧杯、培养皿、手术线、滴管、任氏液等。
【实验步骤与观察】1. 破坏脑和脊髓第一种破坏脑的方法：取蛙一只，用纱布包住蛙身，左手握蛙，右手持粗剪刀从口裂插入，沿两眼后缘剪去蛙头。
此法操作简单，但应注意止血。
第二种破坏脑的方法：左手握蛙，并用食指压其头部前端，使头前俯；然后右手持金属探针沿蛙头部的正中线下划，可触及一凹陷处即为枕骨大孔。
将探针从枕骨大孔垂直刺入1～2mm，再向前刺入颅腔，左右搅动破坏脑组织。
将探针刺入椎管，破坏脊髓。
此时蛙四肢松软，表示脑、脊髓已完全破坏（图2-1）。
图2-1 用探针损毁蟾蜍脑和脊髓图2-2 剪断脊柱2. 剪去躯干上部及内脏在蛙两腋稍下方的背部，用粗剪刀剪断脊柱（图2-2）。
左手握住蛙后肢，用拇指按压其骶骨，使蛙头和内脏自然下垂，沿背部两侧剪去其一切内脏和头胸部，仅保留一段脊柱及其两侧的坐骨神经和后肢（图2-3）。
剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。
图2-3 剪除躯干上部和内脏3. 去皮左手用镊子夹住脊柱断端，右手握住断端边缘皮肤，向下剥去全部皮肤。
将标本放在盛有任氏液的培养皿中。
将手和用过的器材洗净。
4.分离两腿用镊子夹住脊柱标本背面，用粗剪刀沿脊柱正中至耻骨联合中央剪开分成两半（注意不要伤及坐骨神经），将一条腿浸入盛有任氏液的培养皿中。
5. 游离坐骨神经取一蛙腿放在玻璃板上，用蛙钉将标本的脊柱固定在蛙板上，趾蹼朝上拉直下肢后再用蛙钉固定在蛙板上。
蟾蜍离体坐骨神经–腓肠肌标本制备讲义
培养皿、烧杯、滴管、蛙板、蛙钉等。
【步骤】
双毁髓 剥制后肢标本 分离两后肢 分离坐骨神经
分离股骨 游离腓肠肌 检验标本
1、双毁髓
左手握蟾蜍，背部向上。用食指按压其头部前端， 拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓 针，由两眼之间中线向后方划触，触及两耳后腺 之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由 凹陷处垂直刺入枕骨大孔（进针深度约2mm，有 脱空感即到达椎管），然后针尖向前刺入颅腔， 在颅腔内搅动，以毁脑组织。再将毁髓针退至枕 骨大孔，针尖转向后方，与脊柱平行刺入椎管， 以捣毁脊髓。脊髓彻底捣毁时，可看到蟾蜍后肢 突然蹬直，然后瘫软，此时的动物为双毁髓动物 （pithed toad） 。
4、分离坐骨神经
将一侧后肢的脊柱端腹面向上，用大头针将 标本背位固定于蛙板上。用玻璃分针沿脊神 经向后分离坐骨神经。股部沿腓肠肌正前方 的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，纵向分离 暴露坐骨神经的大腿部分，直至分离至腘窝 胫神经分叉处。剪断盖在坐骨神经上方的梨 状肌，完全暴露坐骨神经，剪去支配腓肠肌 之外的分支，再剪去脊柱及肌肉，只保留坐 骨神经发出部位的一小块脊柱骨。将已游离 的坐骨神经搭在腓肠肌上。
2）标本制备过程中应经常滴加任氏液，防 止标本干燥，以保持正常生理活性。
3）避免污染、过度牵拉或用器械夹伤坐骨 神经和腓肠肌。
思考与讨论
（1）用锌铜弓刺激坐骨神经如何引起 腓肠肌收缩？
（2）如何保持离体标本的机能正常？ （3）剥去皮肤的后肢标本能用自来水
冲洗吗？
探索性问题
1．该标本可以进行哪些实验研究？试 设计实验内容。
剥皮：避开神经，左手持镊子夹住脊 柱，右手捏住皮肤边缘，向下牵拉剥 离皮肤。拉至大腿时，如阻力较大， 可先剥下一侧，再剥另一侧。将全部 皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液 的培养皿中。然后洗净双手和用过的 全部手术器械，再进行下列步骤。
蟾蜍离体坐骨神经–腓肠肌标本制备
7、检验标本
将制备好的标本浸 泡到任氏液中510min，待其功能 稳定后，用任氏液 沾湿的锌铜弓的两 极接触神经，如腓 肠肌迅速发生收缩， 则标本机能正常。
依次用温热的玻璃 棒和食盐的接触和 洗脱检验肌肉收缩 的变化。
【注意事项】
02
标本制备过程中应经 常滴加任氏液，防止 标本干燥，以保持正
常生理活性。
5、分离股骨
01 沿膝关节剪除并刮净股骨周围的肌肉，保 留股骨的后2/3，剪断股骨。
02 注意：勿剪断坐骨神经。
6、游离腓肠 肌
在腓肠肌跟腱下穿线并结扎，提起结扎线， 剪断肌腱与胫腓骨的联系，游离腓肠肌，剪 去膝关节下部的后肢，保留腓肠肌与股骨的 联系，制备出完整的坐骨神经-腓肠肌标本。
标本应包括：坐骨神经、腓肠肌、柱， 右手捏住皮肤边缘，向下牵拉剥离皮肤。 拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一 侧，再剥另一侧。将全部皮肤剥除后， 将标本置于盛有任氏液的培养皿中。然 后洗净双手和用过的全部手术器械，再 进行下列步骤。
3、分离两 后肢
将去皮的后肢腹面向上置于解剖盘上，右手 持金冠剪纵向剪开脊柱，再剪开耻骨联合， 使两后肢完全分离。
Sciaticgastrocnemius Preparation of Toad
蟾蜍离体坐骨神经 –腓肠肌标本制备
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蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处， 而且其离体组织的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源也 较丰富，因此在生理学实验，常用蛙或蟾蜍的坐骨神经--腓肠肌 标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的 特点等。
【动物和器材】
0
蟾蜍或蛙；
1
毁髓针、锌铜弓、解剖盘、玻璃分针、
蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备
腓肠肌分离
暴露腓肠肌
在暴露的坐骨神经下方，可见腓肠肌 的起始端。用显微镊子轻轻分离腓肠 肌周围的结缔组织。
完整分离腓肠肌
沿腓肠肌的肌腱走向，小心分离并完 整取出腓肠肌，注意保持肌腱的完整 性。
标本制备
洗标本， 去除残留的血液和组织碎 片。
标本固定
将分离好的腓肠肌标本用 生理盐水浸泡在培养皿中， 并用小纸片标记标本的起 始端和终止端。
神经传导速度测量
通过电刺激坐骨神经并记录肌肉的 反应时间，可以计算出神经传导速 度，以评估神经功能是否正常。
数据记录与分析
记录肌肉收缩幅度
使用数据记录仪记录肌肉收缩的 幅度，可以分析肌肉的生理状态 和功能。
神经传导速度计算
根据电刺激和肌肉反应时间，计 算神经传导速度，并分析其与正 常值的差异。
数据统计分析
标本瓶或培养皿
用于放置剥离好的 标本。
实验环境
实验场地
选择安静、无尘、通风良好的实验室， 保持室内清洁。
实验温度
维持室内温度在适宜的范围内，一般 控制在20-25℃。
实验湿度
保持室内湿度适中，避免过度干燥或 潮湿。
实验光照
选择适当的光照条件，避免直射阳光 和强光干扰。
02 实验步骤
标本选取与固定
对实验数据进行统计分析，可以 得出实验组与对照组之间的差异， 以及不同实验条件下的结果变化。
04 结论与展望
实验结论
成功制备了蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本，并观察到了其生理和电生理特性。
实验过程中，我们发现某些处理步骤对标本的活性有影响，如固定剂的选 择和浓度、离体时间等。
通过实验，我们验证了某些理论假设，如神经肌肉接头传递的机制和离子 通道的作用。
实验五 蛙坐骨神经腓肠肌的制作
图2 蟾蜍坐骨神经胖肠标本制备（二） A．后肢肌肉背面观 B．坐骨神经分离暴露后的位置 C、D．坐骨神经脖肠肌标本（实线部分） 1．股三头肌 2．股二头肌 3．半膜肌 4．股骨
［注意事项］ 1．剥制标本时，切忌用金属器械牵拉或触碰神经 干。 2．分离肌肉时应按层次剪切。分离神经时，必须 将周围的结缔组织剥离干净。 3．制备标本过程中，应随时用任氏液浸湿神经和 肌肉，防止干燥。 4．切勿让蟾蜍的皮肤分泌物和血液等沾污神经和 肌肉，也不能用水冲洗，否则会影响神经肌肉的 机能。
图1 蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备（一） A．破坏蟾蜍脑脊髓的方法 B、C．剪除躯干前段及内脏 D．剥掉后肢皮肤
［方法及步骤］ 1．破坏脑脊髓 如图34，A，取蛙或蟾蜍一只，用蛙针从枕骨大孔垂直插 入，向前伸入颅腔，捣毁脑髓；向后插入椎管，捣毁脊髓。 如果蛙处于瘫痪状态，表示脑和脊髓完全破坏。然后沿两 侧腋部将蛙横断为上下两半。并将前半段弃去，保留后半 段备用。 2．剥离皮肤 先剪去尾椎末端及泄殖腔附近的皮肤，然后从脊柱的断端 撕下皮肤，将其全部剥去，直至趾端。除去内脏，将标本 放在滴有任氏液的蛙玻璃板上。将手及使用过的解剖器械 洗净（图1，B、C、D）。 3．分离标本为两部分 沿脊柱正中线将标本匀称地剪成左右两半，一半浸入盛有 任氏液的烧杯中备用，另一半作进一步剥制。
4．分离坐骨神经 在大腿背侧的半膜肌与股二头肌之间用玻璃钩分离出坐骨 神经。注意分离时要仔细用剪刀剪断坐骨神经的分支，向 上分离至基部，向下分离到腘窝。保留与坐骨神经相连的 一小块脊柱，将分离出来的坐骨神经搭于腓肠肌上；去除 膝关节周围以上的全部大腿肌肉，刮净股骨上附着的肌肉， 保留的部分就是坐骨神经及股骨（图1，A、B）。 5．分离腓肠肌 在跟腱上扎一线，提起结线，剪断结线后的跟腱，腓肠肌 即可分离出来。此时在膝关节下方将其他所有组织全部剪 去，到此为止，带有股骨的坐骨神经腓肠肌标本制备完成 （图2，C、D）。
实验三蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备
实验方法和步骤
1. 破坏中枢神经系统：以左手握住蟾蜍，用食指压住其头部，使其略向下弯，将 探针自枕骨大孔插入，先左右横断脊髓，再向前搅毁脑，然后再将探针撤回伸 入脊管破坏脊髓。如果中枢神经系统破坏完全则蟾蜍全身肌肉完全松驰。
2. 剪断脊柱：用粗剪刀自胸部剪断脊柱。 3. 剪除前肢及内脏：沿脊柱的断口至耻骨处，将两侧腹壁的皮肤及肌肉剪开，再
实验三:蟾蜍坐骨神经腓肠肌 标本制备
实验目的 实验原理 实验对象 实验器材 实验方法和步骤 注意事项
实验目的
♦学习急性实验的实验方法。 ♦通过本实验熟悉刺激、兴奋、兴奋性和可兴
奋组织的概念。 ♦掌握蛙类坐骨神经腓肠肌标本的制备方法。
实验原理
♦青蛙和蟾蜍是两栖类动物，其生存环境较简单，离 体组织或器官所要求的条件也较简单。坐骨神经 和腓肠肌属于可兴奋组织，把它们置于人工配制 的任氏液中，其兴奋性在几个小时内保持不变。 若给坐骨神经一个适宜的刺激，可在神经和肌肉 上产生一个可传导的动作电位，肉眼可以看到一 次肌肉的收缩和舒张，表明神经和肌肉兴奋了一 次。
将直肠剪断，将前肢及内脏全部剪掉，但须注意勿损伤两侧下行的坐骨神经丛. 将肛门周围的皮肤和尾骨剪去，便于剥皮与分离标本。 4. 剥皮：一手用镊子夹紧脊柱骨，另一手捏住复于其上的皮肤边缘，用力剥去皮 肤将去皮的标本放在任氏液浸湿的蛙板上，将手和手术器械洗净。 5. 分离左右下肢：用粗剪刀沿脊柱中线把标本分为左右两半。注意勿损伤神经。 6. 剥离坐骨神经：用玻璃分针将坐骨神经丛分离清楚，再从大腿背面股二头肌和 半膜肌的夹缝中分离出坐骨神经。用粗剪刀将与坐骨神经相连的脊柱下部多余 部分剪去，以镊子夹住与神经相连的脊柱骨，提起神经，然后用眼科剪将坐骨 神经向大腿及其它处发出的神经分支剪断，将坐骨神经分离到膝关节。 7. 分离肌肉：分离腓肠肌的跟腱，用线结紧，自跟腱的附着点剪断。提起跟腱将 腓肠肌剥离出来，并将小腿其余部分剪掉，保留一小段(约1.5cm)股骨，并将 附着于骨上的其它肌肉剪掉，即完成坐骨神经腓肠肌标本的制备。 8. 检查标本：用铜锌弓轻轻地与坐骨神经接触，如果标本良好则肌肉立即收缩。
神经实验1 坐骨神经腓肠肌标本的制备
实验1 坐骨神经-腓肠肌标本的制备一、实验目的1. 学习蛙类动物双毁髓的实验方法2. 学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法3. 通过本实验熟悉刺激、兴奋、兴奋性和可兴奋组织的概念。
二、实验原理蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性。
因此，常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。
三、实验器材蟾蜍或蛙、常用手术器械（手术剪、手术镊、用术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针、玻璃分针），蛙板，蛙钉，锌铜弓，培养皿，滴管，纱布，线，任氏液四、实验步骤1. 制备双毁髓蟾蜍（毁脑和脊髓）取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。
左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓。
彻底捣毁脊髓时，可看到动物的后肢突然蹬直，而后瘫软如棉，此时的动物为双毁髓动物。
如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如，必须重新毁髓。
2. 剥制后肢标本剪除上肢和内脏在骶髂关节上0.5-1.0cm处用粗剪刀剪断脊柱。
用镊子夹住后端脊柱，以剪刀沿脊柱两侧剪除所有内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。
剥皮左手用镊子或直接用手捏住脊柱断端（注意不要压迫神经），右手捏住断端边缘皮肤，向下剥去全部后肢皮肤，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。
将手和用过的器械洗净后再进行以下步骤。
3. 分离两后肢将去皮的后肢腹面向上置于玻璃板上，脊柱端在左侧，左手固定标本的股部两侧肌肉，右手持手术刀，于耻骨联合处向下按压刀刃，切开耻骨联合。
然后用手托起标本，用金冠剪剪开两后肢相连的肌肉组织，并纵向剪开脊柱(尾杆骨留在一侧)，使两后肢完全分离。
将分开的后肢，一只继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。
实验三 蟾蜍坐骨神经-腓肠肌标本的制备
六、注意事项
1、制备标本过程中，应随时用林格液润湿神经和肌 肉，防止干燥。 2、游离神经时，切勿用玻璃分针逆向剥离，以防损伤 神经干，又要避免金属器械对神经的不必要触碰。
3、避免蟾蜍皮肤分泌物和血液等污染标本，也不能用 水冲洗标本。
4、有时标本兴奋性过高，可放置２０min待其稳定后再 用于以下实验。必要时可接地予以分流。
2、剪除躯干上部及内脏：在腋部用铁剪刀剪断脊柱， 将头、前肢和内脏一并弃去，仅保存一段脊柱和后肢。脊 柱的两旁可见坐骨神经丛。
3、去皮：先剪去肛门周围皮肤，然后用左手捏住脊柱断端，右手捏 住断端边缘皮肤，向下剥掉全部后肢皮肤。标本放入盛有林格液的小烧 杯中，将手及用过的器械、蛙板洗净，以免皮肤分泌物污染神经-肌肉 标本。 4、分离标本为两部分：沿脊柱正中线将标本均匀地分成左右两半， 分别作进一步剥制。 5、游离坐骨神经：用玻璃分针在半膜肌和股二头肌之间分离出坐骨 神经。注意分离时要仔细用剪刀剪断坐骨神经的分支，勿伤神经干，前 面分离至脊柱坐骨神经丛基部，向下分离至膝关节。保留与坐骨神经相 连的一小块脊柱，将分离出来的坐骨神经搭于腓肠肌上，去除膝关节周 围以上的全部大腿肌肉，用铁剪刀刮净股骨上附着的肌肉，保留下半段 股骨。 6、分离腓肠肌：在跟腱上扎牢一线，提起结线，剪断结扎线外的跟 腱，游离腓肠肌至膝关节处，将膝关节以下小腿其余部分全部剪去。至 此，标本制成。 7、标本的检验：将标本置于蛙板上，用锌铜弓(或电子刺激器)刺激 坐骨神经，若腓肠肌收缩表明标本的兴奋性良好。将标本放入林格液中 待用。
实 验 三
蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备
一、实验目的
学习破坏蟾蜍脑和脊髓的方法. 熟悉并掌握蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备
二、试验器材
两
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蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本制备和
不同强度和频率对肌肉收缩的影响
一、实验摘要
1.目的：掌握制备具有正常兴奋收缩功能的蛙类坐骨神经腓肠肌标本基
本操作以及蛙类手术器械的使用方法。
学习微机生物信号采集处理系
统和换能器的使用。
记录在刺激时间、强度变化率恒定的条件下，不
同强度和频率的电刺激对肌肉收缩的影响。
2.方法：应用蛙类捉拿方法并且毁脑脊髓后制备坐骨神经-腓肠肌标本，
用锌铜弓分别刺激坐骨神经和腓肠肌，观察肌肉变化。
再利用张力换
能器将压力变化转换为电信号，用微机生物信号采集处理系统记录不
同强度和频率对肌肉收缩的影响的变化曲线。
3.结果：用锌铜弓刺激坐骨神经时腓肠肌发生收缩。
在保持足够的刺激
时间(脉冲波宽)不变的条件下，通过逐步增加对蟾蜍坐骨神经的刺激
强度(脉冲振幅)和改变电脉冲刺激频率可发现当电压低于阈值的强
度刺激，坐骨神经支配腓肠肌的神经纤维不发生兴奋，刺激电压达到
阈强度时，坐骨神经干中阈值最低的神经开始兴奋。
刺激强度逐渐增
大，总收缩张力增加。
当刺激电压达到使支配腓肠肌的神经纤维全部
兴奋，则收缩张力达单收缩最大值。
4.结论：在一定刺激时间下，刚能引起组织发生兴奋的刺激称为阈刺激，
所达到的强度为阈强度；能引起组织发生最大兴奋的最小刺激称为最
大刺激，相应的刺激强度叫最大刺激强度。
介于阈刺激和最大刺激间
的刺激称阈上刺激，相应的刺激强度称为阈上刺激强度。
二、关键词：坐骨神经、腓肠肌、兴奋性、阈值
三、引言：刺激神经使神经细胞产生兴奋，兴奋沿神经纤维传导，通过神经肌接头的化学传递，使肌肉终板膜上产生终板电极，终板电极可引起肌肉产生兴奋（即动作电位），传遍整个肌肉纤维，再通过兴奋-收缩耦联使肌纤维中粗、细肌丝产生相对滑动，宏观上表现为肌肉收缩。
[1]
四、材料和方法
1.实验对象：蟾蜍
2.实验仪器：张力换能器、微机生物信号采集处理系统、剪刀、铁碗、
培养皿、锌铜弓、玻璃分针、大头针、蛙板、尖头镊子、棉线、针形
引导电极
3.实验药品和试剂：任氏液
4.实验方法：
1)观察蟾蜍毁脑脊髓前后四肢肌张力的变化。
用锌铜弓分别刺激坐
骨神经和腓肠肌，观察肌肉的反应。
2)毁脑脊髓取蟾蜍一只，用左手握住，以食指压其头部前端使
其尽量前俯，右手持探针自枕骨大孔处垂直刺入，到达椎管，即
将探针改变方向刺入颅腔，向各侧不断搅动，彻底捣毁脑组织；
再将探针原路退出，刺向尾侧，捻动探针使逐渐刺入整个椎管内，
捣毁脊髓。
此时蟾蜍下颌呼吸运动应消失，四肢松软，即成为一
毁脑脊髓的蟾蜍。
否则须按上法再行捣毁。
3)剪除躯干上部及内脏用粗剪刀在颅骨后方剪断脊柱。
左手握住
蟾蜍脊柱，右手将粗剪刀沿两侧（避开坐骨神经）剪开腹壁。
此时躯干上部及内脏即全部下垂。
剪除全部躯干上部及内脏组织，弃于瓷盆内。
4)剥皮避开神经，用右手拇指和食指夹住脊柱，左手捏住皮肤边
缘，逐步向下牵拉剥离皮肤。
拉至大腿时，如阻力较大，可先剥下一侧，再剥另一侧。
将全部皮肤剥除后，将标本置于盛有任氏液的培养皿中。
5)洗净双手和用过的全部手术器械，再进行下列步骤。
6)分离双腿避开坐骨神经，用粗剪刀从背侧剪去骶骨，然后沿中
线将脊柱剪成左右两半，再从耻骨联合中央剪开（为保证两侧坐骨神经完整，应避免剪时偏向一侧）。
将已分离的标本浸入盛有任氏液的培养皿中。
7)游离坐骨神经取腿一条，先用剥离分针沿脊柱侧游离坐骨神经
腹腔部，然后用大头针将标本背位固定于干净蛙板上。
用玻璃分针循股二头肌和半膜肌之间的坐骨神经沟，纵向分离暴露坐骨神经之大腿部分，直至分离至腘窝颈神经分叉处。
然后剪断股二头肌腱、半膜肌和半膜肌肌腱，并绕至前方剪断股四头肌腱。
自上向下剪断所以坐骨神经分支。
将连着3-4节椎骨的坐骨神经分离出来。
8)完成坐骨神经小腿标本将已游离的坐骨神经搭在腓肠肌上。
用
粗剪刀自膝关节周围向上剪除并刮净所以大腿肌肉，在距膝关节约1cm处剪断股骨。
弃去上段股骨，保留部分即为坐骨神经小腿标本。
9)完成坐骨神经腓肠肌标本用尖子镊子在上述坐骨神经腓肠肌
标本的跟腱下方穿孔，穿线结扎之。
提起结扎线，在结扎线下方剪断跟腱，并逐步游离腓肠肌至膝关节处，左手握住标本的股骨部分，使已游离的坐骨神经和腓肠肌下垂，右手持粗剪刀水平方向伸进腓肠肌与小腿之间，在膝关节处剪断，与小腿其余部分分离。
左手保留部分即为附着于股骨之上的、具有坐骨神经支配的腓肠肌标本。
将标本浸入盛有新鲜任氏液的培养皿中待用。
10)实验系统连接和参数设置张力换能器的输出端与生物信号采集
处理系统的输入通道相连。
启动RM6240系统软件，在系统软件窗口设置仪器参数：点击“实验”菜单，选择“刺激强度（或频率）对骨骼肌收缩的影响”项。
参数：通道模式为张力，采样频率400 Hz～1 kHz，扫描速度1 s/div，灵敏度10～30 g，时间常数为直流，滤波频率100 Hz。
在“选择”下拉菜单中选择“强度/频率”
项，显示刺激参数。
11)将离体蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本固定在屏蔽盒中，腓肠肌跟腱的
扎线固定在张力换能器的悬臂梁上。
坐骨神经放在刺激电极和引导电极上，保持神经与电极接触良好。
针形引导电极插入腓肠肌并固定。
12)观察实验现象设定在刺激时间、强度变化率恒定，且强度和频
率初始条件均为零的条件下，采集不同强度和频率的电刺激对肌
肉收缩的影响数据。
五、实验结果
1）用锌铜弓刺激坐骨神经时腓肠肌发生收缩。
2）不同频率递增对肌肉收缩影响记录图
3）不同强度对肌肉收缩影响记录图
在一定刺激时间下，刚能引起组织发生兴奋的刺激称为阈刺激，所达到的强度为阈强度；能引起组织发生最大兴奋的最小刺激称为最大刺激，相应的刺激强度叫最大刺激强度。
介于阈刺激和最大刺激间的刺激称阈上刺激，相应的刺激强度称为阈上刺激强度。
如上图所示：阈强度为0.096V，最大刺激强度0.162V。
开始收缩的频率为3Hz ，完全强直收缩的频率为23Hz
六、实验分析
1.锌铜弓用金属锌和铜铆接而成，锌铜弓在极性溶液中形成回路时，锌与铜两
极产生约0.5-0.7V的直流电压，电流的刺激作用于神经肌肉标本，由于产
生生物电流，因而引起肌肉的收缩。
2.制备标本的过程中，要不断滴加任氏液，以防标本干燥，丧失正常生理活性；
操作过程中应避免强力牵拉和手捏神经或夹伤神经肌肉；毁脑脊髓时防止蟾蜍皮肤分泌的蟾蜍毒液射入操作者眼内或污染实验标本。
3.在恒定时间间隔用不同强度的电压刺激坐骨神经，当电压低于阈值的强度刺
激，坐骨神经支配腓肠肌的神经纤维不发生兴奋，其所支配的肌细胞也不会发生兴奋和收缩。
刺激电压达到阈强度（本次实验阈强度为0.095V）时，坐骨神经干中阈值最低的神经开始兴奋，其所支配的运动单位的肌纤维兴奋并发生收缩。
刺激强度逐渐增大，坐骨神经干中兴奋的神经纤维增加，兴奋和收缩的运动单位增加，令总收缩张力增加。
当刺激电压达到使支配腓肠肌的神经纤维全部兴奋，则收缩张力达单收缩最大值（本次实验最大刺激强度
0.162V）。
4.如果给肌肉以连续短促刺激，随着刺激频率的不同，肌肉收缩会出现不同的
形式。
当频率较低时（本实验频率为3Hz），后一个刺激落在前一个刺激引起的收缩过程结束之后，则只引起一连串各自分开的单收缩。
随频率增加，后一个刺激落在前一个刺激引起的收缩过程的舒张期，则如实验记录数据所示的在频率为7Hz时形成了不完全强直收缩。
当频率增加到每一个后面的刺激落在前一个收缩过程中的收缩期，则各次收缩的张力变化和长度完全融合或叠加起来，就形成完全强直收缩，如实验结果记录所示，开始完全强直收缩的频率为23Hz。
七、实验结论
1.蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳类动物有相似之处，而且其离体
组织的生活条件比较简单，易于控制和掌握，来源也较丰富，由此在生理学实验，尤其是细胞生理学的某些实验中，常用蛙或蟾蜍的坐骨神经腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性、刺激与反应的规律及肌肉收缩的特点等。
2.在保持足够的刺激时间(脉冲波宽)不变的条件下，通过逐步增加对蟾蜍坐骨
神经的刺激强度(脉冲振幅),当电压低于阈值的强度刺激，坐骨神经支配腓肠肌的神经纤维不发生兴奋。
刺激电压达到阈强度时，坐骨神经干中阈值最低的神经开始兴奋。
当刺激电压达到使支配腓肠肌的神经纤维全部兴奋，则收缩张力达单收缩最大值。
3.在保持足够的刺激时间(脉冲波宽)不变的条件下和改变电脉冲刺激频率可
发现当频率较低时,只引起一连串各自分开的单收缩。
随频率增加，后一个刺激落在前一个刺激引起的收缩过程的舒张期，则形成了不完全强直收缩。
当频率增加到每一个后面的刺激落在前一个收缩过程中的收缩期，则各次收缩的张力变化和长度完全融合或叠加起来，就形成完全强直收缩。
参考文献：
[1]陆源、林国华、杨午鸣主编《机能学实验教程》朱大年、王庭槐第8版《生理学》
[2]朱大年、王庭槐第8版《生理学》。