大鼠海马神经元钠离子通道电流的记录与分析

离体大鼠海马神经元自发放电活动一般特征的研究

ｃｌ，ｅｅｅｕｅｓｔｙｗｒｎ—ｒｇｌｔｎｒｌａｅ，ｉｇｅｗｖｅｕａｌａｅｉｔｎｉｎｒｌａｅ，ａｏｙｍｅｅｓｎｅｏｅｅｓＩｐｏｅｈｔｔｅｈｅｕａｏｅｓｓｎｌａｅｒｇｌｒｒｅｓ，ｎｅｓｅｓｐｒｘｓｒｌａｅａｄｐｒｄｒ］ａｅ．ｔｒｖｓｔａｉｅｅｏｅｉｈ
ＴｈｅＧｅｅａｅｔｉｔｖｔａａｔｒｆｎｒｌＥｌｃｒｃＡｃｉｉｙＣｈｒｃｅｓｏｔｅＲａｐｏａｐｓＥｘ — ｉｏＰｒｍｉｌＣｅｌｈｔＨｉｐｃｍｕ —ｖｖｙａｄａｌｓ
ＹＡＮＧｎｈｎＡＳｅｇＲｕｓｅｇ，ＰＮｈｎｗＵ，ＡＮＧｌＹＦＹｉｇ，ＡＧｈｎｃａｇｌＮＳｅｇｈｎ２
ｓｍｕａｔｉｔｌｎｓ．
ＫｅｒｓＲａｉｐｃｍｐｓＭｉｒｅｅｔｅＢｍｎｓｅ；ｐｎａｅｕｉｈｒｅｙｗｏｄ：ｔｈｐｏａｕ；ｅｏｌｅｏ；ｒｆｅＳｔｎｏｓｄｓａｇｒｄｉｏｃ
１引言
（．ｎａＥｐｒｅｔａ，ｕｎＰａｔｅｅ，ｏ１１ＨｓｉｌｆＰＡ，ｕｉ４０２Ｃ／１ＡｉｌｘｅｍｎＬｂＢｒ／／ＣｎｒＮ．８ｏｔＩＧｉｎ５１０，ｈｎｍｉｓｃｔｐａｏｌａ；２ＳｉｃｆｏｅｅＧａｇｉｒａＵｉｒｔ，Ｃｚｉ５１０）．ｃｎｅｒｅＣｌｇ，ｕｎｘｍｌｎｅｉａｌ４０２ｅｉｌｏＮｖｓｙｉｎ

膜片钳常见问题解答讲解

膜片钳常见问题解答（一）1.什么是电压钳与膜片钳，有什么区别？答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流，抵消离子通道开放时所产生的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。

由于注射电流的大小与离子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。

膜片钳技术钳制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极与细胞膜发生紧密接触，使尖端下的这片细胞膜在电学上与其它细胞膜分离，这大大降低了背景噪声，使单通道微弱的电流得以分辨出来。

采用电压钳技术将这片膜的电位钳制在某一数值，可记录到单通道电流。

从这点上看，膜片钳技术是特殊的电压钳技术。

随着膜片钳技术的发展，它已经不仅仅局限于“膜片”的概念，也不仅仅采用电压钳技术，还常采用电流钳技术。

2. 离子通道电导的单位是什么？如何换算？答：离子通道电导的单位是西门子（Siemens, S），旧称姆欧，即安培/伏特。

常用皮西门子（pS），1pS＝10E-12 S，1,000 pS＝1 pA/mV。

3. MultiClamp 700A中，在放大器和信号器的连接中，放大器的raw output是否需要连接信号器的 ANALOG IN 接口? scaled output，raw output有什么区别?答：Raw output为原始信号输出，放大器输出的信号没有经过处理（如滤波、放大等），scaled output为定标输出，输出的信号经过了处理。

后者的灵活度大，因此多采用。

目前膜片钳放大器多设有scaled output，你可将其与数模转换器（你所说的信号器）的ANALOG IN连接，这样放大器的输出信号就能传送给计算机了，此时已经没有必要再使用Raw output了。

若你想记录两个输出，则需要将Raw output与数模转换器的另一个ANALOG IN连接。

4. 在Clampex的Edit protocol/Wave中，Step和ramp各有什么适用范围？答：Ramp多用于电流衰减缓慢的离子通道以及失敏不明显的受体通道的I-V曲线制作，如多用于钾、钙离子通道。

机能学教程-中心简介-哈尔滨医科大学

实验机能学教程哈尔滨医科大学《实验机能学教程》编写人员主编金宏波副主编宋英莉班涛编者边淑玲孙宏丽苏乐王瑞雪宋英莉曲丽辉谷长任李玉荣朱骥伟杨永滨张颖张永春张丽敏金宏波周建秋娄延平姜晓姝郝晓敏班涛贾淑伟霍蓉王然钟鑫吕春梅曹永刚王宁朱久新朴贤美刘妍妍李鸿珠邹向晖李文楠徐杰唐立勇李小雪吴志超卢方浩张莹张晓兰李红霞杨永良孙丽华李哲吴博刘晓宇苑立军李勇刘学义白云龙陈畅田振主审李玉荣李光前言机能学实验教学中心自2000年成立，特别是2007年成为教育部国家级实验教学示范中心（建设单位）以来，对实验教学进行了大量的改革，初步形成了较为完善的实验教学体系，实验机能学教材也已出版了三版。

2012年，根据教育部和卫生部对医学教育综合改革的精神，落实“进一步发挥高等学校实验室在培养人才中的作用若干意见”，学校提出了实验教学改革方案。

机能学实验教学改革将贯彻“以学生为中心”的教学理念，引导和激励学生自主学习，充分调动学生的学习积极性和主动性，密切联系临床实际，重点培养学生的动手能力和科学思维方式，提倡深入思考，逐步开展自主设计、自主实施、自主总结的探索设计性实验，培养学生终身学习能力。

为此，本教材的编写在已有的“基础性-综合性-设计性实验”教学体系的基础上，引入PBL （Problem-based learning，PBL）和TBL（Team-based learning，TBL）教学理念，将贯彻启发式教学和学生自主学习作为教学改革的重点，改革实验流程和授课方式，减少教师讲授，增加学生讨论、团队协作，加强实验总结，进一步完善实验考核与评价。

在教材编写过程中，坚持“三基”和“五性”的要求，根据学科特有的实践特色，除了介绍实验机能学基础理论外，在实验项目编写过程中，尝试增加了数十个相关的临床病例和分析与思考问题，力图引导学生根据所学的机能学理论，自主查找文献资料，根据给定的实验条件自主设计相关实验，并在教师指导下进行小组讨论、完善实验方案，团结协作、共同实施，同时重视总结和实验报告的书写。

膜片钳记录钠电流实验结果

膜片钳记录钠电流实验结果膜片钳是一种用于记录细胞膜上离子通道电流的实验技术。

在钠电流实验中，膜片钳被广泛应用于研究神经元细胞膜上的钠离子通道的活动。

本文将详细介绍如何使用膜片钳记录钠电流实验结果。

一、实验目的通过使用膜片钳记录钠电流，我们可以了解神经元细胞膜上钠离子通道的特性和功能。

具体而言，我们可以研究钠离子通道的开放概率、电流大小和动力学特性等。

二、实验材料和设备1. 膜片钳：包括一个玻璃微电极和一个放大器。

2. 玻璃微电极：用于穿刺神经元细胞膜，并记录离子通道电流。

3. 放大器：用于放大微弱的离子通道电流信号。

4. 实验室常规设备：显微镜、注射器、培养皿等。

三、实验步骤1. 准备工作：a. 准备好玻璃微电极。

将一根玻璃毛细管拉制成细微的一端，并用火烧熔封，形成一个小孔。

b. 准备好实验室常规设备，确保实验环境安全和卫生。

2. 细胞准备：a. 选择合适的细胞进行实验。

可以使用培养的原代神经元细胞或转染表达特定蛋白质的细胞系。

b. 将培养皿中的细胞置于显微镜下，选择一个健康、完整的细胞。

3. 穿刺膜片：a. 将玻璃微电极连接到放大器上，并调整放大器参数，使其适应记录离子通道电流信号。

b. 控制玻璃微电极接近选定的细胞，并轻轻穿刺膜片，使其与玻璃微电极相连。

c. 在穿刺过程中，需要注意保持薄膜完整性和稳定性。

4. 录制钠电流：a. 穿刺成功后，将放大器参数调整到合适的范围。

通常需要设置合适的增益、滤波和采样频率等参数。

b. 开始记录钠电流。

通过施加一系列不同电压的脉冲，可以激活和测量钠离子通道的电流。

c. 记录一段时间内的电流数据，并保存以备后续分析。

5. 数据分析：a. 使用适当的软件对记录的数据进行分析。

可以计算钠离子通道的开放概率、电流大小和动力学特性等。

b. 可以绘制电流-电压曲线（I-V曲线）来描述钠离子通道的特性。

c. 进一步分析和比较不同条件下钠离子通道活动的差异。

四、实验注意事项1. 实验环境应保持安静和稳定，以避免噪音干扰。

哇巴因预处理对模拟缺血大鼠海马神经元NMDA电流的影响

ＥｆｃｆｏａａｎｐｅｒａｍｅｔｏｈＮＭＤＡｌｔｉｃｒｅｔｉｈｐｏａｐｌｎｕｏｓｆｓｎｌｔｄｆｔｏｕｂｉｒｔｅｔｎｎｔｅｅｅｅｒｃｕｒｎｎｉｐｃｍａｅｒｎｏｈｕａｅｃｉｈｍｉａｓｓｅａｒｔｃＷＡＮＧｈｏＨＣａ，ＺＡＮＧＺｈ．ＴｅｌｉａＴｉｌｅｔｒｅｅｒｖｎｉｌＰｅｐｅ’ＳｅｈＣｉｃｌｒＣｎｅ，ＨｂｉＰｏｉｃａｏｌｎａＨｏｐｔｌｓｉ，ａ
模拟缺血可促进ＮＡ通道开放。哇巴因预处理能保护神经元抵抗由ＮＡＭＤＭＤ
受体诱导的兴奋性神经毒性，此神经保护机制与哇巴因阻断缺血对ＮＤＭＡ受体的过度激活、解神经元缓
【关键词】ＮＤＭＡ受体；钠泵；模拟缺血；全细胞膜片钳【中图分类号】Ｒ３８３【文献标识码】Ａ【文章编号】１０７８（０１２ — ６５００２— ３６２１）４３８ — ３
ｉｅｅａｍｏｅｓｉｉｏｗｒｓａｌｈｄｂｐｌｉｇｏｙｅｎｌｃｓｅｒａｉｎｓｐｒｓｏｎｏｎｕｏｓＳｓｈｍｉｄｌｎｖｔｅｅｅｔｂｉｅｙａｐｙｎｘｇｎａｄｇｕｏｅｄｐｖｔｕｅｆｉｎｉｔｅｒｎＯｒｓｉｏｕ
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降钙素基因相关肽对大鼠海马神经细胞钠离子通道的作用

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降钙素基因相关肽对大鼠海马神经细胞钠离子通道的作用
房春燕。宁，．李韩慧蓉。琳，启，，王孙文史立宏‘康白，
①ＣＲＧＰ可以使大鼠海马神经细胞钠
通道电流的峰值增加４％；ｃｉ使其钠离子通道电流的激活曲线和稳态失活曲线产生显著的向超极化（１ ② Ｇ寅值）方向移动１ｍ０Ｖ左右：ＧＰ．７ ⑧ＣＲ８可以阻断ＣＲ３ＧＰ的上述作用结论 ①ＣＲＧＰ能够增加海马神经元钠离子
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选用】ｔＳ～７Ｄ大鼠，ｌ以酶消化加吸管吹打法急性分离其海马神经元细胞，用全细胞膜片钳

成年大鼠海马CA1锥体细胞BK

成年大鼠海马CA1锥体细胞BK成年大鼠海马CA1锥体细胞BK1.成年大鼠海马CA1锥体细胞BK_(Ca)通道的特性在海马，大电导Ca~(2+)激活K~+通道（BK_(Ca)通道）由动作电位上升相所进入的Ca~(2+)和膜去极化所激活，它介导了动作电位复极化和快后超极化电位（fAHP）的产生，且在调节静息状态时神经元兴奋性中也具有重要作用。

近年来，有关海马神经元BK_(Ca)通道的研究主要是用膜片钳技术在培养的或新生的神经元上进行的。

然而，大部分有关海马神经元BK_(Ca)通道在动作电位复极化和fAHP中的作用的研究则主要是在成年脑片或在体上进行的。

到目前为止，对成年海马神经元BK_(Ca)通道的特性还知之甚少，因此本实验应用膜片钳内面向外式研究了成年大鼠海马CA1锥体细胞BK_(Ca)通道的特性。

当[Ca~(2+)]_i=0.01μM时开始观察到BK_(Ca)通道的活动，使BK_(Ca)通道激活一半（P_o＝0.5）的[Ca~(2+)]_i浓度为2μM。

当膜片两侧K~+相等时（140mM），BK_(Ca)通道的电导约为245pS；[Ca~(2+)]_i 为2μM时，膜电位每变化17mV时P_o呈e倍增加。

二级指数可较好地描述BK_(Ca)通道的开放时间（时间常数为2.07ms和14.36ms），表明BK_(Ca)通道存在两种不同的开放时间状态。

另外，BK_(Ca)通道偶尔还出现低电导开放状态，其单通道电流约为正常情况下单通道电流幅度的45％。

成年大鼠海马CA1锥体细胞BK_(Ca)通道的大电导、高[Ca~(2+)]_i敏感性可能是CA1锥体细胞成熟后动作电位时程变短的机制之一。

2．成年大鼠海马CAI锥体细胞BKh通道的调控门）磷酸化作用对 BKC。

通道的调控尽管有关磷酸化。

去磷酸化作用对BKC。

通道的调控己在大脑皮层神经元、垂体前叶神经终木、嗅球神经元进行过研究，然而目前尚无其对海马神经元BKC。

慢性应激抑郁大鼠海马miRNA的差异表达及生物信息学分析

中华行为医学与脑科学杂志2020年12月第29卷第12期Chin J Behav Med Brain Sci,December2020,Vol.29,No.12・1073・-基础研究-慢性应激抑郁大鼠海马miRNA的差异表达及生物信息学分析赛音朝克图'赵俊2罗彤$邓套图格'宋美丽彳艾丽雅彳阿茹娜'I内蒙古自治区国际蒙医医院，呼和浩特010065；2北京中医药大学针灸推拿学院100029；3内蒙古医科大学蒙医药学院，呼和浩特010110通信作者：赛音朝克图，Email:saiyin2012@【摘要)目的分析慢性应激抑郁模型大鼠海马组织miRNA表达特征,探究与抑郁发作相关的差异表达miRNA。

方法将12只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组和模型组，每组6只。

对照组大鼠群养,正常饮水摄食，不给任何刺激。

模型组大鼠孤养,并给予8种不可预知的慢性应激刺激28d,建立大鼠抑郁模型。

利用旷场实验检测大鼠的抑郁行为，运用miRNA 4.0Array芯片技术筛选出对照组和模型组大鼠海马间差异表达miRNA,利用Fisher精确检验，筛选出具有显著性差异的miRNA,采用miRanda和TargetScan两个数据库对显著性差异miRNA分别进行靶基因预测，取两种预测结果的交集，对差异表达miRNA利用GO数据库进行基因功能注释,KEGG数据库进行信号通路(Pathway)注释。

结果miRNA芯片技术分析结果显示，与对照组比较，模型组大鼠海马组织中得到25条差异表达miRNA,其中上调的miRNA有15条(P<0.O5,FC>1.3)，下调的miRNA有10条(P<0.O5,FC>1.3)。

这些miRNA的靶基因主要参与细胞内信号转导、RNA聚合酶II启动子转录的调节、DNA模板化、蛋白质磷酸化、大脑发育、心脏发育等生物学进程(P<0.01)o Pathway分析显示，轴突导向和癌症通路的显著性水平最为显著,其次是AMPK信号通路、cGMP-PKG信号通路、神经营养信号通路等抑郁发作的经典信号通路(P<0.05)。

大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录

大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录
张宇;高秀萍;李建国;郑肇青;张策
【期刊名称】《山西医科大学学报》
【年(卷),期】2006(037)004
【摘要】目的探讨记录全细胞的大电导钙激活钾通道的技术方法.方法首先酶解急性分离大鼠海马神经元;利用全细胞膜片钳技术记录大电导钙激活钾电流.结果可记录到一系列快速的外向钾离子电流.结论所记录到的外向钾离子电流中,快速出现并很快减小的呈尖峰样的瞬变外向电流主要由大电导的钙激活钾电流组成.
【总页数】3页(P341-343)
【作者】张宇;高秀萍;李建国;郑肇青;张策
【作者单位】山西医科大学神经生物学研究室,太原,030001;山西医科大学神经生物学研究室,太原,030001;山西医科大学神经生物学研究室,太原,030001;山西医科大学神经生物学研究室,太原,030001;山西医科大学神经生物学研究室,太
原,030001
【正文语种】中文
【中图分类】R338.2
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2023届河北省衡水中学泰华中学高三决胜新高考生物密卷(11)

2023届河北省衡水中学、泰华中学高三决胜新高考生物密卷（11）一、单选题（共20分）1．下列各选项中，能看作进入人体内环境的是（）A．将酸奶饮入胃中B．氧气进入组织细胞内C．病人通过肌肉注射药物D．洗澡时耳中进水2．如图为人体细胞与内环境之间物质交换的示意图，①②③④分别表示人体内不同部位的液体。

据图判断下列说法正确的是（）A．体液①为血液，含有胆固醇、氨基酸、尿素、CO2等物质B．①、②、④是机体进行细胞代谢活动的主要场所C．③若产生乳酸会引起①、②、④内pH的剧烈变化D．血红蛋白不存在于①中，且①中血浆蛋白含量减少可导致②内渗透压相对升高3．人在进行一定强度的体力劳动后，手掌或脚掌上可能会磨出水泡。

一段时间后水泡可自行消失。

下列有关说法不正确的是（）A．水泡中的液体属于人体内环境，其成分中蛋白质的含量较高B．水泡主要是由血浆中的水大量渗出到组织液形成的C．水泡自行消失是因为其中的液体可以渗入毛细血管和毛细淋巴管D．水泡的形成和消失说明内环境中物质是不断更新的4．分析图中肝细胞与甲、乙、丙三种细胞外液的物质交换关系，叙述正确的是（）A．如果甲中蛋白质含量偏低，将会出现组织水肿B．NaHCO3可与乙中的乳酸反应，使乙pH稳定在～C．甲、乙、丙维持内环境稳态的调节机制是神经—体液调节D．乙中的葡萄糖进入肝细胞被氧化分解，葡萄糖至少穿过了5层磷脂双分子层5．如图为高等动物体内细胞与内环境进行物质交换的相关示意图，有关叙述不正确的是（）A．内环境与I交换气体必须通过肺泡壁B．②主要指泌尿系统排出代谢废物的过程C．Ⅳ指皮肤，是人体最大的器官D．Ⅱ内的葡萄糖通过①进入血液的方式属于协助扩散6．下列关于神经元和神经调节过程的叙述，正确的是（）A．乙酰胆碱在突触间隙中经主动运输到达突触后膜B．每个神经元的轴突和树突外周都包有髓鞘C．在完成反射活动时，兴奋在神经纤维上双向传导D．运动神经元产生的神经冲动可沿轴突传送给效应器7．训练小狗趴下的过程是这样的：先给小狗下命令“趴下”，并用手施力让小狗趴下；当小狗完成这一动作时就要给予狗粮奖励，经过反复训练，小狗就能按照命令完成趴下的动作。

神经生物学中的钠离子通道

神经生物学中的钠离子通道作为一种重要的离子通道，钠离子通道在神经元动作电位的产生和传递过程中发挥着至关重要的作用。

本文将就神经生物学中的钠离子通道做一个简单的介绍。

1. 神经元动作电位的产生和传递在神经系统中，神经元之间的信息传递是通过神经元动作电位来实现的。

神经元动作电位是由离子通道的开放和关闭所引起的离子流动所产生的一个电流信号，该信号沿着神经元轴突快速传递，实现了神经元之间的信息传递。

2. 钠离子通道的特点钠离子通道是一种跨膜蛋白质，在细胞膜上形成了一个长长的蛋白管道。

当神经元受到刺激时，这个管道会通过一系列的通道蛋白分子的协同作用，产生出大量的钠离子通道的开放，使得神经元内外的电位差迅速发生了变化。

这种变化会进一步导致其他离子通道的开放关闭，最终形成了神经元动作电位。

3. 钠离子通道失调会引起哪些疾病？如上所述，钠离子通道在神经元中起着重要的作用。

因此，钠离子通道的失调会直接导致神经系统的疾病。

目前，有许多与钠离子通道相关的疾病已经被发现，其中最常见的就是癫痫、震颤等神经系统疾病。

4. 钠离子通道药物的发展现状由于钠离子通道的重要性，以及许多相对于钠离子通道失控引起的疾病的重要性，研究者们对钠离子通道开发治疗手段的兴趣与热情一直很高。

到目前为止，已经有许多药物被开发出来，例如抗癫痫药物、抗心律失常药物等。

这些药物都能够通过改变钠离子通道的特性，从而抑制神经元动作电位的发生，以达到治疗效果。

5. 钠离子通道的未来发展趋势随着科技的不断进步，钠离子通道的研究也将迎来更多的挑战与机遇。

钠离子通道药物的研发将会越来越精细化，钠离子通道的结构与功能研究也将会越来越深入，这些都将会为神经系统疾病的诊断与治疗提供更加精准和高效的手段。

总之，钠离子通道在神经生物学中发挥着重要的作用，它的结构和功能研究，钠离子通道药物的研发都具有着重要的意义。

我们有理由相信，在不久的将来中钠离子通道的研究将会进一步深化，从而为神经系统疾病的治疗做出更加突出的贡献。

慢性脑缺血大鼠皮层、海马区BDNF及其受体TrKB的表达与认知功能障碍

论文分类号R741.05 单位代码 10183密级公开研究生学号 2005732122吉林大学硕士学位论文慢性脑缺血大鼠皮层、海马区BDNF及其受体TrKB的表达与认知功能障碍Cognitive impairment and Expression of BDNF、TrKB of cortex and hippocampus in chronic cerebral ischemia rats作者姓名：尹昌浩专业：神经病学导师姓名：冯加纯及职称：教授学位类别：医学硕士论文起止年月：2007年1月至2008年4月吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的硕士学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。

除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。

对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。

本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。

学位论文作者签名：日期：年月日中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿声明研究生院：本人同意《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》出版章程的内容，愿意将本人的学位论文委托研究生院向中国学术期刊（光盘版）电子杂志社的《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》投稿，希望《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》给予出版，并同意在《中国博硕士学位论文评价数据库》和CNKI系列数据库中使用，同意按章程规定享受相关权益。

论文级别：■硕士□博士学科专业：神经病学论文题目：慢性脑缺血大鼠皮层、海马区BDNF及其受体TrKB的表达与认知功能障碍作者签名：指导教师签名：年月日作者联系地址（邮编）：吉林大学第一医院神经内科（130021）作者联系电话：作者姓名尹昌浩论文分类号 R741.05 保密级别公开研究生学号 2005732122 学位类别医学硕士授予学位单位吉林大学专业名称神经病学培养单位（院、所、中心）吉林大学第一医院研究方向慢性酒精中毒和脑血管病学习时间2005 年9 月至2008年 6 月论文中文题目慢性脑缺血大鼠皮层、海马区BDNF及其受体TrKB 的表达与认知功能障论文英文题目Cognitive impairment and Expression of BDNF、TrKB of cortex and hippocampus in chronic cerebral ischemia rats关键词（3-8个）关键词：慢性脑缺血；Morris 水迷宫；记忆；内源性神经保护；BDNF;TrKB；姓名冯加纯职称教授导师情况学历学位博士工作单位吉林大学第一医院论文提交日期2008年4月14日答辩日期2008年5月8日是否基金资助项目否基金级别及编号如已经出版，请填写以下内容出版地（城市名、省名）出版者（机构名称出版日期出版者地址（包括邮编）内容提要目的研究慢性脑缺血的损伤机制和慢性脑低灌注中额颞叶皮层、海马区BDNF-TrKB的表达变化规律，明确其内源性的保护机制及其对慢性脑缺血后认知功能的影响。

大鼠海马神经元的培养及细胞培养注意事项

1.成年大鼠海马神经元的培养●步骤1.获得海马细胞◆大鼠乙醚麻醉，断头处理；◆迅速解剖海马组织，置于含有2ml 4℃的HibernateA/B27的35mm的培养皿中；◆随后将其移入含有同上培养基的培养皿，去除脑膜及多余的脑白质（？）；◆将海马移入组织切碎机冷处理台面上事先用HibernateA/B27润湿的滤纸上，沿海马长轴将组织切成的薄片，随后将其移入含有5ml4℃的HibernateA/B27的离心管中；◆30℃震荡8min。

◆大吸管将其移入含有木瓜蛋白酶（预热至30℃）的离心管，置于170rpm的旋转平台（保持组织片悬浮状态），30℃水域温育30min；◆将海马组织切片移入15ml含有2mlHibernateA/B27的离心管中，30℃温育5min，吸管吹打10次（30s），静置2min，将上清移入另一离心管，重复上述步骤2次；2.梯度分离◆将细胞悬液加入Nycoprep gradient（4ml）的上方，室温，1900rpm，离心15min；去除最上方的碎片；吸管收集含有细胞的部分；用5mlHibernateA稀释；第三层富含神经元；将第四层用2 ml B27:NeurobasalA重悬，1100rpm离心1min；3.盖玻片处理：50ug/mL多聚-D-赖氨酸（无菌水溶解）包被过夜，吸去多余的多聚赖氨酸，无菌水漂洗一次，自然干燥1h；4.◆细胞接种：以目标密度稀释于B27:NeurobasalA，以每盖玻片60到120 Ul 接种，置于5% CO2:9% O2中孵育1h；◆将盖玻片移入24孔培养板中,每孔以0.4ml 37℃B27/NeurobasalA漂洗一次，去除未贴壁细胞及细胞碎片；改用的生长培养基；◆培养后4天，每3-4天更换一半培养基；新的培养基中的FGF2含量是远培养基的2倍；1.培养器皿的准备：1）溶液瓶——装配各种溶液——输液瓶；2）螺口瓶——血清或培养基；3）培养瓶——细胞培养——一般采用带螺口的，清洗时注意防止盖子中垫片的丢失；4）培养皿——细胞组织的分离、培养、染色——包括直径为30mm、60mm、120mm5）血球细胞计数板——细胞计数6）移液管——连接上手动（吸耳球）或电动负压吸取装置——在移液管尾部塞入少量脱脂棉；7）离心管——分离、漂洗、收集细胞——一般选用螺口带盖的；Eppendorf ——塑料尖底带盖的离心管8）磁力搅拌器：用于神经细胞的分离机溶液的配置；最好配合使用可调温度的加热装置；可用高压蒸汽消毒。

膜片钳问题解答

膜片钳常见问题解答1.什么是电压钳与膜片钳，有什么区别？答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流（怎么注射），抵消离子通道开放时所产生的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。

由于注射电流的大小与离子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。

膜片钳技术钳制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极与细胞膜发生紧密接触，使尖端下的这片细胞膜在电学上与其它细胞膜分离(怎么分离)，这大大降低了背景噪声，使单通道微弱的电流得以分辨出来。

采用电压钳技术将这片膜的电位钳制在某一数值，可记录到单通道电流。

从这点上看，膜片钳技术是特殊的电压钳技术。

随着膜片钳技术的发展，它已经不仅仅局限于“膜片”的概念，也不仅仅采用电压钳技术，还常采用电流钳技术。

2. 离子通道电导的单位是什么？如何换算？答：离子通道电导的单位是西门子（Siemens, S），旧称姆欧，即安培/伏特。

常用皮西门子（pS），1pS＝10E-12 S，1,000 pS＝1 pA/mV。

3. MultiClamp 700A中，在放大器和信号器的连接中，放大器的raw output是否需要连接信号器的ANALOG IN 接口? scaled output，raw output有什么区别?答：Raw output为原始信号输出，放大器输出的信号没有经过处理（如滤波、放大等），scaled output为定标输出，输出的信号经过了处理。

后者的灵活度大，因此多采用。

目前膜片钳放大器多设有scaled output，你可将其与数模转换器（你所说的信号器）的ANALOG IN连接，这样放大器的输出信号就能传送给计算机了，此时已经没有必要再使用Raw output了。

若你想记录两个输出，则需要将Raw output与数模转换器的另一个ANALOG IN连接。

4. 在Clampex的Edit protocol/Wave中，Step和ramp各有什么适用范围？答：Ramp多用于电流衰减缓慢的离子通道以及失敏不明显的受体通道的I-V曲线制作，如多用于钾、钙离子通道。

急性心肌梗死模型大鼠探索行为及海马神经元中脑源性神经营养因子表达的变化

急性心肌梗死模型大鼠探索行为及海马神经元中脑源性神经营养因子表达的变化张晓鑫;王艳;杨清成【摘要】目的探讨急性心肌梗死(AMI)大鼠探索行为和海马神经元中脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化.方法将25只健康雄性Sprague Dawley大鼠依据分层抽样法分为对照组(n=5)和AMI组(n=20).AMI组大鼠采用心脏左冠状动脉前降支结扎术制作AMI模型,对照组大鼠不做任何处理.采用旷场实验观察各组大鼠AMI前及AMI后3、7、10、14 d探索行为的变化,苏木精-伊红(HE)染色检测2组大鼠心肌组织变化;免疫组织化学染色法和Western blot法检测2组大鼠海马神经元中BDNF蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测2组大鼠海马神经元中BDNF mRNA表达.结果旷场实验结果显示,AMI前2组大鼠潜伏期、水平运动次数、垂直运动次数比较差异无统计学意义(P＞0.05);AMI后3、7、10、14 d,AMI 组大鼠潜伏期长于对照组,水平运动次数、垂直运动次数少于对照组(P＜0.05).HE 染色结果显示,AMI组大鼠心肌组织梗死区及梗死边缘区的心肌细胞出现核固缩现象,且有炎细胞浸润;对照组大鼠心肌细胞呈粉红色.免疫组织化学染色和Western blot检测结果均显示,AMI后7、14 d,AMI组大鼠海马神经元中BDNF蛋白表达量低于对照组(P ＜0.05);AMI组大鼠AMI后14 d海马神经元中BDNF蛋白表达量低于AMI后7 d(P＜0.05).AMI后7、14 d,AMI组大鼠海马神经元中BDNF mRNA相对表达量低于对照组(P＜0.05);AMI后14 d,AMI组大鼠海马神经元中BDNF mRNA相对表达量低于AMI后7 d(P＜O.05).结论大鼠AMI后伴发抑郁样行为,其机制可能与海马神经元中BDNF表达显著降低有关.【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2019(036)003【总页数】6页(P218-223)【关键词】急性心肌梗死;抑郁症;海马;神经元;脑源性神经营养因子;探索行为【作者】张晓鑫;王艳;杨清成【作者单位】新乡医学院第三附属医院神经内二科,河南新乡453003;新乡医学院第三附属医院神经内二科,河南新乡453003;安阳市人民医院神经内科,河南安阳455001【正文语种】中文【中图分类】R542.2+2急性心肌梗死(acute myocardial infracted，AMI)发病率较高，且治疗难度大，预后差，给患者家庭和社会带来很大压力[1]。

膜片钳常见问题解答讲解

膜片钳常见问题解答（一）1.什么是电压钳与膜片钳，有什么区别？答：电压钳技术是通过向细胞内注射一定的电流，抵消离子通道开放时所产生的离子流，从而将细胞膜电位固定在某一数值。

由于注射电流的大小与离子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映离子流的大小和方向。

膜片钳技术钳制的是“膜片”，是指采用尖端经过处理的微电极与细胞膜发生紧密接触，使尖端下的这片细胞膜在电学上与其它细胞膜分离，这大大降低了背景噪声，使单通道微弱的电流得以分辨出来。

采用电压钳技术将这片膜的电位钳制在某一数值，可记录到单通道电流。

从这点上看，膜片钳技术是特殊的电压钳技术。

随着膜片钳技术的发展，它已经不仅仅局限于“膜片”的概念，也不仅仅采用电压钳技术，还常采用电流钳技术。

2. 离子通道电导的单位是什么？如何换算？答：离子通道电导的单位是西门子（Siemens, S），旧称姆欧，即安培/伏特。

常用皮西门子（pS），1pS＝10E-12 S，1,000 pS＝1 pA/mV。

3. MultiClamp 700A中，在放大器和信号器的连接中，放大器的raw output是否需要连接信号器的 ANALOG IN 接口? scaled output，raw output有什么区别?答：Raw output为原始信号输出，放大器输出的信号没有经过处理（如滤波、放大等），scaled output为定标输出，输出的信号经过了处理。

后者的灵活度大，因此多采用。

目前膜片钳放大器多设有scaled output，你可将其与数模转换器（你所说的信号器）的ANALOG IN连接，这样放大器的输出信号就能传送给计算机了，此时已经没有必要再使用Raw output了。

若你想记录两个输出，则需要将Raw output与数模转换器的另一个ANALOG IN连接。

4. 在Clampex的Edit protocol/Wave中，Step和ramp各有什么适用范围？答：Ramp多用于电流衰减缓慢的离子通道以及失敏不明显的受体通道的I-V曲线制作，如多用于钾、钙离子通道。

马桑内酯致痫大鼠海马区GABA和G1u在神经元和神经胶质内时空变化研究

ｃｒｉａｏｅＭｅｈｏＬｂｌｎＡＢＡａｄＧｕｉｉｐｃｍｐｓｏａｓａｉｅｅｔｔｙｉｏａａｌｔｎ．ｉｒｔｄｓａｅｌｇＧｉｌｎｈｐｏａｕｆｎＥＰｒｔｔｄｆｒｎｉｂｍｍｕｅｙｅｈｍｉａｈｏｏｙＲｅｕｌｓｍｅｎｔｅｃｌｅｎｌｇ．ｓｔｃｃｔｃ
元与神经胶质之间的时空变化情况。方法采用免疫细胞化学方法对癫痫发生不同时间段的鼠脑海马区进行ＧＢＡＡ和Ｇｕｌ
的标记。结果癫痫发作前期及间歇期，马区ＧＢ海ＡＡ和Ｇｕｌ在神经胶质内聚集明显，而癫痫发作期，ＡＡ和Ｇｕ在神经ＧＢｌ元内聚集明显。结论癫痫发作过程中，ＡＡ和ＧｕＧＢｌ存在一个从神经胶质转移到神经元后再转移到神经胶质的过程，这个
维普资讯
２８４第６第１０年月４１０卷期
・基础研究・
马桑内痫大鼠酯致海马区ＧＢＡＡ和Ｇｕ神经元和胶质内ｌ在神经时化研究空变
张秀丽郑德枢
（．１大连市中心医院神经内二科，大连１６３；．１０３２广州医学院神经科学研究所，广州５０６）１２０【摘要】目的观察马桑内酯致癫痫鼠脑海马内不同时间段兴奋性神经递质谷氨酸与抑制性神经递质一氨基丁酸在神经
ＳｔｙｈｅＴｅｐｏｒｕｄｏｆｔｍａｌＣｈａｅｏｆＧＡＢＡｄｕｎｇｎａＧｌｂｅｔｅｎｅｏｎｄｅｗｅＮｕｒｎａＮｕ－ｒｌａｎｉｏｇｉｉＨｐｐｏｃｍｐｕｓｏｆＲａｔＩｕｃｄａｎｄｅｂｙＣｏｒａｉＬａｏｎｅｉｒａｔ

SD大鼠海马神经元原代培养及形态学观察

（武汉博士德）、兔抗鼠ＮＳＥ单克隆抗体（北京中彬）。１．２实验方法新生乳鼠酒精消毒后断头取脑，于ＳＭＺ体视显微镜下分离海马组织，０．１２５％胰蛋白酶消化，吹打细胞悬液，台膀蓝染色计数，以１×１０～５Ｘ１０￣＂／ｍＬ细胞密度接种，置培养箱内培养，１ｄ后换为现配的Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ（２％的Ｂ２７）培养基继续培养，以后每３ｄ全量换液１次。取培养神经元，加小鼠抗大鼠ＭＡＰ一２（１：１００稀释）、兔抗鼠ＮＳＥ（１：１００）、一抗４℃过夜，加生物素标记二抗、亲合素，加入ＤＡＢ避光显色，以酒精脱水、二甲苯透明，树胶封片。阴性对照用ＰＢＳ代替一抗。光镜下观察神经元ＭＡＰ一２和
关键词海马神经元；原代培养；ＨＥ染色
ＰｒｉｍａｒｙＣｕｌｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄＯｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆＳＤＲａｔＨｉｐｐｏｃａｍｐａｌＮｅｕｒｏｎ
ＣＡ／Ｚｈｉｐｉｎｇ’ ＬＩＺｈａｏｈｕｉ，ＳＨＩＳｕｑｉｎ４ｅｔａｌ
，
，
（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｕｍａｎＡｎａｔｏｍｙ，ＢａｏｔｏｕＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，Ｂａｏｔｏｕ０１４０６０，Ｃｈｉｎａ；
■●一 ●一一
图１原代培养的海马神经元图片Ａ：原代培养海马神经元１２ｈ，倒置相差显微镜（×２００）；Ｂ：原代培养海马神经元１４ｄ，倒置相差显微镜（ｘ２００）；Ｃ：原代培养海马神经元１０ｄ，免疫组化染色显示ＭＡＰ一２阳性（×２００）；Ｄ：原代培养海马神经元ｌＯｄ，免疫组化ＰＢＳ为对照组显示阴性（×２００）；Ｅ：原代培养海马神经元１０ｄ，ＨＥ染色，黑色箭头显神经胶质细胞，黄色箭头显示为神经元（ｘ３００）；Ｆ：原代培养海马神经元１０ｄ，Ｎｉｓｓｌ染色（×ｚｏｏ）

对比分析海马CA1和CA3神经元基本电生理特性-人体生理学论文-基础医学论文-医学论文

对比分析海马CA1和CA3神经元基本电生理特性-人体生理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——海马是大脑中被广泛研究的热点脑区之一,海马CA1 和CA3 神经元是实验研究中常用的两类神经元且均匀的位于清晰易见的细胞带上,与一些生理行为学和神经系统疾病研究相关联。

CA1 神经元具有明显的海马信号输出环路,在长时程记忆和相对空间任务及行为学上有重要作用。

CA3 神经元位于大脑颞叶海马里,被各种抑制性神经元所调节,CA3 神经元从齿状回神经元接收信息与CA1 神经元有雪佛侧枝相连接,也被应用于记忆方面的研究。

另外,CA1 和CA3 神经元异常放电亦与癫痫等神经系统疾病有关。

该实验制作急性海马脑片,比较分析CA1 和CA3 神经元基本电生理特性,为记忆和神经疾病等研究提供一定的理论基础。

1、材料与方法1. 1 实验动物C57 /BL6 型小鼠10 只,出生约14d,体重约30 g,清洁级,由维通利华公司提供,雌雄不限。

1. 2 仪器与试剂1. 2. 1 主要仪器Leica VT 1200 型振动切片机(Leica Biosystems Nussloch GmbH,德国);电极拉制仪(P-98,美国);膜片钳系统(HEKA,德国);相差红外微分干涉显微镜(Olympus,日本)。

1. 2. 2 主要试剂实验试剂均购自美国Sigma 公司。

解剖液(mmol/L): Sucrose 213、Glucose 10、KCl3、NaH2PO41、CaCl20. 5、MgCl25、NaHCO326,用NaOH 或HCl 调pH 至7. 30 ~ 7. 40,渗透压约为310mOsm。

人工脑脊液( mmol / L ): Glucose 10、NaCl125、KCl 5、NaH2PO41. 2、CaCl22. 6、MgCl21. 3、NaHCO326,调pH 至7. 30 ~ 7. 40。