初始污染菌检查
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书一、引言在日常生活和工业生产中，微生物污染是一个不可忽视的问题。
特别是在食品加工、制药、卫生保健和医疗设施等领域，微生物污染可能对人体健康造成严重影响。
因此，对于这些领域中的设施和设备进行初始污染菌检测至关重要。
本指导书旨在提供一份详细的指南，以帮助进行有效的初始污染菌检测。
二、定义1. 初始污染菌：指在设施和设备投入使用之前，存在于环境中的微生物菌群，可能对人体健康产生影响的细菌、真菌、病毒等。
2. 初始污染菌检测：是通过采集、分离和鉴定设施和设备表面的微生物来评估其是否受到初始污染的检测方法。
三、初始污染菌检测的步骤1. 准备工作在进行初始污染菌检测之前，需要做好以下准备工作：- 确定检测的目标区域：根据需要，确定需要检测的设施和设备区域。
- 收集必要的工具和材料：包括培养基、采样棉签、橡胶手套、消毒剂等。
- 清洁检测区域：确保待检测的区域清洁整齐，以减少外界污染的干扰。
2. 采样- 选择合适的采样方法：根据不同的设施和设备，选择合适的采样方法，常见的包括印迹法、刷子法、划线法等。
- 采样过程中的注意事项：确保采样过程中的卫生条件，佩戴橡胶手套，并在每个采样点上更换新的采样棉签，以避免交叉污染。
- 采样点的选择：根据设施和设备的特点，选择具有代表性的采样点，如接触频繁的表面、接口和难以清洁的区域。
3. 分离与鉴定- 样品处理：将采集到的样品，按照合适的程序进行处理，包括加入适量的培养基，进行可行菌总数的分析。
- 培养与鉴定：将样品在适当的温度和湿度条件下进行培养，待细菌或真菌生长形成菌落后，再通过各种常见鉴定方法（如形态学观察、生化试验、分子生物学技术等）来鉴定菌落的种类。
- 数据记录与分析：将分离鉴定得到的数据记录下来，进行统计和分析，了解初始污染的菌群组成和水平。
四、初始污染菌检测结果的评估与应对1. 结果评估根据初始污染菌检测结果，可以对设施和设备的初始污染情况进行评估。
初始污染菌检测指导书
初始污染菌检测指导书
一、引言
污染菌是指存在于环境中、能够引起食品、水、土壤等特定物质污染的微生物菌种。
这些污染菌对人类健康和环境质量构成潜在威胁。
为了保障公众健康和环境平安，进行初始污染菌检测是必要的。
二、目的
本指导书的目的是提供一个简明的初始污染菌检测流程，以确保检测结果的准确性和可靠性。
通过采用合理的检测方法和技术，有助于及早发现并控制可能存在的污染源，以保护公众的健康和环境的可持续发展。
三、检测方法
1. 样品采集
a. 样品采集前，请确保操作者严格遵守个人卫生要求，包括洗手、穿戴一次性手套等，并准备好干净的采样容器。
b. 根据具体的检测目的和样品类型，选择合适的采集方法。
例如，对于食品样品，可以使用无菌勺子、无菌容器等进行采集。
c. 采集样品时，应避免污染，尽量避免触摸容器内壁，同时避免与外界环境接触。
2. 样品处理和制备
a. 样品采集后，尽快将样品送至实验室进行处理和制备。
b. 根据具体的检测要求，进行样品的预处理，如去除杂质、负离子等。
c. 样品制备过程中，请注意避免交叉污染，使用一次性无菌工具、器皿等进行操作。
3. 检测方法选择
a. 根据检测目标，选择适当的检测方法。
常见的初始污染菌检测方法包括培养法、荧光定量PCR法等。
b. 对于食品等需要进行快速检测的样品，可以选择快速检测方法，如基于抗原-抗体反应原理的快速检测方法等。
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程1. 目标检测产品、原料、辅料实际带菌（活微生物群）数目。
2. 适用范围适适用于本企业产品、原料、辅料初始污染菌检测。
3.职责由质检部负责实施实施。
4.技术要求产品、原料初始污染菌数：≤100cfu/g5.引用标准GB 15979- _一次性使用卫生用具卫生标准中国药典（）GB/T 14233.2- 医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学试验方法6.试剂和培养基6.1洗脱液0.9%Nacl称好9gNaCl溶于1000ml蒸馏水中，充足搅拌直至完全溶解，灭菌备用。
6.2胰蛋白胨大豆琼脂培养基取胰蛋白胨大豆琼脂培养基38g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调整PH 为7.3±0.2，灭菌分装。
6.3玫瑰红钠琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基31.5 g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解后，调整PH为6.0±0.2，灭菌分装。
7.仪器设备锥形瓶量筒高压灭菌锅试管灭菌培养皿灭菌刻度吸管超净工作台酒精灯恒温培养箱洗耳球8.操作方法8.1样品处理8.1.1无菌称取10g能够破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充足振荡，保温于45℃水浴中5～10min，作为1：10供试液。
8.1.2对供试品不能采取破坏性取样可用浸有没有菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。
保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇，作为1：10供试液。
8.2接种8.2.1需厌氧菌取制备好供试液接种于有胰蛋白胨大豆琼脂培养基培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种3支。
取一支有培养基空白平皿做阴性对照。
8.2.1霉菌取制备好供试液接种于有玫瑰红钠琼脂培养基培养皿中，每支平皿接种1ml供试液，接种2支。
取一支有培养基空白平皿做阴性对照。
8.3培养需厌氧培养基置于37℃培养3d ，霉菌培养置于28℃培养5d9.观察计数达成培养时间后，观察阴性对照，若阴性对照有菌，则试验失败，应重新进行；阴性对照无菌，则可取出平皿计数，统计每个平皿菌落数10.结果计算和汇报10.1公式污染菌总数＝平均菌落数×稀释倍数/克重10.2菌落计数基础规则选择平均菌落数在30～300之间稀释级作为汇报菌落数测定范围。
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程1、准备工作1）与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌，置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。
2）采样数量：每批产品随机抽取10件样品.3）检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》：≤100cfu/件次。
4）洗脱液、稀释液采用0.9％无菌氯化钠溶液。
2、试验步骤：1）用无菌手续取出10个样品，分别放入10支装有10ml0.9％无菌氯化钠溶液的试管中，将每个采样管震打80次，混匀，分别吸取1ml放入灭菌平皿，用普通琼脂培养基作倾注培养，置37℃温箱培养48±2h观察结果。
2）用肉眼直接计数，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。
3）计算公式为：菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。
阴性对照试验：将使用的0.9％无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
制备2个平板均不得有菌生长。
3、注意事项：1）在无菌操作台上做试验，防止环境对样品的再次污染，采取一切措施防止人为对样本的污染。
2）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别，必要时用显微镜鉴别。
编制：审核：批准：ZC-14-8初始污染菌监测操作规程1范围适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装（接触手套的小包装）的监测。
第一个月每周进行一次监测，如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次，如果3个月都稳定，监测周期改为每季度一次。
2职责质管部负责取样、按ISO 11737进行试验、如试验结果初始污染菌超过6 cfu/cm2,要及时查找原因，提出改进措施，包括工艺中产品防护和进行环境消毒。
3 生物负载测定方法A.1 概要A.1.1 生物负载测定，可使用不同的方法内容。
初始污染菌检验标准操作规程
初始污染菌检验标准操作规程1 目的:建立产品初始污染菌数检验及分析标准操作规程。
2 责任:质量检验人员负责执行此规程。
3 范围:适用于未灭菌产品初始污染菌数验证试验的检测分析。
4 内容:4.1 初始污染菌检测4.1.1 器材与试剂4.1.1.1 器材(1)生化培养箱、霉菌培养箱(2)立式灭菌柜(3)超净工作台(4)无菌过滤装置(5)无菌镊子、无菌剪子(6)电子天平(7)移液器(8)接种环4.1.1.2 稀释液、冲洗液pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液4.1.1.3 培养基营养琼脂培养基:按说明书方法保存配制。
4.1.2 检验方法:平皿法4.1.2.1 供试液的制备供试品是纱布可用无菌手续称取10g,放入100mlpH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。
作为1:10的供试液。
供试液10倍递减稀释。
供试品是液体取样10ml加至100mlpH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液中充分振荡后取样。
作为1:10的供试液。
供试液10倍递减稀释。
4.1.2.2 供试液操作方法每个稀释级各吸取1ml至直径90mm的无菌平皿中，注入15,20ml温度不超过45?的溶化的营养琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。
每个稀释级注2个平皿。
4.1.2.3 阴性对照取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，置无菌平皿中，注入培养基，凝固，倒置培养。
每种计数用的培养基各制备2个平板，均不得有菌生长。
4.1.2.6 培养条件将已经凝固的平板倒置于37?培养箱中，一般培养48?2h。
4.1.2.7 计数将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。
必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。
4.1.2.7.1 菌落计数基本规则?选取平均菌落数在30,300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
如只有1个稀释级平均菌落数在30,300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。
?如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30,300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。
初始污染菌检测
•特点
〔1〕优点：简便，易推广。
•本卷须知
〔1〕液体石蜡的高度。
〔2〕定期检查。
〔3〕做好记录。
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第二十五页
无菌技术
•斜面培养基接种技术 •方法
1. 左手持别离培养的平板培养基，右手持接种环，经火 焰烧灼，冷却后在平板上挑取菌落。
2. 左手立即放下平板，换持斜面培养基，用右手小指和无名 指拔出管塞，夹持于手指之间。
• 无菌操作在有洁净级别的实验室中进行，与试验相 关的金属器械、玻璃器皿、稀释剂等应经过灭菌处 理；其他的材料应经过外表消毒、紫外线照射消毒 后，再带入实验室 。
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第二十一页
无菌技术
• 实验室平安制度 1.平安通那么
2.生物平安 •微生物检验质量控制制度
1.技术培训和考核制度
2.仪器和试剂的校对制度 3.实验记录制度 4.结果质疑和核对制度
4、洗手消毒：首先用肥皂涂在手上揉搓10～15s，肥皂虽不杀菌， 有去污作用，然后用流水彻底冲洗，可有效除去手上大多数暂 住菌，如连续洗2～3次(视手的污染程度)，使剩余的微生物减
少到最低水平，再用消毒液洗手，如洗必泰、苯扎溴铵、碘
伏、乙醇、过氧乙酸等。
5、操作人员将手部消毒后，再穿戴无菌工作服(包括鞋、帽、口罩 等)。严格的无菌服应是戴帽套头的无扣的上衣，颈部、脸部及
微生物学是研究微生物的形态结构、分类、生理代谢、遗传变异、 生态分布和微生物与人类、动植物关系等的一门学科。我们对微生 物深入研究的目的在于更好地开发微生物资源，充分利用微生物有 利于人类生活方面。控制微生物的有害方面，使之更好地为人类效 劳。
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第四页
《初始污染菌检测》课件
新技术应用
自动化技术
利用机器人和自动化设备进行样 品处理和检测，提高检测效率和
准确性。
生物技术
利用基因组学、蛋白质组学等技术 手段，对初始污染菌进行更精确的 检测和鉴定。
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术提高检测 灵敏度和特异性，实现痕量污染物 的快速检测。
检测标准与规范
制定统一的检测标准
建立全球通用的初始污染菌检测标准，确保检测结果的准确性和 可比性。
新。
分享最佳实践
分享各国在初始污染菌检测方面 的最佳实践和经验，提高全球检
测水平。
感谢您的观看
THANKS
提供食品卫生教育和培训，以提 高员工的食品卫生意识和技能。
医疗和制药行业的管理
制定严格的药品和医疗设备管 理程序，确保其安全性和有效 性。
定期检查药品和医疗设备的存 储和使用情况，以确保其符合 法规和标准。
提供药品和医疗设备管理和使 用的培训和教育，以提高员工 的意识和技能。
05
初始污染菌检测的未来发 展
02
初始污染菌的来源与种类
空气传播
空气中的微生物
空气中的细菌、病毒、霉菌等微生物是初始污染菌的来源 之一。这些微生物可随空气流动而传播，污染食品生产环 境。
空气传播的途径
空气传播是初始污染菌的主要传播途径之一，尤其是在食 品加工环境中，由于人员流动、通风设备的使用等，使得 空气中的微生物容易附着在食品上。
食品和水中的细菌、病毒、霉菌等微 生物也是初始污染菌的来源之一。这 些微生物可能来自于原料本身或是在 加工过程中污染。
控制措施
为了降低食品和水源中的初始污染菌 ，食品加工企业应加强原料检验和质 量控制，定期进行水质检测和处理， 加强食品加工过程的卫生管理。
初始污染菌检测
酵母菌形态特征
大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似，但比细菌菌落大而厚， 菌落外表光滑、潮湿、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和 边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色， 个别为黑色。
啤酒酵母的菌落
微生物群体生长规律
•规律的描绘
将少量单细胞纯培养接种到一恒定容积的新颖液体培养基中，在 适宜的条件下培养，定时取样测定其细菌含量，可以看到以下现象： 开场有一短暂时间，细菌数量并不增加，随之细菌数目增加很快，既 而细菌数又趋稳定，最后逐渐下降。假如以培养时间为横坐标，以细 菌数目的对数或生长速度为纵坐标作图，可以得到一条曲线，称为繁 殖曲线，通常又称为生长曲线。生长曲线代表了细菌在新的适宜的环 境中生长繁殖直至衰老死亡全过程的动态变化。根据细菌生长繁殖速 率的不同，可将生长曲线大致分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期 四个阶段。
细胞外表，只在菌体融解时
才释放，称为细菌内毒素。 其中脂蛋白A是内毒素的主 要生物学活性组分。
真菌形态特征
• 霉菌个体形态
霉菌亦称丝状真菌，是在分类学上很不一样的许多真菌的一部分，但 凡生长在营养基质上形成绒毛状、蜘蛛网状或絮状菌丝体的真菌，统称为 霉菌，霉菌为真核微生物，其构造比细菌复杂。
•酵母菌个体形态
3. 将管口在火焰上通过两三次，但勿烧烫。再迅速将 挑取有菌的接种环伸进斜面内，从斜面的底部向上 划一条接种线，又自下而上蜿蜒接种成曲线。
4. 退出接种环，塞上管塞。接种环经火焰灭菌后放置。 5. 培养后，沿接种线长出菌苔，非接种线的部位应无
细菌生长。
无菌技术
•别离技术 •划线别离法
组段间接种环的灭菌、冷却！
衰亡期：稳定期后如再继续培养 细菌死亡率逐渐增加，以 致死亡数大大超过新生数，群 体中活菌数目急剧下降，出现 了“负生长〞，此阶段叫衰亡期
初始污染菌检验规程
初始污染菌检验规程
背景介绍：
在实验室实验过程中，初始污染菌检验是非常重要的步骤。
初始污染菌指的是
空气、水、试剂或其他材料中存在的微生物。
检验规程的制定能够帮助实验室准确检测和控制初始污染菌的存在，确保实验结果的准确性和可靠性。
检验标准：
初始污染菌检验应符合国家相关标准要求，例如《实验室建设与管理规范》中
对于实验室环境洁净度的规定。
检验过程中应注意保持环境清洁，严格按照检验程序进行操作，确保检测结果的准确性。
检验步骤：
1.准备工作：检验前应检查所需试剂、工具和设备是否齐全，确保实
验室环境干净整洁。
2.取样：根据检验对象的不同，采取相应的取样方法，避免外界污染
的介入。
3.样品处理：对样品进行适当处理，如过滤、稀释等，以便得到合适
的实验样品。
4.培养：将样品接种在适当的培养基上，并在合适的环境条件下培养，
观察细菌的生长情况。
5.检测分析：通过显微镜观察细菌的形态特征，或进行生物学、生化
等相关检测，确定是否存在初始污染菌。
6.记录结果：将检验结果详细记录，包括检测方法、结果数据、存在
问题等，便于回顾和分析。
结论与建议：
初始污染菌检验是确保实验室环境洁净度和实验结果准确性的重要步骤。
在检
验过程中，应严格按照规程操作，保持实验样品的完整性和准确性。
实验室应建立健全的质量管理体系，加强对初始污染菌的监测和控制，不断优化检验方法，提高检测效率和准确性，确保实验室的质量与信誉。
初始污染菌检测课件
2024/7/26
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菌落计数
计数方法: 将平板置菌落计数器或从平板的背面直接 以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细 观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。
菌落特征: ⑴ 形态特征: 常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、
淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四 氮唑试剂)，菌落为红色） ⑵ 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突 起或扁平。 ⑶ 大小差异很大。
高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数
比值=————————————————————
低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数
当比值≤2时, 则以2个稀释级的平均菌落数均值报告；当比值>2但
不超过5时, 则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告；当比值大于
5, 或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时, 应
2024/7/26
2
检测环境及检验量
应在环境洁净度10000级下的局部洁净度 100级的单向空气区域内进行
一般供试品的检验量为3~10个独立包装 的同批次供试品。（见ISO 117371:2006 A8.1）
2024/7/26
3
实验材料及设备
营养琼脂培养基、pH7.0氯化钠-蛋白胨 缓冲液
D/B>70%
2024/7/26
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菌落计数报告规则—平板法
选取细菌、酵母菌平均菌落数在30～300之间、霉菌平均菌落数在 30~100之间的稀释级作为报告菌落数的依据。
1）如只有1个稀释级平均菌落数符合上述规定, 则将稀释级的菌落数乘 以稀 释倍数报告。
2）如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间, 则先计算两稀释 级菌落数的比值。
初始污染菌数检测
一、目的：为测试灭菌前以及内包装袋的初始污染菌是否符合标准。
二、适用范围：本厂产品以及包装袋。
三、引用标准：GB 15980-1995四、所用的仪器和设备1、高压消毒锅：使用时严格按照仪器说明书操作。
2、恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。
3、培养皿：一般采用90mm×15mm的硼酸玻璃培养皿。
4、生理盐水：浓度为 0.9%5、灭菌规格板：5×5cm；玻璃试管：13×150mm6、培养基：普通肉汤琼脂培养基，其配制方法见试剂说明书五、、操作步骤1、对敷料类可用无菌手续取10g，放入 100mL 灭菌生理盐水中，充分震荡 80 次后。
取各管洗液进行检测。
2、对导管类:选取三套新制备的样品，在净化操作台上，将每套样品用无菌的剪刀剪成大约 1 厘米长的段，放入事先灭菌的具塞三角瓶中，加 50 毫升生理盐水，加塞，充分震荡，使样品的内壁、外壁得到充分的洗脱，然后将冲洗液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中，立即盖好备用。
将每一样本洗液充分均匀后，接种2 个平皿，每个平皿加入 1ml 洗液。
当估计含菌量过高时（每个平板生长菌落数超过 300 个），应对洗液进行稀释倍数再接种，一般需 2-3 个不同稀释度，每吸取一个稀释度洗液，更换一支无菌吸管。
3、将凉至45℃普通琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿约 15-20ml 培养基。
4、将培养基与样液小心摇匀，待琼脂凝固后倒置平皿，置37℃培养箱内培养 48h，计算最终结果菌落数。
六、采样数量：各类产品每批随机抽取 10 件样品。
七、结果计算计算公式为：菌数/每件次（或g） = 平均菌数×稀释倍数---------------------(C2)件次或重量（g）初始菌试验报告检品名称生产批号检验日期检验人复核人一、细菌数测定（37±1℃，3 天）初始菌试验报告检品名称生产批号检验日期检验人复核人一、霉菌数测定（27±1℃，3 天）样品天数123评价表示：卫生标准结果判断样品2出现浑浊用“х”没有出现浑浊用“√”100 个/套合格（）不合格（）性照阳对性照阴对31样品天数123评价表示：卫生标准结果判断样品2出现浑浊用“х”没有出现浑浊用“√”100 个/套合格（）不合格（）性照阳对性照阴对31。
医疗器械无菌和初始污染菌检
≤200 ≤20
不得检出不得检出
不得检出不得检出
≤100 不得检出
尿布等 普通级 消毒级
— ≤10 000
≤200 ≤20
不得检出不得检出
不得检出不得检出
≤100 不得检出
注：致病性化脓菌指绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌与溶血性链球菌。
初始污染菌的检验
03
02
当菌落数在100以内，按实有数报告，大于100时采用二位有效数字。
超净工作台
恒温培养箱（至少2台）
压力蒸汽灭菌器
电热干燥箱
集菌仪
电子天平
光学显微镜
环境及人员要求
无菌检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
需氧菌生长
厌氧菌生长
培养基:
改良马丁培养基： 23℃ ~ 28℃培养14天
培养基:
培养基的适用性检查
无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。
01
02
灵敏度检查所用菌种 （药典2010版规定） 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉
待琼脂凝固后翻转平皿置35 ℃±2 ℃培养48h后，计算平板上的菌落数。
取上清液共接种5个平皿，每个平皿中加入1mL供试液
稀释度 5
医疗器械的无菌和初始污染菌检验相关标准
初始污染菌检测
随着时间的推移，相关法规与标准可能会发生变化。检测机构应关注法规与标准的更新 动态，及时调整自己的检测方法和操作规程。
提高检测效率的建议
优化实验流程
采用自动化设备
加强团队合作
通过合理安排实验流程，减少不必要 使用自动化设备进行初始污染菌检测，
的环节和操作，提高检测效率。例如， 可以大大提高检测效率和准确性。例
培训方式
02
采用理论教学和实践操作相结合的方式，确保采样人员能够熟
练掌握相关技能。
培训考核
03
对完成培训的采样人员进行考核，确保其具备从事初始污染菌
检测工作的能力。
03
检测操作流程
采样
采样点选择
根据检测目的和要求，选择具有代表性的采样点，如食品生产车 间、食品加工设备、食品接触表面等。
采样量控制
在实施过程中，持续监测污染菌 的情况，评估措施的有效性，并 根据需要进行调整和改进。
05
注意事项与建议
保证检测的准确性
选择合适的检测方法
根据不同的污染菌种类和检测目的，选择合适的检测方法， 确保准确性和可靠性。
严格控制实验条件
确保实验室环境、设备、试剂等符合相关标准和规定，避 免交叉污染和误差。
定期校准和验证
对检测设备、仪器进行定期校准和维护，确保其准确性和 可靠性。同时，对检测方法进行验证，确保其符合预期的 检测要求。
遵守相关法规与标准
熟悉相关法规与标准
在进行初始污染菌检测时，应熟悉并遵守国家或地区的相关法规与标准，确保检测合法 有效。
遵循操作规程
按照规定的操作规程进行检测，确保数据的准确性和可靠性，同时避免违反相关法规与 标准。
合理安排样品的处理、培养、观察等 如，自动化细菌分离、鉴定设备等。
初始污染菌检查
琼脂凝固后，倒置，37 ℃培 养48h
细菌计数
•基本概念
细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活 菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。
先用肉眼观察点数菌落数然后再用放大先用肉眼观察点数菌落数然后再用放大551010倍倍的放大镜检查以投射光衬以暗色背景以防遗漏的放大镜检查以投射光衬以暗色背景以防遗漏可辅助菌落计数器记下各平皿的菌落数后求可辅助菌落计数器记下各平皿的菌落数后求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数每个稀释出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数每个稀释度的55个平板值相加后除以个平板值相加后除以55
菌数/cm2=
平均菌数 稀释倍数 采样面积c（ m2）
菌数/每只手=平均菌数×稀释倍数
谢谢
计算公式
菌数/m3= 50000 N AT
式中： A——平板面积，cm2； T——平板暴露时间，min； N——平均菌落数。
标准限值：灭菌和消毒产品分别≤500和 ≤2000cfu/m3
物体表面和生产人员手细菌总 数检测方法
采样方法:
将内径为5cm×5cm的灭菌规格板，放在被检物体表 面，根据物体表面积大小，采平行样1～4个，用浸 有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次 （往返计为1次），将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水 的采样管中。
3、如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀 释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按稀释度最低的平均菌 落数乘以稀释倍数报告。
初始污染菌检验操作规程
初始污染菌检验操作规程方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。
每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。
4.6.3结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。
若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。
初始污染菌检验操作规程目的：本规程的目的是为了测定样品细菌总数，以判断样品细菌污染的程度，并评估生产单位的卫生状况，为下一步的灭菌提供参考依据。
适用范围：本规程适用于所有需要消毒灭菌前的产品和洁净车间。
作业条件：1.无菌检测需要在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。
2.超净台及工作台面必须进行洁净度验证。
作业方法与步骤：1.制作营养琼脂培养基，并按要求培养16-18小时后，检查无菌生长方可使用。
2.进行无菌室洁净度验证。
3.进行产品采集与样品处理，制备供试液。
4.进行供试液的10倍递减稀释。
5.进行接种检验。
6.进行培养。
结果与判定：1.计数方法：每个培养皿上菌落数超过300个，以最近的一个稀释级计数。
每个培养皿上菌落数在30-300个之间，以最近的两个稀释级计数，如最近的两个稀释级计数相差大于10倍，则应重新进行稀释。
2.结果判定：若每个培养皿上菌落数均小于规定标准，则样品合格；若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准，则进行进一步检验。
若进一步检验结果仍然超过规定标准，则样品不合格。
菌落计数是食品微生物学检验中常用的方法之一。
在进行菌落计数时，需要注意以下基本规则。
首先，不宜采用菌落层片状生长的平板。
其次，计数符合要求的平板上的菌落，按照公式计算结果。
具体而言，菌数除以每件次（或g）的重量，等于件次或重量（g）。
选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
如果只有一个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将该稀释级的菌落数乘以稀释倍数进行报告。
初始污染菌检查课件
阳性结果
在培养基上观察到菌落生长，表 明样品中存在污染菌。根据菌落 的形态、颜色、大小等特征，可
初步判断污染菌的种类。
可疑结果
培养基上观察到的菌落特征不明 显或难以辨认，需要进行进一步
的鉴定。
结果解释与报告
解释污染菌的来源
根据检测结果，分析污染菌可能来自生产环境、操作人员、 原材料等环节，提出相应的改进措施。
在实验过程中，注意个人防护和实验 室安全，避免交叉感染和意外事故的 发生。
实验结束后，按照实验室规定正确处 理废物，保持实验室的清洁卫生。
实验误差控制
严格控制实验条件和操作过程，减小 误差对实验结果的影响，确保实验结 果的准确性和可靠性。
01
初始污染菌检查的 结果分析
结果判读
阴性结果
在培养基上未观察到菌落生长， 表明样品中未检测到污染菌。
01
初始污染菌检查的 实验操作
实验前的准备
实验器材
准备实验所需的所有器材 ，如培养皿、接种环、酒 精灯等，确保其清洁和无 菌。
实验试剂
根据实验要求准备适量的 培养基、生理盐水等试剂 ，确保其质量和有效性。
实验样品
确保样品来源可靠，采集 过程规范，避免交叉污染 和外界污染。
实验操作流程
实验操作步骤
自动化检测技术
自动化检测技术将进一步提高初始污染菌检查的 效率和准确性，减少人为误差。
生物传感器技术
生物传感器技术可用于快速、准确地检测初始污 染菌，具有广阔的应用前景。
应用领域的拓展
食品安全领域
初始污染菌检查在食品安全领域的应用将进一步拓展，涉及食品 生产、加工、储存、运输等各个环节。
医疗领域
初始污染菌检查在医疗领域的应用将更加广泛，涉及医疗器械、药 品、手术室等环境的消毒和灭菌。
初始污染菌检测
初始污染菌检测⼀、⽬的检测产成品初始污染菌是否符合要求⼆、适⽤范围适⽤于⾮灭菌的产成品检验三、职责化验室化验员按标准操作规程检测四、仪器、设备⽣化培养箱、洁净⼯作台、电⼦天平、PH 计、压⼒蒸汽灭菌器、4℃冰箱、酒精灯、250Ml 的三⾓烧瓶、30Ml 试管、⽆菌镊⼦、⽆菌剪⼑、试管架、90mm 玻璃培养⽫、放⼤镜。
五、检验⽅法1.普通⾁汤琼脂培养基的制备 1.1所⽤试剂胨10g 氯化钠5g 琼脂15-20g ⾁浸液1000ml2.产品采集与样品处理于同⼀批号的三个运输包装中⾄少抽取200个最⼩销售包装样品，1/4样品⽤于检测，1/4样品⽤于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时⽤于复检。
抽样的最⼩销售包装不应有破裂，检验前不得启开。
在100级净化条件下⽤⽆菌⽅法打开⽤于检测的⾄少10个包装，从每个包装中取样，准确称取25g ±1g 样品，剪碎后加⼊到225ml 灭菌⽣理盐⽔中，充分混匀，得到⼀个⽣理盐⽔样液。
液体产品⽤原液直接做样液。
如被检样品含有⼤量吸⽔树脂材料⽽导致不能吸出⾜够样液时，稀释液量可按每次50倍递增，直到能吸出⾜够测试⽤样液。
在计算细菌菌落总数与真菌菌落总数时应调整稀释度。
⽂件号: QS/CKL03B-ZJ-26-A/0 受控状态⽂件名称：初始污染菌检测SOP 版本号编制时间修改状态：审核时间⽣效⽇期批准时间发放号六、细菌菌落总数与初始污染菌检测⽅法本⽅法适⽤于产品初始污染菌与细菌菌落总数（以下统称为细菌菌落总数）检测。
1.操作步骤量取100 Ml的供试液，采⽤滤膜过滤法，⽤供试液冲洗滤膜表⾯，并确保供试液完全覆盖滤膜表⾯。
（滤膜孔径不⼤于0.45um ；直径50mm）取出滤膜，菌⾯朝上贴于营养琼脂培养基上，做两个平⾏对照，同时做⼀个空⽩对照。
倒置于30℃±5℃恒温培养箱内培养3天，观察并记录结果，空⽩应⽆菌⽣长，若空⽩有菌⽣长该试验则视为⽆效。
2.结果报告计算平板上菌落的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数作为每克（g）/毫升(Ml)样品中平板菌落数。
(019)初始污染菌检验规程
1、目的通过检验产品的初始污染菌，了解产品在生产过程中受微生物的情况，以便更好地提高产品质量。
2、范围本方法适用于本公司生产的一次性使用静脉输液针（简称：输液针）、一次性使用无菌配药注射器带针（简称：配药注射器）、一次性使用无菌注射器带针（简称：注射器）、一次性使用输液器带针（简称：输液器）、一次性使用袋式输液器带针（简称：袋式输液器）及其配件、无菌产品初始包装等的初始污染菌的检验。
3、依据GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准中华人民共和国药典2010版第二部GB 8368 一次性使用输液器GB/T 19973.1-2005 （ISO 11737-1:1995）医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分:产品上微生物总数的估计GB 15980 一次性使用医疗用品卫生标准4、要求灭菌产品管道类内腔污染菌数：应≤10cfu/件次，外部应≤100cfu/件次；非管道类应≤100cfu/件次；敷料类应≤100cfu/g；消毒产品应≤1000cfu/件次或重量（g），具体见表1。
5 检验方法5.1卵磷脂、吐温80－营养琼脂培养基的配制：成份：蛋白胨 20 g牛肉膏药 3 g氯化钠 5 g琼脂 15 g卵磷脂肪 1 g吐温80 7 g蒸馏水 1000 g制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分(除琼脂外)加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、吐温80，混匀，调pH值为7.1～7.4加入琼脂，121℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。
5.2 样品采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。
5.3 供试液制备5.3.1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1：10的供试液。
5.3.2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1：10的供试液。
5.3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2，加入灭菌生理盐水100ml。
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初始污染菌检查
生物学检查初始污染菌检查空气中细菌总数检测方法物体表明和生产人员手细菌总数检测方法初始污染菌检测初始污染菌检测目的:保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。
引用标准: GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准中华人民共和国药典2010版附录微生物限度检查法 GB15980-1995 规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。
对一次性使用医疗用品(包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品)生产企业中生产、装配、包装车间(空气中细菌总数检查方法)等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。
检测环境和检验量在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。
洁净区设置可在微生物室操作各类产品每批随机抽样10件样品(10个包装) 方法主要步骤采样初始污染菌检测初始污染菌检测检验方法将每样取5份平行样(取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份
1:1000，……) 初始污染菌检测结果计算公式:
平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次(或
g) ―――――――――――――――――――
件次或重量(g) 注意事项: 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。
应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。
产品初始污染菌数限值: 灭菌产品管道类内腔?10cfu/件次，外部?100cfu/件次，非管道类?100cfu/件次，敷料类?100cfu/g;
消毒产品?1000cfu/件次或重量(g) 初始污染菌检测细菌计数细菌计数
先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏(可辅助菌落计数器)记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度
各平皿生长的平均菌落数(每个稀释度的5个平板值，相加后除以5)。
若平皿中
有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。
菌落特征 ? 形态特征:常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黄色(如果培养基中加入0.1%TTC 氯化三苯基四氮唑试剂，菌落为红
色) ? 边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。
? 大小差异
很大。
菌落计数基本规则菌落计数基本规则空气中细菌总数检测方法测定空气中动态下细菌总数。
采用平板暴露法:车间在30m2以上者，于东、西、南、北(距墙1m处)、中五点;小于30m2者，于一条对角线里、中、外三点，高度均在1.5m
处采样，将普通营养琼脂平板(9cm直径)按上述采样点和高度布放，暴露15min后
立即关盖，于37?温箱培养24h后观察后果，求出5个或3个采样点的平均菌数
计算公式菌数/m3 式中: A――平板面积，cm2; T――平板暴露时间，min;
N――平均菌落数。
标准限值:灭菌和消毒产品分别?500和?2000cfu/m3 物体
表面和生产人员手细菌总数检测方法采样方法: 将内径为5cm×5cm的灭菌规格板，放在被检物体表面，根据物体表面积大小，采平行样1,4个，用浸有灭菌生理盐水的棉拭子，在规格板内涂抹10次(往返计为1次)，将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的采样管中。
对生产人员手采样:被检人五指并拢，将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面，从指尖、甲沟至指根处往返涂抹10次后，
将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的试管中。
检验方法和结果计算将每个采
样管震打80次，混匀，10倍递减稀释，对每个稀释度取3个稀释度，分别取
1ml放于灭菌平皿内，每个稀释度倾注2块平板)，用普通琼脂培养基作倾注培
养，置37?温箱倒置培养24h，观察结果，取菌落数为30,300的平板计算，求出平均菌落数。
菌数/cm2 菌数/每只手平均菌数×稀释倍数 * * * 微生物学检查无菌检查微生物限度检查细菌、真菌数量控制菌其他(初始污染菌) 指标含义(～)
通过测定检品细菌总数可用来判明检品细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的综合依据。
供试液制备培养菌落计数采样方法供试液制备供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1:10的供试液。
2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。
作为1:10的供试液。
3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。
作为供试液。
4.可用破坏性方法取样供试品:(参照中华人民共和国药典2010年规定进行
5. 对有内腔的医疗用器:用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后取样。
6. 对一次性输液(血)器的零配件及其他医疗器械:直接用定量洗脱液
(1ml/10cm2)冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。
梯度稀释 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 供试液 9mlNacl 9mlNacl 1:10 1:100 1:1000 供试液制备推荐的制备方法样品制备供试液制备梯度稀释加样用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入100ml灭菌生理盐水中，不时振摇。
作为1:10供试液。
供试液10倍递减稀释。
尽量避免丝线等杂物的混入。
(1)每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注5个平皿。
(2)经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ?时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个注入1ml稀释液(灭菌生理盐水)灭菌空平皿作阴性对照。
按一个方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。
纱布模拟培养琼脂凝固后，倒置，37 ?培养48h 基本概念细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活
菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。
限制条件平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后计数。
它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下: ?以菌落数为基础。
CFU colony
forming units :一个菌落就是一个细菌形成单位，它可以由一个也可以由多个菌细胞形成。
?受特定培养基和培养条件限制。
?有繁殖能力的菌细胞才能认定“活菌”。
平皿号细菌数平行行间菌落均值 ? ? ? ? ? 37?48h菌落计
数 37?48h菌落计数阴性对照 1:100 1:10 1、选取平均菌落数在30,300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
如只有1个稀释级平均菌落数在30,300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。
2、如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30,300之间，则先计算两稀释级菌落数的
比值。
高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数比值―――――――――――――――――――― 低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数当比值?2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。
当比值 2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
补充:如有3个稀释级，平均菌落数均在30,300之间，则以后2级计算级间比值报告。
(增加解释2) 3、如各稀释级平
均菌落数均在300以上，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告;如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按稀释度最低的
平均菌落数乘以稀释倍数报告。
4、如各稀释级平均菌落数均不在30,300之间，则以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。
5、如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小于1时，应报告菌数为 10个/g或ml。
6、菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。
大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。
在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度细菌计数结果及报告方法 31000或3.1×104 30500 , 12 305 不可计 6 270或2.7×102 270 , 5 11 27 5 510000
或5.1×105 513000 , 513 4650 不可计 4 27000或2.7×104 27100 2.2 60 271 2890 3 38000或3.8×104 38000 1.6 46 295 2760 2 16000或1.6×104 16400 , 20 164 1365 1 10-3 10-2 10-1 报告方式个/g或个/ml 菌落
总数个/g或个/ml 两稀释度菌数之比不同稀释度的平均菌落数例次。