初始污染菌检查

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初始污染菌检验方法验证方案

初始污染菌检验方法验证方案

初始污染菌检验方法适用性验证方案文件编号:

编制/日期:

审核/日期:

批准/日期:

XXXX有限公司

1.验证目的---------------------------------------------------------3

2.范围-------------------------------------------------------------3

3.验证小组成员及职责-----------------------------------------------3

4.参考资料---------------------------------------------------------3

5.检验仪器及器具---------------------------------------------------3

6.菌种信息---------------------------------------------------------4

7.试验环境---------------------------------------------------------4

8.产品选择---------------------------------------------------------4

9.方法适用性验证---------------------------------------------------4

10.修正系数(校正因子)--------------------------------------------6

初始污染菌检验报告模板

初始污染菌检验报告模板

初始污染菌检验报告模板

检验单位信息

•检验单位名称:

•联系人:

•联系方式:

•检验日期:

化验样品信息

•样品名称:

•样品编号:

•生产日期:

•检验日期:

•样品数量:

•检验人员:

检验依据和方法

•检验依据:

•检验方法:

•检验标准:

检验结果

菌种CFU/g 结果

菌名1

菌名2

菌名3

菌名4

菌名5

结论和建议

本次检验样品存在菌落总数超标的现象,请及时采取措施解决。建议对生产环节进行进一步检测,找出问题根源并进行解决。

备注

•检验人员需要进行个人身体健康检查。

•检验过程中需要掌握正确的检验方法和操作流程,确保检验结果真实可靠。

•所有检验结果仅适用于样品本身,不代表其他样品的检验结果。

医疗器械的无菌和初始污染菌检验

医疗器械的无菌和初始污染菌检验

[CMCC(F) 98 001]
黑曲霉
(Aspergillus niger )
[CMCC(F) 98 003]
培养基的适用性检查
菌液制备: 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽
孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养 琼脂培养基上,接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫 乙醇酸盐流体培养基中,30℃~35℃培养18小 时~24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改 良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上, (23~28)℃培养(24~48)小时,上述培养物 用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1mL 含菌数小于 100cfu(菌落形成单位)的菌悬液。
真菌:为多细胞或单细胞微生物,其细胞分化完善,
有细胞核和各种细胞器,故易在体外生长繁殖,直径一
般为10μm ~ 100μm。
医疗器械无菌检验所需设备
超净工作台
医疗器械无菌检验所需设备
恒温培养箱(至少2台)
医疗器械无菌检验所需设备
压力蒸汽灭菌器
医疗器械无菌检验所需设备
电热干燥箱
医疗器械无菌检验所需设备
无菌检查人员必须具备微生物专业知识,并经过 无菌技术的培训。还应该具有高度的责任心和严 谨细致的工作作风。
无菌检查法 环境要求
无菌检查法 环境要求
隔离系统
无菌检查法 环境要求
无菌室在消毒处理完毕后,应检查空气中的菌落数。

初始污染菌检测

初始污染菌检测
将少量单细胞纯培养接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中,在适宜的 条件下培养,定时取样测定其细菌含量,可以看到以下现象:开始有一短暂 时间,细菌数量并不增加,随之细菌数目增加很快,既而细菌数又趋稳定, 最后逐渐下降。如果以培养时间为横坐标,以细菌数目的对数或生长速度为
纵坐标作图,可以得到一条曲线,称为繁殖曲线,通常又称为生长曲线。 生长曲线代表了细菌在新的适宜的环境中生长繁殖直至衰老死亡全 过程的动态变化。根据细菌生长繁殖速率的不同,可将生长曲线大 致分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。
2019年5月
23
第二十三页
无菌技术
•琼脂斜面低温保存法
•方法
将经常使用的菌种的典型菌落接种在斜面上,按规定的温度和时间培养,待充分生
长后,把培养好的新鲜菌种管用牛皮纸包好,4度冰箱保藏。每隔1个月移种一次,继 续进行保藏。
•适用范围
•特点
本法适用与经常使用的细菌、酵母菌等。
〔1〕优点:简便,易推广;一般不需要另选那么保藏用培养基;对大多数
•特点
〔1〕优点:简便,易推广。
•本卷须知
〔1〕液体石蜡的高度。
〔2〕定期检查。
〔3〕做好记录。
2019年5月
25
第二十五页
无菌技术
•斜面培养基接种技术 •方法
1. 左手持别离培养的平板培养基,右手持接种环,经火 焰烧灼,冷却后在平板上挑取菌落。

初始染菌数影响的质量指标

初始染菌数影响的质量指标

初始染菌数影响的质量指标

初始污染菌检验方法验证的目的是确保初始污染菌检验方法的适用性,从而保证检验结果的准确性。初始污染菌的数量可以反映出车间环境卫生的清洁度,与产品灭菌工艺、成品热原及内毒素有直接关系,故而要对其检测方法进行验证,确认其有效性及检测准确性,从而优化产品灭菌工艺及控制产品热原及内毒素,确保产品的安全性。

初始污染菌也称初始生物负载指产品或无菌屏障系统表面或内部的活微生物数量。不同国家对不同产品的生物负载有不同的要求。

初始污染菌检查时培养基的选择,医疗器械产品初始污染菌中培养基适用性检查菌种传代数不要超过5代,菌种种类目前主要有5种:大肠埃希菌 CMCC(B) 44 102

金黄色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003

枯草芽孢杆菌 CMCC(B) 63 501

白色念珠菌CMCC(F) 98 001

黑曲霉菌 CMCC(F) 98 003

获取菌种的方法:可从药检所采购自行培养稀释,它的缺点是操作繁琐,工作量大,菌数不准确。所以目前大多数企业都会选择商业化的培养基灵敏度指示剂,优点是方便,可以在5min之内完成操作,并且菌数准

确。主要步骤是将指示剂进行溶解混匀,取100ul接种,然后培养,所以说操作简便,菌量准确。

接种数量50-100CFU,不同的培养基接种的微生物种类不同而有所不同。供试品对照组制备:取制备好的供试液100ml,以稀释液代替菌液同试验组操作。

阴性对照组为确认试验条件是否符合要求所进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查。

样品份额(SIP),当整个样品不可能全部用于无菌检查时,可用样品的其中一部分用于无菌检查。

初始污染菌数检测

初始污染菌数检测

一、目的:为测试灭菌前以及内包装袋的初始污染菌是否符合标准。

二、适用范围:本厂产品以及包装袋。

三、引用标准:GB 15980-1995

四、所用的仪器和设备

1、高压消毒锅:使用时严格按照仪器说明书操作。

2、恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

3、培养皿:一般采用90mm×15mm的硼酸玻璃培养皿。

4、生理盐水:浓度为 0.9%

5、灭菌规格板:5×5cm;玻璃试管:13×150mm

6、培养基:普通肉汤琼脂培养基,其配制方法见试剂说明书

五、、操作步骤

1、对敷料类可用无菌手续取10g,放入 100mL 灭菌生理盐水中,充分震荡 80 次后。取

各管洗液进行检测。

2、对导管类:选取三套新制备的样品,在净化操作台上,将每套样品用无菌的剪刀剪成大

约 1 厘米长的段,放入事先灭菌的具塞三角瓶中,加 50 毫升生理盐水,加塞,充分震荡,使样品的内壁、外壁得到充分的洗脱,然后将冲洗液转移到另一个无菌的具塞三角瓶中,立即盖好备用。将每一样本洗液充分均匀后,接种2 个平皿,每个平皿加入 1ml 洗液。当估计含菌量过高时(每个平板生长菌落数超过 300 个),应对洗液进行稀释倍数再接种,一般需 2-3 个不同稀释度,每吸取一个稀释度洗液,更换一支无菌吸管。

3、将凉至45℃普通琼脂培养基,倾注于已加入样液的平皿中,每平皿约 15-20ml 培养基。

4、将培养基与样液小心摇匀,待琼脂凝固后倒置平皿,置37℃培养箱内培养 48h,

计算最终结果菌落数。

六、采样数量:各类产品每批随机抽取 10 件样品。

七、结果计算

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程

背景介绍:

在实验室实验过程中,初始污染菌检验是非常重要的步骤。初始污染菌指的是

空气、水、试剂或其他材料中存在的微生物。检验规程的制定能够帮助实验室准确检测和控制初始污染菌的存在,确保实验结果的准确性和可靠性。

检验标准:

初始污染菌检验应符合国家相关标准要求,例如《实验室建设与管理规范》中

对于实验室环境洁净度的规定。检验过程中应注意保持环境清洁,严格按照检验程序进行操作,确保检测结果的准确性。

检验步骤:

1.准备工作:检验前应检查所需试剂、工具和设备是否齐全,确保实

验室环境干净整洁。

2.取样:根据检验对象的不同,采取相应的取样方法,避免外界污染

的介入。

3.样品处理:对样品进行适当处理,如过滤、稀释等,以便得到合适

的实验样品。

4.培养:将样品接种在适当的培养基上,并在合适的环境条件下培养,

观察细菌的生长情况。

5.检测分析:通过显微镜观察细菌的形态特征,或进行生物学、生化

等相关检测,确定是否存在初始污染菌。

6.记录结果:将检验结果详细记录,包括检测方法、结果数据、存在

问题等,便于回顾和分析。

结论与建议:

初始污染菌检验是确保实验室环境洁净度和实验结果准确性的重要步骤。在检

验过程中,应严格按照规程操作,保持实验样品的完整性和准确性。实验室应建立健全的质量管理体系,加强对初始污染菌的监测和控制,不断优化检验方法,提高检测效率和准确性,确保实验室的质量与信誉。

初始污染菌检测

初始污染菌检测

2019/1/12
14
菌落计数报告规则—薄膜过滤法


每张滤膜上的菌落数应不超过100个 点计滤膜上的菌落,例如:对整件样品 以?cfu/件报告 若滤膜上无菌落生长,以“<1cfu/单位” 报告菌落数
2019/1/12
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2019/1/12
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计数方法的验证—回收率
验证试验至少应进行3次独立的平行试验,并分别计 算各试验菌每次试验的回收率。 A 试验组 供试液+试验菌(50~100cfu) B 菌液组 试验菌(50~100cfu) C 供试品对照组 D缓冲液对照组 缓冲液+试验菌(50~100cfu) (A-C)/B>70% D/B>70%
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4
主要步骤
采样
供试液制备
培养
菌落计数
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5
供试液的制备

用?ml 氯化钠-蛋白胨缓冲液浸提?小时 (包括最内层包装的内壁)
-所需供试液的用量和浸提时间需验证 处理方法:振动、冲洗、擦拭法、袋蠕 动、超声、涡旋混合、搅拌
2019/1/12
6
举例—振动


小型医疗器械可以投 入无菌的自封袋中, 加入缓冲液充分振动。 另外,用缓冲液冲洗 内包装袋的内壁。并 与产品缓冲液相混。
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初始污染菌检查

初始污染菌检查

295
46
2890
271
60
不可计
4650
513
27
11
5
不可计
305
12
两稀释 度菌数
之比 - 1.6 2.2

- -
菌落总数 个/g或个
/ml 16400 38000 27100
513000
270 30500
报告方式 个/g或个/ml
16000或1.6×104
38000或3.8×104
27000或2.7×104 510000或 5.1×105
计算公式
菌数/m3= 50000 N AT
式中: A——平板面积,cm2; T——平板暴露时间,min; N——平均菌落数。
标准限值:灭菌和消毒产品分别≤500和 ≤2000cfu/m3
物体表面和生产人员手细菌总 数检测方法
采样方法:
将内径为5cm×5cm的灭菌规格板,放在被检物体表 面,根据物体表面积大小,采平行样1~4个,用浸 有灭菌生理盐水的棉拭子,在规格板内涂抹10次 (往返计为1次),将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水 的采样管中。
初始污染菌检测
•指标含义(!)
通过测定检品细菌总数可用来判明检 品细菌污染的程度,以及生产单位所用的 原料、工具设备、工艺流程、生产人员的 卫生状况,是对检品进行卫生学评价的综 合依据。

初始污染菌检测

初始污染菌检测
及时更新法规与标准
随着时间的推移,相关法规与标准可能会发生变化。检测机构应关注法规与标准的更新 动态,及时调整自己的检测方法和操作规程。
提高检测效率的建议
优化实验流程
采用自动化设备
加强团队合作
通过合理安排实验流程,减少不必要 使用自动化设备进行初始污染菌检测,
的环节和操作,提高检测效率。例如, 可以大大提高检测效率和准确性。例
在实施过程中,持续监测污染菌 的情况,评估措施的有效性,并 根据需要进行调整和改进。
05
注意事项与建议
保证检测的准确性
选择合适的检测方法
根据不同的污染菌种类和检测目的,选择合适的检测方法, 确保准确性和可靠性。
严格控制实验条件
确保实验室环境、设备、试剂等符合相关标准和规定,避 免交叉污染和误差。
样品预处理
根据检测要求,对样品进行适当的预处理,如稀 释、过滤、离心等,以使样品符合检测要求。
检测方法选择
选择合适的检测方法
根据样品的性质和污染菌的种类,选择适当的检测方法,如培养法、 PCR法、免疫学方法等。
检测方法的验证
确保所选的检测方法具有足够的灵敏度和特异性,能够准确检测出 目标污染菌。
检测方法的操作
02
检测前的准备
采样点的选择
采样点应具有代表

选择能够反映整体情况的采样点, 确保采集的样本能够真实反映目 标区域污染菌的分布情况。

初始污染菌检测

初始污染菌检测

②菌落平均数 回收率 ③菌落平均数
1 校正因子 回收率
初始污染菌检测
初始污染菌检测
初始污染菌检测
菌液梯度稀释
初始污染菌检测
菌落计数基本规则
⑤如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均菌落数小 于1时,应报告菌数为<10个/g或ml。 ⑥如有3个稀释级平均菌落数均在30~300之间,则以后2级计算级 间比值报告。 ⑦菌落计数的报告,菌落数在10以内时,按实有数值报告。大于 100时,采用二位有效数字,在两位有效数值后面,应以四舍五入 法计算。在报告菌落数为“不可计”时,应表明样品的稀释度
生长量在[0.5,2]之间为合格
初始污染菌检测
①供试品+培养基(TSA和SDB) ②供试品+1ml含小于100cfu各菌液+适合菌生长的培养基 ③1ml含小于100cfu各菌液+适合菌生长的培养基
②-③ 0.5 ①
抑菌性可接受范围
初始污染菌检测
①去灭菌的样品5个,在每个产品表面均匀加入1ml的小于100cfu的 芽孢(ATCC 9372),自然风干。 ②对1中的产品进行浸润,把菌洗脱,薄膜过滤后平板培养,计数 ③取两个平皿,分别接种1中小于100cfu的芽孢(ATCC 9372)1ml, 培养计数。
初始污染菌检测
目前使用标准GB 15980(一次性使用医疗卫生标准)。本标规定了 一次百度文库使用医疗用品灭菌、消毒前后的卫生标准。本标准对一次性 使用医疗用品(包括灭菌的和消毒的一次性使用医疗用品)生产、 装配,包括车间等生产过程和生产工人手提出卫生的质量控制。

产品初始污染菌检测操作规程

产品初始污染菌检测操作规程

产品初始污染菌检测操作规程

编号:版本:

编制:日期:

审定:日期:

批准:日期:

生效日期:管理部门:

发放部门:

生产部 质管部 工程部 研发部 PMC 采购部 仓库 营销中心 人事行政中心 财务部

一、目的

规范产品初始污染菌数检验标准操作。

二、适用范围

适用于产品初始污染菌检验。

三、职责

微生物实验员对此规程负责。

四、参考资料

1. 参考2020版《中国药典》四部非无菌微生物限度检查法;

2. GB/T 1997

3.1-2015《医疗器械灭菌-微生物学方法-第一部分:产品中微生

物数量的估计》;

3. GB15979-2002 《一次性使用医疗用品卫生标准》

五、内容

1.设备与材料:

薄膜过滤器、恒温培养箱、霉菌培养箱、培养皿、锥形瓶、蓝盖瓶、量筒、烧杯、镊子、剪子、橡皮塞、纱布、灭菌棉球、酒精灯,超净工作台,高压灭菌锅,电子称,0.45um滤膜等、无菌取样袋、无菌手套。

2.稀释液及培养基

0.9%无菌氯化钠溶液、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙式葡萄糖琼脂培养基

3.取样规则

a、PMC配合质管部每月月初计划多生产6套产品;

b、等生产完成后取样员戴无菌手套,将随批量同等条件生产的6套产品装进无菌自封袋后将封条密封;

c、做好记录

d、送至实验室

e、暂时处:冷藏箱规定样品暂存区,存放时间最迟两个小时。

4.检验方法

4.1 取8个灭菌平皿分别倒入胰酪大豆胨琼脂和沙氏葡萄糖琼脂培养基15—

20ml 晾干。

4.2 将每批送至实验室的产品样品,分为编号:1、2、3、4、5、6,再将每个编号的样品分别投入灭菌后的均质袋中,再倒入灭菌生理盐水浸没整个样品,生理盐水的位置应能完全浸没整套样品,根据样品体积的大小适量倒入灭菌生理盐水,充分混匀,使微生物尽可能洗脱后将无菌镊子把样品取出,剩下样液待过滤集菌。

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程

初始污染菌检验规程

1、准备工作

1)与供试液接触的所有器具应采用可靠方法灭菌,置压力蒸汽灭菌器内121℃30min。

2)采样数量:每批产品随机抽取10件样品.

3)检测标准《GB 15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准》:≤100cfu/件次。

4)洗脱液、稀释液采用0.9%无菌氯化钠溶液。

2、试验步骤:

1)用无菌手续取出10个样品,分别放入10支装有10ml0.9%无菌氯化钠溶液的试管中,将每个采样管震打80次,混匀,分别吸取1ml放入灭菌平皿,用普通琼脂培养基作倾注培养,置37℃温箱培养48±2h观察结果。

2)用肉眼直接计数,然后用5-10倍放大镜检查,有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辩时仍以2个或2个以上菌落计数。

3)计算公式为:菌数/件次=平均菌数×稀释倍数/件次。

阴性对照试验:将使用的0.9%无菌氯化钠溶液吸取1ml放入无菌平皿中,注入培养基,凝固,倒置培养。制备2个平板均不得有菌生长。

3、注意事项:

1)在无菌操作台上做试验,防止环境对样品的再次污染,采取一切措施防止人为对样本的污染。

2)由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落与培养基沉淀的区别,必要时用显微镜鉴别。

编制:审核:批准:

ZC-14-8

初始污染菌监测操作规程

1范围

适用于对刚包装好的外科手套和检查手套的初始污染菌的监测和对新购进的小包装(接触手套的小包装)的监测。第一个月每周进行一次监测,如果监测结果是稳定的以后每个月监测一次,如果3个月都稳定,监测周期改为每季度一次。

初始污染菌方法验证

初始污染菌方法验证

初始污染菌方法验证

1.目的

验证产品初始污染菌数的试验方法。

2.范围

适用于质量部门对产品初始污染菌数验证试验的检测。

3.职责

质量检验人员负责执行此规程。

4.依据标准及相关文件

2010版《中华人民共和国药典(二部)》附录Ⅺ J微生物限度检查法

GB/T19973.1-2005《医疗器械的灭菌-微生物学方法-第一部分:产品中微生物数量的估计》

GB15980-2009 《一次性使用医疗用品卫生标准》

5.试验产品

————

6.注意事项

6.1 本操作应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的无菌操作台内进行。操作过程应尽量避免任何可能使结果发生偏差的污染。

6.2 无菌操作台必需定期进行洁净度检测,试验前提前开紫外灯15min后方可进行实验操作。

6.3 过滤器、滤膜、镊子以及无菌设备杯使用前应进行灭菌,使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。

7.器材与试剂

7.1器材

(1)35℃恒温培养箱

(2)23℃恒温培养箱

(3)灭菌器

(4)洁净工作台

(5)无菌过滤装置

(6)无菌镊子

(7)无菌剪子

(8)电子天平

(9)移液器

(10)接种环

7.2稀释液、冲洗液及其制备方法

稀释液、冲洗液配制后按说明书要求进行灭菌。

(1)pH 7.0无菌氯化钠溶液—蛋白胨缓冲液

(2)0.9%无菌氯化钠溶液。

7.3培养基

(1)营养琼脂培养基:按说明书方法保存配制。

(2)玫瑰红钠琼脂培养基:按说明书方法保存配制。

(3)改良马丁液体培养基:按说明书方法保存配制。

(4)改良马丁琼脂培养基:按说明书方法保存配制。

(5)营养肉汤培养基:按说明书方法保存配制。

初始污染菌检验操作规程

初始污染菌检验操作规程

初始污染菌检验操作规程

方法:每个培养皿上菌落数超过300个,以最近的一个稀释级计数。每个培养皿上菌落数在30-300个之间,以最近的

两个稀释级计数,如最近的两个稀释级计数相差大于10倍,

则应重新进行稀释。

4.6.3结果判定:若每个培养皿上菌落数均小于规定标准,则样品合格;若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准,则进行进一步检验。若进一步检验结果仍然超过规定标准,则样品不合格。

初始污染菌检验操作规程

目的:

本规程的目的是为了测定样品细菌总数,以判断样品细菌污染的程度,并评估生产单位的卫生状况,为下一步的灭菌提供参考依据。

适用范围:

本规程适用于所有需要消毒灭菌前的产品和洁净车间。

作业条件:

1.无菌检测需要在洁净度为100级单向流空气区域内进行,严格遵守无菌操作,避免污染。

2.超净台及工作台面必须进行洁净度验证。

作业方法与步骤:

1.制作营养琼脂培养基,并按要求培养16-18小时后,检查无菌生长方可使用。

2.进行无菌室洁净度验证。

3.进行产品采集与样品处理,制备供试液。

4.进行供试液的10倍递减稀释。

5.进行接种检验。

6.进行培养。

结果与判定:

1.计数方法:每个培养皿上菌落数超过300个,以最近的一个稀释级计数。每个培养皿上菌落数在30-300个之间,以最近的两个稀释级计数,如最近的两个稀释级计数相差大于10倍,则应重新进行稀释。

2.结果判定:若每个培养皿上菌落数均小于规定标准,则样品合格;若有一定数量的培养皿上菌落数超过规定标准,则进行进一步检验。若进一步检验结果仍然超过规定标准,则样品不合格。

初始污染菌检查课件

初始污染菌检查课件
按照实验要求,依次进行样品处 理、接种、培养等操作,确保每
一步操作的准确性和规范性。
培养条件
根据实验要求,设置适宜的培养温 度和湿度,保持恒温恒湿,确保菌 种的正常生长。
观察与记录
在培养过程中,定期观察菌种的生 长情况,记录生长曲线、菌落形态 等信息,为后续分析提供依据。
实验注意事项
实验安全
实验后处理
环境监测领域
初始污染菌检查在环境监测领域的应用将进一步拓展,涉及水源、 土壤、空气等环境的污染监测。
未来发展方向与挑战
提高检测灵敏度和特异性
01
针对不同种类的初始污染菌,需要进一步提高检测方法的灵敏
度和特异性。
标准化和规范化
02
建立初始污染菌检查的标准化和规范化体系,确保检测结果的
准确性和可靠性。
通过特定的仪器或技术对样品中的微生物 数量进行快速、准确的计数。
抑制法
基因检测法
在培养基中加入抗菌素等抑菌物质,抑制 样品中细菌的生长,从而准确计数样品中 的微生物数量。
利用基因技术检测样品中的微生物种类和 数量,具有高灵敏度和特异性。
01
初始污染菌检查的 标准与法规
国际标准
ISO 14233-1
总结词:结果应用不合理可能导 致实验室工作的低效和无效,甚 至引发实验室安全事故。
3. 对实验结果的应用缺乏科学性 和严谨性,如未进行统计学分析 、未进行多因素分析等。
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初始污染菌检查

生物学检查初始污染菌检查空气中细菌总数检测方法物体表明和生产人员手细菌总数检测方法初始污染菌检测初始污染菌检测目的:保证灭菌的效果,确定灭菌剂量,监控灭菌过程的有效性。引用标准: GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准中华人民共和国药典2010版附录微生物限度检查法 GB15980-1995 规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。对一次性使用医疗用品(包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品)生产企业中生产、装配、包装车间(空气中细菌总数检查方法)等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。检测环境和检验量在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。洁净区设置可在微生物室操作各类产品每批随机抽样10件样品(10个包装) 方法主要步骤采样初始污染菌检测初始污染菌检测检验方法将每样取5份平行样(取一份样品,根据限值制备好供试液后,取5份1:10,取5份1:100,取5份

1:1000,……) 初始污染菌检测结果计算公式:

平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次(或

g) ―――――――――――――――――――

件次或重量(g) 注意事项: 供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下,无菌操作,防止污染。应严格遵守无菌操作,同时消除抑菌成份的干扰。产品初始污染菌数限值: 灭菌产品管道类内腔?10cfu/件次,外部?100cfu/件次,非管道类?100cfu/件次,敷料类?100cfu/g;

消毒产品?1000cfu/件次或重量(g) 初始污染菌检测细菌计数细菌计数

先用肉眼观察,点数菌落数,然后再用放大5-10倍的放大镜检查,以投射光衬以暗色背景,以防遗漏(可辅助菌落计数器)记下各平皿的菌落数后,求出同一稀释度

各平皿生长的平均菌落数(每个稀释度的5个平板值,相加后除以5)。若平皿中

有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时,该平皿不宜计数,若片状菌落不到平皿中的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半个平皿菌落计数后乘2,以代表全皿菌落数。菌落特征 ? 形态特征:常为白色、灰白色或灰色,亦有淡褐色、淡黄色(如果培养基中加入0.1%TTC 氯化三苯基四氮唑试剂,菌落为红

色) ? 边缘整齐或不整齐,表面有光滑、粗糙,皱褶、突起或扁平。 ? 大小差异

很大。菌落计数基本规则菌落计数基本规则空气中细菌总数检测方法测定空气中动态下细菌总数。采用平板暴露法:车间在30m2以上者,于东、西、南、北(距墙1m处)、中五点;小于30m2者,于一条对角线里、中、外三点,高度均在1.5m

处采样,将普通营养琼脂平板(9cm直径)按上述采样点和高度布放,暴露15min后

立即关盖,于37?温箱培养24h后观察后果,求出5个或3个采样点的平均菌数

计算公式菌数/m3 式中: A――平板面积,cm2; T――平板暴露时间,min;

N――平均菌落数。标准限值:灭菌和消毒产品分别?500和?2000cfu/m3 物体

表面和生产人员手细菌总数检测方法采样方法: 将内径为5cm×5cm的灭菌规格板,放在被检物体表面,根据物体表面积大小,采平行样1,4个,用浸有灭菌生理盐水的棉拭子,在规格板内涂抹10次(往返计为1次),将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的采样管中。对生产人员手采样:被检人五指并拢,将浸有灭菌生理盐水的棉拭子在右手指曲面,从指尖、甲沟至指根处往返涂抹10次后,

将棉拭子放入10ml灭菌生理盐水的试管中。检验方法和结果计算将每个采

样管震打80次,混匀,10倍递减稀释,对每个稀释度取3个稀释度,分别取

1ml放于灭菌平皿内,每个稀释度倾注2块平板),用普通琼脂培养基作倾注培

养,置37?温箱倒置培养24h,观察结果,取菌落数为30,300的平板计算,求出平均菌落数。菌数/cm2 菌数/每只手平均菌数×稀释倍数 * * * 微生物学检查无菌检查微生物限度检查细菌、真菌数量控制菌其他(初始污染菌) 指标含义(~)

通过测定检品细菌总数可用来判明检品细菌污染的程度,以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况,是对检品进行卫生学评价的综合依据。供试液制备培养菌落计数采样方法供试液制备供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1:10的供试液。 2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1:10的供试液。 3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样,被采表面积为100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。作为供试液。

4.可用破坏性方法取样供试品:(参照中华人民共和国药典2010年规定进行

5. 对有内腔的医疗用器:用定量洗脱液,无菌操作冲洗内腔,反复冲洗,充分振落后取样。

6. 对一次性输液(血)器的零配件及其他医疗器械:直接用定量洗脱液

(1ml/10cm2)冲洗,将洗脱液置于无菌容器中,充分振荡后取样。梯度稀释 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 供试液 9mlNacl 9mlNacl 1:10 1:100 1:1000 供试液制备推荐的制备方法样品制备供试液制备梯度稀释加样用灭菌剪刀将纱布剪成小块,称取10g,移入100ml灭菌生理盐水中,不时振摇。作为1:10供试液。供试液10倍递减稀释。尽量避免丝线等杂物的混入。 (1)每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿,每个稀释级注5个平皿。 (2)经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ?时,倾注上述各个平皿15ml,另倾注一个注入1ml稀释液(灭菌生理盐水)灭菌空平皿作阴性对照。按一个方向快速转动平皿,使供试液与培养基充分混匀。纱布模拟培养琼脂凝固后,倒置,37 ?培养48h 基本概念细菌数测定是微生物的定量检查,对非规定灭菌产品中污染的活

菌数量进行测定,通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。限制条件平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位,增生可见菌落后计数。它是一种有条件的计数法,其限制条件大致如下: ?以菌落数为基础。 CFU colony

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