伊维菌素在樱桃谷鸭体内证治药物动力学研究

１ 材料与方法
１．１ 主 要 仪 器 设 备 、药 品 与 试 剂 高 效 液 相 色 谱 仪 （ＬＣ－２０１０，日本岛津 公 司），ＲＦ－１０ＡＸＬ 荧 光 检 测 器 （岛 津 ），ＳＣＬ－１０ＡＶＰ 系 统 控 制 器 （岛 津 ），离 心 机 （上 海 安 亭 科 学 仪 器 厂 ），涡 动 混 合 器 （上 海 青 浦 沪 西 仪器厂）等。三氟乙酸酐 （ｓｉｇｍａ）、Ｎ－甲 基 咪 唑 （ｓｉｇ－ ｍａ）、甲醇（色 谱 纯，天 津）、乙 腈 （色 谱 纯，天 津 ）、肝 素钠 等。 衍 生 化 试 剂 Ａ 液：１ ｍＬ 三 氟 乙 酸 酐 ＋２ ｍＬ 无水乙腈，Ｂ 液：１ ｍＬ 氮甲基咪唑 ＋１ ｍＬ 无 水 乙腈。 １．２ 饲料 健康饲料：按美国 ＮＲＣ（１９９４ 版）标 准 调配。霉 变 饲 料：５０％ 健 康 饲 料 ＋５０％ 发 酵 霉 变 饲 料。 １．３ 实 验 动 物 及 药 物 １ 日 龄 樱 桃 谷 雏 鸭 １３７ 只 （购置四川雅安 某 鸭 场），雌 雄 各 半。 伊 维 菌 素 标 准
中 国 兽 医 学 报 ２０１４年１１月 第３４卷 第１１期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｖｅｔ Ｓｃｉ Ｎｏｖ．２０１４ Ｖｏｌ．３４ Ｎｏ．１１
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伊维菌素在樱桃谷鸭体内证治药物动力学研究
邓 阳，赵世明，唐华侨，靳茹文，李英伦＊ （四川农业大学 动物医学院药学实验室，四川 雅安 ６２５０１４）
摘要：本试验利用证治药动学的方法，研 究 了 伊 维 菌 素 在 樱 桃 谷 鸭 体 内 药 物 动 力 学 变 化 ，旨 在 验 证 黄 曲 霉 毒 素 Ｂ１ 中毒后中药制剂“保肝护肾脱霉素”的药理作用。将１１７ 只 健 康 １ 日 龄 的 樱 桃 谷 鸭 随 机 平 均 分 成 ３ 组，Ⅰ 组 （正 常 组）饲喂健康饲料，饲喂２８ｄ。Ⅱ组（病理组）前７ｄ饲喂健康饲料，８～２１ｄ饲喂含有黄曲霉毒素 Ｂ１ 的霉变饲料，２２ ～２８ｄ饲喂健康饲料。Ⅲ组（中药反证组）前７ｄ饲喂健康饲料，８～２２ｄ饲喂含黄曲霉毒素 Ｂ１ 的霉变饲料，２２～２８ ｄ饲喂健康饲料，与此同时对 每 只 鸭 子 每 天 口 服 保 肝 护 肾 脱 毒 素 液 ５ ｍＬ，口 服 ７ｄ，第 ２９ 天，给 上 述 ３ 组 试 验 鸭 口 服伊维菌素溶液，分别在给药前（０ｈ）和给药后时间点从鸭的 颈 静 脉 采 血，采 用 高 效 液 相 荧 光 色 谱 法 进 行 检 测 。 结 果显示，黄曲霉毒素 Ｂ１造成的病理损伤，能改变伊维菌素 内 服 在 鸭 体 内 的 药 动 学 特 征 ，表 现 出 吸 收 减 慢，吸 收 程 度 减弱，消除速率减弱的药动学特征。经过中药制剂“保 肝 护 肾 脱 霉 素”反 证 后，伊 维 菌 素 的 吸 收 及 消 除 速 度 都 有 不 同程度地增加。试验结果表明，从药动学角度说明中药 制 剂 “保 肝 护 肾 脱 霉 素”对 黄 曲 霉 毒 素 Ｂ１ 造 成 的 病 理 损 伤 有修复作用。 关 键 词 ：伊 维 菌 素 ；肝 脏 损 伤 ；樱 桃 谷 鸭 ；药 动 学 中 图 分 类 号 ：Ｓ８５９．７ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１００５－４５４５（２０１４）１１－１８１３－０５
ｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｉｃｈｕａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６２５０１４，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｖａｌｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｐｕｒｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｏｎ ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｂ１ ｐｏｉｓｏｎｉｎｇ，ｕｓｅｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｉｖｅｒｍｅｃｔｉｎ ｉｎ ｃｈｅｒｒｙ ｖａｌｌｅｙ ｄｕｃｋｌｉｎｇ．Ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｏｎｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ａｎｄ ｓｅｖｅｎｔｙ－ｓｅｖｅｎ ｃｈｅｒｒｙ ｖａｌｌｅｙ ｄｕｃｋｌｉｎｓ ｅａｃｈ ｗｅｒｅ ｌｏｃａｔｅｄ．Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐⅠ（ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅ ｉｎ ｏｐｔｉｍａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｄｉ－ ｔｉｏｎ ｆｏｒ ２８ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ Ⅱ （ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅ ｉｎ ｏｐｔｉｍａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ １７ｄａｙｓ， ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃｈｅｒｒｙ ｖａｌｌｅｙ ｄｕｃｋｌｉｎｇ ｗｅｒｅ ｆｅｄ ａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｂ１ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ ｄｉｅｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎｅｘｔ １４ｄａｙｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｎｅｘｔ ｓｅｖｅｎ ｄａｙｓ ｔｈｅ ｃｈｅｒｒｙ ｖａｌｌｅｙ ｄｕｃｋｌｉｎｇ ｗｅｒｅ ｉｎ ｏｐｔｉｍａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｇｒｏｕｐ Ⅲ （ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｔｉｓｙｎｄｒｏｍｅ ｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅ ｉｎ ｏｐｔｉｍａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｆｏｒ １７ ｄａｙｓ，ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｃｈｅｒｒｙ ｖａｌｌｅｙ ｄｕｃｋｌｉｎｓ ｗｅｒｅ ｆｅｄ ａｆｌａｔｏｘｉｎ Ｂ１ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄ ｄｉｅｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｎｅｘｔ １４ ｄａｙｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｎｅｘｔ ７ｄａｙｓ ｔｈｅ ｃｈｅｒｒｙ ｖａｌｌｅｙ ｄｕｃｋｌｉｎｇ ｗｅｒｅ ｉｎ ｏｐｔｉｍａｌ ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｍｅａｎ－ ｗｈｉｌｅ ｅａｃｈ ｄｕｃｋｌｉｎｓ ｏｒａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ｈｅｐａｔｉｃ ａｎｄ ｋｉｄｎｅｙ ５ ｍＬ ｆｏｒ ７ ｄａｙｓ．Ｄｕｃｋｌｉｎｓ ｉｎ ｅａｃｈ ｇｒｏｕｐ ｏｒａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｔｈｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｉｖｅｒｍｅｃｔｉｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｐｒｏｐｙｌ－ ｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ ｏｎ ２９ｄａｙ．Ｂｌｏｏｄ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｂｅｆｏｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｕｐ ｔｏ ｔｉｍｉｎｇ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ）ｕｓｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｓ－ ｃｅｎｃｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ａｆｌａｔｉｏｎ Ｂ１ｃａｎ ｃａｕｓｅ ｈｅｐａｔｉｃ ｉｎｊｕｒｙ ａｎｄ ｃｈａｎｇｅ ｔｈｅ ｐｈａｒ－ ｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｏｆ ｉｖｅｒｍｅｃｔｉｎ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｏｒａｌｌｙ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄ ｉｎ Ｃｈｅｒｒｙ Ｖａｌｌｅｙ ｄｕｃｋｌｉｎｇ．Ｉｔ ｓｈｏｗｅｄ ｓｌｏｗ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，ｗｅａｋｅｎ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｄｅｇｒｅｅ ａｎｄ ｗｅａｋｅｎ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ．Ｂｕｔ ａｆｔｅｒ ａｎｔｉｓｙｎｄｒｏｍｅ ｂｙ ｐｕｒｅ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｆｒｏｍ
Ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｉｖｅｒｍｅｃｔｉｎ ｉｎ ｃｈｅｒｒｙ ｖａｌｌｅｙ ｄｕｃｋｌｉｎｇ ＤＥＮＧ Ｙａｎｇ，ＺＨＡＯ Ｓｈｉ－ｍｉｎｇ，ＴＡＮＧ Ｈｕａ－ｑｉａｏ，ＪＩＮ Ｒｕ－ｗｅｎ，ＬＩ Ｙｉｎｇ－ｌｕｎ＊ （Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｌａｂｏ－
品 （中 兽 药 品 监 察 所 ，９３．９％ ），临 用 时 将 伊 维 菌 素 溶 解于丙 二 醇 中，制 备 浓 度 为 ０．２ｇ／Ｌ 的 液 体，备 用； “保肝护肾脱霉素”（由 柴 胡、黄 芩、泽 泻、黄 芪、五 味 子等 组 成 的 颗 粒 剂，其 中 柴 胡 皂 苷 ａ 含 量 为 ４．２１ ｍｇ／ｇ，黄 芩 苷 含 量 为 １０．３３ ｍｇ／ｇ）等 。 １．４ 发酵霉变饲料 制 法 霉 变 饲 料 做 法 参 照 文 献 ［２］的 方 法，（１）取 已 经 制 备 好 的 ＰＤＡ 培 养 基 ３０ ｍＬ 于２５０ ｍＬ 三 角 瓶 中，经 １２１℃，１５ ｍｉｎ 高 压 蒸 汽灭菌并冷却至室温。然后用涂布法接种黄曲霉菌 种２４０２ （ＣＩＣＣ 编 号，购 自 中 国 工 业 微 生 物 菌 种 保 藏中心），置２８℃恒 温 生 化 培 养 箱 中 培 养 ７ｄ，然 后 在三角瓶中 加 入 １５０ ｍＬ 灭 菌 生 理 盐 水，在 恒 温 振 荡 器 上 ３５℃ 、１００ｒ／ｍｉｎ 振 荡 ３０ ｍｉｎ，使 霉 菌 孢 子 悬 浮其中，静置待 用。（２）将 粉 碎 过 的 １００ｋｇ 玉 米 粒 的含水量调到 ２０％ 左右，然后每 ２５ｋｇ左右分 装 进 １个带塑料夹膜的编织袋中，经过 １２１℃，１５ ｍｉｎ 高 压蒸汽灭菌后冷 却 到 室 温。（３）在 ３ ｍ×４ ｍ 的 密 封 培 养 室 内 （地 面 铺 垫 塑 料 膜 ）将 灭 菌 饲 料 均 匀 摊 开 后，用喷雾器把含有 大 量 黄 曲 霉 菌 孢 子 的 溶 液 均 匀 的 喷 洒 在 其 表 面 。 （４）发 酵 培 养 期 间 每 天 喷 水 １ 次 ， 搅拌１次，保 持 含 水 量 在 ２０％ 左 右，同 时 维 持 培 养 基中正常 的 含 氧 量，以 利 于 黄 曲 霉 菌 的 生 长。 （５） 发酵 培 养 时 间 为 １０ｄ。 饲 料 中 水 分 含 量 保 持 在 ２０％ 左 右 。 培 养 结 束 后 可 以 清 楚 看 到 培 养 基 表 面 结 块并且发 绿，说 明 上 面 已 经 布 满 大 量 黄 曲 霉 菌 落。 （６）发酵后的玉米粉分装进１ 个带塑料夹膜的 编织 袋 中 ，经 高 压 灭 菌 后 晒 干 ，最 后 密 封 保 存 检 测 。 发 酵 的霉变饲料经高效 液 相 色 谱 法 检 测，结 果 显 示 饲 料 中黄曲霉毒素 Ｂ１ 含量为１００μｇ／ｋｇ。 １．５ 动 物 模 型 的 建 立 选 择 ２０ 只 １ 日 龄 健 康 樱 桃 谷肉鸭，按饲 养 试 验 要 求，完 全 随 机 设 计 分 为 ２ 组 （正 常 组 、模 型 组 ）。 每 组 １０ 只 ，公 母 各 半 ，健 康 饲 料 饲喂至７ｄ，８～２１ｄ正 常 组 采 用 健 康 饲 料，模 型 组 采用含黄曲 霉 毒 素 Ｂ１ ５０μｇ／ｋｇ 霉 变 饲 料 喂 养，２２ 日龄改 为 健 康 饲 料 饲 养，２８ｄ 后 采 集 血 液，对 血 清 中生化指标谷胱甘肽－Ｓ 转移酶（ＧＳＴ）、谷丙转氨 酶 （ＧＰＴ）、谷 草 转 氨 酶 （ＧＯＴ）、超 氧 化 物 歧 化 酶 （ＳＯＤ）、谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 （ＧＳＨ－ＰＸ）、丙 二 醛 （ＭＤＡ）等 指 标 进 行 检 测 。