小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)酶联免疫分析(ELISA)
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本:体液夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书试验原理:BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书自备材料1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1.避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书操作注意事项1.试剂应按标签储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
避免用手接触,有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
小鼠活性氧ROS酶联免疫分析ELISA
小鼠活性氧(ROS)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中活性氧(ROS)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠活性氧(ROS)水平。
用纯化的小鼠活性氧(ROS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入活性氧(ROS),再与HRP标记的活性氧(ROS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的活性氧(ROS)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠活性氧(ROS)含量。
样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
碧云天Mouse TNF-α ELISA Kit (小鼠TNF-α酶联免疫吸附检测试剂盒)说明书
Mouse TNF-α ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PT512Mouse TNF-α ELISA Kit96次产品简介:碧云天的Mouse TNF-α ELISA Kit (Mouse Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即小鼠肿瘤坏死因子-α酶联免疫吸附检测试剂盒,是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的TNF-α的试剂盒。
本产品检测灵敏度高,特异性强,重复性好。
多次重复检测结果表明,最小检出量为30.8pg/ml ,与人TNF-α、sTNF RIs 、TNF RII 等均没有交叉反应,板内、板间变异系数均小于10%。
TNF-α,即TNF 、TNF α或TNFalpha ,也称cachectin 、cachexin 或TNFSF1A 。
TNF-α由巨噬细胞、上皮细胞等多种细胞在细菌感染、内毒素刺激、病毒或寄生虫感染时产生。
肿瘤坏死因子超家族(Tumor necrosis factor superfamily)共约19个成员,包含由巨噬细胞等产生的TNF-α和T 淋巴细胞产生的TNF-β(也称Lymphotoxin-alpha),以及FASL 、TRAIL 、CD40L 、CD27L 、CD30L 等。
TNF-α与TNF-β在结构上有一定的相似性,并且在氨基酸水平有28%的同源性,它们拥有共同的受体TNFR1和TNFR2。
由于TNF-α的生物学活性占TNF 总活性的70%~95%,因此目前常说的TNF 多指TNF-α。
TNF (Tumor Necrosis Factor)因为能诱导细胞死亡而得名,实际上其很多时候诱导的细胞死亡为细胞凋亡。
人TNF-α有两种形式,一种是由233个氨基酸组成的跨膜蛋白同源三聚体(homotrimers),另外一种是该跨膜蛋白在TNF-α转化酶TACE(TNF-α converting enzyme)的作用下切除信号肽,形成成熟的157个氨基酸的可溶性TNF-α单体(分子量为17KDa)的同源三聚体。
肺表面活性蛋白A在肺部疾病中的研究进展
肺表面活性蛋白A在肺部疾病中的研究进展包建华;陈淑靖【期刊名称】《上海医学》【年(卷),期】2007(30)10【摘要】肺表面活性物质是覆盖于肺泡上皮内侧的脂质-蛋白混合物,由Ⅱ型肺泡细胞合成和分泌,起减少肺泡张力、稳定肺泡形态的作用。
二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoylphosphatidylcholine,DPPC)被认为是组成肺表面活性物质最主要的脂质成分,其磷脂含量高达90%,在肺泡表面形成一个气一液面。
而发挥连接这些脂质以降低肺气一液面张力、维持肺表面活性物质更新和内稳态等作用的便是肺表面活性蛋白(surfactant protein,SP)。
目前已发现的SP有4种,按发现先后命名为SP—A、SP—B、SP—C和SP—D。
本文对SP—A的作用及其与肺部疾病关系的研究现状作一综述。
【总页数】4页(P796-799)【关键词】肺表面活性蛋白A;肺部疾病;肺表面活性物质;二棕榈酰磷脂酰胆碱;protein;肺泡上皮;脂质成分;细胞合成【作者】包建华;陈淑靖【作者单位】上海市药剂学校基础教研组;复旦大学附属中山医院内科【正文语种】中文【中图分类】R563【相关文献】1.肺表面活性蛋白及其在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展 [J], 刘海平;黄平2.肺表面活性蛋白D在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展 [J], 陈建华;周贤梅3.肺表面活性蛋白 A 与肺部疾病关系的研究进展 [J], 王妍亭;颜浩;韩娟;刘进衡4.肺表面活性物质蛋白D在哮喘和间质性肺疾病中的研究进展 [J], 李洪波;吕长俊5.肺表面活性蛋白D在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展 [J], 梁程程; 史家欣; 赵新成; 李家树因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
Science重磅报道一种强大佐剂2'3'-cGAMP,可显著增强流感疫苗的抗病毒能力!
Science重磅报道一种强大佐剂2'3'-cGAMP,可显著增强流感疫苗的抗病毒能力!APExBIO2月21日,国际顶级期刊《Science》报道了一篇重磅文章,来自哈佛大学Mei X. Wu和复旦大学陆路等研究人员发现在流感疫苗中添加某种佐剂可以提高其抗多种流感病毒的能力。
这种佐剂是2'3'-cGAMP(2', 3'-环鸟苷单磷酸-腺苷单磷酸),将该佐剂与灭活的病毒一起制成鼻喷雾剂使用可有效诱导小鼠和雪貂体内的异型免疫反应,可以强效防御所有五种测试的流感病毒株。
2'3'-cGAMP使用肺表面活性剂的脂质成分来封装,可以在不破坏肺表面活性剂层和肺泡上皮细胞屏障的情况下,进入肺泡巨噬细胞,激活该细胞和肺泡上皮细胞中的STING 通路,导致有效的抗病毒T细胞和体液免疫反应,而没有伴随的免疫病理学。
研究论文题目为“ Pulmonary surfactant–biomimetic nanoparticles potentiate heterosubtypic influenza immunity ” 。
Science 21 Feb 2020.对于流感疫苗开发,最好的一种情况是使用单一疫苗来对抗多种流感病毒菌株,即诱导抗病毒常驻记忆T细胞(TRM细胞),该细胞可以介导针对多种不同亚型菌株的交叉保护(异型免疫)。
不幸的是,这种疫苗通常使用减毒的活性病毒,这对于某些人群来说可能是不安全的。
I型干扰素(IFN)是机体免疫系统在抗感染中产生的一种蛋白质,当被病毒感染后,肺泡上皮细胞(AECs)和免疫细胞都会分泌干扰素引起免疫应答。
在这个过程中,干扰素基因的刺激因子STING被激活。
2'3'-cGAMP是STING激动剂。
然而,在不破坏肺表面活性剂(PS)层完整性的情况下,将STING激动剂递送到肺泡上皮细胞的胞质溶胶中是非常困难的,因为PS层形成了强大的保护屏障来阻止纳米颗粒和亲水性分子进入它们。
血清及痰液CEA、SA、SP-A检测在肺癌诊断中的应用
s l-e ugc cr J .A nT oa ug2 0 ,3( ) 1- ma c lln a e[ ] n hreSr,0 7 8 2 :4 9 l l n
山东 医药 2 1 第 5 0 0年 0卷第 6期
血 清及 痰 液 C A、A、PA检测 E S S 在 肺 癌诊 断 中 的应 用
王丽萍 , 王宝 中 于文成 冯桂青 赵 。 , , 军
( 1青 岛大学 医学院 , 山东青 岛 260 ; 6032聊城 市人 民 医院 ; 青 岛大学 医学院 附属 医院)
中 图分 类 号 :7 4 2 1 3 . 1 文 献 标 志 码 : B 文 章 编 号 :0226 2 1 )60 6 - 10 -6 X(0 0 0 - 70 0 2
目前肺癌 的确 诊 多依 赖 于病 理 和细 胞 学检 查 ,
但标本 获取不 易 。 目前 尚未 发现 肺癌 特 异性 抗原 , 用 于检测 的肺 癌标 志 物均 为 肿瘤 相关 物 质 , 一 标 单
有价值 的组合 方式 。三项标 志物联 检 的特 异性 和诊
[ ]陈建华 , 5 欧阳玉林 . 肿瘤标 志物癌胚抗 原 ( E ) 测在非小 细 CA检 胞肺癌诊治 中的临床 意 义 [ ] 现 代肿 瘤 医学 ,0 5 1 ( ) J. 2 0 ,3 2 :
l 9 2 0 9 -o .
[ ]Pt L T e a y d nf a o n ri m u m c o 6 ey . h e l i ti t n l g a n a y pt t — tT r e ic i o u cco b s u yl f o [ ] C ne, 0 , ( 1 : 6 - 6 g J . acr 0 0 8 1 ) 2 1 4 . y 2 9 4 2 6
肺表面活性物质SP-A和SP-D免疫调节机制研究进展
中国预防兽医学报Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine第42卷第12期2020年12月V ol.42No.12Dec.2020doi :10.3969/j.issn.1008-0589.202005020肺表面活性物质SP-A 和SP-D 免疫调节机制研究进展周益民1,杜晓敏2*(1.邢台医学高等专科学校第二附属医院,河北邢台054000;2.邢台医学高等专科学校基础医学部,河北邢台054000)中图分类号:S852.4文献标识码:B 文章编号:1008-0589(2020)12-1296-06肺表面活性物质(Pulmonary surfactant ,PS )是由肺泡Ⅱ型细胞产生和分泌的一种复杂的脂质和蛋白质混合物,它们可以在呼气结束时保持肺泡不塌陷,其中亲水性表面活性蛋白(Surface active protein,SP )A (SP-A )和D (SP-D )在天然免疫机制中也发挥着重要作用。
SP-A 和SP-D 能与各种微生物和病原体的成分相互作用,具有绑定和凝集病原体的作用;二者也对细菌的生长具有直接抑制作用。
SP-A 和SP-D 与免疫细胞协同激活各种细胞的功能,如SP-A 和SP-D 参于巨噬细胞的吞噬和氧化机制。
此外,通过与细胞表面模式识别受体结合,SP-A 和SP-D 调节炎症细胞反应,如诱导炎性细胞因子的释放。
SP-A 和SP-D 同属于具有凝集素域与胶原结构的胶原凝集素族群,胶原凝集素涉及甘露糖结合凝集素,在先天免疫系统中发挥一定作用。
二者单体具有相似的特征结构:(1)氨基酸末端包含着一个短的亚基间形成的二硫键;(2)重复的GLY-X-Y 组成的类胶原蛋白结构域;(3)一个颈部区域;(4)碳水化合物识别域(CRD ),SP-A 和SP-D 通过CRD 识别特异性的脂质,CRD 良好的特异性使其在各种微生物和PAMPs 的识别中发挥着重要的作用。
肺表面活性物质与肺部的免疫调节
·98国外医学呼吸系统分册204)2年第22卷第2期肺表面活性物质与肺部的免疫调节鹏|R复旦大学附属中山医院呼吸内科(上海200032)李倬哲综述瞿介明何礼贤审校擒薹肺表面活性物质对肺部外来颗粒、自细胞反应具有重要的调节功能,但其组成成分卵.A、sPD及磷脂的作用各有不同,本文对Ps整体及各成分在肺部免疫调节中的作用分别予以总结。
关t词肺表面括性物质;肺表面活性物质蛋白;免疫凋节肺表面活性物质(pulmonarysurfactant,PS)是一种脂质蛋白复合物。
磷脂占PS总量的80%左右,又可分为双棕榈酸磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PC,)、礴脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌酵(PI)以及鞘磷Jlt(sph)等,其中PC中的双饱和双棕榈酸酰胆碱(DPPC)含量最为丰富,也是降低肺泡表面张力的主要成分L“。
相关蛋白中目前已分离出4种,即肺表面活性物质蛋白A、B、C及D(surfactantproteinsA、B、C、D,SP—A、SP—B、SP,C.和SP—D)¨J。
PS各成分皆主要由肺泡Ⅱ型细胞合成。
然后以板状体(LB,其薅脂成分与支气管肺泡灌洗液(BALF)中相仿,但无SP—D,SP—A也很少)形式分泌至胞外,此时SP-A加入形成管髓体(TM),继之形成单分于脂质层分布于肺泡的气一液界面。
大部分PS由肺泡Ⅱ型细胞重摄取并循环利用,小部分由肺泡巨噬细胞(AM)和肺泡Ⅱ型细胞吞噬后降解”J。
PS的主要作用是降低肺泡表面张力,从而可防止呼气末肺泡塌陷,增加肺的顺应性,促进肺间质液体回流防止肺水肿。
近年来人们发现PS在肺部非特异免疫反应方面也有重要作用,是肺部抵抗外来病原的第一道防线。
由于PS组分多样,不同成分如SP-A、SP-D、磷脂等其免疫调节功能也有所差别,综合作用因之复杂化,在此,我们就目前所知PS对肺部免疫调节的作用作一综述。
1SP-A和SP-D的免疫调节作用肺表面活性物质蛋白SP—A及SP-D同属于胶原样碳氢化合物结合蛋白家族(胶原样植物血凝素,oollectins)。
小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA 实验说明书
小鼠肿瘤坏死因子α (TNF-α)酶联免疫试剂盒使用说明书【预期应用】ELISA法定量测定小鼠血清、血浆、细胞培养物上清、组织裂解液中TNF-α含量。
【产品性能指标】1、检测范围:15.6 pg/ml-1000 pg/ml2、灵敏度:3.9 pg/ml3、精密度:批内差CV%<8%,批间差CV%<10%4、特异性:本试剂盒特异性检测小鼠TNF-α,且与其他相关蛋白无交叉反应。
【实验原理】用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗TNF-α抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗TNF-α抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样本中的TNF-α呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样本浓度。
【试剂盒组成成分】组份96T酶标板(Assay plate) 12条×8孔标准品(Standard) 2瓶(冻干品)生物素标记抗体(Biotin-antibody) 1 x 120 μl/瓶(100×)辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin) 1 x 120 μl/瓶(100×)生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent) 1 x 15 ml/瓶辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidin Diluent) 1 x 15 ml/瓶样本稀释液(Sample Diluent) 1 x 50 ml/瓶浓洗涤液(Wash Buffer) 1 x 20 ml/瓶(25×)底物溶液(TMB Substrate) 1 x 10 ml/瓶终止液(Stop Solution) 1 x 10 ml/瓶板贴 4【存储条件及有效期】未开封试剂盒试剂盒避光保存于2-8℃。
有效期为六个月。
请在试剂盒标注的有效日期内使用。
肺表面活性物质
代谢
Ⅱ型肺泡上皮细胞是合成PS的主要场所。PS在内质合成,经高尔基体和多泡体转运至LB,在LB界膜与细胞质 膜融合后,经过胞吐方式分泌至肺泡腔。LB由多层紧密包裹的同心排列的磷脂膜构成,一旦分泌,就展开形成晶 格状结构的管髓体,再转变成磷脂膜沿肺泡表面铺展于气液界面,从而形成具有降低表面张力活性的磷脂单分子 层,继之膜纯化、崩溃为囊泡样结构,最后,以胞吞方式被Ⅱ型肺泡上皮细胞摄取再循环利用,或被肺泡巨噬细 胞摄取完成分解代谢。由此可见,肺泡腔PS主要有LB、管髓体、单分子层及大小不等的单层或多层囊泡等四种结 构形式,按密度梯度离心PS分为有表面活性的大聚集体(large aggregate,LA)和无表面活性的小聚集体 (small aggregate,SA)。LA主要包括LB、TM和多层囊泡,可分馏出>95%的SP-A、SP-B和SP-C,而SP- D<10%;SA主要为代谢终产物单层囊泡,可分馏出大部分SP-D,而SP-D与磷脂酰肌醇结合调节LA转变为SA。在 肺泡扩张和挤压中表面活性物质从LA转变为SA。蛋白。SP-A是一种分子量为26~35kD多聚体胶原糖蛋白,属于C型凝集素家族 成员,以钙离子依赖性方式结合多种微生物表面上的糖配体。SP-A基因(SFTPA)位于染色体10q22-q23,包括 两个功能基因SP-A1、SP-A2及一个伪基因,SP-A1和SP-A2基因含有4个外显子(exon),长约4.6kb,甲状 腺转录因子-1调节SP-A转录。SP-A具有与SP-B一起促进管髓体的形成、提高PS对气液界面吸附速率、防止PS 被血浆蛋白渗出液灭活、参与肺泡先天免疫防御、直接杀灭微生物和提高吞噬细胞摄取病原体的能力等功能。SP -A基因敲除小鼠对细菌和病毒感染的易感性增加,虽然缺乏管髓体,但几乎不影响PS功能和稳态。SP-D是一种 43kD亲水性表面活性蛋白,也属于C型凝集素家族成员。成熟SP-D由12个单体构成。
吸入异氟烷对大鼠肺表面活性蛋白-A(SP-A)影响详解
吸入异氟烷对大鼠肺表面活性蛋白-A(SP-A)的影响李志红1杨拔贤2安海燕2(1 北京肿瘤医院麻醉科,北京,100036;2北京大学人民医院麻醉科,北京,100044)摘要目的观察大鼠吸入不同浓度异氟烷时,肺表面活性蛋白-A(SP-A)的含量及其基因表达的改变。
方法雄性Wistar大鼠104只随机分为5组:组1,空白对照组(Con,n=8);组2,40% O2对照组(40% O2,n=24);组3,0.7%异氟烷组(0.7%Iso,n=24);组4,1.5%异氟烷组(1.5%Iso,n=24);组5,2.0%异氟烷组(2.0%Iso,n=24)。
其中组2吸入40% O2,组3、4、5大鼠分别吸入设定浓度的异氟烷(载气为40%O2)。
除空白对照外,其余各组再分为三个亚组:4小时组(4hr,n=8)、8小时组(8hr,n=8)和10小时组(10hr,n=8)。
4hr和8hr亚组分别吸入各组气体4小时和8小时,组2中10hr亚组吸入40% O2 10小时,3、4、5组中10hr亚组分别吸入设定浓度异氟烷8小时,停药后再吸入40% O2两小时。
于设定时间点迅速处死实验大鼠,取肺组织透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞结构变化;检测支气管肺泡灌洗液中SP-A的含量(Western Blot);Ⅱ型上皮细胞中SP-A的含量(IHC);以及SP-AmRNA的表达(RT-PCR)。
结果1.40%O2组中各亚组的各项指标与Con组均无显著差异。
2.透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞结构:吸入异氟烷后,0.7%Iso 组肺泡Ⅱ型上皮细胞形态学无明显改变;1.5%Iso组和2.0%Iso组的肺泡Ⅱ型上皮细胞可见明显形态学改变,尤以8hr亚组明显。
3.支气管肺泡灌洗液(BALF)中SP-A的含量:0.7%Iso组中4hr 亚组外,各吸入异氟烷组大鼠的BALF中SP-A的含量均较Con组显著下降(p<0.01);1.5%Iso组和2.0%Iso组中8hr亚组较0.7%Iso组8hr亚组下降更明显(p<0.01)。
血清SP-D、SP-A与IPF患者肺功能、血气指标的相关性研究及预后价值探讨
血清SP-D、SP-A与IPF患者肺功能、血气指标的相关性研究及预后价值探讨黄艳生;李红艳;陈璐璐【摘要】目的研究观察血清肺表面活性蛋白D (SP-D)、肺表面活性蛋白A(SP-A)与特发性间质性肺纤维化(IPF)患者肺功能、血气指标的相关性以及对预后效果的评估价值探讨.方法方便选取该院2016年1月—2017年12月期间收治的50例IPF患者为研究对象,所有患者均采用相同的治疗方案进行药物治疗,分别于治疗前、治疗后1、3、6个月对患者的血清SP-D、SP-A进行检测,并对患者各时间点的肺功能指标:一氧化碳的弥散量(DLCO)、用力肺活量(FVC),氧分压(PaO2)、肺泡动脉血氧分压差(Pa-aO2)血气指标进行检测.采用Spearman检验对SP-D、SP-A与肺功能、血气功能指标间的相关性进行分析.结果患者治疗前、治疗后6个月的SP-D、SP-A水平分别为 (168.92±27.31)、(137.39± 26.64)ng/mL,(21.36±5.84)、(16.21±4.22)ng/mL,且随着治疗时间的延长,SP-D、SP-A水平逐步降低,差异有统计学意义(F=37.361、31.769,P<0.05).相比与治疗前,治疗后患者的DLCO、FVC、PaO2均有升高,而Pa-aO2则有降低,且随着治疗时间延长依次改变,差异有统计学意义(F=28.904、27.024、38.284、31.128,P<0.05).相关性分析显示,SP-D、SP-A与DLCO、FVC、PaO2呈负相关性,与Pa-aO2呈正相关性.结论血清SP-D、SP-A与IPF患者肺功能、血气指标间有明显的相关性,在临床上通过对血清SP-D、SP-A的检测有助于判断和评估患者的预后效果,可为IPF患者诊治提供新的简便方法.【期刊名称】《中外医疗》【年(卷),期】2018(037)023【总页数】3页(P21-23)【关键词】特发性间质性肺纤维化;肺表面活性蛋白D;肺表面活性蛋白A;肺功能;相关性【作者】黄艳生;李红艳;陈璐璐【作者单位】福建省福州肺科医院呼吸科,福建福州 350008;福建省福州肺科医院呼吸科,福建福州 350008;福建省福州肺科医院呼吸科,福建福州 350008【正文语种】中文【中图分类】R563特发性肺纤维化(IPF)是一种慢性、进行性、纤维化性间质性肺疾病,病变局限在肺脏,好发于中老年人群。
SP-A、SP-D与肺部天然免疫防御
SP-A、SP-D与肺部天然免疫防御
王方勇;陈政良
【期刊名称】《免疫学杂志》
【年(卷),期】2002(18)B06
【摘要】肺表面活性物质脱辅基蛋白A、D(SP A、SP D)系C型凝集素超家族中
胶凝素家族成员,是肺部重要的天然免疫防御分子,不仅能清除病原体,还参与免疫、炎症及过敏反应的调节。
【总页数】3页(P75-77)
【关键词】肺部天然免疫防御;SP-A;SP-D;肺表面活性物质脱辅基蛋白A;肺表面活性物质脱辅基蛋白D
【作者】王方勇;陈政良
【作者单位】第一军医大学免疫教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R563;R392.1
【相关文献】
1.特发性肺纤维化患者肺泡灌洗液和血清中Napsin A、KL-6、SP-A、SP-D表达的意义及与肺功能相关性 [J], 陈石; 陈静; 魏瑜; 朱际平; 王谦; 葛海波
2.乙酰半胱氨酸对慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者气道重塑及SP-A、SP-D影
响 [J], 杨丹;王亮;万宗仁
3.血清SP-A、SP-D水平与OSAHS患者病情程度相关性研究 [J], 张健;琚绍坦;陈
露
4.小儿难治性肺炎支原体肺炎肺泡灌洗液SF、SP-A、SP-D变化及其对治疗效果预测价值 [J], 梁丹丹;纵书芳
5.脐血sTREM-1,SP-A,SP-D水平与胎膜早破足月新生儿感染的关系研究 [J], 许沛佳;林树弟;陈敬国;陈桂灵;杨佩珊
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肺表面活性物质的功能及其在急性肺损伤中的临床应用
肺表面活性物质的功能及其在急性肺损伤中的临床应用李钢【摘要】目前认为肺表面活性物质(PS)在急性肺损伤(ALI)中有重要意义,在ALI的发展中,由于各种因素都参与对肺的损伤,使PS减少,同时使PS的功能发生变化;反之PS减少及功能异常又加重肺损伤,如此形成恶性循环.近年来,PS替代治疗的应用范围逐渐增多,在临床治疗过程中也遇到许多新问题.该文就PS的功能、代谢特点及其在ALI中临床应用的相关问题进行综述.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2014(020)013【总页数】3页(P2320-2322)【关键词】表面活性物质;肺;损伤;替代治疗【作者】李钢【作者单位】天津市第一中心医院整形与烧伤外科,天津300192【正文语种】中文【中图分类】R64急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是指除心脏因素以外的各种肺内或肺外因素所引起的急性、亚急性的进行性呼吸衰竭。
ALI的病因复杂,严重的肺感染、肺挫伤及各种的吸入性肺损伤都是常见的致病原因,还包括炎性反应通过血液或淋巴循环入肺,如脓毒症、胰腺炎、弥散性血管内凝血等。
肺表面活性物质(pulmonarysurfactant,PS)存在于哺乳动物肺泡Ⅱ型上皮细胞中,是该上皮细胞分泌的一种脂蛋白复合物。
在ALI的发生、进展中,由于炎性细胞、炎性介质、内毒素成分及自由基等都参加并加重了肺损伤,使PS分泌下降,同时肺内炎症渗出液中的蛋白成分使PS生理活性下降,或者使PS的物理性能发生变化。
PS的这些变化反过来又使肺损伤更加严重,因而造成恶性循环。
因此,PS在肺损伤救治中有重要意义。
1 PS的成分及生理功能PS分布于肺泡气液界面,为肺泡细胞合成和分泌的脂质和蛋白复合物,其中脂质占90%,有效成分为卵磷脂酰胆碱构成,蛋白复合物占10%,包括PS蛋白A复合物、PS蛋白B复合物、PS蛋白C复合物、PS蛋白D复合物。
PS各种组分维持在合适的比例才能发挥其各种生理活性。
肺表面活性蛋白A在免疫炎症反应中的作用
肺表面活性蛋白A在免疫炎症反应中的作用
肖燕;崔社怀
【期刊名称】《免疫学杂志》
【年(卷),期】2000()z1
【摘要】表面活性蛋白 A(SP- A)是肺表面活性物质 (PS)的重要组成部分 ,结构上属于胶凝素家族成员之一。
SP- A除具有降低肺表面张力、维持肺泡正常生理功能的作用外 ,还参与了肺的局部防御和免疫调节过程。
本文就近年来 SP- A在免疫炎症调节方面的研究进展作一综述。
【总页数】4页(P102-105)
【关键词】肺表面活性蛋白A;免疫调节
【作者】肖燕;崔社怀
【作者单位】第三军医大学西南医院呼吸科
【正文语种】中文
【中图分类】R563.8
【相关文献】
1.肺表面活性物质相关蛋白的免疫调制作用 [J], 张军;王仕爱
2.厄洛替尼在小鼠急性肺损伤中作用及对肺表面活性物质相关蛋白A表达的影响[J], 陶欢;徐尤年;付丽莎;夏会敏;姚尚龙;张诗海
3.表面活性蛋白D在免疫炎症反应中的作用研究进展 [J], 李满; 王卫星
4.肺表面活性蛋白A在肺外疾病免疫炎性反应中的作用研究进展 [J], 赵正; 杨雪
5.肺表面活性物质联合人免疫球蛋白对机械通气治疗呼吸窘迫综合征新生儿肺功能炎症反应的影响 [J], 张琪
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脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征患者血清FGF21、SP-A表达及其与预后的关系
脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征患者血清FGF21、SP-A表达及其与预后的关系张龙玉;梁连春;马春华;段忠辉;张寅【期刊名称】《临床和实验医学杂志》【年(卷),期】2023(22)1【摘要】目的探究脓毒症并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者成纤维细胞生长因子-21(FGF21)、肺表面活性蛋白A(SP-A)表达及其与预后的关系。
方法回顾性选取2016年3月至2020年3月首都医科大学附属北京佑安医院感染综合科重症监护室收治的脓毒症并发ARDS患者102例和未并发ARDS患者67例。
对于脓毒症并发ARDS患者,根据入院24 h内氧合指数(PaO_(2)/FiO_(2))将其分为轻度组(n=31)、中度组(n=49)和重度组(n=22);根据入院后28 d内生存情况,将其分为存活组(n=72)和死亡组(n=30)。
利用酶联免疫吸附试验检测血清FGF21、SP-A水平并比较;采用Pearson检验分析脓毒症并发ARDS患者血清FGF21、SP-A水平与急性生理和慢性健康状况评分(APACHEⅡ)的相关性;利用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清FGF21、SP-A对脓毒症并发ARDS患者预后不良的预测价值;利用多因素Logistic回归分析,探讨影响脓毒症并发ARDS患者预后不良的危险因素。
结果与脓毒症未并发ARDS患者相比,脓毒症并发ARDS患者血清FGF21水平[(711.50±228.34) pg/mL vs.(349.64±105.92) pg/mL]明显升高,SP-A[(21.02±6.83)ng/mL vs.(34.36±7.59)ng/mL]水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。
脓毒症并发ARDS轻度组、中度组、重度组患者血清FGF21水平依次明显升高,SP-A水平依次明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。
死亡组PaO_(2)/FiO_(2)值、SP-A水平明显低于存活组,APACHEⅡ评分、FGF21水平及机械通气时间≥4 d、住ICU时间≥12 d人数占比明显高于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05)。
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小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)水平。
用纯化的小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)再与HRP标记的羊抗鼠抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)浓度。
样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。
加入一定量的PBS,PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清。
分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为48ng/L,32ng/L ,16ng/L,8ng/L,4ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)试剂盒性能:1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%检测范围:1.8ng/L -50ng/L保存条件及有效期:1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月FOR RESEARCH USE ONLYDrug NamesGeneric Name :Mouse Pulmonary surfactant-associated protein A (SP-A)ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of SP-A concentrations in Mouse serum, blood plasma, and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Mouse SP-A level in the sample ,use Purified Mouse SP-A antibody to coatmicrotiter plate wells, make solid-phase antibody, then add SP-A to wells, Combined SP-A which With HRP labeled, become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change ismeasured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of SP-A in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samples to the standard curve.Materials provided with the kitSpecimen requirements1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins,centrifugation 20-min at the speed of2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS(PH7.2-7.4), Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS(PH7.2-7.4), Rapidlyfrozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS(PH7.4), Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh a nd the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl fro m the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density:48ng/L,32ng/L ,16ng/L,8ng/L,4ng/L)2.add sample:Set blank wells separately (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing:Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme:Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate:Operation with 3.8.washing:Operation with 5.9.color:Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction:Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay:take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.(×n×5).5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range1.8ng/L -50ng/LStorage and validity1.Storage : 2-8℃. 2.validity : six months.Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.This chart for reference only。