邯郸地区健康体检人群线粒体DNA_1555G和C1494T突变分析
荧光定量PCR法检测线粒体基因A1555G与C1494T突变
【 中图分 类号】 Ｒ ７ ６ ４ ． ４ ４
【 文献标 识码】 Ｃ
［ 文章编号】 １ ６ ７ ３ — ７ ２ １ ０（ ２ ０ １ ３ ） １ ０ （ ａ ） 一 ０ １ ５ ９ — ０ ３
Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｍｉ ｔ ｏ ｃ ｈ ｏ ｎ ｄ ｒ ｉ ａ ｌ ｇ ｅ ｎ ｅ Ａ１ ５ ５ ５ Ｇ ａ ｎ ｄ Ｃ１ ４ ９ ４ Ｔ ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ Ｆ １ ｏ ．
１ ． Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ａ ｃ ａ ｄ ａ ｍ ｙ ｏ ｆ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ｋ ｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ ｏ ｆ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｍｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｍ ｅ ｎ ｔ ， Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ， Ｆ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ３ ５ ０ ０ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ； ２ ． Ｔ ｈ ｅ Ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｆ Ｆ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ， Ｆ ｕ ｊ ｉ ａ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ ， Ｆ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ３ ５ ０ ０ ０ ７ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ
．
ｗａ ｓ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｐ ｅ ｒ ｉ ｐ ｈ ｅ ｒ ａ ｌ ｂ ｌ ｏ ｏ ｄ ｂ ｙ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｋ ｉ ｔ ｓ ｔ ｏ ｕ ｎ ｄ ｅ ｒ ｇ ｏ ｐ ｏ ｌ ｙ ｍｅ ｒ ａ ｓ ｅ ｃ ｈ ａ ｉ ｎ ｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ，ｆ ｌ ｏ ｒ ｅ ｓ ｃ ｅ ｎ ｔ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｐ Ｃ Ｒ ａ ｎ ｄ
母系遗传耳聋线粒体基因1494位C-T和1555位A-G突变的检测方法及其试
专利名称：母系遗传耳聋线粒体基因1494位C－T和1555位A －G突变的检测方法及其试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：董大光
申请号：CN200810223411.1
申请日：20080927
公开号：CN101684498A
公开日：
20100331
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及母系遗传耳聋线粒体基因1494C－T和1555A－G突变的检测方法。
该方法设计改良引物，通过Touch－down PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，检测1494C－T和1555A－G突变。
该方法简单，成本低，检测结果直接、可靠，适用于对母系遗传耳聋线粒体基因1494C－T和1555A－G突变的大规模筛查或预防性检查。
申请人：董大光
地址：361012 福建省厦门市东渡路250号金龙大厦A栋10D
国籍：CN
代理机构：北京三高永信知识产权代理有限责任公司
代理人：何文彬
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线粒体DNA1555A〉G异质性突变大家系的临床与实验分析
水平介 于 １ １ ． ９ ％一 ９ ７ ． ９ ％之 间， 并且在 酶切和测序 结果显示 为野生型或 同质性突变 的样品 中又发 现 了４ 个异质性 突 变 。结 论 异质 性水平 与耳 聋程度／ 氨基糖 甙类药物 敏感度之 间有很强 的关联性 ｒ ＝ ０ ． ７ ５ ８ ， Ｐ ＜ ０ ． ０ ０ １ ） 。此外 ， 母亲 的 异质性水平控制或影 响着子代 的异 质性 ， 提示线粒体 Ｄ Ｎ Ａ异质性代代传 递过程中可能存在一种规律 。
５ １ ８ ０ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ２ ０ ） 暨南大学第二 临床 医学院 （ 深圳 市人民医院 ） （ 深圳
【 摘要 】 目的 研究线粒体 Ｄ Ｎ Ａ １ ５ ５ ５ Ａ ＞ Ｇ 异质性 突变大家系 ， 异质性水平及其与耳聋 临床 表型的关系 ， 以及 异质 性 的代 代传递情况 。方法 运用 聚合 酶链反应 一 限制性片段长度 多态性技术 、 直接测序 法及 变性高效液相 色谱 技术 （ Ｄ ｅ ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｈ ｉ ｇ ｈ Ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ Ｌ ｉ ｑ ｕ ｉ ｄ Ｃ ｈ ｒ ｏ ｍ ａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ ， Ｄ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） 检测家 系成员 的 １ ５ ５ ５ Ａ＞ Ｇ突变异 质性并定量 ， 结合 其
ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ａ ｔ ａ ． Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｔ ｈ ｅ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ｖ ａ ｉｅ ｒ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｎ ｏ ｍ ａ ｒ ｌ ｔ ｏ ｓ ｅ ｖ ｅ ｒ ｅ ｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｆ ｏ ｕ ｎ ｄ ｄ ｅ ａ ｆ ｎ ｅ ｓ ｓ ． Ｓ ｉ ｘ ｈ ｅ ｔ ｅ ｒ ｏ ｐ ｌ ａ ｓ ｍｉ ｃ ｓ ｕ ｂ —
线粒体DNA 1555AG异质性突变大家系的临床与实验分析
·临床研究·线粒体DNA 1555A>G 异质性突变大家系的临床与实验分析沈姗姗王琳凯刘畅徐志勇胡玉华高国凤王沙燕暨南大学第二临床医学院（深圳市人民医院）（深圳518020）【摘要】目的发现线粒体DNA 1555A>G 异质性突变一大家系，研究其异质性水平与耳聋临床表型的关系，以及异质性的代代传递情况。
方法运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术、直接测序法及变性高效液相色谱技术（Denaturing High Performance Liquid Chromatography ，DHPLC).检测家系成员的1555A>G 突变异质性及定量，并结合其临床表型进行分析。
结果临床资料显示，该家系的临床表型从正常到重度、极重度耳聋，呈现多样化。
实验室检测结果为：经酶切和测序共检测出6个异质性突变、10个同质性突变和2个野生型；DHPLC 定量分析结果显示，异质性水平介于11.9%-97.9%之间，并且在酶切和测序结果显示为野生型或同质性突变的样品中又发现了4个异质性突变。
结论异质性水平与耳聋程度/氨基糖甙类药物敏感度之间有很强的关联性（r=0.758，P<0.001）。
此外，母亲的异质性水平控制或影响着子代的异质性，提示线粒体DNA 异质性代代传递过程中可能存在一种规律。
【关键词】线粒体DNA 1555A>G 突变；异质性；耳聋；临床表型；变性高效液相色谱（DHPLC ）【中图分类号】R764.43【文献标识码】A 【文章编号】1672-2922（2013）03-05A Large Family With mtDNA 1555A>G Heteroplasmic MutationSHEN Shan-Shan ,WANG Lin-Kai ,LIU Chang,XU Zhi-Yong ,HU Yu-Hua ,GAO Guo-Feng ,WANG Sha-YanSecond clinical medical college of Jinan University ，Shenzhen People's Hospital,Shenzhen 518020,ChinaCorresponding author :WANG Sha-yan ，E-mail:shayanw@【Abstract 】Objective To study the relationship between mutation load and severity of hearing loss and to further ana ⁃lyze the heteroplasmic mtDNA transmission in a large pedigree with heteroplasmy for 1555A>G.Methods Heteroplasmy was tested and quantified using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP),direct sequencing and Denaturing High Performance Liquid Chromatography (DHPLC).Correlation was analyzed together with clinical data.Results The clinical phenotype varied from normal to severe or profound deafness.Six heteroplasmic subjects,ten homoplasmic subjects and two wild-type subjects were detected by PCR-RFLP and sequencing.The results of DHPLC revealed that the proportion of mutation load ranged from 11.9%to 97.9%,and four subjects who were considered as homo ⁃plasmic or wild-type subjects in previous testing were additionally identified as heteroplasmy.Conclusion There is a strong correlation between the mutation load and severity of hearing loss/sensitivity to aminoglycosides (r=0.758,P<0.001).In addi ⁃tion,the mutation level of offspring is associated with their mothers ’in this pedigree,which indicates that there may exist a pattern in the process of heteroplasmic transmission.【Key words 】mtDNA 1555A>G mutation;heteroplasmy;hearing loss;clinical phenotype;DHPLCDOI:10.3969/j.issn.1672-2922.2013.03.基金项目：2009年广东省科技计划项目，编号：2009B030801233。
线粒体耳聋基因(mtDNA) 突变检测标准操作程序
线粒体耳聋基因(mtDNA) 突变检测标准操作程序1 检验目的保证受检者线粒体(mtDNA)耳聋基因突变检测的准确、可靠。
2 检验原理采用 PCR 扩增和基因测序方法检测 mtDNA A1555G、C1494T 两个位点基因突变情况。
3 性能参数3.1 敏感性：PCR 测序所需模板的量较少，一般 PCR 产物需 30~90ng，单链 DNA 需 50~100ng，双链 DNA 需 200~500ng；3.2 特异性：采用 BigDye 荧光标记终止底物循环测序试剂盒，一般可测 DNA 长度为 650bp 左右；3.3 精确度：DNA 测序精确度为(98.5±0.5) %；3.4 简便安全：采用 ABI3130 自动化测序仪，能自动灌胶、自动进样、自动数据收集分析等。
3.5 快速：每组基因测序可在 40min 完成。
4 原始样品系统外周血。
5 容器和添加剂类型EDTA 抗凝管(血常规管)。
6 所需设备和试剂6.1 仪器设备ABI9700 PCR 仪，ABI3130 测序仪，凝胶成像系统。
6.2 试剂盒6.2.1 提取外周血DNA：采用上海赛百盛试剂盒快速提取外周血 DNA；6.2.2 Axygen 公司提供的胶回收试剂盒；6.2.3 ABI 公司提供的 BigDye 测序反应试剂盒：主要试剂是BigDye Mix，内含 PE 专利四色荧光标记的 ddNTP 和普通 dNTP ，AmpliTaq DNA polymerase FS，反应缓冲液等；6.2.4 测序反应产物纯化：醋酸钠/乙醇法纯化 PCR 产物。
7 校准程序厂家工程师完成。
8 程序步骤8.1 全血 DNA 提取试剂盒提取 DNA8.1.1 GN 结合液预热澄清后使用；8.1.2 将 0.3-0.5ml 全血加入到 1ml 纯化树脂中，颠倒混匀 5-6 次。
室温下温育 3min，期间颠倒混匀一次， 5000rpm 离心 3sec，收集沉淀；8.1.3 用 1ml GN 结合液将纯化树脂悬浮，颠倒混匀， 5000rpm 离心 3sec，收集沉淀；8.1.4 用 0.5ml 漂洗液漂洗纯化树脂两次，颠倒混匀， 5000rpm 离心 3sec，收集沉淀；8.1.5 用 0.8ml 无水乙醇悬浮，装入离心纯化柱， 12000rpm 离心 1min ，倒掉废液收集管中的乙醇，再次离心 1min，尽量除尽乙醇；8.1.6 将离心纯化柱套入一个干净的 1.5ml 离心管中，加入 100μl 超纯水于纯化树脂中，室温下放置 3min ，12000rpm 离心 2min ，-20C备用。
线粒体基因A1555G和C1494T突变检测试剂盒临床应用研究
３ ５例 标 本 中 检 测 出 １例 １ ５Ａ＞ Ｇ 突 变 ，３份 阳 性 ４ ５５ ２
标 本 中检 测 出 １ ２例 １ ９ Ｃ Ｔ 突 变 和 １ 例 １５ ＞ Ｇ 突 ４４ ＞ １ ５ ５Ａ
山 西 医药 杂 志 ２ １ 年 １ ０１ ２月 第 ４ Ｏ卷 第 １ ２期 上 半 月 Ｓ ａｘ ｅ ， ｅｅ ｅ ０ １Ｖｏ． ０ Ｎｏ １ ｈ ｉ ｔ ｈ ｎ ｉ ｄＪ Ｄ ｃｍｂ ｒ １ ， １４ ， ． ２ｔｅＦｒ Ｍ ２ ｓ
・
基础研究 ・
线粒体基 因 Ａ１５ Ｇ和 Ｃ ４ ４ ５５ １９ Ｔ突变检测试剂盒临床应用研究
３ 讨 论
１ ３ １ 核 酸 提 取 ： 照 试 剂 盒 说 明 书 进 行 操 作 ， １ Ｌ ．． 按 取 Ｏ
全 血 加 到 １ ５ｍＬ离 心 管 中 ， 入 ５ ０“ 双 蒸 水 ， 烈 振 ． 加 ０ Ｌ 剧 荡 ， 温 下 放 置 １ ｉ。１ ０ ／ ｉ 心 ３ｒｉ ， 上 清 ， 室 ５ｒ ｎ ３０ ０ｒｒ ｎ离 ａ ａ ｎ去 ａ 收 集 沉 淀 （ 要 时 可 用 双 蒸 水 反 复 洗 沉 淀 物 ， 至 无 色 或 血 必 直 红 蛋 白很 少 ）沉 淀 中加 入 １ ０ Ｌ核 酸 提 取 液 ， 振 荡 器 上 ， ０ 在
１ ２ 仪 器 和试 剂 ． Ａ ５ ０荧 光 Ｐ Ｒ 仪 （ ｐｉ ｉｓｓｅ ） 药 物 性 耳 Ｂ７０ Ｃ Ａｐ ｌｄＢｏ ｙｔｍｓ ， ｅ 聋基因突变检测试剂盒 （ 光 Ｐ Ｒ法） 荧 Ｃ 为智 海 生 物 工 程 （ 北 京 ） 限公 司 生 产 。 有 １ ３ 检 测 方 法 ． 检 测 结 果 中用 耳 聋 基 因 试 剂 盒 共 检 测 出 １ ２例 １５ Ａ ５５ ＞ Ｇ 突 变 标 本 ，２例 １ ９Ｃ Ｔ 突 变 标 本 ， 有 检 测 结 果 与 １ ４４ ＞ 所 测 序法 结 果 一致 ， 致 性 为 １０ 。 一 ０
线粒体DNA G7444A突变可能影响A1555G突变的表型表达
1. 温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室, 温州 325035; 2. 温州医学院附属第一医院, 温州 325000; 3. Division of Human Genetics and Center for Hearing and Deafness Research, Cincinnati Children’s Hospital Medical Center, Cin-
1.2.2 基因组 DNA 的提取
取得该家系成员的书面同意后, 抽取该家系 8 名成员外周血每人 5 mL, 其中患者 7 人, 按照
图 1 部分家系成员听力图
×: 左耳; O : 右耳。
Fig. 1 Air conduction audiogram of three members in the family
1 对象和方法
1.1 临床资料
先证者(Ⅲ-1), 男, 12 岁, 3 岁时因发高烧用过 3 天的庆大霉素(3～5 mg/kg/每天 4 次), 用药 2 周后 出现双侧听力下降。纯音测听、声阻抗、ABR 表明 其听力损失为重度感音神经性聋(左耳听阈 60 dB, 右耳听阈 102 dB), 其听力曲线为斜坡型(图 1)。对
cinnati, Ohio 45229, USA
摘要: 线粒体 12S rRNA 和 tRNASer(UCN) 基因是导致非综合征型听力损失的两个突变热点区域。作者收集了 1 个母系遗传感音神经性聋家系, 该家系同时携带线粒体 DNA (mtDNA) A1555G 和 G7444A 突变。临床资料分析 表明, 该家系包括药物致聋的耳聋外显率(所有耳聋患者/所有母系成员)为 58%, 而非药物致聋的耳聋外显率 (非药物性聋患者/所有母系成员)为 25%, 明显高于其他携带 A1555G 突变的耳聋家系。先证者的线粒体全序列 分析表明, 该线粒体基因组共有 28 个多态位点, 属于东亚人群 B4c1 单体型。在这些多态位点中, 除 A1555G 和 G7444A 突变外, 未发现其他有功能意义的突变。这表明 mtDNA G7444A 突变可能加重由 A1555G 突变造成 的线粒体功能缺失, 从而增加耳聋的外显率。
基因检测与疾病遗传风险评估
欢迎共阅基因检测与疾病遗传风险评估肖自力1崔春黎2贺宪民3张群41上海荣健生物技术有限公司副总经理2上海同济大学附属同济医院内科副主任医师3上海主健生物工程有限公司技术总监4上海主健生物工程有限公司技术员【摘要】本文通过对国内外分子流行病学研究成果的综述，系统阐述了基因检测与疾病遗传风险的关系，并、个性化预防（神经管畸形患儿与妊高症）一基因、基因多态性及遗传病命，是生物体生、长、老、病、可以说，组计划（:人类HapMap计划更是揭示了各人种中频率超过5%的单体型:为什么每个99．9%是相同的；那为什么每个人身高、体重、之为单核苷酸多态性（singlenucleotidepolymorphism，SNP），这些差异造成了基因多态性，即从群体看，在一个基因座上存在很多基因类型，而每一个体基因型只能属于该基因的一种类型。
SNP作为基因多态性的最主要的形式，反映了个体与个体间的差异本质。
那么运用到人们最关心的健康领域，它决定了个体与个体间疾病易感性的差异。
由此，在人群中通过SNP与疾病罹患情况的关联分析可以确定某一疾病的危险型SNP；把结果运用到个体，通过检测SNP类型可以对个体患该疾病的风险进行评估。
使用基因检测去评估疾病风险只在具有遗传基础的疾病才有可操作性。
遗传病是由遗传物质(包括染色体和基因)发生异常改变而引起的疾病。
根据所涉及遗传物质的改变程序，可将遗传病分为五大类：染色体病（如唐氏综合征、猫叫综合征等）、线粒体遗传病（如药物性耳聋）、体细胞遗传病（如肿瘤）、单基因病（如白化病、血友病等）、单基因遗传病和多基因病。
大多数遗传性疾病是跟多基因、多位点的相联系的疾病。
如心脑血管病、肿瘤、骨骼疾病、肥胖、中风、心脏病、抑郁症、哮喘、糖尿病等。
多基因病的主要特点：（1）一种疾病由多个基因、多个位点参与，而一个基因位点可能与多个疾病有关。
（2）遗传决定的不是疾病本身，而是这种疾病的遗传易感性（即基因型遵循遗传三大定律，但表型不一定遵循遗传三大定律）；（3）疾病发生受外因（生活习惯、生活方式、生活环境、心理因素等）的影响，发病机制十分复杂。
线粒体DNA变异的生理与病理功能影响分析
线粒体DNA变异的生理与病理功能影响分析人体内含有两种不同的DNA，一种是大家熟知的核DNA，另一种就是线粒体DNA。
与核DNA不同的是，线粒体DNA是从母亲那里获得，它只由37个基因编码，但它们都是非常重要的基因，负责控制线粒体内的各种生化反应，如能量生产等。
因此，线粒体DNA变异的生理与病理功能影响已经引起了广泛的关注。
线粒体DNA变异表示，线粒体内的一些基因发生了突变，它可能影响线粒体内的酶、蛋白质等各种生物大分子的结构和功能。
我们现在知道的是，线粒体DNA突变会导致许多严重的疾病，如肌萎缩性侧索硬化症、肌肉相关的线粒体疾病、老年痴呆症等。
但是，线粒体DNA变异对人类健康的影响远不止于此。
下面我们来详细了解一下线粒体DNA变异的各个方面。
线粒体DNA变异对能量代谢的影响线粒体是生物体内能量的主要来源，因此线粒体DNA变异最直接的影响是能量代谢的变化。
当线粒体DNA发生突变时，线粒体中酶的催化作用将受到影响，这将导致线粒体能量代谢的减少。
在某些情况下，线粒体功能降低可能导致许多疾病，如糖尿病、心脏病和癫痫等，这些疾病具有奇怪的临床表现，因为它们联合表现出多个组织或系统的症状。
线粒体DNA变异对免疫系统的影响免疫系统的作用是保护机体免受外界有害物质的侵害，包括病毒、细菌、真菌、寄生虫等。
由于线粒体是自身产生的，它可以被视为病理学过程的一个指标，因为它与能量代谢、细胞凋亡和炎症等基本生理进程直接相关。
一些最近的研究表明，线粒体功能异常可能是自身免疫性疾病（如关节炎、多发性硬化症、红斑性狼疮）发生的潜在危险因素。
这些疾病的治疗需要采用一些细胞因子和抗体，这些都如同催化剂一样，与细胞膜受体作用，进而引起免疫反应。
因此，线粒体DNA变异在自身免疫性疾病中的作用值得关注。
线粒体DNA变异对肌肉和神经系统的影响线粒体可以在不同的组织中发挥不同的作用。
在肌肉和神经组织中，线粒体扮演着关键的角色，因为它们不断需要产生能量。
线粒体基因突变与脂肪代谢疾病发生的关系研究
线粒体基因突变与脂肪代谢疾病发生的关系研究脂肪代谢疾病是一类常见的代谢性疾病，包括肥胖、脂肪肝、代谢综合征以及糖尿病等。
这些疾病在今天的社会中越来越普遍，给人们的健康带来了极大的威胁。
与此同时，近年来研究发现，在脂肪代谢疾病的发生中，线粒体基因突变也起着重要的作用。
线粒体是一个细胞内的独立的细胞器，其主要功能是参与能量代谢，调节细胞内的氧化还原反应。
其中，线粒体中的线粒体DNA基因负责编码线粒体内的蛋白质，这些蛋白质则参与能量代谢过程中的重要反应。
随着基因突变技术的发展，越来越多的研究发现，线粒体内的基因突变与代谢疾病存在着密切的关系。
例如，研究表明，线粒体某些基因突变会导致能量代谢的紊乱，从而引起肥胖等代谢疾病的发生。
同时，也有研究发现，在一些人群中，存在着线粒体的遗传变异，这些遗传变异又常常与肥胖等代谢疾病的发生密切相关。
例如，研究人员发现，在美国的拉丁裔人群中，存在一种常见的线粒体基因突变（mtDNA A1555G），其与2型糖尿病的发生有关。
此外，还有一些研究表明，线粒体基因突变与脂肪肝的发生也有着密切的关系。
例如，一项近期的研究发现，70%的自发型非酒精性肝病（NAFLD）患者中存在着线粒体基因缺陷。
这些缺陷可以导致线粒体功能的下降，从而损害脂肪酸的氧化代谢，增加了NAFLD的风险。
总的来说，线粒体基因突变与脂肪代谢疾病之间的关系十分密切。
这些突变可以导致能量代谢的紊乱，从而增加肥胖、脂肪肝、代谢综合征以及糖尿病等代谢疾病的风险。
然而，目前对于线粒体基因与代谢疾病之间的确切关系还存在着一些争议，需要进一步的研究才能得到科学的证明。
荧光定量PCR法检测线粒体基因A1555G与C1494T突变
荧光定量PCR法检测线粒体基因A1555G与C1494T突变林文津;郭舜民;徐榕青;肖志勇;张亚敏【摘要】目的对非综合征型耳聋患者及其家属进行线粒体基因A1555G与C1494T突变分析,以明确聋病先证者分子病因.方法收集非综合征耳聋患者及其家属共95例受检者的外周血样本,常规方法提取基因组DNA,进行荧光定量PCR检测.同时对所提取的基因组DNA采用传统的毛细管电泳测序分析,并与NCBI GenBank数据库人线粒体基因序列进行比对,从而确诊是否为线粒体基因突变.结果两种检测方法均表明,非综合征耳聋患者及其家属中共检出线粒体基因A1555G突变4例,占聋病先证者7.41％(4/54),未检测到线粒体基因C1494T突变,4例阳性患者双耳均有不同程度的损伤,且均为女性.结论采用荧光定量PCR法检测线粒体基因A1555G与C1494T突变,方便、快捷、准确,能辅助临床快速的分析诊断药源性耳聋的分子病因.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2013(010)028【总页数】3页(P159-161)【关键词】荧光定量PCR;线粒体基因;A1555G;C1494T;药源性耳聋【作者】林文津;郭舜民;徐榕青;肖志勇;张亚敏【作者单位】福建省医学科学研究院福建省医学测试重点实验室,福建福州350001;福建省医学科学研究院福建省医学测试重点实验室,福建福州350001;福建省医学科学研究院福建省医学测试重点实验室,福建福州350001;福建省福州市第二医院,福建福州350007;福建省医学科学研究院福建省医学测试重点实验室,福建福州350001【正文语种】中文【中图分类】R764.44线粒体12SrRNA基因是氨基糖苷类抗生素导致的非综合征型听力损失的一个突变热点区域。
由于A1555G和C1494T突变在12SrRNA基因形成G-C和U-A配对使得与氨基糖苷类抗生素的结合更加容易，这就是为何携带这些突变的人在接触了氨基糖苷类抗生素时会出现或加重耳聋的原因[1]。
PCR-高效液相色谱法检测线粒体DNA A1555G突变
PCR-高效液相色谱法检测线粒体DNA A1555G突变蔡筠;罗彩群;谢建生;吴维青;耿茜;徐志勇;郝颖;徐晓昕【摘要】目的探讨PCR-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)分析技术在检测线粒体(mt)12S rRNA 基因第1 555位A-G均质点突变中的应用.方法 4例临床诊断为氨基糖苷类抗生素耳聋的患者及40例听力正常体检者,分别运用PCR-DHPLC技术、酶切技术及DNA测序技术进行mtDNA1555位点检测.结果 PCR-DHPLC与酶切技术均检测出4例患者mtDNA A1555G突变,在PCR-DHPLC中均呈特征性突变双峰;40 例正常体检者未检测出突变,样品均呈单峰.DNA测序技术证实了DHPLC及酶切技术的准确性.结论 DHPLC能有效地应用于线粒体DNA A1555G突变的检测,该方法简便,成本低廉,可作为mtDNAA1555G突变位点大样本筛查的的手段.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2011(029)002【总页数】2页(P87-88)【关键词】变性高效液相色谱;线粒体;耳聋基因;突变【作者】蔡筠;罗彩群;谢建生;吴维青;耿茜;徐志勇;郝颖;徐晓昕【作者单位】深圳市妇幼保健院中心实验室,广东深圳,518048;深圳市妇幼保健院中心实验室,广东深圳,518048;广州医学院,广州,510182;深圳市妇幼保健院中心实验室,广东深圳,518048;深圳市妇幼保健院中心实验室,广东深圳,518048;深圳市妇幼保健院中心实验室,广东深圳,518048;深圳市妇幼保健院中心实验室,广东深圳,518048;深圳市妇幼保健院中心实验室,广东深圳,518048;深圳市妇幼保健院中心实验室,广东深圳,518048【正文语种】中文【中图分类】R764.4线粒体(mt)12S rRNA基因第1 555位A-G均质性点突变是使用氨基糖苷类抗生素导致耳聋的分子基础[1-2]，在耳聋人群中阳性率为1%～3%[3]。
国内线粒体DNA12SrRNA A1555G突变的流行病学文献分析
国内线粒体DNA12SrRNA A1555G突变的流行病学文献分析纪育斌;王秋菊;兰兰;王卉;史伟;刘穹;满荣军;韩东一【摘要】目的回顾总结国内线粒体DNA12SrRNA A1555G突变流行病学凋研的文献,了解其在国人耳聋患者中的分布特征及目前研究中存在的问题并提出解决方案.方法通过Cbmdisc和PUBMED数据库检索1996-2008年国内报道的各地区对A1555G突变流行病学调研文献,应用CHISS统计软件对每篇文献中样本量、样本特征、地域分布、突变频率及A1555G突变与氨基糖苷类药物应用的相互关系等多个因素进行分析.结果检索到相关文献25篇,纳入研究21篇,研究区域涉及国内14个省、直辖市和自治区,调查人群均为非综合征型感音神经性聋患者;样本总量3473人,A1555G突变者230人(6.62%,230/3 473);各地区样本量78-802人,突变频率0.67%-14.6%,各地区突变频率存在较大差异(P=0.0000).有氨基糖苷类抗生素用药史的患者739人中A1555G突变者100人,突变频率为2.70%-33.33%,平均13.53%,高于非综合征型耳聋人群(P=0.0000).结论国内线粒体DNA12SrRNA A1555G突变频率的流行病学调查存在省市覆盖不全、种族均衡性偏差、地区数据差异较大、样本选择量不足、随机化不充分、缺少种族和年龄划分等诸多问题,需进一步进行系统的线粒体A1555G突变流行趋势研究.【期刊名称】《听力学及言语疾病杂志》【年(卷),期】2010(018)001【总页数】5页(P6-10)【关键词】耳聋;线粒体DNA;基因突变;流行病学;药物性耳聋【作者】纪育斌;王秋菊;兰兰;王卉;史伟;刘穹;满荣军;韩东一【作者单位】中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军耳鼻咽喉科研究所,北京,100853;中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科,中国人民解放军耳鼻咽喉科研究所,北京,100853【正文语种】中文【中图分类】R764.44线粒体DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)突变致聋与感音神经性聋(sensorineural hearing loss,SNHL)关系密切，其中，mtDNA12SrRNAA1555G突变已被证实是氨基糖苷类抗生素导致非综合征型SNHL的分子病理基础[1]。
非综合征家族性耳聋线粒体DNA1555^(A→G)点突变分析
非综合征家族性耳聋线粒体DNA1555^(A→G)点突变分析潘虹;柯肖枚;戚豫;顾之平;吴希如
【期刊名称】《实用儿科临床杂志》
【年(卷),期】1999(14)2
【摘要】分析我国的非综合征家族性耳聋是否存在线粒体DNA1555A→G点突变。
方法以PCR－RFLP的方法对3个非综合征耳聋家系进行线粒体DNA1555A→G
点突变筛查。
结果一个非综合征耳聋家系中5人中4人产生该突变。
结论线粒体DNA1555A→G点突变是部分非综合征耳聋的致病原因之一。
【总页数】2页(P67-68)
【关键词】耳聋;家族性;非综合征耳聋;线粒体DNA;点突变
【作者】潘虹;柯肖枚;戚豫;顾之平;吴希如
【作者单位】北京医科大学第一医院儿科;北京医科大学第一医院耳鼻喉科
【正文语种】中文
【中图分类】R764.430.2
【相关文献】
1.吉林省非综合征型耳聋分子病因学分析——线粒体DNA 12SrRNA1555位点突变基因筛查 [J], 陈金霞;张桂茹
2.非综合征家族性耳聋线粒体DNA1555A→G点突变分析 [J], 潘虹;戚豫;吴希如;柯肖枚;顾之平
3.线粒体DNA1555位点突变、非综合征性聋与氨基糖甙类抗生素关系研究 [J],
王宇澄;王正敏;沈雁
4.线粒体DNA1555位点突变、非综合征性聋与氨基甙类抗生素研究 [J], 王宇澄;王正敏;沈雁
5.昆明地区青少年非综合征遗传性耳聋患者耳聋基因热点突变的筛查 [J], 满宝华;况雪梅;谭红丽;田浩;李亚山;吴旭;杨海清;洪颖;孙伟
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·遗传与优生·邯郸地区健康体检人群线粒体DNA A1555G 和C1494T 突变分析①要跟东李守霞②张小芳陈丁莉孙彩霞郭丽丽杨志明河北省邯郸市中心医院检验科056001中国图书分类号R394，R34文献标识码A文章编号1001-4411（2013）06-0971-03；doi ：10.7620/zgfybj.j.issn.1001－4411.2013.28.29①冀南地区重大出生缺陷三级预防体系建立的研究〔1113108017〕②通讯作者E －mail ：lishouxia1968@【摘要】目的：调查邯郸地区健康体检人群线粒体DNA A1555G 和C1494T 突变的携带率，明确非综合征型耳聋患者发病的分子学基础。
方法：对健康体检人群进行常见耳聋基因筛查内容的宣传，每个受检者抽取外周血并提取DNA ，应于PCR 对线粒体12SrRNA 基因片段进行扩增，应用直接测序法分别对线粒体12SrRNA 基因的2个基因片段进行直接测序。
结果：①2308名健康体检人群中，2000名同意进行常见耳聋基因筛查，接受率达86.96%。
②PCR 检测结果：以2000例研究对象的DNA 样本进行线粒体12SrRNA 基因的2个基因片段扩增，扩增产物片段大小与预期相符。
③测序结果：被检测的2000例研究对象中，3例（占0.15%）携带线粒体12SrRNA 基因A1555G 点突变，其中男性1例，女性2例；1例男性（占0.05%）携带线粒体12SrRNA 基因C1494T 点突变。
结论：常见耳聋基因筛查在健康体检人群中接受程度高，如列入常规的体检项目中，可以用于早期诊断，遗传咨询和指导该家系成员预防药物性耳聋，可以有效避免高危人群出现耳聋。
【关键词】健康体检遗传性耳聋遗传咨询线粒体12SrRNAAnalysis on mitochondrial DNA A 1555G mutation and C 1494T mutation amongpopulation receiving health physical examination in Handan areaYAO Gen －Dong ，LI Shou －Xia ，ZHANG Xiao －Fang et al .Clinical Laboratory ，Central Hospital of Handan City ，Handan 056001，Hebei ，China〔Abstract 〕Objective ：To investigate the carrier rates of mitochondrial DNA A1555G mutation and C1494T mutation among popu-lation receiving health physical examination in Handan area ，and identify the molecular basis of nonsyndromic hearing loss.Methods ：Pub-licity about common deafness genetic screening among population receiving health physical examination was conducted ，peripheral blood sam-ples were abstracted from every study object ，and DNA samples were obtained ，PCR was used to amplify segments of mitochondrial 12SrRNA gene ，the sequences of two gene segments of mitochondrial 12SrRNA gene were detected by direct sequencing method.Results ：Among 2308respondents receiving health physical examination ，2000respondents received common deafness genetic screening ，the acceptance rate was 86.96%.Two gene segments of mitochondrial 12SrRNA gene from DNA samples of 2000study objects were amplified ，the size of prod-uct was consistent with expectant size.Among 2000study objects ，3study objects （0.15%）carried A1555G point mutation of mitochondri-al 12SrRNA gene ，including one man and two women ；one man （0.05%）carried C1494T point mutation of mitochondrial 12SrRNA gene.Conclusion ：The acceptance level of common deafness genetic screening is high among the population receiving health physical examination ，and it can be used for early diagnosis ，genetic consultation ，and directing prevention of drug －induced deafness among the family members if it is included into routine items of health physical examination ，so deafness can be avoided effectively among high risk population.〔Key words 〕Health physical examination ；Hereditary hearing loss ；Genetic consultation ；Mitochondrial DNA12SrRNA随着我国经济的快速发展和国民生活质量的提高，社会整体的保健意识逐渐增强，定期对自己的身体进行检查，对疾病做到早预防、早诊断、早治疗已成为一种必然趋势，健康体检的健康服务产业正是基于此得到了迅速发展〔1〕。
耳聋是最常见的遗传病之一，而70%的遗传性耳聋表现为非综合征性耳聋（NSHI ）〔2〕。
有研究表明，中国人非综合征性耳聋（NSHI ）与为数不多的几个基因突变密切相关〔3〕，如mtDNA12srRNA 、SLC26A4、GJB2、GJB3及GJB6等〔4〕。
线粒体12S rRNA 基因上的一些突变主要发生于12S rRNA 基因和tRNASer （UCN ）基因〔5〕，其最常见的突变位点是A1555G 和C1494T 〔6〕。
该研究对在邯郸中心医院体检中心进行健康体检的2000名听力正常且无耳聋家族史的人群进行了常见耳聋基因线粒体12SrRNA 的筛查。
根据筛查结果提供相应的遗传指导，避免了新生患儿的产生，对提高人口素质方面起到了关键作用。
1资料与方法1.1研究对象2011年3月 2012年7月为在邯郸市中心医院体检中心进行正常体检的人群，2308名·179·要跟东等邯郸地区健康体检人群线粒体DNA A1555G 和C1494T 突变分析第6期体检人群进行常见耳聋基因筛查内容的宣传，其中2000名自愿接受常见耳聋基因筛查。
年龄22 56岁，平均40.3岁。
1.2试剂和仪器Exonuclease I、SAP（New England Biolabs公司）；去离子甲酰胺（HiDi）（美国ABI公司）；2ˑTaq PCR Master Mix（上海莱枫生物科技有限公司）；DNA提取试剂盒（美国AXYGEN生物技术有限公司）；微量核酸蛋白检测仪（美国Thermo 公司）；PCR仪（美国ABI公司9700热循环仪）；测序仪（美国ABI公司3730xl）；电泳仪、小型水平电泳槽（Bio－Rad公司）。
1.3方法1.3.1病史资料采集由受检对象本人填写个人史（头部外伤史、传染病史等）、家族史、体格检查（主要包括全身查体及耳部专科查体）和一些临床资料等。
所有受检研究对象均签署常见耳聋基因诊断知情同意书。
1.3.2血细胞标本的采集与储存清晨空腹采集受测对象外周静脉血5ml，采用EDTA－K2抗凝管，常温静置1h后，以2000r/min离心10min，分离血浆与血细胞，将所有标本统一编码，保存于－80ħ低温冰箱，建立血细胞标本库。
1.3.3PCR反应将线粒体12SrRNA基因的C1494T、A1555G两位点结合起来设计焦磷酸引物。
线粒体12SrRNA基因的2个基因片段扩增引物序列采用加拿大生物研究所提供的在线软件Primer3（ht-tp：//www－/cgi－bin/primer/ primer3.cgi/）进行设计。
引物序列见表1。
PCR反应条件：94ħ预变性5min；94ħ变性30sec，60ħ退火30s，72ħ延伸35s，35个循环；72ħ延长5min。
表1引物序列基因片段长度序列12SrRNA片段1697bp上游5＇－CAACCAAACCCCAAAGACAC－3＇下游5＇－AGAGGTGGTGAGGT TGATCG－3＇12SrRNA片段2474bp上游5＇－CAACCTCACCACCTCTTGCT－3＇下游5＇－GTA AGGTGGAGTGGGTTTGG－3＇1.3.4测序反应将384孔板放入ABI3730xl测序仪（Applied Biosystems，Foster City，CA，USA）中，测序。
1.4结果分析用Mutation Surveyor软件对测序结果进行比对分析。
DNA测序结果用Gene Tool1.0软件与NCBI网站公布的mtDNA的标准序列（NC－001807）进行比对，以筛查是否有突变位点的存在。
2结果2.1常见耳聋基因筛查接受率2308名研究对象中，2000名同意进行常见耳聋基因筛查，接受率达86.96%；所有受测对象均否认有耳聋家族史。
2.2PCR检测结果对2000名研究对象的DNA样本进行线粒体12SrRNA基因的2个基因片段PCR扩增，扩增产物片段大小与预期相符。