维生素类药物分析
维生素类药物分析(SYSH)
返 回9
第一节 维生素A
维生素A包括有维生素A1（视黄醇）、去 氢维生素A（维生素A2 ）和去水维生素A（ 维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，
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10
一、结构和性质
R:
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-H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
11
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25
（2）波长的选择： ① 1
VitA的max（328nm） ② 2 3
分别在1的两侧各选一点
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26
第一法 等波长差法
32 8 31 6 34 0 328
A 3校 2 8 3 . 5 正 2 A 2 3 2 A 3 8 1 A 3 6 4
测定对象 VitA醋酸酯
结构分析
CH3
CH3
CH3 CH3
环己烯
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共轭多 烯侧链
CH3 CH2OR
多异构体 UV 易被氧化
12
1、为一个具有共轭多烯侧链的环己烯 ❖ （1）具有UV吸收
❖ （2）存在多种立体异构化合物 ❖ （3）易发生脱氢、脱水、聚合反应
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13
2、不稳定性
VitA紫 外 线 、 O2 、 氧 化 剂 环氧化物 [ O]VViittAA酸 醛
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31
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32
中国药典收载方法
第一法（维生素A醋酸酯的测定） 将维生素A溶于环己烷，在规定波长测定吸
收度，计算吸收度比值（A/A328 ）
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33
数据处理
如果λmax在326-329nm之间，且A/A328比值未 超过规定值的±0.02，可直接按下式计算含 量：
维生素类药物分析
维生素类药物分析
发射波长435nm
第27页
对照液 + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 S
+ NaOH + 异丁醇
d
供试液 + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 A
+ NaOH + 异丁醇
b
VitB1%
Ab Sd
W对 W样
稀释度 稀释度
100%
维生素类药物分析
第28页
（3）特点 ①灵敏度高，线性范围宽 ②代谢产物不干扰，适合用于体液分析
VitA SbCl3 蓝色 紫红
CHCl3
4、溶解性 不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等
维生素类药物分析
第8页
二、判别试验
1、三氯化锑反应
维生素A在饱和无水三氯化锑无醇 氯仿溶液中展现不稳定蓝色，再变为紫 红色。
VitA SbCl3 蓝色 紫红
CHCl3
维生素类药物分析
第9页
反应条件：
① 要求无水，如存在水可能产生氯化 氧锑（ SbOCl ）。
2、UV分光光度法（药典用于测定片剂、注 射剂）
（1）原理：维生素B1分子中含有共轭双键结 构，含有紫外吸收特征，可在其最大吸收波 长下测定吸收度，依据取样量计算含量。
（2）方法
维生素类药物分析
第26页
（三）硫色素荧光法
（1） 原理
VitB
铁氰化钾
NaOH
硫色素
异丁醇 荧光
（2）方法与计算 激发波长365nm
维生素类药物分析
第48页
一、结构与性质
(一)结构
维生素D2为9，10-开环麦角甾5，7，10(19)， 22-四烯3β-醇，又名骨化醇或麦角骨化醇。
药物分析维生素
注意： C 为混合样品的浓度
A
B
换算因数由纯品计算而得：
第三步 求效价
第四步：求标示量％
01
方法：
03
第一法
02
04
维生素A醋酸酯
判断 是否在326～329nm之间
在326～329nm之间
改用第二法
是
否
求算 并与规定值比较
2、
内标法加校正因子
供试液（样品+内标）
对照液（对照+内标）
是样品中不存在的物质 与被测组分峰靠近 能与各组分完全分离 与被测组分的量接近
内标物
内标法
校正因子：
实际工作中的计算方法
W
W
K
K
%
VitE
100
1
2
=
稀释倍数
稀释倍数
样
对
×
×
×
×
01
HPLC法
02
外标法 此外，还有铈量法、比色法和荧光法
掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。
1
掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。
2
掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。
3
掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。
4
掌握维生素B1非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与注意事项。
5
熟悉本类药物其他的含量测定方法。
02
A300 ：0.374
A316 ：0.592
A328 ：0.663
A340 ：0.553
A360 ：0.228
A300 /A328 ：0.564
A316/A328 ：0.893
药物分析维生素类药物的分析
终点颜色：无色→蓝色 1ml 0.1mol/L碘液，1ml8.806mg C6H8O6 加入新沸放冷的水为了减少水中溶解氧的影响。 酸性：使VC在空气中氧化速度减慢。
VC注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSO3作为抗氧剂.
2、 2,6-二氯靛酚滴定法 酸性下直接用2,6-二氯靛酚滴定，用滴定剂
自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。
VA(5个共轭双键)在盐酸中加热,生成6个共轭双键的 去水VA
VA在326nm有一个吸收峰 去水VA在350-390nm有三个吸收峰（P247）
3、TLC：
确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯， 例：VA和其标准品用环己烷溶解
展开剂：环己烷—乙醚（80：20） 板：硅胶G 显色：磷钼酸为显色剂 Rf： VA 醇 0.１
二、鉴别试验 1、硝酸反应：（药典收录）VE在硝酸条件下,水解生
成生育酚.生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红. VE + HNO3 ----水解生成生育酚-----生育红（橙红色）
2、水解后氧化反应： VE在碱性条件下水解，得α—生育酚，在联吡啶和
三氯化铁试液的作用下，反应产生血红色配离子。
VE+KOH – α生育酚（加入三氯化铁）--生育醌 + 铁配合物 （血红色）
VB1分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，在非 水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。
溶剂：冰醋酸 / 醋酸汞 指示剂：喹哪定红- 亚甲蓝混合指示液 滴定剂：高氯酸（0.1mol/L) 终点：天蓝色 摩尔比：VB1：高氯酸=1：2 VB1摩尔质量=337.27 滴定度T=0.1×(1/2) ×337.27=16.86mg/ml
二. 鉴别试验 1. 硫色素荧光反应：
维生素B1在碱性溶液中，与铁氰化钾氧化成硫色 素，在正丁醇中显蓝色荧光
维生素
第九章 维生素类药物分析练习思考题1.将维生素A溶于无水乙醇-盐酸溶液中，测定紫外吸收光谱，在326nm波长处有一吸收峰，而将此液置水浴上加热，冷却后，在300-400nm范围内出现3个吸收峰，这是为什么？2.用紫外分光光度法测定维生素A含量时，采用三点校正法的目的是什么？3.药典规定以什么表示维生素A的质量，它与重量关系如何？4.维生素A用紫外法测定含量时，要应用校正公式，此校正公式的推导有哪两种方法？分别说说每一种方法中λ2、λ3是怎样选择的？5.按照中国药典维生素A测定法测定时，什么情况下需应用校正公式？什么情况下需用第二法测定？6.紫外分光光度法测定维生素A中的换算因数1900的含义是什么？含量计算公式中的E1%cm与通常意义的E1%cm有何不同？7.维生素E具有怎样的结构特点和性质？8.维生素E中游离生育酚的检查原理是什么？9.中国药典、美国药典、日本药局方分别采用什么方法测定维生素E的含量？10.维生素B1具有怎样的性质？可用哪些方法进行鉴别？11.盐酸硫胺的特殊反应是什么？说明其原理。
12.重量法测定维生素B1时，为什么要加盐酸？硅钨酸量对含量测定有何影响？13.硅钨酸重量法测定维生素B1时，其重量换算因数0.1939是如何求得的？14.硅钨酸重量法测定维生素B1中，生成的沉淀为什么要依次用煮沸的盐酸溶液、水和丙酮洗涤？15.维生素B1除用硅钨酸重量法、非水碱量法测定含量外，还可采用什么方法测定含量？试举2～3例，并说明测定原理。
16.维生素C具有哪些鉴别反应？17.药典采用什么方法测定维生素C含量？该法测定时应注意什么问题？18.用2，6-二氯吲哚酚测定维生素C含量时，如何判断滴定终点？19.维生素D的含量测定中国药典采用HPLC法，该法所用的色谱柱和流动相与一般反相色谱法有何区别？药典收载了几种测定方法，分别用于什么情况下维生素D的含量测定？选择题一、最佳选择题1. 维生素A具有易被紫外光裂解、易被空气中氧或氧化剂氧化等性质，是由于分子中含有（ ）A、环已烯基B、2,6,6-三甲基环已烯基C、伯醇基D、乙醇基E、共轭多烯醇侧链2. 维生素C能与硝酸银试液反应生成去氢抗坏血酸和金属银黑色沉淀，是因为分子中含有（ ）A、环已烯基B、伯醇基C、仲醇基D、二烯醇基E、环氧基3. 维生素C一般表现为一元酸，是由于分子中（ ）A、C2上的羟基B、C3上的羟基C、C6上的羟基D、二烯醇基E、环氧基4.中国药典测定维生素E含量的方法为（ ）A、气相色谱法B、高效液相色谱法C、碘量法D、荧光分光光度法E、紫外分光光度法5.下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是（ ）A、维生素AB、维生素B1C、维生素CD、维生素DE、维生素E6.紫外法测定维生素A含量时，测得λmax在330nm，A/A328比值中有一个比值超过了规定值±0.02，应采用什么方法测定（ ）A、多波长测定B、取A328值直接计算C、用皂化法（第二法）D、用校正值计算E、比较校正值与未校正值的差值后再决定7.用碘量法测定维生素C的含量，已知维生素C的分子量为176.13，每1mL碘滴定液（0.1mol/L）相当于维生素C的量为（ ）A、17.61mgB、8.806mgC、176.1mgD、88.06mgE、1.761mg3.需检查特殊杂质游离生育酚的药物是（ ）A、维生素AB、维生素B1C、维生素CD、维生素EE、维生素D9．重量法测定时，加入适量过量的沉淀剂，可使被测物沉淀更完全，这是利用（ ）A、盐效应B、酸效应C、络合效应D、溶剂化效应E、同离子效应10. 2.6－二氯靛酚法测定维生素C含量，终点时溶液（ ）A、由红色→无色B、由蓝色→无色C、由无色→红色D、由无色→蓝色E、由红色→蓝色11.硫色素荧光法测定维生素B1溶液，测得对照液荧光强度为45%（浓度2.0μg/mL），空白液荧光强度为5%；样品液荧光强度为55%，空白液荧光强度为5%。
药物分析维生素类药物的分析
在方法验证的基础上，可构建维生素类药物分析的评价指 标体系，包括定量限、检测限、回收率、重复性、稳定性 等指标，以全面评价分析方法的性能。
持续改进方向和目标设定
持续改进方向
针对维生素类药物分析过程中存在的问题和 不足，可进一步改进样品前处理方法、优化 分析条件、提高检测灵敏度等，以不断提高 分析结果的准确性和可靠性。
数据处理和结果表达技巧分享
数据处理
对HPLC和UV-Vis法得到的数据进行整理、归纳和统计 分析，包括峰面积、保留时间、浓度等参数的计算和 处理。
结果表达
将分析结果以图表形式呈现，如色谱图、标准曲线图、 含量分布图等，使结果更加直观、易于理解。同时，对 分析结果进行解释和说明，提出改进意见和建议。
在选择维生素类药物的标准品时，应确保其 纯度高、稳定性好，且具有代表性。同时， 应关注标准品的来源和溯源性。
使用注意事项
在使用标准品时，需按照规定的条件进行保 存和使用，避免污染和降解。此外，应定期 对标准品进行复验和更新。
检测方法验证及评价指标体系构建
要点一
检测方法验证
要点二
评价指标体系构建
为确保维生素类药物分析方法的准确性和可靠性，需进行 方法学验证，包括专属性、线性、范围、准确度、精密度 等指标的考察。
质量控制体系建立及实施情况介绍
质量控制体系
为确保维生素类药物分析结果的准确性和可靠性，需建立全面的质量控制体系，包括样 品采集、前处理、分析测试、数据处理等各个环节。
实施情况
目前，质量控制体系已在多个实验室得到广泛应用，有效提高了维生素类药物分析的准 确性和一致性。
标准品选择与使用注意事项
标准品选择
通过对该维生素类药物的定性、定量分析，评估其质量 稳定性和一致性，为药物研发、生产和监管提供科学依 据。
第十章维生素类药物的分析48
1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm
4. 吸收度校正公式：
A328 3.52(2A328 A316 A340) （校正）
A328 A328(校）
5.维生素A醋酸酯效价计算
效价(IU/g)样=
A A max×D
W×L×100
×1900
5.维生素AD胶丸中维生素A 的标示百分含量计算公式
判断差值是否超过规定值的
Ai 规定值 A 328
0.02
3）．计算校正吸收度
吸收度校正公式：
A328 3.52(2A328 A316 A340) （校正）
A328 328 （校正） A P= 100% A328
小结： 1. max 在326~329nm，计算比值差值。 max不在326~329nm，第二法测定。
释至9～15IU / ml 于300、 310、 325、 334nm处测A
(二).性质
1.溶解性：
＊ 不溶于水 ＊ 溶于乙醚，氯仿，异丙 醇，环己烷，脂肪和油。
2.
不稳定性
＊共轭多烯侧链—性质非常活泼.
Lewis , 无水HCl VA 脱水VA
光, 热, 氧化剂, 氧 VA 氧化产物(无活性）
维生素A的氧化产物：
▲ⅰ．环氧化物
1）. 相关物质的吸收 a. 维生素A的衍生物
ⅰ．维生素A2 去氢维生素A
CH2OH
效价为维生素A1的40%，max345~350nm
ⅱ．维生素A3
去水维生素A
CH2
效价低于维生素A1，max385~390nm
b. 维生素A的氧化产物：
环氧化物，醛，酸
d. 鲸醇：VA醇的二聚体，没有生物活性
维生素类药物的分析方法
（3）维生素A在光照下产生的无活性的聚合物：鲸醇。 （4）维生素A的异构体等： 以上这些杂质在 310nm~340nm 的波长范围内有吸收， 所以干扰维生素A的测定。
12
5. 合成的维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式
维生素A，如供试品中干扰测定的杂质较少，能符合下 列第一法测定的规定时，可用溶剂溶解供试品后直接 进行测定，否则应按第二法，经皂化提取除去干扰后 测定。
pH不同的溶液，在247nm处分别测定差示吸收值
（ΔA）。以浓度C为横坐标，以差示吸收值ΔA为纵坐 标绘制标准曲线。
30
样品的测定 取本品20片，精密称定，研细。精密称取适量粉末，
（2）反应介质需无水 （3）温度对呈色强度的影响很大 （ 4）本反应并非维生素 A专属，在相同条件下，某些有关物质均与
三氯化锑显蓝色，干扰测定，常使测定结果偏高。
（ 5 ）三氯化锑试剂有强的腐蚀性，易损坏皮肤和仪器，使用时应 严加注意。
15
（三）高效液相色谱法
采用RP-HPLC法同时测定人血清中维生素 A和维生素E的含量。 根据不同病理生理状态下人血清中维生素A、E的浓度，寻求弄清 与某些疾病的关系，为临床治疗学、营养学等研究提供参考。 1. 仪器与色谱条件 色 谱 柱 为 C18 ； 流 动 相 为 甲 醇 - 水 （ 96:4 ） ； 流 速 为 1.2ml/min。内标物为维生素A醋酸酯。 2. 分析用样品液 对照品：维生素A，维生素E，维生素A醋酸酯
维生素类药物的分析方法：
生物法 微生物法 化学法 物理化学法
2
第一节
维生素A的分析
维生素A 包括
药物分析笔记
目录第十四章维生素类药物分析 (1)第十五章.甾体激素类药物的分析 (6)第十七章.合成抗菌药物的分析 (10)第十二章.喹啉与青蒿素类抗疟药物的分析 (13)第十六章.抗生素类药物的分析 (15)第六章芳酸类非甾体抗炎药物的分析 (19)第九章.二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析 (22)第八章.对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析 (24)第七章.苯乙胺类拟肾上腺素药物的分析 (27)第十章.巴比妥及苯并二氮卓类镇静催眠药物的分析 (30)第十一章.吩噻嗪类抗精神病药物的分析 (32)第十三章.莨菪烷类抗胆碱药物的分析 (33)第一章.药品质量研究的内容与药典概况 (35)第二章.药物鉴别试验 (38)第三章.药物的杂质检查 (41)第四章.药物的含量测定方法与验证 (45)第五章．体内药物分析 (49)第十八章.药物分析概论 (51)第十九章.中药及其制剂分析的概论 (53)第十四章维生素类药物分析○1维生素A一.结构与性质（一）结构1.维生素A结构为具有一个共轭多烯酸侧链的环乙烯2.天然维生素A主要是全反式维生素A3.VitA→VitA2（-2H），VitA1→VitA3（-H2O）（二）性质1.溶解性（与CHCl3，乙酸中微溶，在水中不溶）2.不稳定性（制成酯，凉暗处保存，充氮气或加入合适的抗氧剂以提高药物的稳定性）3.紫外吸收特性（具有共轭多烯的侧链结构，在325-328nm有最大吸收，可用于鉴别或含量测定）4.与三氯化锑呈色（VitA在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定蓝色，可用于鉴别或用比色法测量）二.鉴别试验（一）三氯化锑反应（Carr-Price反应）1.原理：维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中即显蓝色，渐变成紫红色机制：行成不稳定的蓝色碳正离子（二）紫外吸收光谱维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶液在326nm的波长处有最大吸收峰。
当在盐酸催化下加热，生成脱水维生素A（vita3），最大吸收峰向长波长位移（红移），同时在350-390nm的波长间出现三个吸收峰。
药物分析 第十四章 维生素类药物的分析
第一节 维生素A的分析
➢紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm之间有最大 吸收，可用于鉴别。
H3C
CH3
9
CH3
7
8
6
5 4
CH3
3 1CH2OR
2
CH3
第一节 维生素A的分析
λmax 相对生物效价
维生素A 新维生素Aa 新维生素Ab 新维生素Ac 异维生素Aa 异维生素Ab
325.5 328 320.5 310.5 323 324
1 325nm, 2 310nm, 3 334nm
第一节 维生素A的分析
合成的或天然的维生素A 均为酯式维生素A， 根据供试品中干扰杂质的多少，可采用：
（1）直接测定法 （2）皂化法
4. 测定方法
（1）基本步骤
A选择，A328测定或A328校正
求 % 1cm(样)
% 1cm(样)
A C(%) l
= + 0.04
A32校 8 正 3.522A328 A316 A340 3.5220.6280.5610.523
0.605
第一节 维生素A的分析
f A328(校正) A328100% A328
3.7%(15%~ 3%)
标 示% 量 A3C2(g8校 /1正 0m 01)l900平 标均 示丸 量重 10% 0
（一）Carr-Price反应 与三氯化锑呈色反应
Vit A
SbCl3
蓝色
CHCl3(无水无醇)
紫红色
第一节 维生素A的分析
+
CH2
蓝色
+
CH2
紫红
第一节 维生素A的分析
条件： 无水、无醇
药物分析 第09章 维生素类药物的分析
ChP 片剂、注射剂
g/100ml
E11c%m = 421 A = ECL
（每片）相当于标示量的%=
E 1 1c % A m 10W 0稀 1 释 平 标 度 均 示 1 片 量 0% 0
g
稀释倍数 稀1释度
规格 g/片
（三） 硅钨酸重量法
1、 重量法特点
准确度高 灵敏度低 操作繁琐 设备简单
（三） 其他反应
S元素反应
V iN t B a N O P a H A b S c P b
HA N O3 g N AO g 白 C N H N lH H OO
K 2 HH + 4 g I淡[黄 B ]H 2H4g
I 2 H + K I 红 [B 色 ]H I2 I
硅 H 钨 + 酸白
色[B]2SiO2OH2
12WO 34H2O
苦 H +酮 酸 白 色 扇 形
橙红色
强氧化剂
H3C
CH3 O
O O
H3C HO
HNO3
CH3 O
CH3
CH3 C16H33
生育酚
CH3 C16H33
生育红（橙红色）
（二） 三氯化铁－联吡啶反应
VitE
K△OH
生育酚
Fe 3
[O]
对 生育醌
Fe 2 联吡啶 红色
H3C
CH3 O
CH3 C16H33
2×337.27
3479.22
换 算 2 因 M V数 i1t B 233 .27 70.19 M 沉淀34.2729
3、 测定方法
药物分析-14维生素类药物的分析
§14 维生素类药物的分析·脂溶性维生素：VitA、D2、D3、E、K1等·水溶性维生素：VitB族（B1、B2、B6、B12）、VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺一、维生素A中国药典收载的维生素A是指人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。
（一）结构与性质1.具有一个共轭多烯侧链的环己烯·具有UV吸收·存在多种立体异构化合物2.不稳定性（1）易发生脱氢、脱水、聚合反应·脱氢维生素A（A2），脱水维生素A（A3）效价低于维生素A ·鲸醇（维生素A醇的二聚体）无生物活性（2）共轭多烯侧链易被氧化维生素A应凉暗处保存，充氮气或加抗氧剂★3.与三氯化锑发生呈色反应4.溶解性不溶于水，乙醇中微溶；易溶于有机溶剂和植物油等（二）鉴别试验1.三氯化锑反应条件: 无水（SbCl3水解），无醇（和碳正离子作用使其电荷消失）。
2.UV法（BP2003）VitA有一个吸收峰，盐酸催化下加热30s生成脱水VitA，有三个吸收峰，且红移（向长波长位移）。
3.TLC法·BP 对照品法（供试品与不同VitA酯类），显色剂：三氯化锑·USP 规定斑点颜色和Rf值，显色剂：磷钼酸（氧化剂）12（三）含量测定 ★1.三点校正法 （1）原理①杂质的吸收在310~340nm 波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；②物质对光的吸收具有加和性。
（2）波长的选择λ1为VitA 的λmax ；λ2、λ3为分别在λ1的两侧各选一点 ①等波长差法——VitA 醋酸酯nm 12340316328=∆λλλλ，、、)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）②等吸收比法——VitA 醇33431032576A A A == 334310325325260.4555.2815.6A A A A --=（校正）（3）测定方法①直接测定法（等波长差法）——高纯度维生素A 醋酸酯 Ⅰ核对λmax/329~326max 328改用造化法与规定值比较求否是−→−−→−∈A A nm i λ Ⅱ计算吸收度比及比值差规定吸光度比值-328/A A iⅢ判断差值是否超过±0.02，确定用A 或A 校正%15%3)3%%,15(]%3,%3[32802.032832832802.0计算用改用皂化法＜或＞计算用计算用、计算无超过（校正）（校正）有超过A f f A f A f f A −−−−→−→-+→--∈→+-∈→−−−−→−±±)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）%100328328328⨯-=A A A f （校正）Ⅳ求（样品）%11cm E lc AE cm ⨯=)%(%11（样品）·注意：（纯品）（样品）%11%11cm cm E E ≠，c 为混合样品的浓度。
第九章维生素类药物分析
1、具紫外吸收 2、易氧化变质 3、能与三氯化锑呈色 4、水中不溶。
第一节 维生素A的分析
二、鉴别试验
1. 三氯化锑反应
VA 蓝色 → 紫红色 CHCl
SbCl3
3
2. 紫外吸收光谱
VA的无水乙醇溶液在328nm有最大吸收。 3、TLC
第一节 维生素A的分析
例：VA和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷—乙醚（80：20） 板：硅胶G 显色：SbCl3T.S. Rf： VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA棕榈酸酯 0.75
第一节 维生素A的分析
A300 A316 A328 A340 A360 ：0.354 ：0.561 ：0.628 ：0.523 ：0.216
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
Ai A 328
：0.555 ：0.907 ：1.000 ：0.811 ：0.299
换算因数
IU / g （纯品）
1% E1cm （纯品）
1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯 1g的维生素A醋酸酯就相当于
1,000,000 2,907 ,000 IU 0.344
% 1530（环己烷、 维生素A醋酸酯 E1cm
328 ）
第一节 维生素A的分析
2907000 换算因子 1900 1530
H3C N N NH2 CH2 N+ S CH2CH2OH
. Cl-.HCl
CH3
1、水中溶解 2、具紫外吸收 3、碱性中可被氧化 4、两个杂环与生物碱沉淀试剂反应
第二节 维生素B的分析
二、鉴别试验： 1、硫色素反应：
维生素B1 铁氰化钾 硫色素
药物分析
第9章维生素类药物分析一、练习思考题1. 将维生素A溶于无水乙醇-盐酸溶液中，测定紫外吸收光谱，在326nm波长处有一吸收峰，而将此液置水浴上加热，冷却后，在300nm～400nm范围内出现3个吸收峰，这是为什么？2. 维生素E具有怎样的结构特点和性质？3. 维生素B1具有怎样的性质？可用哪些方法进行鉴别？4. 维生素C具有哪些鉴别反应？二、选择题1．维生素A具有易被紫外光裂解，易被空气中氧或氧化剂氧化等性质，是由于分子中含有（）A. 环已烯基B. 2，6，6-三甲基环已烯基C. 伯醇基D. 乙醇基E.共轭多烯醇侧链2．维生素C一般表现为一元酸，是由于分子中（）A. C2上的羟基B. C3上的羟基C. C6上的羟基D. 二烯醇基E.环氧基3．中国药典测定维生素E含量的方法为（）A. 气相色谱法B. 高效液相色谱法C. 碘量法D. 荧光分光光度法E.紫外分光光度法4．下列药物的碱性溶液，加入铁菁化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是（）A. 维生素AB. 维生素B1C. 维生素CD. 维生素DE. 维生素E5．需检查特殊杂质游离生育酚的药物是（）A. 维生素AB.维生素B1C.维生素CD.维生素EE.维生素D参考答案：二、选择题1. E2. B3. A4. B5. D第10章甾体激素类药物分析一、练习思考题1．甾体激素类药物可分为哪几类？2．如何根据甾体激素类药物的结构特征进行鉴别确证？3．异烟肼比色法可用于哪些甾体激素类药物的含量测定？请说明测定原理、影响因素及主要应用范围？二、选择题1．四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量测定？（）A. 可的松B. 睾丸素C. 雌二醇D. 炔雌醇E. 黄体酮2．Kober反应用于定量测定的药物为（）A. 口服避孕药B. 雌激素C. 雄性激素D. 皮质激素E. 孕激素3．氢化可的松因保管不当，C17-α-醇酮基有部分被分解，欲测定未被分解的氢化可的松的含量应采用（）A. 三氯化铁比色法B. 紫外分光光度法C. 异烟肼比色法D. 四氮唑比色法E. 酸性染料比色法4．分别有可的松、黄体酮、地塞米松磷酸钠三种制剂，要进行含量测定，可采用（）A. 四氮唑法测定可的松、黄体酮、异烟肼法测定地塞米松磷酸钠B. 异烟肼法测定该三种药物C. 四氮唑法测定黄体酮、地塞米松磷酸钠，2，4-二硝基苯肼法测定可的松D. 铁酚试剂法测定地塞米松磷酸钠，四氮唑法测定可的松，异烟肼法测定黄体酮E. 芳香醛比色法测定黄体酮、可的松，HPLC测定地塞米松磷酸钠5. 四氮唑比色法测定皮质激素时，下列哪一个药物反应最快？（）A. 地塞米松磷酸钠B. 可的松C. 氢化可的松D. 醋酸氢化可的松E. 醋酸泼尼松龙6. 某药物与硫酸-乙醇共热产生黄色，冷却后加水或稀硫酸稀释，加热显桃红色，此药物是（）A. 睾丸素B. 黄体酮C. 雌二醇D. 炔诺酮E. 可的松7. 下列哪个药物具有盐酸苯肼反应？（）A. 黄体酮B. 苯甲酸雌二醇D. 甲睾酮E. 氢化可的松8. 下面哪一种说法不正确？（）A. Kober反应用于雌激素测定B. 紫外光谱法用于所有甾体激素测定C. 四氮唑法用于皮质激素测定D. 异烟肼法用于所有甾体激素测定E. 盐酸苯肼法用于皮质激素测定参考答案：二、选择题1. A2. B3. D4. B5. B6. C7. E8. D第11章抗生素类药物分析一、练习思考题1．抗生素类药物具有哪些特点？分析方法和含量表示方法与化学合成药有何不同？2．β-内酰胺类抗生素具有怎样的结构特征和性质？3．β-内酰胺类抗生素的含量可采用多种理化方法测定，这些方法分别利用了该类药物的什么性质？4．链霉素的麦芽酚反应、N-甲基葡萄糖胺反应、坂口反应分别利用了链霉素分子的哪部分结构？说明方法的原理与专属性。
维生素类药物分析
A3（ 2校 5 ） 正 A32510% 0 (P) A325
最大吸收波长是否在323～327之间
是 A300/A325是否≤ 0.73
否 色谱法纯化
是
否
A325校正A325100%
A325
A325校正 = 6.815A325-2.555A310-
A 325校正4.260A334 A 325
A 325校正
A3 2 8
A300/A325 ≤ 0.73
超
否
A A3（ 28校正 A3） 2810% 0
A3 2 8
32 8
±3% 之间：A328
-15%～-3%： A328校正
A325校 A正 325A325100% 色法谱 ±3% 之间：A325
<-15%或>+3%:皂化
<-3%或>+3%: A325校
法A328校正
＊相关物质—结构相似,维生素A最大吸收波长 附近也有吸收，对测定有影响。
＊Morton和Stubbs等人在1946年提出了三 点
校正法。
相关物质的吸收
＊a. 维生素A的衍生物（A2、A3） ＊ b. 维生素A的氧化产物 ＊ c. 合成时的中间体
＊ d. 鲸醇：维生素A醇的二聚体， 无生物活性
＊ e. 维生素A异构体 ＊ f. 稀释用油
练习题：维生素A醋酸酯胶丸的含量测定 已知：平均胶丸重为0.0815g 维生素A的标示量为10000IU/丸 取 样 ： 0.1279g→100ml ， 从 中 取 出 2ml →
25ml.
求：维生素A醋酸酯的标示百分含量。
首先计算吸收度比值和吸收度比值差。由结果 知，需计算校正吸收度。
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水浴
浓缩
①算吸光度比值
波长： 300、310、325、334nm
测定： A0、 A1、 A2、 A3
找到： λmax = 325nm （323~327）
在323~327nm，皂化法测定。
不在323~327nm，色谱法纯化。
计算比值：A0/A2 ---- A300/A325
②判断
吸光度比值是否≤ 0.73
（二）紫外分光光度法
VitA2、A3：6个共轭双键，红移.
UV
VitA：5个共轭双键，无水乙醇液λmax=326nm
（三）薄层色谱法
TLC
目的：鉴别醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯
▲例：VA和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷—乙醚（8：2） 薄层板： 硅胶G 显色剂： SbCl3 T.S. 现 象： 蓝色斑点 Rf ：VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA 棕榈酸酯 0.75
VitA 醇 VA1 VitA 醋酸酯
retinol vitamin A acetate
—COCH3
R=
—COC15H31 VitA 棕榈酸酯 vitamin A palmitate
C H2O R
去氢VitA（A2，dehydroretinol）
C H2
去水VitA（A3，anhydroretinol）
1 2 3 1 12nm
VA醋酸酯 1 =328nm 2 =316nm 3 =340nm
VA 醇 1=325nm 2=310nm 3=334nm
（4）测定方法
Ch.p收载有2种方法
第一法（直接测定法）
环己烷 样品配制成9 ~ 15IU ml规定波长处 测A
＊如果人体缺少某种维生素，就会 引起维生素缺乏症，而影响人体的 正常生理机能。
• • • • VitA 缺乏—夜盲症 VitB1缺乏—脚气病 VitC 缺乏—坏血病 VitD 缺乏 —
二、分类－按溶解度
脂溶性： VitA、D、E、K等
VitB族（B1、B2 、 B6 、B12等） 水溶性： VitC 、烟酸、叶酸、烟酰胺、泛 酸等
A W 1900 100% c 100 L 标示量 A
W 1900 100% W 标示量 100 L D A D 1900 W 100% W 100 L 标 示 量
小结：第一法（直接测定法）--VA醋酸酯
① ②
Ai 药典规定值 A 328
A325校正 = 6.815A325－2.555A310－4.260A334
A325 校正） A325 （ 100% A325
( P)
最大吸收波长是否在323～327之间 是 A300/A325是否≤ 0.73 否 色谱法纯化
A 325 校正 A 325 100% A 325 A325校正 = 6.815A325-2.555A310-4.260A334
计算比值：A0/A2 、A1/A2 、A2/A2 、A3/A2 、A4/A2
比较： A i
A 328
药典规定值
测定 波长 300 316
吸光 度
吸光度比值 计算 值 规定 值 0.555
吸光度比 值差
0.907
(325)
328 (330) 340 360
1.000
0.811 0.299
②判断
Ai 规定值 A 328
IU/g w 标示量% 100% 标示量 121068 0.0815 100% 98.7% 10000
第二法(皂化法)
测定对象 等吸收比法
** 样品一定量
VitA醇 300、310、325、334nm
乙醚 提取 9～15IU/ml
EtOH + KOH △皂化 异丙醇 溶介
1 106 ug 1g维生素A醋酸酯= 2907000IU 0.344ug/IU
E1% 数值所相当的效价 b:换算因子的定义：单位 1cm
效 价 （IU/g） 换 算 因 子 E1% (λ max ) 1cm
Байду номын сангаас
换算因子 （维生素A醇） = 3330000/1820 = 1830 换算因子 = 2907000/1530 = 1900 （维生素A醋酸酯）
Vit A、D、E、B1、C 鉴别试验
结构性质
杂质检查 含量测定
第一节 维生素A的分析 Analysis of vitamin A
VitA1： 视黄醇，生物活性最高
VitA
VitA2： 去氢维生素，活性是VA1的30-40% VitA3： 去水维生素，活性是VA1的0.4%
故通常所说的维生素A是指维生素A1。
药典收录情况
人工合成的VA醋酸酯结晶 加精制植物油制成的油溶 液，还有VA胶丸、VAD胶丸 和VAD滴丸
Ch.P
一．结构与性质
1 ．化学结构
环己烯
共轭多 烯侧链
存在多种立体异 构化合物 具有UV吸收
2 3 4 5
9' 1 8' 6
7'
5'
3'
CH2 OR
2'
1'
6'
4'
R=H R=
SbCl3/ CHCl3 VitA(10～20IU/ml) 蓝色 ～ 紫红色 无水/无醇
反应机理：
VA与三氯化锑(SbCl3)中存在的SbCl5作用形成 不稳定的蓝色正碳离子。
注意事项：反应需在无水、无醇条件下进行。 水可使SbCl3水解成 SbOCl 乙醇可与正碳离子作 用，使正电荷消失
溶剂：无水三氯化锑的无醇氯仿溶液
6个共轭双键
结构特点：
（1）环己烯 + 共轭多烯侧链；5个双键 （2）存在多种立体异构体，具有UV吸收 天然 VitA 侧链为全反式； （3）通常所说的维生素A是指维生素A1 （4）天然来源为鱼肝油，主要为醋酸酯和 棕榈酸酯。目前多为人工合成产物
（二）性 质 Properties
1
溶解性 不稳定性
由此可知，应该用测得的A328计算。
A E CL 0.1279 2 C 100 0.010232g/ ml 100 25
1% 1cm
E
1% 1cm
0.652 63.72 0.010232 1
IU/g E1% 1900 63.721900 121068(IU/ g) 1cm
1=328nm; 2=316nm; 3=340nm
ii．等吸收比法：测VitA醇
Aλ2 Aλ3 6 A λ1 7
1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm
*波长的选择
1：VitA的max 2、3：分别在1两侧
ⅰ．等波长差法：
ⅱ．等吸收比法：
A λ 2 A λ1 6 A λ max 7
C:求
E
1% 1cm
A : A328校正 A328
E
1% 1cm
A A c(%) L c 100 L
d:求效价
效价（ IU/g） E1% 换算因数 1cm
平均丸重 效 价 （IU/g） 100% 标示量 E
e:求标示量%
1% 1cm
W 换算因子 100% 标示量
溶解
测定对象 VA醋酸酯
等波长差法
300、316、328、340、360nm
325
330
①算吸光度比值差
波长： 300、316、328、340、360nm
测定： A0、 A1、 A2、 A3、 A4
找到： λmax = 328nm （326～329）
在326~329nm， 第一法测定。 不在326~329nm，第二法测定。
三、含量测定
1
紫外-可见分光光度法 比色法 高效液相色谱法
2
3
（一）紫外-可见分光光度法 Ch.P 2005
利用共轭多烯结构， 在325～328nm处有选择性吸收峰
方法：三点校正法——三波长测定法 （1）原因 （2）原理 （3）波长的选择 （4）测定方法
（1）原因
为了消除杂质（相关物质）吸收所引起的误差 ＊相关物质—结构相似,维生素A最大吸收波长
A328校正 3.52(2A A316 A340 ) 328
A 328 （校正） A 328 A 328
100%
( P)
最大吸收波长是否在326～329之间
是 否
计算吸收度比值之差是否超过±0.02 第二法（皂化） 是 否
A 328 校 正 ） A 328 （ A 328
皂化
判断 A328, A 328校正
③
求
E
1% 1cm
E
1% 1cm
A cL
1% 1cm
④ 求效价
效价（ IU/g） E
换算因数
平均丸重 标示量% 效 价 标示量 ⑤求 A D 1900 W 100% W 100 L 标示量
练习题：维生素A醋酸酯胶丸的含量测定 已知：平均胶丸重为0.0815g 维生素A的标示量为10000IU/丸 取样：0.1279g→100ml，从中取出2ml → 25ml. 波长 300 316 328 340 360 吸收度 0.374 0.584 0.652 0.534 0.211 比值 0.574 0.896 1 0.819 0.339 规定值 比值差 0.019 0.555 0.907 -0.01 1 0 0.811 0.008 0.04 0.299
a:杂质吸收在310nm～340nm范围近似呈一条直线， 随λ↑, A↓
b:物质对光的吸收具有加和性 A样品 = A维生素A + A相关物质
（3）波长的选择