活菌制剂冻干保护剂的研究进展
直投式泡菜发酵剂冻干保护剂的研究
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强 的 高效 浓 缩 型 乳 酸 菌 发 酵 剂 ， 须 降 低 冷 冻 干 燥 必
酵， 以保 证 安 全 正 常 的 生 产 和 优 良可 口 的风 味 ［ 。 １ ］
ｒ ｉｅ．Ｔｈ ｐ ｉ ｌｆｒ ｌ ｂ ａ ｅ ｓ１ ｏ ｋｍ ｌ ，３ ｏ ｒｈ ｌｓ ，４ ｏ ｕ ｒ ｓａ ｄ ｏｄ ｓ ｅｏ ｔ ｏ ｍｕａ ｏ ｔｉ ｄ ｉ ０ ｍａ ｎ ｆｓ ｉ ｍｉ ｋ ｆｔｅ ａｏｅ ｆｓ ｃｏ ｅ ｎ Ａ ０ ０ ２ ｏ Ｓ ， ｎ ｈ ｅ ｕ ｖｖ ｌ ａｅｃｎｕ ｏ７ ． ６ ｉ ｈ ｏ ｆ ｍａｉｎ ．５ ｆ Ｍｎ Ｏ‘ ａ ｄｔｅｃｌ ｓ ｒｉａ ｒｔ ａ ｐｔ ７ ８ ％ ｎｔｉ ｄ ｐｒ ｔ ｔｏ ｎ ｄｉｅ ｔｖ ｔｓ ｔ ｉ ｃ ｅ ｕ ｙ ｏｎ ｆｅ ｅ－ ｒｅ ｏ ｅｃ ｉ ｎ ｏ ｒ ｃ ａ ｅ ｎ ｐｉｋｌ
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发酵乳杆菌(H0801)冻干保护剂的优化
分析与检测发酵乳杆菌是乳酸菌的一种，广泛存在于发酵食品中，由于其对胃肠道环境具有较好的适应能力、对胆固醇具有较强的降解能力以及具有免疫调节等促进人体健康的作用。
本研究以发酵乳杆菌为研究对象，对其冻干保护剂种类及添加量进行筛选，利用单因素和正交实验确定其冻干保护剂的最佳配方。
1 材料1.1 菌株发酵乳杆菌（H0801），由汉臣氏（沈阳）儿童制品有限公司提供。
1.2 MRS培养基蛋白胨1%、牛肉粉0.5%、酵母粉0.4%、葡萄糖2%、吐温-800.1%、磷酸二氢钾0.2%、乙酸钠0.5%、柠檬酸0.2%、硫酸镁0.02%、硫酸猛0.005%以及琼脂粉1.5%，按比例配制1 L，pH为6.80。
1.3 菌泥制备5%接种量、温度37 ℃、培养24 h，12 000 r/min离心10 min，菌泥备用。
2 方法2.1 单一保护剂添加量的确定5种保护剂原料及其添加量为脱脂乳粉（4%、6%、8%、10%与12%）、海藻糖（1%、3%、5%、10%与15%）、麦芽糊精（0.5%、1%、3%、5%与7%）、VC钠（0.02%、0.04%、0.08%、0.1%与0.15%）及甘油（0.1%、0.5%、1%、1.5%与2%）。
分别用5种不同浓度保护剂与菌泥混合，菌泥与保护剂比例为1∶2，混合均匀后，分装到冻干机托盘中，进行冻干，测定冻干前后的活菌数，并计算冻干存活率。
2.2 不同组合保护剂添加量的确定根据单一保护剂实验结果，制定4个不同添加量的组合保护剂配方，分别配置冻干保护剂，在相同的冷冻干燥条件下冻干，并测定每个方案冻干前后的活菌数，计算存活率。
①海藻糖15%、脱脂乳粉12%、VC钠0.15%、甘油0.1%与麦芽糊精1%；②海藻糖5%、脱脂乳粉6%、VC钠0.08%、甘油0.5%与麦芽糊精3%；③海藻糖10%、脱脂乳粉8%、VC钠0.1%、甘油1%与麦芽糊精5%；④海藻糖3%、脱脂乳粉10%、VC钠0.04%、甘油1.5%与麦芽糊精7%。
乳酸菌冷冻干燥技术研究进展
乳酸菌冷冻干燥技术研究进展张英华１，２，霍贵成１，２＊，郭１，２（１．乳品科学教育部重点实验室，黑龙江哈尔滨１５００３０；２．东北农业大学食品学院，黑龙江哈尔滨１５００３０）收稿日期：２００４－１２－２３基金项目：国家“８６３”项目（２００２ＡＡ２４８０４１）作者简介：张英华（１９７４－），女，黑龙江人，讲师，博士研究生，主要从事乳品科学方面的教学与研究工作。
!通讯作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｃｈｕｏ＠０４５１．ｖｉｐ．ｃｏｍ摘要：冷冻干燥是生产商品化乳酸菌发酵剂的一项关键技术。
文章综述了影响乳酸菌冻干效果的因素，冻干对乳酸菌细胞膜造成的损伤和乳酸菌冻干保护措施。
关键词：乳酸菌；冷冻干燥；技术中图分类号：ＴＳ２５２．５４文献标识码：Ａ随着我国乳品工业的发展和人们保健意识的增强，乳酸菌对人体健康有益作用的不断深入研究和揭示，乳酸菌产品逐渐受到人们的重视。
发酵乳制品作为一种功能性食品越来越受到广大消费者的青睐，其中酸奶产量正以每年２５％的速度递增［１］。
目前乳酸菌菌粉可采用真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等不同的方法进行制备，许多研究者发现冷冻干燥具有其他方法无法比拟的优点，是制备和保存生物材料最有效的方法之一，并得到越来越广泛的应用［２］。
真空冷冻干燥发酵剂于７０年代初期开始研制，现在已经开始商业化，这种发酵剂含活菌数高，发酵活力强，遗传性稳定，便于储藏，携带方便，使用安全，因而它被广泛地应用［３，４］。
１真空冷冻干燥技术真空冷冻干燥（简称冻干）技术出现在１８１１年左右，当时用于生物体的脱水。
１８１３年美国人Ｗｏｌｌａｓｔｏｎ发现水的饱和蒸气压与水的温度有关，在真空低温条件下，水容易汽化，水在汽化时将导致温度的降低。
根据这一发现，１９０９年Ｓｈａｃｋｅｌｌ开始用冻干法干燥血清和细菌。
１９３５年第一台商业用冻干机问世，随后冻干技术扩展到医药、食品领域。
现在冻干技术已经加入到高新技术领域的行列。
冷冻干燥法的原理主要根据微生物细胞水相平衡关系，在水发生相变的过程中，当压力低于三相点的压力时，固态冰可直接转化为气态的水蒸气。
冻干保护剂及其保护机理的研究进展
冻干保护剂及其保护机理的研究进展生命科学学院动物科学专业2008084533（学号）严忠平（姓名）指导教师郑新添【摘要】进入上个世纪的八九十年代，科学技术的迅猛发展和人民群众对健康保障的需求为药品冷冻干燥技术的飞速发展提供了强大的动力，在药品冻干损伤和保护机理、药品冻干工艺、药品冷冻干燥机等方面取得了巨大的成绩。
但药品冷冻干燥技术是一门边缘学科，需要生物学、药学、制冷、真空和控制等知识的交叉和综合，因此仍存在亟待解决的问题。
冷冻干燥是目前保持微生物、动物组织、细胞及蛋白质等活性物质生物活性的一个有效的、普遍的方法．制品经完全冻结，并在一定的真空条件下使冰晶升华，从而达到低温脱水的目的，此过程即称为冷冻干燥，简称冻干，是冷冻和干燥的结合，其中冷冻与干燥引起的蛋白质变性的机理各不相同．【关键词】冻干保护剂保护机理药品生物自进入上个世纪的八九十年代，科学技术的迅猛发展和人民群众对健康保障的需求为药品冷冻干燥技术的飞速发展提供了强大的动力，在药品冻干损伤和保护机理、药品冻干工艺、药品冷冻干燥机等方面取得了巨大的成绩。
但药品冷冻干燥技术是一门边缘学科，需要生物学、药学、制冷、真空和控制等知识的交叉和综合，因此仍存在亟待解决的问题。
冷冻干燥是目前保持微生物、动物组织、细胞及蛋白质等活性物质生物活性的一个有效的、普遍的方法．制品经完全冻结，并在一定的真空条件下使冰晶升华，从而达到低温脱水的目的，此过程即称为冷冻干燥，简称冻干，是冷冻和干燥的结合，其中冷冻与干燥引起的蛋白质变性的机理各不相同．冷冻干燥技术最早于1813年由英国人华莱斯顿(Wollaston)发明．自Heckly和Hammer(1911年)首次对微生物进行干燥保存以来，经过多年来的完善与发展，国内外学者们发现冷冻干燥技术具有与其他干燥方法无可比拟的优点E23，菌种在低温下干燥，各种成分、酶的活性丧失少；可以保持菌种的形态、色泽；复水性好，能很快地吸水还原成干燥前的鲜活状态；脱水彻底，保存期长，储存运输、销售方便．但是，在真空冷冻干燥过程中，冷冻和干燥不可避免地会造成部分微生物细胞的损伤、死亡，及某些蛋白分子的钝化．为了提高冷冻干燥微生物、蛋白质等生物制品的存活率与生物活性，人们进行了大量的研究，其中包括冷干过程中蛋白质的空间结构的变化，以及各种保护剂对这些变化的影响[1]．1 冷冻干燥保护剂冻干是复杂的相变过程,冻干制品在整个过程存在的各种应力,包括低温应力、冻结应力、干燥应力等,常常是直接或间接导致制品中蛋白质变性的因素 ,所以在冻干过程中需使用保护剂。
工程化益生菌活菌制剂在疾病治疗中的研究进展
综㊀㊀述㊀基金项目:国家自然科学基金青年项目(Ｎｏ.８２００３２９３)ꎻ江苏省自然科学基金青年项目(Ｎｏ.ＢＫ２０１８０５５３)作者简介:贺鼎元ꎬ男ꎬ硕士生ꎬ研究方向:药剂学ꎬＥ－ｍａｉｌ:１１６０７７３８８７＠ｑｑ.ｃｏｍ通信作者:何东升ꎬ男ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ研究方向:药剂学ꎬＴｅｌ:０２５－８３２７１３０５ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｄｏｎｇｓｈｅｎｇｈｅ＠ｃｐｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎻ涂家生ꎬ男ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ研究方向:药剂学ꎬＴｅｌ:０２５－８３２７１３０５ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｊｉａｓｈｅｎｇｔｕ＠ｃｐｕ.ｅｄｕ.ｃｎ工程化益生菌活菌制剂在疾病治疗中的研究进展贺鼎元１ꎬ２ꎬ何东升１ꎬ２ꎬ涂家生１ꎬ２(１.中国药科大学药学院药用辅料及仿创药物研发评价中心ꎬ江苏南京２１０００９ꎻ２.国家药品监督管理局药物制剂及辅料研究与评价重点实验室ꎬ江苏南京２１０００９)摘要:使用工程化益生菌作为活菌制剂是一种新兴的递药系统设计思路ꎬ主要利用益生菌本身特有的生物安全性与胃肠道靶向性来构建具备主动靶向功能的新型递药系统ꎮ本综述从益生菌活菌制剂的优势和工程化益生菌活菌制剂在疾病治疗中的应用展开ꎬ重点关注了工程化益生菌在细菌感染㊁病毒感染㊁肿瘤和炎症等疾病治疗中的研究进展ꎬ并展望了益生菌活菌制剂的未来发展ꎮ关键词:益生菌ꎻ活菌制剂ꎻ药物递送中图分类号:Ｒ９４３㊀文献标志码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２４)０２－０１５９－００６ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２４.０２.０１０ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｌｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｉｎｄｉｓｅａｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔＨＥＤｉｎｇｙｕａｎ１ꎬ２ꎬＨＥＤｏｎｇｓｈｅｎｇ１ꎬ２ꎬＴＵＪｉａｓｈｅｎｇ１ꎬ２(１.ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＲｅｓｅａｒｃｈＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓａｎｄＧｅｎｅｒｉｃＤｒｕｇｓꎬＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙꎬＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｊｉｎｇ２１０００９ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＮＭＰＡＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓａｎｄＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓꎬＮａｎｊｉｎｇ２１０００９ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｔｈｅｕｓｅｏｆｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓａｓｌｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｉｓａｎｅｍｅｒｇｉｎｇｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍｄｅｓｉｇｎｉｄｅ￣ａꎬｗｈｉｃｈｍａｉｎｌｙｕｓｅｓｔｈｅｕｎｉｑｕｅｂｉｏｓａｆｅｔｙａｎｄｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔａｒｇｅｔｉｎｇｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｔｏｂｕｉｌｄａｎｅｗｄｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙｓｙｓｔｅｍｗｉｔｈａｃｔｉｖｅｔａｒｇｅｔｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎ.Ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｆｏｃｕｓｅｓｏｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎꎬｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎꎬｔｕｍｏｒａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎꎬａｎｄｌｏｏｋｓａｈｅａｄｔｏｔｈｅｆｕｔｕｒｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃａｓｌｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ＰｒｏｂｉｏｔｉｃｓꎻＬｉｖｅｂａｃｔｅｒｉａｌｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎꎻＤｒｕｇｄｅｌｉｖｅｒｙ㊀㊀益生菌作为对人体能产生健康功效的活性微生物补充剂ꎬ与人们的生活关系密切ꎬ在食品㊁药品和动物饲料等多个领域已经得到广泛应用ꎮ益生菌可在呼吸道㊁泌尿生殖道和肠道定植ꎬ并调控人体各部位菌群ꎬ进而调节乳糖代谢㊁钙吸收㊁维生素合成ꎬ以及抑制癌变等[１－２]ꎮ关于益生菌的研究已经在全世界开展了数十年之久ꎬ由于基因编辑技术的迅速发展与基因工程相关试验成本的降低ꎬ目前已可更便捷地实现益生菌的定向工程化改造ꎬ使其具有特定的治疗功能[３]ꎮ近年来ꎬ如脂质体包裹纳米酶涂层修饰的工程化益生菌应用于溃疡性结肠炎治疗[４]㊁基因工程改造乳酸乳球菌分泌β－内酰胺酶进而治疗艰难梭菌感染[５]等多种治疗策略的出现ꎬ都展示了益生菌制剂的广大前景ꎮ１㊀益生菌活菌制剂的优势益生菌活菌制剂继承了益生菌本身的安全性ꎬ同时易于改造以发挥新功能ꎬ另外还具有独有且优异的目标病灶靶向性及组织留存能力ꎬ这让益生菌活菌制剂在疾病治疗方面显示出了巨大的潜力[６－７]ꎮ１.１㊀基因组庞大ꎬ便于改造㊀益生菌具有庞大的基因组ꎬ便于进行基因工程改造ꎮ以嗜酸乳杆菌为例ꎬ其基因组大小在１.９９Ｍｂ左右ꎬ基因数目约１９２７~１９４８ꎬ蛋白数目约１８３２~１８４５ꎬ庞大的基因组和蛋白数目使其适合作为基因工程化改造的原材料[８]ꎮ除传统电激法㊁热激法质粒导入外ꎬ近年来ＣＲＩＳＰＲ等基因编辑技术的迅速发展也使目标工程化益生菌的制备更为高效便捷ꎮ通过基因编辑技术对现有益生菌进行改造ꎬ可以直接验证这些新型微生物的遗传物质㊁蛋白质和功能作用是否发生了预期的改变ꎮＺｈｏｕ等[９]利用外源性Ⅱ型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ９系统和内源性Ｉ－Ｂ型ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ系统进行了无缝基因组工程的研究ꎬ而这种高通量基因组工程工具的应用除了为益生菌改造提供便利外ꎬ也对从基因组学角度来探究益生菌对宿主产生益处的机制有着重要意义ꎮ此外ꎬ益生菌表面的细胞膜和细胞壁可进行修饰以携带多种元件ꎬ使其成为更加多功能化的药物载体ꎮ在益生菌表面利用沉积法形成双分子脂质涂层以及自组装丝素蛋白纳米涂层用于保护细菌载体等相关设计思路在国内外均有报道[１０－１１]ꎮ１.２㊀生长简单可控ꎬ培养技术成熟㊀益生菌的生长简单可控ꎬ具有培养技术成熟高效和培养成本较低的优点ꎮ目前益生菌的培养技术已经趋于成熟ꎬ益生菌繁殖迅速㊁成本低廉和操作简便的优点使其相较于其他传统纳米药物载体而言更加易于获得ꎬ在载体设计与前期预实验的进行上更为高效ꎮ而益生菌本身作为一类常被用于食品中的安全的添加剂ꎬ对人体健康益处已在食品上得到验证ꎬ因此其在安全性方面具有明显的优势[１２]ꎮ１.３㊀对肿瘤微环境存在靶向性㊀在不同种类肿瘤的肿瘤微环境中ꎬ存在乏氧或富氧的不同情况ꎬ而益生菌中也存在好氧菌和厌氧菌ꎬ这让益生菌形成了天然的肿瘤微环境靶向性ꎮ以丁酸梭菌㊁鼠李糖乳杆菌为代表的厌氧益生菌具有主动靶向乏氧肿瘤微环境的潜质ꎬ而枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌等好氧型益生菌则具有靶向富氧肿瘤微环境的潜质ꎮ除了利用肿瘤微环境富氧/乏氧特性实现靶向外ꎬ部分益生菌(如嗜酸乳杆菌和乳酸乳球菌)由于具有一定胃肠道耐受能力与定植能力ꎬ在进行工程化改造后可以设计成具有胃肠道主动靶向功能的口服药物递送载体[１３]ꎮ２㊀工程化益生菌活菌制剂在疾病治疗中的应用㊀㊀工程化益生菌活菌制剂本身不仅具有较大的空间作为药物的载体ꎬ作为益生菌还具有调控菌群的功能ꎬ同时还可作为生产平台在原位表达多种具有治疗作用的组分ꎬ因此其在药物制剂领域和疾病治疗中的应用前景十分广阔[３ꎬ１４－１５]ꎮ２.１㊀工程化益生菌用于治疗细菌感染㊀细菌感染通常使用抗生素进行治疗ꎬ然而抗生素的过度使用会造成人体内细菌耐药增强ꎬ经抗生素筛选后存活的具备耐药性的 超级细菌 的繁殖会导致肠道菌群失衡ꎬ进而导致乳糜泻㊁脓毒症㊁炎症性肠病㊁肝脏甚至胰腺相关炎症的产生[１６]ꎮ在面对类似问题时ꎬ工程化益生菌为细菌感染的治疗提供了新的思路ꎮ艰难梭菌感染(ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎꎬＣＤＩ)一般是由产毒素艰难梭菌过度繁殖导致肠道菌群失调并释放毒素所引起的ꎬ其临床表现多样ꎬ从无症状的携带者状态ꎬ到不同程度的腹泻ꎬ再到最严重的威胁生命的结肠炎ꎬ最终导致死亡[１７]ꎮ常用的对ＣＤＩ的诊断手段是使用酶免疫分析进行检测ꎬ然后结合万古霉素㊁非达霉素等抗生素进行治疗[１８]ꎮＣｈｅｎ等[１９]对布拉迪酵母菌进行了工程化改造ꎬ使其分泌一种单一的四特异性抗体ꎬ该抗体能有效和广泛地中和ＣＤＩ的主要毒力因子(ＴｃｄＡ毒素和ＴｃｄＢ毒素)ꎬ对抗疾病而不引起抗生素耐药性ꎮ在对小鼠疾病模型的预防和治疗实验中ꎬ该工程菌证明对原发性和复发性ＣＤＩ具有保护作用ꎮ这种工程化酵母菌免疫疗法具有能够与抗生素联用的优点ꎬ有作为ＣＤＩ风险预防药物和ＣＤＩ患者治疗药物的潜力ꎮ此外ꎬ已被认证对人体安全的布拉迪酵母菌用于递送时ꎬ可以使用口服给药ꎬ这种方便而高顺应性的给药方式也让这个治疗方案相比传统药物载体介导的免疫疗法有着明显的优势ꎮ李斯特菌是最致命的食源性病原体之一ꎬ可造成二至三成的感染者死亡[２０]ꎮＢｈｕｎｉａ团队设计了可以产生李斯特菌黏附蛋白的工程干酪乳杆菌菌株ꎬ该菌株在小鼠肠道定植ꎬ竞争性地减少李斯特菌的黏膜定植和全身传播ꎬ保护小鼠免受致命感染ꎮ它们还可以通过聚集肠黏膜调节性Ｔ细胞㊁ＣＤ１１ｃ＋树突状细胞和自然杀伤细胞来增强肠免疫调节功能[２１]ꎮ这种基于配体－受体结合机制来设计的抗感染策略更为直接有效ꎬ也具有更好的生物安全性ꎮ菌株与肠道上皮细胞的近距离接触和接近增加了与宿主相互作用的机会ꎬ从而更好地执行接触依赖机制(竞争排斥和免疫调节)ꎬ以发挥其预期的有益作用ꎮ２.２㊀工程化益生菌应用于病毒感染治疗㊀在病毒感染治疗方面ꎬ工程化益生菌主要通过在原位表达抗病毒因子而发挥治疗作用ꎬ也得到了广泛的应用ꎮ针对ＨＩＶ感染ꎬＰｅｔｒｏｖａ等[２２]构建了工程化鼠李糖乳杆菌表达ＨＩＶ抑制剂用于ＨＩＶ的治疗ꎮ他们首先分别在鼠李糖乳杆菌ＧＧ和ＧＲ－１中表达Ａｃｔｉｎｏ￣ｈｉｖｉｎ(ＡＨ)和Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓｉｎ(ＧＲＦＴ)两种抑制ＨＩＶ的凝集素ꎬ分别用于胃肠道和阴道黏膜递送ꎬ并研究ＧＲＦＴ在胞内的表达情况ꎮ该研究成功构建了能够生产ＧＲＦＴ的重组鼠李糖乳杆菌ＧＧ和ＧＲ－１菌株ꎮ在ｎｉｓＡ启动子诱导下ꎬ观察到重组ＧＲＦＴ表达水平最高ꎬ证明了对Ｍ型和Ｔ型ＨＩＶ－１病毒株的抗ＨＩＶ活性ꎮ该研究开发了一种有效的基于工程化微生物的抗ＨＩＶ－１药剂ꎬ使用鼠李糖乳杆菌ＧＧ和ＧＲ－１作为治疗蛋白的载体获得了较好的效果ꎬ这项工作代表着关于抗艾滋病凝集素原位高效表达的研究迈出了重要的一步ꎮ针对小鼠诺如病毒感染ꎬＨｏａｎｇ等[２３]构建了工程化副干酪乳杆菌进行了研究ꎮ该研究首先对鼠源的具有潜在抗病毒活性的３Ｄ８单抗的编码序列进行密码子优化ꎬ将其导入副干酪乳杆菌中使其能够分泌３Ｄ８单抗(３Ｄ８ｓｃＦｖ)ꎬ并对该单抗对胃肠道病毒感染的抗病毒作用进行评价ꎮ结果表明ꎬ新构建的工程化副干酪乳杆菌分泌的３Ｄ８ｓｃＦｖ保持了穿透细胞和核酸水解活性ꎮ使用提取的３Ｄ８ｓｃＦｖ来预处理ＲＡＷ２６４.７细胞ꎬ可防止小鼠诺如病毒感染诱导的细胞凋亡ꎬ降低病毒衣壳蛋白ＶＰ１ｍＲＮＡ的表达ꎮ小鼠模型中ꎬ在小鼠诺如病毒感染前口服工程化副干酪乳杆菌可使编码病毒聚合酶ｍＲＮＡ的表达水平降低２０.１倍ꎮ综上所述ꎬ这些结果表明ꎬ可分泌３Ｄ８ｓｃＦｖ的副干酪乳杆菌为开发可摄入的抗病毒益生菌提供了抗胃肠道病毒感染的基础ꎮ２.３㊀工程化益生菌应用于肿瘤治疗㊀工程化益生菌的潜在多功能修饰特性为其在肿瘤治疗中提供了多种可能ꎬ如通过调节肠道菌群及利用自身靶向作用等特点ꎬ为肿瘤的治疗提供了新的思路ꎮ为了实现治疗目的ꎬ工程化益生菌制剂的构建主要通过两种策略:一是将益生菌包裹于载体材料内ꎻ二是将治疗性药物装载于益生菌内部ꎬ而将益生菌作为载体[２４]ꎮ将益生菌包括与载体材料中ꎬ可以利用载体材料的可修饰特性赋予益生菌新的功能ꎮＺｈｅｎｇ等[２５]利用β－环糊精和金刚烷介导的主客体相互作用ꎬ将葡聚糖包裹在丁酸梭菌孢子外部制备了益生菌孢子(孢子－ｄｅｘ)ꎬ并探究了其在结肠癌治疗中的应用ꎮ在肠道的厌氧环境中ꎬ孢子－ｄｅｘ会复活ꎬ分解葡聚糖ꎬ并特异性地富集在肿瘤组织中ꎮ葡聚糖的引入改善了肠黏附ꎬ促进了丁酸梭菌的发酵ꎬ进而产生大量的抗癌短链脂肪酸ꎮ此外ꎬ益生元的易修饰性也提供了与卡培他滨和双氯芬酸等负载药物联合治疗的可能性ꎮ重要的是ꎬ这项研究表明ꎬ孢子－ｄｅｘ能系统地调节肠道微生物群ꎬ从而将肠道微生物群从促肿瘤转变为抗肿瘤类型ꎬ可为胃肠道疾病的新疗法设计提供参考ꎮ益生菌的安全性和内部空间使其可以作为良好的药物载体ꎮＸｉｅ等[２６]构建了趋磁益生菌负载光热治疗剂并开展了用于肿瘤治疗的研究ꎮ他们提出了一种将药物加载到益生菌中的递送策略ꎬ通过电穿孔将化疗药物５－氟尿嘧啶和巨噬细胞表型调节剂唑来膦酸装入大肠杆菌Ｎｉｓｓｌｅ１９１７(ＥｃＮ)中ꎬ然后在ＥｃＮ表面装饰金纳米棒来构建工程化益生菌ꎮ在近红外照射下ꎬ金纳米棒的光热效应提高了局部温度ꎬ内部药物逐步释放ꎬ实现了由外部开关来控制药物的释放ꎬ也是实现通过活细胞来实现对药物的控释ꎮＥｃＮ的主动靶向促进了药物在肿瘤内渗出血管并蓄积的过程ꎮ这个治疗方案将化疗㊁免疫治疗和光热效应结合于一体ꎬ为益生菌作为靶向药物载体在肿瘤治疗中的研究提供了新思路ꎮ２.４㊀工程化益生菌应用于炎症治疗㊀在炎症治疗方面ꎬ工程化益生菌同样可通过原位表达特异性治疗分子以及肠道菌群的调节等方式来发挥作用ꎮ炎症性肠病(ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｂｏｗｅｌｄｉｓｅａｓｅꎬＩＢＤ)分为两种亚型ꎬ即克罗恩病和溃疡性结肠炎ꎬ均与Ｔ细胞介导的对肠道细菌的免疫反应失调有关ꎬ是慢性复发缓解的胃肠道炎症性疾病ꎮＺｈｏｕ等[２７]开发了一种能够在胃肠道内原位产生过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的工程益生菌[ＥｃＮ－ｐＥ(Ｃ/Ａ)２]ꎬ并考察了他们在ＩＢＤ中的治疗作用ꎮ他们设计了壳聚糖和海藻酸钠为组分的材料来包裹工程化益生菌ꎬ使口服工程益生菌具备胃肠道环境耐受能力ꎮ结果表明ꎬ口服ＥｃＮ－ｐＥ(Ｃ/Ａ)２可有效上调结肠组织紧密连接相关蛋白的表达水平ꎬ保护结肠上皮细胞免受炎症诱导的凋亡ꎮ动物实验结果表明ＥｃＮ－ｐＥ(Ｃ/Ａ)２的治疗能显著减轻葡聚糖硫酸钠盐(ＤＳＳ)诱导的急性ＩＢＤꎬ具体表现包括体重恢复㊁结肠黏膜组织损伤恢复和结肠髓过氧化物酶活性降低ꎮ结果表明ꎬ口服这种包被的工程化益生菌对急性ＩＢＤ的治疗是安全有效的ꎮ在口腔炎症方面ꎬＳｉｌｖａ等[２８]使用分泌人三叶因子１(ｈＴＦＦ１)的基因对乳酸乳球菌进行了工程化改造ꎬ并在临床中配制成漱口液用于治疗口腔黏膜炎症ꎮ结果表明ꎬ局部给药工程化乳杆菌来原位分泌ｈＴＦＦ１为口腔黏膜炎的预防和治疗提供了一种安全有效的工具ꎮ值得一提的是ꎬ安全性研究结果也支持对有发生中性粒细胞减少风险的口腔黏膜炎患者安全给药ꎬ这将大大降低此类患者因口腔黏膜损伤诱发菌血症的额外风险ꎮ这项研究的结果对于口腔黏膜炎症这一重要且目前仍未被满足的医疗需求而言具有重大临床意义ꎮ２.５㊀工程化益生菌应用于其他治疗领域㊀除了细菌与病毒感染㊁肿瘤㊁炎症这些较为热门的治疗领域外ꎬ工程化益生菌活菌制剂还能为许多其他疾病的治疗提供方便和有益的平台ꎮ在代谢性疾病方面ꎬ随着高嘌呤饮食消费的增加ꎬ高尿酸血症已经成为继糖尿病之后的第二普遍的代谢性疾病ꎬ而人体内缺乏尿酸氧化酶ꎬ无法将尿酸进一步代谢ꎮ体内多余的尿酸通过肾脏和肠道排出ꎬ因此ꎬ肠道微生物可能为治疗高尿酸血症提供一种新的方式ꎮＺｈａｏ等[２９]构建了含有编码枯草芽孢杆菌尿酸盐代谢蛋白ＰｕｃＬ和ＰｕｃＭ㊁编码大肠杆菌尿酸盐转运蛋白ＹｇｆＵ和过氧化氢酶ＫａｔＧ以及编码透明颤菌细菌血红蛋白Ｖｈｂ的质粒ꎬ将质粒导入ＥｃＮ中ꎮ该工程化ＥｃＮ能够在常氧和低氧条件下快速降解尿酸ꎬ能够实现肠道的定植ꎬ且无论胃肠道给药还是血液注射给药的方式都能够显著降低高尿酸血症小鼠的血尿酸浓度ꎮ研究结果支持肠道中应用工程化ＥｃＮ菌株来治疗高尿酸血症的可行性ꎬ同时提出了直接向血液中注射工程化ＥｃＮ菌株的新疗法ꎬ为使用工程化益生菌治疗代谢紊乱类疾病提供了新思路ꎮ肠－脑轴的发现已经证明ꎬ大脑功能会受到肠道微生物群代谢物的影响ꎬ因此利用工程化益生菌来调节肠道微生物群从而对大脑功能的调节具有重要意义ꎮ基于肠道微生物群的肠－脑轴调节可用于神经退行性疾病的治疗ꎮＰａｎ等[３０]设计了３种蓝光响应益生菌ꎬ它们分别通过上转换光基因分泌ＧＡＢＡ㊁ＧＣＳＦ或ＧＬＰ１等物质构建成微纳米系统ꎬ从而进行对递送系统的时空传递和控制ꎮ该微纳米系统可促进小肠靶向和肠内外源性乳酸乳杆菌的产生ꎬ实现由肠道对焦虑行为㊁帕金森病㊁迷走神经传入等脑功能的精准操控ꎮ已有研究表明ꎬ口服ＧＡＢＡ能够缓解小鼠的焦虑样行为[３１]ꎮ本实验设计并构建了光照下能分泌具有生物活性的ＧＡＢＡ的乳酸乳球菌ꎬ口服递送工程化益生菌并用上转化光照射后ꎬ结果表明ꎬ该实验成功利用基于微生物的肠－脑轴调节实现了对焦虑的精确调节ꎮ值得一提的是ꎬ这项设计中使用的上转化光照射触发响应的方法比起在肠道插入光纤的传统方法ꎬ避免了肠道组织的损伤ꎬ可控性也更强ꎮ此外ꎬ该实验还通过相同的原理构建了能通过光照触发响应分泌在ＰＤ恢复过程中的神经保护和神经功能恢复中发挥作用的ＧＣＳＦ㊁作用于肠神经系统(ＥＮＳ)中的ＧＬＰ１受体的ＧＬＰ１等多种工程化光照响应型益生菌ꎬ并取得了较为理想的治疗效果ꎮ这种无创㊁实时的益生菌干预策略使肠道菌群与宿主的交流更加可控ꎬ为工程微生物准确㊁有效地调口服活生物治疗剂的设计方案结合了纳米技术和基因工程的进展ꎬ在微生物治疗的临床应用方面有着巨大应用前景ꎮ３㊀总结与展望近年来ꎬ工程化益生菌领域的发展非常迅速ꎬ得益于ＣＲＩＳＰＲ等相关基因编辑技术的发展和工程菌基因编辑平台的构建ꎬ益生菌的工程化改造变得更加便捷高效ꎬ不断拓展了工程化益生菌的应用ꎮ但是ꎬ工程化益生菌活菌制剂仍然存在一定的局限性ꎮ例如ꎬ由于益生菌主要定植在肠道部位ꎬ目前其在疾病治疗中的应用仍以肠道部位疾病为主ꎬ将益生菌应用于人体其他部位疾病治疗仍有一定难度ꎮ虽然基于肠－脑轴调节的研究使基于工程化益生菌的生物治疗方案在神经退行性疾病的治疗中显示出巨大的潜力ꎬ为拓宽工程化益生菌的应用提供了有益的证据ꎬ但工程化益生菌与宿主相关大脑功能之间的远程调节关系仍有待进一步探索ꎮ目前ＦＤＡ仍将益生菌归类为膳食补充剂ꎬ对益生菌相关制剂的剂量㊁疗效㊁安全性的要求并不严格ꎮ但是ꎬ益生菌活菌制剂设计研发过程中常常涉及到对益生菌进行基因工程改造以使其具备治疗作用ꎬ在这一过程中获得抗生素耐药基因的益生菌有可能将耐药基因转移给邻近的病原微生物ꎮ因此ꎬ在制备得到益生菌活菌制剂后ꎬ有必要加强相关研究ꎬ对其制剂和微生物的稳定性㊁在肠道上皮中的定植㊁抗致病反应㊁免疫激活等重要功能指标进行相应检测ꎬ并进行深入探讨ꎮ此外ꎬ针对益生菌改善肠道菌群丰度的生物原理尚不明确ꎬ仍需结合蛋白组学相关研究以进一步实现益生菌作为治疗药物的应用ꎮ总之ꎬ工程化益生菌具有稳定性㊁特异性㊁选择性㊁成本低㊁相对安全等优点ꎬ可能成为癌症㊁炎症㊁感染等不同类型疾病治疗的新方法ꎬ同时在罕见疾病的诊断和治疗方面具有巨大潜力ꎬ有望成为疾病治疗和药物制剂领域新的选择ꎮ参考文献:[１]㊀ＨＩＬＬＣꎬＧＵＡＲＮＥＲＦꎬＲＥＩＤＧꎬｅｔａｌ.Ｅｘｐｅｒｔｃｏｎｓｅｎｓｕｓｄｏｃｕｍｅｎｔ.ＴｈｅＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒＰｒｏ￣ｂｉｏｔｉｃｓａｎｄＰｒｅｂｉｏｔｉｃｓｃｏｎｓｅｎｓｕｓｓｔａｔｅｍｅｎｔｏｎｔｈｅｓｃｏｐｅａｎｄａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｕｓｅｏｆｔｈｅｔｅｒｍｐｒｏｂｉｏｔｉｃ[Ｊ].ＮａｔＲｅｖＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌＨｅｐａｔｏｌꎬ２０１４ꎬ１１(８):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[１２]ＺＨＡＮＧＣꎬＭＡＫ.ＮＩＥＫꎬｅｔａｌ.ＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｔｈｅｓａｆｅｔｙａｎｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＲｏｓｅｂｕｒｉａｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ:Ａｐｏ￣ｔｅｎｔｉａｌ"ＮｅｘｔＧｅｎｅｒａｔｉｏｎＰｒｏｂｉｏｔｉｃ"[Ｊ].ＦｒｏｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌꎬ２０２２(１３):９７３０４６.[１３]ＵＲＢＡＮＳＫＡＡＭꎬＢＨＡＴＨＥＮＡＪꎬＭＡＲＴＯＮＩＣꎬｅｔａｌ.Ｅｓ￣ｔｉｍａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌａｎｔｉｔｕｍｏｒａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｍｉｃｒｏｅｎｃａｐ￣ｓｕｌａｔｅｄＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓｙｏｇｕｒｔｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｔｈｅａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓｉｎＡｐｃ(Ｍｉｎ/＋)ｍｉｃｅ[Ｊ].ＤｉｇＤｉｓＳｃｉꎬ２００９ꎬ５４(２):２６４－２７３.[１４]ＰＬＡＺＡ－ＤＩＡＺＪꎬＲＵＩＺ－ＯＪＥＤＡＦＪꎬＧＩＬ－ＣＡＭＰＯＳＭꎬｅｔａｌ.Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｃｔｉｏｎｏｆｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ[Ｊ].ＡｄｖＮｕｔｒꎬ２０１９ꎬ１０(Ｓｕｐｐｌ１):Ｓ４９－Ｓ６６.[１５]ＢＲＯＮＰＡꎬＶＡＮＢＡＡＲＬＥＮＰꎬＫＬＥＥＲＥＢＥＺＥＭＭ.Ｅ￣ｍｅｒｇｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏ"ｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓａｎｄｔｈｅｈｏｓｔｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｕｃｏｓａ[Ｊ].ＮａｔＲｅｖＭｉ￣ｃｒｏｂｉｏｌꎬ２０１２ꎬ１０(１):６６－７８.[１６]ＴＡＲＲＡＮＴＣꎬＫＲＯＣＫＯＷＥＭ.Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｏｖｅｒｕｓｅ:ｍａｎ￣ａｇｉｎｇｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙａｎｄｍｉｔｉｇａｔｉｎｇａｇａｉｎｓｔｏｖｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ[Ｊ].ＢＭＪＱｕａｌＳａｆꎬ２０２２ꎬ３１(３):１６３－１６７.[１７]ＣＡＳＳＩＮＩＡꎬＰＬＡＣＨＯＵＲＡＳＤꎬＥＣＫＭＡＮＮＳＴꎬｅｔａｌ.Ｂｕｒ￣ｄｅｎｏｆｓｉｘｈｅａｌｔｈｃａｒｅ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓｏｎＥｕｒｏｐｅａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｈｅａｌｔｈ:ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇｉｎｃｉｄｅｎｃｅ－ｂａｓｅｄｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ－ａｄｊｕｓｔｅｄｌｉｆｅｙｅａｒｓｔｈｒｏｕｇｈａｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ－ｂａｓｅｄｍｏｄｅｌｌｉｎｇｓｔｕｄｙ[Ｊ].ＰＬｏＳＭｅｄꎬ２０１６ꎬ１３(１０):ｅ１００２１５０. 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微生态制剂的研究进展及应用
微生态制剂的研究进展及应用摘要:微生态制剂是指利用动物体内正常微生物成员或促进物质经特殊加工工艺支撑的活菌制剂。
微生态制剂以其独特的作用机制和无毒副作用、无残留及无抗药性等优点越来越受到世人的关注。
由于微生态制剂的特点是效果好、成本低且不污染环境,得到众多学者的关注。
1947年,外国学者首次用乳酸杆菌饲喂仔猪后发现,乳酸菌可有效改善猪营养状况,增加其体质量。
但微生态制剂一直没有得到深人研究,直到20世纪60年代才开始逐渐被实际应用于畜禽养殖业。
Lioyd(1997)试验证明,乳酸菌对肠道致病菌有颉颃作用。
Schillinger(1989)发现,乳酸菌可预防消化道疾病并有促进宿主生长的作用。
Sorokulova(1998)研究发现,饲喂益生菌可提高巨噬细胞活性。
美国食品与药品管理局(FDA)和美国饲料管理协会(AAF— CO)(1989)规定了43种允许饲喂的微生物。
我国微生态制剂也得到进一步发展,农业部(1999)第105号文件公布允许使用的微生物种类是12种。
目前,我国的年使用量已超过l 000 t。
1微生态制剂的定义与分类1.1定义微生态制剂是指利用动物体内正常微生物成员或促进物质经特殊加工工艺制成的活菌制剂。
较早被称作益生素和促生素,国内亦称为微生态制剂。
在美国被命名为DFMs(直接饲用微生物)。
欧盟委员会将其命名为微生物制剂。
根据《动物微生态学》(何明清,1998)理论,机体通过补充外源有益菌群,使消化道内有益菌群迅速生长繁殖,并建立种群优势。
微生物制剂的抗病促生长机制尚处于假说阶段,即菌体自身的蛋白质、维生素及代谢产生的多种抑菌物质和酶类共同实现其促生长作用。
1.2微生态制剂的分类1.2.1 按成分分为益生菌、益生元和合生元3大类益生菌是有利于宿主肠道微生物平衡的活菌食品或饲料添加剂。
目前,用作微生态饲料添加剂的微生物主要有乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌、放线菌和光合细菌等几大类。
益生元是能有选择性地刺激宿主动物消化道内有益菌的生长,从而对动物产生有利作用的食品或饲料中的不可消化成分,包括低聚糖、微藻(如螺旋藻和节旋藻)及天然植物(如中草药和野生植物)等。
疫苗生产用冻干保护剂的分类和作用机理研究
冻干保护剂是除赋形剂外,给于药物有效成分在冻干机冷冻干燥过程及冻干后储存阶段保护药物药效的成分。
常用保护剂有糖类、白蛋白、聚乙二醇等等。
冻干保护剂可影响生物制品的质量、效价和稳定性，改变生物制品的生产工艺，提高产品干燥能力并增大产品批次间的稳定性。
耐热冻干保护剂有免疫活性但无药理活性,可在冻干和保存时维持疫苗的稳定性,初次干燥时在适宜的温度下疫苗不倒塌，企业低成本即可获取。
一、分类（一）按相对分子量分按相对分子量分可分为低分子化合物和高分子化合物。
“酚子化合物彳氐分子化合物可提高微生物存活率,形成均一悬液,起到水分缓解作用。
如：酸性物质：谷氨酸、天冬氨酸、乳酸；中性物质：葡萄糖、孚廉、蔗糖、海藻糖、山梨醇；碱性物质：精氨酸、组氨酸。
2.高分子化合物高分子化合物对微生物有保护作用，可促进其升华形成耐热骨架阻断热传导和热辐射。
如：白蛋白、明胶、蛋白陈、脱月血粉。
水解明胶水解明胶可去掉杂质蛋白、无抗原性、无过敏反应、无热源，并且分子量小、均质、易溶于水，可过滤除菌，共熔点为-12o C o对微生物的保护作用高出普通明胶10%以上。
脱脂奶粉可促进升华、加热灭菌，易取得均质产品，并扩大细胞相互间的距离。
（二）按功能和性质分1耐热冻干保护剂耐热冻干保护剂在冻结和干燥过程中，可防止活性组分变性，如海藻糖、蔗糖、聚维酮（PVP）等。
2.填充剂可防止有效组分随水蒸气一起升华逸散，如：甘露醵、明胶等。
3.抗氧化剂产品的自身氧化可消耗冻干样品内部和环境中的氧；放入电子或氢离子，可阻断冻干样品中氧化链式反应，抑制氧化酶活性，防止样品在冷冻干燥及储藏过程中氧化变质。
如硫代硫酸钠、维生素E、维生素C等。
4.酸碱调整剂在冷冻干燥、储藏过程中，将生物制品PH值调整到活性物质ZUi稳定区域。
常用的有：磷酸二氢钾、磷酸氢钠。
（三）按物质的种类分1糖/多元醇类单糖（葡萄糖、半乳糖）：糖与生物制品活性组分的分子形成氢键而代替了原有水的位置，起保护作用；低聚糖（蔗糖、海藻糖）：低聚糖能起到低温保护功能?□脱水保护作用；海藻糖则具有相对较高的玻璃化转变温度。
冻干保护剂及其保护机理的研究进展
冻干保护剂及其保护机理的研究进展生命科学学院动物科学专业2008084533（学号）严忠平（姓名）指导教师郑新添【摘要】进入上个世纪的八九十年代，科学技术的迅猛发展和人民群众对健康保障的需求为药品冷冻干燥技术的飞速发展提供了强大的动力，在药品冻干损伤和保护机理、药品冻干工艺、药品冷冻干燥机等方面取得了巨大的成绩。
但药品冷冻干燥技术是一门边缘学科，需要生物学、药学、制冷、真空和控制等知识的交叉和综合，因此仍存在亟待解决的问题。
冷冻干燥是目前保持微生物、动物组织、细胞及蛋白质等活性物质生物活性的一个有效的、普遍的方法．制品经完全冻结，并在一定的真空条件下使冰晶升华，从而达到低温脱水的目的，此过程即称为冷冻干燥，简称冻干，是冷冻和干燥的结合，其中冷冻与干燥引起的蛋白质变性的机理各不相同．【关键词】冻干保护剂保护机理药品生物自进入上个世纪的八九十年代，科学技术的迅猛发展和人民群众对健康保障的需求为药品冷冻干燥技术的飞速发展提供了强大的动力，在药品冻干损伤和保护机理、药品冻干工艺、药品冷冻干燥机等方面取得了巨大的成绩。
但药品冷冻干燥技术是一门边缘学科，需要生物学、药学、制冷、真空和控制等知识的交叉和综合，因此仍存在亟待解决的问题。
冷冻干燥是目前保持微生物、动物组织、细胞及蛋白质等活性物质生物活性的一个有效的、普遍的方法．制品经完全冻结，并在一定的真空条件下使冰晶升华，从而达到低温脱水的目的，此过程即称为冷冻干燥，简称冻干，是冷冻和干燥的结合，其中冷冻与干燥引起的蛋白质变性的机理各不相同．冷冻干燥技术最早于1813年由英国人华莱斯顿(Wollaston)发明．自Heckly和Hammer(1911年)首次对微生物进行干燥保存以来，经过多年来的完善与发展，国内外学者们发现冷冻干燥技术具有与其他干燥方法无可比拟的优点E23，菌种在低温下干燥，各种成分、酶的活性丧失少；可以保持菌种的形态、色泽；复水性好，能很快地吸水还原成干燥前的鲜活状态；脱水彻底，保存期长，储存运输、销售方便．但是，在真空冷冻干燥过程中，冷冻和干燥不可避免地会造成部分微生物细胞的损伤、死亡，及某些蛋白分子的钝化．为了提高冷冻干燥微生物、蛋白质等生物制品的存活率与生物活性，人们进行了大量的研究，其中包括冷干过程中蛋白质的空间结构的变化，以及各种保护剂对这些变化的影响[1]．1 冷冻干燥保护剂冻干是复杂的相变过程,冻干制品在整个过程存在的各种应力,包括低温应力、冻结应力、干燥应力等,常常是直接或间接导致制品中蛋白质变性的因素 ,所以在冻干过程中需使用保护剂。
冻干乳酸菌的研究进展
则浪费能源和时间，降低产品存活率Ｉ 引 。 利用真空冷冻干燥技 术生产 活菌制 剂是多种保 度过低 ， 藏 方 法 中较 为 理想 的一 种 Ｉ 冷 冻 干燥 也 称 为冻 干 ， １ 干燥过 程 ｌ ｌ 。 ． ２ 是 冷 冻 和 干燥 技 术 的有 机 结 合 ，掌 握 冻 干 工 艺 、冻 样 品完全 冻结 后 即进 入 干燥 阶段 ，干燥 过程分 为 次 干燥 和二 次干 燥 。一 次 干燥是 冷冻 样 品利用升 华 干伤害 、冻干乳酸菌存 活率 的影 响因素 ，对乳业发 展 具有 十分重 要 的意义 。 除 冰 （ 冻水 ） 的方法 ，此 温度不 能超 过其 自身共熔 冷 点 温度 ，否则会 发 生产 品融 化 、体 积缩 小 、颜色加 深 １ 冻干工 艺 等 现 象 。 一 次 干 燥 结 束 后 ， 样 品 残 留 水 分 为 冷 冻 干 燥 技 术 的原 理 主要 是 根 据 微 生 物 细 胞 水 ５ １％。二次 干燥 是结 合 水 的一 部分 在 高真 空下 被 ％～ ０ ０３ 相 平 衡 关 系 ，当 水 发 生相 变 ，压 力 低 于 三 相 点 的 压 除 掉 的过 程 ，加 热 温度 以 ２ ～ ０ ℃为宜 ，二 次 干 燥 力 时 ，固态 冰 可 直接 转 化 为 气 态 的水 蒸 气 。冷 冻 干 后产 品 的含水 量为 １ ３ ４ ％～ ￣［ １ 。 燥就是根据这一原理 ，把物质 中的水分 （ 主要是游 １ 制品的取出 － ３ 离水）预先降温冻结成冰 ，然后在真空的条件下使 冷冻干燥结束后 ，冻干箱仍处于真空状态 ， 此时 物 质 中 的冰 晶 升华 ，待 冰 晶升 华 后 再 除 去 部 分 吸 附 的制品对氧气特别敏感 ，如果出箱 时放人无菌空气 ，氧 水 ，而 物 质本 身 留在 冻 结 时 的冰 态 固架 中 ， 因此其 气与一些活 性基团很 陕结合 ，将对 产品造成无法挽 回的 干 燥 后 体 积 不 变 ，疏 松 多 孔 ，最 终 呈 残 水 量 很 少 影响 。因此 ，产品出箱前必须放人 干燥 的高纯度惰性气 （％～ ％） 的干制 品 １ ４ １ 。 体 ，再取 出产品 ，如果有条件最好 采用箱 内加塞法罔 。 １１ 冷冻过 程 ． ２ 乳 酸菌 的冻 干损伤 菌泥 与保护 剂混 匀后 可 以先预冻 ，也 可 以直接 冷 １ 冻 。实验 室用 菌种 可 以 先放 人液 氮 或 干冰 中预冻 后 ， ２ 冻干对乳酸菌细胞膜的影响 ． 冻干对乳 酸菌细胞膜 的影响主要表 现在 以下方面 ： 再 进行 干燥 ；工业 化 大规 模 生产 时 ，由于 样 品量 大 ， 而 预冻 操作 比较 繁琐 ，故 多 采用 直 接冷 冻 干燥 方 法 。 ①冻干对细胞膜磷脂双分子层 的影响 ，当磷脂冻干脱 常 用 的冷 冻 速度 为 １５ｏ／ ｎ ～ Ｃｍｉ，冷 冻 的温度 根据 产 品 水时，极性端的水合氢键被除去 ，迫使酰基集聚在一 的共熔 点来 确 定 ，一 般 以低 于共 熔 点 ｌ～０℃为宜 。 起，从而使极性端密度增加 ，糖链间的范德华力增加， Ｏ２ 如果高于共熔点 ，将导致样 品收缩和颜色加深 ；但温 液 晶相脂 膜 转 变成 凝 胶相 ，细 胞膜 的结构 发 生 变化 ，
冷冻干燥中冻干制剂的一些问题综述讲解
冷冻干燥中冻干制剂的一些问题综述综述2013.6 陈亚飞摘要：冷冻干燥技术是生物制剂的主要生产工艺，采用冷冻干燥工艺可保持产品原有的理化性质和生物活性，且有效成分损失极少。
干燥后的产品形状、体积、晶型等理化指标均一性好。
产品因含水量低而易于长期保存, 因疏松多孔而使得加水后可迅速完全溶解。
但在冻干制剂的生产或实验中我们总会有一些冻干上的问题，下文就是我们在冻干制剂上的主要问题的分析。
关键词：制剂预冻共晶温度玻璃态转化崩解温度干燥稳定性水分保护剂一冷冻干燥技术1 冷冻干燥技术的发展随着真空泵和制冷机的出现，冷冻和干燥理念的结合，近些年来冷冻干燥技术在全世界发展迅速，应用非常广泛。
冷冻干燥技术的发展史已经百年有余，从最初发现冷冻干燥技术，以及真空条件下水的饱和蒸汽压于水的温度关系，到采用主动加热方法减短干燥时间并用于生产化。
1958年的第一届冷冻干燥会议促进了冻干的发展，在食品、药品、建材等行业得到广泛应用。
近些年来，伴随着电子计算机和传感测量技术在冻干领域的应用，冻干技术已加入高新技术领域行列。
人体器官的保存和再植的研究，营养保健食品的追求，超轻隔热陶瓷在航天飞机的应用，以及低温超导材料等纳米级超细微粉材料的制备，都需要真空冷冻干燥技术和设备。
在医药领域中，真空冷冻干燥技术对药品和医疗事业都有重要应用。
药品方面上包括生物制品（活菌菌苗、活毒疫苗、一些生物制品和生化药品等）、化药生产（多位注射剂：抗生素药、循环器官用药、中枢神经用药、维生素类和肿瘤用药等）、中药生产（中草药、中成药）；医疗事业上对保存血液、动脉、骨骼、皮肤、角膜和神经组织等各种器官上效果良好。
2 冷冻干燥的定义及优缺点简述冷冻干燥是指将被干燥含水物料冷冻成固体，在低温减压条件下利用水的升华性能，使物料低温脱水而达到干燥目的的一种干燥方法。
是将热能通过与物料接触的壁面以传导方式传给物料，使物料中的湿分气化并由周围空气气流带走而干燥的操作。
植物乳杆菌冻干保护剂的筛选及冻干工艺的研究
DOI :10.15906/11-2975/s.20201711基金项目:生猪绿色养殖体系综合技术研究与示范(2018GX044)*通讯作者[摘要]本试验对植物乳杆菌的冻干保护剂进行了筛选,同时对冻干工艺进行了优化。
结果表明:最佳冻干保护剂配方是奶粉20%,海藻糖10%,甘油2%,低聚木糖5%;最佳的预冻温度和时间分别是-70益,6h ;菌泥与水不同比例混合冻干后,随着水分的增加,植物乳杆菌的存活率缓慢下降,建议水与菌泥最佳比列为0.5:1。
经过冻干保护剂和冻干条件的优化,植物乳杆菌的存活率达到80%以上。
[关键词]植物乳杆菌;保护剂;冷冻干燥[中图分类号]S816.7[文献标识码]A[文章编号]1004-3314(2020)17-0053-05植物乳杆菌冻干保护剂的筛选及冻干工艺的研究张菊,苏成文*,亓鹏,陈焱,孙得发(山东畜牧兽医职业学院,山东潍坊261061)真空冷冻干燥(简称为冻干)是目前制备和保藏微生物的有效方法,冻干是将冷冻技术和干燥技术进行有机结合。
微生物在真空冷冻干燥过程中要经受冷冻和干燥两种激烈因素的影响,损伤是难以避免的。
乳酸菌在真空冷冻干燥过程中,通常会造成细胞膜通透性发生改变、蛋白质变性失活、pH 的动态平衡被打破、DNA 发生损伤以及膜脂肪酸组成发生改变等(张英华等,2006)。
影响乳酸菌在冻干后效果的因素有很多,如菌株、菌体的大小及其形状、菌种的菌龄、初始菌种的浓度、pH 、相应的保护剂系统、预冻的温度、降温的速率、冷冻干燥的条件、细胞的含水量、细胞膜的成分和复水的条件等(李华等,2002),若在冻干的过程中采取一定的保护措施,加入适宜的有效保护剂系统,同时采用适合特定菌株的预冻温度和预冻时间,可以在最大程度上减轻或有效避免真空冷冻干燥对细胞带来的损伤。
低聚糖又称为寡糖,由2~10个单糖分子通过糖苷键聚合而成的直链或支链化合物,其包括功能性低聚糖和普通低聚糖。
功能性低聚糖一般很难被消化吸收,但是可以被肠道中的微生物发酵利用。
植物乳杆菌DMDL9010冻干优化研究
Ｏ ｐｔｉｍ ｉｚｅｄ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ Ｄ Ｍ Ｄ Ｌ９０１０
ＨＵＡＮＧ Ｙａｎｙａｎ ，ＺＨＡＯ Ｓｈａｎ ，ＨＥ Ｊｉａｍｉｎ ，ＬＩＵ Ｄｏｎｇｍｅｉ ，ＺＨＯＵ Ｑｉｎｙｕ ，ＬＩＮ Ｚｈｏｎｇｐｅｉ ，ＦＥＮＧ Ｌｉｋｅ ，ＰＥＮＧ Ｘｉａｏｘｉａ。，ＹＡＮＧ Ａｉｊｕｎ
Ⅵｎ＾ ．ｃｈｉｎａｄ￣ｒｙ．ｎｅｔ
ｚｇｒｐｇｙ＠ １６３．ｃｏｍ
中 国乳 品工 业
由 ＩＮＤｕｓＴＲＹ
植物乳杆 菌 ＤＭＤＬ９０１ ０冻 干优 化研 究
黄 燕燕 ，赵珊 ，何嘉敏 ，刘冬梅 ，周钦育 ，林钟培 ，冯立科 。，彭小霞 ，杨爱君
（１．华 南理 工 大 学 食 品 科 学 与 工 程 学 院 ，广 州 ５１０６４０；２．广 东 燕 塘 乳 业 股 份 有 限 公 司 ，广 州 ５１０６４０）
肉类发酵菌种真空冷冻干燥保护剂研究进展
肉.如业
MEAT INDUSTRY
*综述*
的浓缩效应及细胞脱水效应会导致细胞酶失活，破 坏蛋白质与水分子、细胞膜之间的相互作用力，引起 蛋白质构象发生改变，丧失生物功能;(4)核糖核酸 结构发生变化,冷冻干燥过程会引起蛋白质变性,使
DNA双螺旋结构的稳定性下降，造成细菌生物活性 下降血如］。
鉴于直投式肉用发酵剂具备的一系列优势以 及冷冻干燥过程对菌体细胞的损伤机制，加入冻干 保护剂成为当前保持菌粉活力的重要方法。保护 剂种类、含量的选择，以及保护剂复配优化成为当 前热点研究方向。并且菌株不同，使用的保护剂配 方也不尽相同，这给后续冻干保护剂的研究带来了 挑战。
关键词冷冻干燥保护剂复配发酵剂肉类
Research progress on vacuum freeze - drying protective agentsfor meat fermentation strains
BI Yuxing,ZHANG Xiangmei,LU Han,ZHAO Jingjing, WEI Xingfang,LU Yinyin
虽然发酵剂得到了广泛使用，但是在运输以及 储存过程中如何保持较高活菌数和活力的问题日益 凸显。近年来，直投式发酵剂以其具有的显著优势 而成为发酵技术研究的热点之一少］。该类发酵剂 发酵活力强,不需要进行重新传代就可以直接投入 生产应用，在使用和管理上都更为方便问。
2直投式肉用发酵剂
现今微生物发酵研究及其在各行各业的应用越 来越多,为保证生产效果的稳定,应用冷冻干燥技术 制备发酵菌粉成为当前研究热点之一［⑷。为确保 产品的生产稳定性,提高产品质量,直投式发酵剂在 肉制品生产方面的应用日渐增多。直投式肉用发酵 剂是指不必进行活化等过程,宜接投入肉制品生产 的一类发酵剂，能够解决普通发酵剂使用时具有的 一系列问题,简化生产工艺与传代复壮次数。
嗜酸乳杆菌H0606 冻干保护剂配方优化
序号 保护剂名称 存活率 /%
1 脱脂乳 57.13
2 乳糖 43.19
表 1 不同单一保护剂溶液对嗜酸乳杆菌 H0606 冻干的影响
3
4
5
6
7
8
海藻糖 抗坏血酸钠 谷氨酸钠 甘油 麦芽糊精 蔗糖
62.25
46.46
40.12 34.27 24.09 56.33
9 葡萄糖 42.38
10 吐温 80 17.73
关键词：嗜酸乳杆菌；真空冷冻干燥；保护剂
采用真空冷冻干燥方法制备嗜酸 乳杆菌冻干粉的过程中，由于低温、 低压和干燥对菌体活性具有破环作用， 因此需添加优选的冻干保护剂以防止 菌体活性降低 [1]。
1 材料与方法
1.1 材料与设备
菌株：嗜酸乳杆菌 H0606，由汉 臣氏（沈阳）儿童制品有限公司提供。
MRS 培 养 基： 用 于 嗜 酸 乳 杆 菌 H0606 增殖培养。
11 无菌水
1.46
的保护效果均好于无菌水对照组，其 中海藻糖、脱脂乳、蔗糖、抗坏血酸钠、 乳糖、葡萄糖和谷氨酸钠的保护效果 较好。 2.2 不同组合保护剂对嗜酸乳杆菌冻 干的影响
按照下面配方分别配制冻干保护 剂，在相同的冷冻干燥条件下对同一 菌悬液进行冷冻干燥。
配方①：脱脂奶粉 100.0 g/L、蔗 糖 2.0 g/L、海藻糖 100.0 g/L、余量为 无菌水；
冻干粉的放大生产提供了研究基础 [3]。 参考文献
[1] 张英华 , 霍贵成，郭鸰 . 乳酸菌 冷冻干燥保护剂的筛选 [J]. 食品科技， 2006(11):72-75.
[2] 杜磊 , 乔发东 . 乳酸菌冷冻保护 剂的选择 [J]. 广东奶业，2010(01):1617.
冷冻干燥制剂的稳定性研究进展
冷冻干燥制剂的稳定性研究进展武华丽,胡一桥(中国药科大学药剂教研室,江苏南京210009)摘要:目的介绍冷冻干燥制剂在生产和贮运过程中影响药物稳定性的因素及冻干保护机制的研究进展。
方法综述冻干制剂在生产(分装、冷冻、干燥)和储存过程中影响药物稳定的因素;介绍了冻干保护剂的几种保护机制。
结果与结论研究冻干制剂稳定性对于生物技术药物制剂的开发有重要意义。
关键词:冷冻干燥;稳定性;蛋白质;玻璃化中图分类号:R94文献标识码:A文章编号:1001-2494(2001)07-0436-03随着生物技术的高速发展,多肽蛋白质类药物不断涌现,可应用于临床的多肽、蛋白酶、激素、疫苗、细胞生长因子及单克隆抗体等成为开发重点,目前已有35种重要治疗药物上市。
生物技术药物的基本剂型是冻干剂。
冷冻干燥技术早期主要用于生物材料的保存,其原理是利用冷冻的溶液在低温低压条件下,从冻结状态不经过液态直接升华除去水分完成干燥。
冷冻干燥技术可以使药物保持原有的理化性质和生理活性,且有效成分损失极少。
此外,冻干制剂特有的疏松多孔结构,可以使药物易于重新复水而恢复活性,而且冻干制剂含水量低,易长期稳定保存。
冻干制剂的低共熔态多孔结构在口腔内可迅速溶化释出药物,因此该技术现在也用于口服速溶制剂[1]。
尽管与液体制剂相比冻干制剂稳定,但是冷冻干燥是一个非常复杂的过程,在预冷第一、第二干燥阶段和储存过程中,药物的结构可能受其中的物理化学变化影响而发生变化,特别是蛋白质多肽类药物的二、三级结构易受破坏,失去活性而影响药效。
本文对近年来国内外学者对冻干过程中药物稳定性问题的研究进展进行了综述。
1水分含量严格控制水分含量是保证冻干制剂质量的关键。
水分含量对冻干制剂质量的一个重要指标)))玻璃转化温度(Tg)有影响,即药品的水分含量越低,其Tg越高,药品越能长期稳定地储存。
通常冻干制剂的水分含量要求控制在1% ~3%之间,以保持稳定。
在水分含量较低时,药物的溶剂降解反应呈零级动力学模式[2]。
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Ａｄ ｖ ａ ｎｃ ｅ ｓ ｏ ｎ ｃ ｒ ｙ ０ ｐ ｒ ０ ｔ ｅ ｃ ｔ ａ ｎｔ ｓ ｏ ｆ ｌ ｉ ｖ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｐｒ ｅ ｐａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｓ
ＺＨＡＮＧ Ｇｕ ａ ｎ ｇ— ｌ ｅ ｉ ， ＺＨＡＮＧ Ｘｉ ｎ— ｃ ｈｕ ａ ｎｇ， ＺＨＡＩ Ｌｅ ｉ
张光 磊 综述 ； 张 新创 ， 翟 雷 审校
兰州生物制 品研究所有 限责任公 司 甘肃省疫苗工程技术研究中心 ， 甘肃 兰州 ７ ３ ０ ０ ４ ６ 摘要 ： 冷冻干燥技术广泛应用 于细菌性 活疫 苗生产和菌 种保藏 等方面 。细 菌细胞 在冷冻 干燥过 程 中会 出现损 伤 ， 甚 至死 亡。通过 添加适合 的冻干保护剂可 以最大程度减小细胞损伤 ， 保持活菌制剂 的活力和性 能。就冻于 过程对 细菌的损伤机制 、 冻干保护剂 的作 用机 理以及保护剂的筛选 方法 等方 面进 行 了阐述 ， 对活菌 制剂保 护剂 的筛选有
Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ：Ｌｉ ｖ ｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｉａ ｒ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ； Ｆｒ ｅ ｅ ｚ ｅ — ｄｒ ｙｉ ｎ ｇ； Ｃｒ ｙ ｏ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅｃ ｔ ａ ｎ ｔ ｓ
为了维持渗透压平衡细胞内液中水分可以扩散到细胞外降低细胞外液浓度或者在细胞内冻结提高细胞内液浓这两种情况都会使胞外和胞内的电解质浓缩细胞过度脱水并发生皱缩引起细胞的损伤甚至死亡这种损伤被称为溶质损伤电解质含量的变化还会引起溶液ph的改变若ph变化超出菌体细胞的最适范围将会造成ph敏感成分如细胞内的某些酶活性的降低甚至丧失
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ：Ｔｈ ｅ ｆ ｒ ｅ ｅ ｚ ｅ — ｄ ｒ ｙｉ ｎｇ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｉ ｓ ｗｉ ｄｅ ｌ ｙ ｕ ｓ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｌ ｉ ｖ ｅ ｂ ａｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎｅ ａ ｎｄ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ｐ ｒ ｅ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ． Ｔｈｅ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｓ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ ｆ ｒ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ｆ ｒ ｅ ｅ ｚ ｅ — ｄ ｒ ｙ ｉ ｎ ｇ ｗｉ ｌ ｌ ｂ ｅ ｄａ ｍａ ｇ ｅ ｄ， ａ ｎ ｄ ｅ ｖ ｅ ｎ ｄ ｅ ａ ｔ ｈ． Ａｄ ｄｉ ｎｇ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｃ ｒ ｙ ｏ ｐｒ ｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ａ ｎ ｔ ｓ ｃ ａ ｎ ｒ ｅ ｄ ｕｃ ｅ ｔ ｈ ｅ ｄａ ｍａ ｇ ｅ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ｍａ ｘ ｉ ｍｕｍ ｅ ｘ ｔ ｅ ｎ ｔ ，ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｖ ｉ ａ ｂ ｉ ｌ ｉ ｔ ｙ ａ ｎｄ ｐ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｆ ｌ ｉ ｖｅ ｂａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｐ ｒ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ．Ｉ ｎ
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・
８ ０・
微生物学免疫学进展
２ ０ １ ５年 ８月第 ４ ３卷第 ４期
Ｐ ｒ ｏ ｇ ｉ ｎ Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ Ｉ ｍｍ ｕ ｎ ｏ ｌ ，Ａ ｕ ｇ ．２ ０ １ ５ ，Ｖ ｏ １ ． ４ ３ Ｎ ｏ ． ４
・
综
述 ・
活 菌 制 剂 冻 干保 护 剂 的研 究 进 展
ｔ ｈ ｉ ｓ ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ，ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｏ ｆ ｆ ｒ ｅ ｅ ｚ ｅ — ｄ ｙｉ ｒ ｎ ｇ ｉ ｎ ｊ ｕ ｙ ｒ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ，ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｃ ｙｏ ｒ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ａ ｎ ｔ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ 冻干燥 ； 冻干保 护剂
中 图 分 类 号 ：Ｒ ３ ９ ２ — ３ ３ 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：１ ０ ０ ５ — ５ ６ ７ ３ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ４ — ０ ０ ８ ０ — ０ ６
Ｄ０Ｉ ： １ ０ ． １ ３ ３ ０ ９ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｐ ｍ ｉ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ４ ． ０ １ ６
Ｌ ａ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ Ｃ ｏ ． ， Ｌ ｔ ｄ ． ， Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｆ ｏ ｒ Ｇ ａ ｓｕ ｎ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｉ ａ ｌ Ｖ ａ ｃ ｃ ｉ ｎ ｅ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ，