鸡蛋中粘杆菌素残留含量消除药代动力学研究

380.2
80
140 10
注：* 表示定量离子。
1.3 数据处理 计算给药后每个时间点鸡蛋中药物浓度的平均值及标
准 误 差 ，得 到 平 均 药物 浓 度 — 时 间 数 据 ，采 用 winnonlin 药 的药物浓度—时间数据，求出鸡蛋中药代动力学参数。 2 结果与分析 2.1 方法的线性关系、回收率、精密度和检出限
供试鸡只为 20 只产蛋旺期的母鸡 ，由中山市御桂堂农 业技术有限公司提供。购入后单笼饲养，自由采食和饮水， 饲料喂不含黏菌素等抗菌药物的蛋鸡全价饲料。 试验前观
基金项目 作者简介
收稿日期
中 山 市 科 技 计 划 项 目 （20114A192 ）。 曾 建勇 （1980-），男，广 东 中 山 人 ，农 艺 师 ，从 事 农 产 品 中 的 污染物残留检测工作。 * 通讯作者 2013-08-19
RSD∥（%，n=6） 10.4 8.5 7.8
处理、测定，以粘杆菌素 A 和粘杆菌素 B 标准曲线回归方程
表 4 蛋鸡饮水给药后鸡蛋内的药代动力学参数
计算鸡蛋中粘杆菌素的浓度，并计算给药后每个时间点鸡 蛋中药物浓度的平均值及标准误差，结果见表 3。
表 3 饮水试验中不同鸡蛋中的药物残留浓度
采 样 时 间∥d
Abstract Elimination of colistin sulfate residue content and pharmacokinetics study in eggs showed that the main pharmacokinetic parameters of egg were as follow：Cmax was（242.564 1±158.707 4）μg/kg，Tmax was（10.206 68±0.937 77）d，AUC was（1 668.298±686.869 8）μg/（kg·d），K01-HL was（2.459 439±2.255 054）d，K10-HL was（2.387 610±1.889 865）d，CL was（0.130 340±0.029 891）L/（kg·d）.
配制一系列标准工作溶液，做基质标准曲线，粘杆菌素 以 A 和 B 的面积之和进行定量分析，其线性方程、线性范围 和相关系数见表 2。分别添加高、中、低 3 个浓度标准溶液， 按试验方法进行处理分析，平均添加回收率（每个添加浓度 平行测定 6 次）为 70.8%～116.5%，相对标准偏差小于 10.4%， 结果见表 2。检测限按 3 倍信噪比计算为 0.11 μg/kg，定量限 按 10 倍信噪比计算为 0.37 μg/kg。 2.2 蛋鸡给药后鸡蛋中粘杆菌素药物浓度的测定
表 1 粘杆菌素 MRM 离子对及质谱条件参数设置
分析物
分子量
分子离子 [M+3H]3+
m/z
特征碎片 离子 m/z
扫描时间 FRAG
ms
V
CE eV
粘杆菌素 A 1 169.8 390.8
101.1*
80
140 7
384.9
80
140 10
粘杆菌素 B 1 155.8 386.1
101.1*
80
140 7
察 3 周，临床无异常后进行正式试验。并将正式试验前所采 集的不含粘杆菌素药物的鸡蛋作为空白对照。
供试仪器与试剂：高效液相色谱－三重四级杆串联质 谱 联 用 仪 （Agilent G6410A LC －MSD QQQ）； 全 自 动 固 相 萃 取 仪 （吉 尔 森 公 司 ）；Strata-X 固 相 萃 取 净 化 柱 （60 mg/3cc， Phenomenex 公 司 ）； 硫 酸 粘 杆 菌 素 （Colistin sulfate）： 含 量 78.3%，德 国 Dr.Ehrenstorfera 公 司 ；乙 腈 、甲 醇 、甲 酸 （Merck 公司），均为色谱纯试剂 ；试验用 水 为 Watsons 蒸 馏 水 ；其 余 试 剂 均 为 分 析 纯 。 粘 杆 菌 素 原 料 药 ， 含 量 83.6% ， 批 号 为 KBT20121011 ，由 湖 北 康 宝 泰 精 细 化 工 有 限 公 司 提 供 。 1.2 试验方法 1.2.1 试剂配制。准确称取原料药 24.0 g，用水稀释至 10 L， 配 制 成 含 粘杆 菌 素 2 g/L 的 饮 用 水 ，早 晚 各 配 制 1 次 。准 确 称取 0.063 9 g 硫酸粘杆菌素标准品，用 2 g/L 甲酸溶液配制 成 500 μg/mL 的硫酸粘杆菌素标准储备液，置于 4 ℃冰箱中 避光保存。 1.2.2 动物给药与采样。配制含药浓度 2 g/L 的饮用水给鸡 自由饮用，早晚给药，每天 2 次，连续给药 12 d，其余正常饲 喂，从给药第 1 天开始捡蛋并检测鸡蛋内的药物残留，直至 药物残留消除。 1.2.3 样 品 提 取 。准 确 称 取 5.00 g 鸡 蛋 样 品 ，加 入 5%高 氯 酸 15 mL，漩涡震荡 3 min，摇床振荡 20 min，超声提取 30 min， 4 ℃下 10 000 r/min 离心 10 min，将 上 清 液 经 润 湿 的 滤 纸 过 滤至离心管中，再加入 10 mL 乙醚，水平摇床上振荡 10 min， 10 000 r/min 离心 7 min，弃去上层有机层，下层以待净化。 1.2.4 样品净化。全自动固相萃取仪自动过柱，以 3 mL 甲醇、 3 mL 水活化 Strata-X 固相萃取小柱，转移样品提取液至固相 萃取柱，接着依次用 5%甲醇水溶液 3 mL、2%丙酮水溶液 3 mL、 纯净水 3 mL 淋洗，最后用 0.2%甲酸/甲醇（3∶7，V/V）5 mL 洗 脱，洗脱液 50 ℃下氮气吹至近干 。浓缩液用 2 g/L 甲酸定容 至 1.0 mL，涡旋混匀，过膜转移至进样瓶，上机检测。 1.2.5 色谱条件。ZORBAX SB-C18 色谱柱，2.1 mm×150.0 mm，
14
13
130.89±15.62
11
14
86.18±6.61
13
15
42.77±6.77
12
16
15.20±5.20
14
17
ND
20
注：ND 表示不可测得。
关键词 硫酸多粘菌素 E；鸡蛋；药代动力学；高效液相色谱-三重四级杆串联质谱 中图分类号 S859.796 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）19-0295-02
Elimination of Colistin Sulfate Residue Content and Its Pharmacokinetics Study in Eggs ZENG Jian-yong 1 LIU Hong 1 LI Zhen-yuan 2
（1Zhongshan Quality Supervision & Inspection Institute of Agricultural Products in Guangdong Province ，Zhongshan Guangdong 528400； 2Zhongshan Agricultural Technology Promotion Center ）
Key words colistin sulfate E；egg；pharmacokinetics；high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry
多粘菌素是由多粘芽孢杆菌产生的一族理化性质相 似、由环状多肽和脂肪酸结合而成的碱性多肽类抗生素，可 分为多粘菌素 A、多粘菌素 B、多粘菌素 C、多粘菌素 D、多 粘菌素 E、多粘菌素 K、多粘菌素 M、多粘菌素 P 等 8 种[1]，其 中应用最多 的 是 多 粘 菌 素 E（又 称 粘 杆 菌 素 ，colistin），其 对 G 杆 菌 有 强 烈 的 杀 菌 作 用 [2]，同 时 因 具 有 较 好 抗 菌 谱 和 高 效、低毒、残留少的特性而被日本、欧美等国家农业部批准 用于饲料添加剂，促进禽畜生长和提高饲料利用率，并且可 以防止饲料大规模生产中常出现的由大肠杆菌和沙门氏菌 污染引起的疾病[3-4]，我国于 1986 年批准日 本 旭 化 成 工 业 株 式会社的产 品 进 口 国 内 市场 ，反 应 良 好[5]。多 粘 菌 素 E 是 30 种以上成分的混合物，粘杆菌素 A 和粘杆菌素 B 为主要成 分[6]，目 前 ，国 内 对 多 粘 菌 素 的 研 究 主 要 集 中 在 应 用 以 及 动 物性食品中残留检测方法上 ，对其毒性及药物代谢方面[7]也 有一些初步研究，但比较少。目前国内外对多粘菌素在动物 机体内的残留消除规律报道较少，Ziv et al[4]报道了黏菌素在 牛 体 内 的 药 动 学 和 组 织 残 留 消 除 ，温 芳 等[8]报 道 了 鸡 体 内 硫酸粘杆菌素残留消除规律研究 ，张纯萍等[7]报道了猪体内 硫酸粘杆菌素的药代动力学研究，还没有对鸡蛋中粘杆菌素 残留消除规律研究的文献报道。本文尝试研究粘杆菌素在鸡 蛋中的药代动力学研究，通过对鸡蛋内药物的吸收代谢过 程详尽地认识药物的药理特性，为研究多粘菌素的兽医临 床用药以及制定合理的给药方案、休药期提供依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料
平 均 值 x軃 ±S.E∥μg/kg
n
1
ND
20
2
ND
20
3
ND
20
4
6.54±1.51
12
5
14.14±3.32
14
6
36.05±5.08
10
7
54.22±5.97
13
8
70.22±7.00
14
9
126.17±14.89
11
10
174.24±20.98
13
11
247.43±24.41