直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌
PCR在食品微生物测定实例-PCR快速检测沙门菌
食品微生物分子生物学测定PCR快速检测沙门菌沙门菌是一种常见的污染食品的致病菌，该菌的常规检测主要采用微生物培养法，需经过选择性增菌、分离培养、革兰氏染色镜检等步骤，以及一系列生化和血清学检测，整个过程一般需要4-7天。
PCR技术作为一种快速、准确检测生物样品中遗传物质的检测方法，为食品中沙门菌的快速检测提供了新的技术手段，本方法可以在12-24h之内即可得出可靠的结果。
实验原理：沙门菌染色体上含有其特有的侵袭基因InvA，可以以此基因设计一对引物，利用Taq酶在合适的条件下，以4种单核苷酸（dNTP）作为原料进行高效循环扩增，最终得到特异性的PCR扩增DNA产物，此产物可以通过琼脂糖凝胶检测进行确认。
实验材料：四硫酸盐胱氨酸增菌液鼠伤寒沙门菌标准参考株Taq DNA聚合酶dNTP10×PCR buffer琼脂糖溴化乙锭（EB）1×TAE电泳缓冲液（0.04M Tris-Cl、0.01M EDTA），溴酚蓝加样缓冲液DNA marker1.5 ml EP管0.2 ml PCR小管微量加样器和枪头PCR反应扩增仪琼脂糖凝胶电泳仪紫外自动成像系统实验步骤：1. 将待检测食品制作成匀浆液接种于四硫酸盐胱氨酸增菌液中培养6h，取100μl 培养物于100 °C加热预处理5min，制作成DNA粗提物用于检测。
2. PCR体系的构建：将PCR反应的6种组分加入到0.2ml的PCR小管中组分体积Taq酶1μldNTP 2μl10×PCR buffer 5μlPCR引物2μl待测样品5μlddH2O 35μl总体积50μl3. PCR反应：将添加好PCR组分的PCR小管以简易离心机进行离心，离心结束后，放入PCR仪中。
将PCR反应扩增仪设定程序：94°C预变性5min，PCR循环：94°C 变性30s，55°C 退火30s，72°C 延伸45s（循环35次），循环结束后，72°C 延伸7min。
Real-time PCR方法检测肉品中的沙门氏菌
Real-time PCR方法检测肉品中的沙门氏菌方平;杨永莉;杨宝;王晓闻【摘要】应用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到沙门氏菌fimI基因特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,通过熔解曲线可知其熔点值约为85.6 ℃,而对其他非沙门氏菌则检测不到荧光信号.建立了一种肉品中的沙门氏菌Real-time PCR检测方法,用该方法检测市售牛肉、香肠中的沙门氏菌,其检测灵敏度分别为13,12 cfu/25 g,从样品的处理到得出检验结果可以在10 h内完成.该检测方法具有简便、快速、特异性强、敏感度高等特点.【期刊名称】《山西农业科学》【年(卷),期】2010(038)008【总页数】6页(P71-76)【关键词】沙门氏菌;Real-time PCR;快速检测;肉品【作者】方平;杨永莉;杨宝;王晓闻【作者单位】山西农业大学食品科学与工程学院,山西,太谷,030801;山西农业大学食品科学与工程学院,山西,太谷,030801;山西农业大学食品科学与工程学院,山西,太谷,030801;山西农业大学食品科学与工程学院,山西,太谷,030801【正文语种】中文【中图分类】TS207.4在我国，沙门氏菌污染引起的食物中毒占食源性疾病中细菌食物中毒病例的70%～80%[1]，且WHO已将沙门氏菌列入具有严重为害和中等为害的食物传播性病原[2]。
而沙门氏菌常规检测方法和普通PCR方法的灵敏度及检测所需要的时间还有待于进一步提高。
本研究用普通PCR方法检测引物对沙门氏菌的特异性，并用SYBR Green I作为荧光染料，拟用Real-time PCR方法检测熟制牛肉和香肠中沙门氏菌，以建立一种检测肉品中沙门氏菌速度快、灵敏度高的方法。
1 材料和方法1.1 主要材料与试剂试验样品：熟制牛肉（市售）、香肠（市售）。
试验菌株：沙门氏菌和非沙门氏菌标准菌株各10株（表1）。
SYBR Green I，dNTP，buffer，Taq 酶等均购自宝生物工程（大连）有限公司；DNA Ladder购自天根生物（北京）有限公司。
沙门氏菌的检验方法
沙门氏菌的检验方法沙门氏菌（Salmonella）是一类革兰氏阴性的杆状细菌，是引起沙门氏菌属感染的病原菌。
这种细菌可以引发食物中毒和伤寒症，其中食物中毒是最常见的感染途径。
因此，对沙门氏菌的快速、准确的检测非常重要。
目前，沙门氏菌的检测方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。
以下是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。
1. 传统培养分离法传统的沙门氏菌检验方法是利用富含寡糖的培养基，如XLD、SS等，以及一些选择性供氧培养基，如亚硫酸和肉汤琼脂培养基等，将样品进行培养。
通过培养，沙门氏菌会形成典型的红色或蓝绿色菌落。
然后，从菌落中挑取纯培养物，并进行生理生化反应和田纳氏试验以确定是否为沙门氏菌。
2. 免疫学方法免疫学方法是通过检测沙门氏菌特异性抗原或抗体来诊断沙门氏菌感染。
常用的方法有：- 血清凝集试验：利用特异性沙门氏菌抗原和患者血清，在特定条件下观察血清与抗原的凝集反应，可确定是否感染沙门氏菌。
- 酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用特异性沙门氏菌抗原或抗体和酶标记的二抗，通过检测光学密度来判断是否存在沙门氏菌。
3. 分子生物学方法分子生物学方法可以通过检测沙门氏菌的基因或DNA来快速、准确地诊断沙门氏菌感染。
常用的方法有：- PCR（聚合酶链式反应）：通过特异性引物扩增沙门氏菌的DNA片段，然后进行凝胶电泳分析。
PCR可以提供快速、高效的沙门氏菌检测结果。
- 实时荧光PCR：使用带有荧光探针的PCR引物，通过检测荧光信号的强度来定量沙门氏菌的存在量。
- 基因芯片技术：基因芯片上固定了沙门氏菌特异性的探针，可以同时检测多个基因或DNA序列，提高检测效率。
除了上述方法，还可以利用质谱仪等仪器进行快速鉴定，甚至利用抗生素敏感试验、细菌溶解酶试验等进行进一步的鉴定和鉴别。
总结起来，沙门氏菌的检验方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。
这些方法可以单独或联合使用，以提供准确、快速的沙门氏菌检测结果，对于预防和控制沙门氏菌感染具有重要意义。
等温扩增荧光技术快速检测沙门氏菌的研究
分析检测等温扩增荧光技术快速检测沙门氏菌的研究梁振瑞，张 薇，许绍坤，李鲜鲜，冯 红，自武全（云南瑞栢泰生物科技有限公司，云南昆明 650000）摘 要：本文研究并建立等温扩增荧光技术快速检测沙门氏菌的方法。
通过对沙门氏菌的SSAQ基因序列保守区设计引物，采用最佳引物组搭配其他配套试剂建立一种针对沙门氏菌的等温扩增荧光技术快速检测方法；采用直扩法提取DNA，通过等温扩增荧光技术与常规PCR法对不同浓度沙门氏菌进行扩增检测，检测最低检测限，对其灵敏度进行评价。
结果表明，所建立的针对沙门氏菌等温扩增荧光检测的方法与常规PCR法相比，等温扩增荧光检测的方法灵敏度更高，且根据干扰实验结果可知该方法对沙门氏菌具有良好的特异性，所建立的针对沙门氏菌的等温扩增荧光技术检测方法具有操作快捷、简便、反应时间较短、良好的特异性和较高的灵敏度的特点，能够用于沙门氏菌的快速检测。
关键词：等温扩增荧光技术；沙门氏菌；特异性；灵敏度Research on Rapid Detection of Salmonella by Isothermal Fluorescence Amplification TechnologyLIANG Zhenrui, ZHANG Wei, XU Shaokun, LI Xianxian, FENG Hong, ZI Wuquan(Yunnan Rare Biotechnology Co., Ltd., Kunming 650000, China)Abstract: A method for rapid detection of Salmonella by isothermal amplification fluorescence was developed. By designing primers for the conserved region of SSAQ gene sequence of Salmonella, an isothermal amplification fluorescence method for rapid detection of Salmonella was established by combining the best primers with other supporting reagents. The direct expansion method was used to extract DNA, and the isothermal amplification fluorescence technique and conventional PCR method were used to detect Salmonella with different concentrations. The minimum detection limit was detected, and the sensitivity was evaluated. The results showed that the established method for isothermal fluorescence amplification detection of Salmonella is more sensitive than the conventional PCR method, and it has good specificity for Salmonella based on interfering experimental results. The characteristics of this method are fast, simple, short reaction time, good specificity, and high sensitivity. It can be used for rapid detection of Salmonella.Keywords: isothermal fluorescence amplification technology; Salmonella; specificity; sensitivity沙门氏菌是革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科，是常见的食源性致病菌，目前已知血清型有2 500个以上[1-3]。
沙门氏菌的检测技法07
鼠伤寒沙门氏菌菌株染色体埘蛆克隆成功，并用于
检测食品中沙门氏菌的存在。Ｆ№等人在食品沙门氏
菌检测中引入ＤＮＡ．ＲＮＡ杂交技术，此法应用的探针 含有用放射性同位素标记的伤寒沙门氏菌ＤＮＡ片断， 其敏感性高，经大约４８ｈ增菌步骤后，检测极限可达 每毫升１０８个细菌，但由于要使用放射性同位素，只 能在专门的实验室中进行，因此阻碍了该方法的推广 应用【１０］。为此，以核酸杂交为基础的比色计技术目前 已发展起来［１ｌ】。这种方法依赖于沙门氏菌核糖体 对叮Ａ（ｒ】卧渔）及核糖体发育过程中储存的核酸成分进 行检测。这种天然富含ｒ】卧限标靶序列的情况使得无 辐射检测成为可能，同时又保持了与放射性同位素方 法相当或更高的敏感性。 ２．４基因芯片技术 Ｃｈｉ出ｉｋｏｖ等采用寡核苷酸芯片研究沙门氏菌抗原 和毒力因子与其致病性的关系，发现细菌毒力因子可 用于肠道致病菌的分析检测【１２１。靳连群等利用基因芯
结果表明该方法可靠，且阳性率比国标方法耐１９１。黎
兆滚等使用ＥＬＩＳＡ技术，对９４份鱼粉样品增菌培养液检
８３
万方数据
《现代食品科技》
Ｍｏｄｅｍ
Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ
Hale Waihona Puke Ｔｅｃｈｎｏｌｏ野ｖ０１．２３
Ｎｏ．５（总９５）
测沙门氏菌，结果表明阳性符合率为９２％，阴性符合 率为１００％，总符合率９８％以上【２０ｊ。 ３．２斑点酶联免疫吸附 斑点酶联免疫吸附（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）试验是一项免 疫学检测技术，具有简单、快速、敏感、特异性强等 特点，并具有较高的可重复性。 目前，应用该法检测食品中沙门氏菌的报道很多。 张红见等应用Ｄｏｔ－ＥＵＳＡ法对８５份猪胴体进行了沙 门氏菌的检测。结果表明，在８５份肉样中，Ｄ０ｔ－ＥＵＳＡ 检出沙门氏菌阳性６５份，阳性率为７６．４７％，检测结 果与常规方法一致【２１１。雷风应用Ｄｏｔ－ＥＬＩｓＡ法检测鱼 粉８５份，对沙门氏菌最低检出量为每毫升４００个，沙 门氏菌阳性检出率７５．２９％，常规分离培养法阳性检出 率为６２．３５％，两者差异不显著瞄】。康明等应用 Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鱼粉８５份，结果表明，６４份为阳性， 常规分离培养法５３份为阳性，两种方法差异不显著。 由此可见，该方法简便、特异、快速、结果直观，便 于在基层推广使用【２３Ｊ。 ３．３免疫磁性分离技术 由于食品检样常为固液多相混合体，采用常规方 法难以将少量致病微生物分离出来。借助免疫磁性分 离技术，可以很快地在含有大量杂菌的悬液中有选择 性地分离出目的微生物，节省时间。目前，应用该法 分离检验食品中致病菌也有一些相关报道。Ｓ均ｅⅣｅ等 报道了用免疫磁性分离技术从乳及乳制品、肉类和蔬 菜中分离出沙门氏菌，其检测限为每克１００个细菌ｆ２４】。 ＭａｌｌＳ丘ｅｌｄ等比较免疫磁性分离技术和常规方法从食品 中分离沙门氏菌。他们用１２０种食物样品，其中一半样 品中加入低浓度的沙门氏菌。结果证实，就选择性而 言，抗沙门氏菌磁珠和增菌方法中最有效的亚硒酸盐 选择性培养基一样有效【２５】。值得强调的是，免疫磁性 分离技术能捕获受损伤的靶细菌，而目前所用的几种 常规方法则不具备这样的能力。
沙门氏菌菌检测方法
沙门氏菌菌检测方法沙门氏菌（Salmonella）是一类常见的食源性致病菌，可以引起人类各种疾病，如食物中毒、胃肠炎等。
因此，对食品中的沙门氏菌进行检测是非常重要的。
下面我将详细介绍几种常用的沙门氏菌检测方法。
1. 培养法培养法是最常用的沙门氏菌检测方法之一。
该方法需要将样品（如食品、水）在适当的培养基上进行培养，并观察是否有沙门氏菌的生长。
具体步骤如下：（1）将样品接种于含有选择性成分的培养基上；（2）将接种的培养基培养在适当的温度下，通常为37摄氏度；（3）观察培养基上是否有典型的沙门氏菌的形成，一般表现为黑色斑点；（4）进行进一步的确认试验，如生化试验和血清学试验。
2. PCR法PCR法是一种快速、准确且高度灵敏的沙门氏菌检测方法。
PCR法通过扩增样品中沙门氏菌的特定基因片段来检测其存在。
具体步骤如下：（1）提取样品中的DNA；（2）使用特定引物扩增沙门氏菌的基因片段；（3）通过电泳将扩增产物分离，并观察是否有目标片段的出现。
3. ELISA法ELISA法是一种常用的快速筛查大量样品的沙门氏菌检测方法。
该方法利用特异性抗体与沙门氏菌抗原结合，并通过酶催化反应来检测沙门氏菌的存在。
具体步骤如下：（1）将样品涂覆在固相酶标板上；（2）添加特异性抗体与沙门氏菌抗原结合；（3）洗涤去除非特异性结合的成分；（4）添加辣根过氧化物酶标记的二抗，并形成酶标复合物；（5）通过酶催化反应产生显色物质，观察是否有颜色的出现。
4. 质谱法质谱法是一种高分辨率、高灵敏度的沙门氏菌检测方法。
该方法通过检测样品中沙门氏菌的特定代谢产物来判断其存在与否。
具体步骤如下：（1）提取样品中的代谢产物；（2）使用质谱仪进行检测，并与数据库中的标准进行比对；（3）根据比对结果判断样品中是否有沙门氏菌的存在。
除了上述常用的沙门氏菌检测方法外，还有一些新兴的检测技术，如纳米技术、免疫传感器等。
这些方法具有高灵敏度、高特异性和快速的特点，可以用于食品、环境等多种领域的沙门氏菌检测。
鸡组织中沙门氏菌的分离鉴定与药物筛选
禽沙门氏菌病，是一个概括性术语，指由沙门氏菌属中的任何一个或多个成员所引起禽类的一大群急性或慢性疾病。
在所有动物中，最常报道的沙门氏菌来源于家禽和禽产品。
禽沙门氏菌病是养禽业各个时期都值得关注的重要疾病问题。
因此，定期进行沙门氏菌分离培养和耐药性检测很有必要。
1试验方法1.1细菌分离无菌采集具有典型沙门氏菌感染病症鸡的肝脏和脾脏，将病料的新鲜截面在SS 琼脂培养基的表面轻轻涂抹均匀，将涂好的培养基放在恒温箱中，37℃下培养24h 。
在培养基上选取12个淡红色、圆形、表面光滑、湿润、较大、中心黑色、边缘透明的菌落，分别接种于盛有营养肉汤的试管中，编号1～12号后放在恒温箱中，37℃下培养24h 。
1.2PCR 试验[1-4]1.2.1引物来源及设计参照沙门氏菌组氨酸转运操纵子基因序列，此基因序列是沙门氏菌属的高度保守序列。
用软件Primer 5.0设计l 对引物，长度为25bp ，两引物间核苷酸长度为234pb 。
引物I ：5'-ACT GGC GTT ATC CCT TTC TCT GCT G-3'。
引物Ⅱ：5'-ATG ，TTG TCC TGC CCC TGG TAA GAG A-3'。
预计扩增产物的长度为284pb 。
1.2.2扩增取无菌0.5mL 离心管十二支，编号1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12。
向每支离心管中分别加入上游引物1μL ，下游引物1μL ，dNTPs 4μL ，10×buffer 5μL ，水36.7μL ，Taq 酶0.3μL 。
然后在1～12号离心管中各加与之对应的菌液2μL 。
将上述混合液稍加离心，立即置PCR 仪上，执行扩增。
在94℃预变性7min ，进入循环扩增阶段，94℃30s ，47℃30s ，72℃45s ，循环30次，最后在72℃保温10min 。
反应结束，PCR 产物放置于4℃待电泳检测。
1.2.3电泳配置0.8%琼脂糖凝胶，溶化后加5μL EB ，倒板，取5μL pcr 扩增产物加1μL 缓冲液上样，点上marker 后放进电泳槽，将电压调到140伏特，开始电泳。
沙门氏菌的检测方法
沙门氏菌的检测方法
沙门氏菌是一种能够引起食物中毒的细菌，对人体健康造成威胁。
因此，对食
品中是否存在沙门氏菌进行有效的检测是非常重要的。
下面将介绍几种常见的沙门氏菌检测方法。
首先，传统的培养法是最常见的检测方法之一。
这种方法是将样品在适当的培
养基上培养，待细菌生长后，通过观察细菌的形态、生长速度和其他特征来识别是否存在沙门氏菌。
这种方法简单易行，但需要较长的时间来获取结果，通常需要
3-5天。
其次，分子生物学方法也是一种常用的检测手段。
例如，聚合酶链反应（PCR）可以通过扩增目标DNA片段来检测沙门氏菌的存在。
这种方法具有高度的特异性
和灵敏度，能够快速准确地检测出沙门氏菌，但需要一定的实验条件和设备支持。
另外，免疫学方法也是沙门氏菌检测的重要手段之一。
免疫学方法包括酶联免
疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹（Western blot）等，通过检测样品中的特定抗原或抗体来判断是否存在沙门氏菌。
这种方法具有较高的特异性和灵敏度，能够在较短的时间内获取结果。
此外，质谱法也是一种先进的沙门氏菌检测方法。
质谱法通过检测样品中的蛋
白质或其他化合物的质荷比来判断是否存在沙门氏菌。
这种方法具有高度的准确性和快速性，但需要较为复杂的设备和专业的操作技能。
总的来说，针对沙门氏菌的检测方法有多种选择，每种方法都有其特点和适用
范围。
在具体的实验中，可以根据实际情况选择合适的检测方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。
希望本文介绍的方法能够对沙门氏菌的检测工作有所帮助。
实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌
实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法，以提高对该菌的检验速度和准确性，为公共卫生，食源性致病菌监测，突发性群体性食物中毒事件提供技术支持。
方法采用实时荧光PCR法和培养法对40份不同类食品进行沙门菌和志贺菌的检测，并对分离的菌株进行血清分型和定量检测，比较两种方法的特异性，灵敏度，准确性。
结果采用实时荧光PCR法检测40份样本,其中8份沙门菌核酸阳性，阳性率20%；采用培养法检测这40份样本，4份样品分离出沙门菌，阳性率10%，且4份样品经核酸检测均为阳性，32份核酸阴性样本采用培养法检测，均未分离到沙门菌和志贺菌。
结论实时荧光PCR法结合传统分离培养法适宜食品中沙门菌，志贺菌的快速筛查鉴定及食物中毒等突发事件的快速诊断。
沙门菌(salmonella)和志贺菌(shigella)是重要的，常见的肠道致病菌，也是食品卫生国家标准中规定的食品必检的肠道致病菌，由沙门菌引起的伤寒、副伤寒及由志贺菌引起的细菌性痢疾是《中华人民共和国传染病防治法》中规定报告的乙类传染病，肉，蛋，奶等营养丰富的食品是其主要传播媒介。
沙门菌污染不仅能导致鸡白痢，仔猪副伤寒，流产等疾病，还使人类发生伤寒，败血症，胃肠炎，食物中毒等，志贺菌主要引起细菌性痢疾，它们对人们的身体健康和生命安全构成了严重的威胁[1，2］，世界各地的食物中毒中，由沙门菌引起的中毒病例占首位或第2位，建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法，以提高对该菌的检验速度和准确性，在公共卫生，食源性致病菌监测，突发性群体性食物中毒事件中的快速检测中有重要意义,也是沙门菌和志贺菌检验研究的核心所在。
1 材料与方法1.1样品种类和来源样品购于南京市各农贸市场，超市和餐饮店主要消费品：生畜肉，熟肉制品，即食食品，中式凉拌菜。
1.2主要试剂和仪器1.2.1培养基沙门菌和志贺菌选择性培养基（BS平板，HE平板,SS平板及显色平板）和沙门菌和志贺菌选择性增菌液（TTB,SC,GN）均购自北京陆桥公司。
生物定量PCR沙门氏菌检测原理
生物定量PCR沙门氏菌检测原理PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的分子生物学技术，它通过在体外扩增目标DNA序列的特定区域，具有高灵敏度和高特异性的特点。
PCR在沙门氏菌检测中被广泛应用，因为沙门氏菌是一种常见的食物传播病原菌，能够引起人类和动物的胃肠道感染和食物中毒。
生物定量PCR在沙门氏菌检测中可以准确、快速地定量沙门氏菌的数量，并判断食品样品是否受到沙门氏菌的污染。
生物定量PCR沙门氏菌检测的原理是基于PCR技术和实时荧光定量PCR技术。
首先，为了进行PCR反应，需要提取样品中的沙门氏菌DNA。
样品的处理方式通常包括预处理（如样品的震荡、离心等），细胞破碎和DNA提取。
一旦得到样品中的目标DNA，就可以开始PCR反应。
PCR反应需要用到DNA引物和特定的酶。
引物是两个单链DNA分子，它们与待扩增的沙门氏菌DNA序列的两个互补区域配对，形成稳定的DNA双链结构。
引物的设计需要依赖于目标基因的序列信息，以确保引物能够特异性地与沙门氏菌DNA结合。
酶是一种特定的DNA聚合酶，它能够在高温条件下，将引物延伸，并合成新的DNA链。
PCR反应分为三个步骤：变性、退火和延伸。
首先，通过加热样品，将DNA双链变性成两条单链DNA。
然后，将温度降低，使引物与目标序列特异性结合。
在此温度下，DNA聚合酶能够沿着目标DNA序列在引物上进行延伸，合成新的DNA链。
随着每个PCR循环的重复，DNA的数量呈指数级增加。
实时荧光定量PCR是在PCR反应过程中实时监测PCR产品积累的量。
它基于聚合酶链式反应产物ssDNA结构与荧光探针相互作用的原理。
在PCR反应中，荧光探针被引物特异性结合的DNA序列上的DNA聚合酶剪切，使两个荧光染料（荧光发射染料和荧光供体染料）分离，导致荧光信号的发射。
实时荧光定量PCR仪器会记录PCR反应过程中的荧光信号。
荧光信号越高，表示PCR产物的数量越多。
通过与已知浓度的标准曲线相比较，可以确定目标DNA的浓度。
沙门氏菌的鉴定与PCR快速检测
沙门氏菌的鉴定与PCR快速检测摘要：沙门氏菌是一种常见的重要的人畜共患病原菌，不仅能引起各种动物的沙门氏菌病，而且与人类多种疾病有关，在世界各地的食物中毒病例中，沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位。
沙门氏菌在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要的意义。
本实验通过SS培养基的培养以及革兰氏染色检测鉴定和纯化菌株，并选用操作简便、快速、费用低廉的热裂解法来获得细菌基因组DNA，同时对热裂解的时间进行了比较实验，以及对PCR检测的敏感性和所用引物的特异性进行了试验。
结果表明，所培养的菌确为沙门氏菌；菌体煮沸时间2min即可得到比较好的PCR效果；通过PCR能检测出129 pg的沙门氏菌DNA。
所设计的引物对沙门氏菌属有比较好的特异性。
关键词：沙门氏菌；PCR；快速检验Identification and Rapid Detection of PolymeraseChain Reaction of SalmonellaAbstract: The strain was identified and purified by cultivation with SS media and Gram’s stain. The pyrolysis method was selected to obtain the genome DNA of Salmonella. Comparison of pyrolysis time, the sensitivity of PCR to the template DNA and the specificity of primer were studied. The results showed that the culture was absolute specific Salmonella. The better effectiveness of PCR was obtained when the mycelium of Salmonella was boiled for 2min. 129 pg DNA of Samonella would be able to detect by PCR. The primer used in this experiment was specific to Salmonella.Key words : Salmonella；PCR；rapid detection1 前言1.1 细菌性食物中毒严重威胁人类健康“民以食为天，食以安为本”。
沙门氏菌检测方法研究进展
沙门氏菌检测方法研究进展沙门氏菌是一种能够引发人类食物中毒的致病菌，对于保障食品安全，保护消费者健康至关重要。
因此，沙门氏菌的检测方法一直受到广泛关注和研究。
以下将对沙门氏菌检测方法的研究进展进行综述。
1.传统方法：传统的沙门氏菌检测方法主要包括斑点培养法、传统PCR和ELISA等技术。
斑点培养法适用于样品数量少、时间要求不严格的情况，但是在灵敏度和特异性方面存在一定的局限性。
传统PCR和ELISA是便捷、经济的检测手段，但是对样品处理和分离纯化要求较高，且存在一定的假阳性和假阴性结果。
2.分子生物学方法：近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，越来越多的沙门氏菌检测方法基于分子生物学方法得到应用。
其中，实时荧光PCR技术是一种快速、灵敏和特异的检测方法，其能够实现对沙门氏菌的快速定性和定量分析。
此外，引物和探针的设计也得到了不断改进，提高了检测的特异性和灵敏度。
3.免疫学方法：免疫学方法包括单克隆和多克隆抗体的制备，并应用于免疫层析法、免疫电镜法和免疫PCR等技术中。
免疫层析法是一种便捷的沙门氏菌检测方法，其通过抗体的特异性识别来实现菌的快速检测。
免疫电镜法则结合了抗体和电子显微镜的优势，能够在样品中直接观察到沙门氏菌的存在。
4.快速检测方法：为了满足对沙门氏菌快速检测的需求，研究人员开发了许多新型的快速检测方法。
其中，光学生物传感器技术是一个有前景的方法，通过光学信号的变化来实现对沙门氏菌的检测。
此外，微流控芯片技术也是近年来发展迅速的领域，能够通过微小的通道和对流控制实现对沙门氏菌的检测和分离。
总结起来，沙门氏菌的检测方法在传统方法、分子生物学方法、免疫学方法和快速检测方法等方面都有了重要的研究进展。
这些方法在沙门氏菌的快速、灵敏和特异性检测方面发挥了重要作用，对于食品安全的监测与控制具有重要意义。
未来，随着技术的不断进步和发展，沙门氏菌的检测方法将更加多样化和高效化。
用PCR技术检测动物产品中沙门氏菌的研究
用PCR技术检测动物产品中沙门氏菌的研究
沈孝民;涂书清
【期刊名称】《中国动物检疫》
【年(卷),期】1997(014)002
【摘要】用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测沙门氏菌，结果表明，对各种不同血清型的沙门氏菌和已知被该菌污染的鱼粉和动物产品的肉汤培养物均检出阳性，而其他的枸橼酸杆菌、奇异变形杆菌，大肠艾希氏杆菌、缓慢爱德华氏菌和嗜水气单胞菌等非沙门氏菌类，均为阴性。
证明本方法特异性高且有灵敏、快速等特点，适用于口岸检疫进出境动物产品快速、准确验放的需要。
【总页数】3页(P8-10)
【作者】沈孝民;涂书清
【作者单位】福州动植物检疫局;福建省计划生育科学技术研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S852.612
【相关文献】
1.应用PCR技术同步检测动物产品中的4种致病菌 [J], 蒋鲁岩;陈光哲;段宏安;蔡宝亮;秦敏;张常印
2.肺炎支原体感染动物模型的建立以及PCR技术在感染检测中的应用与研究 [J], 辛德莉
3.肺炎支原体感染动物模型的建立以及PCR技术在感染检测中的应用与研究 [J], 辛德莉
4.多重PCR技术检测食用鱼类产品中β-溶血性嗜水气单胞菌毒性基因研究 [J], 余文杰
5.应用分子生物学技术检测布鲁氏菌抗原的研究——Ⅱ PCR技术在动物布鲁氏菌病早期诊断中的应用 [J], 唐浏英;邱海燕;李元凯
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用
动物医学进展,2004,25(6):55258Progress in Veterinary MedicinePCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用刘华伟1,2,郭蔼光1,马立农23,邱 立1(1.西北农林科技大学,陕西杨陵712100;2.深圳职业技术学院,广东深圳518055)中图分类号:S852.612文献标识码:A文章编号:100725038(2004)0620055204摘 要:PCR是一种体外核酸扩增技术,具有敏感性强、特异性高、快速、简便等优点,在医学、生物学等领域中得到了广泛应用。
文章系统地阐述了PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用,并对引物基因设计、PCR扩增过程中的技术参数和常见疑难问题做了归纳总结。
同时简要介绍了PCR技术的研究进展,展望了今后微生物检测的发展方向。
关键词:PCR;沙门氏菌;快速检测;引物设计;血清型沙门氏菌是一类广泛分布于自然界,对人类和动物具有极大危害的革兰氏阴性致病菌。
目前全世界已分离出2523个血清型[1],我国已发现216个[2]。
与人类疾病有关的血清型主要集中于A～E群,包括:伤寒沙门氏菌、甲、乙、丙型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸭沙门氏菌、新港沙门氏菌等,其中以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及猪霍乱沙门氏菌最为常见。
传统的检测方法过程复杂,周期长,所需试剂繁多。
PCR技术以其敏感性强、特异性高、简便、快速等优点,现已广泛应用于微生物检测,本文重点论述了PCR技术在沙门氏菌检测中的应用,并对其研究进展做了简要介绍。
1 PCR技术简介聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR,是一种体外核酸扩增技术。
PCR技术最初是为了降低化学合成基因的工作量,1971年由Khorana和他的同事提出。
1985年由Kary Mullis和Cetus公司的同事首次开发成功,随后在医学、生物学等领域中得到了广泛应用,Kary Mullis因此获得1993年诺贝尔化学奖。
沙门氏菌的检测方法
ＧｕｉｄｅｔｏＣｈｉｎｅｓｅＰｏｕｌｔｒｙ２００６年第２３卷第２４期禽业园地近年来，沙门氏菌食物中毒和动物感染沙门氏菌十分严重。
由肠炎沙门氏菌引起人的急性胃肠炎，在世界各国有增加的趋势，已成为国际公共卫生的一个重要课题。
沙门氏菌作为致病菌检测的一项重要指标，在公共卫生、食品卫生、畜牧兽医和出入境检验检疫中均有重要意义。
下面就对沙门氏菌的检测方法进行简单的介绍。
一常规方法从病料中分离培养为基础的常规方法，对这种方法的相关研究较多。
虽然该方法是迄今为止最确实的方法，但由于沙门氏菌常在肠系膜和膜淋巴结中而不在肠腔中出现等原因，故排泄到粪中去的细菌可以是间歇的和低密度的，所以有时必须重复分离并采取大量样品在增菌肉汤中培养。
此外，这种常规方法为确诊而进行的细菌学鉴定需要几人才能报告结果，因此该方法不够简便、准确和快速。
传统的沙门氏菌检测方法的改进内容主要集中在选择性培养基的选择上。
如由于沙门氏菌具有可特异性地分解丙烯乙二醇产酸，使中性红指示剂变红的生化特征，在分离培养基中加入丙烯乙二醇、５－溴－４－氯－３－吲哚－β－Ｄ呋喃半乳糖，可实现对沙门氏菌的分离与鉴定工作同步进行，使沙门氏菌检测所需时间从常规方法的４～６ｄ缩短至２ｄ；采用Ｓａｌｍｏｓｙｓｔ培养基进行增菌后，在Ｒａｍｂａｃｈ培养基上进行分离培养，可实现对沙门氏菌的快速检测，大大减少了检测中所需培养基种类，同时培养过程全部在３７℃下进行，操作简便。
二应用免疫酶标技术目前己有应用ＥＬＩＳＡ对猪沙门氏菌抗体进行检测的报道。
张艳红通过试验确定了快速检测肠炎沙门氏菌的竞争ＥＬＩＳＡ方法（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）。
目前正在研制肠炎沙门氏菌特异性单克隆抗体Ｈｇｍ，两株单抗联合使用将会更准确地检测肠炎沙门氏菌。
杨爱萍的试验结果表明单抗直接ＥＬＩＳＡ法灵敏度高，特异性强，可避免人为因素造成的假阴性，且能在短时间内快速筛去大量的阴性样品。
检测时间比传统方法大为缩短，为加快产品流通提供了方便与可能。
直接ELISA与PCR联合检测人粪便中的沙门氏菌
直接ELISA与PCR联合检测人粪便中的沙门氏菌张晓燕;黄金林;焦新安;刘秀梵【期刊名称】《江苏农学院学报》【年(卷),期】2003(24)4【摘要】采用直接酶联免疫吸附试验(ELISA)与PCR相结合的方法,对某市饮食行业健康人群的1 426份人粪便样品进行沙门氏菌检测,并与国家标准方法对比,直接ELISA法的敏感性和特异性分别达100％和97.2％,PCR法的敏感性和特异性均为100％。
确定的沙门氏菌快速检测优化程序为:对大量样品采用直接ELISA筛检,去除阴性样品,阳性样品采用PCR法作进一步鉴定;需要定型时则用国家标准方法。
此法具有高度的特异性、敏感性和快速简便等优点。
【总页数】3页(P13-15)【关键词】人粪便;沙门氏菌;联合检测;直接ELISA;PCR;直接酶联免疫吸附试验;致病菌【作者】张晓燕;黄金林;焦新安;刘秀梵【作者单位】扬州职业大学轻工系;扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室【正文语种】中文【中图分类】R378.22;S852.61【相关文献】1.用PCR技术检测直接从粪便中提取真菌DNA的实验研究 [J], 吴浩;陈珍晶2.直接从粪便中检测致犊牛腹泻产肠毒素大肠杆菌的双重PCR方法的建立与应用[J], 马广强;张维军;栾婧婧;林树乾;杨少华;刘文强;高运东;仲跻峰;赵宏坤3.直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌 [J], 黄金林;焦新安;文其乙;潘志明;张小荣;张如宽;刘秀梵4.荧光定量PCR快速检测粪便中沙门氏菌方法的建立及应用 [J], 王荣香;倪凯翔5.鸡粪中沙门氏菌和大肠杆菌O78多重PCR检测方法的建立 [J], 胡茂秀;王莎莎;俞超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验一ELISA方法快速检测肉制品中的沙门氏菌
实验一 ELISA方法快速检测肉制品中的沙门氏菌一、实验目的掌握ELISA方法快速检测肉及肉制品中的沙门氏菌的具体方法及操作步骤。
二、实验原理酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种常用的固相酶免疫测定方法,是在放射免疫分析理论的基础上发展起来的一种非放射性标记免疫技术,具有灵敏度高、特异性强、重复性好,所用试剂稳定、易保存,试验操作简便,结果判断客观等特点常用的ELISA测定方法有:根据检测目的和操作步骤不同, ELISA有3种基本方法。
(1)双抗体(原)夹心法 (2)间接法 (3)竞争法。
其中竞争法由于具有反应重复性与完成性好的特点,它是目前使用较广泛的测定方法。
三、实验材料1．包被缓冲液：碳酸盐缓冲液（pH9.6 , 0.1M） Na2CO3.10H2O 11.45g NaHCO3 5.04g NaN3 0.2g 蒸馏水加至1000mL2．稀释液： PBS(Ph7.4, 0.15M ) 0.2M Na2HPO4 40.5 mL 0.2M NaH2PO4 mL NaCl 8.2g 3．Tween 20 0.5 mL 蒸馏水加至1000mL4．洗涤液：NaCl -Tween NaCl 8.5g Tween 20 0.5 mL蒸馏水加至1000mL5．底物溶液：磷酸盐-柠檬酸缓冲液（pH5.0） 0.1M柠檬酸 24.3 mL 0.2M磷酸氢二钠25.7mL 蒸馏水加至50mL 邻苯二胺 40 mg，溶解后避光保存。
临用前加入30% H2O2 0.15 mL 6．封闭液：0.2% BSA溶液7．沙门氏菌血清8．辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体9．终止剂：2M 硫酸10．ELISA板11．酶标检测仪12．移液枪13．人工污染沙门氏菌的香肠制品一份。
四、实验步骤(1)样品前增菌18-24h.(2)样品包被:取样品100μｌ/孔包被酶联板4℃过夜，洗板3次。
(3)封闭:BSA 200μｌ/孔,37℃孵育1ｈ，洗板3次。
单抗酶联试剂盒与PCR方法快速检测沙门氏菌的比较
单抗酶联试剂盒与PCR方法快速检测沙门氏菌的比较杨爱萍;黄金林【期刊名称】《畜牧与兽医》【年(卷),期】2003(35)12【摘要】本文对单抗酶联试剂盒与PCR方法快速检测沙门氏菌进行了比较。
将沙门氏菌与大肠杆菌以不同比例混合后 ,分别用ELISA和PCR法检测 ,在1∶1 0 0的比例时 ,用这 2种方法均能检测出阳性样品 ;在1∶1 0 0 0的比例时 ,用ELISA法检测为阴性 ,而用PCR法则能检测出。
检测鲜牛奶、龙虾、虾仁、熟食制品等样品 ,2种方法的符合率达 97 6 %。
对冻虾仁、人粪便样品的前增菌、选择性增菌、后增菌过程进行同步检测 ,在样品的前增菌液 ,直接ELISA法检测的OD值小于 0 5 ,而PCR法扩增能出现特异条带 ,经国标方法验证为阳性 ,证实PCR法的敏感性优于直接ELISA法 ,而在选择性增菌液和M 肉汤后增菌液中 ,2种方法均能检出阳性样品。
【总页数】2页(P21-22)【关键词】单抗酶联试剂盒;PCR;沙门氏菌;快速检测;比较研究;敏感性【作者】杨爱萍;黄金林【作者单位】江苏经贸职业技术学院;扬州大学生物科学与技术学院【正文语种】中文【中图分类】S852.61;S854.43【相关文献】1.沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用 [J], 李小玲;刘斌;但现龙;王大鹏;周敏;史贤明2.食品沙门氏菌PCR快速检测试剂盒简介 [J], 马立农;刘华伟;张春柳;梁顺兴3.沙门氏菌通用PCR快速检测试剂盒的研制与应用 [J], 孔繁德;陈琼;徐淑菲;彭海滨4.新城疫病毒单抗酶联试剂盒与RT-PCR方法检测新城疫强毒感染的比较 [J], 董伟;刘秀梵;张如宽5.应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断绿孔雀新城疫 [J], 吴长新;马德斌;梁慧良;彭大新因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
文章编号:1002-2694(2004)04-0321-03直接ELISA和PCR相结合快速检测样品中的沙门氏菌*黄金林1,2,焦新安**1,2,文其乙1,潘志明1,2,张小荣1,张如宽1,刘秀梵1摘 要:目的 通过样品试验,得到优化的沙门氏菌检测方法。
方法 在单抗直接EL ISA和PCR法检测沙门氏菌的基础上,将PCR法和单抗直接EL ISA两种快速检测方法进行比较研究。
结果 直接ELI SA方法结合PCR方法对城区141份水样、2002年春季饮食行业工作人员健康检查的1426份人粪便样品,并与常规国标方法对比,直接EL ISA法的敏感性和特异性达100%和97 2%,PCR法的敏感性和特异性均为100%。
通过对鲜牛奶样、龙虾、虾仁、熟食制品、水样、人粪样测试,最终确定较优化的沙门氏菌检测程序。
结论 PCR法的敏感性优于直接EL ISA法。
对大量样品采用直接EL ISA筛检,除去大量阴性样品,阳性样品用PCR法作进一步鉴定;需要确定血清型时则用国标方法。
关键词:沙门氏菌;PCR;ELI SA;快速检测中图分类号:R378 2 文献标识码:ACombination of direct ELISA and PC R for rapid detection of Salmonella HU AN G Jin lin,JIA O Xi nan,WEN Q i yi,PA N Zhi ming,ZHAN G Xiao rong,ZHAN G Ru kuang,L IU Xiu fuan(Yangz hou Univer sity,Y angz hou225009,China)ABSTRAC T:Aim A n opitimized rapid protocol for the detection of Salmonella w as developed Methods An M abbased direct EL ISA and PCR protocol for t he detection of Sal monella were dev elo ped previously T his study investig ated t he accuracy of both di rect ELISA and P CR for the rapid detection of Salmonella and set up a new detection strategy Result Using direct EL ISA to detect w ater samples from dow ntown area of Y angzhou city,and then using PCR to test the EL ISA positive samples and rando mly selected negative samples,the coincidence of t heir results was97 2% In the2002spring physical examination of Y angzhou Guang ling district for employ ees in the restaurant industry,1426human feces samples were detected by the combination strateg y of dir ectELISA and PCR metho d Compared w ith t he results of National Standard method,the sensitivit y and specificity of dir ect ELI SA was100%and 97%,respectively,while those of PCR method reached both100% It also indicated that combinat ion use of two methods could g ive positive r eport wit hin40hrs,and also achieve high sensitivit y and specificit y Based o n all the results,an opitimized r apid protocol for t he detection of S almonella w as dev eloped Conclusion T he results sugg est that the sensitivity of PCR is higher than that of di rectEL ISA use dir ectEL ISA to screen the larg e number of samples first,and then use P CR to test the EL ISA positiv e samples,the fi nal step is,if needed,to use N at ional Standar d method to deter mine the seroty pes of SalmonellaeKEY WORDS:Salmonella;PCR;EL ISA;r apid detection沙门氏菌是一种常见的重要人兽共患病原菌,它不仅能导致鸡白痢、鸡副伤寒、仔猪副伤寒、流产等动物疾病,还能使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物中毒,在世界各地的食物中毒中,沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位 1 。
因而始终是医疗卫生、食品卫生和商检部门的重点检验对象之一。
沙门氏菌是一群形态、培养、生化反应和抗原构造相类似的革兰氏阴性杆菌,种类繁多,已确认的沙门氏菌有2500个以上的血清型 2 。
沙门氏菌的检测长期以来缺乏一种简便、快速、敏感性高和特异性强的理想方法。
目前对该菌的快速检测主要集中在免疫酶试验、免疫扩散法、乳胶凝集试验和免疫荧光法及酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)技术等方法上 3,4 。
本研究在PCR法和直接ELISA法检测沙门氏菌的基础上 5,6 ,对直接*受教育部高等学校优秀青年教师教学科研奖励计划(175)、江苏省 十五 科技攻关、上海市科技兴农重点攻关项目(2002341)资助**联系作者作者单位:1 扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室,扬州 225009;2 扬州大学生物科学与技术学院ELISA和PCR快速检测样品中的沙门氏菌进行了比较,并探讨了检测大量样品的优化程序,即:对大量样品采用直接ELISA筛检,以除去大量阴性样品,对阳性样品再采用PCR法检测,定型以国标方法作血清型鉴定。
1 材料与方法1 1 材料1 1 1 菌种 S enteritidis,Escherichia coli由扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室保存。
1 12 试剂 引物合成由宝生物工程(大连)有限公司合成;buffer、dNTPs、Taq酶、低分子量PCR M arker购自华美生物工程公司;常规试剂为国产分析纯试剂。
1 2 试验方法1 2 1 PCR法:按文献 5,7,8 。
1 2 2 直接ELISA方法被检抗原的处理 鲜牛奶、龙虾、虾仁、熟食制品、水样、人粪样等样品,直接从选择性增菌液SC或M肉汤后增菌液中取1ml于Eppendorf管中,离心收集沉淀,采用少量PBS洗涤后,悬浮,沸水浴20min,4 保存备用 6 。
1 2 3 直接ELISA法 参照文其乙等报道的程序 6 进行,主要步骤:将处理的抗原取50 l加入酶标板孔内,50~60 烘干,冷甲醇固定5~10min, PBST洗涤3次,5m in/次,再加入最佳工作浓度的CB8、de7酶标单抗混和液50 l/孔,37 水浴孵育2h,以后各步同常规直接ELISA法,每块被检样品板中设立阳性、阴性、空白对照各一孔。
1 2 4 水样中沙门氏菌快速检测 随机采集城区护城河水样36份、甲公园水样71份、乙公园水样34份。
每份取25ml与225ml BPW混匀,37 , 46h;然后取1ml增菌液,加入10ml SC增菌液, 37 ,18~24h,取1ml SC增菌液,加入至9ml M肉汤中,37 ,6h,进行直接ELISA检测,对阳性样品和10%ELISA结果阴性的随机样品,作PCR扩增检测。
对阳性菌株进行DA和生化试验 10 ,并将三种方法的结果进行比较。
1 2 5 人粪便样中沙门氏菌常规检验和联合快速检测 本试验与疾控中心合作,按国标方法进行常规检验,ELISA试验同步进行,取18~24h培养的SC增菌液1ml,加至9ml M肉汤中,37 ,培养6h 后,作直接ELISA检测。
对直接ELISA阳性样品和10%的ELISA结果阴性的随机样品,作PCR扩增检测。
对阳性菌株进行DA和生化试验 10 ,并将3种方法的结果进行比较。
12 6 数据分析 与国标法相比,检出试验的敏感性、特异性和符合率分别按下列公式进行计算。
敏感性=真阳性数/(真阳性数+假阴性数)特异性=真阴性数/(真阴性数+假阳性数)符合率=(真阳性数+真阴性数)/被检总数2 结 果2 1 沙门氏菌和大肠杆菌不同比例混合,直接ELISA法和PCR法的检测比较试验采用平板计数法,确定沙门氏菌细菌数量为106/ml,然后将沙门氏菌和大肠杆菌按10 1、1 1、1 10、1 100、1 1000、1 10000混合,分别取混合物1ml用PCR方法和ELISA方法进行检测。
沙门氏菌与大肠杆菌组成比例为1 1000时,用ELISA法检测为阴性,而PCR法则能检出。
图 PCR扩增产物图谱1-6.分别为10 1、1 1~1 10000M.PCR markerFig. Electrophoresis of PCR productsL ane1~6:10 1~1 1000 Lane M.PCR mar ker2 2 沙门氏菌检测方法的平行试验结果2 2 1 实际样品中沙门氏菌检测方法的平行试验结果采集农场鲜牛奶样品、出口龙虾样品、虾仁样品、熟食制品等,共208份。
采用ELISA方法和PCR方法同步进行,并用国标方法进一步验证。
见表1。
表1 实际样品沙门氏菌检测方法的平行试验结果Tab 1 The accuracy of both directELISA and PCR for the rapid detection of Salm onella样品总数直接EL ISA PCR国标法+阳性率(%)+阳性率(%)+阳性率(%)牛奶851416 471214 121214 12虾861213 951011 631011 63熟食37410 8138 1038 10合计283014 422512 022512 02结果显示,直接ELISA法检测30个阳性样品, PCR法检测出25个阳性样品,其中11份为人为污染。