沙门氏菌快速检测方法

沙门氏菌快速检测方法文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-

沙门氏菌快速检测方法

1 试剂与仪器

1.1所用器具

三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针

1.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅

1.3 所用试剂和培养基

1.3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）培养基

称取BPW培养基20.1g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，以90mL/瓶分装到各锥形瓶，并于121℃灭菌15 min，冷至常温。1.3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液

取TTB增菌液基础93.6g，加入蒸馏水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于锥形瓶中，每瓶100mL。

将锥形瓶放入灭菌锅中，121℃灭菌20min；冷至30℃，每100mL基础培养基中加入TTB配套试剂碘液和煌绿各一支（开启前用75%酒精棉消毒西林瓶表面），混合均匀。

2、操作步骤

2.1 配制BPW培养基（第一天）

2.2 培养基冷却至室温后，对培养基和整个房间进行紫外灭菌15分钟, 关灯60 min后使用。（第一天）

2.3 预增菌（第一天）

称量样品10g至含BPW培养基的锥形瓶，并及时盖上盖子，150rpm 下振荡10min，于36℃±1℃培养18h左右。

2.4 配制TTB增菌液（第一天）

2.5 增菌（第二天）

2.5.1 接种和培养

轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1mL，转种于9mL TTB增菌液内，于42℃±1℃培养18h～24h。

2.5.2

2.6 配制沙门氏菌显色培养基平板（第二天）

2.6.1 取瓶内干粉4.75g，用100mL蒸馏水溶解，可按比例扩大或者缩小。

2.6.2 混合加热至100℃，搅拌加热至完全溶解，冷却至50℃倒平板。

2.6.3 样品用画线或者涂布法接种，37℃培养24小时。

2.6.3 观察菌落颜色：（第三天）