间充质干细胞的免疫原性及其在移植中的应用

间充质干细胞的免疫原性及其在移植中的应用目的：探讨研究间充质干细胞的免疫原性以及rMSCs在临床移植中的应用。

方法：使用免疫组化方法鉴定rMSCs表面rat LA-ABC、rat LA-DR、CD80、CD86分子，并使用流式细胞术检测其含量；免疫组化法rMSC表面MHCI、Ⅱ类分子的鉴定。结果：rat LA-ABC分子在大鼠间充质干细胞的表面的表达率为13.08%，同时rat LA-DR以及CD80、CD86分子在大鼠间充质干细胞的表面均未有不表达，而外周血淋巴细胞PBLs的表面对rat LA-ABC、rat LA-DR、CD80、CD86这些分子的表达率分别为92.71%、22.39%、14.08%、9.03%。光学显微镜下观察细胞染色情况，细胞核中有棕黄染色者为阳性细胞。结论：MSC具有多向分化潜能，特性稳定；MSC不表达MHCⅡ类分子,不表达或极低表达MHCI类分子，能逃脱宿主免疫系统的排斥，异基因MSC可以进入宿主细胞，并能长期存在。MSC具有低免疫原性，临床上大大降低移植排斥及移植物抗宿主病，提高临床移植的存活率。

[Abstract] Objective: To investigate the mesenchymal stem cells of the immunogenicity and rMSCs in clinical transplantation. Methods: Immunohistochemistry identified rMSCs surface rat LA-ABC, rat LA-DR, CD80, CD86 molecules, and using flow cytometry and their contents; immunohistochemistry rMSC surface MHCI, Ⅱmolecule identification. Results: rat LA-ABC molecules in rat mesenchymal stem cell surface expression was 13.08%, while rat LA-DR and CD80, CD86 molecules in rat mesenchymal stem cells are not expressed on the surface were not suits the week the surface of blood lymphocytes PBLs of rat LA-ABC, rat LA-DR, CD80, CD86 expression of these molecules were 92.71%, 22.39%, 14.08%, 9.03%. Cells were observed under light microscope staining, nuclei were stained in brown positive cells. Conclusion: MSC have multilineage differentiation potential, characteristics and stability; MSC did not express MHC Ⅱmolecules, did not express or very low expression of MHCI molecules, can escape the host immune system rejection, allogeneic MSC can enter the host cell, and long-term existence. MSC with low immunogenicity, greatly reduce the clinical transplant rejection and graft versus host disease, improve the survival rate of clinical transplantation.

[Key words] Bone marrow-derived mesenchymal stem cells; Immunogenicity; Transplant; Clinical appication

间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）是指源自未成熟的胚胎结缔组织的细胞。是可形成多种细胞类型的多能干细胞[1]。大鼠间充质干细胞（Rats MSCs）作为中胚层发育的早期细胞，其具备自我更新与多向分化的能力，经体外培养后可以进一步分化为骨细胞、软骨细胞等[2]。rMSCs除了在骨髓中主要存在之外，在大鼠机体的脂肪、血液、肺以及脐血中都有存在，因此随着近年来组织细胞学的发展，间充质干细胞在临床移植方面的应用也正不断扩大[3]。为探讨研究间充质干细胞的免疫原性以及rMSCs在临床移植中的应用，本文将所

进行的免疫原性实验及分析报道如下：

1 资料与方法

1.1 材料与方法

实验所用Wistar雄性大鼠，180～200 g，由山西医科大学生理教研室提供。

1.2 试剂与仪器

胎牛血清（杭州四季青公司）；L-DMEM（美国HYCLONG公司）；丝裂霉素C（日本协和发酵工业株式）；大鼠白细胞抗原（rat LA）（美国Sigma公司）；绿色荧光蛋白（GFP）质粒（美国Sigma公司）；胶原酶Ｖ（美国Sigma公司）；MHCI单抗、MHCⅡ单抗abcam公司。低温水平离心机，TGL系列，国产；OlYMPUS荧光显微镜，BX41-32P02-FLB3，日本；OLYMPUS倒置显微镜，CKX31-A12PHP；日本。

1.3 实验方法

依次分别为间充质干细胞分离培养分化[4]，流式细胞仪检测，细胞RNA的提取、反转录和扩增[5-7]，外周血淋巴细胞PBLs杀伤活性试验[8-9]，免疫组化法。

1.4 统计学方法

所得数据均采用SPSS 13.00软件包进行统计处理，数据以均数±标准差（x±s）表示，组间比较进行t检验，计数资料进行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠间充质干细胞与外周血淋巴细胞的表达率

通过流式细胞仪检测比较，rat LA-ABC分子, rat LA-DR以及CD80、CD86分子在大鼠间充质干细胞rMSCs的表面和外周血淋巴细胞PBLs的表面的表达情况，t检验结果示：rat LA-ABC在rMSCs表面表达率低于在PBLs表面表达率，rat LA-DR分子在rMSCs表面不表达，在PBLs表面低表达（P＜0.01）；CD80，CD86在rMSCs表面不表达，在PBLs表面低表達（P＜0.05），差异具有统计学意义，可认为rMSC具有免疫原性，抑制at LA-ABC分子, rat LA-DR以及CD80、CD86分子的表达。具体如表1。

通過对3代MSC免疫组织化学染色方法发现，光学显微镜下细胞染色情况为细胞核中有棕黄色染色者为阳性细胞。见图1～3。