一种可靠的大鼠肝星状细胞分离及培养方法
大鼠肝星状细胞分离纯化方法的改进
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【 摘要】 目的 研 究肝 损伤后细胞基质的沉积及 纤维化形成机 制 ， 建立一种 经济、 简便 、 可靠的分 离大鼠肝星
状 细 胞 （ Ｃ 的 方 法 。 方 法 用 链 霉 蛋 白酶 和 胶 原 酶 灌 流 大 鼠 肝 脏 ， ｔ ｒｐ密 度 梯 度 离心 分 离 ＨＳ 并 进 行 体 ＨＳ ） Ｏｐｉ ｅ ｐ Ｃ， 外 培 养 。结 果 细 胞 得 率 为 ５０ ０／ ， 率 和 纯度 分 别 为 ９ ％ 、６ 。结 论 该 方 法 简便 、 用 、 定 、 靠 ， ． ×１ 鼠 活 ８ ９ 实 稳 可 为
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论 著 ・
大 鼠 肝 星 状 细 胞 分 离 纯化 方 法 的 改进
一种改良的肝星状细胞分离方法
一种改良的肝星状细胞分离方法陈超;陈宁;覃霞;朱樑【摘要】目的改良肝星状细胞(HSC)的分离方法,为深入研究肝纤维化的发生机制奠定基础.方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位消化肝脏,在1.040~1.060 g/mL 范围内多重多次密度梯度离心分离HSC,台盼蓝染色测定细胞存活率,328 nm紫外光激发HSC自发蓝绿色荧光法和Desmin细胞免疫荧光法鉴定HSC及检测HSC 纯度.Desmin和α-SMA细胞免疫荧光方法鉴定HSC静息和活化状态.结果每只大鼠肝脏HSC得率为(3~5)×107个,HSC存活率在95%以上,纯度在90%以上,体外培养14 d后活化的HSC纯度几乎达100%.结论在1.040~1.060 g/mL密度范围内采用多重多次密度梯度离心方法,避免了HSC分离过程中因密度配比误差及HSC自身密度相对不均一性所导致的细胞流失,建立了一种改良的肝星状细胞分离方法,HSC得率和纯度更加稳定,达到国外文献报道水平.%Objective To improve the method of isolating rat hepatic stellate cells (HSCs). Methods Rat hepatic stellate cells were isolated for several times with multiple density centrifugation within 1. 040 ～ 1. 060 g/mL after enzyme perfusion of liver. The cell viability was determined by Trypan blue exclution staining. The purity of HSCs was identified by retinoid antofluorescence and immunostaining by Desmin. The phenotype of HSCs was evaluated by characteristic immunofluorescence using antibodies specific for Desmin and α-SMA. Results About (3 ～5 ) × 107 HSCs were harve sted from each rat through multiple density centrifugation within 1. 040 ～ 1.060 g/mL. The cell viability was more than 95％ determined by the trypan blue exclusion method. The purity of freshly isolated HSCs and the activatedHSCs were more than 90％ and almost 100％ respectively assessed by retinoid antofluorescence and immunostaining cells using Desmin antibody. Conclusion The method of multiple density centrifugation greatly increased the production of HSCs by reducing loss of cells due to error of density preparation and their relative heterogeneity of density during isolating HSCs. This method is more convenient, efficient and reliable.【期刊名称】《胃肠病学和肝病学杂志》【年(卷),期】2011(020)006【总页数】4页(P564-567)【关键词】肝星状细胞;细胞分离;肝纤维化【作者】陈超;陈宁;覃霞;朱樑【作者单位】第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003;第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003;第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003;第二军医大学长征医院消化内科,上海,200003【正文语种】中文【中图分类】R575肝星状细胞(HSC)是肝纤维化发生发展的中心环节［1］。
大鼠肝脏细胞同步分离与培养方法的建立
大鼠肝脏细胞同步分离与培养方法的建立潘艳1, 王万鹏2, 张启迪3, 华香1, 房凤梅1, 傅承宏3, 王维1（1.涟水县人民医院检验科，江苏淮安 223400；2.涟水县人民医院肾脏科，江苏淮安 223400；3.上海交通大学医学院附属上海市第一人民医院消化科，上海 200080）摘要：目的建立一种同时分离大鼠肝细胞（parenchyma cell，PC）、肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）、肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cell，SEC）与库普弗细胞（Kupffer cell，KC）的操作方案。
方法采用EDTA/胶原酶两步灌注法获取肝细胞悬液，通过低速离心首先分离出PC组分，然后通过链蛋白酶E去除非实质细胞（nonparenchymal cell，NPC）中的PC，最后通Nycodenz和Percoll溶液进行梯度离心分离并纯化HSC、SEC和KC，体外培养并观察各细胞表型和功能的变化。
结果 PC、HSC、SEC和KC平均每克组织产量分别为（26 ± 9.2）× 106、（1.5 ± 0.2）× 106、（7.4 ± 1.5）× 106和（3.1 ± 0.9）× 106，活力分别为（93.1 ± 2.3）%、（90.1 ± 3.4）%、（96.2 ± 2.1）%和（98.2 ± 1.7）%，纯度分别为（98.5 ± 1.2）%、（95.1 ± 2.5）%、（93.6 ± 3.6）%和（98.1 ± 1.4）%；HSC在体外培养过程中逐渐丧失维生素A，转化为肌成纤维样（myofibroblast，MF）细胞；SEC在体外培养第3天出现凋亡，至7天凋亡达到顶峰，随后少量存活的细胞在体外增殖，至培养14天时形成典型的“铺路石”形态；培养14天的SEC保留清道夫功能，但丧失窗孔结构；KC可在体外增殖，培养至14天仍具有吞噬功能，表达特征性标志CD68。
柴胡皂苷d对氧化应激诱导的HSC-T6活化细胞内AP-1、NF-κB表达的影响及其雌激素受体机制
柴胡皂苷d对氧化应激诱导的HSC-T6活化细胞内AP-1、NF-κB表达的影响及其雌激素受体机制沈艳婷;刘进锴;阙任烨;陶智会;林柳兵;李勇【摘要】目的：研究柴胡皂苷d（SSd）对氧化应激诱导的肝星状细胞HSC-T6活化细胞内AP-1、NF-κB表达的影响及其雌激素受体（ER）机制，探讨植物雌激素对肝纤维化的作用机制，为临床应用植物雌激素提供理论依据。
方法：体外培养大鼠肝星状细胞HSC-T6，采用免疫组化法，检测SSd对氧化应激诱导的HSC-T6活化细胞内α-SMA蛋白表达的影响；采用Western blot法，观察SSd对氧化应激诱导的HSC-T6活化细胞内AP-1、NF-κB表达的影响。
结果：氧化应激处理HSC-T6细胞后，α-SMA、AP-1和P65/NF-κB表达明显增加。
如使用雌二醇（E2）或SSd预处理HSC-T6细胞24h后再接受氧化应激处理，三种蛋白表达明显降低，这种作用可被雌激素受体（ER）完全拮抗剂ICI-182780和ERβ拮抗剂THC抑制。
结论：E2、SSd可能通过调控ERβ，进而抑制核转录因子AP-1和P65/NF-κB的表达起到抑制HSC-T6活化的作用。
【期刊名称】《江苏中医药》【年(卷),期】2015(000)012【总页数】4页(P81-83,84)【关键词】柴胡皂苷d;肝;星状细胞;HSC-T6细胞;体外实验;大鼠【作者】沈艳婷;刘进锴;阙任烨;陶智会;林柳兵;李勇【作者单位】上海中医药大学附属市中医医院脾胃病科，上海200071;中国人民解放军第二军医大学附属东方肝胆外科医院肝外一科，上海200433;上海中医药大学附属市中医医院脾胃病科，上海200071;上海中医药大学附属市中医医院脾胃病科，上海200071;上海中医药大学附属市中医医院脾胃病科，上海200071;上海中医药大学附属市中医医院脾胃病科，上海200071【正文语种】中文【中图分类】R282.710.5肝纤维化（hepatic fibrosis，HF）是由于各种致病原因所致慢性肝损伤反复修复，经过过度的创伤愈合应答，导致瘢痕组织形成，引起细胞外基质（extracellular matrix，ECM）在肝脏内过度增生与异常沉积所致肝脏结构和肝功能异常改变的一种病理变化，其发生发展是一个连续的阶段性过程。
大鼠心肌细胞的分离鉴定以及培养
大鼠心肌细胞的分离鉴定以及培养心肌细胞是构成心脏组织的重要细胞之一，对于心脏疾病的研究和治疗具有重要意义。
在进行心脏细胞的研究和培养过程中，对大鼠心肌细胞的分离、鉴定以及培养是非常关键的步骤。
本文将介绍大鼠心肌细胞的分离、鉴定以及培养的方法和步骤，希望能够帮助读者更好地理解和掌握这一关键技术。
一、大鼠心肌细胞的分离大鼠心肌细胞的分离是进行心肌细胞培养的第一步，其关键在于有效地分离心肌细胞，保证细胞的纯度和活力。
以下是常用的大鼠心肌细胞分离的方法：1. 心脏采集：首先需要从大鼠体内取出心脏组织，最好选择小鼠、大鼠等小型动物，以便于获取足够数量和较为纯净的心肌细胞。
2. 心室组织的分离：将心脏组织置于含有氧气的离心纯化液中，迅速剪下心脏，并去除心包膜、心尖等结缔组织，然后将心室组织切成小段。
3. 细胞的分离和纯化：将切成小段的心室组织放入含有0.1%胰蛋白酶和0.1%重组胰岛素的胰酶溶液中进行消化，去除结缔组织和细胞外基质，然后用离心分离出心肌细胞。
4. 心肌细胞的过筛和纯化：经过离心后，得到的上清液中含有大量的心肌细胞和其他细胞。
通过过筛的方法，可以进一步提取纯净的心肌细胞，并将其进行鉴定和培养。
1. 形态鉴定：观察分离得到的心肌细胞在显微镜下的形态特征，包括细胞形状、大小、结构等。
正常的心肌细胞应该呈长条形、有交叉条纹，并具有丰富的胞浆。
2. 免疫细胞化学鉴定：通过染色技术，使用与心肌细胞特异蛋白相关的抗体标记心肌细胞，如肌动蛋白、肌钙蛋白等，观察其在心肌细胞中的表达情况，以确定其纯度和特异性。
3. 功能鉴定：通过检测心肌细胞的功能特性，如心肌收缩力、电生理特性等，来判断心肌细胞的活性和健康程度。
可以通过贴壁法、钙离子荧光示踪等技术手段来进行功能鉴定。
通过以上的鉴定方法，可以全面地评估分离得到的心肌细胞的纯度和活性，为后续的心肌细胞培养和实验奠定基础。
在分离和鉴定得到的心肌细胞可以进行培养，为心脏疾病的研究和治疗提供重要的实验材料。
HSC-T6细胞培养及鉴定实验报告
HSC-T6大鼠肝星状细胞培养及鉴定实验报告前言肝星状细胞(hepatic stellate cell，HSC)的名称有多种多样，如肝贮脂细胞（fat-storing cell，FSC）、脂细胞（1ipocyte）、维生素A贮存细胞（vitamin A-storing cell）、窦周细胞（perisinusoidal cell）、Ito细胞等。
HSC位于Disse间隙内，紧贴着肝窦内皮细胞（sinusoidal endothelial cells, SEC）和肝细胞。
其形态不规则，胞体呈圆形或不规则形，常伸出数个星状胞突包绕着肝血窦。
此外，HSC还伸出胞突与肝细胞、邻近的星状细胞相接触。
HSC胞质内有1～14个直径约1.0～2.0μm的富含维生素A和甘油三酯的脂滴，胞浆中有丰富的游离核糖体、粗面内质网及发达的高尔基复合体。
胞核形态不规则，由于脂滴的挤压，常致细胞核有一个或多个凹陷，核内可见1～2个核仁。
正常肝脏中HSC的数目很少，只占肝细胞总体数目的5%～8%及总体体积的1.4%，但HSC的立体分布和伸展足以覆盖整个肝窦微循环。
正常情况下HSC表现为富含Vitamin A脂滴的静止型，其功能主要有：（1）代谢和贮存Vitamin A：肝脏储存有体内80%左右的维生素A，对体内维生素A的代谢起着重要作用。
视黄醛在小肠内酯化后被运输到肝脏并与特异的视黄醛结合蛋白结合，然后转运到邻近的HSC储存。
（2）储存脂肪：正常HSC胞质内的脂滴含有大量的甘油三酯，为肝细胞提供能源。
（3）合成和分泌胶原及糖蛋白、蛋白多糖等基质成分。
目前的研究认为，HSC是正常及纤维化肝脏中细胞外基质（extra cellular matrix，ECM）的主要合成细胞。
正常肝脏中HSC合成的胶原以Ⅰ型、Ⅲ和Ⅳ型为主，其合成量是肝细胞的10倍、内皮细胞的20倍以上。
HSC 还能合成纤维连接蛋白、层连蛋白和粗纤维调理素等糖蛋白成分，以及硫酸皮素、硫酸软骨素和透明质酸等蛋白多糖。
咖啡酸苯乙酯对肝星状细胞的作用及机制分析
!489:;4<:!咖啡酸苯乙酯对肝星状细胞的作用及机制分析杨 宁１，邓 江２，王怡恺２，常 莎１，高 宁２，王文俊２，党双锁２，石娟娟２１陕西中医药大学附属医院肿瘤医院，陕西咸阳７１２０００；２西安交通大学第二附属医院感染科，西安７１０００４摘要：目的 探讨咖啡酸苯乙酯（ＣＡＰＥ）对大鼠肝星状细胞（ＨＳＣ）－Ｔ６的作用及作用机制。
方法 不同浓度ＣＡＰＥ（５、１０、１５μｍｏｌ／Ｌ）分别作用于ＨＳＣ－Ｔ６细胞，同时构建ＧＦＰ－ＬＣ３质粒转染至ＨＳＣ－Ｔ６细胞，自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂３－Ｍｅｔｈｙｌａｄｅｎｉｎｅ（３－ＭＡ）进行干预，采用ＭＴＴ方法检测ＣＡＰＥ对ＨＳＣ－Ｔ６细胞增殖的影响，透射电镜观察ＣＡＰＥ对ＨＳＣ－Ｔ６细胞超微结构的影响，细胞免疫荧光实验检测ＣＡＰＥ对ＨＳＣ－Ｔ６细胞ＬＣ３表达的影响，ｑＲＴ－ＰＣＲ检测自噬相关基因ＡＴＧ５、ＡＴＧ７、ＡＴＧ１２、Ｂｅｃｌｉｎ１和ＬＣ３ｍＲＮＡ的表达情况，Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ检测ＡＴＧ７、Ｂｅｃｌｉｎ１、ＬＣ３Ｉ／Ⅱ、ｐ－ＡＫＴ／ＡＫＴ、ｐ－ｍＴＯＲ蛋白的表达情况。
计量资料组间比较采用单因素方差分析及Ｄｕｎｎｅｔｔ－ｔ检验。
结果 ＣＡＰＥ干预组较对照组可抑制ＨＳＣ－Ｔ６细胞增殖，且生长明显受到抑制，细胞质中可观察到脂滴和轮盘状自噬体散在分布。
与对照组（１３．３４％±２．５９％）相比，不同浓度ＣＡＰＥ５μｍｏｌ／Ｌ（２３．６８％±３．７６％，ｔ＝－５．５５３，Ｐ＜０．００１）、１０μｍｏｌ／Ｌ（４３．４７％±３．８３％，ｔ＝－１５．９５８，Ｐ＜０．００１）、１５μｍｏｌ／Ｌ（５７ ２５％±２．７８％，ｔ＝－２８．３３４，Ｐ＜０．００１）的ＬＣ３荧光染色均显著增强，且呈正相关。
ＣＡＰＥ干预组（１０、１５μｍｏｌ／Ｌ）ＡＴＧ５、ＡＴＧ７、ＡＴＧ１２、Ｂｅｃｌｉｎ１和ＬＣ３ｍＲＮＡ水平明显增加（Ｐ值均＜０．０５）。
大鼠肝星状细胞分离与培养方法的实验研究
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大鼠心肌细胞的分离鉴定以及培养
大鼠心肌细胞的分离鉴定以及培养大鼠心肌细胞是研究心脏疾病和心肌细胞功能的重要模型细胞。
分离、鉴定和培养大鼠心肌细胞是心血管研究的基础工作之一，本文将介绍关于大鼠心肌细胞的分离、鉴定以及培养的方法。
一、大鼠心肌细胞的分离1. 材料准备（1）取得3-5天大的小鼠；（2）取得适合的心肌分离培养试剂盒，如Worthington试剂盒；（3）取得离心机和培养箱等实验设备。
2. 心肌细胞的分离（1）将小鼠处死，取出心脏放置在含有生理盐水的培养皿中；（2）迅速将心脏移至足够的胶原酶/胶原酶B混合液中，加入2-3ml的混合液，用剪刀将心脏切成小块；（3）将含有心肌切块的培养皿放入37度水浴箱中37±1度水浴中消化，酶解30-50min，要不断观察；（4）将消化液收集至15ml离心管内，并逐渐加入适量的生理盐水；（5）将含有细胞的离心管放入离心机，1500rpm离心去沉淀心肌细胞；（6）吸去上清液，加入足够的DMEM/F-12培养基，轻轻振动混匀；二、大鼠心肌细胞的鉴定1. 细胞形态鉴定（1）将培养皿内心肌细胞移至显微镜下观察细胞形态；（2）通过显微镜观察细胞的形态、大小、颜色等；（3）正常大鼠心肌细胞呈长条形，且贴附于培养皿底部。
2. 免疫荧光染色鉴定（1）将培养皿内的细胞进行PBS溶液洗涤；（2）加入4% paraformaldehyde固定细胞，洗涤；（3）加入常用的抗心肌肌动蛋白抗体，孵育；（4）洗涤后加入FITC标记的二抗或荧光素进行荧光染色；（5）用荧光显微镜观察细胞的荧光情况，确定心肌细胞的特异性。
三、大鼠心肌细胞的培养1. 培养基的配制（1）将DMEM/F-12培养基加入10%的胎牛血清、1%的青霉素和链霉素，混匀；（2）将培养基过滤灭菌后，置于4度冰箱储存备用。
2. 心肌细胞的培养（1）将心肌细胞悬液加入到预先涂覆明胶的培养皿中；（2）将培养皿放入CO2培养箱中37度培养，第二天更换新的培养基；（3）每2-3天更换一次培养基，直至细胞形成充分的单层。
大鼠原代肝细胞分离培养方法的改良
大鼠原代肝细胞分离培养方法的改良
裔传卉;汪纪仓;刘宗平
【期刊名称】《江苏农业科学》
【年(卷),期】2009(000)005
【摘要】本研究的目的是改进经典的Seglen原位两步胶原酶灌流法,建立稳定简便的大鼠原代肝细胞分离培养方法.采用胰酶消化获取大鼠肝细胞进行纯化、培养,过碘酸-雪夫反应(PAS)鉴定.结果显示,本法培养的肝细胞产量高、活力好,每只大鼠可获得约2×10~8个肝细胞;相差显微镜观察不同生长期的肝细胞,细胞贴壁后变平变薄,双核细胞呈岛状连接的形态学特性;PAS鉴定,肝细胞内由于含有大量的糖原颗粒而被染成红色.表明改良的方法稳定、高效,为进一步的试验研究奠定了基础.【总页数】3页(P201-203)
【作者】裔传卉;汪纪仓;刘宗平
【作者单位】扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009;扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳,471003;扬州大学兽医学院,江苏扬州,225009
【正文语种】中文
【中图分类】S852
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2.新生大鼠原代小胶质细胞分离培养方法的改良 [J], 钱凯;唐琳俊;王希;杨坤;张开
鑫;钱腾达;马涛;石晶;李立新
3.大鼠主动脉内皮细胞改良型分离培养方法 [J], 林翠红;刘光辉;杨田野;赵利;王航;史常旋;孟春
4.一种改良的鸡胚原代肝细胞的分离培养方法 [J], 唐雪;马海田
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大鼠肝星状细胞中多种细胞色素P450亚型的表达
大鼠肝星状细胞中多种细胞色素P450亚型的表达廖长秀;汪晖;张春;平洁【期刊名称】《中国药理学与毒理学杂志》【年(卷),期】2007(21)5【摘要】目的采用改良的肝星状细胞(HSCs)体外分离和纯化技术,观察刚分离的大鼠HSCs中细胞色素P450(CYP450)亚型的表达,初步探讨CYP450同工酶在HSCs生理功能和激活中的作用.方法采用链霉蛋白酶/胶原酶序贯灌流和Nycodenz密度梯度离心方法,分离和纯化大鼠HSCs,半定量RT-PCR法检测HSCs和肝细胞内多种与视黄醇代谢相关的CYP450亚型mRNA的表达.结果HSCs的得率为每肝(0.8～1.2)×107.刚分离的大鼠HSCs中均能检测到CYP1A1, CYP1B1, CYP2B1/2和CYP2E1 mRNA表达,其中,HSCs中CYP1A1 mRNA及CYP1B1 mRNA表达量接近甚至高于同一个体肝细胞中的表达水平.但CYP3A1 mRNA未检测到.结论刚分离的大鼠HSCs可较高水平地表达多种与视黄醇代谢相关CYP450亚型,提示HSCs中CYP450亚型可能参与了HSCs的生理功能调节和激活过程.【总页数】6页(P404-409)【作者】廖长秀;汪晖;张春;平洁【作者单位】武汉大学基础医学院药理学系,湖北,武汉,430071;武汉大学基础医学院药理学系,湖北,武汉,430071;武汉大学基础医学院药理学系,湖北,武汉,430071;武汉大学基础医学院药理学系,湖北,武汉,430071【正文语种】中文【中图分类】Q593.1【相关文献】1.新藤黄酸对大鼠肝微粒体细胞色素P450亚型酶活性的影响 [J], 陈伟;何瑞曦;彭慧;朱妍妍;彭代银;陈卫东;2.比索洛尔对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶含量及其不同亚型活性的影响 [J], 刘明远;杨光远;李萌;赵可欣;韩梅;赵锦程;张明远;朱秋双;杨玉;白雪3.养心复脉饮对大鼠肝微粒体细胞色素P450亚型酶活性的影响 [J], 张尚鹏;徐星娥;陈华栋;厉亚;楼蓉;张慧慧;陈艳晓4.大鼠体外肝星状细胞活化过程中代谢活化相关 CYP450亚型的变化 [J], 廖长秀;吴勇;平洁;敖英;印宪;汪晖5.大鼠肝星状细胞体外分离纯化方法的建立及多种CYP450亚型的表达 [J], 廖长秀;汪晖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
SV40LTag基因诱导永生化大鼠肝星状细胞系的建立及鉴定
生和修复有重要作用… ， 体外将其 与肝细胞 进行 混合培 养可
Ｉ、 Ⅲ型胶原 （ｏ ａｅ — Ｉ、 、 ｃｌ ｎ ｌ ｇ Ⅲ） 转化生长 因子 一Ｂ （ｒｎｆ － ．ｔ ｓｒ ａ ｏ
大大提高肝细胞的活性及分化 状态 。然 而 ， 目前分离 原代 ｍｉ ｒｗｈｆｃ ｒ ｅ ｌＴ Ｆ—Ｂ ） 体 ， Ａ Ｃ免疫组化试 剂 ｎ ｇｏ ｔ ｔ ，Ｇ ｇ ｔ ａｏｂａ Ｉ抗 ＳＢ Ｈ Ｃ的方法繁琐 、 Ｓ 产量低 ， 细胞 增殖传 代有 限， 加上 国际上仅 盒 （ 武汉 博士德生物技术公 司） Ｒ ， Ｔ试剂盒 （ Ｉ 司 ）携 带 ＭＢ 公 ，
［ 摘
要 ］ 目的 ： 建立长 期传 代 、 形态和生物 学特性 稳定 的永生化 Ｈ Ｃ Ｓ 。方 法 ：采用 Ｐｏ ａ １ ｒｎｓ Ｅ、 ｅ Ｖ型胶 原酶
原位灌流消化及 Ｎ ｅｄｎ 密度梯度离 心分离大 鼠原代肝 星状细胞 （ Ｓ ， ｙｏｅｚ Ｈ Ｃ） 并进 行免 疫组 化 Ｓ Ｂ Ａ Ｃ法鉴 定和培 养。
用 Ｅ ｅｔ ｅ Ｔａｓ ｅｉ ｅｇｎ 方 法将 携带 Ｓ ４ Ｌ ａ 基因的质粒 Ｐ Ｖ ｎｏ 该质粒 由意大利学 者 Ｇｏａｎ ａｄ ｆ ｅ ｎ ＠ ｒｎｆ ｔ ｎＲ ａｅ ｔ ｅ ｅ ｏ Ｖ ０Ｔ ｇ Ｓ ３染第 １ Ｈ Ｃ， Ｇ １ ｏ 转 代 Ｓ 以 ４ ８筛选直 至获得 阳性 克隆细胞 ， 经体外 长期培养 和传代后 ， Ｐ Ｒ方法 检测 以 Ｃ
维普资讯
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塑国病理 生理 杂志 Ｃ ｉ ｓ Ｊｕ ａｏ Ｐｔ ｐｙｏ ｇ ０７２ （０ ： ７ — ０７ ｈ ｅ ｒ ｌ ｆ ａ ｏｈｓ ｌｙ ０ ， １ ）２ ４ ２７ ｎ ｅ ｏ ｎ ｈ ｉｏ ２ ３ ０
［ 文章编号 ］ １０ ４ １ （ ０７ １ ２ ７ ０ ０ ０— ７ ８ ２ ０ ）０— ０ ４— ４
改良大鼠肝星状细胞的分离和原代培养
四川医学２０ ０ ２年 ７月第 ２ ３卷 （ ７期 ） Ｓ ｃ ｕ ｎ Ｍｅ ｉ １１ ｕ ｎ ｌ２ ０ ， ｌ ３ Ｎｏ ７ 第 ｉ ａ ｄ ｃ ． ｒ ａ ， ０ ２ Ｖｏ ， ． ｈ ａ ｏ ２
・６ ５ ・ ７
改 良大 鼠肝 星 状 细胞 的 分 离 和原 代 培 养
计 算 黄染 细胞 数 ， 细胞 总 数 即为 细胞 阳性 率 ， 即细 除 亦
胞 纯 度 。③ 维 生 素Ａ 自发 荧 光 ： ３ ８ ｍ 波 长 的 紫 外 在 ２ｎ
光 激发 下 ， 分 离 或早 期 原 代 培养 的ＨＳ 能发 出蓝 绿 新 Ｃ
Ｓｎｏ ａ ｇ ｎ公 司 ） 兔 抗 大 鼠ｄ ｓ ｎ抗 体 、 兔Ｓ Ｐ免疫 组 ， ｅ ｍｉ 抗 — 化 试剂 盒 （ 福州 迈 新 公 司 ） 。③ 主 要 仪 器 ： 温离 心 机 低
的 浓 度接 种 在 直径 １ ０ ｍ 塑料 培 养皿 中 ， ５ 二 氧 ０ｒ ａ 于
化碳、５ ９ ％潮 湿 空 气 的 二 氧 化 碳 培 养 箱 里 培 养 ， ４小 ２ 时后 换 液 ， 以后 每 ３ ～４天换 １次 培养 液 （ １ ％胎牛 血 含 ０
清 ） 。 １ ３ 结 果 ．
原 酶 、 白酶 Ｅ（ 国Ｓｇ 蛋 美 ｉｍａ公 司 ） ＤＭＥ 培 养 粉 、 ， Ｍ Ｉ Ｍ 培 养 粉 （ 国Ｇｉｃ ＭＤ 美 ｂ ｏ公 司 ） Ｍｅｒ ａ ｄ （ 海 ， ｔｉ ｍｉｅ 上 ｚ
板 上 ， 养７天后 按 试剂 盒 操作 。阳性 细胞胞 浆 染有 黄 培 色 颗 粒 。 阳性率 计 算 ： 细胞 片上 随 机数 ２ ０个 细胞 ， 于 ０
１ ２ １ ＨＳ 的 分 离 ： ４ ０ ． ． Ｃ 取 ０ ｇ以上 雄 性Ｓ Ｄ大 鼠１只 ， 腹 腔 注 射 ２ 戊 巴 比妥 钠 溶 液０ ５ （ ０ ／ ｇ ， 醉 ． ｍｌ ３ ｍｇ ｋ ） 麻 后 将大 鼠固定 于 洁 净手 术 台上 ， 规 消毒皮 毛 。 常 剖开 腹
大鼠肝脏星形细胞的分离培养及鉴定
【 要 】 目的 摘
技 术支 持 。方 法 ９ ％。结 论 ８
建 立大 鼠肝 星形 细胞 （ ｐ ｅａ ｌ， Ｓ ） ｝ ａｃ ｔｌｅ ｅｓＨ ｃ 的体 外分 离及 培养方 法 ， 进行 肝纤 维化 的实 验研 究 提 供 ｓｌｔｃ ｌ 为
【 关键词 】 肝 脏星 形 细胞 ； 细胞培 养 ； 定 鉴
Ｉ ｌＵ ｎ ｃ ｌ ｒ ｎ ｄ ｎ ｆ ａ ｏ ｆｈ ｐ ｔ ｔ ｌｔ ｅ ｓ ｆｏ ｎ ｒ ａ ａ ｉｅ Ｘ ｅ Ｙ ｏ， ａ ｈ ｅ ｓ ａ ｏ ，ｕ ｔ ｅ ａ ｄ ｉｅ ｔ ｃ ｔ ｎ ｏ ｅ ａ ｃ ｓ ｌ ｅ ｃｌ ｒ ｍ ｏ ｌ ｌｒ ｔｌ ｒ ｏ ｕ ｉ ｉ ｉ ｉ ｅａ ｌ ｎ ｖ ／ ａ Ｐ ｎ Ｚ ｉ ￣ ， ｕ Ｈ ￣ｉ ｎ ｅ ａ ． ｈ Ｑ ｔ ｇ ｇ， ｌ １ ａ ；
ｄｓｒ ｅ ｅｒｅｅｃｓ ａｍ ｄ ｅ ｒｃｄｒ ｒｓｌｔｎａｄｃｌ ｒ ｏ ｔ ｅａ ｃｓ ｌ ｔ ｃｌ （ Ｓ ） ａ ｓ ｂｉ ｅ ｉ ｃｎｒｕａｏ ｅｃ ｂｄ ｉ ｔ ｆｒ ｅ． ｏｉ ｄｐ ｅｕｅｆ ｏａｏ ｎ ｕｔ ｅ ｆ ａ ｈｐｔ ｔｌ ｅ ｅｓＨ Ｃ ｗ ｓｅｔ ｌｈｄｗ山 ｅｔｆｇｔｎ ｉ ｎｈ ｅ ｎ ｉ ｆ ｏ ｏｉ ｉ ｕ ｒ ｉ ｅａ ｌ ａ ｓ ｌ ｉ ｏ ｉ ｌ－ ｙｒｄｎｉ ｕｈ ｎｏ ｉ ｌＨ ｐｑ ｅｐ １０３ ． ｅｕｔ ｎａｓ ｇｅｌ ｅ ｅｓｙｃｓｉ ｆ ｃ ｌ ｙａｕ （ ＝ ．５ ） Ｒ ｓ ｌ ｎ ａ ｔ ｏ Ｆ ｏ－ ｓ ｅｙ ｌ ｆ ｓ ｓ ｇｔ ｓｍ ｔ ｄｗ ｓａｏｔ１ ． １７ ｐｒ ｉｄ ｏ Ｈ Ｃ ｕｉ ｉ ｅ ｏ ａ ｂ ｕ ～１５× ０／ ｅ ｅ ｎ ｈ ｈ
大鼠移植肝内Kupffer细胞分离及对T细胞增殖的抑制效应
大鼠移植肝内Kupffer细胞分离及对T细胞增殖的抑制效应刘骅;曹晖;吴志勇【期刊名称】《外科理论与实践》【年(卷),期】2007(12)5【摘要】目的:建立分离、纯化和培养大鼠肝脏Kupffer细胞(KC)的方法,并观察KC对同种反应性T细胞增殖的影响。
方法:采用在体原位肝脏灌注结合密度梯度离心技术,进行肝移植受体大鼠肝脏KC分离、纯化和培养。
在体外实验中进一步观察KC在MLR(混合淋巴细胞反应)体系中对同种反应性T细胞增殖程度的影响。
结果:KC得率为(1.1±0.2)×107/肝,平均存活率为(93.5±1.8)%,纯度≥90%,ED-2(+)。
培养24h可见大量细胞伸展生长,呈现典型的星形或多边形。
在MLR体系中加入未经辐照的KC后,反映T细胞增殖程度的每分钟脉冲数值明显降低,且接受联合免疫治疗并长期存活的D、E两组所获得的KC对T细胞增殖有着更为明显的抑制作用。
结论:本实验成功建立了分离、纯化和培养大鼠KC的方法。
KC对同种反应性T细胞增殖具有抑制作用,尤其从接受联合免疫治疗后长期存活受体大鼠所获得的KC抑制作用更为明显。
【总页数】4页(P439-442)【关键词】肝移植;枯否细胞;T淋巴细胞,抑制效应;大鼠【作者】刘骅;曹晖;吴志勇【作者单位】上海交通大学医学院附属仁济医院普外科【正文语种】中文【中图分类】R333.4【相关文献】1.分离、鉴定与培养大鼠肝细胞、肝星状细胞和Kupffer细胞 [J], 蔡伟祥;方建凤;庄伟;李玉梅;2.大鼠肝贮脂细胞Kupffer细胞的分离,培养和鉴定 [J], 高春芳;孔宪涛3.分离、鉴定与培养大鼠肝细胞、肝星状细胞和Kupffer细胞 [J], 蔡伟祥;方建凤;庄伟;李玉梅4.大鼠肝贮脂细胞及Kupffer细胞的分离培养和鉴定 [J], 高春芳;孔宪涛5.Kupffer细胞Fas配体的表达及其对移植肝内淋巴细胞的杀伤作用 [J], 涂兵;梁绍勇;陈勇;龙飞伍;彭勇;刘作金;徐明清;严律南;龚建平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
肝星状细胞分离培养及鉴定的试验方案
肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）分离培养及鉴定的试验方案【试验原理】在用循环灌注法去除肝胶原组织后,根据HSC内含富含脂滴,密度较轻,它与肝脏内其它细胞在不同密度的离心液中有不同的浮密度的原理,采用密度梯度离心方法(连续性和非连续性两种)使HSC存在于一高度提纯的区带中而得以分离。
【试验动物】雄性清洁级Sprague-Dawsey大鼠（购自浙江省实验动物中心,合格证号：）,体重400～500g,常规饲料喂养,正常饮水,在分离HSCs前2周每天Vitamin A以200IU/100g灌胃。
【试剂与仪器】主要试剂Ⅳ型胶原酶、链霉蛋白酶(Pronase E)、Nycodenz均为美国Sigma公司产品,DNA酶I(Dnase I)、DMEM培养干粉(高糖型)为Gibco公司产品,鼠抗人Desmin 抗体SP试剂盒为福州迈新生物工程公司产品,其它试剂均为国产分析纯试剂。
主要仪器设备蠕动恒流泵、超净工作台(2台)、电子分析天平、超速低温离心机、二氧化碳培养箱、多功能动物手术台等。
【试验方法】1、肝星状细胞的分离制备1）肝星状细胞的分离采用改良的Friedman方法,大鼠术前禁食12～16h,自由饮水。
2）用1％戊巴比妥钠40mg/kg 腹腔内注射麻醉大鼠。
3）胸腹部皮肤消毒,移入超净工作台中。
沿腹部正中线剪开腹腔,分离下腔静脉及门静脉,在门静脉距肝外10mm处用眼科剪斜形剪一小口,迅速插入自制血管插管,结扎固定。
4）接通恒流蠕动泵,灌注预热37℃的D-Hank’s肝脏灌流液,剪开下腔静脉,此时可见灌流液自下腔静脉流出,肝脏逐渐饱满,由紫红色逐渐变成淡黄白色。
5）游离肝脏,保留下门静脉血管插管及下腔静脉的标志缝线。
将游离之肝脏置于平皿中,灌注预热37℃的含酶Hank’s液I(含0.05％的胶原酶、0.1％链霉蛋白酶溶液并调PH 7.35),并将灌注系统进液端放入平皿中,使流出的酶液可进行循环灌流,可见肝脏变软无弹性,肝包膜下出现小液泡。
建立一种改良方法分离大鼠肝星状细胞
（ｅｔｆＧ ｓｒ ｎｅｏｏｙ ｈ ｆ ｌｔｄＫ ｎ ａＨｏ ｉｌ Ｋ ｎ ｎ ｄｃ ｎｖｒｉ ， Ｄｐ． ａｔ ｅｔｒｌ ，ＴｅＡｆ ｉｅ ｕ ＂ ｓ ｔ ｕｍｉ Ｍｅｉ Ｕ ｉｅ ｔ ｏ ｏ ｇ ｉａ Ｈｕ ｐ ａｏ ｆ ｇ ｌ ａ ｓｙ
Ｋ ｎ ｉｇＹ ｎ ａ ５ ０ ２ ｈｎ ） ｕ ｍ ｎ ｕ ｎｎ６ ０ ３ ，Ｃ ｉａ
传代后 ＞ ５ ９％．结论
Ｈ Ｃ得率和纯度． Ｓ
肝脏离体后消化 能达 到在体消化 同样 的效果 ，应用 Ｎ ｃｄｎ 密度 分离介质可获得满 意的 ｙｏｅｚ
［ 关键词］分离 ；大鼠；肝星状细胞
【 中图分类号］Ｒ ７ ． ［ ５ ５ 文献标识码］Ａ ［ ２ 文章编号］１０ —４ ０ （０ ２ ６ ０ ８— ４ ０ ３ ７ ６ ２ １）０ —０ １ ０
ｓ ｐ ｌｍｅ ｔ ｄ ｗｉ ｆ ｔｌ ａｆ ｅ ｕ ｎ ｅ ７ ｃ ｎ ａｎ ｄ ５ ＣＯ ９ ％ ａｒｉ ｃ ｂ ｔ ｒ Ｒｅ ｕｔ Ｔ ｅ ｈ ｒ ｅ ｔ ｕ ｐ ｅ ｎ ｅ ｔ ｌ ％ ｅ ａ ｃ ｌ ｓ ｒ ｍ ｕ ｄ ｒ ３ ℃ ｏ ｔｉ ｅ ％ ｈ ０ ， ５ ｉ ｎ ｕ ａｅ ． ｓ ｌ ｓ ｈ ａ ｖ ｓ
昆明医科 大学学报
２ １ ，６） １ ～２ ０ ２ （ ：８ ０
ＣＮ 一 ｌ ４９ ５３ ０ ／Ｒ
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＫｕ ｍ ｉｇ Ｍ ｅ ｉａ ｉｅ ｓｔ ｏ ｒ ａ ｎ ｎ ｄｃ ｌＵｎ ｖ ｒｉｙ ｏ
建立一种改 良方法分离大 鼠肝星状细胞
李 玉莲 ，宋 正 己 ，范 红 ，彭 伟 ，陈艳敏 ，万 苹 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 昆明 医科 大 学 附属 昆华 医院 消化 内科 ，云 南 昆明 ６０ ３） ５０２
ｉ ｍｍｕ ｏ ｕ ｒｓ ｅ ｃ ｔｉｉｇ ｉｅ ｔ ｅ ｎ ｓａ ｅ ｕ ｉ ｆＨＳ ． ＨＳ ｅｅ ａｔ ａｅ ｙ ｃ ｌ ｒ ｎ ｕ ｃ ａｅ ｎ ｆ ｏｅｃ ｎ ｅ ｓａｎｎ ｄ ｎｉ ｄ ａ ｄ ａ ｓｙ ｄ ｐ ｒｔ ｏ Ｃ ｌ ｉ ｆ ｙ Ｃ ｗ ｒ ｃｉ ｔｄ ｂ ｕｔ ｅ ｏ ｎ ｏ ｔｄ ｖ ｕ
TGF-β1诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6活化及上皮间质转换
细胞存 活 率 ； Ｔ Ｇ Ｆ ／ ３ １刺 激 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６后 ， 细胞 拉 伸 ， 伪足 增 多呈 星形 ， 细 胞 间连 接 疏松 ， 呈 显著 活 化状 态 ； Ｆ — ａ ｃ ｔ ｉ ｎ 聚集 形成 应 力纤 维丝 ， 沿细胞长轴分布 ； 实验 组 ｏ ／ ． ． Ｓ ＭＡ ｍＲ Ｎ Ａ及 ｖ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｉ ｎ ｍＲ Ｎ Ａ的 表 达 量 明 显 高 于 对 照 组 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 而 Ｅ — ｃ ａ ｄ ｈ ｅ ｒ ｉ ｎ ｍＲ ＮＡ的表达 量 明显 降低 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） ； 在不 同浓 度 的 Ｔ Ｇ Ｆ — ｐ １呈剂 量依 赖性 致仪 一 Ｓ ＭＡ 及 Ｎ． ｃ ａ ｄ ｈ ｅ ｒ ｉ ｎ和 ｖ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｉ ｎ的蛋 白表 达 量增 多 ， 而Ｅ — ｃ ａ ｄ ｈ ｅ ｒ ｉ ｎ 的 蛋 白表 达 量 减 少 。结 论 Ｔ Ｇ Ｆ ． ３ ／ １可 诱 导 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６ 活 化及 上皮 间质转 换 。
研 究 论 文
Ｔ Ｇ Ｆ — ｌ ３ １ 诱 导 大 鼠肝 星状 细胞 系 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６活化 及 上皮 间质转 换
王丽惠 ，程 变巧 ，朱 琪 ，林 伟 国
（ １ ． 厦 门大学 医学院 ， 福建 厦门 ３ ６ １ １ ０ ０ ； ２ ． 厦 门大学附属福州第二 医院 肝胆 内科 ， 福建 福州 ３ ５ ０ ０ ０ ７ ）
摘要 ： 目的 探讨转化生长因子－ Ｂ １ （ Ｔ Ｇ Ｆ 一 １ ３ １ ） 在大鼠肝星状细胞系（ Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６ ） 活化及上皮间质转换（ Ｅ Ｍ Ｔ ） 中
的作用 。方 法 体 外 培养 ＨＳ Ｃ － Ｔ ６， 用 ＭＴ Ｔ法 筛选 Ｔ Ｇ Ｆ — ｐ １对 Ｈ Ｓ Ｃ — Ｔ ６作 用 的最 佳 浓度 ； 用 １ ０ ｇ ／ Ｌ Ｔ Ｇ Ｆ — Ｂ １处 理 ＨＳ Ｃ — Ｔ ６ ２ ４ ｈ ， 相差 倒置 显微 镜 下观 察细 胞形 态 改变 ， 免疫 荧 光染 色法 检 测细 胞 骨架 结 构 Ｆ ・ ａ ｃ ｔ ｉ ｎ蛋 白的 表
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ｓｉ Ｔ ｅｈｒｅｔ ａ ｆ ｅａ ｃｓ ｌ ｔ ｃＵ ｉ （ ． ｕｔ ｓ ｈ ａ ｓ ｒｔ ｏ ｐｔ ｔ ａ ｅ ｓ ｌ ３ ２±０ ６ ）×１‘ｃｌ ｅ ｖｒａｄｖａｉｔ ａ ａ ｏｅ ｖ ｅ ｈ ｉ ｅ ｅ Ｗｌ ｓ ．７ ０ ｅ ｓ ｒ ｉ ｉ ｌｙ ｒ ｅｗ ｓｍ ｒ ｐ ｌｅ ｎ ｂｉ ｔ
１ｔｄ ｂ ｖ ｒ ｐ ｆｕ ｉｎ ｗ ｔ ｒｎ ｓ ｄ ｃ ｌ ｇ ｎ ｓ ￣ ｗ ｄ ｂ ｅ ｓｔ ｒｄ ｅ ｔ ｅ ｔ ｆ ｇ ￣ ｎ ｗ ｔ ｃ ｄ ｎ Ｒｅ ａｅ ｙ ｌ ｅ ｅ ｓｏ ｉ ｐ ｏ ａ ｅ ａ ｏｌ ｅ ａ ｅ ｆ ｏ ｅ ｙ ｄ ｎ ｉ ｇａ ｉｎ ｎ ｒ ｕ ａ ｏ ｈ Ｎｙ ｏ ｅ ｚ ｉ ｈ ｎ ａ ｏ ｙ ｃ ｉ ｉ －
肝星状细胞的方法。
该 法是 一种较理想 的分离
［ 关键词 】 肝星状 细胞 ； 细胞分离 ； 肝纤维化 ［ 中图分类号 ］ Ｒ ５５ ［ ７ 文献标识码 ］ Ａ ［ 文章编号 ］ １７ ３ ０ （０ ０ １ ６ ４— ８６ ２ １ ）２—１５ ０ １７— ４
ｄｉ１ ．９９ ｊｉ ｎ １７ ３ ０ ．００ １ ． １ ｏ：０ ３６ ／． ｓ．６ ４— ８ ６２ １ ．２ ０ ｓ
Ａ ｅｉｂｅｍｅｈ ｄ ｆｒ ｔ ｅｉｏａｉｎ ａ ｄ ｃ ｌ ｒ ｆｒ ｔｈ ｐ ｔ ｔｌ ｔ ｅｌ Ｚ ｔ ＮＧ Ｇ ｏ，ＨＵ ＮＣ ｕ ｒ ｌ ｌ ｔ ｏ ｏ ｈ ｌｔ ｎ ｕｔ ｅ ｏ ａ ｅ ａ ｃ ｓｅｌ ｅ ｃ ｌ ａ ｓ ｏ ｕ ｉ ａ ｓ ｔＡ ｕ Ａ Ｙｎ ，
通讯作者 ：张法灿（ ９８一）男 ， １５ ， 教授 ， 主任医师 ， 硕士生导师 ， 研究方向 ： 消化系统疾病的基础与临床研究。Ｅ ｍ ｉ： ａｇ ｅｎ ２ ．ｏ － ａｌｚ ｎ ｆ ａ ＠１６ ｃｒ ｈ ａ ｎ
［ 摘要］ 目的 探 讨一种高效 、 济 、 经 稳定 的肝 星状细 胞的分 离方法 ， 肝纤 维化 研究 提供 细胞模 型。 为 方法 应用链霉蛋 白酶 、 胶原酶灌 流 ， Ｎ ｃｄｎ 为 分离介质 ， 以 ｙｏｅｚ 采用密度梯 度离心法分 离大 鼠的肝星状 细胞 。 结果 肝星状细胞的获得率为 （ ． ０ ６ ）×１ 只、 ３ ２± ．７ ０／ 存活率为 ９ ％以上。结论 ０
ｇｏ ｉｎ，Ｎａ ｎ ｎ ３ ０ １ Ｃ ｉａ ｎ ｉｇ ５ ０ ２ ， ｈ ｎ
［ ｂ ｔａｔ Ｏｂｅｔ ｅ ｏｄ ｖｌｐａｐ ｕ ｔｅ ｉｅｐｎｉ ｎ ａｌ ｍ ｔｏ ０ ｔｅｉ ｌ ｏ ｎ ｕｔｒ Ａ ｓ ｃ］ ｒ ｊｃ ｖ Ｔ ｅｅ ｍｄ ｅｖ ， ｘｅｓ ｅａｄｓ ｂｅ ｅ ｄｆ ｏ ｔ ｎａｄｃｌ ｅ ｉ ｏ ｉ ｎ ｖ ｔ ｈ ｒｈ ｓ ａ ｉ ｕ
ｚ Ａ Ｇ Ｆ 一 ｎ ｅ ａ．Ｄｐ ｒ ｅｔｏ ａｔ ｅｔｏ ｇ ｔｅＰ ｏｌ’ ｏ ｉ ｌ ｕ ｎｘ ｈａ ｇ Ａ ｔｎｍ ｕ ｅ Ｈ Ｎ 口ｃ ， ｔ １ ｅａｔ ｎ Ｇ ｓ ｏｎｅ ｌ ｙ． ｈ ｅ ｅ Ｓ ｓ ｔ Ｇ ａ ｇ ｉ ｕ ｎ ｕｏｏ ｏｓＲ — ａ ｍ ｆ ｒ ｒｏ ｐ Ｈ ｐａｏ ｆ Ｚ
［ ｙｗ ｒｓ Ｈｅａ ｃｓ ｌ ｔ ｃＵ Ｈ Ｃ ） Ｃ ｌｉ ｌ ｏ ； Ｈ ｐｔ ｂｏｉ Ｋｅ ｏ ｄ ］ ｐｔ ｔｌ ｅ ｅ ｓ（ Ｓ ｓ ； ｅ ｏ ｔ ｎ ｉ ｅ ａ ｌｓａ ｉ ｅａｉ ｆ ｒｓ ｃｉ ｓ
自 １８ ９２年 Ｋ ｏｋ等…首次成功分离出肝星状 ｎｏ
细胞 （ ｅａｃｓ ｌｔ ｃｉ ， Ｓ ｓ 以来 ， 来 越 多 的 ｈｐｔ ｔｌｅ ｅｓＨ Ｃ ） ｉ ｅａ ｌ 越 资料证 实 ， Ｓ ｓ 肝纤 维化 进 程 的关键 细胞 － 。在 Ｈ Ｃ乃 ２ ］ 慢 性肝炎 病毒 、 酒精 、 物等 一种 或多 种慢 性损 伤刺 毒 激下 ， 静止 的 Ｈ Ｃ 活化 、 殖 并产 生大 量 的细胞 外 Ｓｓ 增
ｈ ｎ ９ ％ Ｃｏ ｃ ｕ ｉ ｎ ｔ ａ ０ ． ｎ ｌ ｓｏ Ｔ ｉ ｔ ｏ ｓ ａ ｄ ａ ｐ ｏ ｒｔ ｅ ｉｏ ｈ ｉ ｎ ｉ ｅ ｌｏ ｔ ｎ ｆ ｈ ｓ ｌｔ ｎ ｕｔ ｅ ｏ ａ Ｃｓ ｄ ｉ ｏ ｏ ｕ
中国临床新医学 ２ １ 年 ００
１月 ２
第 ３卷 笫 １ 期 ２
・１ ５ ・ １７
一
种 可 靠 的 大 鼠肝 星状 细 胞 分 离及 培 养 方 法
张 国， 黄俊娟 ， 张法灿 ， 刘 斐 ， 陈兴 洲 ， 梁列新
基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目（ 编号 ：０ ６ １５ ；人社部资助 留学人员 科技活动择 优项 目（ ３ ９０ ４ ） 编号 ：０ ９ ３ ；广西 自然科学基 ２００ ） 金资助项 目（ 编号 ：１５ ３ ） ０ ３ ０ ５ ；广西卫生厅 重点科研课题 （ 编号： 桂卫重 ２０ ５ ） ０９８
作者单位 ： ３０１ 南宁 ， ５０２ 广西壮族 自 区人 民医院消化内科（ 治 张
作者简介 ：张
国， 张法灿 ， 梁列新 ） ４０６ 湖北 ， ； ３００ 武汉大学人 民医院 （ 黄俊娟 ） ；
斐， 陈兴洲 ）
５ ０ ２ 南宁 ， ３０ １ 广西壮族 自治区人民医院科研实验 中心 （ 刘
国（ ９９一 ， ， １ ６ ） 男 博士 ， 主任医师， 研究方 向： 慢性肝病的基 础与临床研究 。Ｅ ｍ ｉ ｚａ ｇｕｇ＠ｈｔ ａ ．ｏ － ａ ： ｎｇ ｏ ｌｈ ｘ ｏ ｉｃ ｍ ｌ ｍ
ｏ ｔ ｅ ａｃｓ ｌ ｔ ｅＵ ＨＳ ｓ ８ａｃｌｍ ｄｌ ｒ ｅｓ ｄｅ ｆ ｅ ａｃｆ ｒ ｉ Ｍｅ ｏ ｓ ａ Ｈ Ｃ ｅ Ｏ ｆ ａ ｈｐｔ ｅ ａ ｅｓ（ Ｃ ）ａ ｅｌ ｏ ｅ ｆ ｔ ｉｓ ｐｔ ｂｏ ｓ ｔ ｄ Ｒ ｔ Ｓ ｓ ｒ ｉ ． ｒ ｉ ｔｌｅ ｔ ｕ ｏ ｈ ｏｈ ｉ ｉ ｓ ． ｈ ｗ ｅ Ｓ