重组乙肝疫苗汉逊酵母的介绍ppt课件
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重组乙型肝炎疫苗ppt课件
个月及6个月后注射第2、3针;其他人群免 疫程序为第0、1、6个月，剂量均为5ug/支。
疫苗制备
• 取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代
扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜 温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗 提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处 理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞 作为防腐剂。 取国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培 养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到 每1.0mg/L时，收获培养液，经硫酸铵盐析，2～3次密度 梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭 活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。
•
简介
• 重组乙型肝炎疫苗是由重组酵母或重组
CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原， 经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者 为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组 CHO乙型肝炎疫苗。其性状为白色混悬液， 静置形成可摇散的沉淀。
疫苗用法
• (2)注射部位为上臂三角肌肌内。 • (1)本疫苗注射时要充分摇匀。 • (3)新生儿第1针在出生后24小时内注射，1
持9-10年，国产重组乙肝疫苗（主要为酵母疫苗） 的免疫效果和免疫持久性如何，是人们关心的重 点。因为乙肝病毒缺乏易感动物模型，乙肝疫苗 的免疫效果考核只能应用人体考核来评价，既往 研究证明应用乙肝苗阻断HbsAg、HbeAg双阳性 母亲的新一儿传播HBV是评价乙肝疫苗的效力的 最直接指标，且1-10岁儿童对乙肝疫苗反应较好。 我们选择新生儿和儿童作为疫苗考核对象，进行 国产酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究。阶 段结果报告如下：
重组乙型肝炎疫苗
背景
• 乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性
重组乙肝疫苗(汉逊酵母)的介绍
重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞ຫໍສະໝຸດ 4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
2. 乙肝疫苗的发展： 第一代乙肝疫苗
（血源性乙肝疫苗）
第二代乙肝疫苗 （基因工程疫苗）
cho细胞乙肝疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫苗 （第一代重组酵母乙肝疫苗 ） 重组汉逊酵母乙肝疫苗 （第二代重组酵母乙肝疫苗）
3.汉逊酵母为甲基营养型酵母，基因组易操作，培养基廉价，有分泌型表达模式，正确的 折叠和修饰，产量理想，发酵液产出杂蛋白少，产物易于纯化，无热源和其他病原体，安 全性好
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
9.用丁基琼脂糖进行疏水层析，纯化后的抗原用硫氰酸盐处理以 完成二硫键的交联
10. 再与氢氧化铝共沉淀，此时抗原吸附在氢氧化铝上
乙肝疫苗生产发展简介PPT
基因工程技术
01
利用基因工程技术，提高疫苗的产量和纯度。
新型佐剂的研发
02
开发新型佐剂，增强疫苗的免疫原性。
细胞培养技术
03
利用细胞培养技术，实现疫苗的连续生产。
疫苗生产的国际化合作与交流
国际合作项目
参与国际合作项目，共 同研发和推广乙肝疫苗 。
技术交流与转让
加强技术交流与转让， 促进疫苗生产的国际合 作。
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
新疫苗的研发方向
1 2
新型疫苗的研发
针对乙肝病毒变异株，研发更有效、更安全的疫 苗。
联合疫苗的研发
将乙肝疫苗与其他疫苗结合，减少接种次数，提 高接种率。
3
免疫策略的优化
研究更合理的免疫接种程序，提高疫苗的保护效 果。
疫苗生产技术的创新与突破
乙肝疫苗的重要性
控制乙肝传播
乙肝疫苗是预防HBV感染的最有 效方法，通过接种疫苗可以降低 感染风险，控制乙肝的传播。
预防慢性肝炎
接种乙肝疫苗可以预防慢性肝炎 的发生，避免因感染HBV而导致 的长期健康问题。
提高人口素质
乙肝疫苗的接种可以保护广大人 群，特别是儿童和青少年，提高 人口素质和健康水平。
乙肝疫苗生产发展简介
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
汇报人：可编辑 2024-01-11
• 乙肝疫苗的起源与背景 • 乙肝疫苗的生产技术 • 乙肝疫苗的生产现状 • 乙肝疫苗的未来发展 • 乙肝疫苗的安全性与监管
目录
CONTENTS
01
乙肝疫苗的起源与背景
中国疫苗生产现状
疫苗和乙肝疫苗相关知识简介ppt课件
乙肝小常识
1、3、5三项 同时是阳 性，就叫 “大三阳”； 1、4、5三项 同时是阳 性，就叫 “小三阳”。
5.核心抗原
4.e抗体
3.e抗原 2.表面抗体 1.表面抗原
7.乙肝疫苗注射注意事项
肝炎患者以及发热、急性传染病者，严重慢 性病患者，有免疫缺陷的人、严重过敏体质者和
正在使用免疫抑制剂的人不可接种乙肝疫苗。
谢 谢 ！
一般安全可靠，很少有不良反应。极个别人 可能有中、低度发热，或注射部位微痛，这种疼 痛与疫苗中含有的吸附剂有关。这些轻微反应一 般在24小时内消失。 注射疫苗侧上臂避免剧烈运动。
8.乙肝疫苗发展前景
我国已将乙肝疫苗纳入计划免疫中，新生儿均 应在出生后24小时内接种乙肝疫苗。 乙肝疫苗的趋势是由预防性疫苗向治疗性疫苗 发展。 每年我国在乙肝治疗方面的医疗支出是300 亿—500亿，目前我国有乙肝病毒携带者1.2亿多， 患者超过3000万，而仅有19%的患者接受以抗病 毒为主的方法进行治疗，因而治疗性乙肝疫苗一 旦研制成功并应用，面对的将是个庞大的市场。
2.我国乙肝现状
4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 3.8
乙肝携带者统计
1.2
乙肝携带者
全世界
中国
3.正确对待乙肝患者和携带者
乙肝病毒携带者 相同点 携带乙肝病毒 乙肝患者 携带乙肝病毒
肝病症状
肝功能 是不是病人 如何应对
没有
正常 不是；一般难以发病，保持良好心 态，80%-90%可平安一生。 健康生活，注意肝脏保护；定期检 查肝功能，不需要治疗。
无保护的性行为传播：乙肝病毒可以通过精液和阴道 分泌物进行传播。
5.乙肝疫苗
切断乙肝病毒传播的有效途径 2.10%
基因工程乙肝疫苗ppt课件
接种第三针。为达到最佳的效果，应按时全程接种。
接种乙肝疫苗的人群
• 处于HBV感染高度危险状态的易感者（未 感染过HBV的人）应接种乙肝疫苗。主要 包括： ①全部新生儿及幼儿园未接种过 乙肝疫苗的孩子； ②传染科、口腔科、 血液室、透析室和经常接触血液的工作 人员； ③新加入某一群体的人员，如新 入伍的战士、新入学的大学生； ④从事 食品服务行业者及保育工作人员； ⑤发 育障碍者，收容所中的患者和工作人员 ； ⑥血液透析患者； ⑦使用血液制品 者； ⑧器官移植前的患者；需长期应用 免疫抑制剂者； ⑨乙肝病毒携带者的家 庭接触者； ⑩注射毒品成瘾者；长期教 养机构中的犯人。
Bye bye~
部专门下发57号文件，具体部署用基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝疫
苗事宜。
乙肝疫苗的制备
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取
一般的目的基因的获取方法有：
反转录法 化学合成法
反转录—聚合酶链反应法
工程菌的构建
CHO(中国仓鼠卵巢）细胞的特点 ①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、 理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子 ②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化; ③具有重组基因的高效 扩增和表达能力; ④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进行 悬浮培养 ,表达fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利 于外源蛋白的后分离
自身无法克服的缺点：
•
其一，乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒，在此情况下，
再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料，对携带者的身体健康有损害；
•
其二，疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血浆来源和质量
乙肝疫苗接种指南PPT课件
接种部位：乙肝疫苗一般选择 上臂三角肌或臀部进行接种。
乙肝疫苗接种指南
副作用和注意事项：乙肝疫苗接种一般 是安全的，但可能会出现轻微副作用， 如注射部位疼痛、发红等。过敏反应和 严重不良反应较为罕见。
乙肝疫苗接种 的好处
乙肝疫苗接种的好处
预防乙肝感染：乙肝疫苗接种 可有效预防乙肝病毒感染，降 低患乙肝的风险。
- 新生儿：应在出生后24小时内接种 第一剂乙肝疫苗。
- 婴儿和儿童：应按照规划疫苗接种 日程表接种乙肝疫苗。
- 青少年和成人：未感染乙肝病毒的 人应接种乙肝疫苗以预防感染。
- 其他高风险人群：如医务人员、性 伴侣是乙肝病毒携带者的人等。
乙肝疫苗接种指南
接种次数和剂量：一般需接种3 剂乙肝疫苗以建立有效免疫， 接种间隔时间为0、1和6个月。
阻断病毒传播：接种乙肝疫苗 有助于阻断乙肝病毒的传播链 ，减少病毒在社区中的传播。
乙肝疫苗接种的好处
保护肝脏健康：乙肝病毒感染会导致肝 脏疾病，接种乙肝疫苗可以保护肝脏健 康，预防严重后果的发生。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
谢谢您的观 赏聆听
乙肝疫苗接种 指南PPT课件
目录 引言 乙肝疫苗接种指南 乙肝疫苗接种的好处
引言
引言
乙肝疫苗接种的重要性：乙肝 是一种严重的传染病，疫苗接 种是预防乙肝的最有效方法之 一。
本PPT旨在向用户介绍乙肝疫苗 接种的指南和注意事项。
乙肝疫苗接种 指南
乙肝疫苗接种指南接 的种 人对 群象 ，： 特乙 别肝 是疫 以苗 下适 人用群：于所有年龄段
乙肝疫苗接种指南
副作用和注意事项：乙肝疫苗接种一般 是安全的，但可能会出现轻微副作用， 如注射部位疼痛、发红等。过敏反应和 严重不良反应较为罕见。
乙肝疫苗接种 的好处
乙肝疫苗接种的好处
预防乙肝感染：乙肝疫苗接种 可有效预防乙肝病毒感染，降 低患乙肝的风险。
- 新生儿：应在出生后24小时内接种 第一剂乙肝疫苗。
- 婴儿和儿童：应按照规划疫苗接种 日程表接种乙肝疫苗。
- 青少年和成人：未感染乙肝病毒的 人应接种乙肝疫苗以预防感染。
- 其他高风险人群：如医务人员、性 伴侣是乙肝病毒携带者的人等。
乙肝疫苗接种指南
接种次数和剂量：一般需接种3 剂乙肝疫苗以建立有效免疫， 接种间隔时间为0、1和6个月。
阻断病毒传播：接种乙肝疫苗 有助于阻断乙肝病毒的传播链 ，减少病毒在社区中的传播。
乙肝疫苗接种的好处
保护肝脏健康：乙肝病毒感染会导致肝 脏疾病，接种乙肝疫苗可以保护肝脏健 康，预防严重后果的发生。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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乙肝疫苗接种 指南PPT课件
目录 引言 乙肝疫苗接种指南 乙肝疫苗接种的好处
引言
引言
乙肝疫苗接种的重要性：乙肝 是一种严重的传染病，疫苗接 种是预防乙肝的最有效方法之 一。
本PPT旨在向用户介绍乙肝疫苗 接种的指南和注意事项。
乙肝疫苗接种 指南
乙肝疫苗接种指南接 的种 人对 群象 ，： 特乙 别肝 是疫 以苗 下适 人用群：于所有年龄段
重组乙型肝炎疫苗(乙肝疫苗)
重组乙型肝炎疫苗（乙肝疫苗）【预防的疾病】乙肝疫苗可以预防乙型病毒性肝炎。
【种类】乙肝疫苗有重组乙肝疫苗（酿酒酵母）、重组乙肝疫苗（汉逊酵母）和重组乙肝疫苗（CHO细胞）3种。
【接种对象】主要为新生儿。
【免疫程序】共接种3剂次，其中第1剂在新生儿出生后24小时内接种，第2剂在1月龄时接种，第3剂在6月龄时接种。
【禁忌】（1）已知对该疫苗的任何成分，包括辅料以及甲醛过敏者；（2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者；（3）患未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
【注意事项】（1）接种疫苗之前，应如实向预防接种医生告知儿童身体健康状况。
若有感冒、发热等症状，待恢复健康后进行补种；（2）接种疫苗后，须在预防接种单位留观至少30分钟。
若儿童出现轻度发热等一般反应，通常不需任何处理。
若高烧不退或伴有其他并发症者，应及时到医院就诊。
1. 疾病概况乙肝是由乙肝病毒感染引起的传染病。
传染源为乙肝病人和乙肝病毒携带者。
主要通过血液、性接触和母婴传播。
人群对乙肝病毒普遍易感，感染结局与感染乙肝病毒时的年龄有关，年龄越小，转为慢性乙肝的可能越大。
约80%～90%的围生期感染者、30%的＜6岁儿童感染者可转为慢性乙肝，成人感染乙肝病毒后转为慢性乙肝的比例＜10%。
有15%～25%的慢性乙肝患者可发展为肝硬化和原发性肝细胞癌而导致死亡。
2. 主要症状乙肝发病比较隐匿，临床上常表现为低热、乏力、食欲减退、恶心、呕吐、厌油、腹胀、肝区疼痛，可出现巩膜黄、尿黄如茶水样等黄疸症状、轻度发热等。
重症者可能发展为肝硬化和原发性干细胞癌，甚至导致死亡。
3. 治疗原则乙肝治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎和抗氧化、抗纤维化和对症治疗，其中抗病毒治疗是关键。
只要有适应证，且条件允许，就应到专科医院和专科门诊进行规范化的治疗。
乙肝病毒携带者需定期随访。
4. 预防措施接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效措施。
目前对新生儿实行免费接种乙肝疫苗，在0、1、6月龄各接种1剂。
乙肝疫苗课件
免疫效果
母婴阻断
未同时使用HBIG，保护效果为95% 同时使用HBIG，保护效果达98%
青少年和成人
大于95%受种者
无应答和低应答 是否加强免疫 是否要筛查 孕妇 早产儿 意外暴露后
参考文献
夏宪照 罗会明. 《实用预防接种手册》.
谢谢！
接种部位为上臂三角肌肌内注射 不同国家生产的疫苗对注射对象的年龄要求不同
接种对象
免疫程序
3剂（第0、1、6个月） 血液透析者4剂（第0、1、2、6个月） 16岁以上人群有HepB接种史
≤10mlIU/ml 全程基础免疫 10~100mlIU/ml 加强1剂20ug ≥100mlIU/ml 不接种
国产HepB 啤酒酵母 CHO 汉逊酵母
进口HepB 啤酒酵母（安在时） 汉逊酵母（益可欣）
剂量和用法
啤酒酵母 CHO 汉逊酵母 进口HepB
新生儿和＜19岁 ≥19岁每次1.0ml 每次0.5ml（5ug） （10ug） ≤15岁每次1ml ＞15岁每次1ml （10ug） （20ug） 婴儿和成人每次均为0.5ml（10ug） ≤15岁每次0.5ml （10ug） ＞15岁每次1.0ml （20ug）
禁忌症
患急性或慢性严重疾病者 对疫苗已知的任何成分过敏者 发热暂缓接种
接种反应
一过性疼痛10%-20% 低热1.8% 上呼吸道症状1-2% 胃肠道症状1% 偶合晚发性维生素K缺乏 症（2周-3月龄新生儿）
注意事项
HepB不应皮下或皮内注射 HIV感染、血透和免疫缺陷的患者，初种后要 追加接种
乙肝疫苗生产发展简介 PPT
苗）。1995年停产。
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
《乙肝疫苗接种》课件
乙肝疫苗接种后产生的免疫力并不是终身的，需要定期加强接种。
根据世界卫生组织的建议，一般人群在完成三剂乙肝疫苗接种后，不需 要进行后续的加强接种。
但对于一些高风险人群，如医务人员、经常接触血液或体液的人员等， 可能需要定期接受乙肝抗体检测，并在抗体水平降低时进行加强接种。
05
总结与展望
乙肝疫苗接种的成果与经验总结
THANKS
感谢观看
乙肝疫苗接种的成果
通过广泛的乙肝疫苗接种计划，全球范围内乙肝感染率显著下降，避免了大量慢性乙肝病例的出现， 有效保护了公众健康。
乙肝疫苗接种的经验总结
成功的乙肝疫苗接种计划需要政府、医疗机构、社区和家庭的共同努力，同时也需要持续的监测和评 估，不断完善接种策略。
乙肝疫苗接种的未来发展方向与展望
未来发展方向
保险获得部分或全部报销。
乙肝疫苗接种是否安全？
乙肝疫苗是一种安全有效的预防乙肝 病毒感染的疫苗。
然而，像任何疫苗一样，乙肝疫苗也 存在一些可能的副作用，如局部疼痛 、红肿、发热、头痛等，但这些反应 通常是轻微且短暂的。
经过严格的临床试验和长期使用，乙 肝疫苗被证实对大多数人都是安全的 。
乙肝疫苗接种后是否可以终身免疫？
乙肝病毒携带者常常没有明显 的症状，因此容易传播病毒而 不自知。
乙肝疫苗接种的意义
乙肝疫苗接种是预防乙肝病毒感染的有效手段，通过接种疫苗可以产生抗体，从而 避免感染乙肝病毒。
乙肝疫苗的接种可以降低感染率，控制乙肝的传播，保护易感人群，特别是儿童和 青少年等高危人群。
乙肝疫苗的接种还可以降低肝硬化和肝癌等疾病的发生率，提高人民的健康水平。
确保每个接种对象只接受一次乙肝疫 苗接种。
观察接种反应
接种后观察30分钟，无异常反应方可 离开。
根据世界卫生组织的建议，一般人群在完成三剂乙肝疫苗接种后，不需 要进行后续的加强接种。
但对于一些高风险人群，如医务人员、经常接触血液或体液的人员等， 可能需要定期接受乙肝抗体检测，并在抗体水平降低时进行加强接种。
05
总结与展望
乙肝疫苗接种的成果与经验总结
THANKS
感谢观看
乙肝疫苗接种的成果
通过广泛的乙肝疫苗接种计划，全球范围内乙肝感染率显著下降，避免了大量慢性乙肝病例的出现， 有效保护了公众健康。
乙肝疫苗接种的经验总结
成功的乙肝疫苗接种计划需要政府、医疗机构、社区和家庭的共同努力，同时也需要持续的监测和评 估，不断完善接种策略。
乙肝疫苗接种的未来发展方向与展望
未来发展方向
保险获得部分或全部报销。
乙肝疫苗接种是否安全？
乙肝疫苗是一种安全有效的预防乙肝 病毒感染的疫苗。
然而，像任何疫苗一样，乙肝疫苗也 存在一些可能的副作用，如局部疼痛 、红肿、发热、头痛等，但这些反应 通常是轻微且短暂的。
经过严格的临床试验和长期使用，乙 肝疫苗被证实对大多数人都是安全的 。
乙肝疫苗接种后是否可以终身免疫？
乙肝病毒携带者常常没有明显 的症状，因此容易传播病毒而 不自知。
乙肝疫苗接种的意义
乙肝疫苗接种是预防乙肝病毒感染的有效手段，通过接种疫苗可以产生抗体，从而 避免感染乙肝病毒。
乙肝疫苗的接种可以降低感染率，控制乙肝的传播，保护易感人群，特别是儿童和 青少年等高危人群。
乙肝疫苗的接种还可以降低肝硬化和肝癌等疾病的发生率，提高人民的健康水平。
确保每个接种对象只接受一次乙肝疫 苗接种。
观察接种反应
接种后观察30分钟，无异常反应方可 离开。
重组乙型肝炎疫苗概述
重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）
3. 原液的制备 • 发酵：锥形瓶、种子罐、生产罐三级发酵 • 纯化：细胞破碎（Triton X-100） 、硅胶吸附、
疏水色谱纯化、硫氰酸盐处理、稀释、过滤除菌 • 保存：2-8 ℃，不超过3个月
重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）
4. 半成品的制备 • 甲醛处理：100μg/ml • 铝吸附 • 配制：与铝佐剂等量混合 5. 成品的制备 • 分批、分装及冻干后包装
重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）
（二）检定要求
1. 原液检定 • 特异蛋白带：SDS-PAGE，20-25kD蛋白带 • N-端氨基酸序列测定：氨基酸序列分析仪 • 纯度：免疫印迹法、高效液相色谱法 2. 半成品的检定 • 吸附完全性≥95% • 硫氰酸盐含量＜1.0μg/ml • Triton X-100含量＜15.0μg/ml
重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）
• 由重组酵母细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯 化、灭活及加入佐剂吸附制成。
重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）
（一）制备方法 1. 生产用菌种： 基因重组构建的表达HBsAg的重组酿酒酵母原始
菌种
重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）
2. 种子批的建立及检定 • 符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定 • 建立：原始菌种传代
培养物纯度：无细菌和其他真菌检出 HBsAg基因序列测定 • 检定 质粒保有率：平板复制法 活菌率：血细胞计数板 抗原表达率：蛋白质含量、 HBsAg含量 • 保存：工作种子批-70℃保存，其余液氮保存
新生儿乙肝疫苗接种及预防接种安全注射ppt课件
编辑课件
17
1、人员要求
承担新生儿乙肝疫苗接种的工作人员应 当具备执业医师、执业助理医师或护士 资格，并经过卫生行政部门组织的预防 接种专业培训并考核合格。
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18
2、接种室设置要求
接种单位产科设专用接种室，并设置醒目标识。如确需与其他功 能室共用，则应有相对独立的分区，且标识清晰。 接种室要求宽敞、明亮、通风、整洁。 设置接种乙肝疫苗的接种台，并有醒目的标识。 接种室应配备疫苗专用冰箱。 建立相关工作制度：建立预防接种工作制度，疫苗和冷链管理制 度，疑似预防接种异常反应报告和处理等相关工作制度。
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5
2.新生儿乙肝疫苗接种程序（1）
全程接种3针 接种时间为0、1、6个月 第1针在出生后24小时内尽早接种； 第2针在第1针接种后1个月接种 第3针在第1针接种后6个月接种。
编辑课件
6
2.新生儿乙肝疫苗接种程序（2）
第2针与第1针的间隔时间不得少 于1个月。
第3针与第2针的间隔时间不得少 于2个月。
编辑课件
36
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5、接种登记（2）
《登记卡》第一联由负责接种新生儿首 针乙肝疫苗的接种点、接种门诊留存备 查，第二联交新生儿家长； 接种点（包括产科接种点）、接种门诊 根据实际使用的数量，凭疫苗使用报表 到当地乡级防保科或疾控机构领取乙肝 疫苗和注射器。
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6、统计与报告
各级医疗保健机构（指设置产科或开展接生工作的单位） 负责新生儿的乙肝疫苗接种、接种登记通统计报告，并于 每月5日前将上月新生儿乙肝疫苗接种和使用情况上报至区 疾病预防控制中心。
重组乙型肝炎疫苗
重组乙型肝炎疫苗一、疫苗针对疾病乙肝，是由乙型肝炎病毒引起的以肝脏病变为主的一种传染病。
临床上以食欲减退、恶心、上腹部不适、肝区痛、乏力为主要表现。
部分患者可有黄疸、发热和肝大伴有肝功能损害。
有些患者可慢性化，甚至发展成肝硬化，少数可发展为肝癌。
主要通过血液传播、母婴传播、性接触传播。
二、疫苗简介我国现批准上市的乙肝疫苗有重组（酿酒酵母）乙型肝炎疫苗、重组（汉逊酵母）乙型肝炎疫苗和重组（CHO）乙型肝炎疫苗三种，剂量分10μg、20μg和60μg三种。
三、疫苗作用我国是乙肝高发国，接种乙肝疫苗是预防乙型肝炎的重要手段。
接种乙肝疫苗后，尤其是对新生儿常规接种乙肝疫苗，可使机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力，有效降低乙肝的发病率和患病率。
四、免疫程序（一）适用对象所有未感染乙肝病毒且未获得乙肝免疫力的无禁忌症人群。
（二）接种剂次和间隔10μg、20μg乙肝疫苗全程需接种3针，按照0、1和6个月的程序，即接种第1针疫苗后，在1个月和6个月时注射第2针和第3针。
新生儿首针乙肝疫苗应在出生24小时内尽早接种。
60μg乙肝接种对象为16岁及以上易感人群，只需接种一剂次。
具体操作按选用的适用疫苗的说明书执行。
（三）接种部位和途径上臂外侧三角肌肌肉注射。
五、其他事项（一）接种禁忌1、已知对该疫苗所含任何组分，包括辅料、甲醛以及硫酸庆大霉素过敏者；2、患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者；3、妊娠期妇女；4、患未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
（二）暂缓接种1、发热、急性感染或处于慢性疾病急性发作期的，待病愈或病情缓解后再进行接种；2、接种疫苗和开始化疗及免疫抑制治疗之间至少应间隔2周。
正在接受化疗或放疗患者等结束后数月内再接种；3、以上使用要求如和疫苗说明书有冲突，以疫苗说明书为准。
重组(酵母)乙型肝炎疫苗
重组（酵母）乙型肝炎疫苗
【组成与性状】
本品系由重组酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)，经纯化加佐剂吸附后制成。
疫苗为白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物。
【规格】
本品每安瓿为0.5ml。
每次人用剂量0.5ml，含HbsAg5ug。
【质量标准】
本品依据《中国生物制品规程》(2000版)标准生产和检定，符合质量要求。
【作用与用途】
本疫苗接种后，可刺激机体产生对乙型肝炎病毒的免疫力，用于预防乙型肝炎。
【接种对象】
本疫苗适用于乙型肝炎易感者，尤其下列人员：
(1)新生儿、特别是母亲为HBsAg、HBeAg阳性者；
(2)从事医疗工作的医护人员及与接触血液的实验人员。
【用法与剂量】
(1)本疫苗注射时要充分摇匀。
(2)注射部位为上臂三角肌肌内。
(3) 新生儿第1针在出生后24小时内尽早注射。
1个月及6个月后注射第2、3针，其他人群免疫程序为第0、1、6个月，剂量均为5ug/支。
【禁忌】
患有发热、急性或慢性严重疾病者及对酵母成分过敏者禁止使用。
【副反应及处理】
本品很少有不良反应，个别人可有中、低度发热或注射局部微痛，24小时内即自行消失。
【注意事项】
(1)用前摇匀。
(2)安瓿破裂、有摇不散的块状物时不得使用。
(3)应备有肾上腺素，以防偶有过敏反应发生时使用。
【保存、运输及使用期限】
保存于2-8℃暗处，严防冻结。
在盒签或瓶签标明的失效期前使用。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
检测正确表达目的产 物的酵母
5.筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞，获得外源基因高效表达的 基因工程菌。
4
菌种的制备及发酵
重组酵母细胞 小三角瓶
用成功构造的基因工程菌进行扩大培养，经过逐级放大至发 酵罐。原料以碳水化合物为主，不含有毒物质，并加入少量有机 和无机氮源；能容易进行大量有效的乙肝病毒表面抗原的生产； 生产过程中，通常常温进行，操作温和，不考虑防爆问题；生产 过程中考虑防止杂菌的污染。
7
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
8
3
重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞
4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
大三角瓶
发酵过程中，可采用分批补料或连续流加补料以保证最优生 长和维持细胞浓度、生长速度和营养供应之间的适当平衡。可添 加诱导剂如乳糖到发酵液中去以诱导可调节启动子的表达。
种子发酵罐 生产发酵罐
发现在碳源中降低葡萄糖浓度，补充甘油和蔗糖能较明显地 改善比活值和HBsAg的相对浓度。将发酵前期、中期和后期温 度分别控制在27℃、33℃、25℃；发酵从pH4.5开始，逐步上 升到pH6；以及维持溶氧浓度在最适水平（70%饱和度），都可 以提高重组质粒的稳定性和HBsAg在发酵液中的积累。
重组乙肝疫苗（汉逊酵母） 制备
1
目录
1.背景介绍 2.重组酵母构建 3.菌种制备和发酵 4.分离纯化 5.纯度测定工艺 6.疫苗的保存
2
背景介绍
1.乙肝病毒的感染可导致慢性肝脏疾病甚至肝癌的发生。我国乙肝感染率为60%，乙肝表 面抗原携带率约为10%，有约1.2亿人携带乙肝病毒。乙肝病毒中决定乙肝病毒抗原性的蛋 白是乙型肝炎病毒（HBV薄膜蛋白），主要包括，乙肝病毒表面抗原（HBsAg）,前S1抗 原和前S2抗原
5
发酵液
过滤
蛋白酶抑制剂
细胞破碎
表面活性剂
微滤
滤液
超滤
硅胶吸附
热硼酸
疏水层析
硫氰酸盐处理
氢氧化铝共沉淀
分离纯化
1.发酵结束后，通过过滤或离心，使酵母与发酵液分离，
2. 加入蛋白酶抑制剂以防抗原在细胞破碎时被分解。
3.然后细胞通过高压匀浆机破碎释放出抗原。酵母细胞较 厚，比大肠杆菌难破碎，可在高压匀浆机内施加几千个大气压， 通过针型阀突然降压到零使细胞破碎。
2. 乙肝疫苗的发展： 第一代乙肝疫苗
（血源性乙肝疫苗）
第二代乙肝疫苗 （基因工程疫苗）
cho细胞乙肝疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫苗 （第一代重组酵母乙肝疫苗 ） 重组汉逊酵母乙肝疫苗 （第二代重组酵母乙肝疫苗）
3.汉逊酵母为甲基营养型酵母，基因组易操作，培养基廉价，有分泌型表达模式，正确的 折叠和修饰，产量理想，发酵液产出杂蛋白少，产物易于纯化，无热源和其他病原体，安 全性好
4.细胞破碎后加入表面活性剂使抗原溶解。
5.粗细胞裂解物用0.2微米中空纤维柱进行微滤。抗原和大部分 低分子量宿主细胞内含物通过滤膜，细胞碎片被膜拦截。
6.滤液再进行超滤，此时抗原被膜拦截而低分子浪宿主细胞内含 物通过滤膜除去
7.残留的表面活性剂通过吸附在聚苯乙烯小珠上除去
8.再用硅胶吸附抗原，用热硼酸缓冲液洗脱
9.用丁基琼脂糖进行疏水层析，纯化后的抗原用硫氰酸盐处理以 完成二硫键的交联
10. 再与氢氧化铝共沉淀，此时抗原吸附在氢氧化铝上
6
纯度测定
乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进入人体系统，为了降低疫苗内杂质含量对人体产生的 不良影响，必须进行疫苗的纯度检测。
乙肝疫苗表面抗原的纯度检定是疫苗质量控制的关键手段之一。目前分析测定重组乙 型肝炎疫苗纯度的HPLC常用方法是应用TSK-G5000PW分子筛。中国药品生物制品检定所 疫苗二室曾报道应用该系统对Merck酿酒酵母重组乙肝疫苗和CHO细胞重组乙肝疫苗进行 纯度分析，可获得良好的分离效果。对重组汉逊酵母乙肝疫苗，现有的HPLC检测系统应用 0.1mol/L DTT与1:50吐温80等量混合处理后能有效地检测不同类型重组乙肝疫苗表面抗原 的纯度。
检测正确表达目的产 物的酵母
5.筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞，获得外源基因高效表达的 基因工程菌。
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菌种的制备及发酵
重组酵母细胞 小三角瓶
用成功构造的基因工程菌进行扩大培养，经过逐级放大至发 酵罐。原料以碳水化合物为主，不含有毒物质，并加入少量有机 和无机氮源；能容易进行大量有效的乙肝病毒表面抗原的生产； 生产过程中，通常常温进行，操作温和，不考虑防爆问题；生产 过程中考虑防止杂菌的污染。
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疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
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重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞
4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
大三角瓶
发酵过程中，可采用分批补料或连续流加补料以保证最优生 长和维持细胞浓度、生长速度和营养供应之间的适当平衡。可添 加诱导剂如乳糖到发酵液中去以诱导可调节启动子的表达。
种子发酵罐 生产发酵罐
发现在碳源中降低葡萄糖浓度，补充甘油和蔗糖能较明显地 改善比活值和HBsAg的相对浓度。将发酵前期、中期和后期温 度分别控制在27℃、33℃、25℃；发酵从pH4.5开始，逐步上 升到pH6；以及维持溶氧浓度在最适水平（70%饱和度），都可 以提高重组质粒的稳定性和HBsAg在发酵液中的积累。
重组乙肝疫苗（汉逊酵母） 制备
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目录
1.背景介绍 2.重组酵母构建 3.菌种制备和发酵 4.分离纯化 5.纯度测定工艺 6.疫苗的保存
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背景介绍
1.乙肝病毒的感染可导致慢性肝脏疾病甚至肝癌的发生。我国乙肝感染率为60%，乙肝表 面抗原携带率约为10%，有约1.2亿人携带乙肝病毒。乙肝病毒中决定乙肝病毒抗原性的蛋 白是乙型肝炎病毒（HBV薄膜蛋白），主要包括，乙肝病毒表面抗原（HBsAg）,前S1抗 原和前S2抗原
5
发酵液
过滤
蛋白酶抑制剂
细胞破碎
表面活性剂
微滤
滤液
超滤
硅胶吸附
热硼酸
疏水层析
硫氰酸盐处理
氢氧化铝共沉淀
分离纯化
1.发酵结束后，通过过滤或离心，使酵母与发酵液分离，
2. 加入蛋白酶抑制剂以防抗原在细胞破碎时被分解。
3.然后细胞通过高压匀浆机破碎释放出抗原。酵母细胞较 厚，比大肠杆菌难破碎，可在高压匀浆机内施加几千个大气压， 通过针型阀突然降压到零使细胞破碎。
2. 乙肝疫苗的发展： 第一代乙肝疫苗
（血源性乙肝疫苗）
第二代乙肝疫苗 （基因工程疫苗）
cho细胞乙肝疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫苗 （第一代重组酵母乙肝疫苗 ） 重组汉逊酵母乙肝疫苗 （第二代重组酵母乙肝疫苗）
3.汉逊酵母为甲基营养型酵母，基因组易操作，培养基廉价，有分泌型表达模式，正确的 折叠和修饰，产量理想，发酵液产出杂蛋白少，产物易于纯化，无热源和其他病原体，安 全性好
4.细胞破碎后加入表面活性剂使抗原溶解。
5.粗细胞裂解物用0.2微米中空纤维柱进行微滤。抗原和大部分 低分子量宿主细胞内含物通过滤膜，细胞碎片被膜拦截。
6.滤液再进行超滤，此时抗原被膜拦截而低分子浪宿主细胞内含 物通过滤膜除去
7.残留的表面活性剂通过吸附在聚苯乙烯小珠上除去
8.再用硅胶吸附抗原，用热硼酸缓冲液洗脱
9.用丁基琼脂糖进行疏水层析，纯化后的抗原用硫氰酸盐处理以 完成二硫键的交联
10. 再与氢氧化铝共沉淀，此时抗原吸附在氢氧化铝上
6
纯度测定
乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进入人体系统，为了降低疫苗内杂质含量对人体产生的 不良影响，必须进行疫苗的纯度检测。
乙肝疫苗表面抗原的纯度检定是疫苗质量控制的关键手段之一。目前分析测定重组乙 型肝炎疫苗纯度的HPLC常用方法是应用TSK-G5000PW分子筛。中国药品生物制品检定所 疫苗二室曾报道应用该系统对Merck酿酒酵母重组乙肝疫苗和CHO细胞重组乙肝疫苗进行 纯度分析，可获得良好的分离效果。对重组汉逊酵母乙肝疫苗，现有的HPLC检测系统应用 0.1mol/L DTT与1:50吐温80等量混合处理后能有效地检测不同类型重组乙肝疫苗表面抗原 的纯度。