重组乙肝疫苗(汉逊酵母)的介绍ppt课件
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重组乙肝疫苗汉逊酵母的介绍ppt课件
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
检测正确表达目的产 物的酵母
5.筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞，获得外源基因高效表达的 基因工程菌。
4
菌种的制备及发酵
重组酵母细胞 小三角瓶
用成功构造的基因工程菌进行扩大培养，经过逐级放大至发 酵罐。原料以碳水化合物为主，不含有毒物质，并加入少量有机 和无机氮源；能容易进行大量有效的乙肝病毒表面抗原的生产； 生产过程中，通常常温进行，操作温和，不考虑防爆问题；生产 过程中考虑防止杂菌的污染。
7
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
8
3
重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞
4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
大三角瓶
发酵过程中，可采用分批补料或连续流加补料以保证最优生 长和维持细胞浓度、生长速度和营养供应之间的适当平衡。可添 加诱导剂如乳糖到发酵液中去以诱导可调节启动子的表达。
检测正确表达目的产 物的酵母
5.筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞，获得外源基因高效表达的 基因工程菌。
4
菌种的制备及发酵
重组酵母细胞 小三角瓶
用成功构造的基因工程菌进行扩大培养，经过逐级放大至发 酵罐。原料以碳水化合物为主，不含有毒物质，并加入少量有机 和无机氮源；能容易进行大量有效的乙肝病毒表面抗原的生产； 生产过程中，通常常温进行，操作温和，不考虑防爆问题；生产 过程中考虑防止杂菌的污染。
7
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
8
3
重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞
4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
大三角瓶
发酵过程中，可采用分批补料或连续流加补料以保证最优生 长和维持细胞浓度、生长速度和营养供应之间的适当平衡。可添 加诱导剂如乳糖到发酵液中去以诱导可调节启动子的表达。
基因工程乙肝疫苗ppt课件
答敏感性不同，所以有的人打疫
苗容易产生抗体，而部分人不会
产生抗体。乙肝疫苗第一针后大
概有30%左右的人产生抗体，而
第二针后有50%～70%左右，第
三针后90%左右产生抗体。
打乙肝疫苗前的注意事项有以下几点
•
•
1、有支气管哮喘和血清病的人、对青霉素等药物过敏者和过敏性荨麻疹
患者不能接种乙肝疫苗
•
2、成年人接种乙肝疫苗最好注射在上臂三角肌处，此处的接种成功率最
应用前景
• 基因工程乙肝疫苗较之于血液乙肝疫苗主要区别之一在于它生产来源 不同。它有着许多血源乙肝疫苗不可比拟的优势。
•
自1985年以来，我国一直采用接种血源乙肝疫苗预防乙肝，血源
乙肝疫苗对控制我国乙肝大面积流行曾起了很大作用，但是，由于血
源乙肝疫苗需用乙肝病毒表面抗原携带者的血浆为原、乙肝患者和乙肝病毒携带者不需要接种乙肝疫苗
•
4、非正常出生的婴儿(包括剖腹产)和出生后体质较差的婴儿最好推迟接种
时间
•
5、发烧患者和先天性免疫疾病患者或某些重症患者，应根据医院判断是
什么是基因工程乙肝疫苗？
• 基因工程乙肝疫苗（酵母重组）是一种乙肝 表面抗原（HbsAg）亚单位疫苗，它是采用 现代生物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基 因进行质粒构建，克隆进入酵母菌中，通过 培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚 单位。这种乙肝表面抗原亚单位具有原料易 得、产量大、安全、高效等特点。美国默克 公司研究的此产品最早获美国FDA批准。国 内生产此产品技术均从其引进。
应用学科
免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学科 ）；免疫预防（三级学科）
• 发展概况
重组酵母乙肝疫苗首先在美国默克公司研 制成功，并于1986年被美国FDA批准通过。 1991年，我国自行研制的第一个基因工程 疫苗—哺乳动物细胞生产乙肝疫苗获准生 产。我国当前已能大规模生产乙型肝炎表 面抗原重组疫苗，分别称酵母重组和CHO（ 中国仓鼠卵巢细胞）重组疫苗，免疫效果 比同剂量的血源疫苗优良，并且十分安全 ，可以放心使用。
乙肝疫苗接种ppt课件
血清转换：抗-HBs滴度≥10IU/L GMT：抗-HBs几何平均滴度
Mannucci PM,et al. Am J Hematol. 1988 Dec;29(4):211-4. Assad S, et al. Vaccine.2000;18:57-67
乙肝疫苗在血友病患者中的应用
研究结果：
接种3剂后，98％的患者体内产生抗-HBs滴度≥10IU/L，GMT
追查所有感染患者：共19例/239例
队列分析评估感染途径
院内获得性感染爆发源的研究： 160bp的核心区基因序列比较
Hepatitis B vaccination indications
Medical indications: hemodialysis patients or patients who receive clotting factor concentrates. Occupational indications: health-care workers and public-safety workers who have exposure to blood in the workplace; and persons in training in schools of medicine, dentistry,nursing, laboratory technology, and other allied health professions. Behavioral indications: injection drug users; persons with more than one sex partner during the previous 6 months; persons with a recently acquired sexually transmitted disease (STD); all clients in STD clinics; and men who have sex with men.
Mannucci PM,et al. Am J Hematol. 1988 Dec;29(4):211-4. Assad S, et al. Vaccine.2000;18:57-67
乙肝疫苗在血友病患者中的应用
研究结果：
接种3剂后，98％的患者体内产生抗-HBs滴度≥10IU/L，GMT
追查所有感染患者：共19例/239例
队列分析评估感染途径
院内获得性感染爆发源的研究： 160bp的核心区基因序列比较
Hepatitis B vaccination indications
Medical indications: hemodialysis patients or patients who receive clotting factor concentrates. Occupational indications: health-care workers and public-safety workers who have exposure to blood in the workplace; and persons in training in schools of medicine, dentistry,nursing, laboratory technology, and other allied health professions. Behavioral indications: injection drug users; persons with more than one sex partner during the previous 6 months; persons with a recently acquired sexually transmitted disease (STD); all clients in STD clinics; and men who have sex with men.
重组乙肝疫苗(汉逊酵母)的介绍
重组酵母的构建
获取目的基因
1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒 导入宿主细胞
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
培养酵母细胞ຫໍສະໝຸດ 4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
2. 乙肝疫苗的发展： 第一代乙肝疫苗
（血源性乙肝疫苗）
第二代乙肝疫苗 （基因工程疫苗）
cho细胞乙肝疫苗
重组酿酒酵母乙肝疫苗 （第一代重组酵母乙肝疫苗 ） 重组汉逊酵母乙肝疫苗 （第二代重组酵母乙肝疫苗）
3.汉逊酵母为甲基营养型酵母，基因组易操作，培养基廉价，有分泌型表达模式，正确的 折叠和修饰，产量理想，发酵液产出杂蛋白少，产物易于纯化，无热源和其他病原体，安 全性好
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。
9.用丁基琼脂糖进行疏水层析，纯化后的抗原用硫氰酸盐处理以 完成二硫键的交联
10. 再与氢氧化铝共沉淀，此时抗原吸附在氢氧化铝上
乙肝疫苗生产发展简介PPT
基因工程技术
01
利用基因工程技术，提高疫苗的产量和纯度。
新型佐剂的研发
02
开发新型佐剂，增强疫苗的免疫原性。
细胞培养技术
03
利用细胞培养技术，实现疫苗的连续生产。
疫苗生产的国际化合作与交流
国际合作项目
参与国际合作项目，共 同研发和推广乙肝疫苗 。
技术交流与转让
加强技术交流与转让， 促进疫苗生产的国际合 作。
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
新疫苗的研发方向
1 2
新型疫苗的研发
针对乙肝病毒变异株，研发更有效、更安全的疫 苗。
联合疫苗的研发
将乙肝疫苗与其他疫苗结合，减少接种次数，提 高接种率。
3
免疫策略的优化
研究更合理的免疫接种程序，提高疫苗的保护效 果。
疫苗生产技术的创新与突破
乙肝疫苗的重要性
控制乙肝传播
乙肝疫苗是预防HBV感染的最有 效方法，通过接种疫苗可以降低 感染风险，控制乙肝的传播。
预防慢性肝炎
接种乙肝疫苗可以预防慢性肝炎 的发生，避免因感染HBV而导致 的长期健康问题。
提高人口素质
乙肝疫苗的接种可以保护广大人 群，特别是儿童和青少年，提高 人口素质和健康水平。
乙肝疫苗生产发展简介
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
汇报人：可编辑 2024-01-11
• 乙肝疫苗的起源与背景 • 乙肝疫苗的生产技术 • 乙肝疫苗的生产现状 • 乙肝疫苗的未来发展 • 乙肝疫苗的安全性与监管
目录
CONTENTS
01
乙肝疫苗的起源与背景
中国疫苗生产现状
国产重组乙型肝炎疫苗CHO细胞ppt课件
1992年与2006年HBsAg阳性率比较
14 12
HBsAg阳性率（％）
2010年湖北省CDC在2个市的3个县人群中开展乙肝血清学监 测，共监测人群700人,HBsAg阳性率为2.14%； 0～4岁为 0.67%,15岁以上为5.00%,15～19岁最高,为7.00%
10 8
6 4
2 0
15 50
15
全国肝炎疫苗研究及应用经验交流会、 《中国计划免疫》2007.8
由此可见
剂量越高，抗体滴度越高。 相同剂量，产生抗体滴度相近。
16
乙肝疫苗的种类
1、血源乙肝疫苗—用无症状的HBsAg携带者的血液制成 2、基因工程乙肝疫苗—利用基因工程研制重组DNA乙肝疫
苗，曾先后研制过大肠杆菌系统、啤酒酵母细胞系统、哺乳动物 细胞系统和牛痘病毒系统的重组乙肝疫苗。
13
北京疾控中心做的观察
华北制药CHO20-10-10
大连汉逊酵母10-10-10
深圳康泰酵母10-5-5
北京天坛酵母10-5-5 在大学新生当中做的观察，华北CHO疫苗阳转 率最高，达到98.7%。
全国肝炎疫苗研究及应用经验交流会、 《中国计划免疫》2007.8
14
1、天坛
2、康泰
3、大连
4、华北
目前乙肝疫苗接种的问题
1、低无应答率高，情况普遍，10-15%接种 疫苗后无应答。 2、保护时间短，新生儿接种5微克3年后抗 体阳性率约30%。 3、成人应用剂量低。
4、母婴阻断没有正确处理。
8
乙肝疫苗预防接种常见的问题
不同剂量乙肝疫苗母婴阻断效果
疫苗 剂量 母亲单阳性 调查 人数 阳性 人数 阳性率 （％） 调查 人数 母亲双阳性 阳性 人数 阳性率 （％）
疫苗和乙肝疫苗相关知识简介ppt课件
乙肝小常识
1、3、5三项 同时是阳 性，就叫 “大三阳”； 1、4、5三项 同时是阳 性，就叫 “小三阳”。
5.核心抗原
4.e抗体
3.e抗原 2.表面抗体 1.表面抗原
7.乙肝疫苗注射注意事项
肝炎患者以及发热、急性传染病者，严重慢 性病患者，有免疫缺陷的人、严重过敏体质者和
正在使用免疫抑制剂的人不可接种乙肝疫苗。
谢 谢 ！
一般安全可靠，很少有不良反应。极个别人 可能有中、低度发热，或注射部位微痛，这种疼 痛与疫苗中含有的吸附剂有关。这些轻微反应一 般在24小时内消失。 注射疫苗侧上臂避免剧烈运动。
8.乙肝疫苗发展前景
我国已将乙肝疫苗纳入计划免疫中，新生儿均 应在出生后24小时内接种乙肝疫苗。 乙肝疫苗的趋势是由预防性疫苗向治疗性疫苗 发展。 每年我国在乙肝治疗方面的医疗支出是300 亿—500亿，目前我国有乙肝病毒携带者1.2亿多， 患者超过3000万，而仅有19%的患者接受以抗病 毒为主的方法进行治疗，因而治疗性乙肝疫苗一 旦研制成功并应用，面对的将是个庞大的市场。
2.我国乙肝现状
4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 3.8
乙肝携带者统计
1.2
乙肝携带者
全世界
中国
3.正确对待乙肝患者和携带者
乙肝病毒携带者 相同点 携带乙肝病毒 乙肝患者 携带乙肝病毒
肝病症状
肝功能 是不是病人 如何应对
没有
正常 不是；一般难以发病，保持良好心 态，80%-90%可平安一生。 健康生活，注意肝脏保护；定期检 查肝功能，不需要治疗。
无保护的性行为传播：乙肝病毒可以通过精液和阴道 分泌物进行传播。
5.乙肝疫苗
切断乙肝病毒传播的有效途径 2.10%
《乙肝疫苗接种》课件
乙肝疫苗接种后产生的免疫力并不是终身的，需要定期加强接种。
根据世界卫生组织的建议，一般人群在完成三剂乙肝疫苗接种后，不需 要进行后续的加强接种。
但对于一些高风险人群，如医务人员、经常接触血液或体液的人员等， 可能需要定期接受乙肝抗体检测，并在抗体水平降低时进行加强接种。
05
总结与展望
乙肝疫苗接种的成果与经验总结
THANKS
感谢观看
乙肝疫苗接种的成果
通过广泛的乙肝疫苗接种计划，全球范围内乙肝感染率显著下降，避免了大量慢性乙肝病例的出现， 有效保护了公众健康。
乙肝疫苗接种的经验总结
成功的乙肝疫苗接种计划需要政府、医疗机构、社区和家庭的共同努力，同时也需要持续的监测和评 估，不断完善接种策略。
乙肝疫苗接种的未来发展方向与展望
未来发展方向
保险获得部分或全部报销。
乙肝疫苗接种是否安全？
乙肝疫苗是一种安全有效的预防乙肝 病毒感染的疫苗。
然而，像任何疫苗一样，乙肝疫苗也 存在一些可能的副作用，如局部疼痛 、红肿、发热、头痛等，但这些反应 通常是轻微且短暂的。
经过严格的临床试验和长期使用，乙 肝疫苗被证实对大多数人都是安全的 。
乙肝疫苗接种后是否可以终身免疫？
乙肝病毒携带者常常没有明显 的症状，因此容易传播病毒而 不自知。
乙肝疫苗接种的意义
乙肝疫苗接种是预防乙肝病毒感染的有效手段，通过接种疫苗可以产生抗体，从而 避免感染乙肝病毒。
乙肝疫苗的接种可以降低感染率，控制乙肝的传播，保护易感人群，特别是儿童和 青少年等高危人群。
乙肝疫苗的接种还可以降低肝硬化和肝癌等疾病的发生率，提高人民的健康水平。
确保每个接种对象只接受一次乙肝疫 苗接种。
观察接种反应
接种后观察30分钟，无异常反应方可 离开。
根据世界卫生组织的建议，一般人群在完成三剂乙肝疫苗接种后，不需 要进行后续的加强接种。
但对于一些高风险人群，如医务人员、经常接触血液或体液的人员等， 可能需要定期接受乙肝抗体检测，并在抗体水平降低时进行加强接种。
05
总结与展望
乙肝疫苗接种的成果与经验总结
THANKS
感谢观看
乙肝疫苗接种的成果
通过广泛的乙肝疫苗接种计划，全球范围内乙肝感染率显著下降，避免了大量慢性乙肝病例的出现， 有效保护了公众健康。
乙肝疫苗接种的经验总结
成功的乙肝疫苗接种计划需要政府、医疗机构、社区和家庭的共同努力，同时也需要持续的监测和评 估，不断完善接种策略。
乙肝疫苗接种的未来发展方向与展望
未来发展方向
保险获得部分或全部报销。
乙肝疫苗接种是否安全？
乙肝疫苗是一种安全有效的预防乙肝 病毒感染的疫苗。
然而，像任何疫苗一样，乙肝疫苗也 存在一些可能的副作用，如局部疼痛 、红肿、发热、头痛等，但这些反应 通常是轻微且短暂的。
经过严格的临床试验和长期使用，乙 肝疫苗被证实对大多数人都是安全的 。
乙肝疫苗接种后是否可以终身免疫？
乙肝病毒携带者常常没有明显 的症状，因此容易传播病毒而 不自知。
乙肝疫苗接种的意义
乙肝疫苗接种是预防乙肝病毒感染的有效手段，通过接种疫苗可以产生抗体，从而 避免感染乙肝病毒。
乙肝疫苗的接种可以降低感染率，控制乙肝的传播，保护易感人群，特别是儿童和 青少年等高危人群。
乙肝疫苗的接种还可以降低肝硬化和肝癌等疾病的发生率，提高人民的健康水平。
确保每个接种对象只接受一次乙肝疫 苗接种。
观察接种反应
接种后观察30分钟，无异常反应方可 离开。
重组乙型肝炎疫苗(乙肝疫苗)
重组乙型肝炎疫苗（乙肝疫苗）【预防的疾病】乙肝疫苗可以预防乙型病毒性肝炎。
【种类】乙肝疫苗有重组乙肝疫苗（酿酒酵母）、重组乙肝疫苗（汉逊酵母）和重组乙肝疫苗（CHO细胞）3种。
【接种对象】主要为新生儿。
【免疫程序】共接种3剂次，其中第1剂在新生儿出生后24小时内接种，第2剂在1月龄时接种，第3剂在6月龄时接种。
【禁忌】（1）已知对该疫苗的任何成分，包括辅料以及甲醛过敏者；（2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者；（3）患未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
【注意事项】（1）接种疫苗之前，应如实向预防接种医生告知儿童身体健康状况。
若有感冒、发热等症状，待恢复健康后进行补种；（2）接种疫苗后，须在预防接种单位留观至少30分钟。
若儿童出现轻度发热等一般反应，通常不需任何处理。
若高烧不退或伴有其他并发症者，应及时到医院就诊。
1. 疾病概况乙肝是由乙肝病毒感染引起的传染病。
传染源为乙肝病人和乙肝病毒携带者。
主要通过血液、性接触和母婴传播。
人群对乙肝病毒普遍易感，感染结局与感染乙肝病毒时的年龄有关，年龄越小，转为慢性乙肝的可能越大。
约80%～90%的围生期感染者、30%的＜6岁儿童感染者可转为慢性乙肝，成人感染乙肝病毒后转为慢性乙肝的比例＜10%。
有15%～25%的慢性乙肝患者可发展为肝硬化和原发性肝细胞癌而导致死亡。
2. 主要症状乙肝发病比较隐匿，临床上常表现为低热、乏力、食欲减退、恶心、呕吐、厌油、腹胀、肝区疼痛，可出现巩膜黄、尿黄如茶水样等黄疸症状、轻度发热等。
重症者可能发展为肝硬化和原发性干细胞癌，甚至导致死亡。
3. 治疗原则乙肝治疗主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎和抗氧化、抗纤维化和对症治疗，其中抗病毒治疗是关键。
只要有适应证，且条件允许，就应到专科医院和专科门诊进行规范化的治疗。
乙肝病毒携带者需定期随访。
4. 预防措施接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效措施。
目前对新生儿实行免费接种乙肝疫苗，在0、1、6月龄各接种1剂。
乙型肝炎疫苗接种ppt课件
•
•
• •
•
（四）接种禁忌症
(1) 结核病、急性传染病、肾炎、心脏病、免疫缺陷症、湿疹或皮肤病 患者。 (2) 急性疾病、烧伤患者、疾病恢复期(疾病结束及健康恢复之间)、近 期接种天花疫苗、泌尿道感染患者。(国外资料) (3) 由于使用下列药物或治疗而致免疫应答抑制：烷化剂、抗代谢药、 放射治疗、类固醇。(国外资料) (4) 由于下列疾病导致免疫应答降低：全身恶性肿瘤、HIV感染、γ干 扰素受体缺陷、白血病、淋巴瘤。(国外资料) (5) 由感染性疾病导致的发热或未知病因的发热不得使用卡介苗。(国 外资料) (6) 免疫力降低的婴儿或儿童。(国外资料) 慎用 (1) 结核菌素反应强阳性的患者慎用。 (2) 哮喘患者。免疫原性物质可引起哮喘发作或过敏反应。
（九）意外暴露后的预防
• 应立即检测乙肝两对半及HBV DNA、ALT和AST， 并在3和6个月内复查。 • 主动和被动免疫：如已接种乙型肝炎疫苗，且已 知HBs-Ag≥10mIU/Ml者，可不进行特殊处理。如 未接种过乙型肝炎疫苗，或虽接种过乙型肝炎疫 苗，但HBs-Ag＜10mIU/mL或HBs-Ag水平不详者， 应立即注射HBIG 200-400 IU，并同时在不同部 位接种一针乙型肝炎疫苗（20ug）,于1和6个月后 分别接种第2和第3针乙型肝炎疫苗（各20ug）.
群中HBsAg流行率为9.09%，估计约1.2亿人为慢性HBV感
染。其中慢性乙肝约3 000万例。全国每年死于与乙肝相关 肝病约30万例。
（四）近年乙肝流行病学特征
传播途径发生变化 •不同HBV流行区间人口流动增加 •医源性传播增加 •家庭内传播减少 • HBV水平传播增加 HBeAg阴性乙肝增多 •持续免疫压力导致突变株选择 •长期治疗导致病毒变异 • PreC/C启动子变异 •检测方法灵敏度提高 HBV感染和肝癌发病率下降－乙肝疫苗免疫 HBV变异株增加 HBV基因型研究深入
重组乙型肝炎疫苗ppt课件
• 乙肝病毒属DNA病毒科，有三种外壳的基因编码。
乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原抗 体(HBsAg与抗-HBs)、e抗原抗体(HBeAg与抗HBe)、核心抗原抗体(HBcAg与抗-HBc)、x抗原抗 体(HBxAg与抗-HBx)和HBv-DNA。有临床意义的 主要有HBsAg与抗-HBs、HBeAg与抗-HBe和抗HBc，简称“两对半”。 临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏 力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。
重组乙型肝炎疫苗
背景
• 乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性
肝炎的40﹪，它可以急性发病，也可以形成 慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其 中很大一部分人可以是健康的病毒携带者， 不出现症状，但表面抗原（HbsAg）阳性， 或者同e抗原（HbeAg）阳性，常常是重要 的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢 性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的 一个重要威胁。
乙肝疫苗的发展
• （一）联合疫苗： • 联合疫苗具有减少注射针次、接种副反应及
提高接种覆盖率的优点。已上市的联合疫苗如SB 公司的百白破-乙肝四联疫苗、甲-乙肝联合疫苗， MSD公司的流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗等。 我国全细胞百白破-乙肝四联疫苗和无细胞百白破 -乙肝四联疫苗已完成临床前研究，甲-乙肝联合 疫苗的开发研究制也在进行。
（三） CHO疫苗
• 本疫苗系用基因工程技术将乙型肝炎表面
抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)内，通过对细胞培养增殖，增殖分泌 乙肝表面抗原(HBsAg)于培养液中，经纯化 加佐剂氢氧化铝后制成。疫苗外观有轻微 乳白色沉淀。
国产酵母乙肝疫苗的效果
• 研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维
• 对应用0、1、2月程序免疫的400名小学生进行了
乙型肝炎的免疫预防ppt课件
编辑课件
13
七、阻断母婴传播免疫程序
编辑课件
14
八、未检测出抗体原因
• 1、疫苗贮存不当导致氢氧化铝胶体呈块状， 其接种效果将完全无效；
• 2、使用前未充分摇匀，使疫苗液体中的氢 氧化铝胶体完全悬浮均匀，其接种效果将 明显降低；
• 3、疫苗注射入脂肪层内；
• 4、有免疫缺陷；
• 5、目前检测表面抗体所用的包被抗原为血 源性抗原，而且现在使用的乙肝疫苗为基 因疫苗，故检测灵敏度较低。
编辑课件
17
九、特殊情况接种
• 在意外接触HBV感染者的血液和体液后的预防：
• 1、血清学检测，应立即检测HBsAg、抗-HBs、 ALT等，并在3和6个月复查。
• 2、主动和被动免疫
• 如已接种过乙肝疫苗，且已知抗-HBs≧10mIU/ml 者，可不进行特殊处理。如未接种过乙肝疫苗， 或虽接种过乙肝疫苗，但抗-HBs≦10mIU/ml或抗HBs水平不详，应立即接种HBIG200-400IU，并 同时在不同部位接种一针乙肝疫苗，于1和6个月
• 如果出生后24小时内未能接种，仍需 按照上述0、1、6的要求尽早接种。如 果第2针或第3针滞后于接种程序的规 定，应尽快补种。第2针与第1针的间 隔时间不能少于1个月，如果第2针滞 后时间较长，第3针与第2针间隔时间 不能少于2个月，并且第1针和第3针间 隔时间要在4个月以上。
编辑课件
5
三、接种率评价
后分别接种第2和第3针乙肝疫苗(各20μg）.
编辑课件
18
十、乙肝疫苗免疫效果
• 乙肝疫苗除可预防乙肝外，还可预防丁型肝 炎，因为丁型肝炎病毒必须依赖乙肝病毒才 能复制，但不能预防其它类型的肝炎。接种 第1针后有50%左右产生HBsAb ，而接种第 2针后有80%左右，完成3针次95%能产生 保护性抗体，母婴阻断率90％以上。但仍 有很少部分由于遗传因素，不能产生保护作 用。
乙肝疫苗课件
免疫效果
母婴阻断
未同时使用HBIG，保护效果为95% 同时使用HBIG，保护效果达98%
青少年和成人
大于95%受种者
无应答和低应答 是否加强免疫 是否要筛查 孕妇 早产儿 意外暴露后
参考文献
夏宪照 罗会明. 《实用预防接种手册》.
谢谢！
接种部位为上臂三角肌肌内注射 不同国家生产的疫苗对注射对象的年龄要求不同
接种对象
免疫程序
3剂（第0、1、6个月） 血液透析者4剂（第0、1、2、6个月） 16岁以上人群有HepB接种史
≤10mlIU/ml 全程基础免疫 10~100mlIU/ml 加强1剂20ug ≥100mlIU/ml 不接种
国产HepB 啤酒酵母 CHO 汉逊酵母
进口HepB 啤酒酵母（安在时） 汉逊酵母（益可欣）
剂量和用法
啤酒酵母 CHO 汉逊酵母 进口HepB
新生儿和＜19岁 ≥19岁每次1.0ml 每次0.5ml（5ug） （10ug） ≤15岁每次1ml ＞15岁每次1ml （10ug） （20ug） 婴儿和成人每次均为0.5ml（10ug） ≤15岁每次0.5ml （10ug） ＞15岁每次1.0ml （20ug）
禁忌症
患急性或慢性严重疾病者 对疫苗已知的任何成分过敏者 发热暂缓接种
接种反应
一过性疼痛10%-20% 低热1.8% 上呼吸道症状1-2% 胃肠道症状1% 偶合晚发性维生素K缺乏 症（2周-3月龄新生儿）
注意事项
HepB不应皮下或皮内注射 HIV感染、血透和免疫缺陷的患者，初种后要 追加接种
乙肝疫苗生产发展简介 PPT
苗）。1995年停产。
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
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重组酵母的构建
获取目的基因 1.根据已经测定的编码乙肝病毒表面抗原决定簇基因序列，用化 学合成法直接合成目的基因
构建重组质粒
2. 用DNA连接酶将含有外源基因的DNA片段连接到质粒分子上， 构成DNA重组分子。
3.借组细胞转化手段将DNA重组分子导入酵母细胞内。
导入宿主细胞
培养酵母细胞
4.短时间培养转化酵母细胞，以扩增DNA重组分子。
大三角瓶
种子发酵罐
生产发酵罐
分离纯化
发酵液 过滤蛋ຫໍສະໝຸດ 酶抑制剂1.发酵结束后，通过过滤或离心，使酵母与发酵液分离， 2. 加入蛋白酶抑制剂以防抗原在细胞破碎时被分解。 3.然后细胞通过高压匀浆机破碎释放出抗原。酵母细胞较 厚，比大肠杆菌难破碎，可在高压匀浆机内施加几千个大气压， 通过针型阀突然降压到零使细胞破碎。 4.细胞破碎后加入表面活性剂使抗原溶解。 5.粗细胞裂解物用0.2微米中空纤维柱进行微滤。抗原和大部分 低分子量宿主细胞内含物通过滤膜，细胞碎片被膜拦截。 6.滤液再进行超滤，此时抗原被膜拦截而低分子浪宿主细胞内含 物通过滤膜除去 7.残留的表面活性剂通过吸附在聚苯乙烯小珠上除去
细胞破碎
表面活性剂
微滤
滤液
超滤
硅胶吸附
热硼酸
疏水层析 硫氰酸盐处理 氢氧化铝共沉淀
8.再用硅胶吸附抗原，用热硼酸缓冲液洗脱
9.用丁基琼脂糖进行疏水层析，纯化后的抗原用硫氰酸盐处理以 完成二硫键的交联 10. 再与氢氧化铝共沉淀，此时抗原吸附在氢氧化铝上
纯度测定
乙肝疫苗是通过肌肉注射的方式进入人体系统，为了降低疫苗内杂质含量对人体产生的 不良影响，必须进行疫苗的纯度检测。 乙肝疫苗表面抗原的纯度检定是疫苗质量控制的关键手段之一。目前分析测定重组乙 型肝炎疫苗纯度的HPLC常用方法是应用TSK-G5000PW分子筛。中国药品生物制品检定所 疫苗二室曾报道应用该系统对Merck酿酒酵母重组乙肝疫苗和CHO细胞重组乙肝疫苗进行 纯度分析，可获得良好的分离效果。对重组汉逊酵母乙肝疫苗，现有的HPLC检测系统应用 0.1mol/L DTT与1:50吐温80等量混合处理后能有效地检测不同类型重组乙肝疫苗表面抗原 的纯度。
5.筛选和鉴定经转化处理的酵母细胞，获得外源基因高效表达的 基因工程菌。
检测正确表达目的产 物的酵母
菌种的制备及发酵
重组酵母细胞 小三角瓶 用成功构造的基因工程菌进行扩大培养，经过逐级放大至发 酵罐。原料以碳水化合物为主，不含有毒物质，并加入少量有机 和无机氮源；能容易进行大量有效的乙肝病毒表面抗原的生产； 生产过程中，通常常温进行，操作温和，不考虑防爆问题；生产 过程中考虑防止杂菌的污染。 发酵过程中，可采用分批补料或连续流加补料以保证最优生 长和维持细胞浓度、生长速度和营养供应之间的适当平衡。可添 加诱导剂如乳糖到发酵液中去以诱导可调节启动子的表达。 发现在碳源中降低葡萄糖浓度，补充甘油和蔗糖能较明显地 改善比活值和HBsAg的相对浓度。将发酵前期、中期和后期温 度分别控制在27℃、33℃、25℃；发酵从pH4.5开始，逐步上 升到pH6；以及维持溶氧浓度在最适水平（70%饱和度），都可 以提高重组质粒的稳定性和HBsAg在发酵液中的积累。
第一代乙肝疫苗 （血源性乙肝疫苗）
cho细胞乙肝疫苗
第二代乙肝疫苗 （基因工程疫苗）
重组酿酒酵母乙肝疫苗 （第一代重组酵母乙肝疫苗 ）
重组汉逊酵母乙肝疫苗
（第二代重组酵母乙肝疫苗）
3.汉逊酵母为甲基营养型酵母，基因组易操作，培养基廉价，有分泌型表达模式，正确的 折叠和修饰，产量理想，发酵液产出杂蛋白少，产物易于纯化，无热源和其他病原体，安 全性好
重组乙肝疫苗(汉逊酵母)的 介绍
目录
1.背景介绍 2.重组酵母构建 3.菌种制备和发酵 4.分离纯化 5.纯度测定工艺 6.疫苗的保存
背景介绍
1.乙肝病毒的感染可导致慢性肝脏疾病甚至肝癌的发生。我国乙肝感染率为60%，乙肝表 面抗原携带率约为10%，有约1.2亿人携带乙肝病毒。乙肝病毒中决定乙肝病毒抗原性的蛋 白是乙型肝炎病毒（HBV薄膜蛋白），主要包括，乙肝病毒表面抗原（HBsAg）,前S1抗 原和前S2抗原 2. 乙肝疫苗的发展：
疫苗保存
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存12个月，但当温度升高后，效力很快降低。 在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者几个小时，非常不利于在室温下运输。为了使疫苗 的稳定性提高，可用冻干的方法使之干燥。这样，疫苗的有效期往往可延长1倍或以上，在 室温下其效价的损失亦较慢。 冻干要点是： （1）冷冻，即将疫苗冷冻至共熔点以下。 （2）真空升华，即在真空状态下降水分直接由固态升华为气态。 （3）升温缓慢，即升温的过程尽量缓慢，不使疫苗在任何时间下有融解的情况发生。 （4）冻干好的疫苗应在真空或充氮气后密封保存，使其残余水分保持在3%以下。这样的 疫苗能保持良好的稳定性。