实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定
谷丙转氨酶活力测定
谷丙转氨酶活力测定（改良赖氏法）一，实验目的掌握血清丙氨酸氨基转移酶（ALT ，也称谷丙转氨酶，GPT ）活性测定的原理。
熟悉转氨酶活性测定的操作方法。
了解测定血清丙氨酸氨基转移酶活性的临床意义。
二，相关理论体内蛋白质处于不断降解与合成的动态平衡食物蛋白质经消化吸收的氨基酸和体内组织蛋白质降解产生的氨基酸混在一起，分布于体内各处，作为参与代谢的氨基酸库氨基酸分解代谢的主要反应是脱氨基作用肝脏的脱氨基方式有:氧化脱氨基,氨基转换作用及联合脱氨基氨基转移酶转氨酶： 催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT 又称丙氨酸转氨酶alanine aminotransferase ALT三．转氨作用的意义正常时转氨酶主要分布在细胞内，血清中酶活力很低 GOT 以心脏细胞中活力最大，其次为肝脏细胞 GPT 则以肝脏细胞中活力最大谷丙转氨酶的临床意义如果GPT 血清值超过正常上限2－3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能。
参考范围：0-50 U/L ，卡门氏单位0-25 KarU 四．酶活力单位（U ，active unit ）国际单位：61年酶学委员会建议使用统一单位，在特定条件下，1分钟内转化1 μmol底物所需的酶量，称为一个国际单位（IU ，又称U ）1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm ，光径1cm 的条件下，1ml 血清使反应液的吸光度下降0.001的转氨酶活性。
卡门氏单位和国际单位换算1 IU/L ＝2.1 KarU 五，实验原理血清中的丙氨酸转氨酶（ALT ），在37℃、pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量，亦即与ALT 活性的高低成正比关系。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
一、实验目的
掌握谷丙转氨酶的测定方法。
二、实验原理
谷丙转氨酶作用于丙氨酸及α-酮戊二酸，生成谷氨酸与丙 酮酸。丙酮酸与2.4-二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此 物在碱性溶液呈红棕色，与经同样处理的标准丙酮酸比色， 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。
C O O H 500：标准丙酮酸浓度 2.
37℃ 水浴5 分钟
0.1
0.1（标准丙酮酸） 0.1
混匀后 37℃水浴 准确保温30分钟
0.1（H2O）
0.5
0.5
0.5
0.5
——
——
0.5
0.5
混匀后 37℃水浴 准确保温20分钟
各加5ml ，混匀，静置10min，读A 520nm 0.000
六. 附注
➢2.4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异 性的，α-酮戌二酸也能与2.4-二硝基苯肼作用而 显色。 ➢2.4-二硝基苯肼身也有类似的颜色，因此空白 管颜色较深。
2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g）
掌握谷丙转氨酶的测定方法。
C H 4-二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异性的，α-酮戌二酸也能与2. 2 2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g） C H 2 C H 3 5μg 丙酮酸为一个谷丙转氨酶活性单位。
S ×2.
C H N H 新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏） 2 5：谷丙转氨酶换算单位 C O O H 2）每g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（U/g）
四. 实验试剂
1.标准丙酮酸 现配 2.谷丙转氨酶底物 4℃，1周
二硝基苯肼溶液
6.新鲜肝脏（购买或取活的小白鼠肝脏）
五、实验步骤
1.肝匀浆
处理：20g 肝先用生理盐水洗净，滤纸吸干水，再用预冷的0.1M pH7.4 PB捣
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶的测定实验报告引言：血清谷丙转氨酶（AST）是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，主要参与氨基酸代谢过程。
AST的测定在临床上具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
本实验旨在通过酶促动力学方法测定血清中AST的活性，并分析实验结果。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 血清标本：从健康志愿者采集的血样。
- AST测定试剂盒：包括底物、辅酶、酶标试剂等。
- 酶标仪：用于测定底物的光吸收值。
2. 实验方法：- 步骤一：标定酶标仪将已知浓度的AST酶标溶液分别加入不同的试管中，测定其对应的光吸收值，建立标准曲线。
- 步骤二：制备样本将采集到的血清标本离心，取上清液，稀释至适宜浓度。
- 步骤三：测定AST活性将标定好的试剂和稀释后的血清标本加入试管中，混匀后，放入酶标仪中测定吸光度。
- 步骤四：计算AST活性根据标准曲线，计算出各个样本的AST活性。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一系列样本的AST活性数据。
根据标准曲线，我们可以计算出每个样本的AST活性，并进行进一步的分析。
首先，我们可以观察到不同样本之间AST活性的差异。
正常情况下，AST活性在一个相对稳定的范围内，超出该范围可能提示肝脏功能异常或疾病存在。
因此，通过测定AST活性，我们可以初步判断一个人的肝脏健康状况。
其次，我们还可以对不同条件下AST活性的变化进行研究。
例如，我们可以比较不同性别、不同年龄段、不同体重指数的人群的AST活性是否存在差异。
这样的研究有助于进一步了解AST在人体内的生理变化和代谢过程。
此外，我们还可以将AST活性与其他临床指标进行关联分析。
例如，我们可以比较AST活性与肝功能指标、炎症指标等之间的关系。
这些关联分析可以为临床诊断和治疗提供重要的参考依据。
总结：通过本实验，我们成功地测定了血清中AST的活性，并对实验结果进行了分析和讨论。
AST的测定在临床中具有重要意义，可以用于评估肝脏功能和诊断肝脏疾病。
血清谷丙转氨酶活力测定
血清谷丙转氨酶活力测定目的和要求了解转氨酶的性质及临床意义。
掌握用测定试剂盒方法测定谷丙转氨酶（GP T或ALT）活力。
原理在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。
此过程可用下式表示：本实验以丙氨酸的氧化脱氨为例，测定谷丙转氨酶活性。
在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α–酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。
此反应可逆，平衡点近于1。
无论正向或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可测定生成的α–酮酸，因此可有多种测定方法。
本实验以丙氨酸及α–酮戊二酸作为谷丙转氨酶（GP T或ALT）作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。
丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸–2，4–二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439～530nm，可用于测定丙酮酸含量。
α–酮戊二酸也能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯稍有差别，在520nm波长比色时，α–酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。
经转氨酶作用后，α–酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长520nm处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α–酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以籍以测定谷丙转氨酶的活力。
但是，由于在实验中不宜有过多的α–酮戊二酸以降低其对显色的干扰，因此，对于作为底物的α–酮戊二酸浓度作了一定的限制，从而不能保证酶反应充分进行，以致丙酮酸产量与酶之间的关系并不始终成一直线关系。
当酶量增大时，曲线斜率减小。
因此在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释后再进行测定。
另外，2，4二硝基苯肼对此显色反应也有一定的干扰，因此，在制作丙酮酸标准曲线时，虽没有加α–酮戊二酸，但是丙酮酸二硝基苯腙的吸光度与丙酮酸含量之间的关系也并不始终呈一直线关系，丙酮酸含量增大时，曲线斜率降低，因此，必须采用标准曲线中呈现出直线关系的部分来测定丙酮酸的生成量。
分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力实验原理的教学
在医学实验中，测定血清谷丙转氨酶（AST）活力是一项常见的实验项目。
AST是一种存在于细胞质和线粒体中的酶，其活力的变化与肝脏疾病、心肌梗塞等疾病有关，因此对其活力的测定具有重要的临床意义。
分光光度法是一种常用的测定AST活力的方法，其原理简单、灵敏度高，被广泛应用于实验室教学和临床实验中。
本文将介绍分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的教学方法及实验原理。
二、实验原理1. 原理概述分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的原理是通过测定NADH在340nm处的吸光度变化来间接测定AST的活力。
在AST催化下，谷丙酮酸被转化为丙酮酸，同时NADH被氧化为NAD+，在这个过程中，NADH的量减少，其在340nm处的吸光度也随之下降。
通过测定NADH在340nm处的吸光度变化可以间接测定AST的活力。
2. 实验步骤（1）样品制备：将待测血清标本离心沉淀，取清澈液体作为实验样品。
（2）反应体系配置：在离心管中依次加入0.1mol/L磷酸缓冲液、0.1mol/L谷氨酰胺、0.005mol/L的NADH和待测血清标本，将混合液置于37℃水浴中预温。
（3）光度计调零：将光度计调零，设置吸光度波长为340nm。
（4）反应开始：向预温的混合液中加入谷丙酮酸，开始计时测定吸光（5）记录数据：间隔一定时间（例如30秒）记录一次吸光度值，直至吸光度不再发生变化。
三、教学方法1. 理论讲解：在实验前，对分光光度法的原理进行详细的讲解，包括NADH在340nm处的吸光度变化与AST活力的关系，以及实验的步骤和注意事项。
2. 演示操作：老师可以进行实际的操作演示，展示如何配置反应体系、如何操作光度计、如何记录数据等。
3. 学生操作：让学生分组进行实验操作，指导学生合理分配实验任务，注意安全操作，并及时解答学生在实验中遇到的问题。
4. 数据分析：引导学生利用实验数据进行分析，计算得出血清谷丙转氨酶活力的结果，并进行讨论和总结。
四、实验结果分析通过分光光度法测定AST活力的实验，可以得到待测血清样本在一定时间内NADH在340nm处的吸光度值变化曲线。
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在代谢过程中的重要作用。
2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 掌握分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力的操作技能。
二、实验原理转氨酶是一种广泛存在于生物体内的氨基转移酶，能催化氨基酸的氨基与酮基酸的酮基互换。
在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
其中，谷丙转氨酶（ALT）是人体内最重要的转氨酶之一，主要存在于肝脏细胞内。
当肝脏发生病变时，如肝炎、心肌梗死等，血清中ALT活力常显著增加，因此在临床诊断上，ALT活力的测定具有重要的意义。
本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶活力，通过检测ALT催化丙氨酸与酮戊二酸反应生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应生成的丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，来计算酶的活力。
三、实验材料1. 仪器：分光光度计、离心机、恒温水浴锅、移液器、试管等。
2. 药品与试剂：丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼、NaOH、标准ALT溶液、血清样本等。
四、实验步骤1. 准备工作：将所有药品与试剂按照实验要求进行配置，确保实验所需的药品与试剂质量合格。
2. 标准曲线制作：将标准ALT溶液按照实验要求进行稀释，制成一系列不同浓度的标准溶液。
分别取等体积的标准溶液和2，4-二硝基苯肼溶液，混合后加入NaOH，进行显色反应。
在560nm波长下，测定吸光度值，以ALT浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 实验测定：取血清样本，按照实验要求进行稀释，分别加入丙氨酸、酮戊二酸、2，4-二硝基苯肼和NaOH，进行显色反应。
在560nm波长下，测定吸光度值。
4. 数据处理：将实验测定的吸光度值代入标准曲线，计算出血清ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，线性范围为20～100U。
2. 实验测定：根据实验数据，计算血清ALT活力，结果为X U/L。
3. 结果分析：根据血清ALT活力值，判断肝脏功能是否正常。
血清谷丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)
【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman） 分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。
血清谷—丙转氨酶活性的 测定（改良赖氏法）
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作 方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
【实验原理（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝 醌化合物而影响测定结果，但因其量不多，加之对505nm 的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强，尤其用 标准曲线作测定时，所用的酶活性单位通过卡门氏分光光 度速率法矫正，摈弃了赖氏法一些固有弊端，结果比其他 比色法准确。故卫生部临检中心建议国内无条件使用连续 监测法的单位使用赖氏法。1981年全国常规生化检验方法 学术讨论会认为赖氏法测定ALT活性较为合理，全国肝炎 协作会议也建议统一使用改良赖氏法。
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S管和U管进行双管平行操
作。先做对照管和测定管，在30min保温期间再做空白管和标准管。
【实验结果】 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在 坐标纸上以上表中An－A 0之值为纵坐标，相应的 酶活性的卡门氏单位为横坐标作图，即得赖氏法 测定ALT的标准曲线 2.标本中ALT活性结果 ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU－ AB)，便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 ⑵计算 将实验测得的AU－AB 、AS 代入下面计 算公式，即可算得标本中ALT活性
血清谷丙转氨酶的测定实验报告
血清谷丙转氨酶的测定实验报告血清谷丙转氨酶（ALT）是一种存在于肝脏细胞内的酶，其测定可以作为肝脏功能的重要指标。
本实验旨在通过对血清中ALT水平的测定，来了解实验对象的肝脏功能情况，为临床诊断和治疗提供参考依据。
实验材料与方法。
1. 实验材料：实验对象血清样本。
ALT测定试剂盒。
生化分析仪器。
2. 实验方法：取实验对象血清样本，离心获得血清。
使用ALT测定试剂盒，按照说明书进行操作。
将混合溶液加入生化分析仪器，进行测定。
实验结果与分析。
经过实验测定，得到实验对象血清中ALT的浓度为X U/L。
根据正常参考值范围，我们发现实验对象ALT水平略高/正常/异常。
结合实验对象的临床症状和其他检查结果，可以初步判断实验对象可能存在肝脏功能异常/疾病。
实验结论。
本实验结果提示实验对象存在肝脏功能异常/疾病的可能性较大，但仍需结合临床症状和其他检查结果进行综合分析和判断。
在临床实践中，我们应该重视对肝功能的监测和评估，及时发现和干预肝脏疾病，保护患者的健康。
实验注意事项。
1. 实验操作过程中应严格按照试剂盒说明书进行，避免操作失误影响实验结果的准确性。
2. 实验前应检查试剂盒和仪器的有效期和质量，确保实验材料的可靠性。
3. 实验过程中应注意个人防护，避免接触血清样本和化学试剂造成伤害。
4. 实验结果应结合实际情况进行综合分析，避免片面性的结论和误导。
本实验结果仅供参考，具体诊断和治疗需由专业医生进行判断和指导。
希望本实验结果能为临床医学研究和实践提供一定的参考价值。
以上是本次血清谷丙转氨酶的测定实验报告，谢谢阅读。
实验五：改良Mohun法测定谷-丙转氨酶活性 南京医科大学
0.5
－
－
－
丙酮酸 0.4
0.1
0.1
50 ug/ ml
－
混匀, 37℃水浴准确保温30min
0.5
0.5
0.5
0.5
谷-丙转氨酶底物液
0.4mol/L NaOH溶液
－
0.5
－
－
混匀, 37℃水浴保温10min
5.0
5.0
5.0
5.0
混匀, 室温静置10min, 520nm比色测吸光度A. 用空白管调零,测定标准管吸光度;用对照管调零,测定测定管吸光度
37℃保温条件下与底物作用30min后，每生成2.5ug的丙酮
酸为1谷-丙转氨酶单位，正常值为2-40单位/ml。
三、实验步骤：
试剂 (ml)
0.1mol/L 磷酸盐缓冲液
谷-丙转氨酶底物液 血清(肝匀浆)
2, 4-二硝基苯肼溶液
取干燥大试管4支，标号
测定管
0.4
对照管
0.4
标准管
0.6
Байду номын сангаас空白管
1.0
A档 拉杆2、3、4档 测吸光度： 标准管、测定管
休息状态：拉杆1档 A=1.-----
四、结果、讨论：
谷丙转氨酶活性单位/每毫升肝匀浆=
m （A测定管 /A标准管 × 标准管中丙酮酸含量）
×1
2.5
0.1
m标准管中丙酮酸含量 = V标准管×C标准管 (0.4 ml × 50 ug/ ml)
五、注意事项：
1 、保温温度和时间要精确， 即谷丙转氨酶发挥催化作用环境
2 、概念：酶活性单位
3、 微量移液器的使用 P4
（1） 套吸头 （2） 吸取溶液： 按到第一档，垂直进入液面（0.5cm）
生物化学实验谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定
谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定一、[实验目的]1.用纸层折法观察肝脏丙转氨酶ALT的转氨作用；2.用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力；3.学习治疗检测SGPT的方法及原理；4.了解检测肝损伤模型的制备及SGPT在科研中的应用。
二、[仪器与试剂]1．实验材料动物肝脏2．实验试剂（1）0.9%NaCl溶液（2）海砂（3）1%谷氨酸溶液（1%KOH溶液中和）（4）1%丙酮酸钠溶液（用1%KOH溶液中和）（5）0.1%KHCO3溶液（6）0.025%一溴乙酸溶液（用1%KOH中和）（7）2%乙酸溶液（8）酚的饱和水溶液：将2份酚和2份水（按重量计算）混合，放入分液漏斗中，振荡。
静止24h以后分层，将下部酚层放入瓶中备用。
新配制的酚展层剂可以反复使用1周。
（9）0.1%水合茚三酮的正丁醇溶液（10）0.1%标准谷氨酸溶液（11）0.1%标准丙氨酸溶液（12）1%KOH溶液谷丙转氨酶活性的鉴定（纸层析法）一、[实验原理]观察肌肉糜中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。
通过纸层析法检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。
为防止丙酮酸被肌肉糜中的其它酶所氧化或还原，在反应系统中加入了抑制剂溴乙酸。
二、[实验操作]1.谷丙转氨酶提取液制备：2g肝脏+0.9%NaCL 6mL+海砂 200mg，在低温下，研磨成浆，用稀薄的脱脂棉过滤，得提取液（滤液不清）。
2.转氨作用取试管2支，按下表加入试剂，加入试剂的单位为mL加脱脂棉塞，45℃水浴，1.5h，时时振荡内容物沸水浴2min，使蛋白质完全沉下，过滤，作层析3.纸层析操作方法取圆形层析滤纸1张，在圆心处用圆规绘出直径为3cm的同心圆（滤纸不可以折），通过中心将滤纸绘成四等分扇形。
用毛细管点样2-4次（直径不超过2mm），在滤纸的圆心上剪一小孔，直径约1-2mm，取一小滤纸条，将下端剪成刷状，在卷成灯芯插入圆形小孔，不能使灯芯突出纸面，将圆形滤纸平放在盛有层析液（水饱和酚）培养皿上，使灯芯向下与溶剂接触，用大小相同的培养皿盖在滤纸上，溶剂通过灯芯上升到滤纸上向四周展层，直到溶剂前沿移至距滤纸边缘约1cm处时停止（展层时间为1h），80-100℃烘箱干燥，喷洒水合茚三酮的正丁醇溶液，80-100℃显色。
实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定
实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定【目的和要求】了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，学习转氨酶活力测定的原理和方法。
【原理】生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。
它们催化的反应如下。
正常人血清中只含有少量转氨酶。
当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。
测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法测定。
从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。
【操作方法】2,4-硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。
底物中的α-酮戊二酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。
因此，在制作标准曲线时，须加入一定量的底物，（内含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。
先将试管置于37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。
向各管内加入0.5ml2，4-二硝基苯肼溶液后再保温20min，最后，分别向各管内加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。
在室温下静置30min，以0号管作空白，测定520nm的光吸收值。
用丙酮酸的微摩尔数为横坐标，光吸收值为纵坐标，画出标准曲线。
2．酶活力的测定：取2支试管并标号，用第1号试管做为未知管，第2号试管做为空白对照管。
各加入谷丙转氨酶底物0.5ml,置于37℃水浴内10min，使管内外温度平衡。
取血清0.1ml加到第1号试管内，继续保温60min。
到60min时，向两支试管内各加入2，4-二硝基苯肼试剂0.5ml，于37℃保温20min,然后再向2支管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。
《生物化学试验》实验五：改良Mohun法测定谷-丙转氨酶活性
临床意义
用本法测定血ALT正常值为40 U/ml以下
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细胞 受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清中ALT 活性增高。 测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。 显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死， 中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞， 轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。
glutamate pyruvate
在520nm波长测定其光密度，与经同样处理标准
丙酮酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性。
pyruvate
2, 4-dinitrate phenylhydrazine
(brown) pyruvate dinitrate
phenylhydrazone
血清谷-丙转氨酶活性单位定义：每毫升血清在pH值7.4，
复习分光光度计的使用
（1） 开机，调波长，预热15-20分钟 （2）将待比色溶液倒入比色杯 • 高度2/3 - 4/5比色杯 • 手握毛面，注意光面整洁 • 依次放入样品室（空白管放第一槽，毛面朝向操作者）
（3）测定
T档 拉杆0档
调T100% ： 空白管
T档 拉杆1档
调T 0%, 转为A档 A=1.-----
1 、保温温度和时间要精确， 即谷丙转氨酶发挥催化作用环境
2 、概念：酶活性单位
3、 微量移液器的使用 P4
（1） 套吸头 （2） 吸取溶液： 按到第一档，垂直进入液面（0.5cm）
缓慢松开控制按钮，使之慢慢回到初始位置。 （3）移入试管中：吸头贴壁并有一定角度，将溶液全部吹出。
吸头弃于烧杯中，微量移液器放回盒内。
1.0
0.5
－
－
－
测定转氨酶活力的实验报告
测定转氨酶活力的实验报告测定转氨酶活力的实验报告引言：转氨酶是一类重要的酶，广泛存在于生物体内，参与多种生物化学反应。
通过测定转氨酶的活力，可以了解生物体内的代谢情况，对疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本实验旨在通过测定转氨酶的活力，探究其在生物体内的作用及其相关机制。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康的小鼠作为实验对象。
2. 试剂：包括转氨酶检测试剂盒、生理盐水、麻醉剂等。
3. 仪器：分光光度计、离心机等。
实验步骤：1. 将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验组小鼠经过麻醉后，采集血液样本，离心分离血清。
3. 对照组小鼠同样采集血液样本，离心分离血清。
4. 使用转氨酶检测试剂盒，按照说明书进行操作，测定血清中转氨酶的活力。
5. 使用分光光度计，测定各组样本的吸光度值，并计算相应的转氨酶活力。
6. 对实验结果进行统计学分析。
实验结果：实验组小鼠的转氨酶活力明显高于对照组小鼠。
经过统计学分析，两组之间的差异具有显著性。
讨论：转氨酶活力的测定结果表明，在实验组小鼠中，转氨酶的活力明显增强。
这可能是由于实验组小鼠受到了某种刺激，导致转氨酶的合成和释放增加。
转氨酶在生物体内参与氨基酸代谢和脂肪酸代谢等重要过程，其活力的增强可能与这些代谢通路的活跃有关。
转氨酶活力的测定对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
例如，肝功能异常常常伴随着转氨酶活力的改变。
通过测定转氨酶活力，可以及早发现肝脏疾病，并进行相应的治疗。
此外，转氨酶活力的测定还可以用于评估药物的肝毒性，指导药物的使用和剂量调整。
然而，需要注意的是，转氨酶活力的测定结果受到多种因素的影响。
例如，实验条件的控制、样本的保存和处理等都可能对结果产生影响。
因此，在进行转氨酶活力的测定时，需要严格控制实验条件，并进行多次重复实验，以确保结果的准确性和可靠性。
结论：通过测定转氨酶的活力，我们可以了解生物体内的代谢情况，并对疾病的诊断和治疗提供重要参考。
血清谷丙转氨酶ALT(精)
光度。由测得的吸 A 光度在曲线上查得
试样溶液中待测组
分的浓度，最后计
算得到试样中待测
组分的含量。
0
浓度C
几点注意：
(1) 理想的标准曲线应为：用不同浓度标准 溶液所测得的吸光度对浓度作图时，是 一条斜率接近于1通过原点的直线；
(2) 标准溶液浓度范围应在被测物质浓度的 一半到二倍之间；
(3) 吸光度在0.05---1.0之间为宜。
A样 = KC样L
A标
KC标L
则：
C样 =
A样 A标
C标
2. 标准曲线法
(1) 配制一系列不同
含量的待测组分的 吸
标准溶液，以不含
光 度
待测组分的空白溶 A
液为参比，测定标
准溶液的吸光度。
并绘制
吸光度—浓度曲线
0
浓度C
(2) 得到标准曲线
（工作曲线），然
后再在相同条件下 吸
测定试样溶液的吸
光 度
四、操作步骤
五、注意事项
1.血清样品的测定需在显色后30分钟内完 成。
2.在血清中加入底物后，应准确记时。
பைடு நூலகம்
六、实验的结果
• 1.第一组同学绘制标准曲线 • 2.其余组的同学做ALT活性的测定 • 实验报告要求2项都完成
七、讨论与小结
实验三
血清谷丙转氨酶（ALT) 活性的测定
一、实验目的：
• 进一步掌握分光光度法基本原理和应用 • 通过实验, 理解酶促反应的原理 • 掌握反应原理、操作步骤及标准曲线的
绘制。
二、原 理
三、方法
分光光度法----标准曲线法
定量分析方法
1. 对比法
将标准与样品分别在相同条件下显色，测 定其吸光度。因是相同物质在相同条件下 测定，故可按下式计算出样品的浓度：
临床检测--谷丙转氨酶活性的测定
临床检测--谷丙转氨酶活性的测定临床检测是医学领域中非常重要的一部分，通过检测患者的生物样本中的各种生化指标，可以用来评估患者的健康状况和疾病的发展程度。
谷丙转氨酶（alanine transaminase，简称ALT）是一种重要的生物标志物，常用于评估患者的肝功能。
ALT是一种存在于细胞质中的酶，其主要在肝脏中和一部分在心肌、脾脏、肾脏中含量较低。
正常情况下，ALT的活性比较低，当肝细胞受到损伤时，ALT会被释放入血液中，导致血液中ALT活性的升高。
因此，通过检测血液中的ALT活性可以间接地了解患者的肝脏功能状况和肝细胞的损伤程度。
谷丙转氨酶活性的测定方法有多种，常用的方法有光度法、比色法和酶动力学法等。
其中，最常用的方法是利用光度法进行测定。
这种方法通过测量分析物的吸光度来确定其浓度，从而获得谷丙转氨酶活性的结果。
光度法的测定原理是谷丙转氨酶与特定底物反应生成特定产物，这种产物在特定波长下具有特定的吸光度。
通过测量产物的吸光度可以计算出样本中的谷丙转氨酶活性。
光度法测定谷丙转氨酶活性通常需要使用专用的仪器设备，如分光光度计、酶标仪等。
首先，需要准备好标准品和待测样品。
标准品是已知浓度的谷丙转氨酶，其活性单位为每升（U/L）。
待测样品可以是血浆或血清，通常需要先将其离心去除悬浮物，获得清晰的样本。
测定时，将待测样品和标准品分别加入反应试剂中，反应试剂含有特定的底物和辅酶。
然后，在恒定温度下，将反应混合物置于光度计或酶标仪中进行反应，反应时间一般为30分钟。
反应结束后，测定光度计读取每个反应混合物的吸光度并记录下来。
根据标准品的测定结果，可以建立起标准曲线。
标准曲线是以标准品浓度为X轴，吸光度为Y轴所绘制的曲线。
然后，利用待测样品的测定结果和标准曲线，可以计算出待测样品中谷丙转氨酶的活性。
在进行谷丙转氨酶活性测定时，需要注意一些技术细节。
首先，样本的处理过程中需要注意保持样本的稳定性和完整性，避免悬浮物的干扰。
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实验五血液中谷丙转氨酶活力的测定
【目的和要求】
了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，学习转氨酶活力测定的原理和方法。
【原理】
生物体内广泛存在的氨基移换酶也称转氨酶，能催化α-氨基酸的α-氨基与α-酮基酸的α-酮基互换，在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中有重要作用。
转氨酶的最适pH接近7.4，它的种类甚多，其中以谷氨酸-草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶）和谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶）的活力最强。
它们催化的反应如下。
正常人血清中只含有少量转氨酶。
当发生肝炎，心肌梗死等病患时，血清中转氨酶活力常显著增加，所以在临床诊断上转氨酶活力的测定有重要意义。
测定转氨酶活力的方法很多，本实验采用分光光度法。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸α-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法测定。
从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。
【操作方法】
2,4-硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙。
底物中的α-酮戊二酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成α-酮戊二酸苯腙。
因此，在制作标准曲线时，须加入一定量的底物，（内含α-酮戊二酸）以抵消由α-酮戊二酸产生的消光影响。
先将试管置于37℃恒温水浴中保温10min以平衡内外温度。
向各管内加入0.5ml2，4-二硝基苯肼溶液后再保温20min，最后，分别向各管内加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。
在室温下静置30min，以0号管作空白，测定520nm的光吸收值。
用丙酮酸的微摩尔数为横坐标，光吸收值为纵坐标，画出标准曲线。
2．酶活力的测定：取2支试管并标号，用第1号试管做为未知管，第2号试管做为空白对照管。
各加入谷丙转氨酶底物0.5ml,置于37℃水浴内10min，使管内外温度平衡。
取血清0.1ml加到第1号试管内，继续保温60min。
到60min时，向两支试管内各加入2，4-二硝基苯肼试剂0.5ml，于37℃保温20min,然后再向2支管中加入0.4mol/L氢氧化钠溶液5ml。
在室温下静置30min后，测定未知管的520nm波长光吸收值（显色后30min至2小时内其色度稳定）。
在标准曲线上查出丙酮酸的微摩尔数。
（用1μmol丙酮酸代表1.0单位酶活力）。
计算每100ml血清中转氨酶的活力单位数。
【试剂和器材】
一`试剂
1．试管及试管架
2．吸管
3．恒温水浴
4．分光光度计
二`器材
1．0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）
2．2.0μmol/ml丙酮酸钠标准溶液。
取分析纯丙酮酸钠11mg溶解于50ml磷酸缓冲液内[当日配制]。
3．谷丙转氨酶底物。
取分析纯α-酮戊二酸29.2mg DL-丙氨酸1.78g克置于小烧杯内，加1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L 盐酸调整pH至7.4后，加磷酸缓冲液至100ml。
然后加氯仿数滴防腐。
此溶液每毫升含α-酮戊二酸2.0μmol，丙氨酸200μmol。
[在冰箱内可保存一周]。
4．2，4-二硝基苯肼溶液。
在200ml锥形瓶内放入分析纯2，4-硝基苯肼19.8mg，加100ml 1 mol/L盐酸。
把锥形瓶放在暗处并不时摇动，待2，4-二硝基苯肼全部溶解后，滤入棕色玻璃瓶内置[冰箱内保存]。
5．0.4mol/L氢氧化钠溶液。
6．人血清[冰箱内保存]。