肝脏谷丙转氨酶活力测定

实验八 肝脏谷丙转氨酶活力测定

实验类型：验证性实验

相关知识

1. 酶活力：

2. 酶活力单位(即酶含量的多少)

国际单位 习惯单位：谷丙转氨酶在37度与底物作用30min 后，能产生2.5ug 的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位 3.转氨酶

4 谷丙转氨酶

一、 实验目的

1． 了解转氨酶的性质及临床意义 2． 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法

二、实验原理

丙氨酸及α－酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。

丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm ，可用于测定丙酮酸的含量。

α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm 波长比色时，丙酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。

在520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。

三、实验器材、试剂、材料 1． 新鲜猪猪脏

2． 722型分光光度计、剪刀、吸管

3． 标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）；0.02%2,4－二硝基

苯肼；0.4mol/L NaOH 溶液

2 ＋

辅基为磷

2 2 + + ‘ ‘

四、实验操作步聚

1.肝匀浆制备

（1）将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲

液，制成10%肝匀浆。（每四组1份）

（2）吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）

4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份）

2.谷丙转氨酶活力测定（每组做1份）

取试管4支按下表加液

五、实验结果与讨论

2.每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物

作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位）

3.每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。