课程论文(刘英超修订)

青岛农业大学本科生课程论文论文题目番茄黄化曲叶病毒病防治与抗性育种的研究学生专业班级园艺08级一班学生姓名（学号）刘英超（20083221）指导教师王富完成时间 2011年12月3日2011 年 12 月3 日课程论文任务书学生姓名刘英超指导教师王富论文题目番茄黄化曲叶病毒病防治与抗性育种的研究论文内容（需明确列出研究的问题）：综述了番茄黄化曲叶病毒的病害症状及防治措施；综述了番茄黄化曲叶病毒的生物学特点；综述了番茄黄化曲叶病毒抗病性的鉴定方法；综述了抗性品种育种。

资料、数据、技术水平等方面的要求：1、参考文献不少于15篇，其中包含2篇英文文献，引用要准确；2、字数不少于3000字，论述条理清楚，结论要明确；3、番茄黄化曲叶病防治与抗性育种的研究4、格式符合学院课程论文要求，要求规范。

发出任务书日期完成论文日期教研室意见（签字）院（部）院长意见（签字）番茄黄化曲叶病毒病防治与抗性育种的研究该病毒为中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)，属于双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒（Begomovirus）病毒，因该属病毒在自然条件下只能由烟粉虱（Bemisia tabaci）以持久方式传播，又被称为粉虱传双生病毒，是一类具有孪生颗粒形态的植物DNA 病毒，广泛分布于热带和亚热带地区，在烟草、番茄、南瓜、木薯、棉花等重要经济作物上造成毁灭性危害。

一、番茄黄化曲叶病毒的病害症状及防治措施（一）危害症状染病番茄植株矮化，生长缓慢或停滞，顶部叶片常褪绿、发黄、变小，叶片边缘上卷，叶片增厚，叶质变硬，叶背面叶脉常显紫色。

生长发育早期染病植株严重矮缩，无法正常开花结果；生长发育后期染病植株仅上端叶和新芽表现症状，结果数减少，果实变小，成熟期果实着色不均匀(红不透)，基本失去商品价值。

（二）防治措施1、选择抗病品种山东、河北等蔬菜产区田间试验表明，tok-29、tok-30、tok-31、普罗旺斯605、飞天、光辉、阿库拉、忠诚、浙杂301、苏红9号等品种对番茄黄化曲叶病毒有较好的抗性。

2、培育无病毒苗育苗时注意以下几点：育苗床与大田分开;苗床土进行消毒处理;育苗床采用50-60目防虫网隔离，苗床上方进行悬挂挂黄板诱杀。

3、防治烟粉虱防治烟粉虱的措施有：在放封口设置防虫网；消除棚室周围的杂草；棚内设置黄板进行诱杀；避免连作，减少人员随意串棚；化学防治，10%吡虫啉1000~1500倍,70%吡虫啉(艾美、高红、阵风)5000倍,20%啶虫脒(阿达克5号)3000~5000 倍,1·8%阿维菌素类杀虫剂2000~3000倍液喷雾。

4、加强田间管理定植前，先将定植棚进行熏棚处理，移栽后，定植棚避免与茄科蔬菜连作，。

及时清除田间及棚内外杂草和残枝落叶，以减少虫源和减轻烟粉虱的发生，在绑蔓、整枝、打杈、蘸花和摘果等操作时，应先处理健株，后处理病、弱株，并认真观察其生长势，若有疑似症状，应及时拔除，在棚室外深埋、烧毁，结合整枝及时除去植株下部烟粉虱虫、卵枝叶。

5、及时喷洒抗病毒制剂番茄分苗、定植、绑蔓、打杈前先喷1%肥皂水加0·2% ~0·4%磷酸二氢钾或1∶20~40豆浆或豆奶粉,预防接触传染。

在定植前后各喷1次NS-83增抗剂(为混合脂肪酸组成)100倍液,能增强番茄耐病性。

田间发现病株时处立即拔除外,在发病初期(5~6叶期)开始喷药预防与治疗,药剂为3·85%病毒必克、20%病毒A、1·5%植病灵进行叶面喷雾,药后隔7d再喷1次,连续喷3次。

二、番茄黄花曲叶病毒的生物学特点研究发现，引起番茄黄化曲叶类似症状的双生病毒病害其实是由多种双生病毒造成的，而番茄黄化曲叶病毒（tomato yellow leaf curlvirus，TYLCV）仅是其中1种。

番茄是双生病毒的常见寄主，目前世界各地至少报道了57种不同双生病毒及50种待验证的双生病毒（大多数为菜豆金色花叶属begomovirus）可以侵染番茄，其中既有单组分双生病毒也有双组分双生病毒，而除单组分双生病毒番茄伪曲顶病毒属的番茄伪曲顶病毒（tomatopseudo curly top virus，TpCTV）和甜菜曲顶病毒属的番茄卷叶病毒（tomato leaf roll virus，ToLRV）外，其余的都属于菜豆金色花叶属（Begomovirus）。

根据基因组结构可分为双组分（bipartite，含有DNA-A和DNA-B）和单组分（monopartite，只含有DNA-A）双生病毒。

其中DNA-A编码与病毒的复制、包裹以及基因表达调控相关的蛋白质、DNA-B编码与病毒运动有关的蛋白质。

除泰国TYLCV分离物属于双组分的双生病毒外，其他的TYLCV分离物均属单组分双生病毒。

近年来对中国番茄黄化卷叶病毒病（TYLCCNV）和烟草曲茎病毒（TbCSV），巴基斯坦棉花曲叶病毒（CLCuV）以及秋葵黄脉花叶病毒（BYVMV）等的研究发现，这类单组分双生病毒伴随着一种新型的卫星分子，称之为DNAβ。

DNAβ对于这些病害诱导典型症状是必须的，它的复制、包裹、移动和介体传播等都依赖辅助病毒的DNA-A。

Czosnek等以以色列TYLCV-ISR分离物的序列为探针，对来自11个国家的14个TYLCV的分离物的外壳蛋白（CP）、复制相关蛋白（REP）及基因间隔区（IR）的氨基酸序列进行进化树分析，结果将病毒分为3个群体，群体1来自地中海、中东和非洲地区，群体2来自印度、远东和澳大利亚地区，群体3来自美洲地区。

在国内，刘玉乐等在广西分离到了中国番茄黄化曲叶病毒（TYLCV-CHI），该病毒含单组分基因组，可能是一种不同于其他国家和地区的新双生病毒，同其他国家地区的TYLCV同源性低。

广东番茄卷叶病毒病与中国台湾的番茄卷叶病毒病（TOLCTWV）DNA-A的序列同源性达到97.7%，而与目前中国大陆所有报道的双生病毒存在明显的差异，由此表明广东番茄卷叶病毒病是由TOLCTWV的1个分离物侵染引起的；对上海、江苏、安徽、浙江等地分离的番茄黄化曲叶病毒与东南亚国家报道的双生病毒分离物亲源关系较远，而与美国的分离物亲缘关系较近，表明该小种可能是美国或非洲TYLCV的1个分离物。

三、番茄黄花曲叶病毒抗病性的鉴定方法目前鉴定番茄黄化曲叶病抗性的方法有烟粉虱传毒、嫁接接种、农杆菌侵染接种、基因枪轰击接种、血清学检测、PCR法等。

其中效果较好的是烟粉虱接种鉴定法和农杆菌接种法。

烟粉虱传毒包括温室中烟粉虱接种、回型笼中烟粉虱接种、露地烟粉虱接种3种类型，其中回型笼接种鉴定的准确性较高，但费时费力，进行大范围接种鉴定较困难。

温室烟粉虱接种法是最常用的接种方法，也可用于较大规模的接种鉴定。

农杆菌接种法是利用TYLCV-DNA侵染克隆，通过根癌农杆菌侵染待鉴定植株，在植物体内病毒DNA形成、复制、运输并诱发感病症状。

近年来研究已证实用农杆菌接种法可以鉴定不同野生型番茄和栽培番茄TYLCV的抗性，因此该方法可以用于抗性育种筛选。

四、抗性品种育种（一）、常规育种由于栽培番茄种内不具有TYLCV的抗性，所以为获得抗性育种亲本，需在大量的野生近缘种中进行筛选。

较早发现醋栗番茄（Solanum pimpinellifolium）和秘鲁番茄（S.peruvianum）具很高的抗性，至20世纪90年代又从智利番茄（S.chilens）和多毛番茄（S.habrochaites）中筛选到抗性材料，其植株被感染后体内病毒含量很低，不表现症状。

Pilowsky等从秘鲁番茄中筛选出PI126935并将其作为亲本与栽培番茄杂交，产生了世界上第1个抗番茄黄化曲叶病的商业杂交种TY2-20。

该品种虽然不能完全免疫TYLCV，但在被侵染后能延迟症状的发生和病毒DNA的积累，仍能获得较高的产量。

其他一些抗性品种如TY-197、TY-172等也源于秘鲁番茄。

在其他近缘野生番茄资源中也发现了具有番茄黄化曲叶病抗性的种质，来自于多毛番茄中的B6013、LA386、LA1777等材料，也对TYLCV表现出较高抗性。

（二）、分子标记辅助育种最早鉴定出的抗性位点来源于智利番茄，Zamir等利用来源于普通栽培番茄种（M82-12-8）×野生智利番茄（LA1969）的BC-S1和BC-S2群体以及RFLP标记，将一个抗番茄黄化曲叶病的主效基因Ty-1定位在番茄第6号染色体上，位于着丝粒端。

另外2个修饰基因分别被定位于第7号染色体和第3号染色体上。

经验证鉴定，该位点的分子标记SSR-47，TG97可作为番茄Ty-1等位基因鉴定的标记。

Pérez等发现了另外一个可用于定位Ty-1基因的CAPS（Cleavedamplified polymorphic sequence）标记REX-1，该标记同时与番茄根结线虫病的抗性基因Mi相连锁。

（三）、基因工程育种通过基因工程培育抗性品种，目前已报道的研究主要集中在编码外壳蛋白（CP）和复制蛋白（REP）的基因上。

V1基因编码TYLCV病毒外壳蛋白，在病毒的传播过程中有很重要的作用。

Kunik等用35SCaMV启动子驱动TYLCV的CP蛋白在转基因番茄植株中表达，发现植株对该病具有较高抗性。

Zrachya等构建了以V1基因为靶基因的SiRNAs，通过接种后与对照比较表明，针对TYLCV的CP 蛋白构建的SiRNA可以提供抗性。

由C1编码的REP蛋白是复制必须蛋白，研究发现，将REP蛋白基因的5'端部分系列与IR序列相连转入番茄，后代表现出很高的抗病性。

而导入REP的反义载体得到的番茄转化植株也对TVLCV具不同程度的抗性。

而将REP不完整序列转化番茄后表达也可提供TYLCV高抗性。

Fuentes 等也构建了针对编码REP蛋白的C1基因的SiRNA载体，转化番茄后也获得了很高的抗性。

参考文献：[1]赵统敏，余文贵，赵丽萍.番茄黄化曲叶病毒病在徐州地区的发生与综合防治.江苏农业科学，2009（6）：8.[2]王富，李文丽.番茄曲叶病毒病综合防控技术.中国果菜，2009.7 (31-32)[3]秦艳琴.番茄TY病毒的发生与防治.适用技术，2010.7 (36-37)[4]李小靖，叶志彪.我国番茄黄化曲叶病发生规律和研究进展.长江蔬菜，2010（2）：1－5[5]余文贵,赵统敏,杨玛丽,赵丽萍.番茄黄化曲叶病及其抗病育种研究进展.江苏农业科技，2009, 25(4): （925-930）[6]张春奇，李红波，潘永.番茄黄化曲叶病及抗病育种研究概况.中国瓜菜，2011，24（5）：50-54[7]李廷刚，李长松.番茄黄化曲叶病毒研究进展.中国农学通报，2011,27(02):90-94[8]叶青静，周国治，王荣青，阮美颖，姚祝平，杨悦俭.番茄黄化曲叶病毒病抗性鉴定技术研究.研究报告，2011,Vol.9,No.2,210-217[9]周雪平.侵染我国番茄双生病毒种类鉴定及致病性分析[D].杭州：浙江大学，2009.[10]吴永汉,张纯胄,许方程,等.温州地区番茄曲叶病毒病发生与防治[J].中国蔬菜, 2007(5): 57-58.[11]褚栋，侯丽霞，刘国霞，等.山东省局部地区番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定[J].山东农业科学，2010（2）：13-15.[12]尹哲，杨普云，刘树生，等.番茄黄化曲叶病毒病暴发原因分析及防控对策[J].中国植保导刊，2010（4）：20-21.[13]国艳梅，杜永臣，等.番茄黄化卷叶病毒病（TYLCV）的研究进展[J].中国农业科技导报，2009，11（5）：30-35.[14]余文贵，赵统敏，杨玛丽，等.番茄黄化曲叶病及其抗病育种研究进展[J].江苏农业学报，2009，25（4）：925-930.[15]叶青静，杨悦俭，王荣青，等.番茄抗黄化曲叶病育种研究进展[J].中国农业科学，2009，42（4）：1230-1242.[16]尹哲，杨普云，刘树生，等.番茄黄化曲叶病毒病暴发原因分析及防控对策[J].中国植保导刊，2010（4）：20-21.[17]Ji Y F，Scott J W，Schuster D J，et al.Molecular mapping of Ty-4，a new tomato yellow leaf curl virus resistance locus on chromosome 3 of tomato[J].J Amer Soc Hort Sci，2009，134（2）：281-28.[18]Garcia B E，Graham E，Jensen K S，et al.Co dominant SCAR marker for detection of thebegomovirus-resistance Ty-2 locusderived from Solanum habrochaitesin tomato germplasm[EB/OL].[2008-12-28].[19] ZRACHYA A,KUMAR P, RAMAKRISHAN U, et a.l Production of siRNA targeted againstTYLCV coat protein transcripts leads to silencing of its expression and resistance to the virus[J] Transgen-ic Research, 2007, 16(3): 385-398.[20]Zrachya A,Kumar P,Ramakrishnan U,et al.Production ofsiRNA targeted against TYLCV coatprotein transcriptsleads to silencing of its expression and resistance to thevirus[J].Transgenic Research,2007,16(3):385-39课程论文成绩评定表。