小麦中胆碱酯酶的提取及其在蔬菜农药残留检测中的应用研究
蔬菜中有机磷农药残留检测方法及其应用研究
摘要论文建立了蔬菜中11 种农药多残留的气相色谱分析方法。
对NY/T761-2008《蔬菜和水果中有机磷、有机氮、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定》标准的蔬菜前处理方法进行了改进，探讨了蔬菜基质对检测的影响。
使用DB-17 毛细管柱分离，FPD 检测器进行检测。
结果显示：11 种有机磷农药分离效果好，在黄瓜、西红柿、生姜中的3 个浓度添加水平，回收率为71.2%-117.9%，相对标准偏差（RSD）为2.1%-11.2%，最低检出限为0.005mg/kg-0.06mg/kg，保留时间为6.396min-19.400min。
在各自限性范围内线性关系好（r>0.999）；使用40℃加热氮吹浓缩，可分别提高敌敌畏、甲拌磷回收率至95.00%和103.3%；在被测得13 种蔬菜中，甘蓝、娃娃菜、上海青有少量杂峰影响农药检出；韭菜有大量的基质峰干扰农药检出。
为了有效控制蔬菜农药残留提供科学依据，2009 年9 月至12 月对天河区4 家超市及1 处农贸市场进行随机抽样检测，用气相色谱法测定其中的有机磷农药。
共检测蔬菜样品64 份，其中农药残留阳性的有10 份，超标率为15.63%。
叶菜类蔬菜合格率为71.43%，而瓜菜类、根茎类和茄果类全部合格。
在11 种标的农药中，检测出5 种，其中 3 种为国家禁用农药。
论文还研究了不同清洗方法对去除蔬菜中有机磷农药残留的影响。
采用气相色谱法（GC）对经过不同方法浸泡处理的娃娃菜中敌敌畏和乐果的残留量进行分析，结果显示：除了超声波清洗之外，清水、洗涤剂以及食用碱均能不同程度的去除娃娃菜中残留的农药。
其中斧牌洗洁精对敌敌畏和乐果两种农药残留的去除效果最佳，斧牌洗洁精对两种农药的去除率为分别为84.38%和76.11%。
关键词：气相色谱（GC）；有机磷农药残留；蔬菜ABSTRACTMethods were set up for determination of 11 organ phosphorus pesticides multi-residuein vegetables by gas chromatography and define the scope of application of this method by analysis of vegetable matrix. Vegetable pretreatment method in standard of NY/T 761-2008 was modified in this paper, and DB-17 capillary column and flame photometric detector (FPD) were used. The result showed that 11 organ phosphorus pesticides were separated from each other. The fortified recovery of 11 pesticides gained from cucumber, tomato, and ginger with three spiked levels ranged from71.2% to 117.9%. The Relative standard deviation (RSD) was 2.1% to 11.2%, the Minimum detection limit of the method was 0.005~0.06 mg/kg for DB-17 column, and the Retention time was 6.396 to 19.400 minutes. The calibration curves showed good linearity with correlative coefficient of more than 0.999. Sample was heated up to 40℃ when blew by nitrogen (N2), the recoveries of Dichlorovos and Phorate would enhance to95.00% and 103.3% respectively. Among 13 vegetables detected, green pepper, baby cabbage and shanghai green have several peaks of matrix to impact detection of pesticide residues while garlic chive was found a large number of peaks interfere with the detection of pesticides.A survey of organ phosphorus pesticide in sixty four vegetable samples collected randomly from four supermarkets and one vegetable wholesale market of Guangzhou city was carried out from September to December in 2009. Gas chromatography analysis for 11 organ phosphorus pesticide residues in the samples showed that the qualification rate of leaf vegetables was 71.43%, and no investigated pesticide residue was detected in the all examined the raw melons vegetables, the root vegetables, and the solanaceous fruit vegetables. Five kinds of organ phosphorus pesticides were detected in 10 kinds of samples (64 samples) with the disqualification rate being of 15.63%, among which three prohibited pesticides for planting vegetables according to relevant laws were detected. Forbidden pesticide residue was detected with relatively high frequency in the vegetable samples.The effects of different rinsing methods on the removal ratio of organ phosphorus pesticide residues from Baby cabbage were investigated. The gas chromatography (GC) was used to analyze the pesticide residues in baby cabbage rinsed by different method. The results showed that clear water rinsing, detergent and edible alkali can remove the residual pesticide in baby cabbage at different level，except for treatment with ultrasonic. Among all these methods，d etergent with brand of Axe can remove residual pesticide effectively. The removalratio of Dichlorovos and Dimethoate was 84.38%, 76.11% by detergent with brand of Axe. Keyword：Gas chromatography; organic phosphorus pesticide residue; vegetable目录摘要 (I)Abstract ...................................................................................................................................... I I 第一章：绪论.. (1)1.1有机磷农药 (1)1.2蔬菜中有机磷农药残留现状 (2)1.3农药残留危害 (4)1.3.1农药残留对人体健康的危害 (4)1.3.2农药残留对生态系统的危害 (5)1.3.3农药对害虫天敌的危害 (5)1.3.4农药对土壤微生物的危害 (5)1.3.5农药对水环境的影响 (5)1.4蔬菜中有机磷农药的前处理方法与分析方法 (6)1.4.1农药残留的前处理技术 (6)1.4.2农药残留的分析检测技术 (7)1.5蔬菜表面有机磷农药的去除方法 (8)1.5.1物理方法81.5.2化学方法101.5.3生物方法111.6本研究的目的与意义 (11)1.7研究内容 (12)第二章蔬菜中11 种有机磷农药残留的气相色谱检测及蔬菜基质影响的研究 (14)2.1 引言 (14)2.2实验材料与仪器设备 (14)2.3实验方法 (15)2.3.1气相色谱分析条件 (15)2.3.2GC-MS 分析条件 (16)2.3.3样品提取162.3.4 净化 (16)2.4结果与讨论 (16)2.4.1种有机磷农药混合标准液色谱分离效果图 (16)2.4.2氮吹温度对敌敌畏、甲拌磷回收率的影响 (18)2.4.3不同基质对检测效果的影响 (19)2.4.4线性范围、标准曲线、检出限和保留时间 (23)2.4.5回收率和精密度实验 (24)2.5本章小节 (26)第三章广州市售蔬菜有机磷农药残留情况调查分析 (27)3.1 引言 (27)3.2实验材料与仪器设备 (27)3.3实验方法 (27)3.3.1测定方法273.3.2评定标准283.4结果与讨论 (28)3.4.1总体检测情况 (28)3.4.2不同种类农药检出率 (28)3.4.3不同类别蔬菜中农药残留情况 (29)3.4.4不同品种蔬菜中农药残留情况 (30)3.4.5不同来源蔬菜的农药残留检测情况 (31)3.5本章小节 (31)第四章：清洗方法对蔬菜中有机磷农药残留去除效果的研究 (33)4.1 引言 (33)4.2实验材料与仪器设备 (33)4.3实验方法 (34)4.3.1样品处理方法 (34)4.3.2样品前处理方法 (34)4.3.3GC 检测条件344.3.4清洗方法344.3.5农药残留率的计算 (35)4.4结果与讨论 (35)4.4.1清水浸泡时间对农药去除的效果 (35)4.4.2超声波清洗对农药去除的效果 (36)4.4.3洗涤剂浸泡对农药去除的效果 (37)4.4.4食用碱浸泡对农药去除的效果 (39)4.5本章小节 (40)结论与展望 (41)参考文献 (43)第一章绪论第一章绪论1.1有机磷农药二十世纪末，在我国农药生产种类中，杀虫剂占了农药总产量的近70%，而在杀虫剂总量中，有机磷农药又占了近70%[1]，有机磷农药在我国农药生产和使用中有着特殊的地位。
蔬菜农药残留酶法快速检测技术探讨
蔬菜农药残留酶法快速检测技术探讨摘要介绍了酶法快速检测蔬菜中农药残留技术的作用原理及其优缺点，分析了该方法使用过程中的常见问题，并提出相应的对策，以促进蔬菜及其制品的安全生产，确保人们的饮食生活不受农药残留的影响。
关键词酶法快速检测技术；蔬菜；农药残留；原理；问题；对策中图分类号 ts207.7；ts207.5+3 文献标识码 a 文章编号1007-5739（2013）14-0274-01蔬菜是与人们日常生活密不可分的农产品之一，其质量安全直接关系到人民群众的生命安全和健康。
我国政府和有关部门一直高度重视蔬菜安全问题。
同时，农药在蔬菜、水果中的残留问题也引起了人们的普遍关注。
据初步统计，全国每年发生农药中毒事件逾10万例，死亡3 200人。
因此，为了确保广大人民群众的蔬菜食用安全，采取有效的手段对蔬菜质量安全进行监测显得尤为重要。
目前，农药残留检测方法大致q可分为三大类：第1类是生物测定法（bioassay），第2类是化学分析法（chemical analysis），第3类是兼生物及化学的免疫分析法和生化检测法。
由于蔬菜、水果类鲜食农产品保存时间相对较短的特点，目前常用的方法是生化检测法中的快速检测技术——酶法。
1 酶法快速检测技术的作用原理以及优缺点1.1 有机磷农药和氨基甲酸酯农药的作用机理昆虫神经中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性被有机磷和氨基甲酸酯类农药抑制，使乙酰胆碱积累，影响正常传导，导致昆虫中毒而死。
它能与昆虫或人体中的酶（酯酶、胆碱脂酶）分子中的丝氨酸上的羟基牢固地结合，从而强烈地抑制酯酶和胆碱脂酶的活性。
以有机磷农药为例，有机磷农药与胆碱酯酶结合，阻碍胆碱酯酶分解乙酰胆碱，导致神经肌接头和体内其他部位乙酰胆碱的过量积聚，神经中毒症状继而发生。
1.2 酶法快速检测农药残留的作用原理与具体应用从生物化学的角度看，一方面，有机磷农药和氨基甲酸酯农药与乙酰胆碱是竞争性作用于胆碱酯酶，即胆碱酯酶可以与乙酰胆碱结合，催化乙酰胆碱生成乙酰和胆碱；另一方面，若胆碱酯酶与有机磷农药结合，会阻断反应[1-4]。
浅析果蔬中农药残留现状及检测技术发展
1.果蔬农药残留基本现状当前我国果蔬行业在种植过程中常使用杀虫剂、杀菌剂、除草剂等化学制剂，其中杀虫剂占比 72%、杀菌剂占比 11%、除草剂占比 15%左右。
果蔬中的农药多为以有机氯、有机磷等化学成分为主的有机物，也有含砷、硫、铅、铜等重金属元素的无机物，这些农药残留物质进入人体后会迅速被血液吸收，对大脑神经元、人体免疫机能构成损害，部分有害物质还有可能诱发器官病变、癌变，严重影响人体健康，并且对于生态环境构成破坏与威胁。
为响应国家号召与要求，近年来农业检测机构持续加强技术攻关，不同地区农业理化实验室的建设数量逐年增加，综合运用如明确检测方法步骤、控制样品制备细度、加强仪器设备维护管理、防范器皿用具交叉污染、确立空白检测值、重视检测结果计算等手段，并开发出分散固相萃取 (QuEChEＲS)前处理结合气、液质三重四级杆串联质谱检测等多种先进技术，可针对不同复杂基质进行检测，具备较强的发展潜力，极大推进了农业检验检测体系的完善建设。
伴随串联质谱技术的持续应用与推广，其灵敏度、选择性、抗干扰能力都将得到进一步优化，有条件的实验室已将飞行时间质谱(TOF－MS)和傅里叶变换质谱( FT－MS) 等高分辨质谱应用于果蔬农药的全方位扫描检测领域，增强了筛查与定性分析能力，为我国农药残留检测技术的发展与标准体系的建设创设良好发展前景。
2.果蔬多农药残留的主要分析方法2.1速测法2.1.1速测卡法农药残留速测卡又名农药残留快速检测卡、农药残留检测卡、农残速测卡。
是以国家2003年公布的农药残留快速检测的执行标准：GB/T 5009.199-2003方法为原理，根据胆碱酯酶催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有抑制作用，由颜色的变化判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
利用对有机磷和氨基甲酸酯类农药高敏感的胆碱酯酶和显色剂做成的试纸。
该试纸操作方便，灵敏度高，反应速度更快，保存时间长。
实验2 乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药
K 0K t 吸光度A实验二乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药目前有机磷、氨基甲酸酯类农药是我国大量使用的杀虫剂，虽然这类农药与过去使用的有机氯农药相比，降解速度较快，但在果蔬中的残留仍然较为严重。
由于该类农药能抑制人体内乙酰胆碱酯酶的生理活性，神经传导因此受阻，引起神经麻痹乃至死亡，对人类健康造成极大危害。
对于果蔬中的农药通常采用气相色谱等方法进行分析，但分析时间长，操作步骤烦琐，适用于实验室分析。
长期以来在大部分果蔬市场中，通常采用乙酰胆碱酯酶抑制法进行快速检测，即以乙酰胆碱酯酶作为检测试剂，采用农药残留检测仪，根据乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定果蔬样品中的残留农药。
一、 实验目的1． 了解果蔬中残留农药的分析方法；2． 掌握酶抑制分析方法的原理及操作方法； 3． 理解农药残留性评价的意义。
二、 实验原理有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，酶抑制法就是根据这一昆虫毒理学原理，对农药残留进行检测。
以乙酰胆碱为底物，在乙酰胆碱酯酶（ACHE ）的作用下，乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DNTB ）产生显色反应，使反应液呈黄色（于410nm 处有最大吸收峰）。
根据酶促反应动力学原理，在没有有机磷和氨基甲酸酯类农药存在时，底物在酶的催化作用下发生水解，反应速率可以用吸光度值随时间的变化率K 0来表示。
当有机磷和氨基甲酸酯类农药加入到酶的显色体系中时，农药抑制了酶的活性，影响显色体系的反应速度，此时体系吸光度随时间的变化率为K t ，则有机磷和氨基甲酸酯类农药对酶的活性的抑制率Y 的计算公式如下：%10000⨯-=K K K Y tK 0：空白样品的吸光度随时间变化曲线的斜率值K t ：样品溶液的吸光度随时间变化曲线的斜率值其中K 0和K t 都可通过以下过程进行推导和计算。
蔬菜中农药残留快速检测技术的应用探讨
结果 以酶被 抑 制 的 程度 （ 制 率 ） 抑 判定 ， 以 ５ ％为界限。抑制率的范围是 ０ 一１０ ０ ％ ０ ％。当蔬 菜样品提取液对酶的抑制率 ＜ ０ ５ ％时 ， 可判定样品 合格 ； 抑制率Ｉ５ ％时， ＞０ 样品为阳性结果 ， 该样品需 要重复检验 ２次以上 ， 如仍为阳性 ， 表示蔬菜 中有 高剂量有机磷 或氨基 甲酸酯类农药存在 。对 阳性 结果的样品， 可用气 相色谱仪 、 高效液相仪进一步 确定具体农药品种和确切含量 。
１ 检测的原 理和方法
１ １ 检 测原 理 ．
酶抑 制 法 是 根 据 昆 虫 毒 理 学 原 理 发 展 而 成 。 即有机磷 与氨基 甲 酸酯 类 农 药 可 特 异 性 地 抑 制 昆
２ ， — Ｃ ０／Ｃ Ｃ Ｎ Ｙ １ 农残 速测仪检测范围 Ｓ Ｐ
２１ 检 测 的蔬菜 种 类 ．
４ 结果 的计 算判定
根据样品对酶的抑制情况即抑制率判定农药
是否超 标
酶液的吸光度值 ， 吸光度值差别小的酶液为稳定性
好 的酶 液 。
底 物具 有 自动水解 的倾 向 ， 过度水解 的底物 会
４１ 检测结果计算公式 ． 抑制率（ ＝［Ａ 一Ａ）￣ ］ ０ ％ ％） （ ０ ｔ ｏ ×１ ／ ０ 式 中：ｏ △ 对照溶液反应 ３ ｉ吸光度的变化值； ｎ ｍ △ 样品溶液反应 ３ ｉ 吸光度的变化值。 ｔ ｎ ｍ
持一 致 。
迅速 。但是 ， 现时农药残留检测， 仅停 留在追溯 、 监 察农药的使用及农药残留情况的分析， 相关法规法 制的建设也未能配套完善 ， 这主要是农产品质量安
５４ 其他 注意事 项 ．
仪器应置于干燥 、 通风 的环境 中， 仪器工作 以 前， 预 热 ５一ｌ 应 Ｏ分钟 ， 仪 器 状 态 稳 定。Ｓ— 使
酶抑制率法测定蔬菜中农药残留试验分析
酶抑制率法测定蔬菜中农药残留试验分析作者：何欢来源：《新农业》2022年第18期摘要：为探究现阶段蔬菜供应市场农药残留是否超标问题，本文提出以酶抑制率法为检测手段的蔬菜农药残留试验分析。
试验以叶菜类、芸薹属类、豆类、瓜类、茄果类和根茎类蔬菜为检测方向，对19种蔬菜共3800批次进行农药残留试验分析，经扦样研磨加入酶抑制剂检测酶抑制活性的方法探究样品蔬菜中存有农药残留超标的情况。
经检测统计结果能够看出以豆类蔬菜农药超标最多，占检测份数的2.8%；以根茎类蔬菜农药残留超标最少，占检测份数的0.2%。
由此可得出现阶段蔬菜供应市场中农药残留超标现象仍普遍存在，通过试验的方式为相关监管部门提供技术检测依据。
关键词：酶抑制剂法；蔬菜；农药残留1.1 试验材料本文所提试验将使用大型菜市场供应原料为试验基础材料，采集时间为2021年8月，其中蔬菜样品按类别可分为叶菜类、芸薹属类、豆类、瓜类、茄果类和根茎类等6大类，共19个蔬菜品种。
其中叶菜类包含7个品种、芸薹属类和豆类均为3个品种、瓜类、茄果类和根茎类均为2个品种，共计检测份数为3800份（单位：批次），其中叶菜类共1400份，占总份数36.8%；芸薹属类和豆类均为600份，均占总份数的15.8%；瓜类、茄果类和根茎类蔬菜均为400份，均占总份数的10.5%。
本试验所使用的仪器与试剂有：DY-3500Plus食品速测仪、电子天平，检测试剂有提取试剂、乙酯胆碱酯酶、二硫代二硝基苯甲酸显色剂、碘化硫代乙酰胆碱底物。
1.2 试验方法样品处理：将从市场购买回来的蔬菜样品进行预处理，擦净表面泥土，用取样器取1厘米左右的方碎片，用电子天平称取叶菜类2克，非叶菜类4克。
将称取好的样品放入取样瓶中，加入20毫升缓冲液，振荡1～2分钟，倒出提取液，静置2分钟待测。
检测：对照测试，在专用反应瓶中加入3毫升缓冲液，再加入50微升显色剂和50微升酶液，混匀，37℃下放置30分钟后加入50微升底物，摇匀并立即倒入比色皿中，放入测试通道，按仪器“对照”键测试3分钟的吸光度变化值？A0。
液相色谱法检测粮油农残的研究进展
液相色谱法检测粮油农残的研究进展液相色谱法检测粮油农残的研究进展摘要：当前，我国的食品安全问题越来越受到人们的关注和重视，而粮油作为日常生活中必备的一种油品也是农残控制的一个十分重要的环节。
液相色谱法检验粮油农残也在这一过程中受到了越来越多人的关注和重视。
高效液相色谱法在应用的过程中操作相对比较简单，灵敏度也比较好，不需要大量的样品支持，所以也得到了人们的欢迎。
本文主要分析了液相色谱法检测粮油农残的研究进展，以供参考和借鉴。
关键词：粮油产品;前处理;高效液相色谱;农药残留一、引言农作物害虫防治工作中，农药发挥着十分重要的作用，但是农药残留对人体健康的危害也是非常明显的，这一问题也得到了越来越多人的关注和重视，很多国家对农药残留的监督和研究力度也在不断的加强，液相色谱法和液质联用的方法在操作上比较便捷，此外检测的精度较高，所以在农药残留的研究和检测中得到了十分广泛的应用，粮油是家庭日常用品，所以对其农药残留予以控制也是十分关键的一个内容。
二、粮油产品的前处理技术2.1传统的前处理技术农残的前处理技术主要涵盖了两个过程，一个是提取，一个是净化。
按照农药性质和样品类型的差异，我们可以选择振荡法、索氏抽提法和超声波提取法，因为在检测的过程中，样品的成分具有较强的复杂性，在对成分进行提取之后还要对杂质进行有效的处理，比较常用的就是吸附柱层析法，吸附柱当中要填充适量的活性炭和氧化铝等。
借助溶剂转换，我们可以有效的解决提取和净化过程中出现的一些冲撞。
比如我们可以采用丙酮-乙酸乙酯-正己烷等比例混合溶剂来提取油品当中的农残成分，此外还要用氮气将提取液吹干，之后还要使用乙腈进行转溶处理，此外也可以使用超声波的方式进行助溶。
在这一过程中可以将油脂和待测农残分离出来，这样也就可以有效的避免提取液中油脂含量超过标准而出现SPE净化无法得到正常的开展。
这种方式需要较长的时间，同时还有可能对环境造成污染，对人体造成伤害，检测的精确程度也无法得到充分的保证，在这样的情况下就需要对其进行改进和创新，保证检测的质量和水平。
酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留灵敏度与准确性的研究
酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留灵敏度与准确性的研究姚晓寰（深圳市计量质量检测研究院，广东深圳 518000）摘 要：本文对酶抑制法快速检测蔬菜中农药残留的灵敏度与准确性进行验证，分别使用酶抑制快速检测方法与气相色谱方法对10类50份蔬菜样品进行敌敌畏等10种有机磷农药残留量的检测。
结果表明，蔬菜中农药残留的酶抑制快速检测方法灵敏度与准确性可以满足快检需求，其对50批次实际样品的检测结果与气相色谱方法检测结果基本相符，能够满足基层市场监管部门和果蔬市场监控蔬菜质量的需求。
关键词：蔬菜；农药残留量；快速检测Sensitivity and Accuracy of Enzyme Inhibition Method for Rapid Detection of Pesticide Residues in VegetablesYAO Xiaohuan(Shenzhen Institute of Metrology and Quality Testing, Shenzhen 518000, China) Abstract: This article verifies the sensitivity and accuracy of enzyme inhibition method for rapid detection of pesticide residues in vegetables. The enzyme inhibition rapid detection method and gas chromatography method were used to detect 10 types of organic phosphorus pesticide residues such as dichlorvos in 50 vegetable samples from 10 categories. The results show that the sensitivity and accuracy of the enzyme inhibition rapid detection method for pesticide residues in vegetables can meet the needs of rapid detection. The detection results of 50 batches of actual samples are basically consistent with the results of gas chromatography, which can meet the needs of grassroots market regulatory departments and fruit and vegetable markets to monitor vegetable quality.Keywords: vegetables; pesticide residues; quick detection有机磷农药以其高效广谱、残留期短等优点，在蔬菜种植中应用十分广泛。
蔬菜有机磷农药残留快速检测方法分析
蔬菜有机磷农药残留快速检测方法分析作者：卓二妹来源：《农家科技下旬刊》2017年第05期摘要：有机磷农药能够有效起到抑制水果蔬菜中病虫害的滋生，促进农作物的健康成长的作用，但是有机磷农药对于人类和牲畜属于有害化学物质，对于环境也有一定的影响，因此蔬菜中的有机磷农药残留检测问题越来越被人们重视。
本文分析了几种不同的有机磷农药在蔬菜中残留的快速检测方法，希望能够对后期的工作开展有所帮助。
关键词：有机磷农药；农药残留；检测方法有机磷农药是农业生产过程中常用的化学农药之一，这一类化学农药在使用之后会出现残留问题，尤其是蔬菜，目前的监测办法是酶化学抑制法，灵敏度比较高，但是分析仪器比较贵重，并且需要有专业的技术人员进行分析和操作，不适合我国小规模性质的现场快速检测要求，因此为了保证蔬菜的使用质量，必须要结合实际情况采取相应的措施来检测农药残留，保证蔬菜的安全食用。
一、有机磷农药残留检测的重要作用有机磷农药属于高效的杀虫剂和除草剂，蔬菜和水果种植中一般是作用于病虫害抑制工作。
目前有机磷农药属于使用量比较大的农药之一，例如说乐果、敌敌畏等，它的化学性质是自然界容易分解，进入体内也容易分解，但是非常容易在食物性食品当中残留，尤其是水果和蔬菜。
如果大量使用有机磷农药不仅对人和动物有危害，甚至还会影响自然环境。
有机磷农药中毒之后的表现是胆碱酯酶活性降低，因为有机磷农药抑制了乙酰胆碱酯酶，引起烟碱样症状还有中枢神经系统症状，严重时中毒者会出现肺水肿、脑水肿，呼吸麻痹最后死亡。
随着人们生活水平的不断提升，食品安全问题备受关注，人们都开始注意到蔬菜、水果中的农药残留问题。
卫生部门专门调查显示，被喷洒过农药之后，周围环境中的农药成分基本降解需要100-150d，有很多成分甚至是无法降解，更不用提在水果和蔬菜中的残留农药降解时间了。
目前常用的检测方法有很多，但是有很多方法处理时间太长，同时蔬菜属于鲜食食物，储存时间较短，因此快速有效的检测方法才适用于水果、蔬菜的农药残留检测工作。
酶抑制法在蔬菜农药残留快速检测中的应用
了巨大 的经济效益 ， 同时也给环境安全和人体健康 带来 了一定威胁。近年来 ， 随着病虫害发生的频率 和强度越来越大 ， 农药品种和数量及毒性也随之不
断增 加 ，这种 恶 性 循环 造 成 生态 系 统平 衡 被 破 坏 ， 生态 环Байду номын сангаас 恶化 日益加 重 。农药 的大量使 用 与滥 用导
致农药污染问题经常发生 ， 尤其是蔬菜等食品中农 药残留直接关 系到人民群众的身体健康 ， 己成为威
胁 百姓 餐 桌 安全 的 “ 隐形 杀 手 ” ，且 有 愈 演 愈烈 之
势 。而农药残留 ， 也成为当前全社会公众关注的一 个焦点… 。降低农药对蔬菜的污染 ， 加强对农药残 留 的监测则成为 目前农业生产急需解决 的重要问题 。 因此 ， 要预防和处理农药引起 的环境 、 食 品污染 ， 及 控制农产 品中农药残 留量 的关键环节之一就是在 流通领域 中加强对农产 品中农药残留量 的快速 、 适
时、 准确 的 分 析 检 测 ， 做 好 蔬 菜 农 药 残 留检 测 及 防 控， 对 合 理 使 用农 药 、 保 护 环 境 和 保 障大 众 健 康 具
有重 要 的意 义 。
物传感器法等 。酶抑制法速测对操作人员 的要求 、 成本消耗以及后期的维护费用均较低 ， 更重要 的是 检测时间短 ，能够达到现场快速出结果 的需求 ， 易 于在基层推广等特点 ， 对滥用农药和不法商贩有较
检测时间短能够达到现场快速出结果的需求易因此要预防和处理农药引起的环境食品污染及于在基层推广等特点对滥用农药和不法商控制农产品中农药残留量的关键环节之一就是在大的威慑力21流通领域中加强对农产品中农药残留量的快速适时准确的分析检测做好蔬菜农药残留检测及防酶抑制法农药残留快速检测控对合理使用农药保护环境和保障大众健康具酶抑制法速测准确性和灵敏度尚好是近年来有重要的意义
酶抑制法在农药残留快速检测过程中的应用分析
酶抑制法在农药残留快速检测过程中的应用分析刘顺字;郭淑贞;林双娣;赖秀桃;余其峰【摘要】阐述了酶抑制农残快速检测法的原理,从样品的代表性、胆碱酯酶的活性、仪器的功能性和操作的规范性4个方面分析了影响该方法准确性的因素,针对检测结果的假阳性和假阴性问题提出了整株或粗块提取减少干扰、增敏剂提高检测灵敏度、加热破坏干扰物质和过滤消除色素影响等解决对策.%This paper expounded the principle of enzyme inhibition method in the rapid detection of pesticide residues. It analyzed the four factors affecting the accuracy from the representative of the sample, the activity of cholinesterase, instrument's functionality and operation of normative. In order to reduce the false positives and false negatives of test results, the whole or coarse extraction to reduce interference, sensitization agent to improve the detection sensitivity, heat damage interference filter material and elimination of the influence of pigment are proposed.【期刊名称】《湖南农业科学》【年(卷),期】2017(000)007【总页数】4页(P85-87,91)【关键词】酶抑制法;农药残留快速检测;应用分析【作者】刘顺字;郭淑贞;林双娣;赖秀桃;余其峰【作者单位】清远市清新区农产品质量安全监督检测中心,广东清远 511800;清远市清新区农产品质量安全监督检测中心,广东清远 511800;清远市清新区农产品质量安全监督检测中心,广东清远 511800;清远市清新区农产品质量安全监督检测中心,广东清远 511800;清远市清新区农产品质量安全监督检测中心,广东清远511800【正文语种】中文【中图分类】S481+.8农药是农产品生产种植过程中不可或缺的重要农资产品，因其残留对人畜和生态的负面影响从而引起了人们的日益重视和担忧。
实验二 乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药
K 0K t 吸光度A实验二乙酰胆碱酯酶抑制法快速测定果蔬中的残留农药目前有机磷、氨基甲酸酯类农药是我国大量使用的杀虫剂，虽然这类农药与过去使用的有机氯农药相比，降解速度较快，但在果蔬中的残留仍然较为严重。
由于该类农药能抑制人体内乙酰胆碱酯酶的生理活性，神经传导因此受阻，引起神经麻痹乃至死亡，对人类健康造成极大危害。
对于果蔬中的农药通常采用气相色谱等方法进行分析，但分析时间长，操作步骤烦琐，适用于实验室分析。
长期以来在大部分果蔬市场中，通常采用乙酰胆碱酯酶抑制法进行快速检测，即以乙酰胆碱酯酶作为检测试剂，采用农药残留检测仪，根据乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定果蔬样品中的残留农药。
一、 实验目的1． 了解果蔬中残留农药的分析方法；2． 掌握酶抑制分析方法的原理及操作方法； 3． 理解农药残留性评价的意义。
二、 实验原理有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，酶抑制法就是根据这一昆虫毒理学原理，对农药残留进行检测。
以乙酰胆碱为底物，在乙酰胆碱酯酶（ACHE ）的作用下，乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DNTB ）产生显色反应，使反应液呈黄色（于410nm 处有最大吸收峰）。
根据酶促反应动力学原理，在没有有机磷和氨基甲酸酯类农药存在时，底物在酶的催化作用下发生水解，反应速率可以用吸光度值随时间的变化率K 0来表示。
当有机磷和氨基甲酸酯类农药加入到酶的显色体系中时，农药抑制了酶的活性，影响显色体系的反应速度，此时体系吸光度随时间的变化率为K t ，则有机磷和氨基甲酸酯类农药对酶的活性的抑制率Y 的计算公式如下：%10000⨯-=K K K Y tK 0：空白样品的吸光度随时间变化曲线的斜率值K t ：样品溶液的吸光度随时间变化曲线的斜率值其中K 0和K t 都可通过以下过程进行推导和计算。
浅谈胆碱酯酶对分析有机磷农药残留的影响
浅谈胆碱酯酶对分析有机磷农药残留的影响摘要：本文阐述了目前我国农药残留快速检测技术酶抑制法在使用中存在的问题和解决途径。
并采用茭白作为样品对酶抑制法中产生假阳性的因素进行了分析与解决。
讨论了对胆碱酯酶活性产生影响并提出了胆碱酯酶的优化反应条件。
酶抑制法具有快速、简便、灵敏及低成本等优点，并已成为我国农药残留快速检测的主流技术。
关键词：农药残留酶抑制法胆碱酯酶假阳性农药残留快速检测技术在我国应用最多的是酶抑制法，利用这一原理生产的各种速测卡、速测仪具有高的专一性、灵敏性和准确性及低成本等优点，正越来越多地进入蔬菜、果品、茶叶等生产基地、农贸市场、超市及监督部门，已成为我国农药残留快速检测的主流技术，是当前和今后一段时期内农产品农药残留快速检测的首选方法之一。
1 材料与方法1.1 酶抑制法实验原理在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制值与农药的浓度呈正相关。
正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制值，通过抑制值可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
1.2 原料试剂仪器原料：茭白冲洗掉表面泥土，剪成1cm见方碎片，取样品1g放入烧杯或提取瓶中，加入5ml缓冲溶液，震荡1min～2min，到出提取液，静置3min～5min，待用。
试剂：①ph8.0缓冲溶液；②显色剂：分别取160mg二硫代二硝基苯甲酸（dtnb）和15.6mg碳酸氢钠，用20ml缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存；③底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0ml蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。
保存期不超过两周；④乙酰胆碱酯酶：用缓冲溶液溶解，3min的吸光度变化δa0值应控制在0.3以上。
摇匀后4℃冰箱中保存备用。
保存期不超过4天。
仪器：农药残留测定仪（博纳cl-biii）。
蔬菜农药残留快速检测中易出现的问题与对策
前 后 吸 光 值之 差 可 以测得 酶 活性 被 抑 制程 度 （ 抑制 用 率 表 示） 。当抑制 率 ≥７ ％时 。 明蔬 菜 中含 有某 种有 ０ 说 机磷 或 氨基 甲酸酯 类农 药 残 留 ； 当抑 制 率＜ ０ ７ ％时 ， 为 合格。
蔬菜农药残 留快速检 测 中易 出现的 问题 与对 策
李 艳 辉
（ 阳 市农 业 检 测 中心 ， 阳 １ ０ ３ ） 沈 沈 １ ０４
摘 要 ： 绍 蔬 菜 中 有 机磷 和 氨 基 甲酸 酯 类 农 药残 留 快 速 检 测 方 法 的原 理 ， 出 实 际 检 测 过 程 巾易 出现 的 问 题 ， 针 对 这些 问 题 提 介 指 并 出 相 应 的解 决 措 施 ． 结 ｝ 检 测 操作 中 的 几点 注 意 事项 ， 总 ｝ ｛ 以减 小 误 差 、 免 失 误 ， 高 检 测 结 果 的可 信 度 。 避 提 关键 词 ： 药 残 留 ； 菜 ； 速 检 测 ； 机 磷 ； 基 甲 酸 酯 ； 制 率 ； 农 蔬 快 有 氨 抑 问题 ； 决 措 施 解 中 图 分 类 号 ： １５５ 文 献 标 志 码 ： 文 章 编 号 ：６４ １６ （０ ９０ － ０ ９ ０ Ｒ ５． ４ Ａ １７ — １２０ ） １０ ２ － ２ １
ｒ ｅ ｒｒ ｄ ｃ ｎ ｒｏ ｓ ａ ｏ ｄ ｎ ｓａ ｅ ｎ ｍｐ ｏ ｉ ｇ ｔ ｅ ｒ ｌ ｂｌ ｙ ｏ ｅｅ ｔ ｎ ｒ ｓ ｌ ． ｉ ｄ ｆ ｅ ｕ ｉ ｇ ｅ ｒ ｒ， ｖ ｉｉ ｇ ｍｉ ｋ ｓ ａ ｄ ｉ ｒ ｖｎ ｅｉ ｉ ｔ ｆ ｔｃ ｉ ｅ ｕ ｔ ｚ ｏ ｔ ｈ ａ ｉ ｄ ｏ ｓ Ｋｅ ｒ ｓ ｐ ｓｉｉ ｅ ｒ ｓ ｕ ； ｅ ｅａ ｌ； ａ ｉ ｅｅ ｉ ａｉ ｎ ｏ ｇ ｎｃ ｐ ｏ ｐ ｏ ｕ ； ａ ｂ ｍａｅ ｉ ｈｂ ｔ ｎ ｒ ｔ； ｒ ｂ ｅ ｃ ｕ ｔ ｒ ａ ｕ ｅ ｙ ｗｏ ｄ ： ｅ ｔ ｄ ｅ ｉ ｅ ｖ ｇ ｔ ｂ ｅ ｒ ｐ ｄ ｄ ｔ ｒ ｎ ｔ ； ｒ ａ ｉ ｈ ｓ ｈ ｒ ｓ ｃ ｒ ａ ｔ ； ｎ ｉ ｉ ｏ ａｅ ｐ ｏ ｌ ｍ； ｏ ｎ ｅｍｅ ｓ ｒ ｃ ｄ ｍ ｏ ｉ
酶抑制法在蔬菜农药残留快速检测中的应用
酶抑制法在蔬菜农药残留快速检测中的应用一、酶抑制法的原理酶抑制法是一种利用酶与抑制剂相互作用并产生信号变化的分析方法。
其原理主要是通过添加抑制剂来破坏酶与底物之间的反应，从而测定所含有的底物的含量，有时还可用于发现和测定抑制剂。
在蔬菜农药残留快速检测中，酶抑制法主要通过检测农药残留对酶活性的影响来实现。
一般情况下，酶抑制法可以分为两种：非竞争性抑制和竞争性抑制。
在非竞争性抑制中，抑制剂与酶分子发生化学结合，改变酶的构象，导致酶活性发生变化。
而在竞争性抑制中，抑制剂与底物结合，导致酶无法催化底物，从而降低酶的活性。
酶抑制法通过对酶活性的监测，可以快速、准确地测定蔬菜中农药残留的含量，为食品安全提供有力的保障。
1.快速、高效：酶抑制法具有检测速度快、结果准确的优势。
一般情况下，酶抑制法的检测时间不会超过1小时，有些方法甚至可以在30分钟内完成。
这对于食品快速检测具有非常大的意义。
2.灵敏度高：由于酶抑制法可以检测到微量的农药残留，因此其灵敏度非常高。
这意味着即使是微量的农药残留也能够被有效地检测到，为食品安全提供了更有力的保障。
3.成本低：相比于传统的色谱等方法，酶抑制法的成本更低，操作更简单。
这使得酶抑制法在食品生产和检测领域中具有非常大的应用前景。
4.多样性：酶抑制法可以针对不同的农药残留进行定制，具有很强的适应性。
这使得酶抑制法可以应用于多种不同类型的蔬菜和农药，使得其在农产品安全检测中具有广泛的应用前景。
酶抑制法在蔬菜农药残留快速检测中具有诸多优势，其快速、高效、灵敏度高、成本低等特点使得其在食品安全检测领域中备受关注。
目前，酶抑制法已经在蔬菜农药残留快速检测中得到了广泛的应用。
以下将介绍一些关于酶抑制法在蔬菜农药残留快速检测中的应用实例：1.氯吡蜀醇的酶抑制法检测氯吡蜀醇是一种常用的农药，其残留对蔬菜的质量和安全产生了较大影响。
研究人员利用酶抑制法对氯吡蜀醇残留进行了快速检测，结果表明该方法不仅检测速度快，而且灵敏度高，能够准确测定不同蔬菜中氯吡蜀醇的残留水平。
蔬菜农药残留快速检测技术研究
Ｖ１ 一Ｃ ２ ×Ｖ２公式 计算 相应 工作 液所需 的农药 标
准品 ， 然后 用 缓 冲 液稀 释 。 每种 农 药 所 配制 的浓
度见表 １ 。
１ ． ２ 酶抑 制 率检测 方法 取数支 试 管 ， 其 中一 支 加 入 ２ ． ５ ｍＬ缓 冲液
惠州 ５ １ ６ ０ ０ ７ ）
摘要： 为 了快 速 检 测蔬 菜 中农 药 残 留 问题 ， 应 用农 残 速 测 仪 ， 以绿健公 司生产的试 剂为检测试 剂， 对 蔬 菜 中农
敏 。 曾柏 荣 ， 黎启 光 。 吴云 普 。 潘 锦秀
（ １ ． 惠 州市 惠城 区农 产 品质 量安全 监督 中心 ， 广 东 惠州 ５ １ ６ ０ ０ ３ ； ２ ． 惠 州学院 生命 科 学 系， 广东
农 药残 毒 快速检 测试 剂盒 购 于东莞 市绿 健生 物科 技有 限公 司 ， 包括 ： 酶、 底物、 显 色剂 、 缓 冲液 。
注， 农产 品 质量安 全 问题更 加 突 出 ， 已成 为农业 发
展 新 阶段急 待 解 决 的 主 要 矛 盾 之 一ｌ ２ ］ 。广 东 省 惠 州市 作为 珠 三角 地 区 蔬 菜 的 主产 区 ， 除供 应 本 地 以外 ， 还 担负着 向广 州 、 深圳 及香 港等 地供应 蔬
检 测蔬 菜购 于 惠 城 区 冷水 坑 农 贸市 场 ， 包 括
２ 结 果 与 分 析
２ ． １ 农 药浓 度与抑 制 率关 系
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３ — ０ １ — ２ ９ 基 金项 目 ： 广 东省 科技计 划资助 项 目（ ２ ０ ｌ １ Ｂ ０ ３ ０ ８ ０ ０ ０ ２ １ ） ； 惠 州 市 科 技 计 划 资 助 项 目（ ２ ０ １ ２ Ｐ １ ６ ） ； 惠 城 区 科 技 计 划 资 助 项
用于检测农药残留的胆碱酯酶酶源的研究进展
目前应 用较 多 的农药 残 留快 速检测 法 主要 是 酶抑制
法 ，即根据 有机 磷 和氨基 甲酸酯类 化合 物对 胆 碱酯
２ 胆 碱 酯酶 的分 子类 型和 分布 胆碱 酯酶 （ｈｌｅｔａ ， ｈ ） Ｃ ｏｎｓ ｒ ｅ Ｃ Ｅ 分为 乙酰 胆碱 酯 酶 ｉ ｅｓ
仪器 设 备投 入 大 ，操作 复 杂 ，检测 成 本 高 ，也 不便 于现 场 检测 。农 药 残 留的快 速 检 测方 法 日显 重 要 。
虫 头部 以及 电鳐 、电鳗 的 电器 官 中提 取 ［，材 料 来 １ ］ 源 困难 ，提取 过 程复 杂 ，产 量低 ， 本 高 。要满 足 成 当前 农 药残 留检 测 的需求 ，稳 定 的胆碱 酯酶 的酶 源
用于 检 测 农 药 残 留 的胆 碱 酯 酶 酶 源 的研 究 进 展①
丁运 华② 陈勇 智
（ 州学 院生命科 学 系 广 东惠 州 ５ ６ ０ ） 惠 １０ ７
摘 要 概 述 农 药 残 留 检 测 的现 状 ，分 析 胆 碱 酯 酶 的分 子类 型 、分 布 ，不 同来 源 的 胆 碱 酯 酶 的特 点 及 分 离 纯 化
残 留以及残 留量 的多少 。酶 抑制 法 的优点 是前 处理 简 单 ，检 测 时间 短 ，所需 仪 器 、设 备简单 ，适 于现 场 测定 。但 其检 测 的灵 敏度 和可靠 性 与使用 的酶有
１ 农 药 残 留检 测 的方 法 常 用 的农 药 残 留检 测 方 法 ，主 要 是 薄层 色 谱
酶 活性 有强 烈 的抑制 作用 的特 性 ，在 酶 的反 应体 系
中添加 果蔬 等样 品 的农药 提取 液 ，反应 一定 时问后 观察颜 色 的变化 或测 定酶 与某 种特 定化 合 物反应 的
蔬菜农药残留快速检测中易出现的问题与对策
蔬菜农药残留快速检测中易出现的问题与对策刘元元（新疆精河县农业农村局，新疆 精河 833300）［摘要］随着社会的不断发展，人们生活质量有了很大提升。
蔬菜作为人们生活中不可缺少一部分，对于人们的身体健康有直接影响，但是在蔬菜生产中，需要喷洒农药，农药残留在蔬菜表层，就会对人们的身体健康造成威胁，所以需要对蔬菜农药残留进行检测，从而更好的保证蔬菜食用安全。
本文主要对蔬菜农药残留快速检测技术中容易出现的问题以及解决对策进行了阐述，以供参考。
［关键词］蔬菜；农药残留；检测近年来，有机磷和氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残留问题和引发中毒的情况较为突出。
为保证人们吃上安全放心的蔬菜，保障人民身体健康，蔬菜农药残留快速检测越来越普遍地被各大农产品检测机构所采用。
蔬菜农药残留快速检测技术是一种生化方法，是根据乙酰胆碱酯酶被抑制程度(抑制率)来检测蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药的残留。
该技术适用于蔬菜产地、批发市场以及农药残留检测部门开展快速检测工作。
特别是将农药残留快速检测法与化学法配套应用，可实现优势互补，会起到事半功倍之效。
该方法可对有农药残留的蔬菜进行粗筛，将一部分含药量较高的蔬菜控制在市场之外，避免农药中毒事故的发生。
蔬菜农药残留快速检测方法适用于叶菜类、果菜类、豆菜类、瓜菜类、根菜类(除胡萝卜、茭白等)中甲胺磷、氧化乐果、对硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、杀扑磷、敌敌畏、克百威、涕灭威、灭多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲萘威、丙硫克百威、速灭威、残杀威、异丙威等农药残留的快速检测。
１蔬菜农药残留检测技术的原理该方法是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中的乙酰胆碱酯酶的活性造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，导致昆虫中毒致死的原理而设计。
如果蔬菜中不含有机磷和氨基甲酸酯类农药，乙酰胆碱酯酶水解后，水解产物可与显色剂反应产生颜色，如果蔬菜中含可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性的有机磷和氨基甲酸酯类农药，这种酶就不能被水解，从而无显色反应。
蔬菜农药残留检测中酶抑制法的应用分析
Apr. 2020 CHINA FOOD SAFETY 123分析与检测近年来，频频发生的食品质量安全问题，使得公民安全消费意识逐步提升，对蔬菜农药残留予以了更多的关注。
为促进农产品质量安全水平的提升，保障消费者健康，相关职能部门应当对蔬菜生产实施全过程农药管控。
酶抑制法无需耗费太多成本，具备较高的准确性与灵敏度，在基层市场监管部门农药残留快速检测中十分适用。
1 实验方法1.1 仪器与试剂农药残留快速检测仪，比色瓶、移液枪、样品超声提取仪等。
K 2HPO 4（无水磷酸氢二钾）；KH 2PO 4（磷酸二氢钾）；C 14H 6N 2O 8S 2（二硫代二硝基苯甲酸）；NaHCO 3（碳酸氢钠）；C 7H 16SNI （硫代乙酰胆碱）等；蒸馏水；叶菜类蔬菜、瓜果、块根(茎)样品。
1.2 试剂配制缓冲液：取KH 2PO 4、K 2HPO 4各 3.23 g、11.90 g，用蒸馏水（1 000.0 mL）溶解。
显色剂：取NaHCO 3、C 14H 6N 2O 8S 2各15.6 mg、160.00 g，用上述缓冲液 （20.0 mL）溶解，转入冰箱（4 ℃）。
底物：取硫代乙酰胆碱25.0 mg，用蒸馏水（3.0 mL）溶解，转入冰箱（4 ℃）。
乙酰胆碱酯酶：以酶活性为根据，缓冲液溶解，控制3 min 吸光度值变化不低于0.3，摇匀后冰箱中保 存（4 ℃）。
2 检测步骤2.1 样品溶液制备擦掉蔬菜样品表面泥土，取块根（茎）、瓜果类蔬菜取2.00 g 表皮，叶菜类蔬菜剪成大小为1cm 2的碎片后取2.00 g，加入到含有10.0 mL 缓冲液的提取瓶中，然后转至多用可调速振荡器内，震荡提取2 min，静置 3～5 min [1]。
浸提液颜色较浅或无色时，转入离心管备用，待测；若颜色浑浊，吸取0.5mL 至离心管并离心，上层液清澈时结束离心，做样液，待测。
浸提液存在严重色素干扰时，可转至另一提取瓶内，根据颜色深浅加入活性炭0.10～0.50 g，转入多用可调速振荡器，振荡提取5～6 min 后，静置5～10 min，吸取0.5 mL 至离心管，用微型离心机离心至上层液清澈，做样液备用（若有活性炭残留于样液中，需再次离心处理，保障样液内无活性炭残留）。
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质浓度为纵坐标， 绘制盐析曲线， 分析确定硫酸铵
的用量。
根据盐析曲线， 先添加硫酸铵至一定饱和度，
离心， 分别取若干份等体积的上清液， 用２．０ｍｏｌ／Ｌ硫
酸溶液调节， 使之最终分别达到不同的ｐＨ值， ４℃振
荡３０ｍｉｎ， 离心， 分别测定在不同ｐＨ值下上清液的酶
活力 和蛋白质 浓 度 ， 以ｐＨ值 为 横 坐 标 、酶 活 力 和 蛋
后的胆碱酯酶用于快速检测蔬菜中农药残留的方法。
关键词：小麦； 胆碱酯酶； 酶活； 农药残留
中图分类号：ＴＳ２０７．５＋３
文献标识码：Ａ
文章编号：１００５－ ９９８９（２００７）０２－ ０２３７－ ０４
Ｓ ｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｄｅ ｔｅ ｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｅ ｓ ｔｉｃｉｄｅ ｒｅ ｓ ｉｄｕｅ ｓ ｉｎ ｖｅ ｇｅ ｔａ ｂｌｅ ｗｉｔｈ ｃｈｏｌｉｎｅ ｓ ｔｅ ｒａ ｓ ｅ ｅ ｘｔｒａ ｃｔｅ ｄ ｆｒｏｍ ｗｈｅ ａ ｔ
Ｎｏ． ２． ２００７ ２３７
分析检测
目前， 农产品的病虫害防治仍以化学防治为主， 有机磷及氨基甲酸酯类农药仍然在蔬菜、粮食等作 物上广泛使用。随着病虫害抗药性的逐年增加， 许 多蔬菜种植者一味依赖增加农药用量来保证产量， 导致蔬菜中农药残留量严重超标， 严重威胁着人们 的 健 康 ［１］。 我 国 每 年 因 食 用 有 机 磷 农 药 超 标 蔬 菜 引 起 的 食 物 中 毒 事 件 屡 有 发 生［２］， 因 此 ， 建 立 一 种 简 便 、 快速、灵敏的农药残留检测方法， 以控制农药残留 超标蔬菜流入市场就显得极其重要。传统的农药残 留检测方法主要是色谱法， 该法虽然定量精确、灵 敏度高， 但样品前处理复杂， 仪器设备昂贵， 分析方 法手续复杂， 需专业人员进行操作， 因此不适于市 场管理部门经常性的现场检测［３］。目前， 我 国学者研 究较多的农残快速检测方法主要是酶抑制法， 该法 是基于农药对胆碱酯酶的抑制作用， 通过检测胆碱 酯酶被抑制的程度， 间接检测农产品中农药残留的 情况。植物和动物中的胆碱酯酶均有此特异反应， 植物中的胆碱酯酶的活性不如动物的高， 但其具有 取材方便、成本低、保存方便等优点［４］。本文对小 麦 中胆碱酯酶的提取、纯化进行了探讨， 并探索了其 在蔬菜农药残留检测方面的可行性， 为快速、经济、 准确地检测蔬菜中农药残留状况提供理论依据。
白质浓度为纵坐标， 绘制等电点沉淀曲线， 确定最
适ｐＨ值。由最适ｐＨ值， 以２．０ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液调整体系
ｐＨ值后 离心得上清 液 ， 于 上 清 液 中 继 续 添 加 硫 酸 铵
至一定饱和度， ４℃静置１２ｈ， 抽滤得滤饼， 对滤饼进
行溶解， 即得第一次盐析酶液。
１．２．２．２ 第二次硫酸铵盐析 在第一次盐析酶液中继
ＬＩＵ Ｋａｉ－ ｈｕａ， ＸＩＮＧ Ｓｈｕ－ ｊｉｅ
（Ｘｉｎｙａ ｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａ ｌ Ｃｏｌｌｅ ｇｅ ， Ｘｉｎｙａ ｎｇ ４６４０００）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓ ｓ ｏｆ ｃｈｏｌｉｎｅｓ ｔｅｒａｓ ｅ ｗａｓ ｓ ｔｕｄｉｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ， “ｌｉａｏｃｈｕｎ １４”ｗａｓ ｓ ｅｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅ ｐｅｓ ｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓ ｉｄｕｅｓ ｂｙ ｃｏｍｐａｒｉｓ ｏｎ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｈｏｌｉｎｅｓ ｔｅｒａｓ ｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｗｈｅａｔ ｖａｒｉｅｔｙ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｐＨ ｖａｌｕｅ ａｎｄ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓ ｏｌｕｔｉｏｎ ｏｎ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ｓ ｔｕｄｉｅｄ ， ａｎｄ ｔｈｅ ｃｈｏｌｉｎｅｓ ｔｅｒａｓ ｅ ｗａｓ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｓ ａｌｔｉｎｇ ｏｕｔ． Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓ ｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ， ａｎ ｅｎｚｙｍｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｐｅｓ ｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓ ｉｄｕｅｓ ｉｎ ｖｅｇｅｔａｂｌｅ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｗｈｅａｔ； ｃｈｏｌｉｎｅｓ ｔｅｒａｓ ｅ； ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ； ｐｅｓ ｔｉｃｉｄｅ ｒｅｓ ｉｄｕｅｓ
定酶活性的变化， 从而测定酶的抑制率， 判断农药
残留情况。
２ 结果分析
２．１ 胆碱酯酶提取条件的筛选 ２．１．１ 提取液ｐＨ值对胆碱酯酶活性的影响 在其它条 件相同的情况下， 向小麦中分别加入小麦质量３～４倍 的不同ｐＨ的磷酸缓冲溶液（０．２ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ５．０～８．５）作为提 取液， 于４℃下浸泡１６ｈ， 研磨， ５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ， 测上清液中酶 活 ， 以 提 取 液ｐＨ值 为 横 坐 标 、酶 活 为 纵坐标绘制曲线， 结果见图１。
农药的缓冲溶液作为反应体系， ３７℃下对胆碱酯酶进
行抑制３０ｍｉｎ后， 测定其酶活力变化。
抑制率按下列公式进行计算：
抑制率（％）＝ Ａ０－ Ａ１ ×１００ Ａ０
式中： Ａ０──未受抑制酶的活力； Ａ１──受农药抑制酶的活力。
１．２．７ 部 分 蔬 菜 中 有 机 磷 农 药 残 留 的 检 测
从市场
参考文献： ［１］ ＧＢ２７６０－ １９９６．食品添加剂使用卫生标准［Ｓ］ ［２］ ＧＢ／Ｔ５００９．２９－ ２００３．食品中苯甲酸、山梨酸的测定［Ｓ］ ［３］ 马昌洪．高效液相 色 谱 法 测 定 肉 制 品 中 苯 甲 酸 和 山 梨 酸
含量［Ｊ］．遵义师范学院学报，２００５，７（５）：６７－ ６８ ［４］ 仲岳桐．高油脂食品中 苯 甲 酸 、山 梨 酸 、糖 精 钠 样 品 前 处
依据以上筛选出的提取条件， 对所选几种小麦中 的胆碱酯酶进行提取， 并测其酶活， 结果见表１。
表１ 不同小麦品种中胆碱酯酶活性比较
小麦品种 浙丰２号 焦农１号 辽 春 １０号 辽 春 １４号 冬 麦 ９４０９
酶活力 （Ｕ） １５ １３．２ ２０ ２９ ８．９
由 表１可 以 看 出 ， 所 选 几 种 小 麦 中 ， “辽 春１４” 的 酶 活 力 最 高 ， 其 次 是 “辽 春 １０” 和 “浙 丰 ２ 号 ”， “冬 麦９４０９” 和 “焦 农１号 ” 的 胆 碱 酯 酶 的 酶 活 力 较 低。以下选用 “辽春１４号”为试验材料。 ２．３ 胆碱酯酶的纯化 ２．３．１ 第 一 次 盐 析 依 照１．２．２．１中 方 法 ， 绘 制 了 第 一 次硫酸铵盐析沉淀曲线图及等电点沉淀曲线图， 见图 ４、图５。
麦 质 量３倍 的 磷 酸 缓 冲 溶 液 （０．２ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ８．０）， 在 ４℃ 下 分 别 浸 泡 ４ｈ、 ８ｈ、 １２ｈ、 １６ｈ、 ２０ｈ、 ２４ｈ， 研 磨 ， ５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ， 测上清液中酶活， 以提 取 时 间 为横坐标、酶活为纵坐标绘制曲线， 结果见图３。
由图３可知， 酶活力随提取时间的延长而增大， 但 超 过１６ｈ后 酶 活 力 上 升 不 明 显 。 本 实 验 选 择 １６ｈ作 为 提取时间。 ２．２ 不同小麦品种中胆碱酯酶酶活的比较
续添加硫酸铵， 使之最终分别达到不同的饱和度，
操作方法同上， 绘制盐析曲线， 确定硫酸铵用量。
１．２．３ 酶活测定方法 分光光度法［７］。
１．２．４ 硫酸铵浓度的表示方法 奥氏饱和度表示法［８］。
１．２．５ 蛋白质含量的测定 紫外吸收法［９］。
１．２．６ 有机磷农药抑制率的测定［１０］ 用含有一定浓度
分析检测
小麦中胆碱酯酶的提取及其在蔬菜 农药残留检测中的应用研究
刘开华，邢淑婕 （信阳农业高等专科学校生物工程系， 信阳 ４６４０００）
摘要：初步确定了小麦中胆碱酯酶的提取工艺， 比较了不同小麦品种中胆碱酯酶的活性， 筛选出 “辽
春１４ ”为试材， 分析了提取液用量、ｐＨ值等因素对胆碱酯酶活性的影响， 同时探讨了经硫酸铵盐析
理的方法改进［Ｊ］．中国卫生检验杂志，２００１，１１（４）：４７１－ ４７１ ［５］ Ｍ Ｇｏｎｚáｌｅｚ， Ｍ Ｇａｌｌｅｇｏ， Ｍ Ｖａｌｃáｒｃｅｌ． Ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ－
ｉｃ ｆｌｏｗ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ ｉｎ ｆａｔｔｙ ｆｏｏｄｓ ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，１９９９，８４８（７）： ５２９－ ５３６ ［６］ Ｅｌｉｓａｂｅｔｈ Ｄｒａｎｇｅ， Ｅｌｓａ Ｌｕｎｄａｎｅｓ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｎｇ－ ｃｈａｉｎｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｕｓｉｎｇ ｎｏｎ － ａｑｕｅｏｕｓ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃ－ ｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｎｄｉｒｅｃｔ ＵＶ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏ－ ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，１９９７，７７１（３）：３０１－ ３０９
收稿日期：２００６－ ０７－ １９ 作者简介：刘开华（１９６９－ ）， 男， 讲师， 硕士研究生， 研究方向为食品安全。
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碱度而改变其在有机相和水相中分配比的方法， 有 效去除脂肪等杂质的干扰， 达到了较高的灵敏度、准 确度和精密度， 完全满足我国对于肉制品中山梨酸和 苯甲酸检测的要求， 适宜在日常检测工作中应用。
上购回辣椒、西红柿、大白菜、小白菜、黄瓜、茄
子 、 芹 菜 ， 用 取 样 器 分 别 切 取 蔬 菜 样 品 ５ｇ， 加 入
１０ｍＬ ０．０２ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ８．０的磷酸缓冲溶液， 振荡１０ｍｉｎ，