胆碱酯酶的测定
胆碱酯酶测定试剂盒(丁酰硫代胆碱底物法)标准化操作规程,SCHE-SOP
胆碱酯酶测定试剂盒(丁酰硫代胆碱底物法)标准化操作规程1 目的规范实验室操作，保证检验工作顺利有效进行特制定此规程。
2 授权操作人经培训且考核通过的临床检验人员。
3 适用范围本试剂用于体外定量检测人血清或血浆中胆碱酯酶的活力。
4 检验方法本试剂采用丁酰胆碱底物测定胆碱酯酶的活力。
5 检验原理样本中胆碱酯酶水解丁酰硫代胆碱生成硫代胆碱，硫代胆碱与二硫代双硝基苯甲酸反应生成黄色的硫代硝基苯甲酸，通过测定405nm处吸光度值的升高，可以计算出样本中胆碱酯酶的活力。
6 标本要求6.1 样本为血清或血浆。
及时离心分离样本，不得使用溶血或被污染的样本。
血浆样本可采用肝素或EDTA抗凝。
6.2 血清密闭贮存于2℃~8℃可稳定1周，经稀释后，在室温可稳定2小时。
7 试剂及配套品7.1试剂来源长春迪瑞医疗科技股份有限公司胆碱酯酶试剂盒（丁酰硫代胆碱底物）7.2含非反应性保护剂和稳定剂7.3试剂的稳定性与贮存：7.3.1 试剂在2℃~8℃条件下，干燥、避光、密封贮存，有效期为18个月。
7.3.2 试剂开封后在2℃~8℃条件下可稳定30天。
7.4试剂的变质指示：试剂混浊，或以纯水为空白，试剂在405nm处的吸光度大于0.800A（1.0cm光径）时，表明试剂已失效。
8 实验仪器及性能指标8.1 实验仪器迪瑞CS系列全自动生化分析仪8.2试剂性能指标8.2.1空白吸光度：A≤0.800。
8.2.2空白吸光度变化率：△A/min≤0.020。
8.2.3分析灵敏度：测试1U/L被测物时，吸光度变化率（△A/min）＞0.00005。
8.2.4 线性范围：50U/L～15000U/L；线性相关系数r≥0.9900；[50,2000] U/L 范围内，线性绝对偏差应不超过±500U/L；（2000,15000] U/L范围内，相对偏差不超过±15％。
8.2.5 准确度：80%≤回收率≤120%。
8.2.6 测量精密度重复性：CV≤5.0%。
胆碱酯酶CHE测定
胆碱酯酶CHE测定1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确2 原理碳化丁酰胆碱+H2O 胆碱酯酶硫代胆碱+丁酸硫代胆碱+亚铁氰化钾 (Ⅲ) 亚铁氰化钾（II）+胆碱胆碱酯酶催化水解硫代胆碱和碳化丁酰胆碱。
硫代胆碱与黄色亚铁氰化钾（III）反映生成无色的亚铁氰化钾（II），这种颜色的减少可以在405和415纳米之间测得。
3 标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.3 8h内不能及时测定血清可存放于2—80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4 试剂4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司CHE试剂盒,国械注进20142405056YZB/GER 5724-2014）4.1.1试剂盒组成如下:R1 焦磷酸缓冲液:92 mmol/L,pH 7.7；亚铁氰化钾（III）：2.4 mmol/L。
R2 GOOD缓冲液：10 mmol/L，pH 4.0；碳化丁酰胆碱：46 mmol/L；稳定剂4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期；机上稳定期：4周4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。
4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的CHE校准品对自动分析仪进行校准。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
6,胆碱酯酶活性测定
实习三有机磷经皮染毒对全血胆碱酯酶活性的影响（一）目的和意义1、学习经皮染毒技术，掌握急性经皮毒性试验的方法。
2、观察有机磷经皮肤吸收后对机体的急性毒性作用。
3、掌握全血胆碱酯酶活性的测定方法及原理。
（二）仪器1．解剖剪刀、弯剪、镊子、灌胃针。
2．恒温水箱(37±0.5℃)。
3．离心机。
4．分光光度计，10mm比色皿。
5．血红蛋白吸管（20μl）；刻度吸管（5.0ml，2.0ml，1.0ml）；离心管（10ml）；容量瓶（10ml，100ml）；试管（10ml）、烧杯等。
（三）试剂1．受试物：有机磷（由指导教师自定）；溶剂，根据受试物的理化性质选定。
2．磷酸盐缓冲液(1/15m mol/L，pH7.40)：称取9.07g无水磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解并稀释至1000mL(甲液)；称取23.87g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，用水溶解并稀释至1000mL(乙液)。
取甲液19.2mL与乙液80.8mL混合即得。
3．生理盐水：氯化钠8.5g/L。
4．硫代乙酰胆碱(ASCh)：称取72.3mg ASCh(生物试剂)溶于生理盐水中，并稀释到10mL；置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。
5．5，5′－联硫代－双－2－硝基苯甲酸(DTNB)溶液：称取19.8mg DTNB，滴加磷酸盐缓冲液(4.2)，搅拌，直至完全溶解，溶液透明(大约加2mL)，再用生理盐水(4.3)稀释至10mL，置冰箱中保存，临用时以生理盐水稀释10倍。
出现黄色即弃用。
6．抑制剂毒扁豆碱：取1mg左右柳酸毒扁豆碱，溶于0.5mL生理盐水(4.3)，临用时配制，严防污染其他试剂及器材。
7．1m mol/L谷胱甘肽标准溶液：精确称取3.07mg还原型谷胱甘肽用水溶解，移入10mL容量瓶中，稀释至刻度。
此液1mL相当于1μmol谷胱甘肽。
因其易被氧化，应于用时配制，水必须先经煮沸去氧冷却后使用。
（四）实验步骤1．实验动物的选择实验动物可选择健康豚鼠或家兔，也可用大鼠。
胆碱酯酶活性测定试纸干化学法使用说明书
胆碱酯酶活性测定试纸（干化学法）使用说明书【产品名称】通用名：胆碱酯酶活性测定试纸（干化学法）【包装规格】1人份/袋、10-100袋/盒；25人份/筒、50人份/筒、1-20筒/盒。
【预期用途】用于体外定性检测人血清、血浆中胆碱酯酶活性。
【检验原理】胆碱酯酶催化水解乙酰胆碱（Ach）生成乙酸和胆碱，乙酸能使指示剂溴百里香酚蓝（BTB）发生颜色变化，通过颜色的改变反映生成乙酸的量，乙酸量的多少即可表示酶活力的高低；反应结果可与胆碱酯酶活性测定比色表直接进行比色测定。
【主要组成成份】本产品系由20%乙酰胆碱(Ach)、3%溴百里香酚蓝等试剂固定在通过双面胶粘贴有中速滤纸的PVC板上，干燥后裁切成胆碱酯酶活性测定试纸。
【储存条件及有效期】在2-30℃干燥、阴凉、无酸碱腐蚀的条件下密封保存，有效期二年。
试纸开封铝箔袋后在无酸碱腐蚀的条件下可保存3小时，有酸碱腐蚀的条件下开封即用。
【样本要求】1、在无菌条件下采集静脉血样本，尽快分离血清或血浆以避免溶血。
2、检测时应使用新鲜标本。
3、常规抗凝剂不影响检测结果。
【检验方法】在进行测试前必须先完整阅读使用说明书。
1、取测定试纸一片，放在培养皿中，向反应纸片中央加上8～10μl待测新鲜血清或血浆，盖上培养皿盖保持密封（保持一定的湿度以防血清蒸发，同时防外界酸碱影响），放置37℃水浴箱中并开始记时。
2、11分30秒后取出，所呈现色泽与胆碱酯酶活力比色表(见图一)比较，即得胆碱酯酶活力单位。
3、如无水浴箱，根据测定时室温，查附表确定反应所需时间，在到达反应所需时间后立即比色。
4、正常值30-80单位，如低于30单位的标本，欲求得较精确的结果，可将时间延长一倍，再观察结果。
附表：20～40℃内反应终点时间表温度(℃) 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 时间22′15″21′19′45″18′45″17′45″16′45″16′15″15′45″15′15″14′45″14′15″温度(℃) 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40时间14′13′30″13′12′30″12′15″12′11′30″11′15″10′45″10′30″【检验结果的解释】阳性：胆碱酯酶活力单位小于30。
全血胆碱酯酶活性测定
注意事项
• 本法检测限为2.4μmol/L，线性范围为2.4～ 1000.0μmol/L。 水冲洗干净后，再用蒸馏水洗三次， 干燥后备用。 • 取血时不应过度挤压耳垂，如果采血时过度挤 压耳垂，采得的血液中血清和组织液所占比例 过多，会使结果偏低。 • 加碱性羟胺和盐酸(1＋2)时，必须严格掌握振 摇时间，使其充分反应，否则会影响结果。
• 按式(2)计算酶活性的相对值：Y= Xs/ Xc
• 式中：Y—酶活性的相对值，%；
• Xs—被测血样中酶活性的绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)；
• Xc—正常人血中酶活性绝对值， μmol(0.02mL·37℃· 30min)。 Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃· 30min)
四、采样、运输和保存
• 用血色素吸管，取耳垂血20μL，注入比色 管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立 即进行测定。 • 如不能立即测定，可静脉取血0.5mL，注入 玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂)，混匀。 于保温瓶中加冰运送，置于4℃冰箱中可保 存一周。
五、分析步骤
管号 乙酰胆碱标准 应用液(ml) 磷酸盐缓冲液 乙酰胆碱含量 (umol) 0 0 1.0 0 1 0.1 0.9 0.35 2 0.2 0.8 0.7 3 0.3 0.7 1.05 4 0.4 0.6 1.4 5 0.5 0.5 1.75 样品 A 血 0.02 ml 0.98ml 对照 B 血 0.02 ml 0.98ml
水浴 37℃ 5 分钟 乙酰胆碱 0.5ml 37℃30 分钟 羟胺 2 ml 羟胺 2ml 振摇 3 分钟 乙酰胆碱 0.5 ml 37℃30 分钟
碱性羟胺 1：2 HCl 100g/L FeCl3
2 ml
血清胆碱酯酶的检测和临床应用
血清胆碱酯酶的检测和临床应用摘要】血清胆碱酯酶是临床生化检查中的一个常规项目，广泛应用于有机磷农药中毒、肝功能损害的诊断与预后观察。
近年来的研究表明，血清胆碱酯酶与许多临床疾病都有一定的相关性，如脑梗死、慢性阻塞性肺疾病、心力衰竭、感染、恶性肿瘤等。
本文就血清胆碱酯酶的变化与临床相关疾病的研究进展做一综述，为研究人员及临床医生对血清胆碱酯酶的认识提供新的思路。
【关键词】胆碱酯酶；临床应用【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）19-0098-02胆碱酯酶(Cholinesterase，ChE)是一类催化酰基胆碱水解的酶类。
对胆碱酯酶的研究早期主要集中在有机磷农药中毒和肝脏疾病方面，近年来血清胆碱酯酶在神经系统、呼吸系统、心血管系统、感染等方面的研究也取得了一定进展。
1.胆碱酯酶的生物学特性胆碱酯酶分为两种，一种为乙酰胆碱酯酶(AChE)，主要分布于神经组织，小部分分布于红细胞和血清等非神经组织中。
另一种为丁酰胆碱酯酶（PchE），大多数分布于肝、脑白质和血清中，对乙酰胆碱（ACh）的特异性较低，PchE能与有机磷毒剂或杀虫剂结合，并能水解许多酯类、肽类等化合物，参与某些药物的代谢过程。
血清中的胆碱酯酶主要来源于PChE，AChE含量极少。
2.胆碱酯酶的检测方法胆碱酯酶的检测，早期有放射化学测定法，灵敏度高，但因其放射性对人体的危害，不利于大范围推广；临床上也有用试纸法或干片法测定全血和血清中胆碱酯酶，但灵敏度和特异性均受到限制；后续又研发有乙酰胆碱酯酶(AChE)ELISA测定试剂盒，灵敏度和特异性均得到了提高，但因其操作繁琐且耗时较长，不利于大批量标本的检测及基层医院的开展。
目前胆碱酯酶的检测主要是采用羟戊酸铁比色法和改良的Ellman法，反应时间短，且可以在全自动生化分析仪上检测，保证了检测的时效性和结果的准确性。
3.胆碱酯酶的临床应用3.1 胆碱酯酶与有机磷农药中毒有机磷农药是目前被广泛应用的农药，也引起了目前临床上最常见的农药中毒。
胆碱酯酶测定方法
胆碱酯酶测定方法
胆碱酯酶测定方法一般分为以下几种：
1.电化学法：该方法利用电化学传感器测定胆碱酯酶在体外水溶液中所釋放出的胆碱量。
2.比色法：该方法使用乙酰胆碱（ACh）作为底物，使其在胆碱酯酶作用下分解为胆碱和乙酸。
其中生成的乙酸与酶促色反应物（Ellman's reagent）发生反应，并生成黄色的苯硫酚盐（thioamato compounds），在一定波长下可测定其吸光度。
3.放射性测定法：该方法使用放射性标记的底物，如3H-ACh或14C-ACh作为标记，使其在胆碱酯酶的作用下分解，再通过放射计测量放射性底物和产生的放射性胆碱数目的差别，得出胆碱酯酶的活性。
4.光学测定法：该方法利用胆碱酯酶和重组胆碱酯酶能够在基质中催化反应，并通过检测基质中的光学旋光度或发光度来测定胆碱酯酶的活性。
总之，胆碱酯酶测定方法根据测量原理和技术手段的不同，应用范围和测量精度也会有所区别。
具体选择何种方法应根据实际需要和实验条件来选择。
血清胆碱酯酶测定
血清胆碱酯酶测定1．检验目的：半定量检测血清中的胆碱酯酶的活力。
2．检验原理：3．方法学认可：4．标本要求：4．1. 标本：4．1．1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
4．1．2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
4．2 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。
4．3标本运输：常温条件下避光保存运输。
4．4标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
5试剂和器材5．1仪器5．1．1离心机5．1．2恒温水浴箱5．2器材5．2．1试管（带盖）5．3试剂血清胆碱酯酶试纸（潍坊市康华生物技术有限公司）6．校准程序：7．操作步骤：7．1 将病人血液用3000转离心机进行离心分离血清。
7．2 将试纸浸入少量血清中，浸透（约1秒钟）后取出，在试管口揩去过量血清后放在试管中，并盖好试管口，置37℃水浴箱并开始记时。
7．3 11分30秒后所呈现的色泽与标准色版比较，即得胆碱酯酶活力单位7．4 如低于30单位的标本，欲求得较精确结果，可将孵育时间延长一倍，再观察结果。
7．5 如无水浴箱的情况下，根据实验室的温度查下表确定反应时间，达到反应时间立即比色。
8．干扰温度及时间对结果有影响，故应放在温度均匀处操作，并严格控制时间。
9．结果判定9．1检测时间到后立即将呈现的色泽与标准色版比较，即得胆碱酯酶活力单位。
活力单位75 60 45 30 15 0颜色卡延长一倍时间 38 30 23 15 8 09．2报告方式：XX活力单位10．参考区间30-80活力单位。
11．警告值：当检测的结果低于30活力单位时，提示有有机磷中毒的可能，应及时通知临床医生进行相应的措施，并作好登记。
12．医学解释12．1胆碱酯酶活力降低见于肝实质细胞损害性疾病，如重型肝炎，肝硬化。
12．2 胆碱酯酶活力降低见于有机磷中毒时。
全血胆碱酯酶活性的测定
全⾎胆碱酯酶活性的测定全⾎胆碱酯酶活性的测定――羟胺三氯化铁法实验⽬的1. 掌握三氯化铁⽐⾊法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。
2. 了解常见全⾎胆碱酯酶活性测定⽅法的优缺点、注意事项。
3. 学会末梢⾎的采集。
实验原理⾎液胆碱酯酶使⼄酰胆碱分解为胆碱和⼄酸。
未被胆碱酯酶⽔解⽽剩余的⼄酰胆碱和碱性羟胺反应，形成红⾊羌酸铁络合物。
颜⾊深度与剩余⼄酰胆碱的量成正⽐。
在波长520nm ⽐⾊定量，由⽔解的⼄酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。
试剂和材料采样、运输和保存⽤⾎⾊素吸管，取指⾎20⼙L ,注⼊⽐⾊管中（事先加⼊0.98mL 磷酸盐缓冲液）, ⽴即进⾏测定。
实验步骤A 样品管+0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL 全⾎ ------- 却37C ⽔浴 5min ——> +1.0mL ⼄酰胆碱应⽤液 —— 37C ⽔浴30minB 对照管0.98mL 磷酸盐缓冲液+0.02mL 全⾎ +1.0mL ⽔ ----- > 37C ⽔浴 30minC 标准管1.0mL 磷酸盐缓冲液------ -> 37C ⽔浴5min ----------- > + 1.0mL ⼄酰胆碱应⽤液 ----- > 37C ⽔浴30minD 空⽩管1.0mL 磷酸盐缓冲液 ------- 37C ⽔浴 30min蒸馏⽔盐酸溶液（1 + 2）碱性羟胺溶液磷酸盐缓冲液（PH= 7.20）三氯化铁溶液分光光度计 10mL ⽐⾊管漏⽃恒温⽔浴箱，控温⼟ 05C 采⾎针头⾎⾊素吸管37C ⽔浴5min ——>37 C ⽔浴 5min ⼿+1.0mL ⽔⽔浴之后对A、B、C、D四个试管分别进⾏以下操作:1. 加⼊4.0mL碱性羟胺溶液，充分振摇2min；2. 加⼊2.0mL盐酸溶液，充分振摇2min ；3. 加⼊2.0mL三氯化铁溶液，充分振摇；4. 滤纸过滤，520nm⽐⾊。
实验结果表1-1 520nm波长下样品的吸光度样品编号A B C D吸光度0.2990.0030.5380.000结果计算①计算酶活性的绝对值3.149Y= 100=1971.60Y—酶活性的相对值，%;Xs—被测⾎样中酶活性的绝对值，⼙mol(0.02mL ? 37C?30min);Xc —正常⼈⾎中酶活性绝对值，⼙mol(0.02mL ? 37 C ? 30min)。
胆碱酯酶(CHE)测定操作规程
胆碱酯酶（CHE）测定操作规程一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中胆碱脂酶（CHE）的活性。
二、临床意义（一）概述胆碱脂酶可以分为乙酰胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前类亦称真性胆碱酯酶，主要存在于胆碱神经末梢突触间隙。
乙酰胆碱酯酶可以在神经末梢、效应器接头或突触间隙等部位终止乙酰胆碱作用。
（二）临床意义1. 病理性升高：肾病综合征，甲状腺功能亢进，糖尿病，脂肪肝，原发性家族性高CHE血症，血清CHE变异，原发性肝癌等。
2. 病理性降低：重症肝炎，慢性肝炎活动型，肝硬化，肝脓肿，各种癌，低蛋白血症(营养不良，贫血，感染，皮肌炎，急性心肌梗死)，遗传性血清CHE异常症，有机磷中毒(轻度中毒降低30%，中度中毒降低50%，重度中毒降低70%)，溃疡性结肠炎，肾功能不全，天疱疮，烧伤等。
（三）检验原理胆碱酯酶催化S-碘化丁酰基硫代胆碱水解，生成丁酸与硫代胆碱，硫代胆碱与黄色的铁氰化钾[Fe(CN)6]3-反应后形成无色的[Fe(CN)6]4-，在405nm吸光度下降的速率与标本中胆碱酯酶活性成正比。
四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。
样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。
CHE测定样品为不溶血的血清、血浆（肝素抗凝）。
样品应在低温条件下运输并及时测定。
不能使用EDTA抗凝剂的标本。
五、试剂（一）试剂组成不同批号试剂中各组份不能互换。
（二）试剂准备R1和R2试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用后应及时冷藏保存。
（三）试剂的保存及稳定性1. 不能冰冻试剂。
2. 未开瓶的R1和R2试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳定期为瓶签标示的有效期。
全血胆碱酯酶活性的测定讲课讲稿
蒸馏水
盐酸溶液(1＋2)
碱性羟胺溶液
磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)
三氯化铁溶液
氯化乙酰胆碱标准液
分光光度计
10mL比色管
漏斗
恒温水浴箱，控温±0.5℃
采血针头
血色素吸管
采样、运输和保存
用血色素吸管，取指血20μL，注入比色管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立即进行测定。
实验步骤
A样品管+0.98mL磷酸盐缓冲液+0.02mL全血37℃水浴5min
C：以试剂空白为参比的在波长520nm处标准管的吸光度值。
②计算酶活性的相对值
Y= =197
Y—酶活性的相对值，%；
Xs—被测血样中酶活性的绝对值，μmol(0.02mL·37℃·30min)；
Xc—正常人血中酶活性绝对值，μmol(0.02mL·37℃·30min)。Xc=1.60μmol(0.02mL·37℃·30min)
吸光度0.299 0.003 0.538 0.000
结果计算
①计算酶活性的绝对值
带入得：Xs= =3.149μmol
Xs：水解乙酰胆碱的浓度，μmol(0.02mL·37℃·30min)；
A：以试剂空白为参比的在波长520nm处样品管的吸光度值；
B：以试剂空白为参比的在波长520nm Nhomakorabea对照管的吸光度值；
讨论
1.由于未在网上查到北京市居民胆碱酯酶活性的参考标准，遂以课件上浙江地区健康人胆碱酯酶活性绝对值作为参考。即：女：3.19±0.398μmol；因3.149μmol在3.19±0.398μmol的区间内，故该样本的胆碱酯酶活性属正常范围。
2.各组所测数值偏差较大，可能与操作差异如采血时间、振摇是否充分、加热时间等导致胆碱酯酶活性变化有关。
胆碱酯酶活性测定方法
胆碱酯酶活性测定方法
胆碱酯酶（acetylcholinesterase, AChE）活性测定方法主要有以下几种常用的方法：
1. 利用酶促反应产生的色素变化测定：
(1) 比色法：将胆碱酯酶底物乙酰胆碱与碱性溴化镉等试剂反应，生成黄色产物，利用比色计或分光光度计测定产物的吸光度，间接测定胆碱酯酶活性。
(2) 荧光法：将胆碱酯酶底物与荧光染料反应，使底物和产物之间发生荧光变化，利用荧光光谱仪测定荧光强度，间接测定胆碱酯酶活性。
2. 利用电化学方法测定：常用的是反应器中使用碳电极或银电极，利用底物和产物之间的电位差变化测定胆碱酯酶活性。
3. 利用放射性同位素标记测定：将底物或产物标记上放射性同位素，通过测定放射性同位素的放射性强度，间接测定胆碱酯酶活性。
4. 利用质谱法测定：将底物和产物分离并通过质谱仪测定其质荷比，间接测定胆碱酯酶活性。
需要注意的是，不同的测定方法适用于不同的实验目的和样本类型，具体的选择应根据实验需求和设备条件来确定。
三氯化铁分光光度法测定全血胆碱酯酶活性王小鹏
三氯化铁分光光度法测定全血胆碱酯酶原理：在血液胆碱酯酶作用下，乙酰胆碱发生水解；剩余的乙酰胆碱与碱性羟胺反应生成乙酰羟胺，后者在酸性条件下，与三氯化铁反应生成红棕色羟肟酸铁配合物，呈色强度与剩余乙酰胆碱的量成正比，在５２０ｎｍ波长处比色，间接测定血中胆碱酯酶活性。
此法最低检测浓度２.４μmol/L（20μl血样），测定范围2.4~1000.0μmol/L。
步骤：1、标准的配制：取6支比色管，分别加入0.0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml，7μmol/ml的氯化乙酰胆碱标准溶液，加标准缓冲液（PBS）至1.0ml，各加1.0ml水，配制成乙酰胆碱含量为：0.0、1.4、2.8、4.2、5.6、7.0μmol标准溶液系列。
向各管中加入4.0ml 碱性羟胺，振摇2min。
加2.0ml盐酸溶液，振摇2min。
加2.0ml三氯化铁溶液，振摇。
溶液与520nm处，以第一管为参比，测定吸光度值。
以乙酰胆碱含量（μmol）对相应的吸光度值绘制标准曲线。
2、样品的处理：取4支比色管，分别为1（A,B）和2（A,B），向各管加入0.98mlPBS，20μl血样。
置于37℃水浴中预热5min。
向1和2的A管加入1.0ml乙酰胆碱标准溶液。
自加入乙酰胆碱开始计时，在37℃左右（正负0.5℃）准确反应30min，每间隔10min振摇1次，同时，向1和2的B管加入1.0ml乙酰胆碱标准溶液，充分振摇。
取出比色管，各管立即加入4.0ml碱性羟胺溶液，充分振摇2min。
然后，A和B管各加2.0ml盐酸溶液，振摇2min。
加2.0ml三氯化铁溶液，振摇后样品离心。
滤液与520nm处，以标准第一管为参比，测定吸光度。
分别用各管吸光度值计算其中乙酰胆碱剩余量，从而得出1,2号管胆碱酯酶活性。
实验数据及结果：标准曲线吸光度值如下表表1标准曲线吸光度值0 1.4 2.8 4.2 5.6 7.0胆碱酯酶溶液体积吸光度值0.004 0.139 0.260 0.395 0.475 0.600可得标准曲线为：y=0.081x+0.028 拟合方程为R2=0.994样品吸光度如下表表2样品吸光度1号2号A管0.576 0.555B管0.643 0.6561A中含有乙酰胆碱的量是6.7654 1B中含有7.5926 消耗乙酰胆碱为0.8272μmol2A中含有乙酰胆碱的量为6.5061 2B中含有7.7531 消耗乙酰胆碱量为1.247μmol由此数据可知2号管中乙酰胆碱消耗量大，估1号内乙酰胆碱酶活性被抑制为注射有有机磷农药的小鼠血样。
血清胆碱酯酶测定标准操作规程
血清胆碱酯酶测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：血清丁酰硫代胆碱法碱酯酶测定(缩写ChE)，组合项目申请：血生化中肝功能测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。
2.2.2标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定24h，普通冰箱中（2～8℃）稳定7天。
-20℃保存稳定6个月。
为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
2.3标本采集的注意事项2.3.1采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。
2.3.2可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。
3 方法原理CholinsteraseButyrylthiocholine iodide+H20…………thiocholine+butyrate,Thiocholine+DTNB………2-nitro-5mercaptobenzoate,通过测定有色产物480nm处吸光度的变化速率，求得血清中胆碱酯酶的活性。
4 试剂及其他用品4.1试剂盒名称：胆碱酯酶试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。
胆碱酯酶活力判定标准
胆碱酯酶活力判定标准胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）是一种重要的酶类物质，在生物体中具有重要的生理功能。
它主要是在神经系统中发挥作用，通过降解神经递质乙酰胆碱（acetylcholine，ACh）来调节神经信号的传递。
胆碱酯酶活力的检测是评估神经系统功能的一种重要方法。
胆碱酯酶活力的检测方法包括体外测定和体内测定两种。
在体外测定中，可以通过测定样品中酶催化降解底物乙酰胆碱所生成的产物酰胆碱酸（acetic acid）的释放量，来反映胆碱酯酶的活力。
常见的体外测定方法有刺激电极法、色谱法和酶联免疫吸附法等。
体内测定是通过测定动物体内胆碱酯酶活力来评估其功能状态。
常用的体内测定方法主要包括测定血浆或血清中酶活力、组织或细胞中酶活力、脑脊液中酶活力等。
胆碱酯酶活力的正常范围因检测方法、样本来源、性别、年龄等因素而有所差异。
一般来说，胆碱酯酶活力的正常参考范围是：1. 血浆或血清中酶活力：正常成年人的胆碱酯酶活力一般在0.4-1.2 U/mL之间。
2. 组织或细胞中酶活力：胆碱酯酶在不同组织和细胞中的活力差异较大，但一般都会显示较高的活力。
3. 脑脊液中酶活力：正常成年人的脑脊液中胆碱酯酶活力一般在低微的水平。
胆碱酯酶活力的异常变化可能与多种疾病和病理状态有关。
一些疾病和药物、毒物等因素可能引起胆碱酯酶活力的增加或降低。
例如，胆碱酯酶在神经系统中的活力降低可能与阿尔茨海默病等神经退行性疾病相关。
胆碱酯酶活力的增加可能与肝功能损害、某些药物中毒等有关。
此外，胆碱酯酶活力的检测在医学诊断中也具有一定的参考价值。
例如，胆碱酯酶活力的测定可用于鉴别肾上腺激素分泌过多的原因，可与尿儿茶酚胺、瘤胃癌相关的胆碱酯酶比较，以进行肿瘤的诊断。
此外，胆碱酯酶活力的异常变化还可能与某些遗传性疾病有关。
需要注意的是，在进行胆碱酯酶活力检测时，应遵循实验室的规范操作流程和标准方法，以确保测试结果的准确性和可靠性。
全血胆碱酯酶活性测定
四、采样、运输和保存
• 用血色素吸管，取耳垂血20µL，注入比色 管中(事先加入0.98mL磷酸盐缓冲液)，立 即进行测定。 • 如不能立即测定，可静脉取血0.5mL，注入 玻璃管中(含肝素或草酸钾抗凝剂)，混匀。 于保温瓶中加冰运送，置于4℃冰箱中可保 存一周。
五、分析步骤
管号 乙酰胆碱标准 应用液(ml) 磷酸盐缓冲液 乙酰胆碱含量 (umol) 0 0 1.0 0 1 0.1 0.9 0.35 2 0.2 0.8 0.7 3 0.3 0.7 1.05 4 0.4 0.6 1.4 5 0.5 0.5 1.75 样品 A 血 0.02 ml 0.98ml 对照 B 血 0.02 ml 0.98ml
• 按式(2)计算酶活性的相对值：Y= Xs/ Xc • 式中：Y—酶活性的相对值，%； • Xs—被测血样中酶活性的绝对值， µmol(0.02mL·37℃·30min)； • Xc—正常人血中酶活性绝对值， µmol(0.02mL·37℃·30min)。 Xc=1.60µmol(0.02mL·37℃·30min)
二、仪器
• • • • • • 分光光度计； 10mL比色管； 漏斗； 恒温水浴箱，控温±0.5℃； 采血针头； 血色素吸管。
三、试剂
• 本标准所用试剂均为分析纯试剂 1、实验用水，蒸馏水或具同等纯度的去离子水 2、盐酸溶液(1＋2) 3、碱性羟胺溶液，临用前将139g/L盐酸羟胺溶液和140g/L氢 氧化钠溶液等体积混合 4、磷酸盐缓冲液(PH＝7.20)，准确称取磷酸氢二钠 (Na2HPO4·12H2O)8.36g和磷酸二氢钾(KH2PO4)1.36g， 用水溶解并稀释到500mL，保存在冰箱内 5、三氯化铁溶液，称取10g三氯化铁(FeCl3·6H2O)，加 0.84mL盐酸(4.2)，然后加水100mL。贮存于棕色瓶中 6、氯化乙酰胆碱标准液：贮备液70µmol/mL乙酰胆碱；临用 前，取此溶液用磷酸盐缓冲液稀释10倍为应用液， 7µmol/mL乙酰胆碱
胆碱酯酶抑制法测定有机磷农药残留量
胆碱酯酶抑制法测定有机磷农药残留量胆碱酯酶抑制法测定有机磷农药残留量（本法参照GB/T 5009·199—2023）一、原理有机磷类（OPS）和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶（AchE）的活性具有很强的抑制作用。
向样品中添加肯定量的乙酰（或丁酰）胆碱酯酶，假如样品中含有上述两大类农药，即会对酶的活性产生抑制作用。
当向含有农药的样品中添加底物（碘化硫代乙酰胆碱）和显色剂（二硫代二硝基苯甲酸）时，酶由于失去活性而不能催化底物分解并完成显色反应；相反，假如样品中不含农药，胆碱酯酶则能催化底物分解并完成显色反应。
通过分光光度计于412nm波长下比色，能测出颜色变化造成的吸光度之差，再通过吸光度的变化计算出酶的抑制率。
酶的抑制率越大，说明样品中残留农药的含量越高。
二、试剂1、磷酸盐缓冲溶液：3.2gKH2PO4和11.9gK2HPO4配成1000mL，PH8.0、2、显色剂：160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸钠，用20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。
3、底物：取25.0mg碘化硫代乙酰胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后4℃冰箱中保存备用，保存期不超过2周。
4、胆碱酯酶溶液：称取0.040g丁酰胆碱酯酶（粉剂）或乙酰胆碱酯酶，加入2mL磷酸盐缓冲溶液，溶解后低温保存，1周内可用。
三、仪器1、农药残留快速测定仪或分光光度计。
2、分析天平。
3、恒温烘箱。
四、测定步骤1、取蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm见方的碎片，取样1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲液振荡1～2min，倒出提取液，静置3～5min备用。
2、对比溶液测试：先于试管中加入2.5mL缓冲液，再加入0.1mL胆碱酯酶溶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上（每批样品测试时放置时间应一致）。
加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色，应立刻用1cm比色皿放入农药残留快速测定仪（或分光光度计），记录反应3min的吸光度变化值△A0、3、样品溶液测定：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操作与对比溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值△At。
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胆碱酯酶（CHE）的测定
一、原理：血清及组织中CHE使乙酰胆碱水解成胆碱和乙酸，未被水解的剩余乙酰胆碱与羟胺作用生成乙酰羟胺，再与铁离子在酸性溶液中形成棕色复合物，根据颜色深浅推算出酶的活力。
二、试剂：
1、试剂一：溶液60ml×1瓶，室温保存。
2、试剂二：乙酰胆碱粉剂×1支，-20℃保存，稀释液5ml×1瓶，4℃保存。
80μmol/ml 乙酰胆碱底物贮备液的配制：将一支乙酰胆碱碱粉剂倒入5ml稀释液中即成，4℃。
8μmol/ml 乙酰胆碱应用液的配制：贮备液：试剂=1：9稀释。
3、试剂三：甲粉剂×1支；乙液30ml×1瓶；丙液30ml×1瓶；室温保存。
试剂三应用液的配制：每次测试前将甲粉倒入乙液中，充分摇匀，根据需要量将甲乙混合液与丙液等量混合，充分混匀，配成试剂三应用液，现用现配。
4、试剂四：溶液30ml×1瓶，室温保存。
5、试剂五：溶液20ml×1瓶，室温保存。
6、试剂六：粉剂×1瓶，稀释液30ml×1瓶，测试前将稀释液倒入粉剂中，充分混匀，避光
4℃冷藏。
测各管吸光度值。
四、计算：
1、定义：血清中CHE的计算：每毫升血清在37℃和底物作用20分钟，分解1μmol乙酰胆
碱为1个活力单位。
2、计算公式：
血清中CHE活力。