医学资料真菌感染与实验室诊断进展
深部真菌病的实验诊断进展
深部真菌病的实验诊断进展深部真菌病指除表皮、毛发、甲床以外，真菌侵犯内脏、皮下组织和黏膜所致的感染，其发生取决于外界致病因素和人体免疫力的相互作用。
常见的病原真菌有念珠菌、曲霉、隐球菌等。
近年来，随着广谱抗生素等药物的广泛应用及免疫抑制剂人群的增多，真菌感染不断增多，已成为应用免疫抑制患者及其他危重病患者的主要死亡原因之一。
据最新统计，每年全球有100万艾滋病患者罹患隐球菌脑膜炎，其中70%在3个月内死亡。
真菌感染的预后有赖于早期治疗，研究显示早期治疗可以提高生存率。
日本一所教学医院收集77例怀疑为深部真菌病的病例，62%早期治疗患者的临床症状和血清学检查提示疾病有好转，而非早期治疗的患者相关改善率仅为21%。
遗憾的是，深部真菌病早期诊断困难，在缺乏依据的情况下，加用抗真菌药物不仅增加治疗成本和患者负担，也增加了发生不良反应的风险。
因此，深部真菌病的早期检测与鉴定受到临床的重视。
现就目前深部真菌病诊断方法作一综述。
一、直接镜检、培养和组织病理学检查一般取痰液、尿液、胸腹腔积液、脑脊液、活检组织等作标本，直接涂片是真菌学检查最经典的方法，具有快速、简便的特点，且可以根据特征性形态区分念珠菌、隐球菌、结合菌等。
无菌体液、皮下组织和各类活检组织标本中发现真菌成分常可确立深部真菌病的诊断，如脑脊液墨汁涂片中发现带有荚膜的隐球菌孢子、组织标本中发现真菌菌丝及孢子等。
但直接镜检的检出率很低，从而导致漏诊。
正常人痰液内可有真菌定植，故痰液涂片只有找到致病性真菌才可以确定诊断，找到条件致病性真菌不应轻易诊断为真菌感染，还应结合临床其他方面综合考虑，因此直接镜检法对深部真菌病诊断作用有限[?。
培养法灵敏度低，且周期长，不能为临床提供早期诊断的依据。
组织病理学检查因危重患者很难承受侵袭性的取材方法(如肺组织活检)，也给临床应用带来一定困难。
二、血清学诊断(一)真菌特异性抗原检测1．(1,3)-b-D葡聚糖测定(G试验)：(1,3)-b-D葡聚糖(BG)广泛存在于真菌细胞壁，细菌、病毒、人体细胞及其他病原菌无此成分，故作为真菌抗原有较高的特异性。
真菌实验室检测技术新进展护理课件
05
护理人员在真菌实验室检测技术 中的角色和责任
提高对真菌实验室检测技术的认识和理解
了解真菌实验室检测技术的目的和意义
护理人员应了解真菌实验室检测技术在诊断和治疗真菌感染中的重要作用，以及其对患者 预后的影响。
开发新型检测技术和方法
下一代测序技术
01
利用下一代测序技术对真菌进行全基因组测序或宏基因组测序
，快速准确地鉴定和分型真菌。
代谢组学和蛋白质组学技术
02
利用代谢组学和蛋白质组学技术分析真菌的代谢产物和蛋白质
表达，为真菌的鉴定和分型提供新的手段。
生物传感器技术
03
利用生物传感器技术对真菌进行快速、简便的检测，提高检测
学习真菌实验室检测技术的原理和方法
护理人员需要了解真菌实验室检测技术的原理、方法及操作流程，以便更好地配合实验室 工作。
掌握解读检测结果的能力
护理人员应具备解读真菌实验室检测结果的能力，能够根据结果判断患者是否感染真菌及 感染的具体病菌种类。
规范操作和维护实验室安全
遵守实验的规章制度，确保实验室内环境清 洁、卫生，符合安全要求。
护理人员应及时向医生反馈患者的病情变化和实验室检测结果，以便医
生根据情况调整治疗方案。
02
与其他护理人员协作
在真菌感染患者的护理过程中，护理人员之间应保持密切协作，共同完
成患者的诊断和治疗工作。
03
共同参与患者教育
护理人员可与医生、实验室技术人员共同参与患者教育活动，向患者及
家属介绍真菌感染的预防和注意事项，提高患者的自我保护意识和能力
真菌感染与实验室诊断进展(2013.9.14,绵阳)
2、黄曲霉菌 在SDA培养基上菌落生长快，黄色，表面粉末状。分生孢 子头顶囊球形或近球形，小梗双层，第一层长，布满顶囊表 面，呈放射状排列，黄色，顶端有链形孢子
双相型真菌
37 °C
–酵母相
27 °C
–菌丝相
申克孢子丝菌、马内菲青霉、荚膜组织胞浆菌、粗 球孢子菌、巴西副球孢子菌和皮炎芽生菌
马内菲青霉菌
念珠菌肺炎
痰革兰氏染色发现白细胞和酵母菌 痰培养出念珠菌属 肺活检证实有念珠菌侵入肺组织 排除定植或污染 经典表现： 发现圆形或卵圆形酵母菌属、菌丝或假菌丝
念珠菌定植与感染—呼吸道
机械通气患者气道念珠菌分离率为25% 念珠菌肺炎的实际发生率非常低 侵入肺实质 侵袭性念珠菌病的发生率往往被高估
• 血液播散
逆行性感染
• 泌尿系梗阻
Bouza E,et al. Clin Microbiol Infect 2001 ; 7:532–42.
定植或感染？
出现念珠菌尿后的思考程序：定植还是感染？ 上尿路或下尿路感染？ 更换尿管取中段尿培养以验证真菌尿是否存在 拔除尿管后40%的患者念珠菌尿消失 更换尿管后20%消失 念珠菌尿多代表定植或污染 大多数患者无症状 缺乏炎症反应表现为无症状：不能除外感染 不要轻易判断是定植而放弃处理或匆忙开始抗真菌治疗 念珠菌尿偶尔是播散性念珠菌感染的迹象 特别是有合并症的SICU患者
墨汁染色，新生隐球菌呈圆形或椭圆形 的双层厚壁孢子, 外有一层宽阔荚膜, 边缘清楚 完整, 菌体内可见出芽（菌体计数：判断预后及 疗效的指标）
培养：培养基内可加氯霉素, 但不可加放线菌酮, 因后者抑制本菌生长。 生理生化测定：采用自动微生物系统和API鉴定 组织病理学检查及免疫组化
医学真菌学研究进展
真菌 病 包 括 浅 部 真 菌 病 和 深 部 真 菌 病 。浅 部 真 菌
病 是 由浅 部 真 菌 感 染 浅 表 皮 肤 所 引 起 的疾 病 ， 头 癣 、 如 体 癣 、 癣 、 癣 、 癣 、 真 菌 病 及 花 斑 糠 疹 等 。 在 中 股 手 足 甲
代 价来 延 长 患 者 的 生 存 方 面 。如 ２ ０世 纪 ４ Ｏ年 代 出现 的类 固醇 疗 法使 隐球 菌 感 染 的危 险性 上 升 。 同样 地 ， 在
根 霉 引 起 的 坏 疽 性 脓 皮 病 （ １ 见 彩 插 一 ） 格 特 隐 球 菌 图 ， ； Ｉ ＳＣ 型 （８ １ ） 起 脑 膜 炎 并 成 功 救 治 （ ２ 见 彩 插 Ｔ Ｓ０２ 引 图 ，
－
使 菌 体 侵入 宿 主如 磷 脂酶 等 ； 使 菌 体 逃 避 宿 主 防御 系 ②
素的威胁。免疫 缺 陷患 者是 深部 真菌 病 的高危 人 群 ， ＡＩ 、 液 病 、 ＤＳ 血 恶性 肿 瘤 、 官 移 植 、 伤 患 者 免 疫 缺 陷 器 烧
尤 为 严重 ， 部 真 菌 感 染 也 常 发 生 于 这 类 人 群 。 因 此 ， 深 在 一定 意 义 上 可 以这 么 说 ， 成 深 部 真 菌 感 染 上 升 最 重 促 要 的 因 素 是 医 学 的 发 展 ， 出 表 现 在 有 关 以 免 疫 削 弱 为 突
患者 中发 病 率 显 著 增 高 。为 寻 找 全 新 的 治 疗 靶 点 ， 年 近 来针 对 烟 曲霉 的毒 性 因子 做 了很 多 研 究［ 。烟 曲霉 是 ’
真 菌 中研 究 较 为 清 楚 能 产 生 毒 性 物 质 的 真 菌 。 烟 曲 霉 可
而 言 ， 性 因子 使 菌 体 逃 避 宿 主 防御 系 统 的 清 除 ， 可 毒 并
侵袭性真菌感染的实验室诊断
廖 万 清 （第 二 军 医大学 附属 长征 医 院皮肤 科 ，上海 ２００００３）
关 键 词 ：侵 袭 性 感 染 ；真 菌 分布 于 自然界 ，绝 大 多数对 人类 有利 ，少数 可 感染人 类 导致严 重 疾病 。 近 ３０年 来 ，随 着 实 体 器 官 及 造 血 干 细 胞 移 植 （ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ＨＳＣＴ）等 技 术 的广泛 开展 、免 疫抑 制剂 的大 量应 用 、导 管介 入及 留置 技 术 的广 泛 开 展 及 人 类 免 疫 缺 陷病 毒 （ＨＩＶ）在 全 球 的 持 续 蔓 延 ，侵 袭 性 真 菌 感 染 （ｉｎｖａｓｉｖｅ ｆｕｎｇａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ＩＦＩ）的发 病 率及 死 亡 率 在全球 范 围 内显 著 上 升 ， ，严 重 威 胁人 类 健 康 。 目前 ，国 内外 也有 学 者 把 ＩＦＩ称 为 侵 袭 性 真 菌病 （ｉｎｖａｓｉｖｅ ｆｕｎｇａｌ ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＦＤ） 。流 行 病 学 研 究 显示 ，以 白假丝 酵 母 菌 为 主 的 酵母 样 真 菌 与 以烟 曲霉 为主 的丝 状 真 菌 是 ＩＦＩ最 常 见 的致 病 真 菌 ； 器官移 植受 者真 菌感 染 的发 病率 为 ２０％ ～４０％ ， 获得性 免疫 缺 陷 综 合 征 （ＡＩＤＳ）患 者并 发 真 菌感 染 的可能性 高 达 ９０％ ；在 美 国 ，酵 母 菌 血 症 已跃 居院 内血 源性感 染 的第 ４位 ，而在 中 国ＩＦＩ已成 为 院 内感 染第 ２位 的重 要组 成 ＿２ Ｊ。ＩＦＩ起 病 隐 匿 、 预后 凶险 ，诊断 主要 依赖 于实 验室 真菌 学检 查 ；早 期 、正 确 的诊 断对治 疗结 果及 预后 非 常重要 ；尸 检 研究 发现 ，７５％ 的 ＩＦＩ病 例 在 生 前漏 诊 ，而 漏 诊 率 高 的主要 原 因是 目前 的 ＩＦＩ，尤 其是 烟 曲霉等 丝 状 真 菌 的 实 验 室 诊 断 水 平 远 不 能 满 足 临 床 需 求 。另外 ，近年来 临床上 很多 重要 病 原 真 菌 ， 如 白假丝 酵母 菌对 氟康 唑等 抗真 菌药 物耐 药 的报 道也 屡见 不鲜 ’ 。 因此 ，如何 改 善 ＩＦＩ的实 验 室 诊断技 术 水 平 是 当前 国 内外 真 菌 病 研 究 领 域 的 热点 和迫 切 需 要 解 决 的 问 题 。现 对 当 前 国 内 外 ＩＦＩ实 验室 诊断 技术 应用 的现 状 、难 点及 进展 作 一 述 评 。
真菌感染实验室诊断技术进展
的实验室有能力开展此项技术。
２ 快 速 培 养 鉴 定 方 法
直接显微 镜检查和病原体培养特别是 血培养方 法仍然是临 床检测真菌血症的金标 准。但 由于很 多病原体 直接镜 检检出率 不高 ， 病原体 培养需要 时间长 ， 使危重患者的诊 断治疗存在一定 的延时性 ， 而且这些常规技 术常 常受到检验 人员 的技术熟 练程 度和标本的采集方法 、 部位 和采集 时机等诸多 主观 因素 的影 响 ， 有时不能够得到客观 的阳性 结果 ， 常常延误 了患 者的最 佳治疗
（ ２ ０ １ ３—１ ０—０ ９ 收稿 ） （ 岳静 玲 编辑 ） 病学分册 ， １ ９ ９ ９ ， ２ ５ （ ４ ）： ２ ２ ６
［ ２ ］ 孟样光 ， 李
智， 王先猛 ， 等． 银屑病 局部治疗 和遗传 药理学 的关
．
系［ Ｊ ］ ． 中国临床药理学与治疗学 ， ２ ０ １ ２， １ ７（ １ Ｏ ）： １ １ ７ ９
．
３ ６．
河北联 合大学学报 （ 医学版） ２ ０ １ ４年 １ 月第 １ ６卷第 １ 期
Ｊ ｏ ｕ ｎ ｒ ａ ｌ ｏ ｆ Ｈ ｅ ｂ ｅ ｉ Ｕ ｎ ｉ ｔ ｅ ｄ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ （ Ｈ ｅ ａ ｌ ｔ ｈ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ） ２ ０ １ ４ Ｊ ａ ｎ ． １ ６ （ １ ）
2024年真菌感染诊断市场分析现状
2024年真菌感染诊断市场分析现状一、引言真菌感染是一种常见的临床问题，其诊断对于疾病的治疗至关重要。
近年来，随着人们对健康的关注度增加，真菌感染诊断市场也呈现出快速增长的趋势。
本文将对当前真菌感染诊断市场的现状进行分析，探讨其发展趋势和市场前景。
二、市场规模和增长动力分析据统计数据显示，真菌感染诊断市场在过去几年呈现出逐年增长的趋势。
这主要归因于以下几个因素：1.真菌感染的高发率：随着全球气候变暖和人口老龄化，真菌感染的发病率呈上升趋势。
真菌感染的高发率增加了对诊断工具和技术的需求。
2.新技术的出现：近年来，一些新的诊断技术和工具被引入到真菌感染诊断领域，如PCR技术、流式细胞术等，这些新技术的出现极大地推动了市场的发展。
3.医疗投资的增加：政府和私人医疗机构对真菌感染诊断领域的投资不断增加，这为市场的发展提供了良好的基础。
三、市场竞争格局分析目前，真菌感染诊断市场存在着激烈的竞争。
主要的市场参与者包括医疗设备制造商、实验室服务供应商和医疗机构。
这些参与者通过不断推出更新、更为高效和准确的诊断工具和技术来博得市场份额。
在市场竞争中，一些大型医疗设备制造商具有显著的竞争优势。
他们拥有广泛的分销网络和研发资源，能够更好地抓住市场机会并提供全方位的解决方案。
同时，一些新兴的创新公司通过不断推动新技术的发展和应用来挑战传统巨头的地位。
四、市场发展趋势分析未来几年，真菌感染诊断市场有望保持持续增长，并出现以下几个发展趋势：1.个性化医疗的崛起：随着基因组学和生物技术的快速发展，个性化医疗成为医疗领域的重要趋势。
个性化医疗将为真菌感染诊断市场提供更多的机会和挑战。
2.基于AI的诊断工具的应用：人工智能技术在医疗领域的应用不断取得突破，基于AI的真菌感染诊断工具有望实现更高的准确率和效率。
3.市场合作与整合：在激烈的竞争环境下，市场参与者之间的合作与整合是提高市场竞争力的重要手段。
这将推动市场上不同参与者之间的战略合作和资源整合。
真菌感染的现状与治疗进展ppt课件
%
20% 18% 16% 14% 12% 10% 8% 6% 4% 2% 0%
Fungal infections(%)
18.70% Surgical wound Lung Urinary tract Bloodstream
9.90% 6.70% 5.20% 5.40% 5.10% 5.70%
1.50%
µ Æ Ä Ï Ì Ñ Ç ò ¾ ú ò ¾ Ç ú Ö ¢ ú ¾
8.3
7
5.6
%
血培养结果
Jarvis WR,Martone WJ.Predominant pathogens in hospital infections J Antimicrob Chemother.1991;28:15-19.
2019
-
3
真菌与霉菌的概念
即往真菌和霉菌为同一概念，
目前统称真菌， 霉菌是真
菌的一种。
2019 4
真菌是院内感染常见微生物
• 院内感染的——7.5% • 血液感染的——第四位 • 肿瘤病人发病率——为8% • 严重创伤、烧伤病人——高达16% • 病死率——达55%-70%
2019 5
美国国立医院院内感染检测 （NNIS）1980-1990
John R.Twenty Years of riding the rocket: When do we reach the moon? Presented Focus on Fungal infections II. 2001,4.14-16. Washington D.C. U.S.A. Abstracts P41-43.
医院感染的真菌感染与诊治进展
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传播途径
真菌主要通过接触传播、空气传播和食物 传播等途径感染人体。
真菌感染的危害和影响
对个体的危害
真菌感染可引起皮肤瘙痒、红肿、疼 痛等症状，严重时可导致组织坏死、 器官功能障碍甚至危及生命。
对社会的影响
真菌感染不仅影响患者的生活质量， 还给社会带来沉重的经济负担。同时 ，一些真菌病还具有传染性，对社会 公共卫生安全构成威胁。
医院感染的真菌感染与诊治进 展
CONTENTS
• 引言 • 真菌感染概述 • 医院感染中的真菌感染 • 真菌感染的诊治进展 • 不同部位真菌感染的诊治进展 • 真菌感染与抗菌药物使用 • 总结与展望
01
引言
目的和背景
探讨医院感染的真菌感染现状、危险因素 及诊治进展。
提高医务人员对医院感染的真菌感染的认 识和重视程度。
通过活检或尸检获取组织标本 ，进行组织病理学检查，观察 真菌侵犯组织的病理变化。
0 血清学检查 4检测患者血清中的真菌特异性
抗体或抗原，辅助诊断真菌感 染。
真菌感染的治疗药物及方案
01
抗真菌药物
根据真菌种类和感染部位选择合 适的抗真菌药物，如唑类、多烯 类、棘白菌素类等。
联合用药
02
03
个体化治疗
促进医院感染控制工作的有效开展，降低 真菌感染的发生率。
汇报范围
医院感染的真菌感染的流行病学特点。
医院感染的真菌感染的危险因素及传播途 径。
医院感染的真菌感染的临床表现及诊断方 法。
医院感染的真菌感染的治疗措施及预防策 略。
02
真菌感染概述
真菌感染的定义和分类
定义
真菌感染是由真菌引起的一类感染性疾病，可侵犯皮肤、黏膜、内脏等各个部位 。
WHO真菌重点病原体感染实验诊断与临床治疗
这部分内容主要介绍了常用的抗真菌药物，包括唑类、嘧啶类、烯丙胺类等。 同时，还对抗真菌药物的抗菌谱、耐药性、不良反应以及药物相互作用等方面进 行了详细的介绍。
这部分内容主要介绍了真菌感染的预防和控制措施，包括环境控制、个人防 护、消毒隔离等。还对一些特殊情况下的预防和控制措施进行了讨论，如免疫缺 陷患者的预防和控制、孕妇和哺乳期妇女的预防和控制等。
这本书详细介绍了19种真菌病原体及其所致疾病的病原学、流行病学、检测 方法、诊断路径、药敏试验和耐药机制、治疗原则及相关进展。每一部分的内容 都深入浅出，既有严谨的科学数据，又有生动的临床案例。这不仅让我对真菌感 染有了更深入的了解，也让我对这本书的专业性和实用性有了更高的评价。
我从书中学习到了很多有关真菌感染实验诊断和临床治疗的知识。书中详细 介绍了如何通过实验方法检测和诊断真菌感染，包括各种实验室技术和诊断路径。 这些知识不仅有助于我更好地理解真菌感染的本质，也为我提供了一种实用的工 具，可以在实践中应用这些知识来诊断和治疗真菌感染。
这部分内容主要介绍了真菌的基本特征、分类、致病性以及真菌感染的流行 病学和诊断方法。通过对这些基础知识的介绍，为后续的实验诊断和临床治疗提 供了理论支持。
这部分内容详细介绍了真菌感染的实验室诊断方法，包括直接镜检、培养、 组织病理学检查、血清学诊断等方法。同时，还对各种方法的优缺点进行了评价， 为临床医生选择合适的诊断方法提供了参考。
WHO真菌重点病原体感染实验诊断 与临床治疗
读书笔记
01 思维导图
03 精彩摘录 05 目录分析
目录
02 内容摘要 04 阅读感受 06 作者简介
思维导图
关键字分析思维导图
感染
预防
感染
诊断
真菌的药敏试验进展和前景(完整版)
真菌的药敏试验进展和前景（完整版）摘要随着介入操作和免疫治疗发展、临床医师意识增强和实验室检测能力提高，侵袭性真菌病（IFD）的发病率和诊断水平均有上升。
新的抗真菌药如泊沙康唑、棘白霉素类上市，给治疗带来更多选择。
然而，抗真菌药物的耐药现象屡有报道。
因此，临床对真菌药敏试验的需求日益增加。
本期新版《血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则(第六次修订版)》（下称原则）增加了真菌药敏试验部分，以期为IFD的治疗提供参考依据。
正文随着介入操作和免疫治疗发展、临床医师意识增强和实验室检测能力提高，侵袭性真菌病（IFD）的发病率和诊断水平均有上升。
新的抗真菌药如泊沙康唑、棘白霉素类上市，给治疗带来更多选择。
然而，抗真菌药物的耐药现象屡有报道。
光滑念珠菌在棘白菌素类治疗过程中出现了获得性耐药，烟曲霉对临床治疗用的三唑类交叉耐药，耐药率达5.8%，令人警醒。
被称为“超级真菌”的耳念珠菌通常多重耐药，其造成的院内感染暴发成为全球威胁。
因此，临床对真菌药敏试验的需求日益增加。
本期新版《血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌病的诊断标准与治疗原则（第六次修订版）》（以下简称原则）增加了真菌药敏试验部分，以期为IFD的治疗提供参考依据［1］。
真菌的药敏试验主要目的在于：（1）提供可重复、可靠的结果指示不同抗真菌药物的活性；（2）检测结果宜与体内活性一致，有助于预测治疗结果；（3）检测治疗过程中耐药性的发展；（4）筛选体外有活性的新药。
然而，由于真菌的生长速度慢、形态各异，真菌的药敏试验远较细菌复杂。
接种菌量、孵育时间、孵育温度、培养基类型、终点的判读、人员经验等众多因素都极大影响检测结果。
只有严格限制各种可变因素，标化检测流程，才能使不同实验室的检测结果具有可比性。
为此，美国临床和实验室标准化协会（CLSI）和欧洲抗菌药物敏感试验委员会（EUCAST）均对真菌药敏试验的方法学进行了严格限定，将微量肉汤稀释法作为真菌药敏试验的参考方法，但操作细节不同［2］。
真菌感染检测方法的研究进展
ｑｑ． ｔｏｍ
乳酸 酚棉 蓝染 色是 比较常用 的一种 染 色方 法 ，
染 色后菌 丝和 孢 子 呈深 蓝 色 。 形态结构清晰， 背 景 干净 ， 反差 大 。乳酸 可杀 灭真 菌 ， 棉 蓝可 使其 着 色 ，
【 摘 要】 近 年 来 ， 随 着抗 生 素 、 免疫抑制剂和激素等的广泛应用 ， 真菌感染有不 断上升的趋势 ， 真 菌 已成 为 医 院感 染 的 常 见 病 原 菌 之 一 。 由于 不 同病 原 菌 对 抗 真 菌 药 物 的敏 感 性 不 同 ， 能 否 准 确 诊 断 病 原 菌 直 接 影 响 药 物 的选 择 。及 时 准确 地 检 测 真 菌 感 染 以及 确 定 菌 种 ， 在 临 床 治 疗 中 尤 为 重 要 。该 文 对 真 菌 感 染 检 测 方 法 的 研 究 进 展 作 一 综 述 。 【 关键词】 真菌感染 ； 病原菌 ； 检 测 方 法
技术 的发 展 ， 有 越来 越多 的方法 可 以应用 于真 菌 的
检测 和鉴 定 。 １ 真 菌 镜 检
菌孢 子与脂 肪滴 有时很 难鉴 别 ， 而荧光 染 色法 对脂 肪滴 不产 生标 记 ， 使 得特 异 性 大 大 提 高 ， 弥 补 了 传
统 的 ＫＯＨ 涂 片 法 在真 菌 数 量 少 时检 出率 不 高 的 不足 。已有许 多文 献 证 实 荧 光染 色 法 在 真 菌 检 测 中较 传统 的 ＫＯＨ 湿 片法 具有 敏感 性 强 、 阳性 率 高
胞、 脂滴 、 气泡 均不 着 色 ， 对 比鲜 明 ， 尤 其 利 于 马 拉
临床常见深部真菌的实验室检测进展
临床常见深部真菌的实验室检测进展【摘要】本文以临床常见深部真菌念珠菌、侵袭性曲霉菌、隐球菌和组织胞浆菌为对象，就近年来非培养检测方法的研究进展作一综述。
阐述了真菌胞壁或胞内成分烯醇化酶、beta—葡聚糖、甘露聚糖和Cand—Tec抗原等抗原检测的方法和方法学评价；阐述了PCR、分子杂交等分子生物学方法对这些真菌的各种特异性靶基因的检测，比较各种方法的特异性和敏感性；简述了真菌代谢产物的研究现状。
【关键词】医学检验真菌检测近年来，随着抗生素、免疫抑制剂及皮质类固醇激素在临床上广泛应用，器官移植、导管插管等普遍开展，深部真菌感染率越来越高。
引起深部真菌感染的病原菌主要有白色念珠苗、曲菌和隐球菌等。
传统的检测方法主要为血培养和组织活检，但血培养耗时长，阳性率较低，组织活检缺乏典型改变，影响早期及正确诊断。
近年来，用于检测真菌的抗原、抗体及代谢产物的血清学检查和特异性基因片段的分子生物学检测已成为这一领域研究的热点。
1真菌胞壁或胞内成分的检测1.1烯醇化酶（Enolase）烯醇化酶又称2—磷酸—I>甘油盐水解酶或弹力酶，是糖酵解所必需的胞内酶。
烯醇化酶广泛存在于真菌细胞中，含量丰富且高度保守。
它也是白色念珠菌中含量最为丰富的蛋白质之一，研究显示只有在深部白色念珠菌感染时才大量释放烯醇化酶，而寄生在浅表部位的白色念殊菌一般不会释放该酶。
Walsh等采用白色念珠菌烯醇化酶单克隆抗体检测血标本中的白色念珠菌烯醇化酶以确定是否有深部真菌感染，并以组织活检和血培养加以对照。
在组织活检或血培养中阳性的24例肿瘤患者中,抗原阳性18例,146例组织活检或血培养阴性的肿瘤患者中,抗原阳性6例。
敏感性和特异性分别为75%和96%[1]。
由于烯醇化酶在体内具有很强的抗原性，形成免疫复合物在体内迅速清除，使检测敏感率受到影响。
有学者建议检测血清中抗烯醇化酶抗体及抗体滴度的动态变化来诊断深部念珠菌病.但因寄殖者也可检测到抗体，免疫缺陷者常缺乏抗体，故抗体检测仅有补充诊断价值。
6.真菌感染与实验室诊断进展_李若瑜
菌属分类
• 烟曲霉（A. fumigatus）是最常见的致病曲霉 • 其次为黄曲霉（A. flavus）和黑曲霉（A. niger） • 棒曲霉（A. clavatus）、灰绿曲霉（A. glaucus）、 构巢曲霉（A. nidulans）、米曲霉（A. oryzae）、 土曲霉（A. terreus）、焦曲霉（A. ustus）、杂 色曲霉（A. versicolor）也有致病报道，但发生率 低。
临床常见的隐球菌
• Lodder1970年记载隐球菌：17种，6变种。 • 主要致病菌种： • 新生隐球菌
– 新生隐球菌新生变种 – 新生隐球菌格替变种 – C.neoformans var. grubii
• 浅黄隐球菌 • 浅白隐球菌 • 罗伦隐球菌
致病性隐球菌
• 新生隐球菌(C. neoformans) • 三个变种
生物学特性
• 念珠菌在环境中和人体内均可寄生存在 正常人皮肤、口腔、肠道、肛门、阴道中 可分离出本菌 • 显微镜下表现为芽孢和假菌丝 • 假菌丝一般与致病相关 • 寄生时一般表现为孢子相
致病性
• 条件致病菌 • 白念珠菌致病力强 • 念珠菌毒素、菌体形态、黏附性和分泌水解酶与 其致病性密切相关
常见病原菌
新生隐球菌
(Cryptococcus neoformans)
咖啡酸琼脂产生棕色菌落
直接镜检（墨汁染色）
敏感药物
• 两性霉素B • 5-氟胞嘧啶 (与两性霉素B联合用药) • 氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑等唑类药物多用于 维持治疗或两性霉素B不耐受的病例。
曲 霉
菌属分类
• 曲霉是一类丝状真菌，在自然界中广泛存在。 • 曲霉属的有性阶段属于子囊菌门、不整子囊菌 纲、散囊菌目、散囊菌科、散囊菌属、裸孢壳 属和萨托菌属； • 有性期仅在部分曲霉有描述。 • 无性阶段属半知菌、丝孢纲、丝孢目、从梗孢 科。
真菌实验室检查方法的新进展
真菌实验室检查方法的新进展王君正;于长平【摘要】近年来,我国人畜共患真菌病的发病率明显上升,快速、准确的实验室检查是诊断真菌感染的重要依据.真菌实验室检查通常包括直接镜检、真菌培养、血清学检测等,分子生物学检测也有了一定发展.就真菌感染的实验室检查方法及新进展进行了简要综述.【期刊名称】《畜牧与饲料科学》【年(卷),期】2017(038)002【总页数】3页(P110-112)【关键词】真菌感染;形态学检查;血清学检查;分子生物学检查【作者】王君正;于长平【作者单位】山东师范大学附属中学, 山东济南 250014;山东省医学科学院山东省皮肤病性病防治研究所, 山东济南250022【正文语种】中文【中图分类】R446.5近年来宠物饲养的人群在逐年增多，调查显示2003—2013年10年间我国的宠物数量增长了近900%，宠物犬的数量每年以10%～20%的速度增长，是世界第三大宠物饲养国［1-2］。
因此，人畜共患真菌感染性疾病的发病率也随之升高，而快速、准确的实验室真菌检查技术可以给临床诊断和治疗提供非常有价值的帮助。
1.1 真菌镜检真菌直接镜检仍是目前浅表和皮下真菌感染最简单快速的检测手段。
在皮损处刮取鳞屑、毛发或甲屑制作标本，低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后高倍镜下观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列，通过直接镜检一般可以区分念珠菌、隐球菌、暗色真菌、毛霉（接合菌）等真菌的感染。
无菌体液中直接镜检发现孢子或菌丝均可确定真菌病的诊断，一般在有菌部位只有发现真菌菌丝或大量出芽孢子方有意义［3］。
但是真菌直接镜检阳性率较低，阴性结果亦不能排除真菌感染的可能性。
1.2 染色检查真菌涂片辅以染色检查可提高真菌镜检阳性率，较常用的传统方法有革兰染色、吉姆萨染色、乳酸酚棉蓝染色等。
革兰染色主要用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌感染的检测。
乳酸酚棉蓝染色后可以明显提高真菌镜检阳性率［4］。
而真菌荧光染色法是通过特殊荧光素标联的几丁质酶与真菌细胞壁中的几丁质结合或与真菌细胞壁的β-1，3-葡聚糖产生特异性的结合，并可吸收一定波长的紫外光，使菌丝及孢子显示特殊的荧光。
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临床希望能鉴别
• 念珠菌或丝状真菌
• 白色念珠菌或非白念 • 曲霉菌或毛霉菌
• 是否卡氏肺囊虫
微生物实验室检查
真菌镜检 真菌培养
组织病理
生理生化 血清学方法 分子生物学
真菌标本镜检
最简单也是最有用的实验室诊断方法 优点：简便、快速，阳性结果可确定真菌感染，阴性
结果不能排除诊断。
深部真菌感染的诊断标准 EORTC/MSG 2008修订版
宿主因素 临床特征 病原学 真菌镜检 真菌培养 组织病理学检查 血清学检查方法（间接证据） CSF隐球菌抗原阳性——确诊 GM-test, G-test——临床诊断
Clinical Infectious Diseases 2008; 46
Prevalence at Autopsy [%]
6
4
2
0
78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92
国内侵袭性真菌感染的发病情况
80 70 60
中华医学杂志2003年3月第83卷第5期
75
发生例数
50 40 30 20 10 0
1981～ 1986年 1986～ 1991年 1991～ 1996年 1996～ 2001年
28 18
28
2004-2008年中国5家中心的 念珠菌分布
70
62.1
2004
59.4 57.9 57.7 60.6
2005
2006
2007
2008
60
百 分 比 （ ％ ）
50 40 30 20
15.2 16.1
16 15.5
15.6Biblioteka 15.3 13.2 14.4
16.1 13.2
10 0
白念珠菌
真菌感染与实验室诊断进展
• • • • • • • • •
侵袭性真菌感染发展趋势
患者年龄的增高
广谱抗生素的应用
更多、更复杂的医疗手段（如移植等）
高强度细胞毒性治疗的应用
免疫抑制剂的应用
其它病因死亡率相对降低
条件致病菌
念珠菌
曲霉菌
条件致病真菌感染危险因素
国外：
国内: 广谱抗生素应用 ICU 皮质激素 糖尿病
采用不染色湿片如KOH涂片或Gram染色涂片。 如在无菌体液的直接镜检中发现真菌，常可确立深部
大部分患者为非粒缺患者(占92.7%)
美国PATH网络：侵袭性真菌病数据库 成人HSCT患者的侵袭性真菌病 (2004-2007)
16%
25% 念珠菌感染 曲霉感染 其它 59%
共234例患者发生250次侵袭性真菌感染(确诊或临床诊断)
Epidemiology and Outcome of Invasive Fungal Infection in Adult Hematopoietic Stem Cell Transplant Recipients Clinical Infectious Diseases 2009; 48:265–73 John Bartlett.2009 ICAAC.
2.0%
镰刀菌
1.4％ 0.9％ 0.7％ 0.2％ 0.4％ 0.7％
美国PATH网络：侵袭性真菌病数据库 念珠菌血症2019例 (2004-2008)
3% 2% 8% 16% 白色念珠菌 光滑念珠菌 近平滑念珠菌 热带念珠菌 克柔念珠菌 其它念珠菌
45%
26%
念珠菌血症菌种比例
Epidemiology and Outcomes of Candidemia in 2019 Patients Clinical Infectious Diseases 2009; 48:1695–703
光滑念珠菌
热带念珠菌
真菌
侵袭性曲霉患者在血液科和ICU 最为常见
流行病学1994-1999年法国一项前瞻性调查结果
血液科 ICU 免疫科 6.0% 15.00% 感染科 其它科室(包括内科/呼吸科) 12.0%
4.0%
63.0%
Cornet m et al. J Hosp infect. 2002;514:288-296
真菌感染流行特点
• 危险因素不断增多，发生率逐年增高 • 白念珠菌仍然是最常见的致病菌 • 非白念珠菌和霉菌不断增加
• 曲霉已成为重要的致死真菌
曲霉感染: 日益严重的问题
• 曲霉是继念珠菌之后的第二常见真菌病原体 • 虽然经过治疗，免疫抑制患者的死亡率仍达90%
Andriole VT. J Antimicrob Chemother 1999;44:151-162; Groll AH et al. Adv Pharmacol 1998;44:343-500; Denning DW. Clin Infect Dis 1998;26:781-805; Andriole VT. Curr Clin Top Infect Dis 1998;18:19-36; Lin S-J et al. Clin Infect Dis 2001;32:358-366; Paterson DL, Singh N. Medicine (Baltimore) 1999;78:123-138.
混合型真菌感染的发病率也逐年上升
一项对三级肿瘤监护中心血液肿瘤患者的尸检结果显示
念珠菌/曲霉混合感染
15%
尸 12% 检 检 9% 出 率 6% (%)
3% 0%
11％
8％
12％
1989-1993年
1994-1998年
1999-2003年
Chamilos G,et al.Haematological.2006;91:986-989
血液系统肿瘤病人
—粒细胞减少 __骨髓移植 器官移植 ICU HIV感染
静脉插管
脓毒血症的发病率
+600%
+300%
+300%
Martin et al, NEJM 2003;348:1546
经尸检证实的侵袭性真菌感染
Groll et al, J Infect 1996;33:23-32. 8
All other Candida spp. Aspergillus spp.
新近出现少见真菌尸检检出率也有所上升
一项对三级肿瘤监护中心血液肿瘤患者的尸检结果显示
足放线菌 尸 检 1.6% 检 出 率 1.2% (%)
0.8% 0.4% 0.0%
1989-1993年 1994-1998年 1999-2003年 Chamilos G,et al.Haematological.2006;91:986-989