实时荧光定量RT-PCR检测犬乳腺肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)基因方法的建立及初步应用
人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA)
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。
【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。
【试剂盒组成】1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL4 标准品稀释液6mL10 说明书1份5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张6 酶标试剂6mL12 密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml【需要而未提供的试剂和器材】1、37℃恒温箱2、标准规格酶标仪3、精密移液器及一次性吸头4、蒸馏水5、一次性试管6、吸水纸【操作步骤】1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
血管内皮生长因子检测45
血管内皮生长因子检测45（最新版）目录一、血管内皮生长因子的概念二、血管内皮生长因子的作用三、血管内皮生长因子的检测方法四、血管内皮生长因子检测的意义五、结论正文一、血管内皮生长因子的概念血管内皮生长因子（Vascular Endothelial Growth Factor，简称VEGF）是一种在血管内皮细胞中表达的蛋白质，它可以促进血管内皮细胞的增殖和迁移，从而促进血管的发生和生长。
在生理过程中，血管内皮生长因子对于血管的生长和发育具有重要的调节作用。
二、血管内皮生长因子的作用血管内皮生长因子主要有以下作用：1.促进血管内皮细胞的增殖和迁移：血管内皮生长因子可以刺激血管内皮细胞增殖和迁移，从而促进血管的发生和生长。
2.促进淋巴管的形成：血管内皮生长因子可以与淋巴细胞结合，通过与血管内皮生长因子受体结合，诱导淋巴管的形成。
3.参与肿瘤生长和转移：血管内皮生长因子在肿瘤生长和转移过程中发挥重要作用，它可以促进肿瘤血管的发生和生长，从而为肿瘤提供营养和氧气，促进肿瘤的生长和转移。
三、血管内皮生长因子的检测方法血管内皮生长因子的检测方法主要包括以下几种：1.免疫学检测方法：如酶联免疫吸附试验（ELISA）等，通过检测血液或组织中血管内皮生长因子的表达水平，了解其含量。
2.实时荧光定量 PCR 法：通过检测血管内皮生长因子 mRNA 的表达水平，了解其基因表达情况。
3.蛋白质印迹法：通过检测蛋白质表达水平，了解血管内皮生长因子的含量。
四、血管内皮生长因子检测的意义血管内皮生长因子检测对于了解血管内皮生长因子在疾病发生和发展中的作用具有重要意义，它可以：1.诊断和监测肿瘤：血管内皮生长因子在肿瘤发生和转移过程中发挥重要作用，通过检测血管内皮生长因子的水平，可以了解肿瘤的发生和转移情况，为肿瘤的诊断和监测提供依据。
2.评估治疗效果：在治疗过程中，通过检测血管内皮生长因子的水平，可以评估治疗的有效性。
3.研究血管发生和生长的机制：通过检测血管内皮生长因子的水平，可以了解血管发生和生长的机制，为相关领域的研究提供依据。
实时荧光定量PCR技术全面分析ppt课件
4
常规vs实时
优缺点比较 定量PCR
常规PCR
灵敏度高 高精确度 安全省时
只能进行半定量或定性 分析 不安全易污染 费时费力
5
定量PCR三个基本概念
扩增曲线
背景期
指数增 长期
相关系数(R2) ---大于0.99
平行管重复性 ---SD小于0.167
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标准曲线差
可能的影响因素
稀释精度 加样精度 反应体系的优化 模板降解
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定量PCR的新 运用
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等位基因分型（SNP研究) MicroRNA分析 基因拷贝数（CNV)分析 蛋白质分析
61
62
相对定量的问题 样品材料不均一造成的差别
内标基因 内标通常是b-actin、GAPDH、18SrRNA等看家基因 （内标基因的表达要相对恒定，表达不受处理因素影响） 对目的基因进行均一化：去除样本间加样量不同带来的 误差
19
SYBR Green I法进行相对定量的问
题
问题：
SYBR Green I可以与非特异性双链结合 信号 结果不准确
理想的PCR反应： 非X理n=X想0×的2PnCR反应：
Xn=X0(1+Ex)n
方程式两边同时取对数得:
log Xn=log (X0 (1+Ex)n)
整理方程式得:
n：扩增反应的循环次数
Xn：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率
log X0= (- log(1+Ex) )×n+ log Xn
结合双链DNA分子小沟 延伸结束，形成双链DNA，SYBR Green结合到双螺旋小沟中，当受到适 合光源激发，发射出荧光，反映产物 浓度
血管内皮生长因子促多囊肾大鼠胆管上皮细胞活力及胆管囊性扩张的机制研究
血管内皮生长因子促多囊肾大鼠胆管上皮细胞活力及胆管囊性扩张的机制研究栾明月;闫文帝;刘特思;吕游;佐藤保则;朴英实;任香善【摘要】目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)促进多囊肾(polycystic kid-ney,PCK)大鼠胆管上皮细胞活力及胆管囊性扩张的机制.方法:免疫组织化学染色法检测正常和PCK大鼠肝组织中VEGF(n=6)和CD31(n=10)的表达情况.RT-qPCR法和酶联免疫吸附实验分别检测胆管上皮细胞和培养上清液中的VEGF表达水平.WST-1比色法检测VEGF对大鼠胆管上皮细胞活力和胆管上皮细胞上清液对内皮细胞活力的影响.细胞迁移实验和管腔形成实验检测胆管上皮细胞上清液对大鼠血管内皮细胞迁移和管腔形成能力的影响.结果:免疫组织化学染色结果表明,VEGF在PCK大鼠的胆管上皮细胞中呈高表达;肝汇管区新生微血管数量明显多于正常大鼠(P<0.01);RT-qPCR法和酶联免疫吸附法检测结果表明,PCK大鼠胆管上皮细胞中VEGF mRNA和蛋白表达显著高于正常大鼠(P<0.01);WST-1结果显示,VEGF可增强PCK大鼠胆管上皮细胞活力(P<0.01);PCK大鼠胆管上皮细胞培养上清液能提高内皮细胞活力(P<0.01);VEGF siRNA和VEGF受体抑制剂可降低胆管上皮细胞活力(P<0.01);细胞迁移实验和管腔形成实验结果表明,PCK大鼠胆管上皮细胞培养上清液可提高内皮细胞迁移能力和管腔形成能力(P<0.01).结论:PCK大鼠的胆管囊性扩张与胆管上皮细胞过度分泌VEGF存在联系.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2019(035)006【总页数】6页(P1106-1111)【关键词】血管内皮生长因子;细胞活力;Caroli病;多囊肾【作者】栾明月;闫文帝;刘特思;吕游;佐藤保则;朴英实;任香善【作者单位】延边大学肿瘤研究中心,吉林延吉 133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延吉 133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延吉 133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延吉 133002;金泽大学医学部形态机能病理学教研室,日本金泽 9208640;延边大学肿瘤研究中心,吉林延吉 133002;延边大学肿瘤研究中心,吉林延吉 133002【正文语种】中文【中图分类】R363.2;R692.1+2Caroli病(Caroli disease)是胆管末梢以进行性、多发性囊状扩张为特征的疾患，常合并先天性肝纤维化(congenital hepatic fibrosis，CHF)，是常染色体隐性遗传性多囊肾(autosomal recessive polycystic kidney disease，ARPKD)的肝胆管病变[1-2]，其确切发病机制至今仍未阐明，目前主要有胆管板畸形(ductal plate malformation，DPM)学说和基因突变学说，其中基因突变学说认为，在胚胎发育过程中，胆管形成时期上皮细胞过度增殖，其远端因长期受阻而逐渐扩张呈囊状，近端受阻程度不同，形成大小不一的囊肿[3]。
血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及临床意义
Mod Diagn Treat 现代诊断与治疗2020 Jan 31 (1)•131 •相关。
吸烟是导致CHD发生的重要因素，也是CHD 患者PCI术后再狭窄的危险因素。
长期吸烟的患者 机体氧化能力降低，血管调节功能变弱，促进血管内 膜增生，从而促进ISR的发生W。
糖尿病会引起机体 代谢紊乱并损伤血管内皮，致使内皮功能不全，是导 致ISR发生的重要因素[9]。
高血压是指血压异常升 高的慢性疾病本研究结果显示，狭窄组中有30 例患者有合并高血压，占比78.95%，提示高血压是 诱发ISR的重要因素之一。
高血压可引起血管壁压 力持续升高，损伤血管内皮细胞，加剧动脉粥样硬化，从而导致ISR的发生％。
由此可见，戒烟、合理饮食，控制血糖、降压是降低冠心病患者PCI术后ISR发 生风险的关键所在。
此外，狭窄组支架直径显著小于 非狭窄组，提示置人较大直径的支架可降低ISR的发 生风险。
吴小朋等[12]研究发现，支架直径是ISR的影 响因素，置入较长直径的支架可有效减少ISR的发生 率。
本研究结果与之相符。
综上所述，在冠心病患者接受p e r冶疗期间对 吸烟、糖尿病、高血压、置入支架直径等相关危险因 素提前做出干预，可有效降低ISR的发生风险，对患 者术后恢复有积极的临床意义。
.参考文献：[1]高润霖.进一步改善稳定性冠心病的诊治:浅谈"中国稳定性冠心病诊断与治疗指南"亮点⑴.中华心血管病杂志，2018,46(11):833- 836.[2] 高立建，陈纪林.从循证医学的角度看冠状动脉旁路移植术与经皮冠状动脉介入治疗之争⑴.中国循环杂志，2018,33(12):1159-1161. [3] 王聪霞，范雅洁.冠心病血管内皮损伤与血管重构的研究进展⑴.西安交通大学学报(医学版)2018,39⑷:455-458.[4] 吴天源，李韶南，罗义，等.血清醛固酮对冠心病患者介入术后心血管事件和支架内再狭窄的预测价值[J].实用医学杂志,2018,34(2)：227-230.[5] 王洪涛，余文华，盛燕.静息心电图ST-T改变及静息心率与冠心病严重程度的相关性[J].中国老年学杂志，2019,39(12):2841-2844. [6；|熊青，陈集志，王洪如.684例冠心病患者P C I术后再狭窄发生率 影响因素分析[J].现代诊断与治疗，2018,29(24):4024-4026.[7]廖成标，蒋爱忠，乐建华，等.冠心病合并糖尿病患者支架植人后的预后效果探究[J].现代诊断与治疗，2017,28( 14):2638-2639.[8：]王娟，许浩博，乔树宾，等.吸烟的冠心病患者冠状动脉病变特点 及经皮冠状动脉介入治疗后长期预后评价[J].中国循环杂志，2018,33(11)：1〇53-1058.[9] 李强，李新阳，冯文化.血清晚期氧化蛋白产物对冠心病合并糖尿病患者冠状动脉支架植入术后支架内再狭窄的预测价值[J].中国 糖尿病杂志，2018,26(5):394-397.[10] 杨珍珍，赵存瑞，张锦，等.从血脂控制状况与支架内再狭窄的相关性看心脏康复管理的重要性[J].临床心血管病杂志，2017,33(7)：650-652.[11] 刘越，姚懿，宋莹，等.入院收缩压升高对行冠状动脉介入治疗的急性冠状动脉综合征患者远期预后的影响[J].中国循环杂 志，20丨8,33(5):429-434.[12] 吴小朋，孙慎杰，张娟，等.经皮冠状动脉介入治疗术患者发生支架内再狭窄的影响因素研究[J].中国全科医学，2015，18(16):1918- 1921.收稿曰期:2019-03-15血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及临床意义曹娟(江苏省连云港市赣榆区人民医院病理科，江苏连云港222100)摘要：目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在乳腺癌中的表达以及临床意义。
实时荧光定量PCR实验结果分析
2.0% GMO standard
24.56
19.70
4.86
5.0% GMO standard
22.94
19.48
3.46
Soy dessert
22.78
19.27
3.51
Soy flour
ND
18.13
ND
Soy burger
22.32
19.91
2.41
CT = CT(GMO epsps) – CT(lectin)
1996年－至今：转基因作物迅 猛发展期
转基因产品介绍
1. “转基因产品”又叫生物技术产品，指用基因工程技术或者 其他现代技术改变基因组构成的动物、植物、微生物及其产 品。例如，把某些除草剂抗性的基因转入大豆、玉米的植株中 ，产生除草剂抗性。
2. 转基因食品就是以转基因生物体直接作为食品或以其为原料 加工生产的食品 。
结果与双标准曲线法相近
Healthy RNA
BBER2
GAPDH
28.40
23.27
28.46 28.43± 0.04
23.41
23.34± 0.10
Carcinoma RNA
BBER2
GAPDH
27.36
22.81
27.12
27.24 ± 0.17
22.86
22.83 ± 0.03
ΔC(t) 5.31 5.05 5.18±0.1 8
Intact
7 hr. at 90°C
Experion™ RNA HighSens Chip
0.1-5 ng/μl 100-6,000 nt
Intact
5 hr. degradation
血管内皮生长因子VEGF检测临床意义和检测优势
血管内皮生长因子VEGF检测临床意义和检测优势血管内皮生长因子是一种具有高度生物活性的功能性糖蛋白。
它是特异性的、生理作用强大的内皮细胞有丝分裂原，能作用于血管内皮细胞，使其增殖、迁移、管腔形成，参与血管生成并使毛细血管通透性增加。
它可致肿瘤血管异常生长，阻碍抗肿瘤药物有效输送至肿瘤组织内，并可刺激新生血管生长因子增加。
肿瘤与血管的关系：肿瘤生长和转移原理一方面，如果没有足够的血液供应和营养，肿瘤是长不大的，也就1-2mm3的样子。
肿瘤生长必须依赖血管的生成来提供必要的营养物质和氧气；另一方面，肿瘤的转移也需要血管通透性的改变来实现。
由此可见，肿瘤的生长、转移与血管是密切相关的。
VEGF检测的临床意义1、肿瘤的早期筛查。
肿瘤的生长、转移十分迅速，当肿瘤细胞团向实体肿瘤转化过程中，肿瘤细胞会产生大量VEGF，促进新生血管的生成，此时多为肿瘤Tis期和T1期，是肿瘤早期筛查的最佳时期，并可通过现有的临床手段予以确诊。
早期筛查可提高肿瘤患者的生存率，延长生存时间。
2、肿瘤的广谱性筛查。
有血管新生趋势变化，就伴随VEGF浓度变化。
VEGF可筛查几乎所有实体肿瘤，它的广谱性是其他检测指标不可代替。
3、VEGF可用于肿瘤临床诊断和预后评估。
临床上很多恶性肿瘤疾病缺乏特异性的肿瘤标志物，例如肾癌等。
而由于VEGF的广谱性、敏感性使得通过血液检测VEGF就可辅助诊断这类恶性肿瘤疾病。
同时，根据VEGF的水平变化可反映肿瘤的发展程度，对肿瘤的预后可作出判断。
一般而言，同一种恶性肿瘤，VEGF水平越高，肿瘤恶性程度也越高，预后相对较差。
VEGF检测优势1、早：在癌症发生的早期即可发现，对肿瘤早期发现具有重要意义；2、广：广谱性肿瘤标志物，适用于各种肿瘤的筛查和检测；3、准：联合其他肿瘤标志物检测提高诊断的准确性；4、高：灵敏度高，VEGF的最低检测限为pg级，分析灵敏度为目前肿瘤标志物中最高。
vegf检测评价指标
vegf检测评价指标Vascular Endothelial Growth Factor（血管内皮生长因子）简称VEGF，是一种在血管形成和维护过程中起主要作用的分子。
VEGF通过在血管内皮细胞上结合VEGF受体来促进新血管形成，并且参与多种疾病的发生和进展。
为了评估VEGF的作用和相关疾病的发生风险，VEGF检测成为研究人员广泛使用的评价指标。
目前，VEGF检测技术已经得到了不断的改进，主要包括ELISA法、荧光定量PCR法、免疫组织化学法以及免疫荧光法等多种方法。
其中，ELISA法具有灵敏而高效的特点，被广泛用于定量分析疾病患者血浆和组织中的VEGF水平。
荧光定量PCR法因其准确和快速，成为了常用的测定VEGF mRNA表达水平的方法。
免疫组织化学和免疫荧光法可用于检测VEGF蛋白的表达，同时也能够确定蛋白在哪些组织和细胞类型中表达。
此外，研究人员还采用荧光分析技术、生物传感器技术等先进技术，不断推进VEGF检测技术的研究与应用。
在疾病的诊断和治疗中，VEGF成为了一个重要的生物标志物。
例如，在肿瘤学上，目前许多疗法已经将VEGF作为肿瘤治疗的关键目标，如抑制VEGF等有望成为治疗肿瘤的一种新途径。
在人类的动脉粥样硬化中，VEGF也被证明对新血管形成和斑块稳定起重要作用。
研究表明，通过VEGF检测技术可以提高对此类疾病的诊断和治疗的准确性和效果。
总之，VEGF检测技术已成为检测疾病和评估治疗效果的重要手段，它在目前的实际应用中已经得到了证实。
最新研究也为我们提供了更好的VEGF检测方法和途径，愿将来的VEGF检测技术在更多的疾病中为人类的健康保驾护航。
荧光定量pcr技术及在动物疫病检测中的应用
荧光定量pcr技术及在动物疫病检测中的应用
荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR，RT-PCR）是一种实时监测DNA及RNA扩增
过程并量化扩增产物，这种反应把一种无荧光探针或荧光标记后的探针添加到反应组分中，同时，该探针会特异性结合样品中的特性序列，从而实现荧光信号的产生。
当扩增的反应
产物的数量与样品的终末浓度呈正比时，荧光定量聚合酶链反应就可以推断出样品中特异
性序列的存在性。
荧光定量PCR技术由聚合酶链反应（PCR）和荧光定量技术结合而成，可用于快速，
准确，灵敏地检测动物DNA及RNA水平，尤其是病原体检测，比如病毒、细菌及其他微生
物等。
目前荧光定量PCR技术被广泛应用于动物疫病检测，其核心技术是根据病原体的特性
序列选择特异性探针，在设计制备的PCR 试剂盒中添加其它必要成分，在特定的温度及时间范围内反复扩增，其最终结果可以在实验过程及最后结果中反映出，能够更精确的检测
到一些低检出限的病原体，有效提高检测速度和准确性。
荧光定量PCR技术在动物疫病检测中有以下优点：1.检测灵敏度高，能够以少量样品
快速、准确检测出病原体定量；2.试剂、耗材及仪器成本低廉，可有效节约检测成本；3.
可以同时实现多项检测，样品及检测条件敏感；4.实时荧光反应可以直接在PCR反应完
成时监测样品中扩增片段的变化。
总之，荧光定量聚合酶链反应技术已经成功的应用于动物疫病检测，其良好的检测性能，低廉的成本，实用性强及可靠性，使其在动物疫病领域中地位日益显著。
血管内皮生长因子在犬乳腺肿瘤中的表达
ＶＧ ＥＦ是在 所 有 脊 椎 动物 均 存 在 的 高度 保 守
基 因 ，犬 Ｖ Ｇ １ ４蛋 白与人 Ｖ Ｇ １５蛋 白的氨 基 ＥＦ ６ Ｅ Ｆ６
种高度 特异 的血 管 内疫 细胞 有丝 分裂 原 ，在体 外
中 图分 类 号 ：￥ ５ ．９ ８８２２ 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１０ － ５ ７２ ０ ） １０ ４－ ３ ０５ ８ ６ （０８ ０ － ０ ６ ０
血 管生成 是肿瘤 生长 的必要 条件 ，如果 没有 血管生成， 肿瘤 生长 直 径 不 会 超 过 ２ 咖 ， 有 血 只 管 化 的肿 瘤才 能生长 到具有 临床 意义 的 大小 。新 生的血 管为肿 瘤提供 营养 并带走 代谢 产物 ，为肿 瘤 生长创 造有 利条件 。在肿 瘤 生长过 程 中会产 生
摘 要 ：血管 内皮生长 因子是一种 同源二聚体多肽 ，能够刺激血管上皮细胞 迁移和增值 ，是血管发生 的关键 ，它在肿瘤的生长和转移 中起重要作用。血管 内皮生长因子不仅可以作为临床上判断犬乳腺 肿瘤预
后 的有效指标，而且为犬乳腺肿瘤的治疗开创 了新途径 。 关键词 ：血管内皮生长因子；乳腺肿瘤；犬
癌 基 因 的表达 产 物 ） ， Ｖ Ｇ 等 对 Ｅ Ｆ含 量及 表 达 均有
影 响。
些血管 因子 ， 如血 管 内皮 生长 因子 、 纤维细 胞 成 生长 因子 、转 移生长 因子 、血 小板衍 生 生长 因子
１２ Ｖ ＧＦ受体 Ｖ Ｇ ． Ｅ Ｅ Ｆ的 生物 学 效 应 是通 过 表 达在 特定细 胞表 面 的受体介 导 的 。 Ｅ Ｆ 受体主 要 ＶＧ 有两 种 ： ｉ一 Ｆ ｔ １和 Ｋ Ｒ １ 均 为酪氨 酸激 酶 受体 ， Ｄ一 ， 与 血 管形 成 有 关 。Ｆ ｔ １仅 在 血 管 内 皮细 胞 表 达 ， ｉ一 Ｋ Ｒ １ 要 在血 管 内皮细 胞表 达 ， 在 巨 噬细胞 、 Ｄ一 主 但 某些 血液细 胞 和肿瘤细 胞也 能检 测 到 Ｋ Ｒ １出现 Ｄ－ 表 达 。如 对 小 鼠胚 胎 干 细 胞 基 因 靶 向处 理 ， 使
实时荧光定量PCR对犬乳腺肿瘤组织TNFR1基因的定量检测
摘 要 ： 腺 肿 瘤 是 母犬 中 最 为 常见 的肿 瘤 ， 用 实 时 荧 光 定 量 Ｐ Ｒ 检 测 了 ３ 乳 运 Ｃ ７例 犬 乳 腺 肿 瘤 病 例 和 ３ ７份 正 常 乳 腺 组 织 。
ｉ ｅ ｔｇａ ｅ ｉ ｏ ｔ ｅ ａ ｓ ｃａ ｉ ｆｍ ａ ｍ ａ ｙ ｇ ａ ｕｍ ｏ ｓ ｗ ｉｈ ａ ｐｔ ｉ ， ｒ ａ— ｉ ｅ ＰＣＲ ａ ｍ ｐ ｏ ｅ ｏ ｎｖ ｓ ｉ ｔ ｎｔ ｈ ｓ ｏ ｉ ｔｏｎ ｏ ｍ ｒ ｌ ｎｄ ｔ ｒ ｔ ｐｏ ｏｓｓ ｅ ｌｔｍ ｗ ｓｅ ｌ ｙ ｄ ｔ
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人血管内皮生长因子（VEGF）酶联免疫检测试剂盒使用说明
人血管内皮生长因子（VEGF)酶联免疫检测试剂盒使用说明书AE98006Hu使用前仔细阅读本说明书。
本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人血管内皮生长因子（VEGF)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。
用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中血管内皮生长因子（VEGF)测定。
工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人血管内皮生长因子（VEGF)水平。
向预先包被了人血管内皮生长因子（VEGF)单克隆抗体的酶标孔中加入人血管内皮生长因子（VEGF)，温育；温育后，加入生物素标记的抗VEGF抗体。
再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅与样品中人血管内皮生长因子（VEGF)的浓度呈正相关。
试剂盒组成试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品1200ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存链霉亲和素-HRP3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存生物素标记的抗0.5ml×1瓶1ml×1瓶2-8℃保存VEGF抗体显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存需要而未提供的试剂和器材1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．精密移液器及一次性吸头4．蒸馏水，5．一次性试管6．吸水纸注意事项1．从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
犬瘟热病毒实时荧光RT-RPA检测方法的建立及应用
动物医学进展,2020,41(11)=19-23Progress in Veterinary Medicine犬瘟热病毒实时荧光RT-RPA检测方法的建立及应用张启龙，傅彩霞，张玮，高晓龙，王林，程敏姮，郑雪莹，刘海莹，周德刚*(北京市动物疫病预防控制中心，北京102629)摘要：为建立犬瘟热病毒(CDV)临床快速检测方法，针对CDV保守N基因依据重组酶聚合酶等温扩增(RPA)引物设计原理进行RPA引物探针设计，通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验和临床样品检测，建立了CDV实时荧光RT-RPA检测方法。
结果显示，反应体系中M-MLV反转录酶最适浓度为4U/“L,所建CDV实时荧光RT-RPA检测方法特异性较好，敏感性最低可检测到5.68X102copies/“L,高于国标RT-PCR(GB/T27532-2011)检测方法。
建立的CDV实时荧光RT-RPA检测方法具有较高的敏感性和特异性、操作简便、20min内判定结果，可用于临床犬瘟热快速诊断，对犬瘟热的防控具有重要意义。
关键词：犬瘟热病毒；实时荧光；反转录-重组酶聚合酶等温扩增；检测中图分类号：S852.659.5文献标识码:A文章编号=1007-5038(2020)11-0019-05犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的犬科、鼬鼠科及部分浣熊科的一种高度接触性、急性病毒性传染病［1］。
该病最早于1809年Jeneer首次报道，1905年Carre发现其病原为一种病毒CDV主要侵害易感动物的消化系统、神经系统和呼吸系统，死亡率可达30%-80%，雪貂感染后死亡率可达100%4,严重影响犬业、毛皮动物养殖业及野生动物健康。
CDV属于副黏病毒科麻疹病毒属，病毒基因组为负链RNA,基因组包含约15690个核苷酸,主要编码核衣壳蛋白(N)、磷蛋白(P)、大蛋白基质(L)、膜蛋白(M)和融合蛋白(F)5等蛋白，其中N 基因序列保守性高，是CDV的主要抗原基因。
血管内皮生长因子（VEGF）与肿瘤
血管内皮生长因子（VEGF）与肿瘤
杨占斌
【期刊名称】《中国医学文摘：肿瘤学》
【年(卷),期】2000(014)003
【总页数】2页(P258-259)
【作者】杨占斌
【作者单位】广西医科大学第一附属医院，南宁530021
【正文语种】中文
【中图分类】R730.23
【相关文献】
1.肿瘤增殖相关分子(TSPAN-1)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)在宫颈鳞癌中的表达及意义 [J], 王惠芬;毛熙光
2.浸润性乳腺癌中胸苷磷酸化酶(TP)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达及与肿瘤微血管密度(MVD)的关系 [J], 张刚;邢智勇;李中
3.血管内皮生长因子（VEGF）在恶性肿瘤中的表达及其临床意义 [J], 李春阳
4.新生血管内皮生长因子EG-VEGF/PROK1在肿瘤中的研究进展 [J], 史剑飞;卢北玲;黄博;毛瑞;唐建勇;祝撷英
5.实时荧光定量RT-PCR检测犬乳腺肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)基因方法的建立及初步应用 [J], 邱昌伟;邓干臻;李成叶;林德贵
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犬瘟热病毒荧光定量RTPCR检测方法的建立及应用
犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用苏乔1，余绍华¨，苏力3，蔡勤辉3，陈武3，陈虹1，黄晓卉1，罗满林p(1．中山大学附属第一医院，广东广州510080；2．华南农业大学兽医学院，广东广州510642；3．广州动物园，广东广州510070)【摘要l目的建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法。
方法根据犬瘟热病毒的核衣壳蛋白(N)基因保守序列，设计特异性引物，建立犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法。
结果与结论试验结果表明，该方法敏感性比普通RT-PCR高出100倍，重复性良好，变异系数在1．01％以下，对犬的常见病原核酸提取物检测均为阴性，证明特异性良好。
对32份临床样本进行检测，27份为阳性，高于普通R T-PCR方法。
试验结果表明该方法可用于犬瘟热感染情况的检测。
l关键词l犬瘟热病毒；核衣壳蛋白(N)基因；荧光定量RT-PCR；建立Establishment and Application of Real-time RT-PCR Method for Detectionof Canine Distemper VirusSu Qiaoi．Yu Shaohuat Su ZL Cai Qinhuit Chen Wu3,ChenHongi．Huang Xiaohui7，Luo Manlin2+仃．砌e Firs t Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Gua ngzh ou510080,China2．College of Veter in ary Medicine,South China Agricultural University,Guangzhou510642,China3．Guangzhou Zoo，Guangzhou510070,China)[Abstract]0bieetive Establish real．time Kr-PCR method for the detection of CDV Methods On the basis of nucleocapsid protein(N)gene conservation sequence of the canine distemper virus(CDV)，a pair of specific研mers was designed to es ta bli sh real．time RT-PCR method for the det ec ti on of C DV Results and Conclusions The results showed that the sensitivity of this method was l OO times greater than that of IU二PCR．This method has good reproducibility coefficient of v a ri at io n Was less than 1．0 1％．Pathoge ns associated with canine were not amplified by this method which prov ed it s e xc el l en t specificity．For clinical appli ca t io n．27 po si tiv e samples were detected from32clinical samples in the test．This result revealed that real．time Rr．PCR Can be used for the detection of canine distemper infection．[Key words]CDV；r eal-t ime RT-PCR；nucl eoc apsi d protein(N)gene犬瘟热是由犬瘟热病毒(Cani ne distemper virus，CDV)，所致的一种急性高度接触性传染病，能引起犬科、鼬科、浣熊科等多种动物发病，发病率几乎达100％，易继发二次感染‘11。
实时荧光定量PCR检测犬GAPDH基因
实时荧光定量PCR检测犬GAPDH基因李佳;姜代勋;陈益山;任超;陈丽;张岩;陈武【摘要】建立犬3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的qPCR检测体系,为犬功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.对反应体系进行优化,建立了基于SYBR Green Ⅰ染料技术的real-time PCR方法.结果表明,其标准曲线相关系数达到0.999,扩增效率为105.8%,熔解曲线为特异性单峰,组内变异系数(CV%)为0.25～2.8,组间变异系数(CV%)为1.31～2.85.该研究所建立的荧光定量RT-PCR 法灵敏、稳定、高效,为犬GAPDH基因作为内参基因用于犬相关基因定量表达分析奠定了基础.【期刊名称】《北京农学院学报》【年(卷),期】2010(025)001【总页数】4页(P33-36)【关键词】犬;GAPDH基因;qPCR【作者】李佳;姜代勋;陈益山;任超;陈丽;张岩;陈武【作者单位】北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京,102206;北京农学院动物科学技术系,北京,102206;北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京,102206;北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京,102206;北京农学院动物科学技术系,北京,102206;北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京,102206;北京农学院动物科学技术系,北京,102206;北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京,102206;北京农学院动物科学技术系,北京,102206;北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京,102206;北京农学院动物科学技术系,北京,102206;北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室,北京,102206;北京农学院动物科学技术系,北京,102206【正文语种】中文【中图分类】S818.9实时荧光定量PCR技术,不仅实现了对DNA的定量检测,而且具有高敏感性、高特异性、高通量、时效性的特点[1],且自动化程度高、无污染性[2-3],该项技术在检测基因的表达差异方面具有很强的优越性[4]。
犬心肌中血管内皮细胞生长因子的表达
犬心肌中血管内皮细胞生长因子的表达胡志伟;Joachim von Bonin【期刊名称】《中华老年心脑血管病杂志》【年(卷),期】2002(004)001【摘要】目的观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelid growth factor,VEGF)基因和蛋白质在犬心肌中的表达.方法在犬冠状动脉左前降支放置Ameriod缩窄环制作慢性缺血心肌模型,缺血3周后运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各部位心肌VEGF信使核糖核酸变异体(VEGF mRNA isoform),并行计算机吸光度扫描计算其构成比;采用免疫组织化学ABC法观察心肌中VEGF 蛋白质的定位.结果在犬心肌正常供血区、缺血边缘区及缺血区均有3种VEGF mRNA变异体的表达,其构成比分别是VEGF188为53%,VEGF164为44%和VEGF120为3%;心肌VEGF蛋白质主要定位于血管平滑肌细胞.结论犬心肌中有3种VEGF mRNA变异体的基础表达,缺血并不能改变VEGF基因的剪接转录方式;VEGF以旁分泌的方式调节血管内皮细胞的功能状态.【总页数】3页(P43-45)【作者】胡志伟;Joachim von Bonin【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科,湖北,武汉,430022;德国Hannover医科大学心内科,汉诺威,D-30623【正文语种】中文【中图分类】R542.2【相关文献】1.补阳还五汤对心肌梗死后大鼠心肌微血管密度及血管内皮细胞生长因子-C表达的影响 [J], 陈洪;周迎春;黄桂琼;刘彬;李杏2.急性心肌梗死后血管内皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子表达动态变化[J], 杨靖;毛晓波;曾秋棠3.犬肝射频消融后移行区PET/CT表现与血管内皮细胞生长因子表达的相关性 [J], 杜小丽;畅智慧;王传卓;刘兆玉;崔鹏4.当归补血汤对病毒性心肌炎小鼠心肌保护作用及对心肌组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响 [J], 邝志斌5.血管内皮细胞生长因子真核表达质粒的构建及其在心肌细胞中的表达 [J], 易甫;吕安林;贾国良;张荣庆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬血管内皮细胞生长因子蛋白质和基因序列分析
犬血管内皮细胞生长因子蛋白质和基因序列分析胡志伟;Joachim;von;Bonin【期刊名称】《华中科技大学学报（医学版）》【年(卷),期】2001(030)006【摘要】为构建和表达犬血管内皮细胞生长因子(VEGF)奠定基础,从犬心脏组织提取总RNA和蛋白质,利用逆转录-聚合酶链反应方法,克隆VEGF基因,将其重组入测序载体测序;采用Western免疫印迹方法检测VEGF蛋白质.结果发现:犬心脏VEGF cDNA存在3种异构体,其序列长635 bp、563 bp和431bp,编码188、164和120个氨基酸.犬VEGF与人VEGF相比,缺少第8位氨基酸-甘氨酸,同源性高达94%.在犬心脏Western免疫印迹方法检测到两种VEGF蛋白质的表达,分子量分别约为46 ku和30 ku.提示:VEGF164是犬心脏组织中主要的血管新生、血管张力和血管通透性调控因子.【总页数】4页(P556-558，561)【作者】胡志伟;Joachim;von;Bonin【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院心外科,武汉,430022;德国Hannover医科大学心内科,汉诺威,D-30625【正文语种】中文【中图分类】Q58;Q343.1;R322.1【相关文献】1.人工胶体液对感染性休克犬血管通透性及血管内皮细胞生长因子的影响 [J], 邱一真;孙华;李峰2.犬心肌中血管内皮细胞生长因子的表达 [J], 胡志伟;Joachim von Bonin3.犬肝射频消融后移行区PET/CT表现与血管内皮细胞生长因子表达的相关性 [J], 杜小丽;畅智慧;王传卓;刘兆玉;崔鹏4.血清血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)是晚期宫颈癌的特异性生物标记物:VEGF-C与胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、IGF结合蛋白3(IGF-BP3)及血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)的关系 [J], Mathur S.P.;Mathur R.S.;Gray E.A.;朱国栋5.异种血管内皮细胞生长因子重组蛋白质疫苗联合阿霉素治疗淋巴瘤的研究 [J], 牛挺;刘霆;贾永前;刘继彦;吴扬;胡兵;田聆;杨莉;阚兵;魏于全因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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ｐ Ｅ － ａ Ｇ Ｍ ＴＥ ｓ ｙ栽体 ， 经质粒 Ｐ Ｒ扩增 、 Ｃ 酶切和 测序鉴 定重组质粒 ， 构建标 准曲线 等， 成功建 立 了乳腺 肿瘤 Ｖ Ｇ Ｅ Ｆ基 因 实时荧光定量 Ｐ Ｒ检测方 法。运用 实时 荧光定量 Ｐ Ｒ检 测 了４ 例 不同的犬乳腺肿瘤病例 、 Ｃ Ｃ ０ ２例正常乳腺 组织。结
ａ ｍｅ ｏ ｆ ｅ — ｍｅ Ｐ Ｒ ｔ ｘ ｍｉ ｅ ｃ ｎ ｎ ｌ ｌ ｎ ｔ ｄ ｏ ａ ｔ Ｃ ｏ ｅ ａ ｎ ａ ｉｅ ｉａ ｌ ￣ ｈ ｒｌ ｉ ｌｌ ｌ ｔｍｏ Ｇ ｅ ｅ ｅ ｐ ｅｓｏ ａ ｓａ ｌ ｈ ｄ Ｔ ｔ ＮＡ ｗ ｓ ｅ ｔ ｃｅ ｕ ｒＶＥ Ｆ ｇ ｎ ｘ ｒ ｓｉｎ ｗ ｓ ｅ ｔ ｉ ｅ ． ａ Ｒ ａ ｘｒ ｔｄ ｂｓ ｏ ｌ ａ
的表达量与肿瘤的大小和发病动 物年龄无 关（ Ｐ＞００ ） Ｅ Ｆ基 因在犬乳腺 癌组 织中的表达量 远 高于其在 正常 ． 。Ｖ Ｇ ５ 乳腺和 良性乳腺肿 瘤组 织中的表达 ， 且与淋巴结是 否发 生转移相 关。因此 ， Ｅ Ｆ可作为 犬乳腺 癌转移 、 ＶＧ 复发 的预
测指标之一。
关 键 词 ：Ｅ Ｆ 乳 腺 肿 瘤 ； 时 荧光 定 量 Ｐ Ｒ； ＶＧ； 实 Ｃ 犬
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３４ １
中 国 兽 医 学 报 ２０ 年 ３ ０８ 月 第 ２ 卷 第 ３ ８ 期 Ｃ／ＪＶ ｉ ａ ２０ Ｖ１ ８ ｏ３ ｈ ｔｃ ｎ ｅＳ Ｍ ｒ ０８ ｏ ２ Ｎ ． ． ．
实时荧 光定 量 Ｒ ．Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ检 测 犬乳 腺肿 瘤 血 管 内皮 生长 因子 （ Ｅ Ｆ 基 因 Ｖ Ｇ ） 方法 的建 立及 初 步应 用
ｒ ａ ．ｉ ｅ ＲＴ． ｅ １ｔ ｍ ＰＣＲ
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果发现 ： 犬恶性乳腺肿瘤组织 中，Ｅ Ｆ基 因表达量 明显 高于 良性 乳腺 肿瘤 和正常乳腺 组织 （ ０ ０ １ ； 伴有 在 ＶＧ Ｐ＜ ．０ ）在 淋巴结转移 的犬乳腺癌组织 中， Ｅ Ｆ基 因表 达量明显 高于没有 发现转移的乳腺 癌组织（ ＶＧ Ｐ＜００ ）但 Ｖ Ｇ ．１ ， Ｅ Ｆ基 因
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中图 分 类 号 ：８８２２ ￥５ ．； ７ ￥５ ．９ ；８７４ Ｑ ８
文献 标 识 码 ： Ａ
文 章 编 号 ：０５４４ （０８０ ．３４０ １０—５５ ２０ ）３ １—５ ０
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邱 昌伟 １ ， 干臻 李成 叶 林德 贵 ２邓 ， ，
院 ， 北 武 汉 ４ ０７ ） 湖 ３００
（． １中国农业大学 动物医学院， 北京 １０４２华中农业大学 动物医学 ０ ９；． ０
摘要 ： 为了准确地分析血管 内皮生长因子（ ａｃｌ ｎｏ ｅａ ｇ ｗｈｆ ｔ Ｖ Ｇ ） 犬乳腺肿瘤形成过程 中的作用 ， Ｖｓｕａ ｅｄｔ ｌｌ ｒ ｔ ａ ｏ Ｅ Ｆ 在 ｒ ｈ ｉ ｏ ｃ ｒ，
（ ． ｏ ｅ￣ｏ ｅ ｒ ａｙ ｄ ｉ ， ｈｎ ａ ｒ １ Ｃ Ｕｇ ｆＶｔｉ ｒ Ｍｅｉｎ Ｃ ｉ ｇｉ ｅｎ ｃｅ ａ —
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