TSH荧光酶免疫分析法1
免疫放射分析法与放射免疫分析法测定血清TSH的临床诊断评价
1. 2 方法 血 清 TS H ( IRMA) :天津九 鼎医学 生物工 程有 限公司生产的高灵敏 度人 血清 TSH 免 疫放 射分析 药盒 ,正 常参考值为 0. 2～ 7. 0 uIU/ ml ;血清 TSH ( RIA) :天津九鼎医 学生物工程有限公司生产的高 灵敏 度人 血清 TS H 放射免疫 分析药盒 ,正常参考值为 < 10 uIU/ ml ;血清 TT3 、TT4 :天津 九鼎医学生物工程有限 公司生 产的 T3 、T4 放 射免疫分 析药 盒 , TT3 、TT4 正常参 考值分 别为 0. 7～ 2. 0 ng/ ml 和 6. 0～ 12. 0 ng/ ml ;以上几种参数测定均用 GC2400r 放射免疫 计数 器 ( 中国科学技术大学科技实业总公司中 佳光电仪 器分公司 生产) 进行测定 ,且每次测定均带标 准及质控血 清进行 ,均严 格按照试剂盒说明书操作 。 1. 3 统计学方法 t 检验 ,相关性分析
学出版社 ,1997 . 5002511. 2 李开伦 ,蒋火刚 ,等 . 207 株志贺菌的血清学分型生化 特性和药敏
试验结果分析 [J ] . 贵州医药 ,2000 ,24 (3) ,1662167 . 3 周敏 ,黄亚 ,等 . 105 株志贺菌流行菌株的血清分型及 耐药性分析
[J ]. 检验医学 ,2004 ,19 (4) ,3012303.
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Guizhou Me dical Journal ,2007 , Vol. 31 ,总结了 1996～ 1998 年遵义地区 志 贺菌血清分型结果 ,说明在随后的 7 年中 ,遵 义地区志贺 菌 流行菌株没有发 生大 的变 化 。周 敏 , 黄亚 等[ 3] 在《105 株 志 贺菌流行菌株的血清分型及耐药性分析 》一文报道上海地 区 志贺菌调查结果 ,该地区以宋内氏志贺菌感染为主 。说明 各 地区流行菌株和血清型有差别 。
促甲状腺激素酶免疫化学发光法正常值
促甲状腺激素酶免疫化学发光法正常值下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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促甲状腺激素的检测及其临床意义
促甲状腺激素的检测及其临床意义促甲状腺激素（TSH）是调控甲状腺细胞生长和甲状腺激素合成及分泌的主要因子，由垂体促甲状腺素细胞合成和分泌，并受甲状腺激素的负反馈性调节。
甲状腺功能改变时，TSH的波动较甲状腺激素更迅速而显著，是反映下丘脑-垂体-甲状腺轴功能的敏感指标。
因此，通过检测血TSH水平可以反映甲状腺功能状态，有助于甲状腺疾病的筛查、诊断、治疗效果评判和预后判断。
然而，由于早期建立的放射免疫法检测TSH含量只能确定正常范围的上限，临床上仅仅可以作为甲状腺功能减退症的诊断依据。
20世纪80年代后期，随着实验技术的迅猛发展，免疫放射分析法、化学发光免疫分析法及时间分辨免疫荧光技术的建立和运用，使得TSH检测的灵敏度显著提高，单一检测TSH水平已成为临床上开展甲状腺疾病筛查、诊断和治疗随访的有效工具。
一、 TSH的特性与检测方法TSH是糖蛋白类激素，由腺垂体合成分泌，分子量约为28000道尔顿，由α和β亚基非共价键结合组成。
其α亚基与腺垂体分泌的卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）以及胎盘分泌的绒毛膜促性腺激素（hCG）的α亚基相同，而β亚基彼此不同，从而具有不同的结合特性和生物学活性。
TSH受促甲状腺激素释放激素（TRH）刺激，在24小时均呈脉冲式分泌，正常分泌的脉冲幅度均值为0.6μU/ml，频度为1/1.8小时。
正常人TSH的分泌有节律性，高峰出现在午夜10时至凌晨4时之间，失眠可增加其峰值，而睡眠则降低其脉冲。
不仅如此，TSH的分泌尚有季节性变化，春天TSH浓度降低30%。
TSH在血中不与蛋白相结合，正常浓度是1~2ng/ml，其生物半衰期为90~130分钟，据此推算垂体分泌率是110μg/日。
鉴于血清TSH含量为对数正态分布，平均约1.3~1.4mU/L，其正常低限为0.3~0.5mU/L，高限为3.9~5.5mU/L。
若除外甲状腺过氧化酶抗体（TPOAb）阳性患者，TSH正常上限则有所降低。
促甲状腺激素(TSH)测定试剂(荧光免疫层析法) 产品技术要求万孚
1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，材料附着应牢固，各组分应齐全、完整，标签清晰，卡固定紧密，液体无渗漏。
1.2物理检查
膜条宽为 4.0±0.5mm ；液体移行速度应不低于10mm/min。
1.3准确性
对于没有配备系列校准品的试剂盒，可在试剂盒规定的测量范围内检测国家标准品，其实测值与理论值之比应在0.850~1.150 之间。
1.4最低检出限
应不高于0.1 mIU/L。
1.5剂量-反应曲线的线性
在（0.1~100）mIU/L 区间内，用双对数或其他适当的数学模型拟合，剂量- 反应曲线线性相关系数（r）应不小于0.9900。
1.6精密度
1.6.1分析内精密度
手工操作试剂盒参考品测定结果的变异系数(CV)应不大于15%。
1.6.2批间精密度
在多个不同批次产品之间，参考品测定结果的变异系数(CV)应不大于20%。
1.7特异性
1.7.1与促卵泡生成素（FSH）
浓度不低于200mIU/mL 的FSH，在本试剂盒上的测量结果应不高于本试剂盒的最低检出量水平。
1.7.2与促黄体生成素（LH）
浓度不低于200mIU/mL 的LH，在本试剂盒上的测量结果应不高于本试剂盒的最低检出量水平。
1.7.3与人绒毛膜促性腺激素（hCG）
浓度不低于1000mIU/mL 的hCG，在本试剂盒上的测量结果应不高于本试剂盒的最低检出量水平。
1.8分析间精密度
在 3 次独立分析之间，参考品测定结果的变异系数（CV）应不大于20%。
时间分辨荧光免疫分析
时间分辨荧光免疫分析时间分辨荧光免疫分析(time-reso1vedfIuoroimmunoassay,TRFIA)是80年代初问世的一种超灵敏度的标记免疫检测技术。
其主要特点是以锢系元素铺(Eu3υ等标记抗体或抗原为示踪剂，利用增强液的荧光放大作用和时间分辨荧光法排除样品或试剂中非特异性荧光物质的干扰，最大限度地提高了检测方法的灵敏度和特异性，还具有量程宽,操作简便,标记物容易制备，稳定性好，保存期长等诸多优点。
一、基本原理与放免分析相似，总体上分为竞争法和非竞争法两类，前者多用于小分子半抗原，后者用于大分子化合物。
铺系元素第(Eu).彭(Sn1)、轼(Tb)和钛(Nd)通过双功能螯合剂，在水溶液中很容易与抗原或抗体分子以共价双键结合。
经抗原、抗体间特异性的免疫结合反应，测定免疫复合物的荧光强度，就可推算待测物质的浓度。
辆系离子的荧光信号极弱，需要在酸性条件下，解离出铺系离子，然后与荧光增强液中的B-二酮体生成新的螯合物，经紫外光激发可产生强而持久的荧光信号，其增强效力可达100万倍，故又称解离增强铺系荧光免疫分析(dissociation-enhanced-1anthanidefIuoroimmunoassay,DE1FIA)o锢系元素的发光时间延长，如Eu*和Snr的荧光衰变时间分别达到 4.3×IOns和4.1×10,ns,而样品和试剂中的自然本底荧光的衰变时间仅为4-10ns,通过延迟测量时间，使信号不受本底荧光影响。
此外，锢系元素螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，StOkeS位移大，有利于排除非特异性散射光的干扰，进一步提高荧光信号的特异性。
二、试剂组成(一)EuS标记物：可分为标记抗体、标记抗原，要求有较高的纯度、比活性和免疫活性。
密封后4。
C或-20。
C保存，但应避免反复冻融。
若发现蛋白质聚合，非特异性结合升高，则应停止使用。
(二)固相抗体或抗原：固相载体多用聚苯乙烯微孔条，要求透明度高，吸附性能好，材质均匀，孔间差异小，不同品牌甚至不同批号的微孔条间都会有明显的性能差异，应引起注意。
促黄体生成素(LH)测定试剂(荧光免疫层析法)产品技术要求万孚
1.性能指标
1.1外观检查
外观应平整，标识清晰，各组分齐全，液体无渗漏。
1.2物理检查
膜条宽为 4.0±0.5mm；液体移行速度应不低于10mm/min。
1.3准确度
用参考品作为样本进行测定，其测定结果的相对偏差（B ias）不应超过±10%。
1.4最低检出限
应不大于1mIU/mL。
1.5线性
在1mIU/mL～100mIU/mL 的范围内，线性相关系数r≥0.9900。
1.6精密度
1.6.1批内精密度
用同一批号的试剂分别测定 2 个不同浓度的样本，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。
2.6.2 批间精密度
用三个不同批号的试剂分别测定2 个不同浓度的样本，其测定结果的变异系数（CV）应不大于15%。
1.7特异性
1.7.1与促卵泡生成素（FSH）
浓度不低于200IU/L 的FSH，测定结果应不大于1mIU/mL。
1.7.2与促甲激素（TSH）
浓度不低于200mIU/L 的TSH，测定结果应不大于1mIU/mL。
1.7.3与人绒毛膜促性腺激素（HCG）
浓度不低于1000IU/L 的HCG，测定结果应不大于1mIU/mL。
甲状腺功能的实验室检测的原理及方法
甲状腺功能的实验室检测的原理及方法甲状腺功能实验室检查主要包括甲状腺激素、促甲状腺激素、甲状腺激素结合球蛋白和相关自身抗体检测。
目前认为，联合进行游离三碘甲状腺原氨酸，游离甲状腺素和超敏促甲状腺激素测定，是甲状腺功能评估的首选方案和第一线指标。
甲状腺激素的测定多采用免疫分析法，但传统的放射免疫法灵敏度有限，不能区别正常人低值和原发性甲亢。
化学发光免疫法和时间分辨荧光免疫法都更为灵敏、准确，其检测限可达0.001mIU/L。
但无论检测方法灵敏度多高，结果多准确，都必须结合临床和其他甲状腺功能检查才能做出正确诊断和治疗决策。
一、甲状腺素甲状腺素（thyroxine，T4）检测具有多种方法，传统检测方法采用放射性碘标记的放射免疫法。
但其操作过程繁琐，在临床应用中受到一定限制。
时间分辨荧光免疫法和电化学发光法均是目前最先进的标记免疫测定技术，其检测快捷，敏感度高，近年来在临床T4 检测中被广泛应用。
时间分辨荧光免疫法测定血清总甲状腺素如下：1.原理加入待测血清、铕标记T4和鼠抗T4的单克隆抗体（单抗）温育，试剂中的8-苯胺-1-萘磺酸（ANS）能将结合状态的T4游离出来。
抗T4单抗和包被在微孔板上的二抗结合的同时，样本中的T4和铕标记T4竞争结合抗T4单抗上的结合位点，温育后洗板，加入解离增强液将标记在复合物中的铕离子解离至溶液中，与增强液中的有关成分形成荧光螯合物微囊，发出的荧光强度与样品中的总甲状腺素（total thyroxin，TT4）浓度成反比。
2.试剂与仪器购买成套的商品试剂盒，主要成分如下：已包被第二抗体的96微孔反应板，T4标准品（6瓶，分别含0、20、50、100、150和300nmol/L 的T4标准品），抗T4单克隆抗体（含ANS），铕标记T4（含ANS），浓缩洗液（25×），缓冲溶液，增强液。
3.操作（1）试剂准备：1）洗涤液：40ml浓缩洗液加960ml蒸馏水混合（pH 7.8）。
TSH促甲状腺素化学发光免疫定量检测探究
TSH促甲状腺素化学发光免疫定量检测的探究【摘要】目的：研制人血清中促甲状腺素（tsh）的化学发光免疫检测试剂盒。
方法：采用辣根过氧化物酶标记的抗tshβ亚单位特异性单克隆抗体（mab），与固相包被的抗tshα亚单位的另一mab配对，以鲁米诺作为底物，采用两步法建立了双位点夹心法人血清tsh的化学发光免疫定量分析法。
结果：该方法灵敏度为0.0788 miu/l，批内cv平均为4.7%，批间cv平均为8.4%，平均回收率为93.05%。
该检测与lh、 fsh和hcg无交叉反应。
【关键词】促甲状腺激素（tsh）；化学发光免疫分析法；试剂盒甲状腺功能改变时， tsh的波动较甲状腺激素更迅速且明显，是反映下丘脑、垂体、甲状腺轴功能的敏感指标，因此采用灵敏度高的tsh免疫分析法具有重要的意义。
化学发光免疫分析（chemiluminescent immunoassay， clia）是一种灵敏的免疫分析方法，在免疫诊断试剂研制中已得到了广泛的应用[3]。
本研究根据化学发光免疫分析法的原理研制了血清tsh的检测试剂盒，与国内外同类产品相比具有简便、快捷、成本低等优点。
1 材料和方法1.1 材料 tsh单克隆抗体（mab）、 tsh标准品抗原和辣根过氧化物酶（hrp）为sigma公司产品，光免板为thermo electron公司产品，化学发光底物为biorad公司产品。
1.2 方法1.2.1 标准品的配制将tsh抗原标定后溶于小牛血清中，配制成含0.1， 1， 5， 20， 100 miu/l的标准溶液。
1.2.2 抗体包被板的制备将100μl含tsh mab（0.5mg/l）的ph9.6碳酸盐缓冲液加至包被板中， 37℃包被2 h，再用含10 mg/l bsa的0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液于37℃封闭2 h后晾干备用。
1.2.3 酶标记物的制备 tsh的酶标记物采用过碘酸钠法制备，然后经0.01 mol/l ph7.4磷酸盐缓冲液透析过夜后，加入等量的甘油于-20℃保存备用。
迈瑞 VIDAS 甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）说明书
说明书【产品名称】通用名称：甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）英文名称：VIDAS T4【包装规格】60人份/盒【预期用途】该产品用于定量检测人血清或血浆（肝素锂抗凝）中的总四碘甲腺原氨酸（T4）。
该产品是一种在VIDAS®系列分析仪上使用的自动定量试剂，使用ELFA（酶联荧光分析）技术，定量检测人血清或血浆（肝素锂作为抗凝剂）中的总四碘甲腺原氨酸(T4)的酶免疫测定法。
甲状腺素或者四碘甲腺原氨酸(T4)是甲状腺分泌的激素，大部分（99.9%）与其载体蛋白相结合。
这些载体蛋白主要是TBG（甲状腺素结合球蛋白）。
少部分的游离甲状腺素被认为是这种激素的活性形式。
该产品有助于评价甲状腺的功能。
在甲状腺功能亢进的病人，甲状腺激素水平升高，而在甲状腺功能衰退的病人，甲状腺激素水平一般都会下降。
T4的检测依赖于其在载体蛋白中的浓度，因此有必要检测激素与载体蛋白的结合能力。
这种结合能力的检测还需要与其他甲状腺机能评估的检测相结合，如TSH和T3，同时还要包括患者的临床检查。
甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）有助于对甲状腺功能失调的诊断。
【检验原理】甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）采用将酶免疫竞争分析方法与最后荧光检测(ELFA)相结合的分析原理。
固相管（SPR®）在分析中除作为反应的固相表面，也作为移液装置。
反应试剂为即用型并事先加入到试剂条的孔中，再将孔密封。
所有分析步骤都由仪器自动进行。
反应物进出SPR数次。
首先，取样并加入到含有碱性磷酸酶标记的T4抗原（共扼物）的孔中。
样品中存在的抗原和标记的抗原竞争结合包被于SPR内表面的特异性抗T4抗体。
在最后检测步骤当中，底物（4-甲基伞形酮磷酸酯）循环进出SPR。
共扼物酶催化水解底物成荧光产物（4-甲基伞形酮），在450nm处测量其荧光强度。
荧光强度与样本中抗原的浓度成反比。
分析结束的时候，根据储存在存储器中的校准曲线，由VIDAS®分析仪自动计算结果，然后打印输出。
TSH参考范围的确定及其临床意义
第一代：放射免疫分析方法
(Radioimmunoassay, RIA)
同位素标记抗原
未标记抗原 （待测抗原TSH ）
竞争结合
TSH特异 性抗体
（定量的）
1965年，Robert Utiger 创立
第二代：免疫放射分析方法
(Immuno-metric assay, IMA，免疫分析方法） 标记物为同位素，所以称为IRMA
美国国家临床生化协会指南
• TSH水平的性别、年龄和种族相关性差异，但在临床实践 中并不需要将参考值范围根据这些因素进行校正
• 血浆TSH水平呈现昼夜变异，峰值出现在夜间，而大约为 峰值50％的谷值则出现在10:00-16:00之间，这种生物学 上的变异并不影响对检测结果的诊断判读，因为临床上大 多数门诊患者的TSH检测均在08:00-18:00之间进行，并且 用于建立TSH参考值范围的样本也在这段时间收集
评价 有影响，但意义不大 有影响，但意义不大 有影响，具统计学差异 有影响，但意义不大 有影响，但意义不大 有影响，具统计学差异 有影响，但意义不大 有影响，具统计学差异 有影响，具统计学差异 无明显影响 有影响，具统计学差异 有影响，具统计学差异
内容
TSH的基本知识 TSH测定技术的演变 影响血清TSH水平的因素 TSH参考范围的制定 调整TSH参考范围的争论 TSH的临床应用
NACB 忽略其影响 忽略其影响 忽略其影响 忽略其影响 忽略其影响 忽略其影响 纳入考虑 纳入考虑 纳入考虑 没有考虑 没有考虑 没有考虑
几项根据NACB标准制定TSH参考范围的研究
地区
正常人群 选择标准
澳大利亚 NACB
德国 NACB+超声正常
德国 欧洲 丹麦 中国
TSH荧光定量检测方法和临床意义综述(共22张PPT)
宝太值
2.62 3.91 40.51 2.09
1.29 65.37 3.76 5.86 10.12 3.61 5.14 5.08 6.03 25.41 67.83 2.19 8.66 13.47 7.16 47.50 4.89 7.05 28.64 7.04 40.45 7.58 19.38 6.00 14.07 6.08
典TS型H病的例反是应血滞清后T于SFH高T减4，于低一，提般TT要示4在/F存6T周4减在后低达亚，到2下临0%丘病床脑例-垂甲T体S减H-甲可或状以腺正甲轴常的或减新者平升衡高。。
TSH是判断甲状腺功能的敏感指标。
足跟全血，TSH筛应查。用妊娠月份特异性的TSH参考值。中国医科大学第一附属医院报告的
儿生长障碍，智力落后。PKU 是由于肝脏苯丙氨酸羟化酶缺陷导致苯丙氨 酸代谢障碍所致的常染色体隐性遗传性氨基酸代谢病。
应用及临床意义
新生儿疾病筛查：
标本采集时间应在出生后3～5天。 足跟全血，TSH筛查。TSH ＞50mIU/L，高度怀疑，经血清标本测定确 诊；20 ～50mIU/L复查血清； TSH＜20mIU/L可以排除。
同诊时断选 原取发4性0甲例技亢体和检术甲健减的康最者研早的期血发、清和最。敏产感的业指化标发。现亚公临司床疾现病建。 立了较强的技术和研发团队 ，核心技术平台基
于荧光稀土络合物硅纳颗粒标记物及其制备方法和用荧光稀土纳米颗粒作为标记物的免疫层析方
法及其检测纸条 。
关于宝太
宝太荧光定量产品：
HCG定量检测试剂盒（荧光免疫层析法）
新生儿甲减血清诊断标准：新生儿1～4周，TSH ＞7mIU/L, TT4 ＜
6.5µg/dL ( 84nmol/L)。
必须在产后4～6周内治疗。如果在45天内足量L-T4替代治疗，智商与
荧光免疫化学发光检测TT_3_TT_4_FT_3_FT_4_TSH分析
１．３ 统计学分析 将检测结果用 ｘ±ｓ 表示并用 ＳＰＳＳ１１．０ 统 计学软件进行统计分析。
表 ２ ２００ 例临床血标本 ＴＴ３、ＴＴ４、ＦＴ３、ＦＴ４、ＴＳ Ｈ 检测结果及相关性分析
ｎ
ｘ±ｓ
２００ ３．７７±３．４９
相关性分析 χ２ 值（ Ｐｅａｒｓｏｎ 检验）
ＴＴ３ ０．３６５＊
ＴＴ４ ０．３３４＊
ＦＴ３ ０．４１５＊
ＦＴ４ ０．３６７＊
２００ ３．６３±１．９３
０．９０１＃ ０．８２３＊ ０．８２４＊
１．４ 正 常 参 考 值 ＴＴ３： ０．４５～１．３７ ｎｇ／ｍｌ，ＴＴ４：４．５～１２．０ μｇ／ ｄｌ，ＦＴ３：１．４５ ～３．４５ ｐｇ／ｍｌ，ＦＴ４：０．７１ ～１．８５ ｎｇ／ｍｌ，ＴＳＨ：０．４９０ ～４．６７０ μＩＵ／ｍｌ。
２ 结果 检测结果及相关性分析， 见表 １ 和表 ２。
表 １ ６０ 例正常对照血标本 ＴＴ３、ＴＴ４、ＦＴ３、ＦＴ４、ＴＳ Ｈ 检测结果及相关性分析
床应用［Ｊ］．上海： 上海医学检验杂志， ２００２， １５（ ３） ： １５２～１５３ ２ 高 晓 惠 ， 陈 德 才 ， 温 春 成 ， 等．ＴＳＨ 反 映 甲 状 腺 功 能 状 态 变 化 的 价
值探讨［Ｊ］．四川医学， ２００３， ２４（ ３） ： ２７４ ３ 王自正．现代医学标记免疫学［Ｍ］．北京： 人民军医出版社．２０００， １８７
心 电 传 递 函 数 相 移 Ｑｘｙ（ Ｄ 相 超 限 、Ｗ 波 折 、Ｄ＋Ｗ） ； 相 干 函 数 ＲＦ
测定血清tsh的方法
测定血清tsh的方法测定血清TSH的方法血清TSH作为一种重要的临床指标，被广泛应用于甲状腺疾病诊断、治疗效果的监测和人体代谢调节等方面。
本文将介绍几种常用的方法，用于血清TSH的测定。
一、放射免疫法放射免疫法是一种常用的血液分析方法，用于测量血清中特定物质的浓度。
对于TSH的测定，该方法通常采用放射免疫分析仪器配合放射性标记的抗体。
研究表明，该方法的测定结果准确度高，重复性好，对血清样品的处理和保存要求较高，但操作相对复杂。
此外，放射免疫法受到放射性物质的限制，使用时需遵循相关安全规定，以保护实验人员的安全与健康。
二、化学发光法化学发光法是一种新型的高灵敏度、高特异性的检测方法，其原理是利用特殊荧光物质与样本中的分析物发生特异性反应而产生荧光信号。
对于TSH的测定，也可以采用化学发光法。
这种方法相对较为简便，操作方便，同时具有较高的灵敏度和准确性。
化学发光法对样品处理和维护的要求较低，且耗时短，适合于较大批量的检测工作。
三、酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法是一种基于酶的发色反应的检测方法，经常用于血清中特定物质的测定。
对于TSH的测定，该方法采用TSH抗体与酶标记的抗体结合，形成TSH-抗体复合物，然后通过酶标记物的催化作用产生可见的色素反应。
酶联免疫吸附法操作简单，结果可视化，但其灵敏度和特异性相对较差，不适用于低浓度的TSH测定。
四、免疫荧光法免疫荧光法是一种利用荧光染料标记抗体的检测方法，可以通过荧光显微镜观察到样本中特定物质的分布和浓度。
对于TSH的测定，该方法通常采用荧光标记的抗体与TSH结合，然后在荧光显微镜下观察样品的荧光强度。
免疫荧光法具有高灵敏度、高特异性和高准确性的优点，但操作较复杂，需要专业设备和技术支持。
五、质谱法质谱法是一种基于分析物质的质量和电荷比之间的关系进行测定的方法。
对于TSH的测定，质谱法通常结合液相色谱或气相色谱进行分析，以提高分析的准确性和灵敏度。
质谱法具有高分辨率、高准确性和高灵敏度的特点，但操作复杂、设备昂贵，适用于有较高分析要求的实验室研究。
促甲状腺激素(TSH)检测方法小析
中 图分类号 ： ４ Ｒ ６ ４
文 献标 识 码 ： Ａ
文章编号 ： ４ ９ Ｘ ２ １ ） ７ａ－０ ０ — ３ １ ７ —０ ８ （ ０ ２０ （） ０ ４ ０ ６ 使 得 检 测 灵 敏 度 得 到 一 定 的 提 高 】 。
Ｑ： 塑
Ｓｃｉ ｎｃｅ ｅ ａｎ Ｔｅｃｈｎ ｏ ｉ ｏｖａｔｏｎ ｄ ｏｌ ｇｙ ｎｎ ｉ Ｈｅｒ ｌ ａｄ
促 甲状 腺 激素 （ Ｈ） 测方法小 析 ① ＴＳ 检
宋 立 军
研究 报告
（ 秦皇 岛市卫 生学校 河北 秦皇 岛
０６ ０ ） ６ ０ ０
摘 要： 促甲状廉激 素（ ｈ ｒ ｉ ｓｉ ｕａｉ ｇ ｈ ｒ ｏ ｅ ｔ ｙｏｒｐｎ Ｔ Ｈ 由脑垂体前叶的嗜碱 性细胞分泌 ， Ｔ ｙｏｄ ｔ ｌｔ ｏｍ ｎ ， ｒｔ ｉ ， Ｓ ） ｍ ｎ ｈ ｏ 以游 离的形式存在 于血液 中， 含
ｓｉ ｌ ｒ ｇ ｈ ｒ ｏ ， Ｓ 、 ｔｍｕ ａ ｉ ｏ ｍｏ ｅ Ｆ Ｈ） 促黄 体生 成 原 与 样 本 或 标 准 品 内 抗 原 竞 争 结 合 抗 体 ， ｎ
素 【，】 示 踪 剂 代 替 放 射 性 同 位 素 ， 具 １ ”为 ６ 用
素 （ ｔ ｉ ｉｉ ｇ ｈ ｒ ｎ ， Ｈ） １ ｅｎ ｚｎ ｏ ｍｏ ｅ Ｌ 以及 人绒 毛 实 现 定 量 。 射 免 疫 分 析 灵 敏 度 不 够 ， ｕ 放 无 有 双 功 能 基 团 的 镧 系 元 素 来 标 记 抗 原 或 膜 促 性 腺 激 素 （ ｍａ ｈｕ ｎ Ｈ水 平 ， 操 作 时 抗 体 ，当 解 离 下 来 的 镧 系 元 素 与 特 制 的 且 ｃ ｉ ｎ Ｃ 法 区 分 部 分 正 常 人 的 ＴＳ ｈ０ Ｏ ｉ ｒ 标 记 物 稳 定 性 欠 佳 ， 其 应 用 受 到 一 定 增 强而持 久 。 ０ 代 ， ａ ａ ａ ｔ ｓ ｎ Ｄ ａ 故 ９年 Ｐ ｐ ｎ ｓａ ｉ ｉｍ ｏ ｅ ｉ ａ ｓ ｙ，ＲＭＡ） ＲＩ ｒｃ ｓａ Ｉ 在 Ａ基础 上 进 行改 性 磷 酸 酶 与 抗 体 相 连 接 ， 性 磷 酸 酶 作 碱 进 ， 方 法 使 用 过 量 标 记 抗 体 ， 用 双 抗 用于 底 物 ， 一氟水 杨酸 磷 酸 酯（ 一 ｌ ｏ ｏ 该 采 ５ ５ ｆｕ ｒ ｓ
新生儿疾病筛查检验技术
新生儿疾病筛查检验技术新生儿疾病筛查技术是指用于检测新生儿某些危害严重的先天性遗传代谢性疾病的先进实验室检测技术。
从而早期诊断、早期治疗。
根据我国《母婴保健法》要求至少开展先天性甲低（CH）和苯丙酮尿症（PKU）两项筛查。
CH和PKU患儿在出生后往往缺乏疾病的特异表现，一般要到月龄6个月才逐渐出现固有的临床症状，并日趋加重。
然而，一旦出现了疾病的临床症状，表明疾病已进入了晚期。
即使治疗，智力低下等也难以恢复；相反，若能在出生不久即发现疾病，及时治疗，极大多数患儿能正常发育，其智力亦可达到正常人的水平。
筛查试验结果是早期发现阳性患儿的唯一指征，因此筛查实验室的管理和规范是整个筛查环节的重中之重。
一、苯丙氨酸测定（一）检验方法学以苯丙氨酸（Phe）作为新生儿疾病苯丙酮尿症的筛查指标。
筛查方法主要有荧光分析法、定量酶法、细菌抑制法和串联质谱法。
1.荧光分析法（1）原理：从干滤纸血片上提取出的苯丙氨酸，与茚三酮形成一种荧光化合物。
在激发光波长390nm，发射波长485nm处测定荧光强度。
苯丙氨酸含量与荧光强度成正比，通过检测已知浓度的标准血斑的荧光值并绘制曲线，可求得各样本的苯丙氨酸浓度。
试验中加入二肽L亮氨酰-L丙氨酸后可大大增强此荧光反应，用琥珀酸盐缓冲液严格控制反应条件pH在5.8±0.1，保证理想的荧光值和最大的特异性。
加入铜试剂进一步增强反应并降低背景。
（2）器材：荧光读数仪、60℃恒温孵育箱、孵育/振荡仪、3.2mm打孔器或打孔钳、加样器、八道加样器。
（3）试剂：苯丙氨酸标准品（phenylalanine calibrtors）、苯丙氨酸质控品（phenylalanine controls）、硫酸锌试剂（zinc sulfate reagent）、PKU试剂即茚三酮（PKU reagent）、铜试剂（copper reagent）、PKU 复溶缓冲液（PKU Reconstitution buffer（内含琥珀酸钠缓冲液L 亮氨酰-L丙氨酸和防腐剂）、白色微孔板96孔（white microtiter plate）。
新生儿遗传代谢病筛查结果分析
新生儿遗传代谢病筛查结果分析袁永珍【摘要】Objective To understand the genetic metabolic disease screening of newborn, and to provide evidence for the prevention of neonatal metabolic disease. Methods The screening work and results of inherit metabolic disease in newborns in the Huaping People's Hospital and Maternal and Child Health Care Hospital of Huaping County from July 2012 to De-cember 2015 were analyzed. Results The informed rate was 100% in our country, the screening rate and screening number gradually increased, and the screening rate, recall rate of suspicious positive?cases and qualified rate of blood collection were higher than those in the whole province. Conclusion The screening of inherit metabolic disease in newborns is of im-portant clinical significance to the prevention and control of inherit metabolic disease and improvement of quality of newly-born population.%目的：了解新生儿遗传代谢病筛查情况，为加强筛查工作，预防新生儿代谢疾病提供依据。
甲胚蛋白的检测原理和方法
甲胚蛋白的检测原理和方法甲胚蛋白（Thyroid-stimulating hormone，以下简称TSH）是由垂体前叶分泌的一种蛋白质激素，主要作用是刺激甲状腺合成和分泌甲状腺素。
TSH的检测可以用于甲状腺疾病的诊断和治疗的监测。
下面将详细介绍TSH的检测原理和方法。
一、检测原理：TSH的检测原理通常采用免疫测定法，即通过特异性抗体与TSH结合来测定其浓度。
免疫测定法主要分为两种：放免法和化学发光法。
1. 放免法：放免法是利用酶标记或放射性同位素标记的抗体与待测TSH结合，然后通过洗涤去除未结合的抗体，最后测定标记物浓度来间接测定TSH浓度。
放免法常用的组分包括固相材料、试剂（抗体和检测标记物）、洗涤液和测定仪器等。
2. 化学发光法：化学发光法是将荧光标记的抗体与待测TSH结合，待测样品与标记物竞争与TSH结合，未结合的标记物通过化学发光反应发出荧光信号，通过测定荧光强度来测定TSH浓度。
二、检测方法：1. 放免法：（1）酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）：将待测样品和抗TSH抗体（特异性抗体）加入试剂盒的孔中，结合后洗涤去除未结合物质，然后加入酶标记的第二抗体，再次洗涤去除未结合物质，最后加入底物进行反应，通过测定反应产物的酶活性来测定TSH浓度。
（2）放免分离（Immunoradiometric Assay，IRMA）：将待测样品和放射性标记物结合的第一抗体混合，结合后通过沉淀分离去除未结合的第一抗体，最后通过测量与TSH结合的放射性标记物的放射活性来测定TSH浓度。
2. 化学发光法：（1）固相化学发光法（Immulite）：将待测样品和荧光标记的抗TSH抗体混合，通过竞争结合来测定TSH浓度。
荧光标记的抗体通过化学发光反应发出荧光信号，测定荧光强度与TSH浓度呈反比。
（2）体外化学发光法（Electricchemiluminescence immunoassay，ECLIA）：将待测样品、标准品和酶标记的抗TSH抗体混合，通过竞争结合来测定TSH浓度。
促甲状腺激素(TSH)测定试剂盒(化学发光免疫分析法)产品技术要求爱康试剂
促甲状腺激素（TSH）测定试剂盒（化学发光免疫分析法）1.性能指标1.1试剂条性能指标1.1.1外观试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏，包装标签应清晰、准确、牢固；试剂条中第7孔内组分应为棕色含固体微粒的液体或含棕色固体沉淀的透明液体；第12孔内化学发光底物应为无色或淡绿色液体；其余皆应为无色透明液体，无悬浮物、无沉淀、无絮状物。
1.1.2空白限应不大于0.005μIU/mL。
1.1.3准确度1.1.3.1在试剂盒规定的线性区间内，检测促甲状腺素国家标准品，测定结果的相对偏差应在±10%范围内。
1.1.3.2对具有溯源性的两个浓度水平的正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差应在±10%范围内。
1.1.4线性区间试剂盒在0.02μIU/mL~100μIU/mL区间内，其线性相关系数（r）应不小于0.9900。
1.1.5分析内精密度变异系数（CV）应不大于8.0%。
1.1.6批间精密度变异系数（CV）应不大于15.0%。
1.1.7特异性a)含浓度不低于200 mIU/mL的FSH的零浓度TSH样本，检测结果应不高于0.005μIU/mL；b)含浓度不低于200 mIU/mL的LH的零浓度TSH样本，检测结果应不高于0.005μIU/mL；c)含浓度不低于1000mIU/m L的HCG的零浓度TSH样本，检测结果应不高于0.005μIU/mL。
1.2校准品性能指标1.2.1外观校准品应为无色或浅黄色透明液体。
1.2.2装量装量偏差应在±10%之内。
1.2.3准确度Cal 1、Cal 2实测值与标示值的偏差应在±10%以内。
1.2.4均一性对同一瓶校准品1、校准品2分别重复10次检测，对同一批次10瓶校准品1、校准品2进行检测，检测校准品1、校准品2瓶内差CV应≤10%，批内瓶间差CV应≤10%。
1.3质控品性能指标1.3.1外观质控品应为无色或浅黄色透明液体。
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试剂
⑤、H2O2溶液（4b） ：柠檬酸—醋酸缓冲 液，pH6.0，含过氧化 氢。避免与氧化／还 原剂接触；
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试剂
⑥、终止液： 甘氨酸缓冲液 （5） ，pH10.3 ；
试剂
③、酶结合物稀释液 （3） ：缓冲盐溶液， pH6.5，加0.2％的 KathonCG~作为防腐 剂。用于酶结合物的 稀释；
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试剂
④、HPPA荧光底物 （4a） ：3—P—羟基 苯丙酸溶于Tris缓冲液 (pH7.8)中，加0.2％的 KathonCGe作为防腐剂；
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一、先天性甲低的新生儿筛查方法
1、酶免疫分析法 (enzymelmmunoassay，EIA) 2、放射免疫分析法 (radioimmunoassay，RIA) 3、免疫放射法 (immunoradiometricassay，IRMA)
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特点：
④荧光产物稳定，可放置过夜后测定。 无论在室温(20～25℃)或30℃孵育用 FEIA测定hTSH的敏感性无变化；而在 37℃条件下孵育会增加背景荧光，降低 灵敏度。建议底物孵育温度为20～30℃。
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特点：
③HPPA／H2O2反应生成的荧光强度的影响 因素中，最重要的是底物浓度、反应液和终 止液的pH值。酶反应最佳pH值为7.8。加入 碱性缓冲液终止酶反应，又可显著增强荧光 强度。经测定，使用pH10.3、1.5 mol／L甘 氨酸缓冲液可获得最大荧光强度。在低浓度 hTSH下，该缓冲液可使荧光强度增加5倍， 当hTSH浓度高于80mIU／L时，增强作用依 次减弱。
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试剂
②、抗hTSH—HRP酶 结合物（2） ：辣根过 氧化物酶标记的抗 hTSH(小鼠单克隆抗体 浓度>50ngIgG／m1)抗 体，加0．2％的 KathonCGe作为防腐剂；
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HRP
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打入血斑（TSH）并加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH—亚基的第二抗 体溶液于已包被TSH单克隆抗体的酶标反应孔内。（一步法）
PH：6.5
HRP HRP
HRP HRP
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材料
①、新生儿筛查滤纸干血斑标本：用 S&S903滤纸，按新生儿疾病筛查滤纸干 血斑标本采集方法采集；
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试剂
芬兰LabsystemshTSH-FEIA试剂盒，包含如下物品
TSH荧光酶免疫检测法
相关帮助
需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索 引擎 fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体 数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构 与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用 评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找 并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与 蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台 需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、 制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服 务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您 的加入
被测TSH抗原有两个抗原决定簇 故叫双位点
β位点 α位点
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包被在反应板上的 TSH单克隆抗体 故叫固相
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辣根过氧化物酶(HRP)标记的 抗hTSH—亚基（ β位点）的第二抗体
酶结合物稀释液（3）
洗涤液（6）
终止液（5）
H2O2溶液（4b）
HPPA荧光底物（4a）
抗hTSH—HRP酶结合物（2）
抗hTSH包被的酶标板（1）
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试剂
Hale Waihona Puke ①、抗hTSH包被的酶标板（1）：抗hTSH抗体 IgG(小鼠单克隆抗体)包被的酶标板，浓度 >1.0μg/m1。所有包被酶标板均置于有干燥剂 的锡箔密封袋中以防止潮湿。潮湿将破坏酶标 板的包被，严重缩短试剂盒保存期。试剂盒通 常储存在2—8℃，为防止打开锡箔密封袋时水 蒸气凝结破坏酶标板性能，试剂盒使用前需置 室温半小时后再打开。若锡箔密封袋在使用前 受损或干燥剂变色，请勿使用；
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2、仪器和试剂
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以下仪器均由 芬兰Labsystems公司提供
荧 光 读数仪
电 脑 显示屏
孵 育 振荡仪
八 道 加样器
单 道 加样器
3 mm 打孔器
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试剂
⑨、质控物（8） ：hTSH存 在于滤纸上的干血滤纸血斑 中。加入0．05％Bronidox作 为防腐剂。1张滤纸中具有5 套2种浓度质控物(品)，存于 装有干燥剂的铝箔袋中。 标准品和质控物(品)的TSH浓 度有批号差异，需参照每一 试剂盒中的标准品和质控物 (品)的记录单。
全血样品中TSH含量与血清样品中TSH含量的转化公式 TSHmIU／L血清＝TSHmIU／L全血×lOO／(100—HCR)
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一、先天性甲低的新生儿筛查方法
4、时间分辨荧光免疫分析法 TRFIA me-resolvedfluorescenceimmunoas—say 5、荧光酶免疫分析法FEIA fluoreseenceenzymeimmunoassay 6、自动新生儿疾病筛查系统 (automatednewbornscreeningsystem)
氧水进行酶反应。
PH：7.8
H2O2 HPPA HRP
HPPA
H2O2
H2O2 HPPA HPPA
H2O2 HPPA
H2O2
HPPA H2O2
HPPA HRP H2O2
HRP
H2O2
H2O2
HPPA
H2O2
HPPA
HPPA
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只剩下TSH同时与包被在酶标板上抗TSH的单克隆抗体和辣根过氧化 物酶(HRP)标记的抗TSH—亚基的第二抗体结合物。 被检测TSH抗原被夹在中间，故又称夹心法。
HRP HRP HRP
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加入荧光底物3-P-羟基苯丙酸(HPPA)和双
DPDPA
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特点：
②鉴于HPPA（3-P-羟基苯丙酸）敏感性高、 动力学范围广，已被广泛用于替代传统EIA 显色剂，作为辣根过氧化物酶的底物。以 HPPA作底物的FEIA可检测极低和极高浓度， 具有明显优势，由于hTSH样本正常值与非 正常值之间差异大，故该法特别适用于 hTSH检测。
试剂
⑧、hTSH标准品（7） ： TSH存在于干血滤纸片 的血斑中，包括一个零 空白。存于装有干燥剂 的铝箔袋中。加入0.05 ％Bronidox作为防腐剂。 标准品由红细胞压积为 50％一55％的人血液制 得，所含的hTSH浓度经 过WHO2nd IRP(80／558) 校正；
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自 动 洗板仪
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(1)、仪器：
①、荧光读数仪； ②、孵育／振荡仪； ③、自动洗板仪； ④、3mm打孔器，或打孔钳； ⑤、加样器；八道加样器。 以上仪器均由芬兰Labsystems公司提供。 ⑥、3mm实验血片塑料支架； ⑦、电脑、打印机； ⑧、冰箱。
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试剂
⑦、洗涤液（6） ：含 有吐温20的磷酸盐缓 冲液，加入0.05％ Broni—dox作为防腐剂。 按1:9比例加入蒸馏水 稀释。由于储于4℃可 能形成结晶，稀释前 温度需达18—30℃；
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特点
⑤FEIA检测法方法先进，重复性高。 一般情况下，批内分析变异系数和批间 分析变异系数均小于10％。