简易药敏片的制作
自制药敏纸片对治疗大肠杆菌病效果好
自制药敏纸片对治疗大肠杆菌病效果好近年来鸡大肠杆菌病严重威胁着家禽业的发展，给养殖户造成较大的经济损失。
市场上治疗大肠杆菌病的药品繁多，其主要成份往往不写明，造成养禽户在发生疾病时用同一种成份、不同品名的药物替换使用，既增加损失，又延误病情。
而自制药敏纸片就能减少这些损失。
在测得药品对该菌的敏感程度后再用药，效果较好。
一、病原禽大肠杆菌病原为艾希氏大肠杆菌，该菌系肠道正常菌群之一。
但它有一些致病血清型，科研人员在大肠杆菌病鸡体内一般只能分离出某种特定血清型，比如O1、O2、O78、O35、O16等等。
本菌呈多形性，有时接近球菌的形态，有时呈细长杆状或发丝状，但多数为两端钝圆，革兰氏染色阴性，中等大小的杆菌。
二、临床症状及病理变化1.大肠杆菌病夏季较多见，雏鸡及体弱鸡易感，病鸡精神沉郁、腹泻，排出黄白色、绿色粪便，病鸡不喜走动，关节肿胀。
败血型常引起呼吸道症状，产蛋鸡产蛋下降，砂皮蛋、白皮蛋增多，后期可见腹部胀大。
在发生大肠杆菌病的鸡群中还发现个别鸡一侧或双侧眼失明和肿头现象。
2.剖检可见纤维素性浆膜炎。
心外膜和心包膜上附着有多量灰白色纤维素性渗出物，气囊壁增厚，有黄白色干酪样渗出。
肝脏有灰白色坏死点，有时肝表面形成一层纤维素性渗出物。
经卵感染的雏鸡有卵黄囊炎，卵黄肿胀充血，其中充满棕色水样物；肉鸡关节红肿即滑膜炎，母鸡感染大肠杆菌病后在输卵管有干酪样渗出物，形成输卵管炎和腹膜炎，粘液型大肠杆菌常引起小肠、盲肠、肠系膜或肝脏出现肉芽肿。
三、细菌分离培养及鉴别1.无菌采取新鲜病鸡心血，涂片，革兰氏染色镜检可见阴性中等杆菌。
接种在普通琼脂培养基上培养18～24小时，形成圆形湿润、半透明隆起的乳白色中等大小菌落，挑取生长良好的菌落分别接种在伊红美蓝琼脂培养基、麦康凯培养基和普通肉汤试管内，经37℃、培养18～24小时后观察。
在伊红美蓝琼脂培养基上形成紫黑色带金属光泽的菌落，在麦康凯培养基上生长有圆形、边缘不齐、均匀一致的粉红色菌落，在普通肉汤试管内底部有黄白色絮样沉淀物，取肉汤内沉淀物镜检观察与剖检鸡的检出菌一致。
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
药敏试验的步骤
药敏试验的步骤药敏试验药敏纸片法药敏纸片法是最常用的一种试验方法,能直接体现出抗菌药物的抗菌效用,其优点是：直观明显,对比鲜明，有一定的实验依据。
缺点是：仅表现体外抗菌效果,由于抗菌药物在体内受体液环境,代谢分布,组织扩散浓度,半衰期等因素的影响,个别药物并不能真实反应出实际的抗菌疗效。
下面介绍抗菌药物的药敏纸片法。
试验材料经分离和鉴定后的纯培养菌株(例如大肠杆菌、链球菌等),营养肉汤,琼脂平皿,棉拭子,镊子,酒精灯, 药敏纸片若干。
1.1药敏纸片的制作方法将要试验的抗菌药物按其有效浓度稀释成1mL备用，脂溶性的抗菌药物使用乙醇或丙酮溶解。
用打孔器将滤纸打成6mm直径的圆片100张高压灭菌，加入到抗菌药物有效浓度1mL稀释液中充分混合，阴凉处干燥备用。
多种联合的抗菌药物制剂以其成分中某种含量最高的抗菌药物为标准稀释成有效浓度。
抗菌中草药药敏纸片的制作：取中草药粉剂1g加适量的水充分浸泡煮沸，滤液浓缩成1mL，也加入100张纸片干燥备用。
1.2药敏试验的操作步骤1.2.1 取自然发病动物的病料心血、脾、肝脏、淋巴结或病变明显的组织无菌操作接种鉴别培养基37℃分离培养24h，选典型菌落备用。
1.2.2 将病料中分离出的病原菌用密集划线法或涂布法接种至专用琼脂平板培养基上，均匀的粘贴各药敏纸片，并记录每种抗菌药物药敏纸片的位置。
1.2.3 37℃培养12～18h，取出观察结果。
1.3判定结果1.3.1 量取各药敏纸片抑菌直径大小，并仔细观察抑菌圈的清晰度,通常直径小于10mm的判为该抗菌药物为低度敏感,10～15mm之间为中度敏感，15～25mm为高度敏感，25mm以上为极度敏感。
1.3.2 抑菌圈边缘分界清晰，内部洁净透明,说明该抗菌药物作用迅速，多半为杀菌剂；边缘十分清晰，内部朦胧说明该抗菌药物可能是慢效抑菌剂或有耐药的产生，或分解较快维持抗菌时间短。
1.3.3 抑菌圈中分层次形成同心年轮样，说明可能是联合使用抗菌药物或该抗菌药物失效过快或细菌产生了耐药性。
兽用药敏片的制作和应用
养殖场疾病控制的好坏，直接影响其场经济效益。
疾病控制踪疫苗接种外，药物治疗也十分重要，而做好药敏试验很关键。
市场上购买药敏片不方便，即使购买到药敏片，已用的药品与本场买到药品不是同一厂家生产，疗效也不一致。
我们一般多应用自制的药敏滤纸片，即实用又省钱，经临床实践，效果较好。
现介绍如下：1 制作方法1 穗纸片选用新华t号(或其他质量好的)定性滤纸片，用打孔机打成直径为6 1l"11"]1的小圆纸片，根据需要将数片包成一纸包，或放人带棉塞的小瓶或小平皿内，在160℃干热灭菌1 h或121 ℃灭菌l5 min．置60℃干燥箱内烘干备用。
1．2 药液的配制．1 稀释荆抗生素的稀释剂通常用蒸馏水，但有些抗生素可用其他溶剂作初步溶解。
如：呋喃西林，每片首先用l mo L／I，氢氧化钠1 ml 溶解，再用水稀释到所需浓度。
痢特灵先以二甲基酰胺或丙酮溶解。
1．2 2 药液浓度注射粉荆一般1 g药品加蒸馏水L000 mI稀释；注射针剂，用蒸馏水作100倍稀释。
其他药物按使用说明书上的配料或饮水舍量．换算按1 g需加多少毫升水或配多少毫克料，就相当于配制药液所加蒸馏水毫升数。
如10 g本品可拌50 kg饲料，其换算方法为：1 g本品加5 000 mI 蒸馏水。
1 3 配制方法在无菌条件下，准确称取药量， I g为一个基本单位．为了方便最好将药物先稀释成10 mI ，然后作倍比稀释，如lO0倍稀释药物，在1 g药物中加人l0mI 蒸馏水．然后取l mI 本液加人9 m1 蒸馏水即可。
将无菌滤纸片用无菌镊子摊布于无菌平皿中，每张滤纸片饱和吸水量为0．叭m1，计，每50张滤纸片加人药液0 5 mI ，不时翻动，使滤纸将药液均匀吸净，一般浸泡30 min即可。
然后取出含药纸片置于一纱布中放置37℃孵箱中烘干，烘烤的时间不宜过长．以免某些抗生素失效。
青霉素、金霉素宜在低温真空干燥。
烘干后立即装人无菌的小瓶中加塞置一20℃或家用冰箱中保存，少量供工作用的滤纸片从冰箱中取出后放置室温中1 h，使纸片温度和室温接近。
药敏试验操作小结
药敏试验操作录入时间:2011-4-21 13:46:47 来源：中华检验医学网实验步骤一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦康凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1 药敏片的准备：购买或自制2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
2.2 药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。
此稀释液即为用于做药敏试验的药液。
三、实验操作方法3.1 药敏片法3.1.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密）3.1.2 将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。
药敏实验流程
药敏实验流程（一）普通肉汤培养基的制作：1.NaCL5g, 牛肉膏3g，蛋白胨10g，蒸馏水1000ml，PH7.2~7.6, 2%琼脂粉20 g。
2.先称取NaCL,牛肉膏，蛋白胨易于潮解最后称取，放于烧杯中溶解，玻璃棒搅拌。
3.用PH试纸或PH校正仪调PH值，偏酸加1mol/L的NaOH,偏碱加1mol/L的HCL。
4.用量筒再量一次加入2%的琼脂粉玻璃棒搅拌溶解。
5.盖上硅胶塞，用8层纱布橡皮筋扎好，再用4层报纸包好，令用两层报纸包扎相应数量的平板，121°灭菌20分钟。
6.把已灭菌了的平板放于烘箱内使其干燥或拆开报纸倒放于无菌工作台内使上面的水珠蒸发。
7.做好无菌室的准备工作，待培养基的温度合适时开始倒平板，每个倒25~30ml，一般下午用时上午倒平板，第二天上午用时前一天下午倒平板，若用不完的培养基倒置于4°冰箱保存一周内用完。
（二）接种培养：1..用酒精棉球檫试要解剖的鱼的体表部位，解剖后用酒精棉球檫试要取的发病组织（肝脾肠）。
2.点燃酒精灯，用灭菌了的镊子取发病组织剖面涂抹于培养基一角，用着烧过的接种环在培养基内做三四划线或“之”子划线，做上标记，倒置于37°恒温培养箱内培养18~24h。
（三）贴药敏纸片：在无菌工作台内用接种环挑取优势菌落在培养基内做“米”字划线，用已灭菌了的有齿镊子贴药敏纸片于已经做“米”字划线的培养基，做上标记，10min后放于37°培养箱内培养18~24h. （四）观察结果：记录抑菌圈的大小并排序，填实验结果报告单。
药敏纸片制备流程一、实验所需仪器及试剂打孔器、小瓶、容量瓶、培养皿、10ml移液管、眼科镊、小烧杯等。
0.1M NaOH、0.85%生理盐水、200ml无菌水、恩诺沙星、盐酸土霉素、氟苯尼考。
二、制备流程1、取新华1号定性滤纸，用普通的打孔器打成直径为6mm的圆形小纸片，取出8只小瓶装入50片圆纸片（小瓶干燥洁净）用单层牛皮纸包扎好。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药物敏感实验
6.2细菌接种量：细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
4.结果观察：
在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。
5.判定标准：
6.3药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。
6.4培养时间：一般培养温度和时间为37℃、12-24小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2-4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。
7.应用
5.1药敏实验的结果，应按抑菌圈直径大小作为判定敏感度高低的标准。
表1药物敏感实验判定标准
抑菌圈直径（毫米）
敏感度
20以上
极敏
15-20
高敏
10-14
中敏
10以下
低敏
0
不敏
5.2药物敏感实验判定标准参考表1，抑菌圈直径在15毫米以上为高敏，10毫米以下为低敏，无抑菌圈为不敏。
6.影响药敏结果的因素：
附表2山东省2004年1-5月份大肠杆菌和沙门氏菌常用药物敏感程度参考表
药物
药敏纸片制备方法
药敏纸片制备方法嘿，咱今儿就来唠唠药敏纸片的制备方法，这可真是个有意思的事儿呢！药敏纸片，就像是医生手里的秘密武器，能帮咱找到对付细菌的最佳办法。
那怎么制备呢？首先，咱得有优质的药敏纸片原材料，这就好比做饭得有好食材一样。
然后就是调配，这可不能马虎，得精确再精确，就跟调鸡尾酒似的，比例不对可不行。
把药液均匀地涂在纸片上，这可不是随便涂涂就行的，得有耐心，得细致，不然这药敏纸片可就不灵光啦。
想象一下，要是涂得不均匀，那结果能准吗？那肯定不行呀！接着呢，得让这些涂好药液的纸片好好地干燥一下。
这就像是让它们去晒晒太阳，把水分都赶跑。
但可别晒过头了，不然它们可能就变得脆脆的，一碰就碎了。
等干燥好了，还得把它们好好保存起来。
这保存也有讲究呢，得放在合适的环境里，不能太潮湿，也不能太干燥，就像咱人得待在舒服的环境里一样。
不然，这些药敏纸片可能就失效啦。
你说这药敏纸片制备是不是挺有意思的？就好像在打造一件件小小的艺术品。
咱得用心，得认真，才能做出好用的药敏纸片来。
这可不是随便搞搞就能行的事儿呀！在这个过程中，每一步都很关键呢。
从选择材料到最后的保存，哪一个环节出了问题，都可能让药敏纸片失去作用。
这就跟盖房子一样，一块砖没砌好，可能整座房子都不牢固。
咱做药敏纸片制备的时候，可不能偷懒，不能敷衍。
这可是关系到能不能准确找到对抗细菌的方法呢！要是因为咱没做好，导致结果不准确，那可就麻烦啦。
所以啊，大家一定要认真对待药敏纸片制备这个事儿。
这不仅是一项技术活，更是一份责任呢！咱要为了能更好地对抗细菌，为了大家的健康，把药敏纸片制备得妥妥当当的。
总之呢，药敏纸片制备方法虽然听起来有点复杂，但只要咱用心去做，就一定能做好。
这就像生活中的很多事情一样，只要我们有决心，有耐心，就没有做不到的。
大家加油吧！让我们一起把药敏纸片制备这件事儿做得漂漂亮亮的！。
如何制作药敏试纸和药敏实验
近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。
笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。
一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。
2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。
3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。
制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。
二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。
（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。
（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。
药敏试验操作
药敏试验操作实验步骤一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦康凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1药敏片的准备：购买或自制2.1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
2.2药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。
此稀释液即为用于做药敏试验的药液。
三、实验操作方法3.1药敏片法3.1.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀致密）3.1.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。
为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。
为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏实验
打孔器
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2、药量计算：每张直径6毫米纸片可 以吸收0.01ml药液，则25张纸片,需要 0.25ml药液,50张纸片需要0.5ml药液 。为了方便计算和称量,可配制2ml药 液。药液浓度的确定,需根据相应药品 的相关数据来确定。如诺氟沙星,纸片 含药量为10ug/片,则配制2ml药液所需 诺氟沙星的重量为 2ml×10ug/0.01ml=2000ug=0.002g
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2、固体培养基：
a、取锥形瓶，按照说明书称取所需营 养琼脂粉，加入相应量的蒸馏水， 加热，使沸腾1~2次。
b、分装（制备斜面培养基）：取试管 若干，用移液管移取营养琼脂液 2.5~3ml加入每支试管中。盖上棉 塞，包扎，放入高压灭菌锅 121.5℃灭菌15~30分钟后，取出倾 斜为30°左右放置至营养琼脂冷却 凝固呈斜面。放入36.5℃培养箱中 培养18h~24h，观察，如没有长菌 ，取出放入4℃冰箱中保存备用。 用时应提前半小时取出，恢复常温 。
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3、药液制备：配制药液时，如药物 是水溶性的，可以直接加入2ml水，如 药物是非水溶性的，应先用一定量的 对应溶剂对药物进行预溶（详细见下 表），再加入无菌蒸馏水至溶液为2ml 。如诺氟沙星为碱溶性，称取0.002g 诺氟沙星，先用500ul的2%NaOH将其溶 解，再加入1.5ml水。）如药品所需量 很少，不利于称量或称量误差大，可 将其扩大十倍称量，使用时再进行对 应的十倍稀释即可。如诺氟沙星，仅 需0.002g,可称取0.02g,用2mlNaOH溶 解，取200ul加入1.8ml无菌蒸馏水中 即得所需药液。
自家药敏纸片制备方法的建立及应用效果观察
表 １ 不 同方 法制 备 药 敏 纸 片 的抑 菌 效 果 表
其 它 治 疗 量 的 试 验 药 物 的 抑 菌 效 果 具 有 不 同 的 针 对 性 ， 可 应 用 于 临 床 用 药 参考。
３ 讨 论
治 疗 量
２７
２ ５
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（ ）利 用 兽 医 临 床 常 用 抗 菌 药 物 ３
所 制 作 的 药 敏 纸 片 ．能 解 决 人 用 抗 菌 Ｈ 佗 ＂ 药 物 标 准 药 敏 纸 片 的 药 敏 试 验 的 结 果
对 兽医ｌ 临床 的 指 导 性 不 强 的 难 题 ．方
生 较 理 想 的 抑 菌 效 果 ， 与 喘 速 治 成 份
为 复 方 北 里 霉 素 可 溶 性 粉 的 抗 菌 特 性
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有 关 【。本 研 究 应 用 两 种 不 同 的 培 养 ９ ＝ Ｉ 】 ｏ
庆 大 霉 素
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抑 菌效 果 上 升 而 引 起试 验误 差 。
× × × × × × × ×
垫 底 的 平 皿 中烘 干 ，密 封 备 用 。 （ ） 细 菌 学 检 查 ： 在 无 菌 条 件 下 ３ 取 烘 干 后 的 药 敏 纸 片加 人 到 灭 菌 的 肉
药敏实验器材及操作步骤
药敏实验器材及操作步骤
操作步骤：
一、药敏试纸片的制备:
1. 取定性滤纸,用打孔机打成直径6毫米的圆形小纸片.
2. 取圆纸片50片防入清洁干燥的青霉素空瓶中,瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒后,
3. 放在37度恒温箱中数天,使其完全干燥.
二、药敏片的制备(商品药):
1. 按商品药的使用治疗量的比例配制药液.
2. 在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升,并翻动纸片,使各纸片充分浸透药液,翻动纸片时不能将纸片捣烂.同时在瓶口或瓶身记录药物名称,放37度温箱内过夜,干燥后即密盖。
3. 如有条件可真空干燥.切勿受潮,置阴暗干燥处存放,有效期3-6个月.
三、培养基的制备：
1. 取16.5g营养琼脂至500ML三角烧瓶中，加蒸馏水至485ML于三角烧瓶。
放置电子万用火炉上，不断搅拌至营养琼脂完全融化。
2. 瓶口以单层牛皮纸包扎.经15-20分钟121℃高压消毒,同时把清洗洁净的培养皿一起高压消毒。
3. 然后，每个培养皿中灌入18-20ML，室温凝固保鲜备用。
四、药敏操作：
1. 在净化工作台上，用动物肝脏或心脏的横断面置于培养基上均匀涂布。
2. 然后把七个不同的药敏片均匀分布在培养基上。
3. 置于恒温培养箱中37℃培养24H，然后观察结果。
药物敏感判定标准:
20以上极敏,15-20高敏,10-14中敏,10以下低敏,0不敏.
培养基:应根据实验菌的营养需要进行配制,倾注平板时,厚度合适,约5-6毫米,不可太薄,一般90毫米直径的培养皿,倾注培养基18-20毫升.。
兽用药敏片的制作和应用
兽用药敏片的制作和应用孙丽蓉，李芳萍，康宏昌，刘忠诚，付明山，郑海英（通辽三元种猪示范场，内蒙古通辽#"’###）中图分类号：1’&$文献标识码：2文章编号：!##)3,#()（"##!）#&3##")3#"养殖场疾病控制的好坏，直接影响其场经济效益。
疾病控制除疫苗接种外，药物治疗也十分重要，而做好药敏试验很关键。
市场上购买药敏片不方便，即使购买到药敏片，已用的药品与本场买到药品不是同一厂家生产，疗效也不一致。
我们一般多应用自制的药敏滤纸片，即实用又省钱，经临床实践，效果较好。
现介绍如下：!制作方法!+!滤纸片选用新华!号（或其他质量好的）定性滤纸片，用打孔机打成直径为4--的小圆纸片，根据需要将数片包成一纸包，或放入带棉塞的小瓶或小平皿内，在!4#5干热灭菌!6或!"! 5灭菌!&-78，置4#5干燥箱内烘干备用。
!+"药液的配制收稿日期："##!3#(3#!作者简介：孙丽蓉（!$4,3），女，内蒙古通辽人，助理研究员，硕士；李芳萍（!$4(3），女，内蒙古乌盟察右中旗人，兽医师，大学；康宏昌（!$4#3），男，内蒙古通辽人，高级兽医师，大学+!+"+!稀释剂抗生素的稀释剂通常用蒸馏水，但有些抗生素可用其他溶剂作初步溶解。
如：呋喃西林，每片首先用!-9:／;氢氧化钠!-;溶解，再用水稀释到所需浓度。
痢特灵先以二甲基酰胺或丙酮溶解。
!+"+"药液浓度注射粉剂一般!.药品加蒸馏水!###-;稀释；注射针剂，用蒸馏水作!##倍稀释。
其他药物按使用说明书上的配料或饮水含量，换算按!.需加多少毫升水或配多少毫克料，就相当于配制药液所加蒸馏水毫升数。
如!#.本品可拌&#/.饲料，其换算方法为：!.本品加&###-;蒸馏水。
!+(配制方法在无菌条件下，准确称取药量，以!.为一个基本单位，为了方便最好将药物先稀释成!#-;，然后作倍比稀释，如!##倍稀释药物，在!.药物中加入!#-;蒸馏水，然后取!-;本液加入$-;蒸馏水即可。
药敏片的制法
简易药敏片的制作一、因正规制作药敏片麻烦且使用起来不方便，主要是药量小看抑菌圈的大小也不好看。
同时现在市场上的药都是复方药，厂家一般也不告诉诉客户配方，所以急需自制简易药敏片。
今将制法奉送，不当之处，尚请斧正。
二、简易药敏片的制法1、直接选用各药厂的（瓶装、袋装、筒装等）成品药来做。
其它设备和器皿需要恒温箱、平皿（直径90mm或更大一点的都行）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（这个东西去普通的文具店里就能买上，有两孔的有一个孔的），具体的操作步骤如下。
2、将蒸馏水加一定量到烧杯中，将要选的药厂的药直接加到烧杯中，边加边搅拌使它达到饱合状态（即再加药就不溶了为止）。
加水量视做药敏片的多少而定，一般5毫升水就能做30~40个。
一般情况下，水可以多一些。
3、将滤纸用打孔器打好小圆纸片。
按需要做的量准备好小纸片的量。
4、将浇杯中的药液的上清液倒到干净干燥的平皿中。
然后将小圆纸片逐片放入药水中，浸泡透即可，如果您所放的药敏片过多，也可多泡一段时间，如半个小时或一个小时，同时要翻动它们。
5、将浸泡好的药敏片用镊子夹出，放到另一干燥平皿中，注意药敏做的多时，放湿药敏片不要完全重叠地放。
这样会使有的药敏片在干燥过程中所沾的药量不一，影响您对药的评价。
因为有的药不溶，药厂会加一些助溶剂，干燥过程中有的药会析出。
这时药敏片叠放位置会影响所沾的药量的。
（所以有的药敏片在干燥时有药析出是正常的，不用着急）6、将盛湿药敏片的平皿放到恒温箱中，温度37℃，放置12~24小时即可，不同的药干的时间也可能不一样，所以自己需要视情况而定。
在这个过程中要注意勤翻一下药敏片，尽量不要让它们沾在一起。
7、要注意温度过高（60℃），药敏片颜色会深一些，甚至发黑。
这时药敏片就不能用了。
不过轻微发黄还是可用的。
（有的药是黄的则另当别论）。
8、药敏片的储藏：短期使用可冷藏保存，长期保存要冷冻。
使用时用几个拿几个，用后尽快将它们放回去。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏试验
药敏实验：
1、直接选用各药厂的成品药来做（瓶装、袋装、桶装等）
其他设备需要：恒温箱、培养皿、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器、具体步骤如下：
2、称取1g成品药，溶于50ml蒸馏水中，一般5ml就能
做30-40个。
3、将滤纸用打孔器达成6mm的小圆纸片。
4、将小圆纸片放入配好的药液中浸泡1-2h。
5、将浸泡好的小圆纸片用镊子夹出，放到一干净、干燥
的培养皿中，不要重叠，重叠会使药量不均匀。
6、将放有湿药敏片培养皿放到恒温箱中烘干、可定时翻
动一下。
7、恒温箱温度不要太高，不超过60度。
8、短期使用可冷藏，长期使用冷冻，用多少，拿多少。
用时可在药敏片上编号。
9、固体培养基的配制：
5g营养琼脂加到100ml生理盐水中溶解。
高压灭菌，待其降到50度左右时，将其倒在培养皿中，待其冷却后可涂板，也可放于40度冷藏保存，用时取出涂板。
涂板时注意不要讲琼脂培养鸡表面弄得太湿，不利于细菌生长。
大肠杆菌药敏试验简易方法重点
大肠杆菌药敏试验简易方法近年来，随着养鸡业的迅猛发展，鸡大肠杆菌病的发病率和死亡率也不断增加，现已成为危害养鸡业（特别是肉鸡）最为重要的疾病之一，为细菌病之首。
因此，广大养鸡户谈之色变，没有比感染病毒病又继发大肠杆菌病更糟糕的了。
正因为如此，抗生素得到了大量广泛的应用，又由于大肠杆菌对抗生素容易产生耐药性，所以大肠杆菌的耐药性问题日益突出。
如何解决这个问题将是畜牧兽医工作者今后工作的重点。
而就目前来说，通过抗菌药物敏感性试验（药敏试验）选择敏感药物对鸡群进行预防和治疗是降低大肠杆菌病发病率和死亡率的有效手段。
标准的药敏试验（纸片扩散法）比较繁琐，要先进行细菌培养，再进行药敏试验，试验设备要求高，基层兽医诊疗机构很难做到，现介绍一种简易药敏试验方法（纸片扩散法［1］）。
1试验方法和步骤1.1试验设备恒温培养箱1台、干燥灭菌箱1台、酒精灯1个、接种棒（带接种环）1个（接种环可用回形针自制）、手术剪1把、镊子1个、普通营养琼脂1瓶、玻璃平皿（直径90mm）数个、烧杯（500ml）1个、玻璃棒1个、普通电炉1台、定性滤纸1盒、蒸馏水适量、生理盐水适量、小玻璃瓶（如链霉素瓶）数个（洗净晾干）、钢笔1支、细针头数个、高压蒸汽灭菌锅（可选）1个、普通天平1台、药勺1个、尺子1个。
1.2普通营养琼脂平皿制备1.2.1平皿消毒将玻璃平皿洗净，晾干。
用干燥灭菌箱120℃灭菌1小时；也可用酒精灯火焰消毒，将玻璃平皿内壁靠近火焰，同时慢慢转动平皿使之均匀受热，待平皿内壁上水珠烤干并发烫为止。
1.2.2琼脂消毒营养琼脂与蒸馏水（或生理盐水）以3g：100ml的比例加入烧杯（先加蒸馏水，后加营养琼脂），用电炉加热同时用玻璃棒搅拌，使营养琼脂溶化均匀。
如有高压蒸汽灭菌锅可将溶化的琼脂液装入生理盐水瓶中（不超过其容量的2/3），瓶口留一通气孔（一般用16号针头刺入瓶盖），将瓶站立放入锅内，加热至121℃保持15分钟即可；如无高压锅可直接用电炉加热至沸腾后立即将烧杯从炉上拿下来，待泡沫消了，再放到炉上，如此煮约20分钟（煮时不断搅拌）。
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简易药敏片的制作
一、因正规制作药敏片麻烦且使用起来不方便，主要是药量小看抑菌圈的大小也不好看。
同时现在市场上的药都是复方药，厂家一般也不告诉诉客户配方，所以急需自制简易药敏片。
今将制法奉送，不当之处，尚请斧正。
二、简易药敏片的制法
1、直接选用各药厂的（瓶装、袋装、筒装等）成品药来做。
其它设备和器皿需要恒温箱、平皿（直径90mm或更大一点的都行）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（这个东西去普通的文具店里就能买上，有两孔的有一个孔的），具体的操作步骤如下。
2、将蒸馏水加一定量到烧杯中，将要选的药厂的药直接加到烧杯中，边加边搅拌使它达到饱合状态（即再加药就不溶了为止）。
加水量视做药敏片的多少而定，一般5毫升水就能做30~40个。
一般情况下，水可以多一些。
3、将滤纸用打孔器打好小圆纸片。
按需要做的量准备好小纸片的量。
4、将浇杯中的药液的上清液倒到干净干燥的平皿中。
然后将小圆纸片逐片放入药水中，浸泡透即可，如果您所放的药敏片过多，也可多泡一段时间，如半个小时或一个小时，同时要翻动它们。
5、将浸泡好的药敏片用镊子夹出，放到另一干燥平皿中，注意药敏做的多时，放湿药敏片不要完全重叠地放。
这样会使有的药敏片在干燥过程中所沾的药量不一，影响您对药的评价。
因为有的药不溶，药厂会加一些助溶剂，干燥过程中有的药会析出。
这时药敏片叠放位置会影响所沾的药量的。
（所以有的药敏片在干燥时有药析出是正常的，不用着急）
6、将盛湿药敏片的平皿放到恒温箱中，温度37℃，放置12~24小时即可，不同的药干的时间也可能不一样，所以自己需要视情况而定。
在这个过程中要注意勤翻一下药敏片，尽量不要让它们沾在一起。
7、要注意温度过高（60℃），药敏片颜色会深一些，甚至发黑。
这时药敏片就不能用了。
不过轻微发黄还是可用的。
（有的药是黄的则另当别论）。
8、药敏片的储藏：短期使用可冷藏保存，长期保存要冷冻。
使用时用几个拿几个，用后尽快将它们放回去。
药敏纸片的制作方法
药敏纸片的制作方法
1：纸片的制作及灭菌
选用质量较好的定性滤纸：
用打孔器打成直径为6毫米的圆片，每100片放入一个瓶中，100度干热灭菌1—2小时，或高压灭菌30分钟，在60度上烘干备用。
2：抗菌药物浓度的配制
取复合制剂1g加水30毫升或0.1g加3ml水，直接浸泡药敏片。
3：取出浸泡好的纸片烘干，并在冰箱中保存备用。
可保持6个月的有效期。
1、纸片的选择与制作
在医药公司购买新华1号定性滤纸，用打孔器把滤纸打成直径为6毫米的圆形纸片，装入干洁的青霉素小瓶内，每瓶装入5O只，将若干个装有纸片的小瓶放入高压锅内进行高压灭菌121度20分钟，冷却后置4～8℃条件下保存。
2 、药袖浓度的配比
选择现有的抗菌药物，根据药物的说明进行配比浓度，如规格为100克装的抗菌物，包装说明兑水400斤，即用天平称药物1克加50毫升的灭菌注射用水置于灭菌平皿内，充分溶解后吸出1毫升置于另一个灭菌容器中再加入39毫升的灭菌注射用水。
3 、纸片的浸泡与干燥
取配好的药物溶液放入盛有纸片的青霉素小瓶内(药液的多少以最透纸片为宜)，浸泡24小时后，将多余的药液倒掉，放在无菌条件下晾干或放在37℃的恒温箱内烘干，而后加盖置4～8℃的冰箱中保存备用。