1 HPLC基本原理
赛默飞超高效液相工作原理
赛默飞（Thermo Fisher Scientific）超高效液相色谱（UHPLC）是一种高性能液相色谱技术，它可以更快速、更高效地分离和分析样品中的化合物。
其工作原理基本上与传统液相色谱（HPLC）相似，但具有更高的分辨率和分析速度。
以下是赛默飞UHPLC 的工作原理：
1. 样品注入：样品通常通过自动进样器注入到液相色谱系统中。
在UHPLC中，通常使用小体积的进样器，以减小体积效应，使分析更灵敏和高效。
2. 色谱柱：样品在色谱柱中进行分离。
UHPLC通常使用更细小、更长的柱子，柱子的内径较小，例如2.1毫米，以增加表面积和提高分离效率。
此外，柱子的填料颗粒也更小，通常为1.7微米以下，以增加分辨率。
3. 流动相：UHPLC系统通常使用高压泵来提供高压力的流动相，通常是一种有机溶剂和水的混合物。
高压能够加快流动相的流速，使流体能够快速通过柱子，从而加快分离速度。
4. 检测器：UHPLC通常配备高灵敏度的检测器，例如光二极管阵列检测器（PDA）或质谱检测器（MS），以便对分离的化合物进行检测和定量。
这些检测器能够提供更多信息，如波长扫描或质谱数据，以增加分析的信息丰富度。
5. 数据分析：分析的数据通常由计算机进行记录和分析。
通过分析峰的面积、保留时间和峰形等参数，可以确定样品中的化合物。
总的来说，赛默飞UHPLC的工作原理是通过使用高压、细小的色谱柱和高灵敏的检测器来实现更快速、更高效的分离和分析。
这使得UHPLC成为许多化学和生物分析领域中的强大工具，可用于分析各种复杂的样品。
色谱分析(中国药科大学)第4章第1-6节高效液相色谱分析
本法采用未改性的原形硅胶为固定相，以水性溶液作流动相。常用于分析中药中的生物碱成分，或化学合成的生物碱类药物。
该方法的保留机制是基于硅胶表面的硅羟基在一定的条件下具有离子交换特性，改变任一流动相条件（pH, 离子强度，含水量），都会对保留时间产生影响。
（二）流动相
该法常用的流动相为：乙醇（或甲醇）—1~3%三乙胺水溶液（磷酸或醋酸调节pH值至6~7.5）（85：15）或（80：20）。该法的色谱保留机理相当于离子交换机理，主要依碱性强弱出峰。色谱峰的对称性很好，峰形尖锐。适合于分离在反相HPLC中不宜分离的生物碱类混合物（反相HPLC中生物碱可能拖尾及峰展宽，有时tR相差很大）。
经典柱色谱填料颗粒粒径一般大于100um，颗粒较大，传质扩散缓慢，手工装柱不易装均匀，涡流扩散现象较严重，因此经典液相色谱法柱效较低，分离能力差，只能胜任各组分分配系数相差较大的样品（各组分性质相差较大的样品）的分离，HPLC填料粒径一般为5-10μm，传质快，采用高压均浆技术装柱，装柱均匀性号，涡流扩散小，因此HPLC柱效很高，比经典柱色谱高数百～数千倍，25cm长的硅胶柱柱效可达2万理论塔板，能胜任复杂物的分离，峰容量大。
色谱柱不能很长，柱效不会太高
载气不影响分配，靠改变固定相来改变选择性
固定相：没有GC那样种类繁多靠改变流动相来改变选择性
回收困难
可定量回收，可用于制备
第二节 液－固吸附色谱及液－液分配色谱
一 液－固吸附色谱（LSC）
(一)定义
色谱分离是基于吸附效应的色谱法称为吸附色谱，又称液－固吸附色谱、正相色谱法（normal phase chromatography，NPC）。
影响NS/RE色谱保留的因素如下：
1. 水的比例增加，洗脱能力减小；
高效液相色谱法在蛋白质分离检测中的应用_唐玲玲
1 HP LC 基本原理
HPLC 由液体输送系统、进样系统、色谱柱和检 测系统 4 部分所组成。输液泵将流动相以稳定的流速 （或压力） 输送至分析体系，在进入色谱柱之前通过 进样器将样品导入，流动相将样品带入色谱柱，在色 谱柱中各组分依照分配系数、吸附力大小、带电性 质，乃至分子量大小的差异而被分离，并依次随流动 相流至检测器，将检测到的信号送至数据系统记录、 处理或保存。随着 HPLC 技术的日趋成熟，它已成为 分离和检测蛋白质的重要工具。
Samira Roufik 建立了用 HPSEC 分析多种乳清蛋 白组成的方法，可以作为食品中添加乳清蛋白配方的 依据[12]。由于 HPSEC 相对温和的色谱条件，不会导 致蛋白质和多肽的变性，故常用作一些乳源性生物活 性多肽的制备，如用乳白蛋白和酪蛋白制备血管紧张 素抑制肽[13]，在对 β- 乳球蛋白体外降解的组分进行 分离分析时，采用 HPSEC 能够较好地保持产物多肽 的物理化学性质[14]。 2.5 高效疏水色谱 （high performance hydrophobic iinteraction chromatography，HPHIC）
反相色谱 原理
反相色谱原理
反相色谱是一种常用的色谱技术，它基于样品溶液中溶剂的极性与固定相之间的相互作用。
在反相色谱中，固定相通常为非极性的，而样品溶液则是极性的。
这种相性差异使得样品中极性组分与固定相之间的作用力较强，进而保留在固定相上，而非极性组分则可以更快地通过固定相。
反相色谱的原理是通过控制流动相（主要为溶剂）和固定相之间的相互作用来实现物质分离。
在反相色谱中，固定相通常是一种多孔性材料，比如疏水性的碳氢化合物或含有氢键键合作用的硅胶。
这些固定相会与非极性组分发生相互作用，使得非极性化合物在固定相上停留更长的时间。
在反相色谱中，流动相的选择至关重要。
通常使用的流动相是水和有机溶剂（如乙腈、甲醇）的混合物，其比例会根据样品的特性进行调整。
通过调整流动相的极性，可以控制非极性和极性组分在色谱柱中的分离速度。
分析时，样品被注射到色谱柱中，随后流动相被推动通过柱床。
非极性组分会快速通过柱床，而极性组分会与固定相发生相互作用而保留在柱床上。
通过调整流动相的性质，可以控制非极性和极性组分之间的分离程度，从而实现物质的分离。
反相色谱广泛应用于药学、化学、环境科学等领域中的物质分析和分离。
它具有分离效率高、重复性好、操作简单等优点，并且适用于各种类型的样品。
因此，反相色谱成为现代分析化学中不可或缺的技术之一。
液相色谱分析方法建立-系列一基本理论及色谱介绍
硅 胶 的 溶 解 曲 线
1 2 3 4 5 6 7 8 9 p H
硅胶表面键合相的水解（PH<2）
O
OH
Si
O
+
O
“Column Bleed”
H3C
C
C
C
C
Si
C
C
C
CH3
Cl
CH3
O
+ H3C
C
C
C
C
Si
C
C
C
CH
O 硅胶表面未被键合的酸性硅羟基将会与被分析物相互作用，特别是在 中性条件下会对强碱性化合物产生严重的峰形拖尾。
O 封尾工艺使得表面残余的硅羟基被进一步的消除，为小分子所取代。 O 封尾工艺能促使色谱柱对极性和碱性化合物的分离具有良好的峰形。
50
色谱柱的pH值
O 填料的pH稳定性 O 硅胶填料 pH：2-8 O 聚合物填料 pH：2-12 O 杂化硅胶填料 pH：2-12
O
Low pH (hydrolysis of ligand)
O Si
O
O
OH
+
H3C
C
C
C
C
Si
C
C
C
CH3
HO
CH3
硅胶的溶解（PH>8）
Nucleophilic attack
• Complete dissolution of Silica
• Catastrophic column failure
蒸发光散射
任何挥发性低于流动相的样 品均能被 检测
可检测所有物质。
L-色氨酸含量和纯度的测定实验指导书
L-色氨酸含量和纯度的测定 实验指导书一、实验目的1.了解对二甲氨基苯甲醛与L-色氨酸的反应机理；2.了解高效液相色谱分析的基本原理；3.掌握L-色氨酸的测定方法。
二、概述和原理L-色氨酸的分析方法主要有氨基酸自动分析仪分析法、高效液相色谱分析法、毛细管电泳法、薄层色谱法和分光光度法等。
本实验主要采用分光光度法进行L-色氨酸含量测定。
分光光度法测定L-色氨酸的基本原理为：在硫酸溶液中，L-色氨酸与对二甲氨基苯甲醛发生缩合反应，生成的希夫碱对二甲氨基苯甲醛缩色氨酸为蓝色，颜色深度在一定范围内与L-色氨酸含量成线性关系，可在分光光度计下定量测定。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，其系统主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，由于该法具有高效、快速和灵敏等特点，不仅可用于L-色氨酸含量的测定，还可用于纯度的测定。
其工作原理为：储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
三、实验试剂及仪器1.试剂浓硫酸；对二甲氨基苯甲醛；亚硝酸钠；L-色氨酸标准品；磷酸二氢钾；冰醋酸；甲醇（液相纯）；纯净水；乙腈（液相纯）。
2.仪器紫外可见分光光度计，Agilent 1200 Series高效液相色谱仪。
四、发酵液中L-色氨酸含量的测定1.对二甲氨基苯甲醛溶液（3 g/L）制备准确称取0.3 g对二甲氨基苯甲醛，溶于100 mL 1:1浓硫酸中。
2.亚硝酸钠溶液（2%）制备准确称取亚硝酸钠0.2 g于10 mL容量瓶中，以蒸馏水定容，新鲜配制。
3.L-色氨酸标准储备液（100 mg/L）制备准确称取25 mg L-色氨酸标准品，用纯水定容于250 mL棕色容量瓶中，制得浓度为100 mg/L的L-色氨酸标准储备液，于4 ℃冰箱保存备用。
高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯
高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯一. 实验目的1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。
2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。
3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。
二. 实验原理1、高效液相色谱法是以液体作为流动相，借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。
2、在高效液相色谱中，若采用非极性固定相，如十八烷基键合相，极性流动相，即构成反相色谱分离系统。
反之，则称为正相色谱分离系统。
反相色谱系统所使用的流动相成本较低，应用也更为广泛。
3、定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。
分离度（R）的计算公式为：R＝ 2[t(R2)-t(R1)] /1.7*(W1＋W2)式中 t(R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间； t(R1)为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1及W2为此相邻两峰的半峰宽。
除另外有规定外，分离度应大于1.5。
4、本实验对象为邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAE，常被用作塑料增塑剂。
它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品，如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。
但研究表明，邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用，是一类内分泌干扰物。
待测物性质见表1。
表1色谱柱测试条件液，在不同条件下进行HPLC分离检测。
三.仪器与试剂1、仪器Agilent 1100高效液相色谱仪，50ul微量注射器。
2、试剂甲醇（色谱专用），高纯水四. 实验步骤1、色谱条件色谱柱：辛烷基硅烷键合硅胶（C8）柱温：室温流动相：初始为高纯水：30％，甲醇：70％检测器：DAD检测器;检测波长：220nm；进样体积：100µl定量环，实际注射每次可控制在200µl。
2、待测溶液的配制首先用甲醇做溶剂配制储备液：邻苯二甲酸二甲酯（0.3880g/L），邻苯二甲酸二乙酯（0.2770g/L），邻苯二甲酸二丁酯（0.3776g/L）。
仪器分析高效液相色谱法
仪器分析高效液相色谱法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是目前广泛应用于仪器分析领域的一种重要分析方法。
它通过利用柱子中流动的流动相和样品的物理化学性质的相互作用，使样品组分在柱子中发生分离，再通过检测器对各组分进行定量或定性分析。
仪器分析高效液相色谱法主要由流动相供给系统、进样器、柱子、检测器和数据处理系统等组成。
流动相供给系统通过恒压或恒流的方式将流动相送入进样器中，进样器将样品注入柱子中，柱子根据物理化学性质的差异，使不同组分发生分离，之后检测器检测进入检测器的各组分的浓度，并通过数据处理系统对数据进行分析和整理。
高效液相色谱法具有分离效率高、分离时间短、适用范围广等特点。
与传统的液相色谱法相比，高效液相色谱法的流动相的流速更高，柱子填充物颗粒更小，从而大大提高了分离效率。
同时，高效液相色谱法对样品的需求量较小，具有较好的分析灵敏度。
因此，高效液相色谱法被广泛应用于生物、环境、食品、药物、化工等领域的组分分析和质量控制。
在生物领域中，高效液相色谱法常用于生物样品中代谢产物和药物的分析。
通过绑定柱子、手性柱子以及使用不同的检测器，可以对复杂的生物样品中的不同组分进行准确的分析和定量测试。
例如，对尿液中的代谢产物进行分析可以帮助人们了解人体健康状态，对药物的残留物进行分析可以保证食品和水的安全等。
在环境领域中，高效液相色谱法常用于水质、大气和土壤等环境样品中有机污染物的分析。
通过连接各种不同相的柱子，可以对复杂的环境样品中的有机污染物进行有效的分离，使用紫外-可见光检测器或质谱检测器可以对分离后的各组分进行检测和定量。
在食品领域中，高效液相色谱法常用于食品中添加剂、农药残留物和食品中的有害物质的分析。
通过选择合适的柱子和检测器，可以对复杂的食品样品进行分离和检测，以保证食品的安全性和质量。
在药物领域中，高效液相色谱法常用于药品中活性成分和杂质的分析。
高效液相色谱法(1)
UV absorbance
Hydrophobic interaction Chromatography
nonpolar
--
protein surface
+++
nonpolar
O H3C-C-N-C-O-
NH
填料：
基质：有机聚合物（交联琼脂 糖、乙烯聚合物、TSK-PW） 和大孔硅胶键合相
为了获得合适的溶剂强度(极性),常采用二元或 多元组合的溶剂体系作为流动相.
采用的溶剂可分为底剂及洗脱剂两部分
底剂决定基本的色谱分离, 洗脱剂具有对组分选择性分离
正相色谱中底剂采用低极性溶剂,洗脱剂选择极 性较强的溶剂.
反相色谱中底剂采用强极性溶剂(水),洗脱剂选 择极性较弱的溶剂(有机溶剂).
离子交换色谱主要在含水介质中进行,组分保 留值可以用流动相中盐的浓度和 pH来控制,增加 盐的浓度导致保留值降低,由于流动相离子与交 换树脂相互作用力不同,因此流动相中离子类型 对样品组分的保留值有显著影响.
30KD
50KD
15
20
25
30
Ion Exchange Chrom
protein B protein B Prot ein B
Prot ein A
-- Na+ SO3+ CM
Prot ein B Pro tei nA
常用填料： 磺化聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸 酯、表面改性硅胶等… 分类： 阳离子交换、阴离子交换
反相色谱-流动相的极性小于固定相的分离体系；机理-被分离
物的与固定相的疏水相互作用力的差别；流动相-极性的有机溶 剂或水；分离-范围最广。
RPC
药物的含量测定方法和验证1
一、容量分析法（滴定分析法）
含量的计算： （2）制剂标示量百分含量的计算
VTF 平均片重 标示量% W 100% 标示量
例：取司可巴比妥钠胶囊（标示量为0.1g）20粒， 除去胶囊后测得内容物总重为3.0780g，称取 0.1536g，按药典规定用溴量法测定。加入溴液 （0.1 mol/L） 25ml，剩余的溴液用硫代硫酸钠液 （0.1025mol/L）滴定到终点时，用去17.94ml。 空白试验用去硫代硫酸钠液25.00ml。按每1ml 溴 液（0.1mol/L）相当13.01mg的司可巴比妥钠，计 算该胶囊中按标示量表示的百分含量。
二、光谱分析法
（二）荧光分析法 某些物质受到光照射时，除吸收某种波长的光 之外还会发射出比原来所吸收的光的波长更长 的光；当激发光停止照射后，这种光线也随之 消失，这种光称为荧光。 从样品池出来的荧光是各方向发射的，在与激 发光光源排成直角的方向测荧光强度可以避免 透射的激发光的干扰。
三、色谱分析法
一、容量分析法（滴定分析法）
例题：滴定分析中，一般利用指示剂的突变来判断化 学计量点的到达，在指示剂变色时停止滴定，这一点 为： A.化学计量点 B.滴定分析 C.滴定等当点 D.滴定终点 E.滴定误差 答案：D
一、容量分析法（滴定分析法）
酸碱滴定 氧化还原滴定 滴定分析法 配位滴定 沉淀滴定 非水滴定
三、色谱分析法
例题：HPLC法与GC法用于药物复方制剂的 分析时，其系统适用性试验系指 A.测定拖尾因子 B.测定回收率 C.测定保留体积 D.测定分离度 E.测定柱的理论板数
1有关HPLC的知识
• 故障3 既无压力指示,又无液体流过[1 >。 原因(1) 泵密封垫圈磨损; (2) 大量气泡 进入泵体。 处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对 于第二种情况,在泵作用的同时, 用一个 50ml 的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出 空气。
• 故障4 压力波动大,流量不稳定. 原因系统中有空气或者单向阀的宝石 球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密 封。 处理工作中注意观察流动相的量, 保证 不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空 气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀 座之间夹有异物, 拆下单向阀, 放入盛有 丙酮的烧杯用超声波清洗.
• 3、峰底（peak base）：峰的起点与终点之间 的连接的直线（图1 中的CD）。 • 4、峰高（h ，peak height）：色谱峰最大值点 到峰底的距离（图1 中的BE）。 • 5、峰宽（W ，peak width）：在峰两侧拐点 （图1 中的F ，G）处所作切线与峰底相交两点 的距离（图1 中的KL）。 • 6、半高峰宽（W h/2 ，peak withd at half height）：通过峰高的中点作平行于峰底的直 线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离（图 1 中的HJ）。
第三部分HPLC的分类
• １、液相色谱法（liquid chromatography ， LC）：用液体作流动相的色谱法。 • 2、液液色谱法（liquid liquid 2 liquid chromatography，LLC chromatography LLC ）：将固定液涂渍 在载体上作为固定相的液相色谱法。 • ３、液固色谱法（liquid solid chromatography，LSC ）：用固体（一般 指吸附剂）作为流动相的液相色谱法。
• 9、前伸峰（leading peak）：前沿较后沿平缓 的不对称的峰。（又叫伸舌峰、前延峰） • 10、假峰（ghost peak）：除组分正常产生的色 谱峰外，由于仪器条件的变化等原因而在谱图 上出现的色谱峰，即并非由试样所产生的峰。 这种色谱峰并不代表具体某一组分，容易给定 性、定量带来误差。（又叫鬼峰） • 11、畸峰（distrorted peak）：形状不对称的色 谱峰， 前伸峰、拖尾峰都属于这类。 • 12、反峰（negative peak）：也称倒峰、负峰， 即出峰的方向与通常的方向相反的色谱峰。
高效液相色谱法(HPLC)的概述
此帖与GC版的对应，是为了让大家更好的学习和了解LC主要内容包括：1.高效液相色谱法（HPLC）的概述2. 高效液相色谱基础知识介绍（1——13楼）3. 高压液相色谱HPLC发展概况、特点与分类4. 液相色谱的适用性5.应用高效液相色谱法（HPLC）的概述以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。
其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。
由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用X围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）、色谱柱可反复使用的特点，在《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等。
目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。
将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，不易流失是其特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。
C18（ODS）为最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
系统组成：（一）高压输液系统由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。
1.贮液罐由玻璃、不锈钢或氟塑料等耐腐蚀材料制成。
贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。
3-氧代环丁烷-1,1-二羧酸,二异丙酯 hplc
3-氧代环丁烷-1,1-二羧酸,二异丙酯hplc3-氧代环丁烷-1,1-二羧酸,二异丙酯（3-Oxocyclobutanecarboxylic Acid Diisopropyl Ester）是一种有机化合物。
HPLC（高效液相色谱，High-Performance Liquid Chromatography）是一种分离和分析化学物质的技术。
结合起来，3-氧代环丁烷-1,1-二羧酸，二异丙酯HPLC 可以指涉使用HPLC技术对3-氧代环丁烷-1,1-二羧酸，二异丙酯进行分析和检测。
HPLC是一种广泛应用的分离技术，它基于化学物质在液相中的相互作用和分配行为进行分离。
该技术涉及一组主要组件：流动相（溶剂）、色谱柱、样品进样系统、检测器和数据处理设备。
流动相：流动相是溶解化合物样品并在色谱柱中传输化合物的溶剂系统。
它通常是由溶剂混合物组成的，可根据目标分析的性质和要求选择不同的溶剂系统。
色谱柱：色谱柱是分离化合物的关键部件，根据分析目标的不同选择合适的柱子。
在HPLC中常用的柱子类型包括反相柱、离子交换柱、大小分子筛柱等。
反相柱是最常用的类型，其中常用的填充剂包括碳链和亲水基团。
样品进样系统：样品进样系统将要分析的化合物溶液引入色谱柱。
它可以是自动进样器或手动进样器，确保准确而重复的样品进样。
检测器：检测器用于检测样品在流动相中的组分。
常见的HPLC检测器包括紫外-可见检测器（UV-Vis）、荧光检测器、折光率检测器等。
选用适当的检测器可以根据化合物的属性和要求获得准确的定量和定性数据。
数据处理设备：HPLC仪器通常与计算机或数据处理设备连接，用于记录和分析检测器产生的信号。
数据处理设备可以对色谱图进行处理、数据整合和分析，并生成定量和定性的结果。
通过调节流动相的组成、柱温、流速和检测器参数等条件，对3-氧代环丁烷-1,1-二羧酸，二异丙酯的HPLC分析可以实现其分离和定量检测，同时可以通过与参考标准品比对来确定目标化合物的浓度。
图1高效液相色谱仪的系统流程图原理
液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视, 如分析氨基甲酸酯 农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快,如在环 境污染分析测定水中的烃类, 海水中的不挥发烃类, 使环境污染 分析得到新的发展。
高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的 限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离 热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范 围的物质。
与试样预处理技术相配合,HPLC 所达到的高分辨率和高灵 敏度, 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能,能够 分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展, 有可能在充分 保持生化物质活性的条件下完成其分离。
（2）高压输液泵容易出现的问题是：①压力升不上去：检查一下桌面上是否 有漏下的液滴，如果有拧紧漏液处即可。②压力过高：看一下抽取流动相的 塑料管里是否有气泡，如果有，则按一下Stop，这时候千万别抽气泡，等压 力降下来，最好到0Psi，这时候抽出气泡。如果在过高的压力下抽气泡，后 果会非常严重，流通池会被鼓破，无法分析样品，并且会给你带来很多困 惑，当然如果有经验的话会及时发现，因为流通池破了后会流出蓝色的墨水 样的液体。
高速——流速为0.1～10.0 mL/min。 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达 100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品 少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：
速度快——通常分析一个样品在15～30 min，有些样品甚至在 5 min内即可完成。
hplc电力系统通信基本原理
hplc电力系统通信基本原理HPLC电力系统通信基本原理，对于化学研究人员而言，是非常重要的一项技术。
HPLC电力系统通信技术的发展，不仅促进了HPLC技术的进步，也为生物、医学、制药等领域的研究提供了巨大的帮助。
HPLC电力系统通信的基本原理是，将电脑、HPLC仪器和网络相连。
首先，要连接 HPLC 连接器，将 HPLC 仪器和电脑相连。
下一步，我们需要通过网络编程来编写通讯程序，以使电脑与 HPLC 之间建立联系。
其次，HPLC 仪器需要一个开放的通讯接口。
因为这个接口是用来连接电脑的。
一般来说，通讯接口分为 RS-232，USB，GPIB，以及以太网接口。
接下来，我们需要使用串口通讯协议，与 HPLC 仪器进行通讯。
串口通讯协议，是一种在两个设备之间建立数据传输连接的通讯语言。
我们需要编写一套基于串口协议的程序，例如，让电脑能够发送指令到仪器，从而启动仪器的工作流程。
最后，我们需要建立网络链接。
网络链接是 HPLC 仪器和电脑之间的关键步骤。
网络链接可以使用一种叫做 TCP/IP 协议的标准进行。
这个协议是用于在 WANS 和一些本地局域网之间进行跨越网络传输数据的。
网络连接可以实现两种主要的功能：一种是通过远程访问来监控 HPLC 的进程；另一种是将数据传输到存储设备上，以进行后续的分析。
总之，HPLC电力系统通信基本原理非常重要。
掌握了这项技术，我们可以更加灵活的控制仪器，从而更有效地进行研究。
同时，HPLC电力系统通信的技术发展，在实际应用中也为更多的领域提供了非常好的帮助。
高效液相色谱法测定 1,8桉叶素含量的原理
高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分析技术，其原理是利用高压泵将溶液以高速流动进入色谱柱，然后通过相互竞争的方式在色谱柱中进行分离。
1,8-桉叶素是一种在中药和植物中常见的活性成分，其含量的测定对于药物研发和质量控制具有重要意义。
HPLC法测定1,8-桉叶素含量的原理大致可以分为以下几个步骤：1. 样品制备：首先需要将1,8-桉叶素从植物提取出来，通常采用溶剂提取的方法。
提取后的溶液需要进行适当的预处理，如过滤或稀释，以确保样品适合于HPLC的测定。
2. 色谱柱选择：对于1,8-桉叶素的测定，通常会选用反相色谱柱。
反相色谱柱表面是羟基化的硅胶，可以与1,8-桉叶素的极性结构发生相互作用，实现分离。
3. 流动相选择：对于1,8-桉叶素的测定，通常会选用含有有机溶剂的流动相，如乙腈和水的混合物。
通过调整有机溶剂的含量和pH值，可以实现对1,8-桉叶素的分离和测定。
4. 检测器选择：常用的检测器包括紫外检测器（UV）和荧光检测器。
对于1,8-桉叶素的测定，通常会选用UV检测器，因为1,8-桉叶素在紫外波长下有较强的吸收特性。
5. 样品分析：将经过预处理的样品通过高压泵送入色谱柱，通过流动相的推动，在色谱柱中进行分离。
通过调整色谱柱温度、流速和淋洗程序，可以有效地实现对1,8-桉叶素的分离和测定。
6. 数据处理：通过HPLC系统的数据采集和处理软件，可以自动地对得到的数据进行处理和分析，包括峰面积的积分计算、峰高的测量等。
通过以上步骤，就可以使用HPLC法对1,8-桉叶素的含量进行准确测定。
这种方法具有灵敏度高、分辨率好、重复性好等特点，因此在药物分析和质量控制中得到了广泛的应用。
以上是关于高效液相色谱法测定1,8-桉叶素含量的原理的介绍，希望对您有所帮助。
实际上，高效液相色谱法（HPLC）不仅可以用于1,8-桉叶素的测定，还可以用于其他活性成分的分析和测定。
HPLC法测定1,8-桉叶素含量的原理以及步骤与其他成分的测定并无太大的不同。
2-1HPLC基本原理 作业
HPLC基本原理作业1.试说明反相液相色谱和正相液相色谱的区别。
答：由于极性化合物更容易被极性固定相所保留，所以正相色谱系统一般适用于分离极性化合物，极性小的组分先流出。
相反，反相色谱系统一般适用于分离非极性或弱极性化合物，极性大的组分先流出。
因此在应用上，正相色谱用于分离极性较大的物质，如蛋白质、生物碱等。
反相色谱多用于分离极性较小的物质，在流动相的选择上，反相色谱的优势更大，在实际工作中反相色谱的应用更为广泛。
正相色谱用的固定相通常为硅胶，以及其他具有极性官能团，如胺基团和氰基团的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份zui先被冲洗出色谱柱。
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合zui 先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。
2.简述HPLC对流动相的要求。
①必须是HPLC级的，不与固定相发生化学反应。
②对样品有适宜的溶解度，要求k在1~10范围内(可用范围)或2~5(最佳范围)。
k值太小，不利于分离;k值太大，可能使样品在流动相中沉淀。
③必须与检测器相适应。
如用紫外检测器时，不能选用截止波长大于检测波长的溶剂。
④粘度小。
⑤必须脱气:由于流动相里含有微量空气，经泵的压力作用，会在流通池里产生气泡，这对分析产生一定的影响，如噪音增大，甚至干掩盖信号峰。
因此，流动相在使用前必须经超声脱气30分钟以上。
⑥过滤:由于流动相里有很微小的垃圾，如不经过过滤，偶尔会卡在单向阀门中，从而产生压力波动。
高效液相色谱仪(HPCL)的演示应用
（1）类胡萝卜 素的HPLC色 谱行为特征： 通常会选择 450nm左右 的波长。当其 吸光系数已知 时,就可以根 据其峰面积对 化合物进行定 量分析。
（2）固定相 的选择： 在类胡萝卜 素的正相HPLC 分离中,最常 用的固定相是 硅胶
（3）温度 由于其线型 和刚性结构, 类胡萝卜素 分子HPLC条 件的改变比 其它化合物 要敏感的多
食品的化学安全性问题是人们关注的热门课题。食品 是人类生活中不可缺少的必需品。各种食品具有不同的 特性和营养成分，直接关系人体的健康。在食品生产过 程中往往需要添加防腐剂、抗氧化剂、人工合成色素、 甜味剂、保鲜剂等化学物质，其含量过高对人体健康不 利。此外食品在生产、包装和运输过程中可能会被化学 物质污染，如发生农药残留[1]、兽药残留[2]等危害人 体健康。通过食物链的富集，人类从食品中摄取了种类 繁多且浓度高于环境浓度的有毒、有害物质，而这些有 害物质的化学结构与性质经动植物体后变得更为复杂。 因此，食品分析的重要性日益重要。
（1）材料破碎
天然类胡萝卜素是 存在于生物组织细胞 中的。如不把细胞破 碎，是不可能将其中 的类胡萝卜素有效地 萃取出来的。因此， “材料的破碎”，准 确地讲是指细胞的破 碎，破碎的程度应达 到“亚细胞级”。
（2）萃取 类胡萝卜素的 萃取一般与材料 的破碎同步进行， 方法包括研磨和 剪切。（化合物 的相似相容原理） 应注意的事项包 括:快速、除氧、 温度、PH
1.绿色蔬菜和水果：所有绿色植物组织的细胞的叶 绿体内包含有同样的主要色素:叶绿素a和b、β-胡 萝卜素、叶黄素、紫黄质和新黄质。 2.黄-橙-红色水果和蔬菜：黄-橙-红色水果中类胡 萝卜素的组分是十分多样化的。同样的颜色可以由 不同的类胡萝卜素来产生。最典型的例子为番茄(番 茄红素)和红辣椒(辣椒红素)。
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二、如何平衡色谱柱？ 如何平衡色谱柱？ 新色谱柱，应首先用0.2ml/min的流速将色谱 柱平衡过夜，然后将流速升高到1.0ml/min冲洗 30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至最佳 状态。这样可以保证色谱柱的使用寿命，并且 保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。 平衡过程中，将流速缓慢地提高 用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓 冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的 时间来平衡)
五、色谱柱的维护 1. 使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/ 离子性流动相中有一定的溶解度） 2. 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~7.5， 尽量不超过该色谱柱的pH范围 3. 避免流动相组成及极性的剧烈变化 4. 流动相使用前必须经脱气和过滤处理 5. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动 相，应在实验完毕将柱子冲洗干净，并保存 在乙腈中 6. 压力升高是需要更换预柱的信号
注意：由于气相色谱更快、更灵敏、更方便而 且耗费低，因此凡是能用气相色谱法分析的样 品一般不用液相色谱法。
二、高效液相色谱法的类型
高效液相色谱法可以分为： 液液分配色谱法（LLPC） 液固吸附色谱法(LSAC) 离子交换色谱法（IEC） 离子对色谱法（IPC） 离子色谱法（IC） 空间排阻色谱法（SEC） 亲和色谱法（AC）
一、平衡色谱柱 1.反相色谱柱 1. 经过出厂测试后保存在乙腈/水中。 在用流动相分析样品之前，应使用10~20倍 柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱； 如果所使用的流动相中含有缓冲盐，应注 意用纯水“过渡”。
2. 硅胶柱或极性色谱柱 经过出厂测试后保存在正庚烷中。 如果该色谱柱需要使用含水的流动相，在使 用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡。
第七章高效液高效液相色谱法与气相色谱法比较 高效液 ① 分析对象： 气相色谱法只能分析气体和沸点较低的化合 物； 沸点高、热稳定性差、摩尔质量大的有机 物，主要采用高效液相色谱法进行分离和分 析
② 流动相作用： 气相色谱法的流动相是惰性气体，仅起运载 作用 高效液相色谱法中流动相不仅起运载作用， 还与固定相一起共同完成对组分的分离
(5)Mobile Phase Choice Polar ("strong") solvent interacts most with polar analyte (solute) –elutes faster but less resolution Strength characterized by polarity index P' ranges from -2 (nonpolar) to 10.2 (highly polar)
③运行环境： 气相色谱法一般都在较高温度下进行分离和 测定，使其应用范围受到了较大的限制。 高效液相色谱一般在室温下进行分离和分析， 适于分离分析生物大分子、离子型化合物、不 稳定的天然产物和各种高分子化合物如：蛋白 质、氨基酸、核酸、多糖类、植物色素、高聚 物、染料、药物等。
④HPLC除用于分离和分析外，还可用于制备
5.正相色谱与反相色谱法比较 正相色谱与反相色谱法比较 (1) Normal phase HPLC nonpolar solvent /polar column (2) Reversed phase HPLC polar solvent /nonpolar column (3) Normal- (polar column) versus Reversed Phase (nonpolar) elution:
总之，正相键合相色谱法适于分析中等极性 的化合物如脂溶性维生素、甾族、芳香醇、芳 香胺、脂和有机氯农药等。
四、反相色谱法 Reversed phase HPLC 反相色谱法的流动相极性大于固定相，极性 大的组分先流出色谱柱，极性小者后流出，适 适 于分析非极性化合物。 于分析非极性化合物 现用得最多的是反相键合相色谱 反相键合相色谱法。典型的 反相键合相色谱 反相键合相色谱是在ODS柱上，采用甲醇－水 ODS 或乙腈－水作流动相，分离非极性或中等极性 分离非极性或中等极性 的化合物如同系物、绸环芳烃、药物、激素、 的化合物 天然产物及农药残留等。
HPLC日常维护（ HPLC日常维护（二） 日常维护
——色谱柱的使用和维护
每天用足够的时间来平衡色谱柱，会在处理 问题方面获得最大的“补偿”， 而且色谱柱的寿命也会变得更长！
一定得做！ 一定得做！
新的色谱柱在使用之前进行性能测试，即使 用色谱柱附带的检验报告上的测试条件和样 品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的 使用中，应时常对色谱柱进行测试。
再生方法： 再生方法： 1.极性固定相的再生： 正庚烷 氯仿 乙酸乙酯 乙醇 水
丙酮
2.非极性固定相的再生： 水 乙腈 氯仿(或异丙醇) 乙腈 水
3. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱
四、注意： 注意： 1.在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于 NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该 在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲 洗至碱溶液完全流出。 2.如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完 全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M的硫 酸冲洗非常有效。
三、正相色谱法 Normal phase HPLC 正相色谱法的流动相极性小于固定相。样品 中极性小的组分先流出，极性大的后流出。正 正 相色谱法适于分析极性化合物。 相色谱法适于分析极性化合物 氰基键合相以氰乙基取代了硅胶的羟基，极 氰基键合相 性比硅胶小，选择性与硅胶相似，它主要用于 主要用于 可诱导极化的化合物和极性化合物的分析。 可诱导极化的化合物和极性化合物的分析 氨基键合相以氨基取代了硅胶中的羟基，其 氨基键合相 选择性与硅胶有很大的不同，主要用于分析糖 主要用于分析糖 类物质。 类物质
in a mixture P'AB = φAP'A + φ BP'B
fraction in mixture
In HPLC, capacity factor k' can be manipulated by changing solvent composition best resolution/time when k' = 2-5
(4)Reversed-phase HPLC most common (high polarity solvent, high polarity solutes elute first) R is C8 or C18 hydrocarbon
(4) Stationary Phase Choice Choose column with similar polarity to analyte for maximum interaction Reversed-phase column (nonpolar) R hydrocarbon Normal-phase column (polar) R cyano (C2H4CN) 氰基柱 diol (C3H6OCH2CHOHCH2OH) amino (C3H6NH2) 氨基柱 least polar most polar
三、色谱柱的再生 色谱柱在使用一段时间后柱效会下降，这 时可以考虑对色谱柱进行再生。 进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵， 我们建议：最好不使用您的高效液相色谱仪 上的泵。 建议用来冲洗的溶剂体积 色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积 125*4mm 1.6ml 30ml 250*4mm 3.2ml 60ml 250*10mm 20ml 400ml