mhc_类分子对小鼠移植瘤成瘤影响的研究_郭涛罗诗樵戴珏等

doi：10．3969/j．issn．1000-484X．2014．03．001·基础免疫学·MHCⅠ类分子对小鼠移植瘤成瘤影响的研究①郭涛罗诗樵戴珏殷永芳许继凡（重庆医科大学附属第一医院肝胆外科，重庆400016）中图分类号Ｒ392．9Ｒ730．5文献标志码A文章编号1000-484X（2014）03-0289-06［摘要］目的：研究主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex，MHC）Ⅰ类分子不同的肿瘤细胞在与其MHC分子匹配/非匹配小鼠中的移植瘤成瘤情况，探索MHC分子在肿瘤发生中的作用。

方法：1ˑ104、3ˑ104、5ˑ104个小鼠结肠癌细胞CT26（H2d）分别接种BALB/c（H2d）和C57BL/6（H2b）小鼠，每个剂量对应设置皮下组和静脉组，对C57BL/6小鼠增加5ˑ106、8ˑ106和1ˑ107数量组别；同样将1ˑ105、5ˑ105、1ˑ106个小鼠黑色素瘤细胞B16F10（H2b）分别经皮下或静脉接种到两种小鼠体内，以相同接种量和接种方式下的不同小鼠间形成对比，14d后观察各组成瘤情况。

结果：在BALB/c小鼠成瘤实验中，CT26细胞数为1ˑ104时静脉和皮下组均不成瘤，3ˑ104时静脉组部分成瘤，皮下组不成瘤；5ˑ104时两个组全部成瘤；注射1ˑ105B16F10细胞时两组均不成瘤，5ˑ105时静脉组全部成瘤，皮下组部分成瘤，1ˑ106时两组全部成瘤。

在C57BL/6小鼠实验中，皮下注射CT26细胞数＜5ˑ106时不成瘤，6ˑ106和8ˑ106部分成瘤，1ˑ107时皮下组全部成瘤，静脉组中CT26细胞达5ˑ106也无肿瘤形成，大于此数量细胞注射时小鼠会因为肺栓塞死亡；对B16F10细胞，1ˑ105时静脉和皮下组即可全部成瘤。

结论：当肿瘤细胞与小鼠MHCⅠ表型相匹配，移植瘤成瘤所需细胞数远小于MHCⅠ表型不相匹配所需细胞数，说明MHC分子对肿瘤发生存在影响，此种差异为研究MHC与肿瘤的关系提供了线索，同时也提供了CT26、B16F10细胞株成瘤实验的精确数据。

［关键词］主要组织相容性复合体；MHCⅠ分子；肿瘤免疫Study on effects of MHCⅠmolecule on transplantation tumor in miceGUO Tao，LUO Shi-Qiao，DAI Jue，YIN Yong-Fang，XU Ji-Fan．Department of Hepatobiliary Surgery，First Affili-ated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing400016，China［Abstract］Objective：To study the effects of tumor cells with different phenotype of major histocompatibility complex class I molecules（MHCⅠ）on the transplantation tumor in mice which with different MHC background．Methods：BALB/c（H2d）and C57BL/6（H2b）mice were inoculated with1ˑ104，3ˑ104，5ˑ104of CT26（H2d）tumor cells or1ˑ105，5ˑ105，1ˑ106of B16F10 cells（H2b）intravenously or subcutaneously，then evaluated the rate of tumor incidence after14days respectively．Ｒesults：There was no tumor growth both in the group of subcutaneously and intravenously after injection with1ˑ104of CT26tumor cells in BALB/c mice，then increased the number to3ˑ104，tumor showed in some of the mice in the group of intravenously，and all of mice were born tumor when given5ˑ104cells via vein or subcutaneously．On the other hand，the rate of tumor incidence was0in BALB/c mice which re-ceived1ˑ105of B16F10tumor cells subcutaneously or intravenously，some tumor nodes can be found in lung after received5ˑ105 tumor cells via vein，and increased tumor cells to1ˑ106，the rate of tumor incidence reached100%in two groups．To C57BL/6 mice，there was no tumor growth if the number of CT26cells less than5ˑ106in subcutaneous group，and6ˑ106or8ˑ106was an op-portunistic dose，the rate of tumor incidence didn’t get100%unless the cells reached to1ˑ107．However，we could not find any tumor nodes in the lung even injected5ˑ106cells via tail vein，and all the mice dead beyond this number．Then，when given1ˑ105 of B16F10tumor cells，the rate of tumor incidence reached100%in both group．Conclusion：There is a great difference between dif-ferent mice which are injected with tumor cells under MHC molecular match/mis-match phenotype，these results show the potential re-lationship between MHC molecular and tumor，as well as provide others accurate data of transplantation tumor research on CT26or B16F10tumor cells．［Key words］Major histocompatibility complex；MHCⅠmolecule；Tumor immunity①本文受国家自然科学基金（H1006/30972789）及重庆市自然科学基金（cstc2013jcjyA10105）资助。

作者简介：郭涛（1987年－），男，医师，主要从事移植免疫和肿瘤免疫方面的研究，E-mail：ynguotao@126．com。

通讯作者及指导教师：罗诗樵（1972年－），男，博士，副教授，主要从事移植免疫和肿瘤免疫研究，E-mail：luoshiqiao@hotmail．com。

肿瘤免疫涉及免疫系统与肿瘤发生、发展及转移。

针对肿瘤免疫的研究热点主要包括肿瘤细胞的异质性、转移肿瘤细胞的内在免疫原性以及宿主对肿瘤细胞识别和杀灭［1，2］。

肿瘤免疫的理论基础是免疫监视学说（Immune surveillance theory），该学说认为机体免疫系统可以发挥监视作用，识别“非己”突变细胞，并通过细胞免疫机制特异性清除，以保持机体内环境稳定，当突变细胞通过低表达某些分子或遮盖抗原等逃脱机体免疫监视时，即发生肿瘤免疫逃逸（Tumor immune escape），最终形成肿瘤［3，4］。

近年来研究表明导致肿瘤细胞逃逸的因素主要包括肿瘤抗原免疫原性较弱、抗原识别过程中MHCⅠ分子缺失、抗原递呈过程中共刺激信号缺失以及肿瘤细胞分泌免疫抑制因子等，其中肿瘤细胞在细胞毒性T淋巴细胞（Cytotoxitic T lymphocyte，CTL）免疫应答过程中MHCⅠ表达下调或缺失是导致肿瘤逃逸最重要的原因［5，6］。

已有研究证实肿瘤细胞低水平表达MHCⅠ与肿瘤分期、分化程度、临床预后呈负相关；其他研究则从分子水平阐明了MHCⅠ缺失的原因［7］。

这些研究取得了一定成果，但将这些成果转化到临床治疗中却遇到了极大困难［8］，特别是随着调节性T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞、肿瘤相关巨噬细胞等细胞研究的不断深入［9-11］，肿瘤免疫机制也变得更为复杂，各群免疫细胞终究扮演什么角色还有待探索。

因此，为了更加精确地研究这些免疫细胞，在动物实验中我们需要考虑动物模型的精确度，不同免疫细胞功能的强弱在不同MHCⅠ表型肿瘤模型中是否存在差异？在研究过继输注细胞治疗中，输入细胞与宿主间MHCⅠ匹配与否是否会影响实验结果？免疫系统对MHCⅠ匹配/非匹配肿瘤细胞监视清除作用有何差异？不同数量、不同MHCⅠ表型肿瘤细胞与机体作用时免疫系统间是否存在一种量效关系？这些问题都还有待探索。

基于以上这些疑问，我们将不同数量MHCⅠ表型不同的两种肿瘤细胞小鼠结肠癌细胞CT26（H2d）和小鼠黑色素瘤细胞B16F10（H2b）分别通过静脉和皮下接种到MHCⅠ不同的两种小鼠（BALB/c（H2d）小鼠和C57BL/6（H2b）小鼠体内［13］，观察各组成瘤情况［12］，探索MHCⅠ分子对小鼠移植瘤成瘤影响。

1材料与方法1．1实验动物BALB/c小鼠（H2d，6 8周龄，雄性）和C57BL/6小鼠（H2b，6 8周龄，雄性）购自重庆医科大学实验动物中心，饲养于重庆医科大学附属第一医院SPF级动物实验室。

1．2肿瘤细胞培养小鼠结肠癌细胞株（CT-26）和小鼠黑色素瘤细胞株（BF-10）用含10%胎牛血清（Gibco公司）的DMEM：F12（Hyclone公司）培养基培养，内含1000U/ml青霉素、100ng/ml链霉素和10mmol/L HEPPS，于37ħ、5%CO2孵箱内培养，取对数期细胞进行实验。