血虚证小鼠模型的制作及评价
小鼠血虚证造模方法的比较及四物汤的反证
小鼠血虚证造模方法的比较及四物汤的反证分子生物实验研究部分2002207122 岑川第四组摘要:目的:观察和比较乙酰苯肼和环磷酰胺两种不同造小鼠血虚模型方法的差异性和检查同一基因在不同动物模型中的表达差异以及四物汤治疗的效果。
实验方法:通过正常组、乙酰苯肼组、环磷酰胺组、四物汤组这四组组织切片的观察比较来评价血虚造模方法,及通过RT-PCR法来检测肝组织同一基因的表达差异。
结果:环磷酰胺和乙酰苯肼均有造血虚的作用,四物汤促进血虚证小鼠肝组织基因的表达可能是其生血作用的机制之一。
关键词:血虚环磷酰胺乙酰苯肼四物汤RT-PCR法基因表达近年来,随着对血虚证研究的不断深入,对血虚证动物模型的研究也有新的进展。
尽管动物模型在当前还不能准确反映人体血虚证的全部实质,但作为替代实验对象,已在血虚证发病机制探讨及中药治疗研究等方面发挥了重要作用。
乙酰苯肼和环磷酰胺造模都是血虚造模常用的发法,但由于机制不同,所以有各自不同的特点。
一实验器材和实验方法75%乙醇、氯仿、异丙醇、Trizol、RNAsin(40U/u)、DNTP(10mM)、EB(2mg/ml)、5*TBE、琼脂糖、上下游引物、随机引物(100ug/ul)、20,200,1000u移液枪、电动匀浆机及匀浆管、冷冻式离心机、离心管、电泳仪、PCR仪、剪、镊等正常小鼠组、环磷酰胺造模小鼠组、乙酰苯肼造模小鼠组、四物汤治疗小鼠组各十只煎药:四物汤(生地. 白芍. 当归. 川芎各3g) ,共煎成药汁130ml灌胃给药:治疗组小鼠每天给药四物汤一次,共七天。
前两天每次每只小鼠给药1ml,后五天每次每只小鼠给药0.5ml,其余3组小鼠后四天每只加灌0.5ml生理盐水。
RNA 提取1.取各组实验组任一只小鼠肝组织50-100mg,剪碎,加入1mlTorizol液,快速电动匀浆2.22度,静置5min3.加入氯仿0.2ml,颠倒15s4.22度,静置3min5.离心:4度,15000转/分* 15min6.取上清液0.5ml( 含提取的RNA)7.加入适量异丙醇,混匀8.22度,静置10min9.离心:4度,15000转/分* 10min10.弃上清液11.加入1ml4度75%乙醇(提纯RNA,释放异丙醇)12.离心:4度,10000转/分*5min13.弃上清液,真空干燥5min14.用25ul水溶解,-70度保存反转录5*buffer 4μlDNTP(10mM) 2μl随机引物(100ug/μl) 1μlDTT(100mM) 1μlRNAsin(40U/μl) 1μl总RNA(2ug)水 至18μl65度,5分钟,冰上,加RNAsin1μl,M-MLV1μl。
小鼠脾虚血瘀动物模型的建立
小鼠脾虚血瘀动物模型的建立摘要目的:建立小鼠血瘀证模型。
方法:雌性C57BL/6J小鼠100只,随机分为2组,正常对照组以生理盐水、模型组以利血平注射液股四头肌注射,每天1次,连续14天。
所有动物于第15天摘眼球取血,检测血液流变学各项指标。
结果:模型组的全血高切粘度、低切粘度、血浆粘度等均比对照组明显增高,P<0.01,P<0.05。
结论:采用利血平可以塑造小鼠脾虚血瘀动物模型。
关键词血瘀证动物模型实验研究血瘀证是临床上最常见的证候之一,血瘀证及活血化瘀法是近代中西医结合研究中最活跃的领域之一。
近几十年来,该领域取得了丰硕的成果,其中作为实验研究中重要工具的血瘀证动物模型的研制也取得很大的进展,迄今已研制的血瘀证动物模型达几十种,但小鼠的血瘀证动物模型的报道极少。
本实验对文献报道的大鼠脾虚血瘀模型进行了改良,用利血平塑造小鼠脾虚血瘀模型,现报道该模型的建立及其血液流变学各项指标的变化如下。
1 材料和方法1.1 实验动物及分组:雌性C57BL/6J小鼠,100只,6~8周龄,体重20±2g,由复旦大学实验中心提供,随机分为正常对照组和模型组各50只。
1.2 造模方法:模型组:动物以每天利血平注射液(上海医科大学红旗制药厂产品,规格:1mg/ml,批号:030101)0.1mg/kg体重,股四头肌注射,连续14天。
正常对照组:动物以每天生理盐水0.1mg/kg体重,股四头肌注射,连续14天。
1.3 采血:动物于第15天停止造模,摘眼球取血,置于试管中(每管取5只老鼠的血液约为5ml。
每组各10管),肝素抗凝(10U/ml血)。
2小时内检测。
1.4 仪器:LBY-N6型锥板血粘度仪:北京普利生集团研制生产:XCY-ⅢC 电脑动态血沉压积测试仪:天津市双达科技实业有限公司生产。
1.5 数据处理:数据统计采用SPSS10.0软件完成,均数以样本均数±标准差表示,两组样本均数比较用t检验。
两种血虚小鼠造模方法类比
两种血虚小鼠造模方法类比陈玲玲2002207209[摘要]:目的:本实验通过比较乙酰苯肼,环磷酰胺两种血虚小鼠造模方法,来进一步选取合适的血虚证造模方法,同时评价四物汤的疗效。
方法:采用环磷酰胺250 mg/kg腹腔注射;乙酰苯肼350 mg/kg皮下注射;乙酰苯肼350 mg/kg皮下注射+四物汤治疗;结果:乙酰苯肼可以造成明显的血虚模型,四物汤是否是治疗血虚证的特效方剂有待进一步研究。
[关键词]:血虚证,造模,四物汤血虚证是中医常见证,血虚模型是应用较广的中医动物模型,但目前制造模型的方法不一。
1实验材料与方法1.1实验动物:昆明种小鼠,雄性,40只。
1.2药物或试剂乙酰苯肼(APH,为白色粉末状固体,用时配制成2%溶液)、环磷酰胺粉针剂:200mg×10支×1盒(用时配成10mg/ml溶液)、无水乙醇500ml×1瓶、0.9%氯化钠溶液500ml×1瓶或250ml×1瓶。
1.3仪器或设备电子天平1台,50ml/100ml柱形小烧杯各2个,50ml/100ml量筒各1个,10ml刻度吸管2个,吸球2个,1ml、5ml一次性注射器数支,玻璃棒1根,标签纸,锡箔纸,小鼠灌胃针2支。
1.4实验方法1.41动物分组随机分为正常对照组A、乙酰苯肼模型对照组B、环磷酰胺模型对照组C、乙酰苯肼治疗对照组D等4组,每组10只。
分笼饲养于内铺垫料的塑料笼。
1.42 造模及给药方法组别造模及给药灌胃给药A 腹腔注射同C组造模药物等量的生理盐水,第1、2日各1次。
皮下注射同B组造模药物等量的生理盐水,第1、4日各1次。
第1-4日予同D组等量自来水。
B 皮下注射2%乙酰苯肼溶液,1.7mg/10g/只,第1、4日各1次(3,4,5,6)。
腹腔注射同C组造模药物等量的生理盐水,第1、2日各1次。
同上C 腹腔注射10mg/ml环磷酰胺注射液,1mg/10g/只,第1、2日各1次。
血虚证动物模型造模方法与评析
·73·
专题综述
血虚证动物模型造模方法与评析
许 敏 方肇勤
上海中医药大学基础医学院 (上海 201203)
【摘 要】 综述和评析 20 余年来血虚证动物模型造模方法。期间该模型的研发工作在持续发展,涉及到 多手段、多技术。目前研究和发展趋势比较集中的是化学药物造模、γ射线造模,各造模方法比较集中的问 题主要是各造模剂量、时间,以及造模后持续时间尚未确定,同时对血虚证模型的认识亦在不断深入。
1 血虚证动物模型的造模方法
在检索到的 52 篇有关动物血虚证模型的文献,其 中有具体造模报道的文献 47 篇。从年度发表论文数量 统计看,近年来关于血虚证动物模型的研究逐年增多, 发表相关文献数量在 2001 年出现了一个小高潮。(图1)
15
10
5
文献篇数
0
1981 1989 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003
3失血限食劳倦造模法4142造模时间为1518d14免疫介导造模法应用原理是于balbc小鼠经亚致死量照射后机体的免疫功能严重受损再输入同基因h2但mhs抗原不同的dba2小鼠的胸腺淋巴结混合细胞这些免疫活性细胞得以在宿主体内生存并通过某种未明的机制使宿主体内出现造血抑制细跑和血浆gfugm抑制活性从而导致造血干细胞数量明显减少并出现缺陷使自身复制的速率低于分化率最终引起全血细胞减少43有关方法学与实验指标评析血虚证动物造模方法自20世纪70年代始一直在发展和应用上海中医研究所失血结合限食首次制作出血虚小鼠模型45后至今相继出现了化学药物造模60co射线造模营养性饥饿法31劳倦法3132以及上述方法的复合造模
血虚动物造模方法及四物汤的补血作用研究
血虚动物造模方法及四物汤的补血作用研究胡怡芳[摘要]:对近二十年来的血虚动物模型制作方法进行概述,主要集中在60Coγ射线造模法,化学药物造模,放血法,免疫介导法及复合造模法,各种方法均有优缺点,很难找出一种最有效的方法,只能根据研究的需要选择最合适的方法,应不断改进和研究,以找到最接近临床的造模方法。
四物汤是临床最常用的补血方,具补血调血功能,近年来,国内外很多学者应用现代科学方法对去进行了多方面的研究。
[关键词]:血虚证,造模法,动物模型,四物汤[引言]:随着科学技术的日益发展,实验动物学已经成为现代科学的重要组成部分,每一项重大科研成果的取得都与实验动物的应用密不可分。
同时中医药的研究也在不断发展,用现代科学方法研究中医基础理论的方法越来越受到重视,除了从临床对人体的直接研究,实验动物的应用也越来越广泛,中医证候模型建立的研究也越来越趋于成熟,现就中医血虚动物造模方法及四物汤的补血效果概述如下:[正文]:一.血虚动物造模方法:1.60Coγ射线造模法通过60Coγ射线照射动物全身,使动物造血干细胞减少,白细胞数量下降和骨髓损伤。
多选用C57BL/6J和昆明种小鼠,多为雌性,体重多在18~22g,多为全身一次性照射,距离为4m,剂量为3.5Gy,剂量率在1.27~1.701之间,时间160s左右。
[1-5] 刘永学等[6]对经不同剂量(2.5、5.5、7.5Gy)γ射线照射后,小鼠出现不同程度的血虚症作了研究,照后各剂量组小鼠的骨髓和脾脏细胞均出现了典型的凋亡变化,细胞凋亡越明显,小鼠血虚症越严重,但造血细胞凋亡出现的时间与血虚症的程度无关,无论照射剂量大小,调亡都发生在血虚症出现的早期。
2.化学药物造模2.1乙酰苯肼(APH):APH为强氧化剂,较专一的对红血球有缓慢的进行性氧化损伤作用,尤其是干扰了红血球内的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,促进血红蛋白变形而形成海氏小体,使红血球易于崩解,最终造成机体的溶血性贫血。
小鼠气血双虚模型的复制
果: 与空 白对照 组 小 鼠 比较 , 型 组 小 鼠外 周血 象 显著 降 低 , 腺 脾脏 均 发 生严 重萎 缩 、 模 胸 皮质 明显 变薄 、 小 结 明显 脾 缩小 、 巴细 胞数 明显减 少 , 淋 当归补 血 口服 液可 明显对 抗上 述 变化 。 论 : 血法 和 环磷 酰胺 并 用法 可成 功 复制 出气 结 失
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F ANG Xi o y n ,C a — a l HENG i x n MI i g s n Za — t , A 0 M n - a
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一种气虚血瘀证病证结合动物模型的制作方法及其评价方法[发明专利]
(10)申请公布号 CN 101707989 A(43)申请公布日 2010.05.19C N 101707989 A*CN101707989A*(21)申请号 200910236282.4(22)申请日 2009.10.23A01K 67/027(2006.01)A01K 67/02(2006.01)A61M 31/00(2006.01)(71)申请人北京中医药大学东方医院地址100078 北京市丰台区方庄芳星园一区六号(72)发明人张允岭 娄金丽 扈新刚 柳洪胜张锦 李秀 金香兰 张志辰高铭坚 宋莹(74)专利代理机构北京君尚知识产权代理事务所(普通合伙) 11200代理人余功勋(54)发明名称一种气虚血瘀证病证结合动物模型的制作方法及其评价方法(57)摘要本发明提供了一种气虚血瘀证动物模型的制作方法。
具体是通过力竭运动和/或控制基础进食量和/或给服大剂量心得安制备气虚证动物模型;对气虚证动物模型阻塞大脑中动脉后恢复其血流供应,建立脑缺血气虚血瘀症病症结合模型。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 2 页 说明书 13 页 附图 4 页1.一种气虚血瘀证病证结合动物模型的制作方法,其特征在于:步骤1:通过力竭运动和/或控制基础进食量和/或给服大剂量心得安制备气虚证动物模型;步骤2:对步骤1气虚证动物模型阻塞大脑中动脉0.5h~4h后恢复其血流供应2h~20h,建立脑缺血气虚血瘀证病证结合模型。
2.根据权利要求2所述动物模型的制作方法,其特征在于:步骤1中选用雄性大鼠通过负重力竭性游泳制备气虚证动物模型;步骤2中对步骤1气虚证动物模型用线栓法阻塞大脑中动脉后恢复其血流供应,建立脑缺血气虚血瘀证病证结合模型。
3.根据权利要求1~2中任一所述动物模型的制作方法,其特征在于:步骤1:采用150-250g SD或Wistar雄性大鼠每天负体重的2-10%的重量进行力竭性游泳1-2次,每次5-20min,共游泳1-4周制备气虚证动物模型;步骤2:对步骤1气虚证动物模型阻塞大脑中动脉0.5h-4h后恢复其血流供应2h~20h,建立脑缺血气虚血瘀证病证结合模型。
小鼠血虚证造模及四物汤治疗的血清白蛋白含量检测
小鼠血虚证造模及四物汤治疗的血清白蛋白含量检测黄玮摘要:目的:观察分别用乙酰苯肼、环磷酰胺造模小鼠血清白蛋白(ALB)含量的变化,以及四物汤治疗乙酰苯肼造模小鼠血清白蛋白含量的改变,并间接评估血清白蛋白作为血虚证小鼠指标的特异性。
方法:溴甲酚绿法(BCG)。
结果:只有乙酰苯肼造模使小鼠血清白蛋白增高(P<0.05),环磷酰胺虽然使小鼠血清白蛋白含量降低但无显著差异,四物汤的治疗作用也不显著。
结论:血清白蛋白在乙酰苯肼、环磷酰胺造模小鼠中的变化趋势不一致,因此单纯以血清白蛋白作为血虚小鼠衡量指标的不合理;四物汤为补血名方,但对乙酰苯肼造成小鼠血虚模型的治疗效果不明显。
关键词:血清白蛋白、血虚证造模、环磷酰胺、乙酰苯肼、小鼠1、引言:血虚证是祖国医学的常见证型之一,成因繁多,临床症状复杂,要深入地研究血虚证并加强其临床治疗效果,有懒于良好的血虚证动物模型的建立。
目前,血虚证动物模型(1、5)的建立方法很多,但存在缺乏统一的衡量指标(3、4),血虚的状态不稳定等缺点。
本实验是采用了目前较简便的两种血虚证造模方法:乙酰苯肼、环磷酰胺,进行小鼠造模,结合小鼠四诊(2)、血图片、骨髓图片、组织切片等,观察其造模后的血虚表现,以判断是否可纳入。
同时,用补血名方四物汤治疗模型组,反证。
以检验、比较两种血虚证造模方法是否成熟。
并且,测定各组小鼠血清白蛋白含量,观察是否有关联的特异性改变,以期找到比较合理、可靠的生化指标,为判断造模是否成功提供可定量的标准。
2、材料与方法:2.1试剂与药物:乙酰苯肼;环磷酰胺粉针剂;白蛋白试剂(溴甲酚绿、柠檬酸、柠檬酸二钠、Brij-35)、蛋白标准液42.0g/L,由上海申索试剂有限公司);双蒸水(实验室自备);中药(生地、芍药、当归、川芎各3g,煎汤130ml)2.2器材:台式离心机, 型号TDL80-2B(上海安亭科学仪器制造厂);722分光光度仪计(上海精密科学仪器有限公司); 2ml比色皿4个;震荡器;移液枪20ul、1000ul各一把,镊子3把,试管、试管架、枪头、卷纸若干2.3动物:实验昆明种小鼠,普通级,雄性,40只2.4方法:分组:将40只实验小鼠分为,正常组、环磷酰胺组、乙酰苯肼组、四物汤组4组,每组随机10只小鼠。
血虚证小鼠造模及四物汤治疗实验
血虚证小鼠造模及四物汤治疗实验——中药制备及分子生物学指标检测程韵 2002207120 02中基摘要:本次实验是要比较乙酰苯肼和环磷酰胺制造的小鼠血虚证模型的效果,并且用四物汤治疗乙酰苯肼造模组,来证明四物汤疗效并反证乙酰苯肼造血虚效果。
本组实验以RT-PCR 方法检验小鼠肝细胞白蛋白和葡萄糖醛酸酶基因表达的改变;并观察肝、胃、小肠组织切片的病理改变。
小鼠肝细胞白蛋白组电泳结果亮度显示:四物汤治疗组>乙酰苯肼造模组>环磷酰胺造模组>正常对照组,葡萄糖醛酸酶组电泳结果亮度显示除正常组稍亮外其他各组均不明显。
四物汤对乙酰苯肼造模组小鼠的基因表达有部分影响。
组织切片观察除了肝组织在四物汤治疗组水肿有一定程度减轻,其它组织无明显变化。
关键词:血虚证模型乙酰苯肼环磷酰胺四物汤 RT-PCR引言:血虚证是中医的基础病证,主要表现为营血亏损。
而血虚证动物模型是阐明血虚证的本质和病理生理,以及中药治疗血虚证的机理的不可缺少的途径。
血虚证动物模型的造模方法有60 Co γ射线造模法、化学药物造模法、病因造模法和免疫介导造模法,其中化学药物造模法可选用乙酰苯肼或环磷酰胺来造模。
此次实验选取乙酰苯肼和环磷酰胺进行造模,并对乙酰苯肼造模组进行四物汤治疗,观察各组小鼠的病理,生理,生化和分子生物学指标,比较两种造模方法的效果。
本组在此次实验中的任务主要是中药制备及以RT-PCR方法检验小鼠肝细胞白蛋白和葡萄糖醛酸酶基因表达的改变情况。
一.材料与方法:(一)动物及处理:实验选用昆明种雄性小鼠40只(平均体重约25g)。
随机分成四组:正常组、乙酰苯肼组、环磷酰胺组和四物汤组。
每组10只,分笼饲养于内铺垫料的塑料笼,每组1笼。
每天自食足量普通颗粒饲料。
(二)中药制备及给药:生地、白芍、当归、川芎各20g(上海中医药大学综合实验室采购),冷水浸半小时,煎取药汁后按照所需药物浓度比例浓缩为670ml。
取100ml药物放置于动物房冷藏,每日灌胃给药。
中医虚证动物模型的建立和评价
中医虚证动物模型的建立和评价乔天阳;王阿美;刘文兰【期刊名称】《浙江中医药大学学报》【年(卷),期】2017(041)011【摘要】[目的]总结中医虚证动物模型现阶段的研究进展,为进一步的中医动物模型的建立提供思路和借鉴.[方法]从模拟中医病因的动物模型、西医病因病理的动物模型、病证结合动物模型三种造模方法角度,讨论气虚、血虚、阴虚、阳虚四种中医虚证的动物模型.[结果]经过多年来学者们的积极探索,中医虚证动物模型有了巨大进展,研究者用不同的方法制备了符合中医证候特点的动物模型.中医传统病因的造模方法具有模拟中医传统发病原因,贴近中医病因现实的优势,但模型具有不稳定性的缺点.西医病因病理的动物模型具有稳定性、实用性和可重复性强的优势,但存在与中医传统理论脱节的缺点.病证结合动物模型是现阶段比较理想的动物模型.[结论]要进一步在中医理论的指导下,借助现代化科学技术建立更统一、更科学的造模方法和评价体系,为中医药科学研究提供更坚实的基础.%[Objective]To summarize the advances in research on animal model of deficiency syndrome of traditional Chinese medicine(TCM) of the present stage, to provide the ideas for the establishment of animal model of TCM. [Methods] The article discusses the animal model with Qi deficiency, blood deficiency, Yin deficiency, Yang deficiency syndrome from the TCM etiology, western medicine etiology and pathology, model of western disease combined with syndrome. [Results] After active exploration of scholars over the years, TCM deficiency syndrome animal model has made great progress,researchers have made many TCM syndrome animal models using different methods, which have the characteristics of TCM syndrome. The molding method of traditional etiology of TCM has the advantages of conforming to the TCM etiology, but has the disadvantages of instability. Animal model made by western medicine etiology and pathology has the advantages of stability, practicality and repeatability, but has the disadvantages of disjointing with TCM theory. Animal models combined with disease and syndrome are ideal animal models at the moment. [Conclusion] Under the guidance of Chinese medicine theory, creating a more unified, more scientific method and evaluation system by means of modern science and technology and providing a more solid foundation for the scientific research of traditional Chinese medicine are very important.【总页数】6页(P923-927,940)【作者】乔天阳;王阿美;刘文兰【作者单位】首都医科大学中医药学院北京 100069;首都医科大学中医药学院北京 100069;首都医科大学中医药学院北京 100069【正文语种】中文【中图分类】R331【相关文献】1.2型糖尿病肾病气阴两虚型动物模型的建立及评价 [J], 胡爱民;晏玲;张利芳;赵静;张显林;万巧巧2.气阴两虚型肺癌动物模型的建立和评价 [J], 吴海良;田静3.基于中医临床诊疗模式构建气阴两虚证动物模型的构想与初步探索 [J], 柴程芝;寇俊萍;王文萍;朱丹妮;严永清;余伯阳4.阴虚证、水肿证、阴虚水肿证中医动物模型的造模方法及评价 [J], 徐文峰;范元硕;何泽云;唐群;彭亚军;李旭华5.2型糖尿病气阴两虚病证结合动物模型的制备及评价指标的建立 [J], 张译心;王鑫;刘博;纪凤兰;温富春;丁涛;徐惠波因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
血淤证动物模型建立与评价研究进展
是 根 据 中 医血 淤 证 的 病 因 造 模 ; 二 是 基 于 西 医学
的病理 生理 改变 而建立 的模 型 ; 三是 基于 明确疾 病 , 同时又 有血 淤证 证候 的病 证 结合 模 型 ; 四是 证 候表 征 动 物 模 型 。根 据 干 预 因 素 的 多 少 又 分 为 单 因 素 造 模 、 多 因素造 模 。 1 . 1 中 医 病 因造 模 自上 世 纪 6 0年 代 起 , 中 医证
1 2 8 6 r _ 1 J Me d T h e or &P r oc V o 1 . 2 7 , No . 1 0 , Ma y 2 0 1 4
2 0 1 4 年第 2 7 卷第 1 0 期 隧 咎 理 论 与 致 残
血淤证 动物模型建立与评价研究进展
胡 聃 洪 芳 何 建 成
,
其 动物模 型 的研制一 直是 中医实验 研究 的热 点 ,
并 取 得 了一 定 的 成 果 。 现 将 近 年 来 的 研 究 成 果 总 结
综 述如 下 。
1 血 淤 证 动 物 模 型 的 造 模 方 法 目前 血 淤 证 动 物 模 型 的 造 模 方 法 主 要 有 四种 :
ห้องสมุดไป่ตู้
肌 梗 死 或 脑 梗 死 作 为 局 部 血 液 循 环 的血 淤 模 型 。 王 洪 复等 [ 2 o ] 采用直 流 电刺 激 仪 , 刺 激 左 冠 状 动 脉 前 降
支 形 成 血 栓 或 行 冠 状 动 脉 结 扎 阻 断 局 部 血 流 。 由 于 局 部 血 流受 阻 , 组 织缺 氧 , 引起微 小 血 管 收缩 , 同 时 内皮 细 胞 受 损 伤 并 被 激 活 , 释放 出相应 的炎性 因子 , 从 而激 活 凝 血 系 统 和 血 小 板 等 , 引起 血 淤 性 病 理 变i - l s 。 1 . 3 病 证 结 合 模 型 近 年 来 的 研 究 认 为 复 制 病 证 结 合 动 物 模 型 有 望 成 为 中 医 证 候 动 物 模 型 研 究 的一
血虚证实验动物造模及其证候的检测与评价
血虚证实验动物造模及其证候的检测与评价血虚证是以体表肌肤黏膜组织颜色淡白且全身虚弱为主要表现的一种证型。
基于中医学中气血乃人体的基本物质基础,近年来,国内科研工作者将中医学理论与现代医学实验方法相结合研究血虚证的实验动物模型,成效颇丰。
本文通过检索中国知识资源总库(CNKI)数据库,撷取近10年来血虚证动物模型构造、检测及评价标准相关文献,以造模原理为分类标准,从中医传统病因、西医病因病理、综合法3个方面总结回顾现今血虚证实验动物主要造模方法及评定指标,并结合比较结果展望其未来的发展趋势。
标签:血虚证;实验动物;检测指标;评价标准;综述血虚证实验动物模型是模拟复制血虚证特征而创造出的符合人类血虚证原型,即表现以体表肌肤黏膜组织颜色淡白且全身虚弱为主的人工证型的实验动物。
该模型常被用于补血方剂或药物疗效的研究。
笔者通过分析近10年有关血虚证实验的文献,总结造模的不同方法、检测指标及评价标准,为相关研究提供参考。
1 血虚证实验动物造模方法及评估血虚证实验动物模型一般根据研究目的而选用不同品系的大鼠、小鼠、家兔、鸡等。
其造模方法主要包括失血法、溶血法、辐射损伤法、营养法(类似现代医学缺铁性贫血模型)、化学损伤法和综合造模法。
笔者分别以“方法名+血虚模型”为主题词查找中国知识资源总库(CNKI)数据库近10年文献,包括失血法致血虚模型37篇、溶血法致血虚模型13篇、辐射损伤法致血虚模型30篇、营养法致血虚模型(缺铁1.1 依据中医传统病因建立动物模型一般而言,中医血虚证病因为失血过多;或脾胃虚弱,血液生化乏源;或瘀血阻滞新血不生等[1]。
依据中医传统病因,采用失血法直接造成血容量减少,或营养法人工造成造血物质的缺乏,使血液化生减少等单因素造模方法或多种方法联用的综合失血法,现已运用于多类学术研究。
1.1.1 失血性血虚证模型史氏等[2]研究失血性血虚模型造模方法总结出急性和慢性2种类型。
急性失血性血虚模型采用一次性大量放血法;慢性失血性血虚模型采用综合放血法,即联合隔日放血、游泳及饥饿法和单纯放血法。
血虚证两种造模方法的比较及中药疗效评价
血虚证两种造模方法的比较及中药疗效评价卢文丽方肇勤2007-01-17一、实验目的1. 比较血虚证两种不同造模方法的优劣。
2. 评价中药复方的疗效。
二、实验材料1.实验动物:昆明种小鼠,雄性,40只。
2.药物或试剂乙酰苯肼(APH,为白色粉末状固体,用时配制成2%溶液)、环磷酰胺粉针剂:200mg×10支×1盒(用时配成10mg/ml溶液)、无水乙醇500ml×1瓶、0.9%氯化钠溶液500ml×1瓶或250ml×1瓶。
3.仪器或设备电子天平1台,100ml柱形小烧杯2个,50ml/100ml量筒各1个,10ml刻度吸管2个,洗耳球1个,玻璃棒2根,60ml小口试剂瓶2个,标签纸1张,酒精棉球,1ml一次性注射器数支,小鼠灌胃针2支。
以上为动物造模及药物配制用材料,余具体见各实验指导。
三、实验步骤1.动物分组随机分为正常组A、环磷酰胺模型组B、乙酰苯肼模型组C、乙酰苯肼治疗组D等4组,每组10只。
分笼饲养于内铺垫料的塑料笼内,每笼等量。
2.2%乙酰苯肼溶液的配制(1)电子天平取乙酰苯肼粉末1g,并将其小心倒入100ml小烧杯内;(2)玻璃滴定管吸取10ml无水乙醇,注入烧杯内,玻璃棒搅拌;(3)待粉末几乎溶解完全后,50ml量筒量取30ml生理盐水倒入烧杯内,搅拌。
若仍有粉末未溶解,置于37℃水浴箱内一段时间即可。
(4)将完全溶解后的溶液倒入50ml量筒内,添加生理盐水定容至50ml。
将溶液倒入50ml小口试剂瓶内,贴好标签,常温下保存。
3.药物及剂量采用四物汤治疗:当归10g,川芎10g,白芍10g,熟地黄10g。
给药剂量按照成人体重(60kg)的10倍计算。
药物煎煮浓度为0.4g/ml,约灌胃0.5ml/只。
4. 造模及给药方法组别造模灌胃给药A 腹腔注射同C组造模药物等量的生理盐水,第1、2日各1次。
皮下注射同B组造模药物等量的生理盐水,第1、4日各1次。
简析一种血虚证小鼠模型的制备方法及评价
简析一种血虚证小鼠模型的制备方法及评价下文为大家整理带来的简析一种血虚证小鼠模型的制备方法及评价,希望内容对您有帮助,感谢您得阅读。
血虚是体内阴血亏损的病理现象,可由失血过多,或久病阴血虚耗,或脾胃功能失常,水谷精微不能化生血液等所致。
李东垣在《脾胃论饮食劳倦所伤始为热中论》云:有所劳倦,行气衰少,谷气不盛,上焦不行,下脘不通,胃气热,热气熏胸中,故曰内热,又云:惟当以辛甘温之剂,补其中而升其阳。
通过血虚证中医学的定义和古籍文献的描述可知,血虚多由失血、劳倦、饮食不足等原因所致。
本文通过负重游泳劳倦、眼眶放血、控制饮食的综合造模法,制备新的血虚证小鼠模型,以期为临床验证补血方药提供借鉴和帮助。
1材料1.1动物昆明种健康小鼠(MusMusculus)50只,雌雄各半,体重在18~22g,由山东中医药大学实验动物中心提供。
1.2仪器全自动血球计数仪(型号:F-820),日本岛津有限公司;精密电子天平(型号:FA1004),上海恒平科学仪器有限公司。
2方法2.1实验条件实验室与饲养室均由山东中医药大学中医综合实验室提供,室温20~25℃,湿度45%~55%,通风及光照条件良好,颗粒饲料由山东中医药大学实验动物中心提供,每日更换饮水瓶内饮水和垫料。
2.2造模方法综合造模方法[2-3]包括负重游泳劳倦、眼眶放血、控制饮食,造模时间共持续2周(14d)。
负重游泳劳倦具体方法是指:每天上午10:00和16:00进行负重游泳,负重重量为体重的10%。
强迫小鼠在温水池中游泳2次,每次游泳时间不限定,以小鼠整体下沉于水面6s为限,持续2周(14d)。
温水池水温控制在19℃,水深控制在20cm。
眼眶放血[4]具体方法是指:用左手固定小鼠,轻轻对颈部施加压力,使头部静脉淤血后,在突出的眼球旁找出后眼眶静脉,然后将少量10%可卡因滴入小鼠眼睛内,使眼部局部麻醉;右手持消毒的毛细吸管自内侧眼角平行鼻侧眼眶向喉头方向轻压,刺破后眼眶静脉丛,血液自然吸入管内,放血6~8滴(约0.5mL),放血后拔出毛细吸管,给予小鼠头部冷水刺激,血液自然停止。
血虚证小鼠模型的制作及评价
以动物复制各种人类疾病模型 , 进行关于疾病 学、发病学及预后的研究 , 是促进医学研究发展的 必不可少的手段。当前, 发展中医学的重要一面在 于建立以实验学为前导的基础理论研究。近年来 , 关于血虚证动物模型的制作有了很大的发展 , 研究 人员采取急慢性放血、注射化学药物以及射线照射 等方法[ 5~ 11] 模拟出血虚证动物模型 , 分别 从免疫 学、红细胞膜酶、红细胞变形性、微循环、微量元 素、血细胞化学、组织化学及血液生化等方面, 对 它们进行了广泛的研究。 血虚证主要是由于脾胃生化不足以及急慢性失 血所致 , 其病理变化及临床表现 , 正如 灵枢 决 气篇 说: 血脱者, 色白夭然不泽, 其脉空虚 , 此其候也 , 以及 金匮要略 脏腑经络先后病脉证 篇 所言 : 色白者, 亡血也 等。因此我们采用 慢性放血使其 有形之血 不能速生 , 配合饥饿、 疲劳之法伤其中焦脾胃, 使血液生化不足而制作出 复合血虚证小鼠模型。 笔者认为, 中医的血虚证包括西医多种疾病 , 其中有各种因素所引起的贫血 , 而这些因素包括失 血、寄生虫病、病后或体质素亏、营养不良 , 以及 某些药物和化学、物理因子等 , 它扩大了传统血虚 证的病因范围。关于血液的生成, 中医认为 血者 水谷之精也, 生化于脾 , 中焦受气取汁变化而赤 是谓血 , 以及 肾主骨、生髓、藏精 , 精血同 源 等, 说明血液的生成与脾肾关系最为密切。现
15胸腺脾脏相关指标检测小鼠处死后先用电子秤称出每只小鼠的体重然后剖开暴露胸腺及脾脏小心完整地取出二脏器洗去血污去除系膜及脂肪用扭力天平称出每个胸腺脾脏的重量然后算出相应指数如脾指数脾重体重胸腺指数胸腺重俸统计数据均以均数标准差xs表示t检验
2001 年第 23 卷第 9 期
湖北中医杂志
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论
血虚证实验报告结果分析
一、实验背景血虚证是中医学中常见的一种证候,表现为面色苍白、唇色淡白、头晕目眩、心悸失眠、手足发麻、月经量少色淡等症状。
血虚证的病机主要是血液亏虚,脏腑百脉失养。
为探究血虚证的病理生理机制,本实验通过动物模型模拟血虚证,观察其临床表现和生化指标变化,分析血虚证的病理生理特点。
二、实验方法1. 实验动物:选取体重、年龄相近的SD大鼠60只,随机分为对照组、血虚模型组、中药治疗组,每组20只。
2. 模型制备:采用放血法模拟血虚证。
血虚模型组大鼠采用放血法,每次放血量为大鼠体重的10%,每周放血1次,连续4周。
对照组大鼠仅进行放血操作,不进行放血。
中药治疗组大鼠在放血的同时,给予中药(当归、熟地黄、白芍等)干预。
3. 实验观察指标:观察大鼠的面色、唇色、爪甲、毛发、体重、活动度等临床表现;检测血清红细胞计数、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数、血糖、血脂等生化指标。
4. 数据分析:采用SPSS 22.0软件进行统计分析,组间比较采用单因素方差分析,多重比较采用LSD法。
三、实验结果1. 临床表现:血虚模型组大鼠出现面色苍白、唇色淡白、爪甲无光泽、毛发枯黄、活动度下降等临床表现。
中药治疗组大鼠临床表现较血虚模型组明显改善。
2. 生化指标:血虚模型组大鼠血清红细胞计数、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数均显著低于对照组(P<0.05);中药治疗组大鼠上述指标较血虚模型组显著升高(P<0.05)。
血虚模型组大鼠血糖、血脂水平显著高于对照组(P<0.05);中药治疗组大鼠血糖、血脂水平较血虚模型组显著降低(P<0.05)。
四、结果分析1. 血虚证的临床表现:本实验结果显示,血虚模型组大鼠出现面色苍白、唇色淡白、爪甲无光泽、毛发枯黄、活动度下降等临床表现,与血虚证的典型症状相符。
2. 血虚证的生化指标变化:本实验结果显示,血虚模型组大鼠血清红细胞计数、血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数均显著低于对照组,表明血虚证患者存在血液系统功能异常。
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湖北中医杂志
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论
著
血虚证小鼠模型的制作及评价
梁 毅1 方碧琴2 鲁新华2
指导 :
陈如泉
1 广州中医药大学博士后流动站 ( 510405)
2 湖北中医学院附属医院
关键词 : 血虚证 ; 小鼠模型; 免疫介导 ; 综合放血 1 材料与方法 1 1 动物分组 Balb/ c 小鼠 45 只, 6~ 8 周龄 , 体重 16g~ 18g, 雌雄兼用 , 由湖北省医科院动物中心提供。 DBA/ 2 小鼠, 8~ 10 周龄 , 雌雄不限, 购自中山医科大学 实验中心。 Balb/ c 小鼠随机分成 3 组 , 每组 15 只 , 分别为 : ( 1) 正常组: 灌服蒸馏水 0 5ml~ 0 6ml/ 只, 每天 2 次 , 连续 20 天 ; ( 2) 免疫介导血虚证 模型组; ( 3) 放血血虚证模型组。 1 2 模型动物的建立 ( 1) 免疫介导血虚证小鼠模型: 参考有关文献 。方法 : 取 DBA/ 2 小鼠 断颈 处死 , 95% 酒精浸泡消毒 5 分钟后 , 无菌条件下取 出胸腺及颈、腋下、腹股沟淋巴 结, 加 RPMI1640 培养液, 除去表面血污及粘附的结缔组织, 再次清 洗后, 用手术 刀、剪刀反 复剪切组织 , 直至成 糊 状, 再轻轻辗碎 , 用 200 目尼龙网过滤 , 使之成为 单细胞悬液 , 计数后配成 1 10 / ml 浓度, 其胸腺
[ 1]
1 对象与方法 1 1 临床观察对象 年龄: 在 60 岁以上的老年患者 200 例。 症状与体征 : ( 1) 缺血性胸痛持续半小时以 上 ; ( 2) 心电图胸前相邻部位两个或两个以上导联 ST 段抬高大于 0 2mv, 或 、 、 aVF 导联 ST 段 ( 3) 发病在 6 抬高 0 1mv, 含硝酸甘油不恢复 ;
细胞 : 淋巴细胞为 1 2, 取 1 滴苔酚蓝滴入玻片上 鉴定细胞活性应在 95% 以上。Balb/ c 小鼠经 X 射 线 6 0Gy/ 3min 亚致死剂量照射后 1~ 4hs 内, 立即 经尾静脉注入上述细胞悬液, 每只小鼠 0 2ml。 ( 2) 综合放血血虚证小鼠模型 : 放血: 用左手固定小鼠并轻轻对颈部施加压 力, 使头部静脉淤血 , 在突出的眼球旁分辨出后眼 眶静 脉, 然后 用少 量 10% 可卡 因滴 入动 物眼内 , 使眼部局部麻醉 ; 右手持消毒过的毛细吸管从内侧 眼角由鼻侧眼眶平行地向喉头方向轻压至后眼眶静 脉丛 , 血 液 自 然 吸 入 管 内 , 放 血 6 ~ 8 滴 ( 约 0 5ml) ; 隔日重复 1 次, 直至模型成功 ; 控制饮 食: 自造模之日起改变其正常饮食量, 控制在每日 50g kg - 1 体重 , 自由饮水; 劳倦: 实验组小鼠每 天在温水池中强迫游泳 2 次 , 每次时间不定, 以将 下沉于水为限, 持续 15~ 20 天。 1 3 一般观察项目
0 36*
0 23 0 04
注 : 与正常组比较 , * P < 0 01,
3
讨论
代医学认为 , 骨髓是主要的造血组织。在以往的血 虚证模型中 , 较集中地研究了它们的外周血、组织 器官在免疫、生化、病理等方面的变化, 而缺乏以 机体造血系统病理改变为基础的血虚证模型, 并对 其进行相应的研究。为此笔者引进了现代较为先进 的免疫介导法模拟出血虚证小鼠模型 , 其症状体征 的表现十分符合中医血虚证的特点, 尤其在骨髓造 血系统上有着十分稳定的病理变化, 将其用于观察 血虚证模型的骨髓造血机能状态和补血方药的作用 机理, 有着切实的应用价值。 实验结果表明 , 采用免疫介导法制作的血虚证 小鼠模型, 在处理后的第 8 天即出现明显的血虚证 症状体征: 精神萎靡, 毛色枯黄膨松 , 眼睛、唇鼻 苍白无华, 鼠尾色淡而血管难以辨认 , 体重明显减 轻等; 全血细胞减少, 骨髓有核细胞显著减少 ; 胸 腺、脾脏器官的反应尤其敏感, 表现为明显萎缩, 其重量及相应指数较之正常小鼠有极显著性的差异 ( P < 0 01) 。而且于第 15 天起 , 即出现濒死状态, 小鼠陆续死亡 , 这些反映出其骨髓造血功能衰竭、 免疫器官严重受损的病理特点。而应用综合放血法 制作血虚证小鼠模型, 所需时间则相应较长, 程度 相对较轻, 预后也较上述方法良好。一般在制模的 第 15 天起, 则显现出血虚证症状体征, 基本上同 免疫介导型 , 但在整个制模过程中较少出现濒死状 态。在血液细胞学检查方面 , 主要表现为红细胞计 数明显下降 , 白细胞系、血小板系则无明显改变; 骨 髓 有 核 细 胞 计 数较 正 常 小 鼠 显 著 增 多 ( P <
6 [ 1]
体重、体温、食欲、皮毛、精神、眼睛、尾部 及粪便等。血液一般观察项目有 RBC、WBC、 PLT 计数。 1 4 骨髓有核细胞计数 取小鼠双侧股骨, 用剪刀剪开股骨两头, 露出 骨髓腔 , 然后用消毒过的注射器、 4 号针头 , 吸取 2ml RPMI1640 培养液 , 反复冲洗骨髓腔, 收集全部 骨髓 细胞 , 使 充 分 混 匀, 然 后 镜 下计 数 每 毫 升 BMC 总数。 1 5 胸腺、 脾脏相关指标检测 小鼠处死后 , 先用电子秤称 出每只小 鼠的体 重 , 然后剖开, 暴露胸腺及脾脏 , 小心完整地取出 二脏器 , 洗去血污 , 去除系膜及脂肪 , 用扭力天平 称出每个 胸腺、脾脏的 重量, 然后算 出相应指数 ( 如脾指 数 = 脾 重/ 体重, 胸腺指 数 = 胸 腺重 / 体 重) 。 统计数据均以均数 检验。 2 结果 2 1 一般体征观察 ( 1) 正常组小鼠: 神气矫健, 行动敏捷 ; 皮毛 光泽而密, 紧贴皮肤; 眼睛明亮 , 色泽粉红; 鼻唇 清洁 , 湿润, 呈淡粉红色; 尾粗、圆而呈粉红色; 腰背平直, 食欲正常。 ( 2) 免疫 介导血 虚证小 鼠: 造 模后 的 8~ 14 天 , 表现出精神萎靡, 倦卧少动嗜睡 , 皮毛膨松枯 槁 , 呈浅黄色; 眼睛淡白无神; 鼻唇淡白失泽 ; 耳 尾苍白而凉 ; 团缩拱背 , 明显消瘦; 食欲下降 , 饮 水增多。于第 15 天出现濒死状并陆续开始死亡。 ( 3) 复合放血血 虚证小鼠 : 造模后的 15~ 18 天 , 表现出血虚特征, 其症状、体征基本同免介血 虚模型组, 但程度相对较轻 , 而且未出现小鼠死亡 现象。 2 2 各组小鼠血象 、骨髓有核细胞数 ( BMC) 的 比较 见表 1。 标准差 ( x s) 表示 , t
小时以 内 的 急性 心 肌 梗死 患 者, 且 无 溶 栓禁 忌 症[ 2] 。 1 2 分组 对照组 100 例 : 年龄超过 75 岁 , 2 周内有活动 性出血 , 已作心肺复苏 , 或有外伤史 , 或新近有脑 血管意外病史, 或新近作过外科手术 , 或高血压患 者 血 压 > 2 1 3/ 1 3 3kPa , 或糖 尿 病只) 15 15 15
体
重 重量 ( mg) 重量 ( mg) 0 25 0 05 0 14 0 02
*
正常组 免介组 放血组
18 27 1 49 13 73 15 60 1 22
*
72 40
5 90
*
26 53 5 73
7 86 1 52* 12 32 2 00
1 88*
51 73 8 34* P > 0 05
9
BMC ( 109 / L) 1 91
正常组 免介组 放血组
9 65 3 98 6 27
9 16
837 1 190 5 342 3 800 1 118 1* 136 5
11 58
3 21 1 02* 8 91 1 78
4 45 1 49* 14 21 2 74*
注 : 与正常组比较 , * P < 0 01,
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中西医结合治疗老年急性心肌梗死
李兰强 朱清云
广东省深圳市中心医院 ( 518000)
关键词 : 急性心肌梗死; 中西医结合疗法; 尿激酶; 通心络胶囊 ; 血府逐瘀汤 现已证实, 急性心肌梗死大多是因冠脉管腔狭 窄导致血栓形成 , 使管腔急性闭塞所致
1 2 姚 军 , 李 树浓 淋巴细 胞与 再生 障碍 性贫血 关系 的实 验研 究 中华血液学杂志 , 1991, 12 ( 5) : 229~ 231 周梦圣 对控 制饲 料量 所 致小 白鼠 虚证 动物 模型 的研 究 和探 5 6
[ 2~ 4]
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表 1 各实验组 RBC 、 WBC、 PLT 、 B MC 计数比较 ( x s) PLT ( 10 / L)
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组
别
动物数 ( 只) 15 15 15 (
RBC 10 / L) 1 88 1 04* 1 48*
12
WBC ( 10 / L) 1 94
0 01) , 在胸腺、脾脏的重量及比值方面 , 突出表 现为胸腺萎缩 ( 但不及免疫介导组明显 ) , 指数较 正常明 显下降 ( P < 0 01) ; 但脾脏在重量 和指数 两项指标上并无异常改变。这些也表明了致病因素 的可逆性直接影响到疾病预后的良好与否。 血虚证是一种由多种因素引起的证候, 因此研 究用不同病因模拟出血虚证动物模型, 是为了寻找 出不同因素所致血虚证在临床症状体征及实验室检 查等方面所表现的共性及个性特点。不仅要研究某 证在不同疾病中的共性, 或不同证组成同一疾病的 共性 ; 还要研究同证不同疾病的特性、同病不同证 的特性。从多学科、多层次、多指标来研究血虚证 实质 , 为规范中医临床用药, 阐述补血方药的现代 药用机理 , 提供可靠的实验对象。 参考文献
P > 0 05
2 3
各实验组小鼠体重、 胸腺重量 、脾脏重量及相关指数变化情况
表2
见表 2。
s) 脾 脏 指数 ( 10- 1 ) 11 73 1 60
各实验组体重 、 胸腺重量 、 脾脏重量及相关指数比较 ( x 胸 腺 指数 ( 10- 3 ) 3 98 1 90 3 32 0 35 0 41