Agela液相色谱技术介绍色谱柱使用
grace制备液相说明书
grace制备液相说明书
一、产品简介
Grace制备液相是一种高效、高纯度的液相色谱填料，具有优异的稳定性和分离性能，广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。
本说明书将详细介绍Grace制备液相的使用方法及注意事项。
二、操作步骤
1.样品准备：将待分离的样品进行适当处理，如溶解、稀释等，确
保样品能够与Grace制备液相填料兼容。
2.装柱：将Grace制备液相填料填充到色谱柱中，确保填充均匀、
密实。
可以采用干法或湿法装柱。
3.平衡：在流动相通过色谱柱的过程中，使柱子达到平衡状态。
可
以采用适当比例的流动相进行冲洗。
4.进样：将待分离的样品加入到色谱柱中，注意控制进样量。
5.洗脱：采用适当比例的流动相进行洗脱，控制洗脱速度和流量。
在洗脱过程中，可以适时收集洗脱液，以获得所需的组分。
6.检测：采用适当的方法对洗脱液中的组分进行检测，如紫外可见
光谱法、质谱法等。
7.清洗与维护：在完成分离后，对色谱柱进行清洗和维护，以延长
使用寿命。
三、注意事项
1.在使用Grace制备液相时，应确保实验操作符合相关法律法规和
安全规范。
2.在装柱和平衡过程中，应注意避免填料进入色谱柱的其他部分，
以免影响分离效果。
3.在进样和洗脱过程中，应注意控制流速和流量，避免对色谱柱造
成过大压力。
4.在检测过程中，应注意对仪器进行校准和维护，以保证检测结果
的准确性和可靠性。
5.在清洗和维护过程中，应注意避免对色谱柱造成损坏。
色谱柱的使用和维护
色谱柱的使用和维护色谱柱是一种用于分离混合物的重要工具，广泛应用于化学分析、环境检测、药物研发等领域。
为了保证色谱柱的正常使用和延长其寿命，以下将介绍色谱柱的使用和维护方法。
一、色谱柱的使用1.色谱柱的激活新购买的色谱柱通常需要进行激活处理，以去除柱内杂质和保证柱的稳定性。
常见的激活方法包括使用最终使用的溶剂/流动相进行洗脱或者使用强极性溶液进行反向激活。
激活后，需用洗脱溶剂或流动相进行平衡。
2.样品的前处理样品的前处理对色谱柱的使用和维护至关重要。
首先，要确保样品的纯度和浓度，以避免对色谱柱产生污染。
其次，对于有机溶剂溶解的样品，最好使用过滤器进行过滤，以防止固体颗粒和杂质进入色谱柱。
3.流动相的选择正确选择和配置流动相对于色谱柱的使用非常重要。
根据需要分离的组分特性，选择合适的流动相性质和组成，并根据需要进行酸碱调节、添加缓冲剂等。
此外，注意保持流动相的流速稳定，并定期更换或再生。
4.检测器的设置根据需要检测的组分，选择合适的检测器并进行适当的设置。
常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪（UV-Vis）、荧光检测器、质谱仪等。
在使用检测器前，要确保其正常工作并进行校准。
5.流量控制使用色谱仪时，应保持流量的稳定性。
定期检查和校准流量控制器，并调整至适当的设置，以确保色谱柱正常运行。
6.色谱条件的优化根据分析需要，在保证分离效果的前提下，进行色谱条件的优化。
包括优化流速、温度、柱渗透性、梯度洗脱程序等，以提高分离效果和保护色谱柱。
二、色谱柱的维护1.洗脱和平衡每次使用完色谱柱后，应进行洗脱以去除残留的样品和杂质，并用适当的溶剂进行平衡。
洗脱和平衡步骤的操作要轻柔，避免使用高压流动相进行冲洗。
对于一些特殊样品，如蛋白质和多肽，可以使用具有较强亲和性的溶剂进行洗脱和平衡。
2.色谱柱的储存条件当色谱柱暂时不使用或需要长期储存时，应注意以下几点：首先，将色谱柱从设备上拆卸下来，用纯净溶剂充分洗脱并平衡，保证柱内干净；其次，封闭柱两端，避免进入灰尘和空气，可以使用柱塞或盖子进行封闭；最后，将柱放置在干燥、阴凉的地方存放，避免受到阳光直射和高温。
液相色谱柱使用说明
液相色谱柱使用说明液相色谱柱是一种常见的色谱技术应用于分离和分析化合物的工具。
本文将为您详细介绍液相色谱柱的使用说明，包括如何选择合适的柱子、柱子的安装步骤、样品的准备和加载、柱子的使用注意事项以及柱子的保养和储存方法。
1.选择合适的液相色谱柱在选择液相色谱柱之前，需要考虑以下几个因素：-样品的性质和分离要求：不同的柱子对不同性质的化合物有着不同的分离效果。
根据样品的极性、大小和稳定性等因素，选择合适的柱子（例如反相柱、正相柱、离子交换柱等）。
-流动相的选择：根据样品溶解度和分离要求，选择合适的流动相（溶剂、缓冲液等）。
2.液相色谱柱的安装步骤-将柱床冲洗干净：使用纯溶剂（如甲醇、乙醇等）反复冲洗柱床，直至流出的溶液无色透明。
-将液相色谱柱连接至色谱仪：在连接针嘴前，先用一根塑料贴纸封住柱子的两端，然后将针嘴旋入液相色谱柱的出口。
-将柱子连接到色谱仪：将柱子放入色谱仪的支架上，并确保柱子的连接口与色谱仪的进样器连接正确。
3.样品的准备和加载-样品的准备：将样品溶解在适当的溶剂中，使其达到合适的浓度，并在必要时进行过滤或稀释。
-样品的加载：使用自动进样器或手动进样器，将样品加载到液相色谱柱中。
避免过量的样品装载和过高的进样速度。
确保样品溶液完全进入柱子，并记录样品加载的详细信息。
4.液相色谱柱的使用注意事项-避免干涸：始终保持柱子中的液相色谱柱湿润，避免出现干涸和损坏的情况。
在使用完毕后，必要时用合适的溶剂进行洗脱，然后用空气或氮气进行保护。
-遵循柱子的使用范围：柱子通常有推荐的温度和压力范围。
超出这些范围可能会导致柱子性能下降或甚至损坏。
-避免高浓度的盐类溶液：高浓度的盐类溶液可能对柱子产生不良影响，导致柱子的损坏或压力升高。
5.液相色谱柱的保养和储存方法-定期清洗：根据使用频率，定期清洗液相色谱柱。
使用纯溶剂进行冲洗，以去除残留的样品和杂质。
-保持柱子湿润：柱子在存储期间应保持湿润。
用合适的溶剂进行洗脱，并用盖子密封柱子的两端，以避免柱床干燥。
使用液相色谱柱的流程
使用液相色谱柱的流程概述液相色谱柱是液相色谱分析中的重要组成部分，用于分离、纯化和定性定量分析化合物。
正确使用液相色谱柱是确保色谱分析准确性和可重复性的关键步骤之一。
本文档将介绍使用液相色谱柱的流程，包括准备工作、柱筛选、样品准备和柱的使用。
准备工作在使用液相色谱柱之前，需要进行以下准备工作：1.检查柱的状态：检查柱的外观是否有损坏，确认柱封堵是否严实，并检查是否有柱堵塞。
2.校准检测设备：确保流速计和检测器等检测设备处于正常工作状态，并进行校准。
3.准备色谱柱过渡条件：如果之前使用的是另一种类型的柱或不同的流动相，需要准备过渡条件来避免对柱和样品的影响。
柱筛选选择适合实验需求的液相色谱柱是流程中的重要一步。
以下是柱筛选的步骤：1.确定分离模式：根据实验需求，确定需要分离的化合物性质和分离模式（反相、离子交换、手性、凝胶过滤等）。
2.考虑析出度和保留时间：根据化合物的性质，确定选择具有适当分离度和保留时间的柱。
3.考虑样品种类和溶剂：柱的选择也应考虑样品类型以及所使用的溶剂系统。
4.参考经验和文献：查阅相关的经验和文献，了解柱的性能和应用范围。
5.进行实验验证：根据实验需求，在几种柱中选择一种进行实验验证，比较分离效果和保留时间。
样品准备样品准备对于液相色谱分析的准确性和重现性至关重要。
以下是样品准备的步骤：1.准备样品溶液：根据实验需求，将样品溶解在适当的溶剂中，并用过滤膜过滤以去除悬浮物和颗粒。
2.离心：如果样品中存在固体颗粒或沉淀物，需要用离心机将其分离。
3.稀释：对于浓度较高的样品，可能需要进行适当的稀释，以确保在柱上获得准确的峰。
4.pH调节：根据需要，可以使用缓冲溶液或酸碱溶液来调节样品的pH值。
柱的使用在使用液相色谱柱进行分析之前，需要进行下列步骤：1.连接柱：将柱连接到液相色谱系统中，并确保连接处严密，避免泄漏。
2.准备流动相：根据实验需求，配制适当的流动相，确保溶剂混合均匀。
3.条件优化：根据柱的特性和样品性质，优化流动相的组成、温度和流速等条件，以获得最佳的分离效果。
色谱柱的使用说明
色谱柱的使用说明色谱柱是一种在色谱分析中广泛使用的关键设备，它能够通过分离混合物中的组分以及测定它们的相对含量。
不同的色谱柱具有不同的分离机理和特点，因此每种色谱柱在使用前都需要仔细阅读其使用说明书，以了解其正确的使用方法和注意事项。
以下是色谱柱使用说明的一般内容：1.色谱柱的储存：色谱柱在储存期间需要避光、避湿、避高温，以免对其质量产生不良影响。
柱子应垂直存放，避免受到侧面压力。
定期检查柱子上是否有裂纹、损坏或其他异常情况。
2.安装色谱柱：在安装色谱柱前，需要进行适当的准备工作，如用洗涤剂或溶剂清洗色谱柱，以去除表面的杂质。
然后在柱子的接口处使用密封垫圈，确保柱子和接口之间的密封性。
安装时，需要根据仪器的要求和色谱柱的规格调整柱床高度和流速。
安装完成后，检查柱床是否均匀填充。
3.色谱条件的选择：正确选择色谱条件对于得到准确的分析结果至关重要。
色谱柱的选择应根据样品的特性、分离需求和分析目标来确定。
例如，对于非极性化合物的分离，应使用非极性柱；对于极性化合物的分离，则需要使用极性柱。
此外，还需合理选择进样方式、流速、温度等色谱条件，并根据需要进行优化。
4.样品的制备和进样：对于色谱分析之前，样品可能需要经过一系列的预处理步骤，如萃取、浓缩、溶解等。
进样前，需要对样品进行适当的稀释，以避免柱子堵塞或过载。
确保样品进样前是清洁无杂质的，以免污染柱子或影响分析结果。
还需根据样品的特性，选择适当的进样方式，如气相色谱中的气态进样、液相色谱中的静态进样或动态进样等。
5.色谱的运行和操作：在进行色谱分析时，需要根据选择的色谱条件设置好仪器的运行参数，如载气流速、柱温、检测器灵敏度等。
同时，还需注意检测器的基线稳定性、测量范围、线性范围等，以确保准确的定量分析。
在运行过程中，还需注意实验室的环境条件，如温度、湿度等，并及时记录实验过程和结果。
6.色谱柱的维护和保养：为了延长色谱柱的使用寿命和维持准确的分析结果，需要进行定期的维护和保养工作。
液相色谱柱的使用及再生
液相色谱柱的使用及再生一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作：在使用液相色谱柱之前，需要先进行柱前洗涤。
首先，将色谱柱和相关装置安装到系统中，并连接好进样器。
然后，使用纯溶剂通过色谱柱，将柱内的固定相洗涤干净。
这可用于去除残留的杂质和吸附在固定相上的杂质。
2.样品进样：将待分析样品溶解在合适的溶剂中，通过自动进样器或手动进样器将样品进样到柱中。
在进样过程中，要保证样品与液相色谱柱内的固定相充分接触，以获取准确的分析结果。
3.溶剂梯度：对于复杂的样品混合物，通常需要使用溶剂梯度来实现目标物质的分离。
溶剂梯度可以通过改变溶剂的组成比例或流速来实现。
在液相色谱仪中，可以使用梯度装置来实现自动的溶剂梯度。
4.分析条件控制：在进行液相色谱分析时，需要根据目标物质的特性来选择合适的分析条件，如流速、温度、检测器类型等。
这些条件将直接影响分析结果的准确性和重复性。
5.数据分析和解释：分析结束后，可以通过数据处理软件对所得数据进行处理和解释。
常见的数据处理方法包括峰面积计算、质量浓度计算、波长选择等。
二、液相色谱柱的再生技术1.清洗：随着柱使用时间的增加，固定相表面可能会积累附着物质，影响分离效果。
这时可以使用一些溶剂来清洗柱。
选择的清洗溶剂应该与分析柱内的固定相相溶，但不会溶解固定相。
常用的清洗溶剂包括醇类、有机溶剂和酸碱溶液等。
清洗过程中要保持流速适中，以充分冲洗柱内的固定相。
2.修饰：一些情况下，固定相表面可能出现活性减弱的情况，导致分离能力下降。
这时可以使用修饰剂来修复柱的活性。
修饰剂通常是一种能与固定相反应的化学物质，可以局部刷新固定相表面，恢复柱的活性。
3.再生：当固定相活性无法恢复，或者由于固定相老化等原因，完全更换液相色谱柱是常见的再生方法。
再生过程包括柱前洗涤、柱后洗涤、柱填充等多个步骤，需要根据具体柱的特性和使用情况来进行。
总结：液相色谱柱的使用方法和再生技术对于液相色谱分析的准确性和重复性具有重要意义。
液相色谱柱安装与使用说明
液相色谱柱安装与使用说明1.准备工作：事先准备好所需的色谱柱和色谱条件，选择适当的流动相和检测方法。
2.检查色谱柱：检查色谱柱的包装是否完好，确认柱头和底部不受损。
查看柱子的规格型号和有效期，确保符合实验要求。
3.柱连接：将色谱柱与液相色谱仪的柱接口相连接。
柱接口通常有螺纹接口和快速连接接口，按照仪器的要求选择合适的接口。
4.柱连接密封：使用适当的柱接口垫片来保证柱与柱接口之间的严密密封，以防止漏液和杂质污染。
5.流动相装填：根据实验需求选择合适的流动相，并根据仪器的要求装填到流动相贮箱中。
6. 流速设置：根据实验要求设置合适的流速，一般应在0.5-2.0mL/min的范围内。
7.初始温度设置：根据样品的性质和分析方法，选择合适的柱温度，并进行预热。
柱温度对于保证分离效果和保护液相色谱柱起到关键作用。
1.不要轻易触摸色谱柱的柱头和底部，以免造成污染或损坏。
2.在使用液相色谱柱之前，应用流动相洗涤柱子，以去除悬浮在柱子内的杂质和残留物。
3.色谱柱在长时间使用后会产生杂质沉积，应定期进行反向冲洗和再生。
4.柱温度的设置应根据样品的性质和方法进行优化，一般来说，越高的温度有助于加快分析速度，但也可能导致分离效果下降。
5.不同的流动相和检测方法可能对色谱柱造成不同程度的腐蚀和损害，需要根据实验要求选择合适的条件。
6.注意保持流动相的纯净度，避免使用未经过滤的溶剂。
7.使用完毕后，及时将色谱柱和流动相贮箱进行清洗和保存，以免柱子受到污染和损坏。
总结：液相色谱柱的正确安装和使用对于保证分析结果的准确性和重现性非常重要。
在安装液相色谱柱之前，必须仔细检查柱子的包装和品质，保证柱子的完好和有效期。
在使用过程中，要注意保持良好的实验操作和仪器维护，定期进行柱子的清洗和再生。
通过正确的安装和使用，可以有效延长柱子的使用寿命，保持分析结果的稳定性和准确性。
agela technologiesc18压缩系数
agela technologiesc18压缩系数AGELA Technologies C18压缩系数引言：AGELA Technologies是一家专业从事化学分析和分离技术的公司。
在分析和分离方面，该公司致力于提供高效和可靠的方法和工具。
其中，AGELA Technologies公司生产的C18柱被广泛应用于液相色谱分析中，具有出色的分离性能和较高的稳定性。
C18柱是一种疏水性的柱材，在反相液相色谱中具有独特的应用价值。
本文将重点讨论C18压缩系数的概念和相关特性。
第一部分：C18柱及其应用1. C18柱简介：C18柱是一种常见的反相液相色谱柱，其固定相由18个碳原子的链状分子组成。
这种链状分子具有疏水性，能够与非极性化合物发生相互作用，并将它们从样品矩阵中分离出来。
2. C18柱的应用领域：C18柱广泛应用于生物制药、化学制剂、环境监测等领域。
它能够有效地分离和定量含有脂溶性化合物（如药物、天然产物等）的样品。
第二部分：压缩系数的概念与含义1. 压缩系数的定义：C18柱中的压缩系数是一种度量溶剂渗透强度和柱子填充性能的参数。
它是柱子在渗透剂渗透过程中的体积变化与冲击传递过程中的压力变化之间的比值。
2. 压缩系数的意义：压缩系数是评估柱体性能和流动性的重要指标，能够反映柱子在压力变化下的稳定性。
较低的压缩系数意味着柱子在高压下，填充物的体积不易受到影响，具有更好的稳定性和更高的分离效率。
第三部分：压缩系数的测定方法1. 常见测定方法：常用的测定C18柱压缩系数的方法包括静态方法和动态方法。
其中，静态方法基于溶质在静止柱中与固相相互作用的特性，动态方法则是通过渗透剂在流动过程中对柱子进行实时监测。
2. 相关影响因素：测定压缩系数时，柱子的填充度、温度、流速和液相性质等因素都会对测定结果产生一定程度的影响。
第四部分：C18压缩系数的优势及影响因素1. 优势：C18柱常具有较低的压缩系数，能够在保持分离性能的同时减少柱填充物的体积变化。
博纳艾杰尔色谱柱
2、正相色谱柱的再生： 正相色谱柱用以下溶剂至少各50mL冲洗色谱柱(分析柱) 50%甲醇+50%三氯甲烷→100%乙酸乙酯 除有另有特别说明，博纳艾杰尔科技的液相色谱柱在柱头发生堵塞时可以低流速反冲。
博纳艾杰尔科技液相色谱柱产品服务指南
一 色谱柱的选择 如果您需要选择色谱柱或开发新的分析方法，请进入，于“资料”－“下载专区”处，下载《方法开发申请
色谱柱经过一段时间的使用，会出现柱压升高，柱效下降，一种可能是烧结滤片被堵塞；另一种可能是大分子进入柱内，使
液相色谱仪色谱柱的使用及保养(PPT课件)
除HP外，不同公司产品，其接头不同。处理 不当时，会造成：
色谱峰展宽（死体积）使柱效下降、或渗漏
解决办法：
自制相应的转换接头
使用“通用”型接头（锥箍及螺母）
这种锥箍在不锈钢管上是活动的，因此可以换接不同
的色谱系统及色谱柱。从Phase Separations公司能得 到一些PEEK工程塑料的接头，可用在所有类型的色谱 柱上的。
柱效低
为什么柱效低
色谱柱被污染 过滤片部分堵塞 样品、流动相或密封垫的细小颗粒造成的堵塞 色谱柱内的死体积 流动相pH值及组成不合适造成固定相流失 流速急剧变化造成固定相物理损坏 机械震动造成固定相产生裂缝 柱床收缩或干枯
重复性差、回收率低
实验的重复性差
色谱柱被污染 流动相pH值及组成不合适造成键合相流失 样品溶剂不同或样品本身不稳定
样品稳定性不好
方法的开发不好 缓冲液的pH值不合适 缓冲液的缓冲能力不足
液相色谱实用技 术（二）
流动相及样品的预处理
液相色谱对流动相的要求
除色谱柱对流动相对的要求外，还有∶
与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂的粘度
流动相的脱气
流动相脱气的目的
使色谱泵的输液准确 输液均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高 提高检测的性能 防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外吸收本底降低 保护色谱柱 减少死体积 防止填料的氧化
可更换的消耗品
更换滤芯，
更换垫圈，
保护柱
可避免化学污染。多数保护柱影响到整个色 谱柱的柱效，特别是在用微柱时 保护柱的种类
色谱柱使用及维护
色谱柱使用及维护色谱柱是色谱分析中非常重要的部分，它用于分离和纯化样品中的化合物。
正确的使用和维护色谱柱可以延长其寿命，提高分离效果和分析结果的准确性。
本文将详细介绍色谱柱的使用和维护方法。
色谱柱的使用方法：1.准备工作：在使用色谱柱之前，需要先进行准备工作。
首先，检查柱的状态，确保没有损坏或污染。
然后，根据分析的需要，选择合适的色谱柱和填料。
2.连接色谱柱：将色谱柱与色谱系统连接起来。
通常，色谱柱的两端都有接头，可以使用连接器将其与色谱系统连接起来。
确保连接紧密，避免泄漏。
3.样品预处理：在进样之前，需要对样品进行预处理。
这包括样品的制备和提取，以及可能的前处理步骤，如样品的净化和浓缩。
4.进样：将预处理好的样品通过进样口注入到色谱柱中。
确保进样量适当，避免柱内压力过高或过低。
5.运行分离：启动色谱系统，开始运行分离。
根据实验要求和柱的性能，选择合适的流速和梯度条件。
监控色谱图谱，记录分离的结果。
6.分析结果：根据分离的结果，进行数据分析和解释。
根据需要，可以进行进一步的纯化和结构表征。
色谱柱的维护方法：1.储存条件：在使用完色谱柱后，应将其储存在适当的条件下。
通常，色谱柱应存放在干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和高温。
柱子应储存在立式位置，以避免填料颗粒的沉积和失效。
2.清洗柱子：在使用一段时间后，色谱柱可能会出现柱效降低的情况。
这时，可以尝试进行柱子的清洗。
清洗柱子的方法包括反向冲洗、前冲洗和碱洗等。
选择合适的清洗方法，根据填料的耐受性和污染类型进行清洗。
3.柱效测试：定期对色谱柱进行柱效测试，以评估柱子的性能。
柱效测试可以通过运行标准样品或参考物质来进行。
根据测试结果，可以判断柱子是否需要更换或维修。
4.替换柱端接头：色谱柱的端接头是容易磨损和泄漏的地方。
定期检查柱端接头，如果发现磨损或泄漏现象，及时更换新的接头。
5.避免过高压力：在使用色谱柱时，要注意避免过高的压力。
过高的压力会损坏填料和柱子，降低柱效。
常用液相色谱柱使用与维护保养
常用液相色谱柱使用与维护保养液相色谱柱是分离和分析中常用的仪器配件之一，它的使用和维护保养对于实验结果的准确性和可靠性有着至关重要的作用。
本文将介绍常用液相色谱柱的使用和维护保养方法。
一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作：在使用前，需要对液相色谱柱进行准备工作。
首先，检查柱的外观是否完好无损，如果发现任何损坏或污染，应立即更换。
其次，检查柱装置是否牢固，连接是否紧密。
最后，将固定相和移动相装入柱中，确保固定相充分均匀地填充在柱内。
2.柱的条件调节：根据实验需要，调节液相色谱柱的柱温、流速和柱压等参数。
在调节柱温时，应注意避免温度过高或过低对柱的损害。
调节流速时，应根据样品性质和分离效果选择合适的流速。
控制柱压时，要确保柱内压力稳定在可接受范围内，避免超过柱的承压能力。
3.样品进样：将待测样品注入进样口或进样器中，注意避免空气进入柱，避免对柱的污染。
可以选择外部进样或直接进样的方法，具体方法根据实验要求和样品性质进行选择。
4.运行柱：在启动液相色谱仪前，先将柱进行预冲洗。
预洗液可以选择与移动相相同的溶剂。
启动液相色谱仪后，根据实验要求设定好运行条件，开始进行实验。
在实验过程中，要及时观察色谱图的变化，根据实验需要调节柱温、流速等参数。
5.柱的保存：在柱使用完毕后，将固定相充分冲洗干净，保证柱内固定相的干燥和保存。
然后，将柱装入保护柱架中，避免碰撞和损坏。
柱的保管环境要保持清洁、干燥、避光和稳定的温度。
二、液相色谱柱的维护保养方法1.柱的清洗：在使用液相色谱柱之前，需要先清洗柱以去除可能存在的污染物。
清洗方法包括预洗和后洗。
预洗可以选择与移动相相同的溶剂，将溶剂通过柱时，将固定相表面的杂质冲洗掉。
后洗可以选择与前一个样品不同的溶剂，将固定相和样品残留物进行清洗。
2.避免柱的干燥：柱在使用过程中，应尽量避免柱的干燥，因为柱的干燥会对固定相造成损害。
在柱停用时，应及时用溶剂进行冲洗并封存起来，以保持柱内的湿润状态。
液相色谱仪色谱柱保护柱如何使用 液相色谱操作规程
液相色谱仪色谱柱保护柱如何使用液相色谱操作规程色谱柱是液相色谱中紧要的一个构成部分。
众所周知，色谱是一种分别、分析手段，分别是其核心，而色谱柱担负的就是其分别作用，可以说，色谱柱就是液相色谱仪的心脏。
保护柱则是为了降低分析柱受污染程度，延长分析柱使用寿命的紧要构成部分。
如何使用保护柱1、专柱专用，避开保护柱成为不同项目间的交叉污染源。
2、适时更换保护柱。
当峰的理论塔板数下降15%，或是柱压上升15%，或是关键分别度下降15%时，都应当适时更换保护柱。
3、不慎发生强污染时，可以将分析柱卸下，单独冲洗保护柱，可以使污染物更快的从保护柱中流出。
但是不行超声清洗保护柱，以免损伤柱芯。
保护柱使用注意事项：1、独立式保护柱与分析柱连接时，连接管路尽可能短，且接口切面平滑，尽量削减死体积以降低柱外展宽效应。
2、卡套式保护柱一般未标注液流方向，使用时应自行标注，并依照标注方从来使用，以免正反向使用后，截留的杂质污染分析柱。
3、直接填装的短柱型保护柱，显现柱压上升或峰型变差时，可不接分析柱进行反向清洗，清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
4、卡套式保护柱，柱芯替换时，注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配，同时不易旋拧过紧，以防滑丝。
5、保护柱或柱芯一般不建议超声清洗，因可能对填料表面修饰有影响。
6、相像一保护柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后，再接分析柱使用。
使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命，但选择合适的保护柱更加紧要，选择或使用不当也可能带来截然相反的效果高效液相色谱仪分析样品的预处理高效液相色谱仪分析样品的种类繁多，物理形态广泛，构成及其浓度多而杂多变，对分析结果的干扰因素很多，为达到分析目的，样品要进行有效的预处理。
一、样品预处理的紧要性：1、样品预处理所用时间宏大于色谱分别时间。
2、消耗大量的溶剂和其它化学品，占分析消耗总成本最大。
3、样品预处理是试验的重复性和精准性最差的环节，是影响试验结果好坏的紧要因素。
液相色谱柱的应用-PPT
“甲醇—H2O”流动相。
2. 正相色谱常用的流动相及其冲洗强度的顺序是：
正己烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜异丙醇
最常用的是正已烷，
不同混合溶剂的粘度比较
柱填料基质
高pH下, 硅胶会溶解
低pH下, 键合相会断裂
化学修饰困难
孔结构复杂, 孔径不均匀，
导致柱效不够高, 有机溶剂
衡状态, 对于梯度淋洗尤为重要
孔径 --- 对色谱分离的影响
大孔的填料颗粒可以延长溶质大分子在填
料表面滞留的时间, 达到充分分离, 改善
峰形
样品 MW 2, 000, 选择 100Å 的孔径
样品 MW > 2, 000, 选择 300Å 的孔径
比表面积的比较
比表面积与孔径的影响
大孔径填料适用于大分子分析
移动速率不一样，从而产生色谱分离。
(必要条件)
分配过程
分配系数 - K
K=
CS
Cm
K= 常数
（T恒定）
Cm =组分在流动相中的浓度
Cs = 组分在固定相中的浓度
容量因子k
是指在一定条件下，组分在两相间达到分配平衡时的质量比。
在实际工作中，常应用另一表征色谱分配平衡过程的重要参数——
容量因子(capacity factor)，也称分配比(partition ratio)，以 k 表示。
色谱柱的构造
柱填料：
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之
间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。常用
颗粒粒径在3—10 µm的范围内。
正相柱：多以硅胶为柱填料。另一类正相填料是
硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合
色谱柱的使用
如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3 、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
（1 ）、反相柱的再生：依次采用20-30 倍的色谱柱体积的甲醇：水=10 ：90 （V/V），乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
（2 ）、正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。
要注意上述溶剂必须严格脱水。
4 、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。
但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：（1 ）、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；（2 ）、色谱柱头的填料被样品污染；（3 ）、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出；（4 ）、流动相PH 值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
解决办法如下：（1 ）、如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10 分钟，后再用纯水超声10 分钟，重新装入色谱柱。
（2）、如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
（3 ）、如确定定是盐结晶，用10% 的甲醇/ 水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
（4 ）、如果因PH 值使用不当，很难恢复。
液相色谱柱使用
液相色谱柱使用1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。
反冲后是正者用，还是反着用。
具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。
答:一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。
反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。
我们一直提倡的是:正向使用，反向冲洗。
2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相,在调整梯度的时候发现,刚开始用60%乙腈, RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变化,30%也没有变化,一直调到20%的时候,RT突然变到了约13分钟,请问这是什么原因?我用的是离子交换柱.答:离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。
譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质,离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质,水相是什么缓冲盐,3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护,为什么要这样做,答:新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。
因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。
具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。
用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
4、测定多肽，一般采用什么柱子,流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。
特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子,答:分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。
色谱柱的使用说明
色谱柱的使用说明液相色谱柱是昂贵的色谱耗材，是液相色谱仪的心脏，有着严格的生产标准和测试程序，为了充分发挥色谱柱的性能，最大程度延长色谱柱的使用寿命，请仔细阅读此部分。
色谱柱的身份确认：为了保证每一支色谱柱的质量，月旭公司出品的每一支色谱柱都有唯一的身份编码，根据此编码，我公司可以将质量问题确定到个人，为了保障你的利益，收到色谱柱时，请完成以下程序：1、仔细查看包装盒是否完好，与自己请购的色谱柱是否一致；2、盒内是否有质量检验报告及检验人员签名；3、色谱柱表面有无碰撞伤痕，柱两端保护色谱柱的塑料堵头是否完整；4、色谱柱柱体是否贴有月旭公司色谱柱的身份标牌，并仔细对照包装盒与色谱柱标签上的型号和编号是否一致。
结构和安装：结构：月旭公司出品的高效液相色谱柱柱管材质均为316L不锈钢，两端结构完全一致，其结构如图一：图一 Ultimate○R系列液相色谱柱结构安装：为了保证色谱柱使用时有最高柱效，连接管路尽量使用适合的细径管路，色谱柱进出口的连接必须非常适配，连接管端口部分必须平整，不能有毛刺和切口斜面等现象，各种连接管路请使用专业工具切割修整；1、取出色谱柱，仔细查看柱身洗脱液流向箭头标识，用手旋下柱两端的塑料堵头，放好色谱柱，使洗脱液流向和柱身所示流向一致，如图二所示：图二色谱柱的正确连接2、用手将“连接管路的不锈钢或者其它材质的接头”旋入色谱柱两端，管路接头要和色谱柱接口连接紧密，确保零死体积连接，在色谱仪正常运行时没有漏液。
色谱柱的正确使用：色谱柱是昂贵的色谱耗材，正确的使用和维护对保证色谱柱的正常使用和延长寿命至关重要。
1、色谱柱使用前注意事项：1）、色谱柱内的存储液：月旭公司色谱柱的存储液，如没有特殊说明均为质检报告中所述流动相，氨基（NH2）、氰基（CN）、硅胶柱（SiO2）均为正相条件–正己烷/异丙醇体系，反相柱（C1、C4、C8、C18、苯基Phenyl）均为甲醇/水体系，检测前，请用相互溶的试剂将其替换；2）、新色谱柱的平衡：新反相色谱柱：用纯甲醇冲洗色谱柱30个柱体积，再更换成能与检测流动相互溶的流动相冲洗30个柱体积，最后用流动相稳定系统至基线平稳；新的正相色谱柱：用异丙醇0.5ml/min冲洗30个柱体积，再更换成检测流动相稳定系统至基线平稳；2、色谱柱的使用方向：月旭公司出品的高效液相色谱柱标签上的箭头方向为流动相流向，使用过程时也按此方向，避免双向混用，导致两端填料同时污染，不利于色谱柱的再生和维护；3、流动相和样品保持洁净：由于悬浮在样品或流动相中的细小颗粒会堵塞色谱柱两端的筛板，各种试剂尽量使用色谱纯级的，用量少的试剂纯度至少是分析纯，水最好是超纯水和全玻璃器皿双蒸水，使用前建议用0.45μm的滤膜过滤；样品溶液使用针筒过滤；样品中的杂质是造成色谱柱污染、柱效下降的最主要原因之一，复杂样品可选样品预处理柱（SPE柱）进行样品处理，如果不方便处理，最好使用相匹配的保护柱，样品溶剂与流动相要相匹配，不能出现样品不互溶，极性相差太大等想象，否则会造成色谱峰形变差，鬼峰等现象，使用流动相溶解样品能有效的避免上述情况发生；4、色谱柱允许使用的pH范围：每款色谱柱都有自己特定允许使用的pH范围，请仔细对照你的色谱柱的使用pH范围（表一），在pH范围以外使用，会使硅胶基质溶解或键合相水解，对色谱柱造成不可恢复的损伤，如果在临界pH处使用，分析结束后立即用适合于色谱柱保存并与当前使用的流动相互溶的淋洗液置换掉。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2.754
2.424
400
300
200
1.697
100
0
0
1
2
3
4
5
6
7
YMC ODS-AQ pH2.6
7.734
VWD1A, 波长=254nm(水溶维生素2\选择性测试30度低PH\菲罗门_000003.D) mAU
800
2.617
700
600
2.159
500
2.511
400
300
200
1.487
Venusil MP C18（2），硅羟基pH=5.2
流动相pH=3.5，能充分抑制硅羟基的活性 抑制了二次保留效应
400-6068-099
第14页/共49页
100%水流动相的兼容性
样品：尿苷 色谱柱：4.6*150mm,5μm 流动相：100%水 流速：1mL/min 温度：30℃
2.5672.191 9.468
1.729 2.8322.474
7.922
400
400
300
300
200
200
100
100
0
0
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
min
0
YMC ODS-AQ pH5.8
第17页/共49页
100
0
8
min
0
1
2
3
4
5
6
7
8
Hydro RP pH2.6
VWD1A, 波长=254nm(XBP-C18-2\选择性30摄氏度\ODS-AQ_000001.D) mAU
500
VWD1A, 波长=254nm(XBP-C18-2\选择性30摄氏度\菲罗门_000002.D) mAU
500
16.459 1.505
800
700
600
500
400
300
200
100
0
0
1
2
3
4
5
6
7
Atlantis T3 pH2.6
VWD1A, 波长=254nm(XBP-C18-2\选择性30摄氏度\WATERS-亚特兰蒂斯_02.D) mAU
500
2.543 2.884
400
300
200
7.901
1.728
100
14
min
0
0
弱酸
O RCO
8
色谱柱固定相稳定性
400-6068-099
第10页/共49页
Agela 色谱柱最佳pH适用范围
400-6068-099
第11页/共49页
中等pH下使用 C18
Venusil MP C18 (2), 孔径110Å 特点：亲水性、通用性、 良好分离能力
物理因素 化学因素
6
第6页/共49页
硅胶制作工艺
Aggregation
Polymerization
堆砌法硅胶 Innoval、UHP、Bonshell 优点：高机械强度，耐污染 共聚法硅胶
第7页/共49页
硅胶基质反相色谱分离三要素
疏水部分（链烃和芳香烃） 羟基、氨基 离子化基团
第12页/共49页
双层表面处理技术
减低硅胶表面硅羟基的活性 第13页/共49页
中等pH下良好的分离能力
色谱柱：C18，5μm，4.6×250mm， 样品：吗啡、可待因，脱氢吗啡的分离，流动相:乙腈-25 mM乙酸钠缓冲液（ pH 3.5）= 10：90，
色谱柱A，硅羟基pH=3.5
流动相pH=3.5，未能抑制硅羟基的活性 二次保留严重
色谱分离基本方程
HPLC柱的 “色品”表达
式
R
n 4
1
1
k
k
提高分离度R，需要分别增大n，α，k值
n：柱效，易受柱长、填料粒径的影响 α：选择性，易受流动相和固定相影响； k：保留因子，受固定相和流动相的影响
第1页/共49页
•柱效（n）对分离度（R）的影响
2
4
6
8
10
12
第16页/共49页
Atlantis T3 pH5.8
1.704 2.502
2.821 3.470
7.732
13.715
8 min
14
min
VWD1A, 波长=254nm(水溶维生素2\选择性测试30度低PH\ODS-AQ_000001.D) mAU
800
2.870
700
600
500
VWD1A, 波长=254nm(XBP-C18-2\选择性30摄氏度\2607_000001.D) mAU
500
1.774 2.8342.550
7.237 10.963
400
300
200
100
0
0
2
4
6
8
10
12
MP C18(2) pH5.8
8
min
VWD1A, 波长=254nm(水溶维生素2\选择性测试30度低PH\亚特兰蒂斯_000002.D) mAU
“高富帅”
以上两张谱图k, α值完全相同，仅仅由于柱效高低不同使得它 们具有不同的分离度。
第2页/共49页
•分离选择性（α）对分离度（R）的影响
tR' 2 tR' 1
α =1.04
α =1.35
改变分离选择性α的方法
• 改变固定相 • 改变流动相pH值 • 改用不同的流动相 • 改变柱温
第3页/共49页
-R -OH -O- H+
目标物A、B
反相作用 氢键作用 弱离子交换作用
固定相
反相作用 氢键作用 弱离子交换作用
流动相
甲醇 /乙腈
水
缓冲盐溶液
第8页/共49页
pH对分离的重要影响
10
O
9
RCOH
8
7
6
k’ 5
4
调节ph值对样品的 分离非常有效
3
2 1
0 2
pH = pK
4
6
pH
第9页/共49页
弱碱
α =1.50
•容量因子（k）对分离度（R）的影响
R
n 4
1
1
k
k
k tR' tM
容量因子大于10，k/(k+1)的改变不大，而分析时间将大大 延长。因此，k的最佳范围是1<k<20。
改变容量因子的方法有： •减小柱死体积 •改变柱温 •改变流动相的配比 •梯度洗脱
第15页/共49页
碱性化合物阿米替林在不同pH下保留时间的变化
.1764 .2549
.2867 .3559
.7558
VWD1A,波长=254nm(水溶维生素2\选择性测试30度低PH\2708_000001.D) mAU
800
700
600 500
400
300 200 100
0
0
1
2
3
4
5
6
7
MP C18(2) pH2.6
第4页/共49页
α k' N 如何控制分辨率?
第5页/共49页
影响色谱柱性能的因素
色谱柱与色谱填料的特性
1、 柱填料 • 硅胶纯度 • 粒径（及粒径分布） • 比表面积 • 孔径
2、 色谱柱的构型 • 色谱柱直径 • 色谱柱长度
3、 固定相 • 键合类型 • 残余硅羟基的影响 • 反相键合相的保留行为 • 键合硅胶的稳定性