3-HPLC 色谱柱介绍
3 柱色谱技术
A. ion-exchange chromatogram of papain hydrolysate by DEAESephacel anion-exchage chromatography and the elution was performed at 1.3 ml/min of flow rate with a linear NaCl gradient
③吸附剂与流动相（样品）不发生化学 反应； ④吸附剂颗粒直径适宜，一般吸附剂的 粒径为100-200目或200-300目。 吸附剂通常应具备以下特征：对被分离 的物质具有较强的吸附能力、有较高的 吸附选择性、机械强度高、再生容易、 性能稳定、价格低廉。
5.3.2.2常用吸附剂种类
1、活性炭： 含碳原料经碳化和活化后便成为活性炭。 是一类具有吸附性能的碳基物质的总称， 具有多孔结构和很大的比表面。 活性炭性能稳定，抗腐蚀，常用于食品 工业的脱色、脱臭、净化，也用于环境 保护中的三废处理等。
C. RP-HPLC pattern on a C18 column (4.0 ×250 mm) of active fraction Ⅳ-3 eluted on the HPLC. HPLC operation was carried out with a linear CH3CN gradient (0-1.0 M) at 2.5 ml/min of a
5.3.4 吸附色谱的操作程序
吸附色谱法的操作方式有薄层色谱和柱 色谱法。 薄层色谱是将吸附剂均匀铺在玻璃上， 把待分离的样品点在薄层上，然后用合 适的溶剂展开而达到分离、鉴定和定量 的目的。
吸附色谱的柱色谱法是将分离样品均
匀加入到装有吸附剂填料的柱子内， 再以适当的洗脱剂洗脱以达到不同组 分的分离。具体如下：
watershsst3色谱柱说明书
watershsst3色谱柱说明书Waters HSS T3色谱柱是一种高效液相色谱柱，被广泛应用于生命科学、制药、环境和食品分析等领域。
该柱具有优异的分离性能和稳定性，可用于分离复杂的混合物，提供准确和可靠的分析结果。
以下是关于Waters HSS T3色谱柱的详细说明：1. 柱材料：Waters HSS T3色谱柱采用高质量的硅胶材料制成，具有特殊的表面处理，能够提供优异的色谱性能和稳定性。
2. 柱尺寸：Waters HSS T3色谱柱的常见尺寸为4.6mm乘250mm，具有较大的分离能力和样品容量。
此外，还提供其他规格的色谱柱可供选择。
3. 分离性能：Waters HSS T3色谱柱具有极好的分离性能，可有效分离复杂样品中的成分。
其独特的柱底和柱壁结构可以增强样品和柱相之间的相互作用，提高分离效果。
4. 稳定性：Waters HSS T3色谱柱具有出色的稳定性和重现性，可持续运行大量样品分析而不产生漂移或降解。
柱底和柱壁的特殊表面处理使得该色谱柱不易受到污染和损害，有助于保持柱的使用寿命。
5. 应用范围：Waters HSS T3色谱柱广泛适用于各种样品类型的分析，包括有机化合物、天然产物、药物、代谢产物等。
它可用于定量和定性分析，以及结构鉴定和纯化工作。
6. 色谱条件：Waters HSS T3色谱柱适用于反相液相色谱和离子对色谱法。
在反相液相色谱中，可以使用不同的流动相和梯度条件来优化分离效果。
在离子对色谱中，可以添加离子对试剂来改变运行条件。
7. 包装和存储：Waters HSS T3色谱柱以高压不锈钢柱体包装，旨在保护柱底和柱壁免受损坏和污染。
柱体上标有批号和有效期，以便用户能够正确追踪使用日期和有效期限。
该色谱柱应存放在避光、干燥和温度控制的环境中，以确保其质量和性能。
总之，Waters HSS T3色谱柱是一种优质的色谱柱，具有卓越的分离性能和稳定性，适用于各种复杂样品的分析工作。
色谱柱基础知识简介
色谱柱的再生
• 反相柱的再生。采用以甲醇:水=95:5(V/V)，纯甲 醇，二氯甲烷等溶剂作流动相，顺次冲洗，每种 流动相流经色谱柱的量为20一30倍色谱柱体积然 后再以相反顺序冲洗色谱柱。 • 正相柱再生。顺次以正己烷、异丙醇、二氯甲烷、 甲醇作流动相冲洗色谱柱每步注意平衡溶剂的顺 序，不要颠倒每种流动相流经色谱柱的量为20— 30倍柱体积(因异丙醇的粘度较大，冲洗过程中请 随时注意调整冲洗的流速)，用甲醇冲洗完后，再 以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必需 严格脱水。
高效液相色谱柱知识介绍
2013.12
2014-1-6
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色谱柱的发展现状
• 高效液相色谱(HPLC)是20世纪60年代后期 发展起来的分离分析技术，是现代分离测 定的重要手段。问世以来，因其具有分离 效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能 分析高沸点但不能气化的热不稳定生理活 性物质的特点而被广泛应用于生物化学、 药物及临床分析。
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• 离子交换柱的再生。长时间在高pH值和高 离子强度缓冲溶液中使用，将导致色谱柱 离子交换能力降低。用稀酸缓冲溶液冲洗， 可使阳离子柱再生;反之，用稀碱缓冲溶液 冲洗，可使阴离子柱再生。 • 其他色谱柱的再生 。
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谢谢
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4
色谱柱的构成
• 色谱柱由柱管、压帽、卡套(密 封环)、筛板(滤片)、接头、螺 丝等组成。柱管多用不锈钢制 成，压力不高于70kkg/cm2时， 也可采用厚壁玻璃或石英管， 管内壁要求有很高的光洁度 。 • 色谱柱两端的柱接头内装有筛 板，是烧结不锈钢或钦合金， 孔径0.2一20µm(5一10µm)，取 决于填料粒度，目的是防止填 料漏出
色谱柱参数
色谱柱的参数 色谱柱的参数
色谱柱的参数 色谱柱的参数 载碳量
硅胶表面键合相的比例 与比表面积，键合覆盖度等有关 对ODS，载碳量从7-18%（ODS-100Z为20%）不等 ODS的载碳量高， 则保留增加，适合分析非极性化合 物。制备色谱的上样量也可以增加 载碳量通常影响选择性
色谱柱的参数 色谱柱的参数
硅胶表面性质-纯度
柱的化学性质
样品性质决定柱的化学性质 样品性质决定柱的化学性质
样品结构 溶解性（有机溶剂、水） pH值 极性 酸碱性 分子量
分离目的决定柱的物理性质 分离目的决定柱的物理性质
分析? 制备? 快速分析?（如Super-ODS） 含量分析? 杂质检验? 所有组分分离?
色谱柱的参数 色谱柱的参数
柱长、内径
色谱柱的参数 色谱柱的参数
粒径
粒径越小，分离越快, 柱效越高。但柱压力越高，柱容易被污染， 寿命低 LC-MS和常规分析柱通常使用5 μm填料。3 μm填料使用的困难程 度大，一般非必要时不使用(ODS-100V) Super-ODS为2 μm 填料，UPLC为1.7 μm填料 3cm以下的制备色谱柱通常使用5-10 μm填料 更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径，如10 μm, 或20 μm
色谱柱的参数 色谱柱的参数
封端的效果：
色谱柱的参数 色谱柱的参数
封端-高封端的ODS色谱柱
pH使用范围宽 极性基团封端的色谱柱可以在高水相流动相条件下使用，适合分离 极性化合物 残留的硅醇基影响最小，碱性化合物不拖尾 改善选择性 一般优先使用高封端的色谱柱
HPLC色谱柱的种类
高效液相色谱柱大致可分为五类:一、高效反相液相色谱柱以C18为代表的高效反相液相色谱柱•直被描述为药物发现、开发、方法验证(ValidatiOn)的心脏!高效反相液相色谱柱也极其广泛应用在药物代谢及动力学、生命科学、医疗健康、生物分析检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析、军事、国土安全等领域！高效反相液相色谱制备柱也是最重要的分离纯化技术之一！无论是过去，现在和可预见的未来，以球形B型硅胶(5Um或3um)为材料骨架的高效反相液相色谱柱在实际应用中永远占有统治地位!常规HPLC方法的开发几乎总是从C18作为出发点，反相色谱占了80%以上的应用。
过去数十年来，无数努力集注于：1)改善硅胶的品质，优化键合化学；2)开发新颖的材料骨架替代硅胶。
十多年前，使用有机硅材料取代无机硅材料作为起始原料生产球形硅胶代表一个划时代的革命！生产的球形硅胶命名为B型球形硅胶。
无机A型硅胶重金属含量很高，硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等导致许多碱性化合物回收率低。
球形B型硅胶重金属含量很低，在非常大的程度上消除了A型无机硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等问题。
用B型球形硅胶合成高效液相色谱填料，导致高效液相色谱柱产品质量有质的飞跃！然而，另一方面，基于客户的大量反馈和我们对几乎所有色谱厂商产品的评估，我们相信键合化学问题没有获得很好的解决。
具体体现在：(1)“纯粹”反相机理的键合相例如C18和C8市场上仍然是单功能，三功能和聚合物键合相”鱼目混杂(2)键合相封端问题没有获得很好的解决，•直是困扰色谱领域最大的问题！迄今为止全部的尝试只获得有限的成功。
(3)极性嵌入式(PolarCmbCddCd)键合相极性嵌入式(PoIarCmbCdded)键合相是C18高效反相液相色谱"卫星群”中最重要的产品，是C18和C8键合相最重要的补充。
极性嵌入式(POIarembedded)键合相起源于SupelcoABZ o SupelcoABZ的键合方法是用aminopropyl键合相和长链按酸缩合反应形成一个C16酰胺。
色谱柱介绍
C8、 C4柱
4.常见色谱柱介绍
SiO2
CH3
O Si CH2 CH3
7
CH3
C8、C4等短链烷基键合相适合做极性小以减弱保留，缩短 分析时间。另一方面又可以分析氨基酸，小肽等生物分子。
4.常见色谱柱介绍
4.3 苯基柱
SiO2
CH3
O Si CH2
3
CH3
柱上键和固定相有苯基，也属于反相柱，不过由于苯基有不同的物理特性，例 如空间位阻，具有π电子，所以对某些化合物有较好的分离。与C18、 C8和 C4相比，苯基与带芳香环化合物形成p-p 共轭相互作用，增强此类化合物的相 对保留。这种优良的选择性与对非极性化合物保留能力较弱的特点相结合，使 得-Phenyl相成为分离、分析同时含极性和非极性复杂混合物的最佳选择。
3.色谱柱化学性能
用窄的内径，小的粒径会引起高柱压， 柱压是同时影响增加分离度和减少分析时间的主要障碍。分离度、分析时间及柱压三者相互制约， 选择好其中两者，则第3个因素也就选好了
常见规格色谱柱：
类型 微孔柱 分析柱 半制备柱 制备柱
内径D (cm) 0.1, 0.21
0.3 – 0.46 0.8 – 1.0 2.0 – 5.0
OH
R
侧链基团：二异丁基或二异丙基
提供空间位阻可避免硅胶在低PH 下水解、破坏。
1.PH范围：1-8 2.使用了空间位阻大的硅烷 3. 未封端
优点：可以在低PH下分析酸性、碱性 和中性组分，峰形优异。
5.不同品牌色谱柱介绍
Agilent Eclipse XDB,
Si O
O
O Si
CH3 Si CH3
4.常见色谱柱介绍
氰基柱的适用范围：
HPLC色谱柱的基础知识及使用技巧
HPLC色谱柱的基础知识及使用技巧一、引言高效液相色谱法（HPLC）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析技术。
色谱柱是HPLC系统的核心组成部分，其性能直接影响分析结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍HPLC色谱柱的基本原理、分类、使用及维护等方面的专业知识。
二、色谱柱的基本原理色谱法是一种基于不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡进行分离的物理化学方法。
HPLC色谱柱的核心是固定相，它是由硅胶、氧化铝、活性炭等颗粒状物质组成。
当样品溶液通过色谱柱时，不同物质根据其与固定相的相互作用力大小，依次从固定相中解吸下来，从而实现各成分的分离。
三、色谱柱的分类1.正相色谱柱：适合分离极性化合物，如糖类、醇类等。
2.反相色谱柱：适合分离非极性化合物，如脂肪酸、烃类等。
3.离子交换色谱柱：适合分离带电离子或极性化合物，如氨基酸、核酸等。
4.体积排阻色谱柱：适合分离大分子物质，如蛋白质、多糖等。
四、色谱柱的选择与使用1.根据分析物的性质选择合适的色谱柱。
2.确保色谱柱不受污染，使用前需进行清洗和活化。
3.避免过度使用压力，以延长色谱柱的使用寿命。
4.定期更换色谱柱，以保证分析结果的稳定性。
五、色谱柱的维护与保养1.使用后及时清洗色谱柱，防止残留物对柱子的污染。
2.色谱柱应储存于干燥、避光的环境中，避免受潮或暴晒。
3.对于长期不用的色谱柱，应定期检查其性能并进行活化处理。
4.避免将色谱柱置于高温或低温环境中，以防止硅胶固定相产生裂纹或变形。
5.定期更换流动相，以保证流动相的质量和稳定性。
同时，流动相的pH值应控制在固定相所能承受的范围内。
6.在使用过程中，应时刻关注色谱柱的压力变化。
若发现异常压力或突然变化，应及时检查柱子是否堵塞或受损。
若确有问题，应立即停止使用并进行修复或更换。
7.在使用过程中，还应注意观察色谱峰的形状和大小。
若发现异常峰或分离效果变差，应考虑更换流动相或清洗柱子。
若问题仍未解决，应考虑更换色谱柱。
3-HPLC 色谱柱介绍
甲基三乙氧基硅烷 (MTEOS)
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为何杂化颗粒柱可增加 在高pH下的柱寿命？
Surface modified Silica Particles XTerra® Hybrid Particles
普通硅胶柱
基于杂化颗粒的Xterra 柱
• 硅胶快速溶解 • 严重的柱失效 • 柱寿命短暂
©2014 Waters Corporation
LiChrosorb RP-18
Symmetry C8 Resolve C-18
15
12 12
10.3
12.5 12.4
Ultrasphere ODS
Partisil ODS-3 mBondpak C-18 Nova-Pak C-18
11
11 10 7
11.3
12.0 7.9 5.5
©2014 Waters Corporation 13
键合方式：三点键合
优点：酸性条件下键和相稳定性高（耐水解）
©2014 Waters Corporation
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C18 填料的合成 —3.端基封尾
键合相(配体)：C18
端基封口基团
残留硅羟基
硅胶基质
©2014 Waters Corporation
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130Å and 300Å 1.7 um BEH Particles （电镜照片）
©2014 Waters Corporation
11
填料的合成 —2.键合配体（键合相）
填料的内孔表面 流动相
色谱填料是多孔颗粒（“海绵” ），99％发生色谱分离的表面 是在内 保证待分析和分离的化合物 能够和色谱填料有保留
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– 颗粒分布
ODS-3液相色谱柱
Inertsil ODS-3液相色谱柱Inertsil ODS-3液相色谱柱产品简介Inertsil 3系列的硅胶基于可实现对目的颗粒直径进行控制的独有合成手法，而作为HPLC填料专用产品而制造，因此，与以往产品相比，它可以缩小粒度分布宽幅，而其低压力的秘密正在于此。
以往的硅胶由于包含有细微颗粒及倾斜颗粒，因此有着压力升高的倾向。
而Inertsil 3系列的均整颗粒可完全确保溶离液的流路，因此有着无与伦比的低压力优势。
另外，Inertsil 3系列由于其硅胶表面极其均一化，因此其化学修饰是稳定的，从而也就能够保证各批次填充剂稳定的质量. • 非常广泛的应用领域• 低柱压• 高惰性• 重现性优良• 强大的文献背景支持Inertsil ODS-3液相色谱柱特点介绍新型的高效球形多孔硅胶填料Inertsil ODS-3 代表了当今世界上新一代的 C18 反相填料.它的基质是一种新型的高纯硅胶.这种硅胶不仅纯度高达 99.999% , 而且颗粒球形对称度好, 表面均匀光滑.从而使硅胶的理化性质更加均一, 载体机械强度大, 键合度及柱效更高.更由于 GL Sciences 公司高超的化学键合技术, 使得 Inertsil ODS-3 成为了世界上最好的 C18反相填料之一. 极低的柱压Inertsil ODS-3 中的硅胶颗粒有着近乎完美的球形表面和几乎一致的颗粒大小.因此柱子在使用中的压力较低.如图中所示, 使用甲醇和水作为流动相, Inertsil ODS-3 的柱压比其他品牌明显要低. 较低的柱压意味着在装填填料时的应力较小, 而柱子的寿命则更长.高度惰性众所周知, 位于硅胶表面上的残留硅醇基可以引起峰形的严重拖尾和样品的吸附, 尤其是对胺类等含氮的样品, 分离效果更不理想.在 Inertsil ODS-3 的生产过程中, GL Sciences 公司凭借着他们开发的一种新型的端基封尾技术, 将残留的硅醇基尽可能除尽.为了保证每一支柱子都有最大的惰性, 它们都经过了严格的质量检控, 这其中包括了核磁共振的检测.独特的填装技术Inertsil ODS-3 采用了一种非常特殊的填装工艺以保证产品的独特性, 严格的质量控制贯穿于整个生产过程中, 每一支柱子在出厂前均经过严格的测试.此外, Inertsil ODS-3V 还附有填料批次的质量认证证书, 满足更加严格的质量需求填料规格固定相颗粒形状颗粒尺寸(um)孔径(A)孔体积(mL/g)比表面积(m2/g)碳载量%端基封尾pH 范围ODS-3 Spherical 3, 5, 8 100 1.05 450 15.0 Yes 2-。
ChemPattern产品手册3柱色谱介绍
系统解决方案各论3.柱色谱法解决方案本章介绍高效液相色谱法（HPLC，High Performance Liquid Chromatography）为代表的柱色谱法在ChemPattern先进化学计量学系统解决方案软件中的应用，包括数据处理步骤、方法指南和操作规范等内容，从而展示如何开展基于柱色谱法的复杂体系高内涵分析和先进质量控制等各类分析任务。
除另有说明外，该章节讨论的数据处理内容适用于高效液相色谱法（HPLC）、超高压液相色谱法（UPLC/RRLC），高效毛细管电泳法（HPCE），以及气相色谱法（GC）。
除另有说明外，该章节讨论的涉及软件操作的一般性内容均适用于柱色谱法、平面色谱法、质谱法、核磁共振波谱法、光谱法及通用化学计量学解决方案。
芪甲苷进行测定。
而色谱指纹图谱所采用的样品制备方法（右图）则尽量保留样品的原始组分信息。
色谱条件的方法学考察在色谱的系统适应性试验考察中，一个好的色谱指纹图谱应该具有良好的分离度（Resolution）、稳健性（Robustness）以及重现性（Reproducibility），三者的重要程度依次递进。
良好的分离度是色谱指纹图谱分析所追求的目标，但必须建立在保证试验重现性和稳健性的先决条件之上。
图3-2不同品牌C18色谱柱对样品分离结果的影响示意图3.2样品数据导入ChemPattern支持的色谱类分析化学通用数据格式如下所示。
各主流色谱仪器生产厂家的工作站软件均提供从仪器的内部数据格式文件到通用数据格式文件的转换功能。
类型扩展名说明ANDI二进制格式*.cdf Analytical Data Interchange。
基于NetCDF协议的色谱和质谱数据的数据交换格式标准，由美国分析仪器协会（AIA）制定。
对于色谱数据而言，该类型文件通常包含积分结果。
ASCII文本格式*.csv, *.txt Comma separated value。
一类统称为“逗号分隔值“的以行为单位多列数据文本文件。
waters hss t3色谱柱说明书
waters hss t3色谱柱说明书摘要：一、Waters HSS T3 色谱柱简介二、Waters HSS T3 色谱柱的特点三、Waters HSS T3 色谱柱的应用范围四、Waters HSS T3 色谱柱的安装与使用五、Waters HSS T3 色谱柱的维护与保养正文：一、Waters HSS T3 色谱柱简介Waters HSS T3 色谱柱是一种高效、快速的液相色谱柱，由Waters 公司生产。
这款色谱柱采用了独特的HSS（High Speed Silica）技术，具有高柱效、高分辨率和快速分离等特点，广泛应用于药物分析、生物制药、环境监测等领域。
二、Waters HSS T3 色谱柱的特点1.高柱效：Waters HSS T3 色谱柱具有高柱效，可以提高分析速度和分离效果。
2.高分辨率：这款色谱柱的分辨率较高，能够对样品进行精细的分离和检测。
3.快速分离：Waters HSS T3 色谱柱采用了HSS 技术，可以实现快速分离，提高分析效率。
4.广泛的应用范围：这款色谱柱适用于多种样品的分析，包括药物分析、生物制药、环境监测等领域。
三、Waters HSS T3 色谱柱的应用范围Waters HSS T3 色谱柱主要用于药物分析、生物制药、环境监测等领域，可以对各种样品进行高效、快速的分离和检测。
四、Waters HSS T3 色谱柱的安装与使用1.安装：在安装Waters HSS T3 色谱柱时，需要先将色谱柱的两端用封口胶封好，然后将其插入色谱仪的进样口和检测器接口。
2.使用：使用Waters HSS T3 色谱柱进行分析时，需要按照以下步骤操作：（1）样品准备：将待分析的样品进行预处理，使其符合色谱分析的要求。
（2）样品进样：将样品溶液通过进样器注入色谱柱中。
（3）色谱分离：打开色谱仪的泵，使样品在色谱柱中进行分离。
（4）检测：分离后的样品通过检测器进行检测，得到色谱图。
Waters HPLC色谱柱介绍
如何选择理想的 HPLC分析柱 HPLC分析柱©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation1如何看待色谱柱？色谱柱是液相色谱工作的最重要又最常使用的工具对工具了解越多，越有可能尽早选对合适的工具，使工作开展的更顺 利工欲善其事，必先利其器！©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation2沃特世价值所在： 技术能力+品质保障+专业服务Better traceability & control of the entire processWaters©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011• Manufactures under cGMP, ISO 9001 and ISO 13485 guidelines • Registered with FDA as a medical device manufacturer©2011 Waters Corporation 3概要如何认识色谱柱？ 如何认识色谱柱？ 沃特世色谱柱： 沃特世色谱柱：为色谱工作者的任务而设计 XBridge Atlantis SunFire XSelect UPLC—HPLC方法转换 HPLC—OBD 制备柱无优放大©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation4沃特世色谱柱： 专为色谱分析工作者所需而设计宽pH范围、耐受性最强、最通用的色谱柱增强极性化合物保留的专用硅胶色谱柱高容量、峰形柱效最优化的通用硅胶色谱柱宽选择性覆盖、LCMS方法开发的首选色谱柱©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation5应对耐受性、通用性的需求色谱工作者的需求： 工作者的需求：方法在高pH条件下！！ 方法在较高温度条件下！！ 耐受性？！ 通用性？！2.5, 3.5, 5, 10 µm柱效？！ 样品复杂难以分离？！ 需要各种键合相？ 需要各种柱规格？©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation6高pH耐受性对碱性化合物的分析特别有利 —分离选择性、方法耐受性与柱使用寿命©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation7XBridge： 基于第二代杂化颗粒技术BEH (Bridged Ethylene Hybrid)硅氧骨架中嵌入亚乙基桥- pH范围耐受更宽 - 机械强度更高 - 柱效佳U.S. Patent No. 6,686,035 B2©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011Anal. Chem. 2003, 75, 6781-6788©2011 Waters Corporation8增加化合物的保留并提高灵敏度： High pH Mobile phase2HIGH pH0.1% NH4OH3 6 1 4Morphine Morphine-3ß–o-glucuronide 10-hydroxymorphine5% 00.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80LOW pH0.1% HCOOHCompounds 1. % 10-hydroxymorphineMorphine-6ß–o-glucuronide6 4,5 2 1 32. 3.Morphine-3β-D-glucuronide Morphine-6β-D-glucuronide4. 5. 6. Morphine Morphine N-oxide 6-acetylmorphineMorphine N-oxide0 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 3.00 3.20 3.40 3.60 3.80©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©20116-acetylmorphineMinutes©2011 Waters Corporation9XBridge —耐受性最强、最为广泛适用2.5, 3.5, 5, 10 µm 1.7 µm耐受性最强、最为广泛适 广泛适用的色谱柱第二代杂化颗粒技术 无以伦比的流动相pH、温度和压力的耐受范围 达到前所未有的柱效、峰形和稳定性水平 广泛的键合相选择，配合各种分析物所需 齐全的柱规格供应，满足各种规模需要©2009 Waters Corporation | COMPANY CONFIDENTIAL ©2011©2011 Waters Corporation103NH 3CH +17通过极性嵌入基团保留水 可完全兼容100%水相屏蔽硅醇基，对碱性化合物峰形更佳 提供与C18不同的选择性pH 7.0痢特灵(Furazolidone)原料药的杂质分析实例Ligand type:Trifunctional AmideParticle size:1.7, 3.5 µm Ligand density:7.5 µmol/m 2Carbon load:12% Endcap style:NonepH range:2-11Ligand type:UnbondedParticle size:1.7, 2.5, 3.5, 5 µm Ligand density:— Carbon load:— Endcap style:— pH range:1-9Minutes123321=0.26=0.25Reversed-PhaseXBridge C 18HILICXBridge HILIC1. 6-acetyl morphineHILIC 可以提供和反相不同的分离选择性应用于生物医药行业的：—肽的反相分析与分离纯化—小蛋白药物的反相分析—寡核苷酸的离子对反相分析与分离纯化杂化颗粒，无以伦比的流动相pH与温度的耐受性完整的方法与应用资料，整体方案专用柱，经肽谱、蛋白混标或寡核苷酸阶梯混标质控确保批次重现性工作者的需求：：解决色谱工作者的需求2.5,3.5, 5, 10 µm 适用于高pH方法！！耐受较高温度条件！！耐受性极佳！通用性好！柱效高！多种键合相、多种柱规格适应各种项目需要！色谱工作者的需求和问题：越来越多的极性化合物项目！ 极性化合物的保留难？！离子对试剂应用不便！峰形？！柱耐受性？！1. Thiourea2. 5-Fluorocytosine (B)3. Adenine (B)4. Guanosine-5'-monophosphate5. Thymine注：所示色谱柱性能比较情况，与具体操作条件相关，并不代表所有应用情况（法律申明）增强极性化合物保留的专用色谱柱—首选Atlantis T3反相保留反相保留极性化合物首选：提高保留，避免使用离子对试剂 提供pH 2-8全范围的完美峰形 低pH 条件下的耐受性强，柱寿命好积极应对色谱工作者的问题：增强对极性化合物的保留！ 简便的反相条件！ 峰形佳！ 柱耐受性好！ 广受认可与赞誉！色谱工作者的需求和问题：柱效？！柱容量？！载样量高？！中-低pH条件下碱性化合物拖尾严重？！ 样品杂质或相关物质分析及分离？！51V o 234Symmetry ®C 185 µm USP T f = 1.69N = 696151V o234以Amitriptyline （峰5）计算拖尾因子USP T f pH7条件下SunFire™C 185 µm USP T f = 1.26N = 8203MinutesZorbax®SB C18Luna®C18(2)SunFire™C 18Time (minutes)246810Conditions : 3 µm, 3.0 x 150 mm 28:72 乙腈/ 20 mM 甲酸; 0.7 mL/min; 30 °CSN NNOHCl在方法开发过程中，峰拖尾会对任何特定含量方法影响其分离度与灵敏度。
hplc3
液相色谱实用技术色谱柱的使用及保养良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，先测柱效保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件定期检测柱效定期检测仪器的谱带展宽色谱柱的使用及操作色谱柱的保养（一）样品方面除去微粒及杂质了解样品在流动相中的溶解度如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用色谱柱的保养（二）流动相方面除去微粒纯度的要求超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低值在填料的允许范围内缓冲液的pH值，在填料的允许范围内缓冲液（盐）的浓度溶剂色谱纯并与填料相匹配溶剂：色谱纯，并与填料相匹配溶剂中的杂质含量流动相对样品的溶解度有机溶剂或水的比例在线的保护装置给色谱柱提供物理的保护 除去样品及流动相中的颗粒 给色谱柱提供化学的保护 防止分析柱被化学污染装置在线过滤器自装填料保护柱预装保护柱在线过滤器In-Line Filter防止颗粒在色谱柱头累积优点：基本不影响柱效在需要高柱效的分析时中常用（如：氨基酸分析）可更换的消耗品更换滤芯更换垫圈保护柱可避免化学污染。
多数保护柱影响到整个色谱柱的柱效，特别是在用微柱时保护柱的种类普通自装填料的保护柱影响柱效同装填技术有关柱效降低较大影响柱效同装填技术有关，柱效降低较大 商品预装保护柱有各种填料的预装柱供选择，使用方便。
填料容积较小，也引起柱效降低可换芯式保护柱新型的保护柱适应的用户类型非常脏, 非常复杂的样品本底生化样品,, 溶液环境样品食品不想作太多的固相萃取不想降低柱效新型的保护柱Sentry Guard 的特点特点高质量, 高效填料-不损失柱效-增加分析柱效增加适应范围20mm柱长-脏样品载荷能力大，能延长保护柱寿命手可拧紧接头，安装时不需要工具通用柱套-适用于所有的HPLC柱(3.9及4.6内径)整体式-使用方便，容易各种不同填料配合色谱柱色谱柱的清洗色谱柱的存放存放前的处理除去杂质、盐合适的存放溶剂避免色谱柱床的干枯 避免机械震动防止细菌生长注意存放的温度色谱柱常见毛病柱压过高多少才算高?不同色谱柱有差异不同系统有差异不同溶剂有差异柱效低复性差重复性差不出峰，回收率低柱压过高为什么柱压会过高 微粒堵塞样品流动相密封垫柱床膨胀不可逆吸附细菌生长柱效低为什么柱效低色谱柱被污染过滤片部分堵塞样品、流动相或密封垫的细小颗粒造成的堵塞 色谱柱内的死体积流动相pH值及组成不合适造成固定相流失流速急剧变化造成固定相物理损坏机械震动造成固定相产生裂缝柱床收缩或干枯重复性差、回收率低实验的重复性差色谱柱被污染流动相pH值及组成不合适造成键合相流失 样品溶剂不同或样品本身不稳定回收率低不出峰回收率低，不出峰不可吸附“不可逆”吸附固定相过强或流动相过弱非特异性吸附色谱柱以外的因素（一）“柱效”问题，不一定是色谱柱问题！仪器问题：连接不好造成死体积进样器检测器管路，连接口保护柱在线过滤器堵塞流动相问题：色谱柱未平衡好进样量太大色谱柱与仪器的联接除HP外，不同公司产品，其接头不同。
高效液相色谱(HPLC)简介
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分；
按极性分：极性、弱极性、非极性；
按使用方式分：固定组成淋洗和梯度淋洗。
常用溶剂： 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、
乙腈、水。
采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动
相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。
3. 流动相选择
在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累 积，损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱 子。如使固定液溶解流失，酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并 在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测 器时，流动相不应有紫外吸收。
高效液相色谱（HPLC）简介
目
1, 液相色谱分析法的发展 2, 高效液相色谱的特点 3, 高效液相色谱仪简介 4, 液相色谱法介绍 5, 分析方法的选择 6, 实际分析操作过程
录
1、液相色谱分析法的发展
20世纪初： 俄国植物学家茨维特提出经典液 相色谱法。经典液相色谱法包括柱色 谱、薄层色谱、纸色谱。 20世纪60年代末： 随着色谱理论的发展、高效细微 固定相的开发、高压恒流泵及高灵敏 度检测器的应用，高效液相色谱法得 到了突破性的发展。
a. 紫外检测器
应用最广，对大部分有机 化合物有响应。 特点： 灵敏度高；
线性范围宽；
流通池可做得很小(1mm × 10mm ，容积 8μL)； 对流动相的流速和温度变化不敏感； 波长可选，易于操作； 可用于梯度洗脱。
b. 光电二极管阵列检测器
紫外检测器的重要进展；
高效液相色谱柱基础知识
色谱柱的种类
➢ 高分子聚合物 • 常用的是以高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或聚甲基丙
烯酸酯为基质的球形填料。 • 压力限度比无机填料低； • 在整个pH范围内稳定，可以用NaOH或强碱来清洗
分离有机酸、碱、盐这些离子型化合物。 ➢ 样品容量随烷基链长增加而增大，且长链烷基可
使溶质的保留值增大，并常常可改善分离的选择 性；短链烷基键合相具有较高的覆盖度，分离极 性化合物时可得到对称性较好的色谱峰。苯基键 合相与短链烷基键合相的性质相似。
反相键合相色谱
流动相为极性的水或缓冲液，常加入甲醇、 乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶 的有机溶剂以调节保留时间。
ZORBAX Extend-C18，pH9~12, ➢ 基质的颗粒度 颗粒度越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小)，分离度越好，柱压
越高(渗透性差)，常用5μ。 ➢ 基质的颗粒分布 颗粒分布越宽:柱效低(渗透性差) ➢ 基质的颗粒形状 球型:柱效高、重现性好、柱床结构均匀 无定型（不规则形状）：柱床结构不均匀,流动相线性速度不均匀，
色谱柱 ； • 聚合物基质在流动相发生变化时会出现膨胀或收缩，
对于小分子化合物柱效低； • 主要用于大分子化合物，常制成凝胶柱或离子交换
柱。
化学键合相色谱柱
➢ 定义：将有机官能团通过化学反应共价键合到硅胶 表面的游离羟基上而形成的固定相称为化学键合相。
➢ 种类 非极性键合相（反相）：键合相表面基团为非极性
高效液相色谱柱基础知识
张润平
色谱柱的构造
✓ 色谱柱由柱管、填料压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、 于70 kg/cm2 时，也可采用 厚壁玻璃或石英管。为提高柱效，减小管壁效应，管内壁要求 有很高的光洁度，不锈钢柱内壁多经过抛光。
waters hss t3色谱柱说明书
waters hss t3色谱柱说明书全文共四篇示例，供您参考第一篇示例：一、引言色谱柱是液相色谱技术中至关重要的部分，它直接影响到色谱分离的效果与结果。
Waters HSS T3色谱柱作为Waters公司的一款重要产品，具有高效分离、优异耐久性和广泛适用性等特点，受到了广泛的关注和应用。
本文将详细介绍Waters HSS T3色谱柱的特点、使用方法以及注意事项，希望能够帮助用户更好地了解和使用该产品。
二、产品特点1. 高效分离：Waters HSS T3色谱柱采用特殊的填料材料和粒径分布，具有优异的分离能力，能够有效解决样品分析中的复杂性和交叉干扰问题。
2. 广泛适用：该色谱柱适用于多种样品类型的分离，包括有机物、药物、生物样品等，具有很强的通用性。
3. 耐久稳定：Waters HSS T3色谱柱具有良好的耐久性和稳定性，能够承受高压和多次重复使用，保证分析结果的可靠性。
4. 高分辨率：由于HSS T3色谱柱的独特设计和材料特性，使得其在保证分离效果的能够提供高分辨率的分析结果，有利于样品成分的准确检测和定量分析。
5. 良好的再生性：Waters HSS T3色谱柱在适当条件下具有良好的再生性能，可以反复使用，延长色谱柱的使用寿命，降低分析成本。
三、使用方法1. 准备工作：在使用Waters HSS T3色谱柱前，应先进行适当的准备工作，包括浸泡、平衡和洗脱等步骤，以确保色谱柱内部的填料材料和介质处于最佳状态。
2. 样品预处理：对于不同类型的样品，需进行相应的预处理工作，如溶解、过滤、稀释等，以确保样品的纯度和适用性，避免对色谱柱造成不必要的损坏或污染。
3. 流动相选择：根据样品类型及分析要求，选择合适的流动相，并根据需要进行适当的调节和混合，以保证在色谱分离过程中的稳定性和有效性。
4. 良好的保养：在使用完成后，应及时对色谱柱进行适当的保养和再生，包括冲洗、干燥、存放等步骤，以保证色谱柱的长期稳定性和再生性能。
3微米,hplc色谱柱
3微米,hplc色谱柱
3微米是指色谱柱的填料粒径，而HPLC是高效液相色谱的缩写。
色谱柱的填料粒径是指填料颗粒的平均直径，通常用微米（μm）来
表示。
填料粒径越小，色谱柱的分离能力和分离速度通常会更好。
对于HPLC色谱柱来说，3微米的填料粒径意味着填料颗粒非常细小，这有助于提高分离效率和分辨率。
在HPLC分析中，使用3微米的填料粒径的色谱柱通常能够实现
更快的分离和更高的分辨率。
这对于需要高效分离的样品来说是非
常重要的。
另外，3微米的填料粒径也意味着色谱柱的压力会更高，因为需要更大的压力才能将溶剂推动通过细小的填料颗粒，所以在
选择色谱柱时需要考虑色谱系统的最大承受压力。
总的来说，3微米的填料粒径对于HPLC色谱柱来说是一种常见
的规格，它能够提供高效的分离和分辨率，但也需要考虑到对色谱
系统的压力要求。
在实际选择和使用时，需要根据具体的分析要求
和色谱系统的特性来进行综合考虑。
hplc三相表 模块
hplc三相表模块HPLC三相表模块是一种高效液相色谱仪的组成部分，用于测量和分析样品中的三相物质。
以下是对HPLC三相表模块的详细介绍：一、HPLC三相表模块的定义HPLC三相表模块是指在高效液相色谱仪中用于同时测量和分析三个相互独立相的模块。
这种模块通常由三个独立的检测器组成，每个检测器对应一个相。
通过这种模块，可以同时获取样品中三个相的分离情况和浓度信息。
二、HPLC三相表模块的组成部分1. 进样器：进样器是用于将样品引入HPLC系统的部件，它可以通过自动或手动方式进行样品的进样。
2. 色谱柱：色谱柱是HPLC系统中的核心部件，用于对样品中的物质进行分离。
色谱柱通常由小颗粒的固定相和大的颗粒的流动相组成。
3. 泵：泵是用于将流动相输送到色谱柱中的部件。
它可以通过电动或气动方式提供稳定的流动相流量。
4. 检测器：检测器是用于检测样品中物质的浓度的部件。
在HPLC三相表模块中，通常使用三个独立的检测器，分别对应三个相。
5. 数据处理系统：数据处理系统是用于收集、处理和分析HPLC检测数据的部件。
它可以通过计算机或其他数据处理设备实现。
三、HPLC三相表模块的工作原理HPLC三相表模块的工作原理基于高效液相色谱技术。
样品经过进样器进入系统后，被注入色谱柱中。
在色谱柱中，样品中的物质受到固定相和流动相的作用，根据它们的相互作用力不同，实现分离。
分离后的物质通过检测器进行检测，检测器将信号输送到数据处理系统，从而得到样品中三个相的浓度信息。
四、HPLC三相表模块的应用HPLC三相表模块广泛应用于化学分析、生物检测、环境监测等领域。
它可以用于分析样品中的三相物质，如药物、代谢物、蛋白质等。
通过HPLC三相表模块，可以同时获得三个相的分离情况和浓度信息，提高分析效率和准确度。
五、HPLC三相表模块的注意事项1. 色谱柱的选择：色谱柱的选择对分离效果至关重要。
根据样品中物质的性质，选择合适的色谱柱，以实现良好的分离效果。
HPLC色谱柱介绍
商品键合相含碳量一般为2%～29%。含碳量 不同与表面覆盖度，固定相的极性，载样 量有关。 表面覆盖度—参加反应的硅醇基数目占硅 胶表面硅醇基总数的比例。 封尾（封端）—即用化学反应将键合相的 载体硅胶的残存硅醇基去掉的方法。封尾 后的ODS吸附性能降低，稳定性增加，这种 键合相只具分配作用，具有强疏水性。
ZORBAX Extend-C18色谱柱——采用C18二齿结构并 用特有的步骤进行双基封端。 在pH高达11.5的条件下，用于分离碱性、酸性、中 性化合物，峰形优良，柱寿命长。 注意：pH范围2-11.5。 使用有机缓冲液，浓度 以10-50mM为好。在中 高pH下避免使用磷酸盐， 碳酸盐缓冲液，最高操 作温度60℃，最佳温度 ﹤40℃。
非极性键合相 表面基团为非极性烃基，如 C 18 、 C8 等， 主要用于 RP 色谱。 C18 是最常用的非极 性键合相，将十八烷基氯硅烷与硅胶表 面的硅醇基经多步反应而成。
R1 Si OH + Cl Si R2 C18H37 Si O R1 Si R2 C18H37 + HCl
1（2，3）：1
新型固定相 ZORBAX SB-C18键合相 使用独特的键合方式， 用特殊的二异丁基硅烷 对硅氧烷键进行保护， 防止了极端pH和高温条 件下键合相的水解，这 些大侧链阻止了键合相 的流失，提高了重现性， 延长了柱寿命。 注意：pH范围0.8-8.0，最高操作温度90℃，
缓冲液浓度0.01-0.02M，避免使用磷酸盐与碳酸盐
色谱柱 150× 4.6mm 200× 4.6mm 250× 4.6mm
柱体积 2.5ml 3.3ml 4.2ml
冲洗体积 50ml 65ml 80ml
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色谱柱使用保养知识
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3
内容
色谱柱应用基础 HPLC色谱柱介绍
色谱柱使用保知识
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4
高效液相色谱柱简介
色谱柱是一根填满填料的管子
柱管的材料(塑料,玻璃,不锈钢…)和尺寸(内径,长短)不尽相同
Waters HPLC色谱柱
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1
Waters 色谱柱发展历史
ACQUITY UPLC® BEH Amide ACQUITY UPLC® BEH Glycan XBridge Amide XSelect HSS HPLC Columns ACQUITY UPLC® HSS Cyano & PFP columns XSelectTM HSS Cyano & PFP columns XP 2.5 µm Columns
管内的填料更是种类繁多,主要分为三大类 – 硅胶基质 – 聚合物基质 – 无机和有机硅胶杂化基质 色谱柱的性能主要取决于填料的性质和填充技术
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5
硅胶颗粒的形状
不规则形状 (Irregular)
– 大硅胶颗粒研磨，筛分
– 不粒尺寸和表面积限制
有机基质 (高聚物)
杂化颗粒技术(具硅-碳键机制)
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第一代杂化颗粒的合成过程
Waters 专利技术 荣获2000年全球 R&D 100 大奖
硅甲基嵌入型聚乙氧基 硅烷 (MPEOS)
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四乙氧基硅烷 (TEOS)
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27
硅胶表面键合相的水解（PH<2）
O Si O O
H3C Si Cl CH3
OH
C C
C C
C C
C CH3
+
H3C
C Si C CH3
C C
C C
C CH3
O Si O O
O
+ HCl
Low pH (hydrolysis of ligand)
H3C
LiChrosorb RP-18
Symmetry C8 Resolve C-18
15
12 12
10.3
12.5 12.4
Ultrasphere ODS
Partisil ODS-3 mBondpak C-18 Nova-Pak C-18
11
11 10 7
11.3
12.0 7.9 5.5
10
130Å and 300Å 1.7 um BEH Particles （电镜照片）
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11
填料的合成 —2.键合配体（键合相）
填料的内孔表面 流动相
色谱填料是多孔颗粒（“海绵” ），99％发生色谱分离的表面 是在内孔表面
Analyte
必须允许流动相进入内孔以 保证待分析和分离的化合物 能够和色谱填料有保留
OH
O Si O O
C Si C CH3
C C
C C
C CH3
+
HO
Note: Sometimes called “Column Bleed”
28
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硅胶的溶解（PH>8）
Nucleophilic attack
• Complete dissolution of Silica • Catastrophic column failure • Short lifetimes
• 因嵌入硅甲基的阻挡, 颗粒表面溶解速 度明显减缓 • 柱寿命大大延长
32
XBridge:第二代杂化填料的合成
美国专利号 6,686,035 B2
硅胶基体中 插入的桥式乙基
EtO
CH2 CH2 OEt O Si Si O Si
O
OEt Si O Et O
O Si OEt O
4
O Et
EtO
Si
Si OEt EtO EtO
µBondapak™
Styragel® Spherisorb® DeltaPak® PrepPak® 1958 1984 1964 1973 1976 1979 1986 Symmetry® 1992 1994 SymmetryShield®
ACQUITY UPLC® BEH SunFire™ Columns XTerra®
15
对色谱柱填料的了解(一)
键合相化学 – 影响化合物的分离度：α – 不同键合相对不同种类的化合物分离不同 – 可能导致色谱的分离机理不同 – 如：C18、C8、CN
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16
键合相色谱柱
以硅胶为基质，通过化学键合方式把C18、C8、NH2等 基团联在基质上，作为固定相 优点∶ – 固定相稳定，不易流失 – 应用广泛，可使用多种溶剂 – 消除硅羟基的不良影响
+
EtO EtO Si EtO
OEt CH2 Si OEt CH2 OEt
EtO
OEt
n
聚乙氧基硅烷 (BPEOS)
Anal. Chem . 2003, 75, 6781-6788 ©2014 Waters Corporation
四甲基硅烷 (TEOS)
双(三乙氧基硅基)乙烷 (BTEE)
33
将高pH 柱稳定性推向新极限
甲基三乙氧基硅烷 (MTEOS)
31
为何杂化颗粒柱可增加 在高pH下的柱寿命？
Surface modified Silica Particles XTerra® Hybrid Particles
普通硅胶柱
基于杂化颗粒的Xterra 柱
• 硅胶快速溶解 • 严重的柱失效 • 柱寿命短暂
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缺点∶
– pH值不能小于2(键合相水解) – 同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同
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17
不同色谱填料的选择性差异
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19
选择性差异来源
填料的品牌-不同硅胶颗粒基质
o
o
密度，表面积，孔径
纯度(残留硅羟基活性不同)
注意：孔径是分布值
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Si-OH = 硅羟基(Silanol)
8
平均孔径/孔体积
孔径/孔体积分布
– 大的孔径可分析高分子量 的分子
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9
填料的孔（多孔式液相色谱颗粒）
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21
残基处理的效果
① 抗坏血酸 ② 烟酰胺 ③ 对氨基苯甲酸 ④ 哌咯西叮 ⑤ 核黄素
⑥ 苯酚
⑦ 盐酸硫胺
NovaPak C18
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未封口 C18
22
对色谱柱填料的了解(三)
含碳量
o
含碳量越高，k'值越大（固定相传质效应增加）
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Waters专利的柱填料颗粒
优点
无机基质 (C18 –硅胶)
• 机械强度高 • 柱效高 • 保留稳定 • 很宽的pH应用范围 • 无离子型作用 • 化学稳定性好
缺点
• 有限的pH应用范围 • 对碱性分析物拖尾 • 化学不稳定性 • 机械强度不佳 • 柱效低 • 保留行为难以预测
球形（Spherical）
– 目前流行的分析填料 – 形更好的性能，重现性
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C18 填料的合成 —1.硅胶基质的合成（多孔）
硅胶颗粒基质
硅羟基
Polyethoxysilane (PEOS)
Tetraethoxysilane (TEOS)
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对色谱柱填料的了解(四)
平均颗粒度，颗粒度分布 – 颗粒度
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颗粒度越小：柱效越高(传质好，涡流扩散小) 柱压越高(渗透性差) 颗粒分布越宽:柱效低(渗透性差) 球型:柱效高、重现性好、柱床结构均匀 无定型：柱床结构不均匀,流动相线性速度不均 匀谱带扩展
ACQUITY UPLC® BEH200 SEC XSelect CSH HPLC columns ACQUITY CSH Columns Viridis SFC Columns ProteinPak High Rs IEX
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内容
色谱柱应用基础 HPLC色谱柱介绍
高含碳量
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有利于不易保留的化合物的分离
水解稳定性好，重现性好 有利于极性化合物的拖尾改善 有利于分析中性及碱性化合物 降低溶剂损耗
低含碳量
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不同色谱柱的含碳量
色谱柱
Symmetry C18 Zorbax ODS C% 19 17 k'苊 (50/50的乙腈/水) 17 15.7