甲硝唑栓微生物限度检查方法验证
甲硝唑栓微生物限度检查方法学验证
甲硝唑栓微生物限度检查方法学验证费夷敏;洪岩;魏宇梅;林梦感;杨国红;王曙光【摘要】目的：建立甲硝唑栓的微生物限度检查方法。
方法按照《中华人民共和国药典》2010版二部修订版的新要求进行方法学验证，采用了薄膜过滤法对细菌、真菌及酵母菌计数和控制菌的检查。
结果细菌、真菌及酵母菌的回收率均70.0%以上，控制菌检查中，各阳性试验菌均检出，阴性对照无菌生长。
结论薄膜过滤法可消除甲硝唑栓的抑菌作用，适用于该制剂的微生物限度检查。
【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2013(000)033【总页数】2页(P54-55)【关键词】甲硝唑栓;微生物限度检查;薄膜过滤法;验证【作者】费夷敏;洪岩;魏宇梅;林梦感;杨国红;王曙光【作者单位】上海现代制药股份有限公司，上海201802;上海现代制药股份有限公司，上海201802;上海现代制药股份有限公司，上海201802;上海现代制药股份有限公司，上海201802;上海现代制药股份有限公司，上海201802;上海现代制药股份有限公司，上海201802【正文语种】中文【中图分类】R961甲硝唑栓具有抗原生动物和专性厌氧细菌的作用，适用于治疗滴虫性阴道炎及敏感厌氧菌所引起的细菌性阴道病，是妇科的常用药物[1]。
为了能够有效的控制甲硝唑栓的质量，及保证甲硝唑栓微生物限度检查方法的科学性和检验结果的准确性，笔者依据《中华人民共和国药典》2010版二部修订版对微生物限度检查的最新要求，进行了微生物限度检查方法学的验证。
1.1 培养基与试剂胰酪大豆胨琼脂、沙氏葡萄糖琼脂、胰酪大豆胨肉汤、甘露醇氯化钠培养基、溴化十六烷基三甲铵、沙氏葡萄糖肉汤、沙氏葡萄糖琼脂、十四烷酸异丙酯。
1.2 菌种金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、铜绿假单胞菌CMCC（B）10104、枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、白色念珠菌CMCC（F）98001。
本次微生物验证所使用的菌种均来源于上海市药品检验所，且菌株传代均不超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法验证方案.doc
2015年版中国药典微生物限度检查方法验证方案人工牛黄甲硝卩坐胶囊微生物限度检查方法验证方案下表用于记录修订/变更主要内容及历史。
1.概述2.验证冃的和范I韦I3.组织及职责4.验证进度计划表5.验证所需要的仪器设备及相关文件的确认6.验证所需要的菌种、培养基、检验样品的确认7.验证项冃和验证方法7.1试验菌株7.2需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证的菌液制备7.3需氧菌总数检查、霉菌和酵母菌总数检查方法验证■■常规倾注平皿法7.4需氧菌总数检查方法验证一离心沉淀■薄膜过滤法7.5控制菌检查方法验证一离心沉淀■薄膜过滤法&偏差与漏项控制9.验证报告会审1.概述我公司生产品种人工牛黄甲硝哇胶囊，产品微生物限度检查项目为需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、以及大肠埃希菌检查和沙门菌检查。
参照《中国药典》2015版四部附录1105：微生物计数法，以及1106：控制菌检查法的规定，本公司对该产品的微生物限度检查方法予以验证。
通过验证以确认所采用的微生物限度检查方法适用。
人工牛黄屮硝卩坐胶囊处方中含有甲硝呼、人工牛黄以及常用辅料成分，文献资料介绍屮硝卩坐对细菌有抑菌特性，对霉菌和酵母菌无抑菌活性。
屮硝畔在水中微溶，可以通过离心沉淀•薄膜过滤法去除其对微生物生长的影响。
本验证方案通过试验菌株的回收率测试，首先确认常规倾注平皿法是否适用于木品的微生物限度检查；如常规倾注平皿法不适用，则进一步验证可去除供试晶抑菌物质的离心沉淀•薄膜过滤法是否适用于本晶的微生物限度检查。
本验证方案根据样晶特性制定微生物限度检查方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
2.验证目的和范围验证该产品的微生物限度检查方法的适用性，对其有效性进行评价，保证检验结果的可靠性。
本验证方案采用3批按GMP要求组织生产的人工牛黄甲硝呼胶囊，进行微生物限度检查方法的验证。
3.组织及职责3.1验证方案和验证报告的起草、审核、批准验证方案曲质量部QC组负责起草，出质量部审核，最终出质量负责人批准。
微生物限度检验方法验证方案
微生物限度检验方法验证方案1.适用范围本方案适用于本公司各品种微生物限度检验方法的验证。
2.目的通过验证确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度的测定。
3.职责项目责任人：负责验证方案的起草及具体实施。
验证管理员：负责验证工作的组织、协调及管理。
QA现场监控员：负责验证实施过程中的监督检查，取样，确保结果的可靠性。
QC负责人：负责验证方案中检验方法的审核及按照规定的取样计划对标准检验操作程序的准确执行，负责组织实施。
QC检验员：负责验证方案的起草与参与实施，并对所测数据准确性负责。
质量部经理：负责验证方案及报告的审核和批准。
4.内容4.1.概述通过验证以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定；确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查。
根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
4.2细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证当建立药品的微生物限度检查时，应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。
.验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。
4.2.1.验证用菌株及菌种要求大肠埃希菌【CMCC（B）44102】、金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、黑曲霉【CMCC（F）98003】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】。
大肠埃希菌为革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，枯草芽孢杆菌为产芽孢杆菌，前述菌株作为细菌计数验证用菌株；黑曲霉为霉菌，白色念珠菌为酵母菌，作为霉菌及酵母菌计数验证用菌株。
验证实验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为0 代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
最新微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案六、验证内容1.供试液的制备1.1.取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:10的供试液。
1.2.取1:10供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:100的供试液。
1.3.取1:100供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，充分振摇使混匀，作为1:1000的供试液。
备注：供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
2.菌液制备2.1.接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35℃培养18～24小时；分别取上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至、、、制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.2.接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，20〜25℃培养2～3 天；取此培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，依次稀释至，制成每1ml含菌数为小于100cfu的菌悬液。
2.3.将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，使大量的孢子成熟。
加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至，制成每 1ml 含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。
2.4.上述菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时之内使用；若保存在2~8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2~8℃，在验证过的贮存有效期内使用。
甲硝唑检验内容操作方法
甲硝唑检验内容操作方法甲硝唑是一种常用的药物，可用于治疗细菌和原虫感染。
甲硝唑检验主要用于药物的质量控制和药效评估。
下面是甲硝唑检验内容和操作方法的详细介绍：一、甲硝唑的化学性质与性质检验：1. 甲硝唑是一种白色到浅黄色结晶性粉末，易溶于水和乙醇，微溶于丙酮和氯仿，几乎不溶于醚。
通过观察甲硝唑的颜色、结晶形态和溶解性，可以初步判断其质量。
2. 甲硝唑具有较强的氧化性，可与还原剂发生反应。
药物样品中的杂质可能与甲硝唑发生氧化反应，降低其药效。
通过测定甲硝唑的含氧量，可以评估其氧化性和纯度。
二、甲硝唑的含量检验：1. 含量检验是甲硝唑检验中非常重要的一项内容。
可以使用高效液相色谱(HPLC)等检测方法，来测定甲硝唑的含量。
首先，准备一定浓度的甲硝唑标准溶液作为对照，然后将样品溶解在适量的溶剂中，并通过色谱柱进行分离与检测。
根据对照品与样品的峰面积比较，可以确定样品中甲硝唑的含量。
2. 另一种常用的含量检验方法是紫外分光光度法。
该方法通过测定甲硝唑在一定波长下的吸光度，来计算其含量。
首先，将甲硝唑样品溶解在适量的溶剂中，然后使用紫外分光光度计测量样品在特定波长下的吸光度。
通过建立标准曲线，可以计算出样品中甲硝唑的含量。
三、甲硝唑的溶解度检验：溶解度检验是评估甲硝唑质量的一个重要指标。
可以通过测定甲硝唑在不同溶剂中的溶解度，来评估其溶解性。
首先，将一定量的甲硝唑样品加入不同的溶剂中，并用摇床加热摇匀，待其全部溶解后，采用适当的方法（例如静态法或动态法）测定甲硝唑的溶解度。
通常，溶解度越高表示甲硝唑的纯度越高。
四、甲硝唑的稳定性检验：甲硝唑的稳定性检验主要通过进行加速试验来评估。
将甲硝唑样品分别暴露在不同条件下，如高温、高湿度、氧化剂等环境下，然后定期进行质量评估。
通过观察甲硝唑的外观、含量和溶解度的变化，可以判断其稳定性和质量持久性。
五、甲硝唑的微生物限度检验：微生物限度检验是用来评估甲硝唑样品是否存在细菌、真菌和酵母等微生物污染。
微生物限度检查方法的验证
ygfyzy 整理
微生物限度检查方法的验证
包括: 1.细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证——准确性（回收率） 2.控制菌检查法的验证——专属性 3.实例
一、细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
1.验证的目的： 确认所采用的方法适合该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定。照
此检查法和检验条件进行供试品细菌、霉菌、酵母菌数检查能保证检验 结果的准确、可靠。 2.验证的步骤： •根据样品特性，制定检验方法和检验条件。 •保证验证试验所用的仪器、培养基和试剂等均符合试验要求。 •按制定的方法进行试验。 •根据验证结果，判断是否符合验证的标准。若符合,按验证的方法和条 件进行药品的微生物限度检查；若不符合，应重新设立验证方案，再进 行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
验证时，按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法 及要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。验证试验至少应进 行 3 次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 3. 验证用菌株： 细菌计数验证用菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌。 霉菌、酵母菌计数验证用菌株：白色念珠菌、黑曲霉。
回收率均能达到 70%以上的检测方法为准。 霉菌和酵母菌以各试验菌（白色念珠菌、黑曲霉）的回收率均能达
到 70%以上的检测方法为准。 11.4 计数方法的验证——结果判断
在 3 次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应均不低于 70%。
若试验组的菌回收率均不低于 70%，则按此供试液制备方法和计数 法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌数能保证检验结果的准确、可靠。
(1)接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养 物至 10ml营养肉汤中，35～37℃培养 18～24 小时，取此培养液 1ml加 0.9％无菌氯化钠溶液 9ml，采用 10 倍递增稀释法，稀释至 10-5～10-7， 使菌数约为 50～100cfu/ml。
甲硝唑片微生物限度检查方法验证
甲硝唑片微生物限度检查方法验证
史永惠;张烨;安月华;孟美英;王艳霞
【期刊名称】《北方药学》
【年(卷),期】2013(000)006
【摘要】目的：验证甲硝唑片微生物限度检查的方法。
方法：采用菌液组、试验组、供试品对照组、稀释剂对照组进行3次独立平行试验，分别计算各试验菌每次试验的回收率。
结果：用药典常规法和培养基稀释法试验菌的回收率均低于70%，改用离心集菌薄膜过滤法后，试验菌的回收率不低于70%。
结论：采用离心集菌薄膜过滤法测定其细菌数、霉菌和酵母菌数及控制菌。
【总页数】1页(P15-15)
【作者】史永惠;张烨;安月华;孟美英;王艳霞
【作者单位】内蒙古鄂尔多斯市食品药品检验研究中心康巴什 017000;内蒙古鄂尔多斯市食品药品检验研究中心康巴什 017000;内蒙古鄂尔多斯市食品药品检验研究中心康巴什 017000;内蒙古鄂尔多斯市食品药品检验研究中心康巴什017000;内蒙古鄂尔多斯市食品药品检验研究中心康巴什 017000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.1
【相关文献】
1.微生物限度和无菌检查方法验证中存在的问题 [J], 郭焕君
2.3种不同抑菌性的耳用制剂微生物限度检查方法验证及应用 [J], 金文丽;王艳;隆
旭红;刘光斌;谢静
3.复方青香胶囊微生物限度检查方法的建立和验证 [J], 郝媛;姚敏娜;王昱锦
4.20种医院制剂微生物限度检查方法验证及应用 [J], 金文丽;王艳;隆旭红;刘光斌;谢静;董玉兰
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药品微生物限度检查方法验证步骤及示教
药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。
细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。
特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。
2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。
（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。
（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。
6. 写出验证资料。
示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。
2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。
霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。
2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。
中国药典2015年版甲硝唑检验原始记录
【性状】㈠．外观性状1.检验结果：本品为。
2.标准规定：本品为白色至微黄色的结晶或结晶性粉末；有微臭。
本品在乙醇中略溶，在水或三氯甲烷中微溶，在乙醚中极微溶解。
3.结论：□符合规定□不符合规定检验人/日期：复核人/日期：㈡.熔点1.仪器：熔点仪型号、编号鼓风干燥箱型号、编号2.操作：取供试品适量，研细，置105℃干燥，然后分取供试品粉末适量，置熔点测定用毛细管中，借助长短适宜的洁净玻璃管，垂直放在实验台面上，将毛细管自上口放入使自由落下，反复数次，使粉末紧密集结在毛细管的熔封端直至装入供试品的高度为3mm。
俟熔点仪温度上升至149℃时，将装有供试品的毛细管浸入传温液中部；继续加热，调节升温速率为每分钟上升1.0～1.5℃，记录供试品在初熔至全熔时的温度，重复测定3 次，取其平均值，即得。
3.检验结果：①℃～℃②℃～℃③℃～℃（极差≤0.5℃）平均值= ℃～℃4.标准规定：熔点为159℃～163℃。
5.结论：□符合规定□不符合规定检验人/日期：复核人/日期：㈢.吸收系数1仪器：电子天平型号、编号紫外-可见分光光度计型号、编号2.试剂：盐酸溶液（9→1000）配制批号3.操作：取本品，精密称取约16.3mg，置50ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀制成每1ml中约含13μg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在277nm的波长处测定吸收度，吸收系数(E%11cm)为365～389。
AV4.计算公式及结果：E%11cm =----------100WW = g A = V(稀释倍数)=E%1= =1cm)为365～389。
5.标准规定：吸收系数(E%11cm6.结论：□符合规定□不符合规定检验人/日期：复核人/日期：【鉴别】㈠ .1.仪器：电子天平型号、编号2.试剂：氢氧化钠试液配制批号稀盐酸配制批号3.操作及结果：取本品 mg（约10mg），加氢氧化钠试液2ml，微温，即得溶液（应为紫红色）；滴加稀盐酸使酸性后即变成（应为黄色），再滴加过量氢氧化钠试液则变成（应为橙红色）。
甲硝唑诺氟沙星栓微生物限度检查方法研究
［ ｙｗｏｄ 】 ｔ ｎｄ ｚｌ－ ｏｆ ｘ ｃ ｕ ｐ ｓｏ ｅ； ｍ ｇｎｔ； ｍｂａ ｅｆｔ ｔ ｎ Ｎ ｕ ａｉ ｒ Ｋｅ ｒ ｓ Ｍｅ ｏ ｉａｏ ｎ ｒｏａ ｉ Ｓ ｐ ｏｉ ｒ ｓ Ｈｏ ｏ ｅａｅ Ｍｅ ｒｎ ｌ ａ ｏ ； ｅ ｔ ｚ ｒ ｅ ｌ ｎ ｔ ｉ ｉｒ ｉ ｒ ｅ ｌ
・
药 品鉴 定 ・
２Ｏ ２第 卷 ４ ０年 月 ７第 期 ｌ
甲硝 唑诺 氟 沙 星栓微 生 物 限度检 查 方 法研 究
周修 森 ， 李道 明
（ 河南省 信 阳市食 品药 品检验 所 ， 南信 阳 河 ４４ ０ ） ６ ０ ０
【 摘要】目的 ： 立 甲硝唑诺 氟沙 星栓微 生物 限度检 查方 法 。方法 ： 建 以含 １ ％吐 温一 ０的 ｐ ＝ ． ８ Ｈ ７０无菌氯 化钠一 白胨 缓 蛋 冲液为溶 剂 ， 匀浆 法制 备供 试 品溶液 ， 用 薄膜 过滤 并在 培养 基 中加 入 中和剂 的方 法 ， 用 采 来进 行 细菌数 的检 测和 控 制 菌检查 。霉菌 及酵 母 菌数 的测 定 ， 可采 用培 养基 稀 释法 。结果 ： 以有效 地 去除 甲硝 唑诺 氟 沙 星栓 的抗 菌成 分 ， 可 ５ 阳性 菌 的回收率 均达 到 ７ ％， 种 ０ 符合 《 国药 典》 ｏ ５年版 的要求 。结 论 ： 建立 的 方法适 用 于 甲硝唑诺 氟 沙星 栓 中 ２ｏ 所
ｃ ｆ ｃ ｉｅ ｙ ｅ ｉ ｎ ｔ ｈ ａ ｔｒｏ ｔ ｉ ｅ ｅ ｔ ｆＭｅ ｒ ｎ ｄ ｚ ｌ — ｏ ｆ ｘ ｃｎ Ｓ ｐ ｏ ｉ ｒｅ ｎ ａ ｅ ｏ ｅ ｏ ｅ ｅ ｆ ５ － ｎ ａ ｅ ｅ ｔ ｌ ｌ ｖ ｍｉ ａ ｅ ｔ ｅ ｂ ｃｅ ｉ ｓａ ｓ ｆ ｃ ｓ ｏ ｔ ｉ ａ ｏｅ — ｒｌ ａ ｉ ｕ ｐ ｓｔｉ ｓ ａ ｄ ｒ ｔ ｆ ｒ ｃ ｖ ｒ ｄ ｏ — ｓ ｏ ｎ ｏ ｏ
甲硝唑栓微生物限度检查方法验证
菌液制备
• (2)接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基 中，23～28℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无 菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～ 10-7，使菌数约为50～100cfu/ml。
菌液制备
• (3)接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基 上， 23～28℃培养5～7天，加3～5ml0.9％无菌氯化钠溶 液洗下霉菌孢子，吸出菌液，取 1ml菌液加0.9％无菌氯 化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6， 使菌数约为50～100cfu/ml
加入50~100cfu/ml的菌液1ml
菌面向上贴于凝固的培养基上（30~35℃ 72h)
平均回收率结果
结果判定
• 从表1 可以看出， 5 株试验菌的试验组菌回收率与稀释 剂对照组的菌回收率均＞70%， 因此， 可采用该法测定 样品的细菌 真菌及酵母菌数。
控制菌检查方法的验证
• 验证试验用菌种：
甲硝唑
• 甲硝唑对缺氧情况下生长的细胞和厌氧 微生物有杀灭作用，它在人体中还原时 生成的代谢物，也具有抗厌氧菌作用， 抑制细菌的脱氧核糖核酸的合成，从而 干扰细菌的生长、繁殖，最终致细菌死 亡。
阴道、尿道给药制剂
• 细菌数 每1g、1ml 或10cm2 不得过100cfu。 • 霉菌和酵母菌数 每1g、1ml 或10cm2 应小于10cfu。 • 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 、梭菌 、白色念珠菌 每 1g、1ml 或10cm2 • 不得检出。
菌液组
50~100cfu/ml的菌液1ml
过滤
取滤膜 菌面向上贴于凝固的培养基上 （30~35℃ 72h)
供试品对照组：
栓剂微生物限度检测方法验证试验报告
微生物限度检测方法验证试验报告一、目的：确认供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性。
二、内容：细菌、霉菌及酵母菌数测定（即：对五株阳性对照实菌株的回收逐一进行验证）。
三、菌种：枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、大肠埃希菌【CMCC（F）44102】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】、黑曲霉菌【CMCC（F）98003】。
四、方法：常规法（）；培养基稀释法（）；薄膜法（）；综合法。
依据《中国药典2005年版》二部微生物限度检查方法验证实验。
五、方法验证：细菌、霉菌及酵母菌数测定，进行三次独立实验，每次平行实验回收率为70%以上。
六、实验：（1）菌液组测定所加的试验菌数。
（2）试验组平皿法计数，取供试品10g（ml），加至含溶化的（温度不超过45℃）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g吐温80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻璃棒搅拌成团后，慢慢加入45℃的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至200ml（1：10），边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为供试液。
取1ml供试液、1ml试验菌液（50～100cfu/ml）分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基，每株菌做两个平板，按平板菌落计数方法测定其菌落数。
（3）供试品对照组取1m供试液注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基，做两个平板，按平板菌落计数方法测定其菌落数。
（4）稀释剂对照组试验时，可用相应的稀释剂替代供试品，加入1ml试验菌（50～100cfu/ml），立即倾入营养琼脂培养基，每株菌做两个平板，按平板菌落计数方法测定其菌落数。
七、结论：通过方法学验证实验证明，采用常规法（）；培养基稀释法（）；薄膜法（）；综合法（），对5株阳性代表菌株回收率均为70%以上。
该方法适用于微生物限度检查复核人：试验人：试验记录（1）批号：验证日期：年月日实验记录（2）批号：验证日期：年月日实验记录（3）批号：验证日期：年月日。
甲硝唑诺氟沙星栓微生物限度检查方法研究
甲硝唑诺氟沙星栓微生物限度检查方法研究作者：周修森,李道明来源：《中国医药导报》2010年第04期[摘要] 目的:建立甲硝唑诺氟沙星栓微生物限度检查方法。
方法:以含1%吐温-80的pH=7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为溶剂,用匀浆法制备供试品溶液,采用薄膜过滤并在培养基中加入中和剂的方法,来进行细菌数的检测和控制菌检查。
霉菌及酵母菌数的测定,可采用培养基稀释法。
结果:可以有效地去除甲硝唑诺氟沙星栓的抗菌成分,5种阳性菌的回收率均达到70%,符合《中国药典》2005年版的要求。
结论:所建立的方法适用于甲硝唑诺氟沙星栓的微生物限度检查。
[关键词] 甲硝唑诺氟沙星栓;匀浆;薄膜过滤;中和剂[中图分类号] R927.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)02(a)-042-03Study on method of microbial limit test for Metronidazole-norfloxacin SuppositoriesZHOU Xiusen, LI Daoming(Xinyang Institute for Food and Drug Control, Xinyang 464000, China)[Abstract] Objective: To establish a method of microbial limit test for Metronidazole-norfloxacin Suppositories. Methods: 1% Tween-80 sterile sodium chloride-peptone buffer(pH=7.0) as the solvent, The solution for test were prepared by homogenate technique, Bacterial count and the controlled bacterium was examined by membrane filtration method and medium added neutralizer, The number of molds and yeast were determined with media dilution method. Results: The method can effectively eliminate the bacteriostasis effects of Metronidazole-norfloxacin Suppositories and rate of recovered of 5-positive bacteria have attained 70%, accord with the standard of Chinese Pharmacopeia (2005 Edition). Conclusion: The method is suitable for microbial limit test for Metronidazole-norfloxacin Suppositories.[Key words] Metronidazole-norfloxacin Suppositories; Homogenate; Membrane filtration; Neutralizer甲硝唑诺氟沙星栓是河南信阳职业技术学院附属医院制剂室配制的外用制剂,以甲硝唑和诺氟沙星为主药、硬脂酸聚烃氧(40)酯为基质混合制成的栓剂。
FA-VD-111 甲硝唑乳膏微生物限度检查方法验证方案
解放军总医院第一附属医院
甲硝唑乳膏
微生物限度检查方法验证方案
1 目的
根据《中国药典》2015版草案中的相关规定，建立甲硝唑乳膏的微生物限度检查方法，并对其进行验证，保证其检验方法的科学性，使检验结果准确可靠。
2 范围
本验证方案适用于甲硝唑乳膏的微生物限度检查方法的验证。
3 人员与职责
质量控制人员负责验证方案与报告的起草，并按照批准的方案实施，完成检验相关数据的采集；质量保证人员负责验证方案和报告的审核；质量管理负责人负责验证方案和报告的批准。
4 培训
本方案实施前应对参加验证人员进行培训，并做好培训记录确保进行验证的人员均能熟悉、掌握验证过程。
5 验证方案
5.1 制剂信息
甲硝唑乳膏为甲硝唑加入至以甘油、三乙醇胺、水组成的水相和以硬脂酸、羊毛脂、凡士林组成的油相乳化混匀后的基质中配制而成，有一定的抗菌作用，临床作为抗阿米巴、抗滴虫、抗厌氧菌药使用。
其质量标准中规定应进行微生物限度检查，每1g样品中细菌数不得超过100cfu，霉菌和酵母菌数不得超过100cfu，并不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。
根据以上特点，本方案中按《中国药典》2015版草案《非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法》（1105）和《非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法》（1106）中相关要求，决定采用稀释剂稀释法消除抑菌性成分对结果的影响，制备供试品溶液；采用平皿法中的倾注法对供试品中的需氧菌总数及霉菌和酵母菌总数进行计数，根据草案对其质量标准中规定的金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌进行检查，并对所选用的计数和检查方法进行验证。
甲硝唑诺氟沙星栓微生物限度检查方法研究
甲硝唑诺氟沙星栓微生物限度检查方法研究
周修森;李道明
【期刊名称】《中国医药导报》
【年(卷),期】2010(007)004
【摘要】目的:建立甲硝唑诺氟沙星栓微生物限度检查方法.方法:以含1%吐温-80的pH=7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为溶剂,用匀浆法制备供试品溶液,采用薄膜过滤并在培养基中加入中和剂的方法,来进行细菌数的检测和控制菌检查.霉菌及酵母菌数的测定,可采用培养基稀释法.结果:可以有效地去除甲硝唑诺氟沙星栓的抗菌成分,5种阳性菌的回收率均达到70%,符合<中国药典>2005年版的要求.结论:所建立的方法适用于甲硝唑诺氟沙星栓的微生物限度检查.
【总页数】3页(P42-44)
【作者】周修森;李道明
【作者单位】河南省信阳市食品药品检验所,河南,信阳,464000;河南省信阳市食品药品检验所,河南,信阳,464000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
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栓剂微生物限度检查方法验证方案
Method Validation Scheme 方法学验证方案栓剂微生物限度检查Approval Before Execution审核和批准××××××有限公司目录1. 概述 (3)2. 目的 (3)3. 范围 (3)4. 依据 (3)5. 责任 (3)6. 人员培训 (4)7. 所需文件 (4)8. 所需仪器仪表校验 (5)9. 试验用培养基、稀释剂、冲洗液、菌种及消毒剂 (5)10. 验证内容 (5)11. 结果分析及评价 (9)12. 进度计划 (9)13. 再验证周期 (10)1.概述根据2015版药典要求，在建立某一药品微生物限度检查方法时应对其检查的方法进行验证，以证明所采用的方法适合于该药品的无菌检查。
若药品的组分或生产工艺发生改变时，还应对其检验方法进行重新验证，以确认供试品在该实验条件下无抑菌性或其抑菌活性可忽略不计。
此次验证应进行3次独立试验，所有验证人员都应进行GMP和岗位SOP培训，设备应进行校验。
2.目的确保在实际检验条件下“醋酸氯己定痔疮栓”微生物限度检查方法的准确性、有效性和重现性。
3.范围适用于“醋酸氯己定痔疮栓”的微生物限度检查方法。
4.依据2015年版中国药典四部通则1105、1106、1107微生物限度检查法5.责任姓名部门职务职责吴霜质量检验部化验员起草验证方案，负责验证方案的实施，数据的收集、统计，完成验证报告。
6.培训所有相关人员均应按如下内容，在验证开始之前进行培训，以使每一名参与验证工作的人员明确自己的职责，更好地完成本次验证工作。
培训内容：①本次验证的性质；②验证的内容③验证小组成员的分工及职责；④验证方法及职责⑤取样计划及职责；⑥验证进度计划安排7.所需文件8.所需仪器仪表的校验9.试验用培养基、溶剂、冲洗液、菌种及消毒剂验证内容培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养、甘露醇氯化钠琼脂培养基稀释剂、冲洗液：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液试液：0.9%无菌氯化钠、1%二盐酸N，N-二甲基对苯二胺试液菌种：包括金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、大肠埃希菌[C MCC（B）44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉菌[C MCC（F）98003]，以上菌种应均由中国药品生物制品检定所提供，传代次数不得超过五代。
TS-VD-550-01人工牛黄甲硝唑胶囊 微生物限度检查方法
非无菌产品微生物限度检查方法适用性试验文件文件名称人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法适用性试验（2015版）文件编号TS-VD-550-01重庆天致药业股份有限公司2018年人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查方法适用性试验方案试验报告的起草：日期：试验报告的审核：日期：试验报告的审核：日期：试验报告的批准：日期：1.概述通过试验以确认所采用的方法适合于该药品的需氧菌、霉菌和酵母菌的测定，确认所采用的方法适合于该药品的控制菌的检查，根据样品的特性制定检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据试验结果判断是否符合试验标准。
若符合，按试验的方法和条件进行药品的微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行试验，直至试验结果符合设立的试验标准。
2.目的:确认所采用的方法适合该药品的需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌的测定。
照此检查法和检验条件进行供试品需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌检查能保证检验结果的准确、可靠。
3.职责3.1.QC：负责起草试验方案和报告，并负责本方案的实施。
3.2QC主管、质量部长：负责试验方案、试验报告的审核。
3.3.质量授权人：负责方案、偏差和报告的最后批准。
4.适用范围:适用于本公司生产的人工牛黄甲硝唑胶囊微生物限度检查：微生物计数法和控制菌检查法。
5.培训:在本方案实施前，已对方案实施过程中涉及人员进行培训，以保证方案顺利实施，并做好培训记录，培训记录见附表1。
6.试验条件6.1.供试品规格：批号：6.2.培养基及试剂培养基名称培养基批号生产厂家6.3.试验用菌株菌种名称菌种编号菌种来源6.4.检验仪器及相关设备仪器名称仪器型号仪器厂家7.计数方法适用性试验7.1.需氧菌总数及霉菌和酵母菌计数方法适用性试验7.1.1菌液制备7.1.1.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、沙门菌的新鲜培养物至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，置30～35℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，制成适宜浓度的菌悬液，备用。
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验证方法
试验组：上清液1 ml
100ml稀释液中混匀
过滤 冲洗2次 过滤 过滤 加至
1ml菌液（白念）
取滤膜于沙氏葡萄糖肉汤培养基中30 ～ 35 ℃培养18 ～ 24 h。
制菌检查方法学验证结果
白念珠菌
试验组 沙氏葡萄糖 液体培养基 + 沙氏葡萄糖 琼脂培养基 呈典型菌落 生长
结果
• 低速离心-薄膜过滤法,真菌及酵母菌计数采用薄膜过滤法, 控制菌检查采用薄膜过滤法与低速离心-薄膜过滤法.结果 细菌、真菌及酵母菌的回收率均＞70.0%,控制菌检查中, 各阳性试验菌均检出,阴性对照无菌生长.结论 薄膜过滤 法与低速离心-薄膜过滤法可消除甲硝唑栓的抑菌作用,适 用于该制剂的微生物限度检查.
试验组
1ml
加至100ml稀释液中混匀
过滤
稀释液冲洗2次(每次100ml) 过滤
上清液
最后一次冲洗液中加入50~100cfu/ml的菌 液 取滤膜 菌面向上贴于凝固的培养基上（30~35℃ 72h)
（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌贴于琼脂培养基中 黑曲霉、白色念珠菌贴于玫瑰红钠培养基中 23~28 ℃ 120h ）
菌液组
50~100cfu/ml的菌液1ml
过滤
取滤膜 菌面向上贴于凝固的培养基上 （30~35℃ 72h)
供试品对照组：
上清液1ml
过滤
加至100ml稀释液 冲洗2次(每次100ml)
菌面向上贴于凝固的培养基上（30~35℃ 72h)
稀释剂对照组
pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml 过滤 过滤
甲硝唑栓微生物限度检查方法 验证
薄膜过滤法
甲硝唑栓介绍
• • • • • • 规格： 0.5g 剂型： 栓剂 批准日期： 批准文号： 药品类型： 英文名称：
2010-5-21 国药准字H20058324 化学药品 Metronidazole+Suppositories
甲硝唑栓介绍
• • • • • • 化学名称：2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇 化学成分： 甲硝唑 药品类别： 抗阿米巴病药及抗滴虫病药 适应症： 本品用于治疗阴道毛滴虫病。 性状： 本品为乳白色至淡黄色鱼雷形栓剂。 贮藏： 遮光，密闭，在30℃以下阴凉处存放。
• • • • a.梭菌 b.金黄色葡萄球菌 c.白色念珠菌 d.铜绿假单胞菌
菌液制备
• 接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马 丁培养基中，23～28℃培养18～24小时，取 此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采 用10倍递增稀释法，稀释至10-5～10-7，使 菌数约为50～100cfu/ml。
甲硝唑
• 甲硝唑对缺氧情况下生长的细胞和厌氧 微生物有杀灭作用，它在人体中还原时 生成的代谢物，也具有抗厌氧菌作用， 抑制细菌的脱氧核糖核酸的合成，从而 干扰细菌的生长、繁殖，最终致细菌死 亡。
阴道、尿道给药制剂
• 细菌数 每1g、1ml 或10cm2 不得过100cfu。 • 霉菌和酵母菌数 每1g、1ml 或10cm2 应小于10cfu。 • 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 、梭菌 、白色念珠菌 每 1g、1ml 或10cm2 • 不得检出。
供试液的制备
• 取样品10 g,加至含无菌十四烷酸异丙酯20mL和无菌玻璃 珠的适宜容器内,置45℃水浴保温，充分振荡使溶解，加 入预热45℃的pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液至100mL,萃 取5~10min，静置，取水层作为1:10的供试品. • 取1 ：10 供试液10 mL， 置无菌条件下500转/min离心 3min,留上清液
加入50~100cfu/ml的菌液1ml
菌面向上贴于凝固的培养基上（30~35℃ 72h)
平均回收ห้องสมุดไป่ตู้结果
结果判定
• 从表1 可以看出， 5 株试验菌的试验组菌回收率与稀释 剂对照组的菌回收率均＞70%， 因此， 可采用该法测定 样品的细菌 真菌及酵母菌数。
控制菌检查方法的验证
• 验证试验用菌种：
菌液制备
• (2)接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基 中，23～28℃培养18～24小时，取此培养液1ml加0.9％无 菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-5～ 10-7，使菌数约为50～100cfu/ml。
菌液制备
• (3)接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基 上， 23～28℃培养5～7天，加3～5ml0.9％无菌氯化钠溶 液洗下霉菌孢子，吸出菌液，取 1ml菌液加0.9％无菌氯 化钠溶液9ml，采用10倍递增稀释法，稀释至10-4～10-6， 使菌数约为50～100cfu/ml
2013-3-9
培养基
• • • • • pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基
菌液制备
• (1)接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的 新鲜培养物至10ml营养肉汤中，35～37℃培养18～24小时， 取此培养液1ml加0.9％无菌氯化钠溶液9ml，采用10倍递 增稀释法，稀释至10-5～10-7，使菌数约为50～ 100cfu/ml